CN117771347A - Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及多肽药物技术领域，具体涉及Glp‑1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂及其制备方法和应用。Glp‑1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，其含有3.5‑5.0mM的人胰岛素素类似物、0.03‑0.07mM的GLP‑1类似物、45‑75mM的苯酚、1.5‑2.5个乙酸锌/人胰岛素素类似物六聚体、2.19‑3.28mg/ml的柠檬酸三钠二水合物、0.11‑0.17mg/ml的柠檬酸、16‑46.4mg/ml的D‑甘露醇。本技术方案可以解决现有技术中GLP‑1类似物和胰岛素类似物配制的混合制剂稳定性不理想的技术问题。本制剂够促成更类似于人胰岛素构象状态和寡聚体化模式，提升人胰岛素类似物的稳定性，GLP‑1类似物的可溶聚集物和不可溶颗粒的形成最小化，具有理想的推广应用价值。

Description

Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂及其制备方法 和应用

技术领域

本发明涉及多肽药物技术领域，具体涉及Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂及其制备方法和应用。

背景技术

胰高糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)是一种主要由肠道L细胞所产生的激素，属于肠促胰素(incretin)。GLP-1以葡萄糖浓度依赖性方式促进胰岛β细胞分泌胰岛素，并减少胰岛α细胞分泌胰高糖素，从而降低血糖。胰岛素(Insulin)是由胰脏内的胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。外源性胰岛素主要用来治疗糖尿病。

度拉糖肽是一种GLP-1类似物，是一种长效胰高血糖素样肽受体激动剂，多用于治疗糖尿病。度拉糖肽通过与胰高血糖素相结合，抑制胰高血糖素的分泌，达到降血糖的作用。依柯胰岛素(Insulin lcodec)是一种每周给药一次的人胰岛素类似物，注射后其可与循环中的白蛋白强效且可逆结合，形成白蛋白储库，同时与胰岛素受体结合的亲和力较低，因此循环中的白蛋白储库基本上处于非活性状态，该储库能缓慢、稳定、持续地释放依柯胰岛素，持续作用于靶器官和组织。2019年，礼来公司GLP-1受体激动剂周制剂度拉糖肽在中国上市。适用于成人2型糖尿病患者的血糖控制，疗效明确，安全性良好，一周一次注射且操作简便。2023年，诺和诺德公司提交的依柯胰岛素上市申请受理。

GLP-1类似物和胰岛素类似物均显示出了理想的降糖效果，如能够将两种药物联合使用，则有可能提升药物的治疗效率。中国专利CN1635900A报道了一种GLP-1和基础胰岛素的预混合物。制备混合物的过程是直接将商业化的GLP-1和胰岛素混合，或者将二者简单溶解后混合。该技术方案研究了不同GLP-1和基础胰岛素混合使用的效果，但是，在混合制剂中产生了GLP-1的低可溶蛋白，两种蛋白之间存在相互作用。针对新型的GLP-1类似物和胰岛素类似物(度拉糖肽和依柯胰岛素)，目前还没有相关的混合制剂的报道。对于度拉糖肽和依柯胰岛素是否可以共同配制，如何能够保证两种药物的化学和物理性质的稳定性，亟需进一步研究。

发明内容

本发明意在提供Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，以解决现有技术中GLP-1类似物和胰岛素类似物配制的混合制剂稳定性不理想的技术问题。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，其含有3.5-5.0mM的人胰岛素素类似物、0.03-0.07mM的GLP-1类似物、45-75mM的苯酚、1.5-2.5个乙酸锌/人胰岛素素类似物六聚体、2.19-3.28mg/ml的柠檬酸三钠二水合物、0.11-0.17mg/ml的柠檬酸、16-46.4mg/ml的D-甘露醇。

本技术方案还提供了一种Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂的制备方法，将苯酚溶液与人胰岛素素类似物溶液混合，然后再加入乙酸锌溶液，获得混合溶液Ⅰ；将柠檬酸三钠二水合物、柠檬酸和D-甘露醇溶于水，然后加入GLP-1类似物，获得混合溶液Ⅱ；将混合溶液Ⅰ和混合溶液Ⅱ混合，调节pH以及定容后即得。

本技术方案还提供了一种Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂在制备降血糖药物中的应用。

本技术方案还提供了一种Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂在制备治疗糖尿病的药物中的应用。

本技术方案还提供了一种Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂在制备减肥药物中的应用。

进一步，Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，其pH值为6.8-7.3。

进一步，Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，其含有4.2mM人胰岛素素类似物、48nM GLP-1类似物、60mM苯酚、2.2个乙酸锌/人胰岛素素类似物六聚体、2.74mg/ml的柠檬酸三钠二水合物、0.14mg/ml的柠檬酸、25mg/ml的D-甘露醇。

进一步，Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，其pH值为7.0。

进一步，人胰岛素类似物为依柯胰岛素。

进一步，Glp-1类似物为度拉糖肽。

综上所述，本技术方案的技术原理以及有益效果在于：

本发明为人胰岛素类似物和Glp-1类似物的复方制剂，特别是度拉糖肽和依柯胰岛素的复方制剂。本方案的复方制剂用于治疗糖尿病相关的疾病、病症或病况，可以用于1型和2型糖尿病，还减轻胰岛素抵抗。

本方案的复方制剂为包含人胰岛素素类似物(Icodec)和GLP-1类似物(Dulaglutide)药物制剂，其能够促成更类似于人胰岛素构象状态和寡聚体化模式，尤其是六聚体。本研究发现其组合制剂显著提升了人胰岛素类似物的稳定性，GLP-1类似物的可溶聚集物和不可溶颗粒的形成最小化，显示出每周给药一次的性质，为糖尿病患者治疗提供了一种新制剂。

本技术方案首次将依柯胰岛素和度拉糖肽制备为混合制剂，对如何获得稳定的混合制剂进行了多方尝试。本技术方案在制剂中加入了柠檬酸三钠、柠檬酸以及D-甘露醇，用于抑制锌离子、苯酚等对度拉糖肽的稳定性造成的负面影响。并且通过特定的制备工艺调整，最大限度地减少了两种活性多肽的相互影响。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细的说明，但本发明的实施方式不限于此。若未特别指明，下述实施例以及实验例所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，且所用的材料、试剂等，均可从商业途径得到。

实施例1：Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂的制备

(1)配方组成和制备工艺

本方案的制剂原料包括：人胰岛素素类似物(商品名：Icodec/依柯胰岛素)、GLP-1类似物(商品名：Dulaglutide/度拉糖肽)、苯酚、乙酸锌、柠檬酸三钠二水合物、柠檬酸、D-甘露醇。

按下述方法制备混合制剂：

溶液a配制：称取人胰岛素素类似物原料(溶质含量90％左右)，用注射用水溶解，获得人胰岛素素类似物溶液(可配置成2-3×溶液)。

溶液b配制：溶液b为通过商业手段获得的乙酸锌溶液，锌离子浓度为5.05mg/ml。

溶液c配制：称量苯酚，用注射用水溶解，获得苯酚溶液，可配置成浓度56mg/ml。

溶液d配制：柠檬酸三钠二水合物、柠檬酸、D-甘露醇或其他辅料(如有，例如：甘油、氯化钠、聚山梨酯80等)用注射用水溶解(辅料可配制成3×溶液，或者保证溶质充分溶解即可)。

将溶液c边搅拌边加入溶液a中，再将溶液b边加边搅拌加入a和c的混合液中，作为混合溶液Ⅰ。

取GLP-1类似物原液，混合溶液d，作为混合溶液Ⅱ。

混合溶液Ⅰ溶液Ⅱ，测定pH值，如果需要用2M HCl或2M NaOH的稀释液调节pH至指定值，用注射用水补加至所需体积，获得混合制剂。

例如，获得的混合制剂中所含物质包括：3.5-5.0mM的人胰岛素素类似物、0.03-0.07nM的GLP-1类似物、45-75mM的苯酚、1.5-2.5个乙酸锌/6聚体、2.19-3.28mg/ml的柠檬酸三钠二水合物、0.11-0.17mg/ml的柠檬酸、16-46.4mg/ml的D-甘露醇，pH调节至6.8-7.3。作为优选的，混合制剂中所含物质包括：4.2mM人胰岛素素类似物、48nM(3mg/ml)GLP-1类似物、60mM苯酚、2.2个乙酸锌/6聚体(即6mol的人胰岛素素类似物对应含有2.2mol的乙酸锌)、2.74mg/ml的柠檬酸三钠二水合物、0.14mg/ml柠檬酸、25mg/ml的D-甘露醇，调节pH值为7.0。

(2)混合制剂检测

使用高效液相色谱测量混合制剂中人胰岛素类似物及GLP-1类似物的化学和物理稳定性。通过检测混悬制剂中的高分子蛋白来体现制剂的稳定性。高分子蛋白为活性成分(人胰岛素素类似物、GLP-1类似物)各自形成的共价二聚体和多聚体，高分子蛋白的活性非常低，高分子蛋白形成的越多越不利于制剂的稳定性。

通过反相超高效液相色谱法(SEC，LC-2030C高效液相色谱仪配备紫外检测器)测定混悬制剂中两种活性成分的高分子量蛋白的量，具体测量方法如下：

A：依柯胰岛素

色谱柱：Waters Insulin HMWP Column，5μm，7.8mm×300mm；

流动相：以0.5mol/L氯化钠的磷酸盐溶液(称取氯化钠146.1g、磷酸二氢钠6.9g，加水2000ml溶解后加入浓磷酸1.7ml，再加入异丙醇2500ml，混匀后加水稀释至5000nl，混匀后即得)为流动相；

色谱柱温：50℃；

样品：稀释25倍，进样量50微升(分步等比例稀释)；

流速：0.5ml/min；

检测波长：280nm；

梯度：等度洗脱；

运行时间：30min。

B：度拉糖肽

色谱柱：Waters XBridge Protein BEH SEC Column，3.5μm，7.8mm×300mm；

流动相：100mM的硫酸钠，100mM磷酸盐缓冲液,15％的异丙醇溶液，PH6.8；

色谱柱温：25℃；

进样量：3mg/ml，10μl；

流速：0.6ml/min；

检测波长：280nm；

梯度：等度洗脱；

运行时间：40min。

实验例1

中国专利CN110087674B公开了含胰岛素的药物组合物，其中公开了人胰岛素素类似物的sem-ico制剂处方，发明人首先尝试在这个制剂处方的基础上加入GLP-1类似物，制备混合制剂。sem-ico制剂处方是适合于人胰岛素素类似物的制剂处方，但在其中添加GLP-1类似物之后，原本的人胰岛素素类似物制剂的性能是否受到影响，GLP-1类似物是否适合制剂环境，是需要发明人研究确定的。其中，原本的sem-ico制剂处方大致为：3.5-5.0mM的人胰岛素素类似物、50-70mM的苯酚、0-15mM的间甲酚、2.0-2.4mol锌离子/6mol人胰岛素素类似物、大于0mM且不超过75mM的氯化钠，pH值7.2-8.0。

参照sem-ico制剂处方，配制含有人胰岛素素类似物和GLP-1类似物的混合制剂，具体方法参见实施例1，只是将溶液d的组成稍作变更，变为含有氯化钠、甘油溶质。本实验例获得的混合制剂的物质组成情况参见表1(以终浓度计)。

表1：参照sem-ico制剂处方的制剂组成情况

混合制剂在2-8℃条件下存放0天(即制备完成后立即检测)、5天、10天和30天之后，对混合制剂中的人胰岛素素类似物、GLP-1类似物的高分子蛋白分别进行检测，评价混合制剂的稳定性。实验结果参见表2和表3。

表2：依柯胰岛素(人胰岛素素类似物)的高分子蛋白检测结果(液相色谱图的面积归一化法计算所得，单位为％)

名称	方案一	方案二	方案三	方案四	方案五	方案六	方案七
								0天	0.061	0.050	0.053	0.062	0.051	0.043	0.049
5天	0.145	0.138	0.212	0.148	0.137	0.202	0.074
								10天	0.629	0.489	0.523	0.651	0.501	1.053	0.259
30天	1.125	0.759	0.926	1.025	0.826	1.056	0.564

表3：度拉糖肽(GLP-1类似物)的高分子蛋白检测结果

名称	方案一	方案二	方案三	方案四	方案五	方案六	方案七
								0天	0.336	0.327	0.301	0.341	0.317	0.371	0.327
5天	0.378	0.479	0.512	0.531	0.493	0.432	0.512
								10天	0.531	0.591	0.601	0.712	0.628	0.528	0.642
30天	0.826	0.901	1.121	1.247	1.125	0.821	1.013

对比方案一(0个乙酸锌/6聚体)、方案二(2.2个乙酸锌/6聚体)和方案三(4.5个乙酸锌/6聚体)可知，在混合制剂中添加锌离子对于维持人胰岛素素类似物的稳定性非常关键，但是会一定程度上对GLP-1类似物的稳定性产生负面影响。其中，2.2个乙酸锌/6聚体对人胰岛素素类似物的稳定性维持效果最佳，且不会对GLP-1类似物的稳定性产生过大的负面影响。

对比方案四(0mM苯酚)、方案五(30mM苯酚)和方案二(60mM苯酚)可知，对于人胰岛素素类似物来说，苯酚的使用可以增加其稳定性，减少高分子蛋白的产生。随着苯酚的使用浓度越高，人胰岛素素类似物稳定性越好，且对高分子蛋白的抑制效果明显。但是，对于GLP-1类似物来说，苯酚对其稳定性有一定的影响，但是影响比较有限。采用60mM的苯酚对两种活性多肽的稳定性维持比较有利。

对比方案六(pH6.5)、方案二(pH7.0)和方案七(pH7.4)可知，混合制剂的pH值对两种蛋白的稳定性具有一定的影响。稍高的pH值对维持人胰岛素素类似物的稳定性有利，稍低的pH值对于维持GLP-1类似物的稳定性有利。由于本方案是两种活性多肽的混合制剂，需要保证两种物质的稳定性，因此，采用pH7.0的方案为宜。

实际上，方案七是中国专利CN110087674B中关于胰岛素和索玛鲁肽这种GLP-1类似物的混合制剂方式。但该方案中采用的人胰岛素素类似物为desB30人胰岛素等，GLP-1类似物为索玛鲁肽，和本方案不同。很明显，适应于desB30人胰岛素和索玛鲁肽混合制剂的方案，并不适用于本方案的依柯胰岛素和度拉糖肽的混合制剂，会导致度拉糖肽的30天稳定性下降过快。针对新型的胰岛素类似物和GLP-1类似物的组合，需要研发一种新型的制剂形式以保证两种功效成分的稳定性。

综合上述实验数据，方案二的整体效果较好，对于两种活性多肽的稳定性维持比较适合。虽然对于维持GLP-1类似物的稳定性的效果没有达到最佳，但是，综合考虑，方案二效果稍好，可基于方案二进行后续的研究。从整体来说，如果参照现有技术的sem-ico制剂处方，在混合制剂中两种活性蛋白的稳定性均不是非常理想，30天的高分子蛋白量仍然高达0.759和0.901，不能满足实际应用需求。这说明参照现有技术的人胰岛素素类似物的之剂配方制备混合制剂，对于GLP-1类似物的兼容性并不好。同时，由于两种活性成分可能存在相互影响，也导致人胰岛素素类似物的高分子蛋白量也处于一个比较高的水平。因此需要对混合制剂的配方进行进一步的探索。提升制剂的整体稳定性，需要解决的比较关键的问题在于，锌离子是人胰岛素素类似物所需的必要组分，但是，锌离子对GLP-1类似物的稳定性产生较为显著的负面影响。上述问题需要得到有效解决，才能够保证混合制剂的质量。

实验例2

在本实验例中进行了缓冲盐和等渗剂筛选，本实验例的制剂组成情况参见表4，制备工艺依照实施例1进行，实验结果参见表5和表6。

表4：制剂组成情况(其中表格中的方案一同实验例1表1中的方案二)

表5：依柯胰岛素(人胰岛素素类似物)的高分子蛋白检测结果

名称	方案一	方案二	方案三	方案四	方案五	方案六
							0天	0.050	0.041	0.475	0.462	0.485	不适用
5天	0.141	0.104	0.117	0.118	0.142	不适用
							10天	0.482	0.364	0.407	0.396	0.582	不适用
30天	0.732	0.588	0.641	0.647	0.871	不适用

表6：度拉糖肽(GLP-1类似物)的高分子蛋白检测结果

名称	方案一	方案二	方案三	方案四	方案五	方案六
							0天	0.325	0.311	0.326	0.314	不适用	0.341
5天	0.481	0.392	0.455	0.462	不适用	0.458
							10天	0.603	0.517	0.539	0.527	不适用	0.597
30天	0.912	0.725	0.863	0.839	不适用	0.932

在实验例1的方案二(即本实验例的方案一)的基础上，发明人尝试将氯化钠置换为具有缓冲效果的溶质。在本实验例的方案三中，将氯化钠置换为柠檬酸三钠二水合物，发现人胰岛素素类似物和GLP-1类似物的稳定性都得到了显著提升。方案三相对于方案一，依柯胰岛素高分子蛋白降低了12％，度拉糖肽高分子蛋白降低了5％。

在实验例1的方案二(即本实验例的方案一)的基础上，发明人尝试将等渗剂甘油置换为其他等渗剂。在本实验例的方案四中，将甘油置换为D-甘露醇，发现人胰岛素素类似物和GLP-1类似物的稳定性都得到了显著提升。方案四相对于方案一，依柯胰岛素高分子蛋白降低了12％，度拉糖肽高分子蛋白降低了5％。

如果将本实施例的方案一的氯化钠和甘油均进行置换，参照本实施例方案二(使用柠檬酸三钠缓冲盐体系以及D-甘露醇)，则极大地提升了人胰岛素素类似物和GLP-1类似物的稳定性，降低两种活性物质的高分子蛋白含量。方案二相对于方案一，依柯胰岛素高分子蛋白降低了20％，度拉糖肽高分子蛋白降低了38％。尤其是对于度拉糖肽，柠檬酸三钠缓冲盐体系以及D-甘露醇的联合使用，在降低度拉糖肽高分子蛋白上，产生了非常显著的效应，二者协同增效，保证了度拉糖肽的稳定性。

综合上述实验结果，可见在混合制剂中使用具有缓冲效果的物质柠檬酸三钠二水合物，以及将等渗剂甘油替换为D-甘露醇，可以克服由于锌离子添加对于GLP-1类似物的稳定性的负面影响，于此同时，还可以进一步提升人胰岛素素类似物的稳定性。除此之外，度拉糖肽在适当的条件下，对依柯胰岛素有协同作用，能够降低依柯胰岛素高分子蛋白的产生。

实验例3

在本实验例中进行了等渗剂浓度的筛选，本实验例的制剂组成情况参见表7，制备工艺依照实施例1进行，实验结果参见表8。

表7：制剂组成情况(其中表格中的方案一同实验例2表4中的方案一)

表8：渗透压测定结果(280-320mOsmol/kgH₂O)

名称	方案一	方案二	方案三	方案四	方案五	方案六
							渗透压	339	331	326	312	305	288

实验例4：

本实验例对方剂中的添加成分进行了测试。将表4方案二中的D-甘露醇替换为等质量以及等摩尔的聚山梨酯80，混合制剂发生了浑浊现象。发明人还尝试将聚山梨酯80调低至20-30mg/ml进行测试，浑浊现象依然存在，所以聚山梨酯80不适合作为两种多肽混合制剂的等渗剂。除此之外，发明人还尝试使用了聚乙二醇作为等渗剂，但是，聚乙二醇会导致制剂的粘度增大，不利于注射，所以不能采用。

本实验例还进行了如表9所示的筛选实验。方案一和方案二同表4的方案一和方案二，方案三使用磷酸氢二钠缓冲盐代替柠檬酸三钠缓冲体系。方案四中加入了组氨酸，方案五中加入了甲硫氨酸，用于对两种功效多肽形成保护。方案六中加入了间甲酚，间甲酚为胰岛素制剂中的常规添加物。高分子蛋白检测结果参见表10和表11。由实验结果可知：使用柠檬酸三钠作为缓冲盐对维持依柯胰岛素和度拉糖肽的稳定性起到了非常显著的作用，如果使用磷酸氢二钠作为缓冲盐，会导致依柯胰岛素产生的高分子蛋白提升15％之多(30天高分子蛋白检测结果)，导致度拉糖肽产生的高分子蛋白提升28％之多(30天高分子蛋白检测结果)。如果在混合制剂中加入组氨酸和甲硫氨酸用以保护两种多肽，反而会对制剂的稳定性产生负面的影响。在混合制剂中添加间苯酚，对依柯胰岛素的稳定性不会产生较大影响，但是会对度拉糖肽的稳定性产生较大影响，导致度拉糖肽产生的高分子蛋白提升12％之多(30天高分子蛋白检测结果)。依柯胰岛素和度拉糖肽是首次联合使用，在二者的联合制剂中，两种多肽形成相互影响，对制剂中的辅助成分较为敏感，等渗剂、缓冲盐和保护剂的置换都会带来两种多肽稳定性上的较大变化，这是发明人在实验研究之前所未能预料的。

表9：制剂组成情况

表10：依柯胰岛素(人胰岛素素类似物)的高分子蛋白检测结果

名称	方案一	方案二	方案三	方案四	方案五	方案六
							0天	0.050	0.041	0.044	0.039	0.042	0.039
5天	0.141	0.104	0.137	0.113	0.099	0.107
							10天	0.482	0.364	0.477	0.378	0.372	0.372
30天	0.732	0.588	0.682	0.613	0.725	0.601

表11：度拉糖肽(GLP-1类似物)的高分子蛋白检测结果

名称	方案一	方案二	方案三	方案四	方案五	方案六
							0天	0.325	0.311	0.401	0.321	0.411	0.417
5天	0.481	0.392	0.479	0.405	0.427	0.433
							10天	0.603	0.517	0.712	0.521	0.523	0.639
30天	0.912	0.725	0.925	0.718	0.862	0.813

实验例5：

本实验例对制备工艺进行了研究，制剂配方采用表4方案二的配方。

候选制备工艺1：溶液a、b、c、d的配制方式参见实施例1，配制完成后按照如下方法操作：将溶液c边搅拌边加入溶液a中，再将溶液b边加边搅拌加入a和c的混合液中，作为混合溶液Ⅰ。混合溶液Ⅰ中加入混合溶液d，再加入GLP-1类似物原液。测定pH值，如果需要用2MHCl或2M NaOH的稀释液调节pH至指定值7.0，用注射用水补加至所需体积，获得混合制剂。

候选制备工艺2：溶液a、b的配制方式参见实施例1，不再配制溶液c、d，而是配制溶液e：称量苯酚、柠檬酸三钠二水合物、柠檬酸、D-甘露醇，用注射用水溶解。

配制完成后按照如下方法操作：

在溶液a中混合GLP-1类似物原液，获得两种活性物质的混合溶液，在将溶液e边搅拌边加入溶液a中，再将溶液b边加边搅拌加入a和e的混合液中。测定pH值，如果需要用2MHCl或2M NaOH的稀释液调节pH至指定值7.0，用注射用水补加至所需体积，获得混合制剂。

表4方案二、候选制备工艺1、候选制备工艺2的多肽稳定性检测结果参见表12和13。试验结果表明，制备工艺方法对两种活性多肽的稳定性影响比较大。实施例1的技术方案首先将依柯胰岛素与苯酚、乙酸锌混合，并将度拉糖肽和柠檬酸三钠、柠檬酸、D-甘露醇混合，然后再将两种多肽混合。候选制备工艺1先将依柯胰岛素与配方中的除度拉糖肽的其他物质混合，然后再加入度拉糖肽。候选制备工艺2首先将度拉糖肽和依柯胰岛素混合，再加入方剂中的其他物质。候选制备工艺1、候选制备工艺2对依柯胰岛素的稳定性的影响不大，但是，对度拉糖肽的稳定性造成了非常显著的影响，特别是候选制备工艺2，会导致高分子蛋白增加52％之多(30天高分子蛋白检测结果)。除了候选制备工艺1和2，发明人还尝试了其他类似制作工艺。例如候选制备工艺3：在本方案实施例1的基础上，取GLP-1类似物原液，混合溶液d，作为混合溶液Ⅱ，将混合溶液Ⅱ与含有胰岛素的溶液a混合，然后再加入溶液b和溶液d；实验结果显示该方式对依柯胰岛素的稳定性影响不大，但是对度拉糖肽有较大影响，其30天高分子蛋白检测结果超过了1.1％和候选制备工艺2差不多。候选制备工艺3为现有技术比较常规的混合制剂制备方式。

由此可见，在将依柯胰岛素和度拉糖肽制备混合制剂的时候，需要先将依柯胰岛素和锌离子以及苯酚等物质混合以保证依柯胰岛素形成一定构象，在该状态下，其不会对度拉糖肽的状态形成较大的交互影响，进而保证了两种物质的长期稳定性。

表12：依柯胰岛素(人胰岛素素类似物)的高分子蛋白检测结果

名称	表4方案二	候选制备工艺1	候选制备工艺2
				0天	0.041	0.040	0.042
5天	0.104	0.106	0.116
				10天	0.364	0.366	0.358
30天	0.588	0.605	0.597

表13：度拉糖肽(GLP-1类似物)的高分子蛋白检测结果

名称	表4方案二	候选制备工艺1	候选制备工艺2
				0天	0.311	0.317	0.342
5天	0.392	0.422	0.447
				10天	0.517	0.543	0.682
30天	0.725	0.752	1.107

实验例6：动物实验研究

(1)试验目的

观察混悬制剂单次给药对小鼠的降糖作用，同时与依柯胰岛素注射液、度拉糖肽注射液做对比。

(2)试验材料

供试品包括：依柯胰岛素注射液、度拉糖肽注射液、混悬注射液(表4方案二)，取供试品用生理盐水稀释至所需浓度,按0.1ml/只皮下注射给药。具体地，将依柯胰岛素稀释至1mg/ml，每只小鼠皮下注射0.1ml，绝对量为0.1mg/只；同样对度拉糖肽注射液进行稀释并注射，绝对量为0.011mg/只；同样对表4方案二获得的混悬注射液进行稀释，依柯胰岛素的绝对量为0.1mg、度拉糖肽的绝对量为0.011mg。

试验动物包括：SPF级昆明种小鼠24只，雌性，体重30±1g。

试验仪器包括：强生稳豪型血糖仪及血糖试纸。

(3)试验方法

将24只小鼠分为4个试验组，每组6只。按下表(表14)皮下给药，给予容积0.1ml/只。对照组给予同等体积的生理盐水。然后于给药后6h、12h、24h、30h、36h测定血糖值；于36h、42h、48h、54h、60h、66h注射50％葡萄糖0.1ml/只，10min后测定血糖值。实验结果详见表15-19，由实验结果可知，本方案的混悬注射液具有更长的作用维持时间。一般来说，两种降糖药物联合使用可以增加降糖的幅度(降低血糖值的幅度)，即药效上会产生叠加效应，而不是延长作用时间。理论上两种降糖药物在体内的代谢时间不会受到联合用药的影响。但是，在本技术方案中，在一具体时间点，混悬注射液中的依柯胰岛素和度拉糖肽的联合使用，并未呈现出明显的血糖值降低幅度，但是，却呈现出了更长的降糖作用维持时间，获得了预料不到的技术效果。

针对表16数据，补充说明如下：糖耐量试验主要用于评价含有GLP-1类似物药物的药效，该组不含GLP-1，不需要做糖耐量，当体内血糖高于正常水平时，GLP-1类似物发挥作用，而不降低正常水平的血糖耐糖实验未进行。所以，针对依柯胰岛素注射液实验组，未进行耐糖实验。

表14：不同组别给药量

组别	名称	剂量
			1	对照组	0.1ml生理盐水
2	依柯胰岛素注射液	0.1mg/只
			3	度拉糖肽注射液	0.011mg/只
4	混悬注射液	(依柯胰岛素0.1mg+度拉糖肽0.011mg)/只

表15：血糖检测结果(对照组，单位：mmol/L)

表16：血糖检测结果(依柯胰岛素注射液，单位：mmol/L)

动物标示	6h	12h	24h	30h	36h
						左耳	5.9	4.4	4.8	5.2	10.6
右耳	6.5	4.6	4.9	6.6	9.0
						左腿	6.4	5.3	5.9	6.7	9.5
右腿	7.2	5.1	6.0	6.8	9.4
						背部	6.8	6.0	4.7	4.7	10.2
无标记	6.4	5.6	3.8	4.5	9.0
						血糖均质	6.53	5.17	5.02	5.75	9.62

表17：血糖检测结果(度拉糖肽注射液，单位：mmol/L)

表18：血糖检测结果(混悬注射液，单位：mmol/L)

表19：作用维持时间(实验组血糖值高于对照组为药效不能维持体内血糖的代偿作用产生的，为药效维持的临界值)

组别	名称	维持时间
			1	对照组	--------
2	依柯胰岛素注射液	约30h
			3	度拉糖肽注射液	约54h
4	混悬注射液	约60h

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，其特征在于，其含有3.5-5.0mM的人胰岛素素类似物、0.03-0.07mM的GLP-1类似物、45-75mM的苯酚、1.5-2.5个乙酸锌/人胰岛素素类似物六聚体、2.19-3.28mg/ml的柠檬酸三钠二水合物、0.11-0.17mg/ml的柠檬酸、16-46.4mg/ml的D-甘露醇。

2.根据权利要求1所述的Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，其特征在于，其pH值为6.8-7.3。

3.根据权利要求2所述的Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，其特征在于，其含有4.2mM人胰岛素素类似物、48nM GLP-1类似物、60mM苯酚、2.2个乙酸锌/人胰岛素素类似物六聚体、2.74mg/ml的柠檬酸三钠二水合物、0.14mg/ml的柠檬酸、25mg/ml的D-甘露醇。

4.根据权利要求3所述的Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，其特征在于，其pH值为7.0。

5.根据权利要求4所述的Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，其特征在于，人胰岛素类似物为依柯胰岛素。

6.根据权利要求5所述的Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂，其特征在于，Glp-1类似物为度拉糖肽。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂的制备方法，其特征在于，将苯酚溶液与人胰岛素素类似物溶液混合，然后再加入乙酸锌溶液，获得混合溶液Ⅰ；将柠檬酸三钠二水合物、柠檬酸和D-甘露醇溶于水，然后加入GLP-1类似物，获得混合溶液Ⅱ；将混合溶液Ⅰ和混合溶液Ⅱ混合，调节pH以及定容后即得。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂在制备降血糖药物中的应用。

9.根据权利要求1-6中任一项所述的Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂在制备治疗糖尿病的药物中的应用。

10.根据权利要求1-6中任一项所述的Glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂在制备减肥药物中的应用。