CN117617249A - 一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂、制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂、制备方法及其应用,在本发明中通过气相色谱‑触角电位联用技术(GC‑EAD)、触角电位技术(EAG)、行为实验测定黑须污蝇信息素—邻苯二甲酸二甲酯的触角电位和行为反应,了解邻苯二甲酸二甲酯对黑须污蝇行为的影响。通过实验证实,使用浓度分别为10‑4μg/μL、10‑3μg/μL、10‑2μg/μL或10‑1μg/μL的邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂可以驱避黑须污蝇,从而减少黑须污蝇与双峰驼的接触机会,可有效防治黑须污蝇引起的阴道蝇蛆病。
Description
技术领域
本发明属于生物防控技术领域,具体来说涉及一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂、制备方法及其应用。
背景技术
黑须污蝇(Wohlfahrtia magnifica)也被称为肉蝇。黑须污蝇属于双翅目(Diptera)麻蝇科(Sarcophagidae)野蝇亚科(Subfamily Paramacronychiinae)污蝇属(Genus Wohlfahritia Brauer)昆虫,广泛分布在蒙古高原、地中海盆地、东欧、中欧、北非、中亚及北亚等地区。黑须污蝇喜欢温暖和光线,主要在夏季活跃,它是引起家畜(马、骆驼、狗、山羊、绵羊、牛等)流血性创伤和天然孔道蝇蛆病的主要病原,同时也是引起双峰驼阴道蝇蛆病的唯一病原。除此之外,黑须污蝇幼虫也能引起人的耳朵、眼睛、皮肤和外阴等方面的多种疾病。
目前蝇蛆病的防治主要依靠农药,药物驱虫治疗,除了杀死寄生部位的蝇蛆,对环境中的黑须污蝇起不到作用,等药效过后,继续产蛆、反复感染。为了改变目前以农药为主的被动防治现状,我们需要探索主动的生物防控措施。
发明内容
本发明的目的是解决现有的技术问题,提供一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂、制备方法及其应用,该驱避剂可以驱避黑须污蝇成虫,以减少其与宿主的接触机会,从而影响其交配及产蛆行为,为治疗双峰驼阴道蝇蛆病提供新的思路。
本发明是通过以下技术方案实现的:
一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂,其制备方法如下所述:将邻苯二甲酸二甲酯与溶剂配制成溶液。
在上述技术方案中,所述溶剂为正己烷。
在上述技术方案中,所述邻苯二甲酸二甲酯的浓度为10-4μg/μL至10-1μg/μL。
在上述技术方案中,所述邻苯二甲酸二甲酯的浓度优选为10-4μg/μL、10-3μg/μL、10-2μg/μL或10-1μg/μL。
一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂在家畜病患防治中的应用:使用上述驱避剂驱避黑须污蝇成虫,以减少其与宿主的接触机会,从而影响其交配及产蛆行为。
在上述技术方案中,所述家畜为马、骆驼、狗、山羊、绵羊、牛等。
在上述技术方案中,所述病患为流血性创伤和/或天然孔道蝇蛆病。
本发明的有益效果是:
本发明公开了一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂、制备方法及其应用,在本发明中通过气相色谱-触角电位联用技术(GC-EAD)、触角电位技术(EAG)、行为实验测定黑须污蝇信息素—邻苯二甲酸二甲酯的触角电位和行为反应,了解邻苯二甲酸二甲酯对黑须污蝇行为的影响。通过实验证实,使用浓度分别为10-4μg/μL、10-3μg/μL、10-2μg/μL或10-1μg/μL的一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂可以驱避黑须污蝇,从而减少黑须污蝇与双峰驼的接触机会,可有效防治黑须污蝇引起的阴道蝇蛆病。
附图说明
图1为黑须污蝇对邻苯二甲酸二甲酯的GC-EAD反应。注:左图为雌性黑须污蝇对邻苯二甲酸二甲酯的GC-EAD反应;右图为雄性黑须污蝇对邻苯二甲酸二甲酯的GC-EAD反应,图中FID为化合物质谱图,EAD表示黑须污蝇对化合物的触角反应,3个EAD为触角电位的3个重复实验。
图2为黑须污蝇对不同浓度的邻苯二甲酸二甲酯的EAG反应。
图3为黑须污蝇对邻苯二甲酸二甲酯的EAG反应对比。
图4为黑须污蝇对不同浓度邻苯二甲酸二甲酯的行为反应(雌性)。
图5为黑须污蝇对不同浓度邻苯二甲酸二甲酯的行为反应(雄性)。
图6为黑须污蝇对邻苯二甲酸二甲酯的行为反应对比。
注:ns:差异不显著(P>0.05)*:差异显著(0.01<P<0.05)**:差异极显著(P<0.01)。对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,可以根据以上附图获得其他的相关附图。
具体实施方式
为了使本发明现实的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于了解,下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术方案。
实施例一、黑须污蝇对邻苯二甲酸二甲酯的GC-EAD反应
(1)样品制备:将购置的邻苯二甲酸二甲酯(99%)使用HPLC级正己烷配制为10-2μg/μL的待测样品,于-20℃冰箱保存备用。
(2)毛细管的制备:用酒精灯使毛细管软化,将毛细管手动拉制到尖端刚好可以放入昆虫触角,拉制过程中尽量保持平衡平稳。毛细管制备完成后,灌装可以导电的液体,本实验灌装0.9%的生理盐水。
(3)触角的连接:
实验选取7日龄左右的雌、雄黑须污蝇对浓度为10-2μg/μL的邻苯二甲酸二甲酯进行测定,每个样品雌、雄黑须污蝇各重复测定3次,每根触角只使用一次。在显微镜下将黑须污蝇触角从基部割下,用含有生理盐水的玻璃毛细管将触角两端连接到触角电位仪的两个玻璃电极上,触角基部连接参比电极,顶部与记录电极相连接,待触角电位仪EAD基线稳定后开始进样,记录电极。记录的信号经Syntech IDAC-2信号采集器放大并转换后,通过GC-EAD软件进行数据的采集和分析。
(4)气相色谱(GC)条件:
初始温度50℃保持1min,以5℃/min升至120℃,保持1min,再以10℃/min上升至150℃,保持1min,最后以20℃/min升至280℃,保持10min;进样量:1μL;不分流进样。
实施例二、黑须污蝇对邻苯二甲酸二甲酯的EAG反应
(1)样品制备:将邻苯二甲酸二甲酯用色谱级的正己烷配制成10-4μg/μL、10-3μg/μL、10-2μg/μL和10-1μg/μL的待测样品,保存至-20℃冰箱待用。
(2)检查洗气瓶中蒸馏水的液面位置是否为一半,不足补充。
(3)将CS-55刺激气流发生器电源和电脑上的相关软件打开。
(4)准备7日龄左右的雌、雄黑须污蝇成虫的触角,连接触角。
(5)将10μL待测样品均匀滴在滤纸条上,将滤纸条放入蓝色枪头中,待溶剂挥发5min后对其进行刺激,正己烷作为空白对照,每测试一根触角后均进行空白对照的EAG测定,由此来进行样品EAG反应值的矫正。
(6)刺激条件:刺激时间为0.2s,刺激间隔为60s,刺激气流流速为300mL/min,持续气流设定为1000mL/min。
(7)每个样品重复测定3次,区分雌雄。
(8)EAG测定结果由EAG信号记录和分析程序记录,样品触角电位相对反应值(EAG相对反应值)计算方法如下:
EAG相对反应值=(2×测试样品的触角电位反应值)÷(测试样品前溶剂对照的触角电位反应值+测试样品后溶剂对照的触角电位反应值)
(9)实验结果使用GraghPad Prism8.0.1对数据进行单因素方差分析(One-WayANOVA)和t检验分析并对其进行绘图。
实施例三、黑须污蝇对邻苯二甲酸二甲酯的行为反应
(1)用净水器管依次连接装置大气采样仪(出气口)→装有活性炭的干燥塔→湿润装置→气味瓶→Y型试管。两侧臂气流维持在1L/min。实验前所有仪器都应该用蒸馏水和酒精各清洗3遍,以此来减少误差。选取5日龄左右的黑须污蝇,进行行为实验测定。每次仅放一只黑须污蝇于Y型试管直臂口,反应时间为5min,当虫子进入侧臂1/2以上并至少停留30s作为选择结果并进行记录。如果5min内未做出选择,则停止该虫的行为测定,不作记录。每组雌、雄黑须污蝇各20只,重复测定3次,同一浓度每只虫子仅测试一次,以蒸馏水为对照实验,实验在室温环境进行。
(2)使用GraghPad Prism对实验数据进行t检验分析并绘图。如果黑须污蝇对化合物的反应显著高于对照组,则该化合物对黑须污蝇具有引诱作用;相反,如果黑须污蝇对对照组的反应显著高于对化合物的反应,则该化合物对黑须污蝇具有驱避作用;若黑须污蝇对两者的反应均不显著,则不能确定该化合物对黑须污蝇是否具有引诱性或驱避性。
表1黑须污蝇对不同浓度邻苯二甲酸二甲酯的EAG相对反应值
结果分析
由图1可知,不同日龄的黑须污蝇雌雄成虫对10-2μg/μL的邻苯二甲酸二甲酯均有GC-EAD反应。
雌性黑须污蝇对不同浓度的邻苯二甲酸二甲酯EAG测定结果如表1图2(左图)所示。实验结果表明,雌性黑须污蝇对不同浓度的邻苯二甲酸二甲酯均有触角反应,随着邻苯二甲酸二甲酯浓度升高,EAG相对反应值降低,雌性黑须污蝇对不同浓度的邻苯二甲酸二甲酯的EAG相对反应值无显著差异(P>0.05)。
雄性黑须污蝇对不同浓度的邻苯二甲酸二甲酯EAG测定结果如表1图2(右图)所示。实验结果表明,不同浓度的邻苯二甲酸二甲酯均能引起雄性黑须污蝇的触角反应,随着邻苯二甲酸二甲酯浓度升高,其EAG相对反应值呈先升高后降低再升高的趋势,雄性黑须污蝇对不同浓度的邻苯二甲酸二甲酯的EAG相对反应值无显著差异(P>0.05)。
不同性别的黑须污蝇对邻苯二甲酸二甲酯EAG测定的对比结果如图3所示。结果表明,雌、雄黑须污蝇对邻苯二甲酸二甲酯的EAG测定结果无显著差异(P>0.05)。
雌性黑须污蝇对不同浓度的邻苯二甲酸二甲酯的行为反应如图4所示。当邻苯二甲酸二甲酯浓度为10-1μg/μL时对雌性黑须污蝇具有显著的驱避性(0.01<P<0.05);其余浓度对雌性黑须污蝇没有显著的行为反应(P>0.05)。
雄性黑须污蝇对不同浓度的邻苯二甲酸二甲酯的行为反应如图5所示。由结果可知,浓度为10-4μg/μL、10-3μg/μL和10-2μg/μL的邻苯二甲酸二甲酯对雄性黑须污蝇无明显的行为反应(P>0.05);而10-1μg/μL的邻苯二甲酸二甲酯对雄性黑须污蝇具有极显著的驱避性(P<0.01)。
不同性别的黑须污蝇对邻苯二甲酸二甲酯的行为反应如图6所示。结果显示不同浓度的邻苯二甲酸二甲酯对雌、雄黑须污蝇均无显著的引诱性或驱避性(P>0.05)。
以上对本发明做了示例性的描述,应该说明的是,在不脱离本发明的核心的情况下,任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂,其特征在于,通过下述方法制备获得:将邻苯二甲酸二甲酯与溶剂配制成溶液。
2.根据权利要求1所述的一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂,其特征在于:所述溶剂为正己烷。
3.根据权利要求1所述的一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂,其特征在于:所述邻苯二甲酸二甲酯的浓度为10-4μg/μL至10-1μg/μL。
4.根据权利要求3所述的一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂,其特征在于:所述邻苯二甲酸二甲酯的浓度为10-4μg/μL、10-3μg/μL、10-2μg/μL或10-1μg/μL。
5.一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂的制备方法,其特征在于:将邻苯二甲酸二甲酯与溶剂配制成溶液。
6.根据权利要求5所述的一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂的制备方法,其特征在于:所述溶剂为正己烷。
7.根据权利要求5所述的一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂的制备方法,其特征在于:所述邻苯二甲酸二甲酯的浓度为10-4μg/μL至10-1μg/μL。
8.根据权利要求7所述的一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂的制备方法,其特征在于:所述邻苯二甲酸二甲酯的浓度为10-4μg/μL、10-3μg/μL、10-2μg/μL或10-1μg/μL。
9.一种邻苯二甲酸二甲酯黑须污蝇驱避剂在家畜病患防治中的应用:将权利要求1-8中任一项所述的驱避剂驱避黑须污蝇成虫,以减少其与宿主的接触机会,从而影响其交配及产蛆行为。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于:所述家畜为马、骆驼、狗、山羊、绵羊或牛,所述病患为流血性创伤或天然孔道蝇蛆病。
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