CN117529334A - 对宿主cd70+同种异体反应性细胞进行选择性靶向以延长同种异体car t细胞持久性 - Google Patents

Abstract

本文提供了包括CD70结合结构域和跨膜结构域的CD70结合蛋白、包括所述CD70结合蛋白的经工程化的免疫细胞以及其制备和使用方法。本文还提供了经工程化的免疫细胞，例如CAR(嵌合抗原受体)T细胞，其用于施用于患者以治疗癌症(例如，实体瘤和血液肿瘤)以及其它不期望的病状。所述细胞被工程化以功能性地表达与所述癌症或其它疾病或不期望的病状所特有的靶分子结合的第一抗原结合分子，例如CD70CAR和第二抗原结合分子，例如第二CAR。所述细胞可以被进一步工程化以降低TRAC、CD52和CD70中的一种或多种的功能性表达水平。还提供了制备和使用所述经工程化的细胞的方法、包括所述经工程化的细胞的组合物和试剂盒以及通过施用所述经工程化的细胞进行治疗的方法。

Description

对宿主CD70+同种异体反应性细胞进行选择性靶向以延长同 种异体CAR T细胞持久性

相关申请交叉引用

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序列表

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技术领域

本公开总体上涉及经工程化的免疫细胞(例如，T细胞)在治疗应用中的用途。

背景技术

经基因修饰以识别恶性肿瘤相关抗原的免疫细胞的过继转移显示出有望作为治疗癌症的新方法(参见例如，Brenner等人，《免疫学新见(Current Opinion inImmunology)》，22(2)：251-257(2010)；Rosenberg等人，《自然综述：癌症(Nature ReviewsCancer)》，8(4)：299-308(2008))。免疫细胞可以被基因修饰以表达嵌合抗原受体(CAR)，即包含抗原识别部分和T细胞活化结构域的融合蛋白(参见例如，Eshhar等人，《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》，90(2)：720-724(1993))。含有CAR的免疫细胞，例如CAR-T细胞(CAR-T)被工程化以赋予其抗原特异性，同时保持或增强其识别和杀伤靶细胞的能力。

然而，经CAR修饰的自体细胞疗法的产生是昂贵的，需要数周的过程和质量测试，并且根据所采用的患者特异性T细胞的初始质量和数量产生不同效力的产物。同种异体的经CAR修饰的细胞疗法——其中来自健康供体的细胞用CAR修饰，并且然后施用于多个患者——有望是比自体疗法更便宜并且更强劲的产物，可以在需要时立即提供(参见例如，Graham等人，《细胞(Cells)》2018，7，155；doi：10.3390/cells7100155)。另外地，同种异体疗法能够选择期望的产物特征(例如，基因编辑效率、整合位点、缺乏有害的脱靶基因编辑、单体型等)，并且促进更复杂的细胞工程化(例如，多个基因编辑改善效力、持久性、归位等)。实施同种异体的经CAR修饰的细胞疗法的主要障碍是患者(宿主)的免疫系统对产物(供体)的排斥的可能性。

虽然同种异体细胞疗法比自体细胞疗法呈现出许多优点，但同种异体细胞也面临宿主或接受者免疫系统细胞的排斥，所述免疫系统细胞与不同于宿主的同种异体细胞产物的表面上的T和NK表位决定簇具有反应性。本公开提供了改进的同种异体疗法的优点，所述同种异体疗法提供了所施用的细胞的增加的持久性，而不管接受者的天然防御如何。

发明内容

本文提供了已被工程化，例如基因工程化以改善所述细胞在已被引入其中的宿主或接受者中的持久性的免疫细胞，包括所述经工程化的细胞的组合物和群体以及在患者中使用所述经工程化的细胞治疗病状，例如癌症的方法。本公开的免疫细胞被工程化以功能性地表达第一抗原结合蛋白和第二不同的抗原结合蛋白，例如第一CAR和第二CAR。选择所述第一抗原结合蛋白例如CAR以用于其对患者的病状，例如癌症的治疗性治疗的合适性。例如，所述第一抗原结合蛋白可以是识别由例如引起病状所特有的细胞，例如癌细胞和/或肿瘤细胞表达的抗原的CAR。所述第二抗原结合蛋白，例如CD70结合蛋白，如对CD70具有结合特异性的CAR，所述抗原结合蛋白响应于例如同种异体CAR T细胞而在接受者免疫细胞上表达。因此，经工程化的细胞可以针对接受者的免疫应答进行防御，从而延长施用后同种异体细胞的存活率。可替代地，一种抗原结合蛋白，例如一种CAR可以包括“治疗性”结合活性和CD70结合活性两者。因此，本公开提供了一种增加例如同种异体CART细胞或任何其它同种异体CAR免疫细胞(例如CARNK细胞)的持久性的方法，所述方法包括将CAR细胞，例如CART细胞、CAR NK细胞、CAR单核细胞或CAR巨噬细胞工程化，以除了细胞功能性地表达的第一抗原结合蛋白例如CAR之外，还功能性地表达抗CD70抗原结合蛋白，例如CD70结合蛋白，如抗CD70 CAR。

这种方法为深度淋巴细胞清除方案可能提供了更安全的替代方案，因为CD70阴性免疫细胞预期不会被CD70 CAR靶向，从而避免了长期免疫抑制。另外，CD70还在包含肾细胞癌、淋巴瘤和急性骨髓性白血病在内的多种肿瘤中由恶性细胞表达。因此，将T细胞工程化以表达针对CD70和第二肿瘤特异性靶标，如CD19或CD20的CAR，作为单独的CAR或作为具有双重特异性的单个CAR，可以增强CAR T细胞的抗肿瘤功效和持久性并延迟宿主免疫系统的排斥。

因此，一方面，本公开提供了一种抑制CD70阳性细胞在体外或在患者中的增殖和/或活性的方法，所述方法包括使所述CD70阳性细胞与经工程化的免疫细胞接触的步骤，所述经工程化的免疫细胞包括或功能性地表达包括与CD70(或CD70结合结构域)结合的胞外配体结合结构域和跨膜结构域的CD70结合蛋白。在相关方面，本公开提供了一种在有需要的患者中进行淋巴细胞清除的方法，所述方法包括向所述患者施用经工程化的免疫细胞的步骤，其中所述经工程化的免疫细胞包括或功能性地表达包括与CD70(或CD70结合结构域)结合的胞外配体结合结构域和跨膜结构域的CD70结合蛋白，并且其中所述经工程化的免疫细胞抑制CD70阳性细胞在所述患者中的增殖和/或活性。在一些实施例中，所述CD70阳性细胞是T细胞、B细胞或NK细胞。在一些实施例中，所述CD70阳性细胞是正常或非癌淋巴细胞。在一些实施例中，所述CD70阳性细胞是经活化的淋巴细胞。在一些实施例中，所述CD70阳性细胞是经活化的T细胞。

另一方面，本公开提供了一种经工程化的免疫细胞，其功能性地表达包括第一抗原结合结构域的蛋白质和包括第二抗原结合结构域的蛋白质，其中所述第一抗原结合结构域与所关注的靶标特异性结合，并且所述第二抗原结合结构域与CD70(例如，CD70结合蛋白)特异性结合。在各种实施例中，包括所述第一抗原结合结构域的所述蛋白质是第一蛋白，并且包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质是与所述第一蛋白分离且不同的第二蛋白。在各种实施例中，所述包括所述第一抗原结合结构域的蛋白质是第一CAR，并且所述包括所述第二抗原结合结构域的蛋白质是第二CAR，即CD70 CAR。在各种实施例中，一种抗原结合蛋白，例如一种CAR包括所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域两者，例如所述CAR是识别所关注的靶标和CD70两者的双特异性CAR。在其它实施例中，包括识别所关注的靶标的所述第一抗原结合结构域的所述蛋白质和包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质，即CD70结合蛋白是不同的蛋白质。

在一些实施例中，所述第一抗原结合结构域的所述所关注的靶标，例如所述第一CAR的所述所关注的靶标是任何所关注的分子，例如包含但不限于CD70、BCMA、EGFRvIII、Flt-3、WT-1、CD20、CD22、CD23、CD30、CD38、CD33、CD133、WT1、TSPAN10、MHC-PRAME、HER2、MSLN、PSMA、PSCA、GPC3、Liv1、ADAM10、CHRNA2、LeY、NKG2D、CS1、CD44v6、ROR1、CD19、Claudin-18.2(也被称为Claudin-18A2或Claudin18同种型2)、DLL3(也被称为δ样蛋白3、果蝇属δ同源物3(DrosophilaDelta homolog 3)、δ3)、Muc17、Muc3、Muc16、FAPα(成纤维细胞活化蛋白α)、Ly6G6D(也被称为淋巴细胞抗原6复合基因座蛋白G6d、c6orf23、G6D、MEGT1、NG25)或RNF43(也被称为E3泛素-蛋白连接酶RNF43，环指蛋白43)，具体地包含所列出的示例性靶标中的任一种的人形式。例如，所述所关注的靶标可以是在细胞的表面上表达并且在一些方面中具有病状或疾病，如任何形式的癌症的特征的任何分子，例如任何蛋白质，所述所关注的靶标的抑制、减少或消除将是治疗上有益的或以其它方式所期望的。

在一些实施例中，所述包括与CD70(例如，CD70结合蛋白)特异性结合的第二抗原结合结构域的蛋白质是或包括CD70 CAR。在一些实施例中，包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质包括抗CD70 scFv、抗CD70 VH或CD70的受体，或者包括这些中的任何两个或更多个。在一些实施例中，所述CD70的受体是CD27或保留对CD70的结合特异性的CD27的片段，例如CD27的CD70结合片段。在一些实施例中，CD27具有或包括如UniProtKB条目P26842中所公开的人CD27的氨基酸序列。在一些实施例中，包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质是包括CD3胞内信号传导结构域的CAR。在一些实施例中，包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质是包括一个或多于一个共刺激结构域的CAR。在一些实施例中，包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质是包括CD3胞内信号传导结构域而不具有共刺激结构域的CAR(第一代CAR)。在一些实施例中，包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质是包括CD3胞内信号传导结构域和共刺激结构域的CAR(第二代CAR)。在一些实施例中，包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质是不包括共刺激结构域的CAR。在一些实施例中，包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质，例如CD70结合蛋白不包括胞内信号传导结构域。在一些实施例中，包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质是任选地包括一个或多于一个共刺激结构域的CAR。在包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质的各种实施例中，所述蛋白质进一步包括胞内信号传导结构域，如CD3ζ胞内信号传导结构域和/或一个或多个共刺激结构域。在一些实施例中，包括所述第二抗原结合结构域的所述蛋白质包括全长CD27或CD27的CD70结合片段，并且进一步包括CD3ζ胞内信号传导结构域。

在各种实施例中，所述经工程化的免疫细胞以降低的水平功能性地表达CD70、TRAC和CD52中的一种或多种。在一些实施例中，相对于对应但未经工程化的免疫细胞的表达水平而言，表达水平的降低为0％，例如当基因的两个染色体拷贝均被敲除时，或50％(即未经工程化的对照免疫细胞中的水平的50％)，例如当基因的两个染色体拷贝中的一个被敲除并且所述基因的另一个染色体拷贝的表达未被补偿性增加时。在一些实施例中，所述细胞表达TRAC、CD52和CD70中的一种或多种的水平是未经工程化的免疫细胞中的表达水平的不大于90％、不大于75％、不大于50％、不大于25％或不大于10％。在一些实施例中，在经工程化的免疫细胞中CD70、TRAC和CD52中的一种或多种的表达水平是未相对于CD70、TRAC和/或CD52进行对应的工程化的对照细胞中的水平的0％至90％的任何值。在一些实施例中，所述经工程化的细胞中的表达水平是例如对照细胞中的水平的10％至90％、25％至90％、25％至75％、10％至50％、25％至50％、50％至90％或50％至75％。在一些实施例中，当例如基因的仅一个染色体拷贝被敲除并且补偿机制导致剩余染色体拷贝的表达水平增加，或者通过除了基因敲除以外的方法实现表达降低时，获得除0％或50％之外的表达水平的降低，所述方法如已知的敲低方法，例如采用各种基于RNA的技术中的任一种的那些方法(例如，反义RNA、miRNA、shRNA、siRNA；参见例如，Lam等人，《分子疗法-核酸(Mol.Ther.-NucleicAcids)》4：e252(2015)，doi：10.1038/mtna.2015.23；Sridharan和Gogtayv《英国临床药理学杂志(Brit.J.Clin.Pharmacol.)》82：659-72(2016))。在一些实施例中，相对于合适的对照，本文所公开的经工程化的免疫细胞表现出在细胞表面处的MHC I类蛋白或复合物的表达水平的降低。在各个实施例中，所述细胞是T细胞，例如人T细胞。在一些实施例中，所述细胞包括CD70、CD52和TRAC基因座或基因中的一种或多种的突变和/或CD70、CD52和TRAC基因座或基因中的一种或多种的破坏，所述破坏导致被破坏的基因座或基因的功能性表达的降低。在实施例中，所述突变或破坏通过任何基因突变或基因编辑技术来引入CD70、CD52和TRAC基因或基因座中的一种或多种，所述任何基因突变或基因编辑技术包含但不限于已知的同源重组技术和采用大核酸酶、TALEN、锌指、shRNA、Cas-CLOVER和CRISPR/Cas系统中的任一种或多种的技术。在一些实施例中，所述细胞是非人细胞，例如灵长类动物细胞或非灵长类哺乳动物细胞。在一些实施例中，所述细胞是人细胞。在一些实施例中，所述突变或破坏是通过敲入核酸(例如编码将在细胞中表达的一种或多种蛋白质或基因产物的核酸)而产生的。在一些实施例中，所述核酸编码所述第一CAR和所述第二CAR中的任一者或两者。

本文提供了一种经工程化的免疫细胞以及其用途，所述经工程化的免疫细胞功能性地表达包括第一抗原结合结构域的蛋白质和包括第二抗原结合结构域的蛋白质，其中所述第一抗原结合结构域与所关注的靶标特异性结合，并且所述第二抗原结合结构域与CD70(或CD70结合蛋白)特异性结合。

在各种实施例中，所述包括所述第一抗原结合结构域的蛋白质是第一CAR，并且所述包括所述第二抗原结合结构域的蛋白质是第二CAR。在一些实施例中，所述第二抗原结合结构域是包括一个或多于一个共刺激结构域的CAR，例如第二CAR。在一些实施例中，所述第二抗原结合结构域是CAR，例如不包括共刺激结构域的第二CAR。在一些实施例中，所述第二抗原结合结构域是任选地包括一个或多于一个共刺激结构域的CAR，例如第二CAR。

在各种实施例中，一种蛋白质包括所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域两者。在某些实施例中，所述一种蛋白质是双特异性CAR。

在某些实施例中，所述所关注的靶标是选自由以下组成的组的蛋白质：CD70、BCMA、EGFRvIII、Flt-3、WT-1、CD20、CD22、CD23、CD30、CD38、CD33、CD133、WT1、TSPAN10、MHC-PRAME、HER2、MSLN、PSMA、PSCA、GPC3、Liv1、ADAM10、CHRNA2、LeY、NKG2D、CS1、CD44v6、ROR1、CD19、Claudin-18.2(Claudin-18A2或Claudin18同种型2)、DLL3(δ样蛋白3、果蝇属δ同源物3、δ3)、Muc17、Muc3、Muc16、FAPα(成纤维细胞活化蛋白α)、Ly6G6D(淋巴细胞抗原6复合基因座蛋白G6d、c6orf23、G6D、MEGT1、NG25)或RNF43(E3泛素-蛋白连接酶RNF43，环指蛋白43)。在某些实施例中，所述所关注的靶标是选自由以下组成的组的蛋白质的人形式：CD70、BCMA、EGFRvIII、Flt-3、WT-1、CD20、CD22、CD23、CD30、CD38、CD33、CD133、WT1、TSPAN10、MHC-PRAME、HER2、MSLN、PSMA、PSCA、GPC3、Liv1、ADAM10、CHRNA2、LeY、NKG2D、CS1、CD44v6、ROR1、CD19、Claudin-18.2(Claudin-18A2或Claudin18同种型2)、DLL3(δ样蛋白3、果蝇属δ同源物3、δ3)、Muc17、Muc3、Muc16、FAPα(成纤维细胞活化蛋白α)、Ly6G6D(淋巴细胞抗原6复合基因座蛋白G6d、c6orf23、G6D、MEGT1、NG25)或RNF43(E3泛素-蛋白连接酶RNF43，环指蛋白43)。

在各种实施例中，本文所公开的经工程化的免疫细胞进一步包括内源性TRAC基因、内源性CD52基因和内源性CD70基因中的一种或多种的一个或多个基因组修饰。在某些实施例中，所述细胞包括TRAC的一个或两个等位基因处的敲除、CD52的一个或两个等位基因处的敲除、或CD70的一个或两个等位基因处的敲除、或TRAC、CD52和CD70中的一种或多种的一个或两个等位基因处的敲除。在各种实施例中，所述经工程化的免疫细胞表达TRAC、CD52和CD70中的一种或多种的水平是未经工程化的免疫细胞中的表达水平的不大于90％、不大于75％、不大于50％、不大于25％或不大于10％。

在各种实施例中，本文所公开的经工程化的免疫细胞是经工程化的T细胞。在各种实施例中，本文所公开的经工程化的免疫细胞是经工程化的NK细胞。

在各种实施例中，本文所公开的经工程化的免疫细胞包括编码所述包括第一抗原结合结构域的蛋白质的第一核酸和编码所述包括第二抗原结合结构域的蛋白质的第二核酸。在某些实施例中，第一载体包括所述第一核酸，并且第二载体包括所述第二核酸。在一些实施例中，一种或两种载体是慢病毒载体。在一些实施例中，一种或两种载体是腺相关病毒(AAV)载体。在某些实施例中，所述第一核酸和/或所述第二核酸位于被破坏的TRAC、CD52或CD70基因座内。在某些实施例中，一种载体包括所述第一核酸和所述第二核酸两者。在一些实施例中，所述载体是慢病毒载体或AAV载体。

在某些实施例中，所述经工程化的免疫细胞包括一种核酸，所述一种核酸编码包括第一抗原结合结构域的所述蛋白质和包括第二抗原结合结构域的所述蛋白质两者。在一些实施例中，载体包括所述一种核酸。在一些实施例中，所述载体是慢病毒载体或AAV载体。在某些实施例中，所述一个核酸位于破坏的TRAC、CD52或CD70基因座内。

在各种实施例中，所述经工程化的免疫细胞包括或进一步包括一种或多种基因组修饰，例如内源性基因座，例如以下中的一种或多种的一个或两个等位基因的基因座的修饰：内源性CD70基因、内源性TCRa基因和内源性CD52基因。在各种实施例中，所述一种或多种基因组修饰导致含有所述修饰的基因的功能性表达的减少或缺失。在各种实施例中，所述修饰包括基因座的破坏，例如敲除、敲低或敲入。在各种实施例中，所述破坏包括编码包括第一抗原结合结构域的所述蛋白质的第一核酸和/或编码包括第二抗原结合结构域的所述蛋白质的第二核酸的插入。在各种实施例中，所述修饰通过敲低，例如反义RNA、siRNA、miRNA、shRNA介导的敲低导致基因的功能性表达的减少或缺失。

本文所提供的经工程化的免疫细胞可以源自或制备自来自各种来源中的任一种的细胞。所述经工程化的免疫细胞可以制备自或源自来自除了将施用所述经工程化的免疫细胞的人以外的人，例如除了接受者以外的供体(例如，健康志愿者)的一种或多种细胞，例如干细胞或免疫细胞，或者可以制备自或源自将施用所述经工程化的免疫细胞的人(接受者)的细胞，例如干细胞或免疫细胞，或者可以衍生自一种或多种经诱导的多能干细胞(iPSC)。在各种实施例中，本文所公开的经工程化的免疫细胞是或源自从健康志愿者获得的免疫细胞、从患者获得或衍生自iPSC。

本文还提供了一种如本文所公开的经工程化的免疫细胞群体。在各种实施例中，所述群体包括10³个至10¹⁰个本文所提供的经工程化的免疫细胞，例如，10³个、10⁴个、10⁵个、10⁶个、10⁷个、10⁸个、10⁹个或10¹⁰个经工程化的免疫细胞，或这些值中任两个之间的任何范围。在某些实施例中，所述群体的所述经工程化的免疫细胞的不超过75％、不超过50％或不超过25％功能性地表达TRAC、CD52和CD70中的任何一种或TRAC、CD52和CD70中的任何两种或更多种。在某些实施例中，所述群体的所述经工程化的免疫细胞的不超过75％、不超过50％或不超过25％功能性地表达TRAC。在某些实施例中，所述群体的所述经工程化的免疫细胞的不超过75％、不超过50％或不超过25％功能性地表达CD52。在某些实施例中，所述群体的所述经工程化的免疫细胞的不超过75％、不超过50％或不超过25％功能性地表达TRAC，并且所述群体的所述经工程化的免疫细胞的不超过75％、不超过50％或不超过25％功能性地表达CD52。

本文还提供了一种细胞群体，其中所述细胞群体包括至少10％本文所公开的经工程化的免疫细胞、至少20％本文所公开的经工程化的免疫细胞、至少30％本文所公开的经工程化的免疫细胞、至少40％本文所公开的经工程化的免疫细胞、至少50％本文所公开的经工程化的免疫细胞、至少75％本文所公开的经工程化的免疫细胞或至少90％本文所公开的经工程化的免疫细胞。在某些实施例中，所述经工程化的细胞的至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少75％或至少90％包括内源性TCRa(或TRAC)基因、内源性CD52基因和内源性CD70基因中的一种或多种的一个或多个基因组修饰。在各种实施例中，所述细胞群体包括10₃个至10¹⁰个细胞。

在各种实施例中，本文所公开的细胞群体和经工程化的免疫细胞群体源自从健康志愿者获得的一种或多种免疫细胞，源自从患者获得的一种或多种免疫细胞或者衍生自一种或多种经诱导的多能干细胞(iPSC)。

本文还提供了一种药物组合物，其包括本文所公开的经工程化的免疫细胞中的一种或多种或者包括本文所公开的细胞群体或经工程化的免疫细胞群体，并且进一步包括至少一种药学上可接受的载剂或赋形剂。

本文进一步提供了一种制备本文所公开的经工程化的免疫细胞的方法，所述经工程化的免疫细胞包括内源性TCRa基因、内源性CD52基因和内源性CD70基因中的一种或多种的一个或多个基因组修饰，所述方法包括使用一种或多种选自由TALEN、锌指、Cas-CLOVER和CRISPR/Cas系统组成的组的基因编辑技术和/或使用任何已知的基因敲低方法，例如采用各种基于RNA的技术中的任一种的那些方法(例如，shRNA、反义RNA、miRNA、siRNA；参见例如，Lam等人，《分子疗法-核酸》4：e252(2015)，doi：10.1038/mtna.2015.23；Sridharan和Gogtay，《英国临床药理学杂志》82：659-72(2016))来降低TRAC、CD52和CD70中的一种或多于一种在本文所公开的经工程化的免疫细胞中的功能性表达和/或来自任何其它基因座的功能性表达。

本文进一步提供了一种制备本文所公开的经工程化的免疫细胞的方法，所述方法包括将编码所述包括第一抗原结合结构域的蛋白质的第一核酸和编码所述包括第二抗原结合结构域的蛋白质的第二核酸引入到免疫细胞中。在某些实施例中，一种载体包括所述第一核酸和所述第二核酸两者。在各种实施例中，所述载体是慢病毒载体。在各种实施例中，第一载体包括所述第一核酸，并且第二载体包括所述第二核酸。在某些实施例中，所述第一载体和所述第二载体中的任一者或两者是慢病毒载体。在各种实施例中，包括第一抗原结合结构域的所述蛋白质是CAR和/或包括第二抗原结合结构域的所述蛋白质是CD70CAR。在各种实施例中，包括第一抗原结合结构域的所述蛋白质和包括第二抗原结合结构域(即CD70结合结构域)的所述蛋白质是物理上分离且不同的蛋白质。在某些实施例中，所述分离且不同的蛋白质由通过例如P2A或T2A肽分离的双顺反子表达盒表达。在一些实施例中，包括所述第一抗原结合结构域的所述蛋白质是相对于包括所述CD70结合结构域的所述蛋白质的N末端。在一些实施例中，包括所述CD70结合结构域的所述蛋白质是相对于包括所述第一抗原结合结构域的所述蛋白质的N末端。在各种实施例中，包括第一抗原结合结构域的所述蛋白质和包括第二抗原结合结构域(即，CD70结合结构域)的所述蛋白质是同一蛋白质，例如双特异性CAR。

本文还提供了一种治疗患者的病状或疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用本文所公开的经工程化的免疫细胞中的任一种或多种中的一种或多种、或如本文所公开的细胞群体或经工程化的免疫细胞群体或如本文所公开的组合物。在各种实施例中，所述病状或疾病是实体瘤或血液瘤。在各种实施例中，所述病状或疾病是病毒性疾病、细菌性疾病、癌症、炎性疾病、免疫疾病或衰老相关疾病。在各种实施例中，所述病状或疾病选自由以下组成的组：胃癌、肉瘤、淋巴瘤(包含非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin′s lymphoma))、白血病、头颈癌、胸腺癌、上皮癌、唾液癌、肝癌、胃癌、甲状腺癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、食道癌、胰腺癌、神经胶质瘤、白血病、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、膀胱癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、口腔癌、皮肤癌和黑色素瘤。在各种实施例中，所述患者是先前治疗的患有局部晚期或转移性黑色素瘤、鳞状细胞头颈癌(SCHNC)、卵巢癌、肉瘤或复发性或难治性经典霍奇金氏淋巴瘤(classic Hodgkin′s Lymphoma，cHL)的成年受试者。

在各种实施例中，所述方法包括施用每kg体重约10³个或10⁴个至约10⁹个本文所公开的经工程化的免疫细胞或每kg体重约10⁵个至约10⁶个细胞的本文所公开的经工程化的免疫细胞或每kg体重0.1x10⁶个与5x10⁶个本文所公开的经工程化的免疫细胞。

在各种实施例中，所述细胞以单剂量施用。在各种实施例中，所述细胞在一定时间段内以多于一个剂量施用。

附图说明

图1展示了同种异体CART细胞的功能，所述同种异体CART细胞包括可以识别并与肿瘤抗原结合的第一CAR和在附图中被称为“CD70Dagger”的可以识别并与CD70结合的第二CAR两者。第一抗肿瘤抗原CAR使所识别的肿瘤细胞裂解。第二抗CD70 CAR，又名CD70dagger使对同种异体CAR T细胞有反应和/或攻击的患者(同种异体CAR T细胞的接受者)的免疫细胞(例如NK和/或T细胞)裂解。因此同种异体CAR T细胞通过预防或限制患者的免疫细胞的攻击而持续更久。

图2A-2D：移植物供体CD70 CART细胞被保护免受接受者同种异体反应性T细胞的杀伤。将来自八个接受者供体的PBMC与经照射的移植物供体T细胞共培养7天，以允许同种异体反应性接受者T细胞(RTC)的致敏和扩增。图2A：然后将致敏的同种异体反应性RTC分离，并与移植物供体T细胞受体α常数(TRAC)敲除(KO)CD70 CAR T细胞或与移植物供体T细胞受体α常数(TRAC)敲除(KO)未转导的T细胞(NTD)以1∶1的比率共培养48小时。通过流式细胞术评估移植物供体细胞的杀伤。图2B：与低同种异体反应性RTC以及与高同种异体反应性RTC共培养后的未转导的和CD70 CART细胞的杀伤百分比。图2C：示出CD70+RTC的杀伤的代表性流式细胞术图。图2D：CD4和CD8 RTC的绝对数量(Abs.No.)和存活率。符号表示单个RTC供体。数据表示两个独立实验。

图3A-3B：来自多个供体的移植物供体CD70 CAR T细胞显示出RTC的杀伤。将来自接受者供体的PBMC与由三个不同供体生成的移植物供体TRAC KO CD70 CAR T细胞以1∶1的比率共培养6天。通过流式细胞术评估接受者T细胞的杀伤。图3A，CD4和CD8 RTC的绝对数量和图3B，存活率百分比。符号表示单个CAR T细胞移植物供体。

图4A-4B：移植物供体CD70 CAR T细胞示出CD70阳性接受者B细胞、T细胞和NK细胞的杀伤。将来自接受者供体的PBMC与移植物供体TRAC KO CD19或CD70 CART细胞以2：1的比率共培养6天。通过流式细胞术评估CD70阳性接受者细胞的杀伤。图4A：流式细胞术图示出了在经活化的B、T和NK细胞上的CD70的上调以及CD70 CAR T细胞对CD70+接受者细胞的杀伤。图4B：CD70+接受者B细胞、T细胞和NK细胞的绝对数量。

图5A-5C：用编码一系列CD70 dagger蛋白(CD70dg)的LVV转导经活化的人T细胞，并通过流式细胞术分析细胞。活化后第14天的CD70dagger+细胞的百分比示出于图5A。活化后第14天的CD4：CD8比率示出于图5B。通过测量CD25和4-1BB在活化后第9天的表达来评估经转导的细胞的活化状态(图5C)。圆圈表示作为第一代CAR的NTD对照或CD70dagger，并且三角形表示作为第二代CAR的CD70 dagger。误差条表示平均值±SEM。MFI：平均荧光强度。

图6A-F：表达CD70 dagger(或CD70结合蛋白)的T细胞耗尽同种异体反应性T细胞并抵抗T细胞介导的排斥。同种异体反应性T细胞MLR(图6A)和PBMC MLR(图6B)使用表达CD70 dagger的TRAC^KO移植物供体T细胞进行。在第9天通过流式细胞术分析细胞，并且测量剩余宿主T和NK细胞的绝对数量。图6C-D中的数据示出经活化的宿主T和NK细胞被在PBMCMLR中表达CD70 dagger的T细胞消除。数据表示两个独立实验。符号表示独特的移植物-宿主供体对。图6E-F描绘了作为携带变体CD3z信号传导结构域(bbz1XX和bbzXX3)的第二代CAR的另外的CD70 dagger构建体的PBMC MLR测定的结果。误差条表示平均值±SEM。

图7A-G：表达通过位点特异性整合引入的CD70 dagger的T细胞。经活化的人T细胞被修饰以表达由通过位点特异性整合引入的AAV载体编码的不同CD70 dagger蛋白，并且通过流式细胞术分析细胞。图7A示出了CD70 dagger阳性细胞的百分比，并且图7B示出了CD70dagger表达水平，两者均在活化后第14天。活化后第9天的活化标志物CD25和4-1BB的表达示出于图7C，并且在活化后第14天如通过流式细胞术确定的CD4：CD8比率示出于图7D。虚线表示表达CD70 dagger的细胞的平均值，所述CD70dagger是具有CD3ζ和4-1BB信号传导结构域的第二代CAR，如“CD70CAR”所示。圆圈和三角形分别表示第一代和第二代CAR的CD70dagger(图7E-G)。使用表达不同CD70 dagger蛋白的TRAC-KO T细胞进行PBMC MLR，并且随时间推移测量细胞计数。图7E中的数据示出CD70 dagger T细胞抵抗宿主排斥并在PBMCMLR测定中扩增。图7F-G中的数据示出宿主T和NK细胞扩增被CD70 dagger T细胞抑制。数据是来自用于板图7E-G的4个独特的移植物-宿主供体对的组合结果。误差条表示平均值±SEM。

图8A-C描绘了对于与CD70三聚体复合物结合的不同抗体而言重要的CD70的氨基酸残基。图8D-E示出了由表达CD70 dagger蛋白的移植物细胞对宿主排斥和宿主T细胞的抑制的抵抗的结果，所述CD70 dagger蛋白含有源自抗CD70抗体克隆4F11、8C8或8F8的CD70结合结构域。

图9示出了单独或与CD70 dagger结合的表达抗肿瘤抗原CAR，例如CD19 CAR的T细胞的细胞毒性结果。

具体实施方式

本公开提供了一种用于提供治疗性同种异体细胞(例如CAR T细胞)产物的策略，所述产物可以克服或减轻接受者的免疫系统的排斥的影响。这允许细胞产物在接受者体内持续更久，并且因此促进和/或改善治疗效果。本策略为同种异体细胞提供了对针对同种异体细胞变活化的宿主免疫细胞的防御。此防御包括由同种异体细胞表达CD70结合蛋白，例如CD70 CAR。因此，此策略选择性地靶向宿主或接受者，例如患者的T和NK细胞上的CD70(分化簇70)蛋白。

通用技术

除非另有指示，否则本公开的实践将采用在本领域的技术范围内的分子生物学(包含重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术。此类技术在以下文献中充分地解释，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning：A LaboratoryManual)》，第二版(Sambrook等人，1989)冷泉港出版社(Cold Spring Harbor Press)；《寡核苷酸合成(Oligonucleotide Synthesis)》(M.J.Gait，编辑，1984)；《分子生物学方法(Methods in Molecular Biology)》，胡马纳出版社(Humana Press)；《细胞生物学：实验室手册(Cell Biology：A Laboratory Notebook)》(J.E.Cellis，编辑，1998)学术出版社(Academic Press)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》(R.I.Freshney，编辑，1987)；《细胞和组织培养概论(Introduction to Cell and Tissue Culture)》(J.P Mather和P.E.Robets，1998)普莱纽姆出版社(Plenum Press)；《细胞和组织培养：实验室程序(Celland Tissue Culture：Laboratory Procedures)》(A.Doyle，J.B.Griffiths和D.G.Newell，编辑，1993-1998)约翰·威利父子出版公司(J.Wiley and Sons)；《酶学方法(Methods inEnzymology)》(学术出版社公司)；《实验免疫学手册(Handbook of ExperimentalImmunology)》(D.M.Weir和C.C.Blackwell，编辑)；《哺乳动物细胞的基因转移载体(GeneTransfer Vectors for Mammalian Cells)》(J.M.Miller和M.P.Calos，编辑，1987)；《当代分子生物学实验指南(Current Protocols in Molecular Biology)》(F.M.Ausubel等人，编辑，1987)；《PCR：聚合酶链反应(PCR：The Polymerase Chain Reaction)》，(Mullis等人，编辑，1994)；《当代免疫学实验指南(Current Protocols in Immunology)》(J.E.Coligan等人，编辑，1991)；《精编分子生物学实验指南(Short Protocols in MolecularBiology)》(约翰威利父子出版公司，1999)；《免疫生物学(Immunobiology)》(C.A.Janeway和P.Travers，1997)；《抗体(Antibodies)》(P.Finch，1997)：《抗体：实用方法(Antibodies：a practical approach)》(D.Catty.，编辑，IRL出版社(IRL Press)，1988-1989)；《单克隆抗体：实用方法(Monoclonal antibodies：a practical approach)》(P.Shepherd和C.Dean，编辑，牛津大学出版社(Oxford University Press)，2000)；《使用抗体：实验室手册(Using antibodies：a laboratory manual)》(E.Harlow和D.Lane(冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)，1999)；《抗体(The Antibodies)》(M.Zanetti和J.D.Capra，编辑，哈伍德学术出版社(Harwood Academic Publishers)，1995)。例如，使用TALEN、CRISPR/Cas9和megaTAL核酸酶的基因编辑技术在本领域的技术范围内，并且在文献中充分地解释，如T.Gaj等人，《基因组编辑技术：原理和应用(Genome-EditingTechnologies：Principles and Applications)》，冷泉港生物学展望(Cold Spring HarbPerspect Biol)2016；8：a023754和其中的引文。

定义

如本文所使用的，“自体”意指从受试者获得的用于治疗所述受试者的细胞、细胞系或细胞群体。

如本文所使用的，“同种异体”意指不是从受试者获得而是从供体获得的用于治疗所述受试者的细胞或细胞群体。

如本文所使用的，术语“内源性”是指来自或产生自生物体、细胞、组织或系统内部的任何材料。

如本文所使用的，术语“外源性”是指从生物体、细胞、组织或系统外部引入或产生的任何材料。

如本文所使用的，“免疫细胞”是指功能性地参与先天性和/或适应性免疫应答的启动和/或执行的具有造血来源的细胞。免疫细胞的实例包含T细胞，例如α/β T细胞和γ/δT细胞、调节性T(Treg)细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、肥大细胞和骨髓源性吞噬细胞。

如本文所使用的，术语“表达”是指由启动子驱动的特定核苷酸序列的转录和/或翻译。

如本文所使用的，“表达载体”是指包括重组多核苷酸的载体，所述重组多核苷酸包括与要表达的核苷酸序列操作性地连接的表达控制序列。表达载体包含本领域已知的所有表达载体，包含掺入重组多核苷酸的粘粒、质粒(例如，裸的或包含在脂质体中)和病毒(例如，慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。

在各种实施例中，本公开的经工程化的免疫细胞功能性地表达第一抗原结合蛋白和第二CD70结合蛋白，例如第一CAR和第二CD70 CAR，并且任选地进一步包括另外的特征。例如，所述经工程化的免疫细胞可以包括基因组修饰，例如在内源性基因，如CD70、TCRa和CD52中的一种或多种处的降低或消除基因的功能性表达的突变，和/或所述经工程化的免疫细胞可以表达一种或多种另外的蛋白质。所述经工程化的免疫细胞还可以包括通过例如基因敲低来减少或消除基因的功能性表达的一种或多种其它基因组修饰。抗原结合蛋白和一种或多种另外的蛋白质可以从通过本文所述的技术引入细胞中的(具有或不具有信号序列的)编码蛋白质的外源性核酸表达。如本文所描述的，本公开的经工程化的免疫细胞可以源自，例如制备自从各种来源获得的细胞，例如免疫细胞。

如本文所使用的，“功能性地表达”基因意指基因被表达，并且所述表达产生功能性基因最终产物。例如，如果基因编码蛋白质，那么如果所述基因的表达最终产生功能正常的蛋白质，则细胞功能性地表达所述基因。因此，例如，如果基因未被转录，或者基因的表达最终产生未经翻译的RNA，或者翻译仅产生非功能性蛋白质，例如蛋白质没有正确折叠或者没有被运输到其作用位点(例如，对于膜结合蛋白而言的膜)，则所述基因未被功能性地表达。功能性表达可以被直接(例如，通过测定基因产物本身)或间接(例如，通过测定基因产物的效果)测量。

如本文所使用的，“可操作地连接”是指单个核酸片段上的核酸序列的缔合，使得一个核酸序列的功能受到另一个的影响。例如，当启动子能够影响编码序列的表达时(即，编码序列在启动子的转录控制之下)，所述启动子与所述编码序列可操作地连接。

如本文所使用的，“表达控制序列”意指指导核酸转录的核酸序列。表达控制序列可以是启动子，如组成型或诱导型启动子或者增强子。表达控制序列与要转录的核酸序列可操作地连接。

“启动子”和“启动子序列”可互换使用，并且是指能够控制编码序列或功能性RNA的表达的DNA序列。通常，编码序列位于启动子序列的3′。本领域技术人员应理解，不同的启动子可以指导基因在不同组织或细胞类型中、或在不同发育阶段、或响应于不同环境或生理条件的表达。

在本公开的任何载体中，载体任选地包括本文所公开的启动子。

“宿主细胞”包含可以是或已经是用于掺入多核苷酸插入物的载体的接受者的单个细胞或细胞培养物。宿主细胞包含单个宿主细胞的后代，并且由于自然、意外或有意突变，后代可能不一定与原始亲代细胞完全相同(在形态学上或在基因组DNA互补方面)。宿主细胞包含用本公开的多核苷酸在体内转染的细胞。

如本文所使用的，术语“胞外配体结合结构域”是指能够结合配体的寡肽或多肽。优选地，所述结构域将能够与细胞表面分子相互作用。例如，可以选择胞外配体结合结构域以识别充当与特定疾病状态相关的靶细胞上的细胞表面标志物的配体。术语“茎结构域”在本文中用于指起作用以将跨膜结构域连接到胞外配体结合结构域的任何寡肽或多肽。具体地，茎结构域被用于为胞外配体结合结构域提供更大的灵活性和可及性。

术语“胞内信号传导结构域”是指转导效应子信号功能信号并指导细胞执行专门功能的蛋白质的一部分。

如本文所使用的，“共刺激分子”是指T细胞上的与共刺激配体特异性结合的同源结合配偶体，从而介导细胞的共刺激应答，如但不限于增殖。共刺激分子包含但不限于MHCI类分子、BTLA和Toll配体受体。共刺激分子的实例包含CD27、CD28、CD8、4-1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3以及与CD83特异性结合的配体等。

“共刺激配体”是指抗原呈递细胞上的分子，所述分子与T细胞上的同源共刺激信号分子特异性结合，从而提供了除了通过例如TCR/CD3复合物与装载有肽的MHC分子的结合所提供的主要信号外的信号，所述信号介导T细胞应答，包含但不限于增殖活化、分化等。共刺激配体可以包含但不限于CD7、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、4-1BBL、OX40L、诱导型共刺激配体(ICOS-L)、细胞间粘附分子(ICAM)、CD30L、CD40、CD70、CD83、HLA-G、MICA、M1 CB、HVEM、淋巴毒素β受体、3/TR6、ILT3、ILT4、结合Toll配体受体的激动剂或抗体以及与B7-H3特异性结合的配体。共刺激配体还特别涵盖与T细胞上存在的共刺激分子特异性结合的抗体，如但不限于CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LTGHT、NKG2C、B7-H3、与CD83特异性结合的配体。

“抗体”是能够通过位于免疫球蛋白分子的可变区中的至少一个抗原识别位点来与靶标(如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等)特异性结合的免疫球蛋白分子。如本文所使用的，所述术语不仅涵盖完整的多克隆或单克隆抗体，还涵盖其抗原结合片段(如Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv)，以及包括抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它经修饰的构型，例如包含但不限于单链(scFv)和结构域抗体(例如包含鲨鱼和骆驼抗体)，以及包括抗体的融合蛋白。抗体包含任何类别的抗体，如IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且抗体不需要具有任何特定类别。免疫球蛋白根据其重链的恒定区的抗体氨基酸序列，可以被分配为不同类别。有五种主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的若干种可以被进一步划分为亚类(同种型)，例如，lgG1、1gG2、1gG3、lgG4、lgA1和lgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定区分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚单元结构和三维构型是众所周知的。

如本文所使用的，术语抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”是指保留与给定抗原特异性结合的能力的完整抗体的一个或多个片段。抗体的抗原结合功能可以通过完整抗体的片段来执行。术语抗体的“抗原结合片段”中涵盖的结合片段的实例包含Fab；Fab′；F(ab′)2；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；单个结构域抗体(dAb)片段(参见例如，Ward等人，《自然(Nature)》341：544-546，1989)以及单独的互补决定区(CDR)。

与靶标“特异性结合”的抗体、抗体缀合物或多肽是本领域中所熟知的术语，并且确定此类特异性结合的方法也是本领域中所众所周知的。如果与替代细胞或物质相比，分子与特定细胞或物质发生反应或缔合更频繁、更快速、持续时间更长和/或具有更大的亲和力，则所述分子被称为表现出“特异性结合”。如果抗体比其与其它物质亲和力、亲合性更大地、更容易地和/或持续时间更长地结合，则所述抗体与靶标“特异性结合”。在此定义下，还应理解，例如，与第一靶标特异性结合的抗体(或部分或表位)可以或可以不与第二靶标特异性结合。因此，“特异性结合”不一定需要(尽管其可以包含)排他性结合。

抗体的“可变区”是指单独或组合的抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区。如本领域中己知的，重链和轻链的可变区各自由通过三个互补决定区(CDR)(也被称为高变区)连接的四个框架区(FR)组成。每条链中的CDR通过FR紧密结合在一起，并且与另一条链中的CDR一起有助于形成抗体的抗原结合位点。存在若干种用于确定CDR的技术，例如基于跨物种序列可变性的方法(即，Kabat等人《具有免疫学意义的蛋白质的序列(Sequences ofProteins of Immunological Interest)》，(第5版，1991，马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院(National Institutes of Health，Bethesda，MD)))；基于抗原-抗体复合物的晶体学研究的方法(an approach based on crystallographic studies of antigen-antibodycomplexes)(Al-lazikani等人，1997，《分子生物学杂志(J.Molec.Biol.)》273：927-948)，Chothia系统(即，Chothia和Lesk，《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》(1987)196(4)：901-917)。如本文所使用的，CDR可以指通过任一方法或通过两种方法的组合所定义的CDR。

可变结构域的“CDR”是可变区内的氨基酸残基，其根据Kabat、Chothia的定义、Kabat和Chothia两者的积累、AbM、接触和/或构象定义或本领域众所周知的任何CDR确定方法来鉴定。抗体CDR可以被鉴定为最初由Kabat等人定义的高变区。参见例如Kabat等人，1992，《具有免疫学意义的蛋白质序列》，第5版，华盛顿特区的国立卫生研究院公共卫生局(Public Health Service，NIH，Washington D.C.)。CDR的位置也可以被鉴定为Chothia等人最初描述的结构环结构。参见例如，Chothia等人，《自然》342：877-883，1989。CDR鉴定的其它方法包含“AbM定义”，所述定义是Kabat与Chothia之间的折衷方案，并且使用牛津分子(Oxford Molecular)的AbM抗体建模软件(现为)衍生，或者基于观察到的抗原接触的CDR的“接触定义”，所述定义在MacCallum等人，《分子生物学杂志》，262：732-745，1996中阐述。在本文中被称为CDR的“构象定义”的另一种方法中，CDR的位置可以被鉴定为对抗原结合做出焓贡献(enthalpic contribution)的残基。参见例如，Makabe等人，《生物化学杂志(Journal of Biological Chemistry)》，283：1156-1166，2008。其它CDR边界定义仍可能不严格遵循上述方法中的一种，但尽管如此将与Kabat CDR的至少一部分重叠，但是鉴于特定残基或残基组或甚至整体CDR不显著影响抗原结合的预测或实验发现，所述边界定义可以被缩短或加长。如本文所使用的，CDR可以指通过本领域已知的任何方法，包含方法的组合所定义的CDR。本文所使用的方法可以利用根据这些方法中的任一种所定义的CDR。对于含有多于一个CDR的任何给定实施例，CDR可以根据Kabat、Chothia、延长、AbM、接触、AHo和/或构象定义中的任一个来定义。

本公开的抗体(和CAR)可以使用本领域众所周知的技术产生，所述技术例如重组技术、噬菌体展示技术、合成技术或此类技术的组合或本领域熟知的其它技术(参见例如Jayasena，S.D.，《临床化学(Clin.Chem.)》，45：1628-50，1999以及Fellouse，F.A.等人，《分子生物学杂志》，373(4)：924-40，2007)。

如本领域已知的，如在本文中可互换使用的，“多核苷酸”或“核酸”是指具有任何长度的核苷酸的链，并且包含DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基和/或其类似物或可以通过DNA或RNA聚合酶并入到链中的任何底物。多核苷酸可以包括经修饰的核苷酸，如经甲基化的核苷酸及其类似物。如果存在，则可以在组装链之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分中断。多核苷酸可以在聚合后进一步修饰，如通过与标记组分结合。其它类型的修饰包含例如“封端”、用以下取代天然存在的核苷酸中的一种或多种：类似物；核苷酸间修饰，如具有不带电的键(例如，甲基膦酸酯、磷酸三酯、磷酰胺、氨基甲酸酯等)和具有带电的键(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些核苷酸间修饰、含有侧基部分，如蛋白质(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)的那些核苷酸间修饰、具有嵌入剂(例如，吖啶(acridine)、补骨脂素(psoralen)等)的那些核苷酸间修饰、含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属等)的那些核苷酸间修饰、含有烷基化剂的那些核苷酸间修饰、具有经修饰的键(例如，α异头核酸等)的那些核苷酸间修饰以及多核苷酸的未经修饰的形式。此外，通常存在于糖中的任何羟基可以例如被膦酸酯基、磷酸酯基替换，被标准保护基团保护或者被活化以制备相对于另外的核苷酸的另外的键，或者可以缀合到固相载体。5′和3′末端OH可以用具有1至20个碳原子的胺或有机封端基团部分磷酸化或取代。其它羟基也可以衍生成标准保护基团。多核苷酸还可以含有本领域中通常已知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包含例如2′-O-甲基-、′-O-烯丙基、2′-氟基-或2′-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α异头糖或β异头糖、差向异构糖(如阿拉伯糖、木糖或来苏糖)、哌喃醣、呋喃糖、景天庚酮糖、非环状类似物和无碱基核苷类似物(如甲基核糖苷)。一个或多个磷酸二酯键可以被可替代的连接基团替换。这些可替代的连接基团包含但不限于其中磷酸盐被P(O)S(“硫代化物”)、P(S)S(“二硫代化物”)、(O)NR2(“酰胺化物”、P(O)R、P(O)OR′、CO或CH2(“甲缩醛化物”)替代的实施例，其中每个R或R′独立地为H或任选地含有醚(-O-)键、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基的经取代的或未经取代的烷基(1-20个C)。多核苷酸中的所有键并非都需要是相同的。上述描述适用于本文中所提及的所有多核苷酸，包含RNA和DNA。

如本文所使用的，“转染”指细胞摄取外源性或异源性RNA或DNA。当外源性或异源性RNA或DNA已被引入细胞内时，细胞已被此类RNA或DNA“转染”。当经转染的RNA或DNA影响表型变化时，细胞已被外源性或异源性RNA或DNA“转化”。转化RNA或DNA可以被整合(共价连接)到构成细胞的基因组的染色体DNA中。

如本文所使用的，“转化”是指将核酸片段转移到宿主生物体的基因组中，从而使得基因稳定遗传。含有经转化的核酸片段的宿主生物体被称为“转基因”或“重组”或“转化”生物体。

如本文所使用的，“基本上纯的”是指至少50％纯(即，不含污染物)、更优选地至少90％纯、更优选地至少95％纯、又更优选地至少98％纯以及最优选地至少99％纯的材料。如本文关于抗体所使用的，术语“竞争”意指第一抗体或其抗原结合片段(或部分)以与第二抗体或其抗原结合部分的结合十分类似的方式与表位结合，使得与在不存在第二抗体的情况下第一抗体的结合相比，在存在第二抗体的情况下第一抗体与其同源表位的结合结果可检测地降低。替代方案，其中第二抗体与其表位的结合在存在第一抗体的情况下也可检测地降低，可以但不一定是这种情况。也就是说，第一抗体可以抑制第二抗体与其表位的结合，而第二抗体不抑制第一抗体与其相应表位的结合。然而，在每种抗体可检测地抑制其它抗体与其同源表位或配体的结合的情况下，无论是在相同、更大还是更小的程度上，所述抗体被认为彼此“交叉竞争”以与其相应的表位结合。本公开涵盖竞争抗体和交叉竞争抗体。无论此类竞争或交叉竞争发生的机制如何(例如，空间位阻、构象变化或与共同表位或其部分的结合)，技术人员将理解，基于本文所提供的教导，此类竞争和/或交叉竞争抗体被涵盖在内并且可以用于本文所公开的方法。

如本文所使用的，“治疗”是用于获得有益或期望的临床结果的方法。出于本公开的目的，有益或期望的临床结果包含但不限于以下中的一项或多项：减少(或破坏)肿瘤或癌细胞的增殖，抑制肿瘤细胞的转移，缩小或减小肿瘤的大小，缓解疾病(例如癌症)，减轻由疾病(例如，癌症)引起的症状，提高患有疾病(例如，癌症)的人的生活质量，减少治疗疾病(例如，癌症)所需的其它药物的剂量，延缓疾病(例如，癌症)的进展、治愈疾病(例如，癌症)和/或延长患有疾病(例如，癌症)的受试者的生存期。

“改善”是指与未施用治疗相比，一种或多种症状的减轻或改善。“改善”还包含症状的持续时间的缩短或减少。如本文所使用的，药物、化合物或药物组合物的“有效剂量”或“有效量”是足以影响任何一种或多种有益或期望的结果的量。对于预防性用途，有益或期望的结果包含疾病(包含疾病的生化、组织学和/或行为症状、其并发症和在疾病发展期间出现的中间病理表型)的风险的消除或降低、减轻严重程度或延迟其发作。对于治疗性用途，有益或期望的结果包含临床结果，如各种疾病或病状(如癌症)的一种或多种症状的发生率降低或改善，减少治疗疾病所需的其它药物的剂量，增强另一种药物的效果和/或延迟疾病的进展。有效剂量可以一次或多次施用进行施用。出于本公开的目的，有效剂量的药物、化合物或药物组合物是足以直接或间接完成预防性或治疗性治疗的量。正如在临床背景下所理解的，有效剂量的药物、化合物或药物组合物可能会或可能不会与另一种药物、化合物或药物组合物联合实现。因此，在施用一种或多种治疗剂的背景下可以考虑“有效剂量”，并且如果结合一种或多种其它药剂可以实现或实现期望的结果，则可以考虑将单个药剂以有效量给予。

如本文所使用的，“受试者”是任何哺乳动物，例如人或猴子。哺乳动物包含但不限于农场动物、运动动物、宠物、灵长类动物、马、狗、猫、小鼠和大鼠。在示例性实施例中，受试者是人。在示例性实施例中，受试者是猴子，例如食蟹猴。

如本文所使用的，“载体”意指能够在宿主细胞中递送并且优选地表达一个或多个所关注的基因或序列的构建体。载体的实例包含但不限于病毒载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子缩合剂缔合的DNA或RNA表达载体、包封在脂质体中的DNA或RNA表达载体以及某些真核细胞，如生产细胞。

如本文所使用的，“药学上可接受的载剂”或“药学上可接受的赋形剂”包含当与活性成分组合时允许所述成分保留生物活性并且与受试者的免疫系统无反应性的任何材料。实例包含但不限于任何标准药物载剂，如磷酸盐缓冲盐溶液、水、如油/水乳液等乳液以及各种类型的润湿剂。用于气溶胶或肠胃外施用的优选的稀释剂是磷酸盐缓冲盐水(PBS)或生理(0.9％)盐水。包括此类载剂的本公开的组合物通过众所周知的常规方法调配(参见例如，《雷明顿氏药物科学(Remington′s Pharmaceutical Sciences)》，第18版，A.Gennaro编辑，宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(Mack Publishing Co.，Easton，PA)，1990；以及《雷明顿药学科学与实践(Remington，The Science and Practice of Pharmacy)》第21版马克出版公司，2005)。

如本文所使用的，“同种异体反应性”指T细胞识别胸腺发育期间未遇到的MHC复合物的能力。同种异体反应性在临床上表现为宿主抗移植物排斥或反应和移植物抗宿主病。

本文中对“约”值或参数的提及包含(并且描述)指向所述值或参数本身±1、2、3、4、5、6、7、8、9或10％的实施例。例如，提及“约X”的描述包含“X”的描述。数字范围包含定义所述范围的数字。

应当理解，在任何情况下在本文中用语言“包括”描述的实施例，也提供了用“由…组成”和/或“基本上由…组成”描述的以其它方式的类似实施例。

在就马库什(Markush)组或替代方案的其它分组而言描述本公开的方面或实施例的情况下，本公开不仅涵盖整体列出的整个组，而且还涵盖所述组的单独的每个成员和主组的所有可能子组，并且还涵盖缺少组成员中的一个或多个的主组。本公开还设想明确地排除所公开和/或所要求保护的实施例中的组成员中的任何组成员中的一个或多个。

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在发生冲突的情况下，以本说明书(包含定义)为准。贯穿本说明书和权利要求书，词语“包括(comprise)”或如“包括(comprises)”或“包括(comprising)”等变体应当被理解为暗示包含所陈述整数或整数组，但不排除任何其它整数或整数组。除非上下文另外要求，否则单数术语应包含复数并且复数术语应包含单数。

本文描述了示例性方法和材料，但是与本文所描述的那些方法和材料类似或等同的方法和材料也可以用于本公开的实践或测试。所述材料、方法和实例仅是说明性的并且不旨在是限制性的。

“抗原结合蛋白”包括一个或多个抗原结合结构域。如本文所使用的，“抗原结合结构域”意指结合指定靶抗原的任何多肽。在一些实施例中，抗原结合结构域与肿瘤细胞上的抗原结合。在一些实施例中，抗原结合结构域与涉及过度增殖性疾病或涉及病毒或细菌抗原的细胞上的抗原结合。

抗原结合结构域包含但不限于作为免疫功能片段的抗体结合区。抗原结合结构域的术语“免疫功能片段”(或“片段”)是抗原结合结构域的物种，所述抗原结合结构域的物种包括缺少全长链中存在的氨基酸中的至少一些，但仍能够与靶抗原特异性结合的抗体的一部分(无论如何获得或合成所述部分)。此类片段具有生物活性，因为所述片段与靶抗原结合，并且可以与包含完整抗体的其它抗原结合结构域竞争与给定表位结合。

免疫功能性免疫球蛋白片段包含但不限于scFv片段、Fab片段(Fab′、F(ab′)2等)、一个或多个互补决定区(“CDR”)、双抗体(重链可变结构域与轻链可变结构域位于同一多肽上，通过太短而不允许同一链上的两个结构域之间配对的短肽接头连接)、结构域抗体、二价抗原结合结构域(包括两个抗原结合位点)、多特异性抗原结合结构域以及单链抗体。这些片段可以源自任何哺乳动物来源，包含但不限于人、小鼠、大鼠、骆驼或兔。如所属领域的技术人员将了解，抗原结合结构域可以包含非蛋白质组分。

可变区通常展现由3个高变区(CDR)接合的相对保守框架区(FR)的相同通式结构。来自每对的两条链的CDR通常由框架区比对，所述框架区可以与特定表位结合。从N末端到C末端，轻链可变区和重链可变区两者通常均包括结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。按照惯例，重链中的CDR区通常被称为HC CDR1、CDR2和CDR3。轻链中的CDR区通常被称为LC CDR1、CDR2和CDR3。

在一些实施例中，抗原结合结构域包括存在于抗体的全长轻链或重链中的一个或多个互补结合区(CDR)，并且在一些实施例中包括单个重链和/或轻链或其部分。这些片段可以通过重组DNA技术产生或可以通过抗原结合结构域(包含完整抗体)的酶或化学裂解产生。

在一些实施例中，抗原结合结构域是抗体或其片段，包含其互补决定区(CDR)中的一个或多个。在一些实施例中，抗原结合结构域是单链可变片段(scFv)，包括轻链CDR：CDR1、CDR2和CDR3，以及重链CDR：CDR1、CDR2和CDR3。

将氨基酸分配到框架、CDR和可变结构域中的每一个通常是根据以下编号方案进行的：Kabat编号(参见例如，Kabat等人《具有免疫学意义的蛋白质的序列》，第5版，NIH公开号91-3242，马里兰州贝塞斯达1991)、Chothia编号(参见例如，Chothia和Lesk，(1987)，《分子生物学杂志》196：901-917；Al-Lazikani等人，(1997)《分子生物学杂志》273：927-948；Chothia等人，(1992)《分子生物学杂志》227：799-817；Tramontano等人，(1990)《分子生物学杂志》215(1)：175-82；以及美国专利第7,709,226号)、接触编号、AbM方案(抗体建模程序，牛津分子公司(Oxford Molecular))或AHo系统(Honneger和Pluckthun，《分子生物学杂志》(2001)309(3)：657-70)。

在一些实施例中，抗原结合结构域是重组抗原受体。如本文所使用的，术语“重组抗原受体”泛指非天然存在的表面受体，所述非天然存在的表面受体包括胞外抗原结合结构域或胞外配体结合结构域、跨膜结构域和胞内结构域。在一些实施例中，重组抗原受体是嵌合抗原受体(CAR)。嵌合抗原受体(CAR)是本领域熟知的。CAR是包括抗原识别部分、跨膜结构域和T细胞活化结构域的融合蛋白(参见例如，Eshhar等人，《美国国家科学院院刊》，90(2)：720-724(1993))。

在一些实施例中，重组抗原受体的胞内结构域包括共刺激结构域和含ITAM的结构域。在一些实施例中，重组抗原受体的细胞内结构域包括细胞内蛋白或其功能变体(例如，截短、插入、缺失或取代)。

如本文所使用的，术语“胞外配体结合结构域”或“胞外抗原结合结构域”是指能够结合配体或抗原或能够与细胞表面分子，如配体或表面抗原相互作用的多肽。例如，可以选择胞外配体结合结构域或抗原结合结构域以识别充当与特定疾病状态(例如，肿瘤特异性抗原)相关的靶细胞上的细胞表面标志物的配体。在一些实施例中，抗原结合结构域包括抗体或抗体的抗原结合片段或抗原结合部分。在一些实施例中，抗原结合结构域包括Fv或scFv、Fab或scFab、F(ab′)2或scF(ab′)2、Fd、单体、亲和体、骆驼抗体、VHH抗体、单结构域抗体或darpin。在一些实施例中，配体结合结构域包括结合对的配偶体，如与表面受体结合的配体、或与配体结合的表面受体的胞外域。

术语“茎结构域”或“铰链结构域”在本文中可互换使用以指起作用以将跨膜结构域与胞外配体结合结构域连接的任何多肽。具体地，茎结构域通常用于为胞外配体结合结构域提供更大的灵活性和可及性。

术语“胞内信号传导结构域”是指转导效应子信号功能信号并指导细胞执行专门功能的蛋白质的一部分。

载体

用于施用多核苷酸组合物的表达载体和方法是本领域已知的，并在本文中进一步描述。

另一方面，本公开提供了一种制备本文所描述的多核苷酸中的任一种的方法。

本公开还涵盖与任何此类序列互补的多核苷酸。多核苷酸可以是单链(编码或反义)或双链的，并且可以是DNA(基因组、cDNA或合成的)或RNA分子。RNA分子包含含有内含子并以一对一的方式对应于DNA分子的hnRNA分子，以及不含有内含子的mRNA分子。另外的编码或非编码序列可以但不必存在于本公开的多核苷酸内，并且多核苷酸可以但不必连接到其它分子和/或载体材料。

多核苷酸可以包括天然序列(即，编码抗体或其部分的内源性序列)，或者可以包括此类序列的变体。多核苷酸变体含有一个或多个取代、添加、缺失和/或插入，使得经编码的多肽的免疫反应性相对于天然免疫反应性分子没有减弱。通常可以如本文所描述地评估对经编码的多肽的免疫反应性的效果。变体优选地表现出与编码天然抗体或其部分的多核苷酸序列至少约70％同一性，更优选地至少约80％同一性，又更优选地至少约90％同一性，以及最优选地至少约95％同一性。如果两个序列中的核苷酸或氨基酸的序列在如下文所述比对最大对应性时是相同的，则两个多核苷酸或多肽序列被称为“相同”。两个序列之间的比较通常通过在比较窗口上比较序列来进行，以鉴定和比较具有序列类似性的局部区。如本文所使用的，“比较窗口”是指具有至少约20个连续位置，通常30个至约75个或40个至约50个连续位置的区段，其中在两个序列进行最佳比对后，序列可以与具有相同数量的连续位置的参考序列进行比较。

可以使用默认参数，使用Lasergene生物信息学软件套件(威斯康星州麦迪逊市的DNASTAR公司(DNASTAR，Inc.，Madison，W1))中的Megalign程序对序列进行最佳比对以进行比较。此程序体现了以下参考文献中所描述的若干比对方案：Dayhoff，M.O.，1978，“蛋白质中演化变化的模型-用于检测远距离关系的矩阵(Amodel of evolutionary change inproteins-Matrices for detecting distant relationships)”Dayhoff，M.O.(编辑)《蛋白质序列和结构图谱(Atlas of Protein Sequence and Structure)》，华盛顿特区全国生物医学研究基金会(National Biomedical Research Foundation，Washington DC)第5卷，增刊3，第345-358页；Hein J.，1990《比对和发生学的统一方法(Unified Approach toAlignment and Phylogenes)》第626-645页《酶学方法(Methods in Enzymology)》第183卷，加利福尼亚州圣地亚哥的学术出版社公司(Academic Press，Inc.，San Diego，CA)；Higgins，D.G.和Sharp，P.M.，1989，《计算机在生物科学中的应用(CABIOS)》5：151-153；Myers，E.W.和Muller W.，1988，《计算机在生物科学中的应用》4：11-17；Robinson，E.D.，1971，《组合理论(Comb.Theor.)》11：105；Santou，N.，Nes，M.，1987，《分子生物学进化(Mol.Biol.Evol.)》4：406-425；Sneath，P.H.A.和Sokal，R.R.，1973，《数值分类法-数值分类法的原理与实践(Numerical Taxonomy the Principles and Practice of NumericalTaxonomy)》，加利福尼亚州圣弗朗西斯市的弗里曼出版社(Freeman Press，SanFrancisco，CA)；Wilbur，W.J.和Lipman，D.J.，1983，《美国国家科学院院刊》80：726-730。

在一些实施例中，“序列同一性的百分比”通过在具有至少20个位置的比较窗口上比较两个最佳比对序列来确定，其中比较窗口中的多核苷酸或多肽序列的部分可以包括与参考序列(所述参考序列不包括添加或缺失)相比添加或缺失(即，空位)20百分比或更少、通常5至15百分比或10至12百分比以进行两个序列的最佳比对。百分比通过以下计算：确定在两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置的数量，以得出匹配的位置的数量；将匹配的位置的数量除以参考序列(即窗口尺寸)中的位置的总数量；并且将结果乘以100，以得出序列同一性的百分比。

变体还可以或可替代地，与天然基因或其部分或补体基本上同源。此类多核苷酸变体能够在中等严格条件下与天然存在的编码天然抗体的DNA序列(或互补序列)杂交。

合适的“中等严格条件”包含在5倍SSC、O.5％SDS、1.0 mM EDTA(pH 8.0)的溶液中预洗涤；在50℃-65℃、5倍SSC下杂交过夜；随后在65℃下用含0.1％SDS的2倍、0.5倍和0.2倍SSC中的每一者洗涤两次持续20分钟。

如本文所使用的，“高度严格条件”或“高严格性条件”是指以下中的那些：(1)采用用于洗涤的低离子强度和高温，例如在50℃下0.015M氯化钠/0.0015M柠檬酸钠/0.1％十二烷基硫酸钠：(2)在42℃下在杂交期间采用变性剂，如甲酰胺，例如，pH 6.5下的具有0.1％牛血清白蛋白/0.1％聚蔗糖/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸钠缓冲液的50％(v/v)甲酰胺与750mM氯化钠、75mM柠檬酸钠；或(3)在42℃下采用50％甲酰胺、5倍SSC(0.75MNaCl、0.075M柠檬酸钠)、50mM磷酸钠(pH6.8)、0.1％焦磷酸钠、5倍Denhardt溶液、经超声处理的鲑鱼精子DNA(50μg/ml)、0.1％SDS和10％硫酸葡聚糖，在42℃下在0.2倍SSC(氯化钠/柠檬酸钠)中以及在55℃下在50％甲酰胺中洗涤，随后在55℃下进行由含有EDTA的0.1倍SSC组成的高严格性洗涤。技术人员将认识到如何根据需要调节温度、离子强度等以适应如探针长度等因素。

本领域的普通技术人员应理解，由于遗传密码的简并性，存在编码如本文所述的多肽的许多核苷酸序列。这些多核苷酸中的一些与任何天然基因的核苷酸序列具有最小的同源性。然而，本公开具体考虑了由于密码子使用的差异而变化的多核苷酸。进一步地，包括本文所提供的多核苷酸序列的基因的等位基因在本公开的范围内。等位基因是由于核苷酸的一个或多个突变，如缺失、添加和/或取代而改变的内源性基因。所得mRNA和蛋白质可能但不必具有改变的结构或功能。可以使用标准技术(如杂交、扩增和/或数据库序列比较)来识别等位基因。

可以使用化学合成、重组方法或PCR来获得本公开的多核苷酸。化学多核苷酸合成的方法是本领域众所周知的并且不需要在本文中详细描述。本领域技术人员可以使用本文所提供的序列和商业DNA合成仪来产生期望的DNA序列。

为了使用重组方法制备多核苷酸，可以将包括期望的序列的多核苷酸插入到合适的载体中，并且进而可以将所述载体引入到合适的宿主细胞中用于复制和扩增，如本文进一步描述的。可以通过本领域已知的任何方式将多核苷酸插入到宿主细胞中。通过直接摄取、胞吞作用、转染、F-交配或电穿孔引入外源性多核苷酸来转化细胞。一旦引入，外源性多核苷酸可以作为非整合载体(如质粒)维持在细胞内或整合到宿主细胞基因组中。如此扩增的多核苷酸可以通过本领域众所周知的方法从宿主细胞中分离出来。参见例如，Sambrook等人，1989。

可替代地，PCR允许复制DNA序列。PCR技术在本领域中是众所周知的并且描述于例如美国专利第4,683,195号、第4,800,159号、第4,754,065号和第4,683,202号以及《PCR：聚合酶链反应》，Mullis等人编辑，波士顿的博克豪斯出版社(Birkauswer Press，Boston)，1994。

可以通过在合适的载体中使用分离的DNA并且将其插入到合适的宿主细胞来获得RNA。当细胞复制并且DNA转录到RNA中时，然后可以使用本领域技术人员众所周知的方法分离RNA，例如，如Sambrook等人，1989，同上所述。

合适的克隆载体可以根据标准技术构建或可以选自本领域可用的大量克隆载体。虽然选择的克隆载体可能会根据要使用的宿主细胞而有所不同，但有用的克隆载体通常将具有自我复制的能力，可以具有针对特定限制性核酸内切酶的单一靶标和/或可以携带可以用于选择含有载体的克隆的标志物的基因。合适的实例包含质粒和细菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript(例如pBS SK+)及其衍生物、mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA以及穿梭载体，如pSA3和pAT28。这些和许多其它克隆载体可从商业供应商处获得，如伯乐公司(BioRad)、Strategene公司(Strategene)和英杰公司(Invitrogen)。

表达载体通常是含有根据本公开的多核苷酸的可复制多核苷酸构建体。这意味着表达载体必须在宿主细胞中作为附加体或作为染色体DNA的组成部分是可复制的。合适的表达载体包含但不限于质粒、病毒载体，包含腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、粘粒和PCT公开第WO 87/04462号中所公开的表达载体。载体组分通常可以包含但不限于以下中的一者或多者：信号序列；复制起点；-种或多种标志物基因；合适的转录控制元件(如启动子、增强子和终止子)。对于表达(即，翻译)，通常还需要一种或多种翻译控制元件，如核糖体结合位点、翻译起始位点和终止密码子。

含有所关注的多核苷酸的载体可以通过多种适当方式中的任何方式被引入到宿主细胞中，所述适当方法包含电穿孔；采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-葡聚糖或其它物质进行转染；微粒轰击；脂质转染；以及感染(例如，其中载体是如牛痘病毒等感染原)。引入载体或多核苷酸的选择通常将取决于宿主细胞的特征。

编码抗原结合蛋白例如CAR的多核苷酸可以存在于表达盒或表达载体(例如，用于引入到细菌宿主细胞中的质粒或用于转染昆虫宿主细胞的如杆状病毒载体等病毒载体或用于转染哺乳动物宿主细胞的如慢病毒等质粒或病毒载体)中。在一些实施例中，多核苷酸或载体可以包含编码核糖体跳跃序列的核酸序列，如但不限于编码2A肽的序列。在由密码子编码的两个氨基酸之间没有形成肽键的情况下，在小核糖核酸病毒的口疮病毒亚群中鉴定的2A肽使核糖体从一个密码子“跳跃”到下一个密码子(参见例如，Donnelly和Elliott2001；Atkins，Wills等人2007；Doronina，Wu等人2008)。“密码子”意指mRNA上(或DNA分子的有义链上)的三个核苷酸，所述核苷酸被核糖体翻译成一个氨基酸残基。因此，当多肽被框中的2A寡肽序列分隔时，可以由imRNA内的单个连续开放阅读框合成两个多肽。此类核糖体跳跃机制在本领域中是众所周知的，并且已知被若干种载体用于表达由单个信使RNA编码的若干种蛋白质。

为了将跨膜多肽引导到宿主细胞的分泌途径中，在一些实施例中，在多核苷酸序列或载体序列中提供分泌信号序列(也称为前导序列、前原序列或前序列)。分泌信号序列与跨膜核酸序列可操作地连接，即，这两个序列在正确的阅读框中被连接并且被定位以将新合成的多肽引导到宿主细胞的分泌途径中。分泌信号序列通常定位于编码所关注的多肽的核酸序列的5′，但是某些分泌信号序列可能定位于所关注的核酸序列的其它地方(参见例如，Welch等人，美国专利第5,037,743号；Holland等人，美国专利第5,143,830号)。本领域技术人员将认识到，鉴于遗传密码的简并性，在这些多核苷酸分子中可能存在相当大的序列变异。在一些实施例中，本公开的核酸序列针对在哺乳动物细胞中的表达，优选地针对在人细胞中的表达进行了密码子优化。密码子优化是指在所关注的序列中，将给定物种的高表达基因中通常罕见的密码子与此类物种的高表达基因中通常常见的密码子进行交换，编码相同氨基酸的此类密码子作为正在被交换的密码子。

本文提供了制备用于免疫疗法的免疫细胞的方法。在一些实施例中，所述方法包括将抗原结合蛋白例如CAR引入到一种或多种免疫细胞中，或引入到编码抗原结合蛋白例如CAR的多核苷酸中，并且使细胞扩增。在一些实施例中，本公开涉及一种将免疫细胞工程化的方法，所述方法包括：提供免疫细胞以及在细胞的表面处表达至少一种抗原结合蛋白例如CAR。在一些实施例中，所述方法包括：用编码抗原结合蛋白例如CAR的至少一种多核苷酸转染细胞，并且在所述细胞中表达所述至少一种多核苷酸。

在一些实施例中，编码抗原结合蛋白例如CAR的多核苷酸存在于一个或多个表达载体中，以在细胞中稳定表达。在一些实施例中，多核苷酸存在于病毒载体中，以在细胞中稳定表达。在一些实施例中，病毒载体可以是例如慢病毒载体或腺病毒载体。

在一些实施例中，编码根据本公开的多肽的多核苷酸可以是例如通过电穿孔被直接引入到细胞中的mRNA。在一些实施例中，CytoPulse技术可以用于瞬时透化活细胞以将材料递送到细胞中。可以修改参数以确定高转染效率和最低死亡率的条件。

本文还提供了转染免疫细胞(例如T细胞)的方法。通常，可以使用本领域普通技术人员已知的任何常规方法，如通过电穿孔将RNA、DNA或蛋白质中的任一种引入到细胞中。参见例如，Luff和Ketteler，《生物分子筛选杂志(J.Biomolec Screening)》20(8)：932(2015)(DOI：10.1177/1087057115579638)。在一些实施例中，所述方法包括：使T细胞与RNA接触以及向T细胞施加敏捷脉冲序列，所述敏捷脉冲序列由以下组成：(a)电压范围为每厘米约2250至3000V的电脉冲；(b)0.1ms的脉冲宽度；(c)步骤(a)和(b)的电脉冲之间约0.2至10ms的脉冲间隔；(d)电压范围为每厘米约2250至3000V的电脉冲，以及约100ms的脉冲宽度和步骤(b)的电脉冲与步骤(c)的第一电脉冲之间约100ms的脉冲间隔；以及(e)电压为约325V的四个电脉冲，以及约0.2ms的脉冲宽度和4个电脉冲中的每个电脉冲之间2ms的脉冲间隔。在一些实施例中，一种转染T细胞的方法包括使所述T细胞与RNA接触以及向T细胞施加敏捷脉冲序列，所述敏捷脉冲序列包括：(a)电压为每厘米约1600、2250、2300、2350、2400、2450、2500、2550、2400、2450、2500、2600、2700、2800、2900或3000V的电脉冲；(b)0.1ms的脉冲宽度；(c)以及步骤(a)和(b)的电脉冲之间约0.2、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10ms的脉冲间隔；(d)电压范围为每厘米约2250至3000V，例如每厘米2250、2300、2350、2400、2450、2500、2550、2400、2450、2500、2600、2700、2800、2900或3000V的一个电脉冲，以及100ms的脉冲宽度和步骤(b)的电脉冲与步骤(c)的第一电脉冲之间100ms的脉冲间隔；以及(e)电压为约325V的4个电脉冲，以及约0.2ms的脉冲宽度和4个电脉冲中的每个电脉冲之间约2ms的脉冲间隔。在本申请中公开了包含在上文所描述的值范围内的任何值。电穿孔介质可以是本领域已知的任何合适的介质。在一些实施例中，电穿孔介质的电导率范围为约0.01至约1.0毫西门子。

在一些实施例中，所述方法可以进一步包括以下步骤：通过使表达例如但不限于TCR的组分(例如TRAC)和/或免疫抑制剂的靶标的至少一个基因灭活(例如，敲除)或降低其表达水平来将细胞基因工程化。使基因灭活旨在使所关注的基因不以功能性蛋白质形式表达。在一些实施例中，待灭活的基因选自由以下组成的组：例如但不限于，TCRα、TCRβ、CD52和CD70。在一些实施例中，所述方法包括通过将能够通过选择性DNA切割来选择性灭活基因的稀切核酸内切酶引入细胞来使一个或多个基因灭活或降低其表达水平。在一些实施例中，稀切核酸内切酶可以是例如转录活化因子样效应子核酸酶(TALE-核酸酶或)、megaTAL核酸酶或Cas9核酸内切酶。

另一方面，对免疫细胞(例如T细胞)进行基因修饰或工程化的步骤可以包括：通过使表达免疫抑制剂的靶标的至少一个基因灭活来修饰免疫细胞(例如T细胞)，以及扩增细胞，任选地在存在免疫抑制剂的情况下。免疫抑制剂是通过若干种作用机制中的一种抑制免疫功能的药剂。免疫抑制剂可以降低免疫应答的程度和/或强度。免疫抑制剂的非限制性实例包含钙调神经磷酸酶抑制剂、雷帕霉素(rapamycin)靶标、白细胞介素-2α-链阻断剂、肌苷单磷酸脱氢酶抑制剂、二氢叶酸还原酶抑制剂、皮质类固醇和免疫抑制性抗代谢物。一些细胞毒性免疫抑制剂通过抑制DNA合成起作用。其它细胞毒性免疫抑制剂可以通过活化T细胞或通过抑制辅助细胞的活化来起作用。根据本公开的方法允许通过使T细胞中的免疫抑制剂的靶标灭活来赋予例如T细胞免疫抑制抗性以进行免疫疗法。作为非限制性实例，免疫抑制剂的靶标可以是免疫抑制剂的受体，如但不限于CD52、糖皮质激素受体(GR)、FKBP家族基因成员和亲环蛋白家族基因成员。

本文提供了用于在细胞(例如经工程化的免疫细胞)中功能性地表达抗原结合蛋白例如CAR以及在同一细胞中功能性地表达CD70结合蛋白例如CD70 CAR(特异性识别CD70的CAR)的组合物和方法。还提供了此类组合物的用途和用于改进免疫细胞(例如T细胞，如CAR-T细胞)的功能活性的方法。本文所提供的方法和组合物可用于改善免疫细胞，例如同种异体免疫细胞(例如同种异体T细胞，同种异体CAR-T细胞)的体内持久性和治疗功效。

在各种实施例中，本文所提供的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞功能性地表达第一抗原结合蛋白，例如第一嵌合抗原受体(CAR)和第二抗原结合蛋白，例如第二CAR，其中所述第二CAR是CD70 CAR。有利地，相对于未经工程化的细胞，本文所提供的经工程化的免疫细胞表现出改善的体内持久性和/或增加的对接受者的免疫系统的排斥的抗性。例如，包括第一CAR和第二CD70 CAR的细胞群体比包括相同的第一CAR并且不包括第二CAR或包括不与CD70特异性结合的第二CAR的细胞群体持续更久。

一种或多种抗原结合蛋白，例如一种或多种CAR可以在将编码所述蛋白质的多核苷酸构建体引入到细胞中之后，在细胞中原位合成。可替代地，抗原结合蛋白例如CAR可以在细胞外产生，并且然后引入到细胞中。将多核苷酸构建体引入细胞中的方法为所属领域中已知的。在一些实施例中，稳定的转化方法可以用于将多核苷酸构建体整合到细胞的基因组中。在其它实施例中，可使用瞬时转化方法来瞬时表达多核苷酸构建体和未整合到细胞的基因组中的多核苷酸构建体。在其它实施例中，可使用病毒介导方法。可以通过任何合适的方式将多核苷酸引入到细胞中，所述方式如重组病毒载体(例如逆转录病毒，包含慢病毒、腺病毒)、脂质体等。瞬时转化方法包含，例如但不限于微注射、电穿孔或粒子轰击。多核苷酸可以被包含于载体，如质粒载体或病毒载体中。

在本文所提供的经工程化的免疫细胞(例如T细胞)的一些实施例中，细胞表达的每个CAR可以包括胞外配体结合结构域(例如，单链可变片段(scFv))、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。在一些实施例中，胞外配体结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域在一个多肽中，即，在单链中。本文还提供了多链CAR和多肽。在一些实施例中，多链CAR包括：第一多肽，所述第一多肽包括跨膜结构域和至少一个胞外配体结合结构域；以及第二多肽，所述第二多肽包括跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域，其中所述多肽组装在一起以形成多链CAR。

胞外配体结合结构域与所关注的靶标特异性结合。在一些实施例中，所关注的靶标，例如，第一CAR的所关注的靶标可以是任何所关注的分子，包含例如但不限于CD70、BCMA、EGFRvIII、Flt-3、WT-1、CD20、CD22、CD23、CD30、CD38、CD33、CD133、WT1、TSPAN10、MHC-PRAME、HER2、MSLN、PSMA、PSCA、GPC3、Liv1、ADAM1O、CHRNA2、LeY、NKG2D、CS1、CD44v6、ROR1、CD19、Claudin-18.2(Claudin-18A2或Claudin18同种型2)、DLL3(δ样蛋白3、果蝇属δ同源物3、δ3)、Muc17、Muc3、Muc16、FAPa(成纤维细胞活化蛋白α)、Ly6G6D(淋巴细胞抗原6复合基因座蛋白G6d、c6orf23、G6D、MEGT1、NG25)或RNF43(E3泛素-蛋白连接酶RNF43，环指蛋白43)，具体地包含所列出的示例性靶标中的任一种的人形式。

在一些实施例中，胞外配体结合结构域包括scFv，所述scFv包括通过柔性接头连接的靶抗原特异性单克隆抗体的轻链可变(VL)区和重链可变(VH)区。单链可变区片段是通过使用短连接肽连接轻链和/或重链可变区来制备的(Bird等人，《科学(Science)》242：423-426，1988)。连接肽的实例是具有氨基酸序列(GGGGS)3(SEQ ID NO：16)的GS接头，所述接头在一个可变区的羧基末端与另一个可变区的氨基末端之间桥接大约3.5nm。已设计并使用其它序列的接头(Bird等人，1988，同上)。通常，接头可以是短的柔性多肽并且优选地包含约20个或更少的氨基酸残基。进而接头可以被修饰用于另外的功能，如附着药物或附着在固相载体上。单链变体可以通过重组或合成产生。对于scFv的合成生产，可以使用自动合成仪。对于scFv的重组产生，可以将含有编码scFv的多核苷酸的合适质粒或其它载体引入到合适的宿主细胞(如酵母、植物、昆虫或哺乳动物细胞等真核细胞或如大肠杆菌等原核细胞)中。编码所关注的scFv的多核苷酸可以通过如多核苷酸的连接等常规操作来制备。可以使用本领域已知的标准蛋白质纯化技术分离所得scFv。

根据本公开的CAR的胞内信号传导结构域负责在胞外配体结合结构域与靶标结合之后的胞内信号传导，从而导致免疫细胞的活化和免疫应答。胞内信号传导结构域能够活化表达CAR的免疫细胞的正常效应子功能中的至少一种。例如，T细胞的效应子功能可以是细胞溶解活性或辅助活性(包含细胞因子的分泌)。

在一些实施例中，用于CAR中的胞内信号传导结构域可以是例如但不限于T细胞受体和共受体的胞质序列，以及这些序列的任何衍生物或变体以及具有相同功能能力的任何合成序列，所述T细胞受体和共受体在抗原受体接合后协同作用以启动信号转导。胞内信号传导结构域包括两种不同类型的胞质信号传导序列：启动抗原依赖性主要活化的胞质信号传导序列，以及以抗原非依赖性方式起作用以提供次级或共刺激信号的胞质信号传导序列。主要胞质信号传导序列可以包括被称为基于免疫受体酪氨酸的活化基序或ITAM的信号传导基序。ITAM是在充当syk/zap70类酪氨酸激酶的结合位点的各种受体的胞质内尾区发现的明确定义的信号传导基序。本公开中使用的ITAM的实例可以包含作为非限制性实例的源自TCRζ、FcRγ、FcRβ、FcRε、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d或其变体的那些。在一些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域可以包括CD3ζ信号传导结构域或CD3ζ结构域的变体。在一些实施例中，本公开的CAR的胞内信号传导结构域包括共刺激分子的结构域。

在一些实施例中，本公开的CAR的胞内信号传导结构域包括选自由4-1BB(GenBank：AAA53133)和CD28(NP_006130以及其同种型)的片段组成的组的共刺激分子的一部分。

CAR在细胞的表面膜上表达。因此，每个CAR可以包括跨膜结构域。本文所公开的CAR的合适跨膜结构域具有以下能力：(a)在细胞，例如免疫细胞，如但不限于淋巴细胞(例如，T细胞)或自然杀伤(NK)细胞的表面处表达；以及(b)与配体结合结构域和胞内信号传导结构域相互作用，以指导免疫细胞对预定靶细胞的细胞应答。跨膜结构域可以源自天然的或源自合成的来源。跨膜结构域可以源自任何膜结合或跨膜蛋白。作为非限制性实例，跨膜多肽可以是T细胞受体的结构域，如α、β、γ或δ；构成CD3复合物的多肽；IL-2受体例如p55(α链)、p75(β链或γ链)；Fc受体，具体地Fcy受体III的亚基链；或CD蛋白。可替代地，跨膜结构域可以是合成的并且可以主要包括疏水残基，如亮氨酸和缬氨酸。在一些实施例中，所述跨膜结构域源自人CD8α链(例如，NP 001139345.1)或是人CD8α链跨膜结构域。在一些实施例中，所述跨膜结构域包括人CD28跨膜结构域或源自人CD28蛋白跨膜结构域。跨膜结构域可以进一步包括位于胞外配体结合结构域和所述跨膜结构域之间的茎结构域。茎结构域可以包括至多300个氨基酸，例如10至100个氨基酸或25至50个氨基酸。茎区可以源自天然存在的分子的全部或部分，如源自CD8、CD4或CD28的胞外区的全部或部分，或源自抗体恒定区的全部或部分。可替代地，茎结构域可以是对应于天然存在的茎序列的合成序列，或者可以是完全合成的茎序列。在一些实施例中，所述茎结构域是人CD8α链(例如，NP_001139345以及其同种型)的一部分。在另一个特定的实施例中，跨膜结构域包括人CD8α链的一部分。在一些实施例中，本文所公开的并且在本文所公开的经工程化的免疫细胞中功能性地表达的CAR可以包括与CD70或本文公开的任何所关注的靶标特异性结合的胞外配体结合结构域、CD8α人茎和跨膜结构域、CD3ζ信号传导结构域和4-1BB信号传导结构域。在一些实施例中，本文所公开的并且在本文所公开的经工程化的免疫细胞中功能性地表达的CAR可以包括与CD70特异性结合的胞外配体结合结构域(例如，CD70抗原结合结构域或CD70结合结构域)和跨膜结构域，包括或不包括一个或多个胞内信号传导结构域。在一些实施例中，编码CAR的核酸可以通过载体，例如质粒载体或慢病毒载体作为转基因被引入到免疫细胞中。在一些实施例中，载体例如质粒载体还可以含有，例如，提供用于鉴定和/或选择接受载体的细胞的选择标志物。

CAR多肽可以在将编码CAR多肽的多核苷酸引入到细胞后在细胞中原位合成。可替代地，CAR多肽可以在细胞外产生，并且然后引入到细胞中。将多核苷酸构建体引入细胞中的方法为所属领域中已知的。在一些实施例中，稳定的转化方法可以用于将多核苷酸构建体整合到细胞的基因组中。在其它实施例中，可使用瞬时转化方法来瞬时表达多核苷酸构建体和未整合到细胞的基因组中的多核苷酸构建体。在其它实施例中，可使用病毒介导方法。可以通过任何合适的方式将多核苷酸引入到细胞中，所述方式如重组病毒载体(例如逆转录病毒(例如慢病毒)、腺病毒)、脂质体等。瞬时转化方法包含，例如但不限于微注射、电穿孔或粒子轰击。多核苷酸可以被包含于载体，如质粒载体或病毒载体中。

本文还提供了免疫细胞(例如T细胞)，如根据本文所描述方法中的任一种获得的分离的T细胞或外周血单核细胞(PBMC)。能够表达异源性DNA的任何免疫细胞可以用于表达抗原结合蛋白，例如所关注CAR的目的，并且进一步用于工程化以表达降低水平的NLRC5和/或TAP2。在一些实施例中，免疫细胞是T细胞。在一些实施例中，免疫细胞可以源自例如但不限于干细胞。干细胞可以是成体干细胞、非人胚胎干细胞，更具体地非人干细胞、脐带血干细胞、祖细胞、骨髓干细胞、诱导多能干细胞、全能干细胞或造血干细胞。代表性的人细胞是CD34+细胞。分离的细胞也可以是树突细胞、杀伤树突细胞、肥大细胞、NK细胞、B细胞或选自由以下组成的组的T细胞：炎性T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞或辅助T淋巴细胞。在一些实施例中，细胞可以源自由CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞组成的组。在一些实施例中，免疫细胞(例如T细胞)，如分离的T细胞被进一步修饰，例如通过本文所描述的方法进行基因工程化(例如采用例如TALEN、CRISPR/Cas9或megaTAL核酸酶来部分地或全部缺失或破坏一个或多个基因座，例如CD70、TRAC和CD52的已知基因编辑技术)，使得所述细胞相对于未经工程化的比较性细胞，表达对应功能性蛋白质的水平降低。

本文所提供的经工程化的免疫细胞可以包括一个或多个模拟表位序列，所述一个或多个模拟表位序列能够分选细胞以富集如本文所描述的经工程化的细胞，例如表达抗原结合蛋白，和/或提供安全开关机制以在将细胞施用于患者或接受者之后灭活免疫细胞，例如以限制副作用的细胞群体。此类模拟表位序列以及其在细胞分选中和作为安全开关的应用在本领域中是已知的，并且在例如US2018/0002435中所描述，所述文献通过引用整体并入本文。

在扩增和基因修饰之前，可以通过多种非限制性方法从受试者获得细胞来源。细胞可以从多个非限制性来源获得，所述非限制性来源包含外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤。在一些实施例中，可以使用本领域技术人员可得并且已知的任何数量的T细胞系。在一些实施例中，细胞可以源自健康的供体、源自诊断患有癌症的受试者或源自诊断患有感染的受试者。在一些实施例中，细胞可以是呈现不同表型特征的混合的细胞群体的一部分。

本文还提供了根据本文所描述的任何方法从经修饰的，例如经转化的或经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞获得的细胞系。在一些实施例中，根据本公开的经工程化的免疫细胞(例如经工程化的T细胞)包括编码第一抗原结合蛋白(例如CAR)的第一多核苷酸和编码第二CD70结合蛋白(例如CD70 CAR)的第二多核苷酸，并且任选地被进一步修饰或工程化，例如被基因修饰来以降低的水平表达CD70、TRAC和CD52中的一种或多种(例如被修饰以包括任一或两个基因座的敲除)。在一些实施例中，一种多核苷酸编码第一抗原结合蛋白(例如CAR)和第二CD70结合蛋白(例如CD70CAR)两者。

本公开的免疫细胞(例如T细胞)可以使用如通常描述的以下方法在细胞修饰之前或之后被活化和扩增：例如但不限于，美国专利6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041和美国专利申请公开第20060121005号中的方法。免疫细胞(例如T细胞)可以在体外或体内扩增。通常，本公开的免疫细胞可以例如通过与刺激免疫细胞的表面上的CD3 TCR复合物和共刺激分子的药剂接触以产生细胞的活化信号而扩增。例如，如钙离子载体A23187、佛波醇(phorbol)12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)或促有丝分裂凝集素样植物血凝素(PHA)等化学品可用于产生免疫细胞(例如T细胞)的活化信号。

在一些实施例中，T细胞群体可以通过以下被体外刺激：与例如抗CD3抗体或其抗原结合片段或固定在表面上的抗CD2抗体接触或与和钙离子载体接合的蛋白激酶C活化剂(例如，苔藓抑素(bryostatin))接触。为了在T细胞的表面上共刺激辅助分子，使用结合辅助分子的配体。例如，在适于刺激T细胞的增殖的条件下，可以使T细胞群体与抗CD3抗体和抗CD28抗体接触。适于T细胞培养的条件包含适当的培养基(例如，最小必需培养基、RPMI培养基1640或X-VIVO^TM 5(龙沙公司(Lonza)))，所述培养基可以含有增殖和活力所必需的因子，包含血清(例如，胎牛血清或人血清)、白介素-2(IL-2)、胰岛素、IFN-γ、IL-4、IL-7、GM-CSF、IL-10、IL-2、IL-15、TGFβ和TNF或本领域的技术人员已知的用于细胞生长的任何其它添加剂。用于细胞生长的其它添加剂包含但不限于表面活性剂、和如N-乙酰基-半胱氨酸和2-巯基乙醇等还原剂。培养基可以包含RPMI 1640(如本文所述)、AIMV、DMEM、MEM、α-MEM、F-12、X-VIVO^TM 10、X-VIVO^TM 15和X-VIVO^TM 20、OpTmizer^TM，并且添加有氨基酸、丙酮酸钠和维生素，无血清或补充有适量血清(或血浆)或一组限定的激素和/或足以使T细胞生长和扩增的量的细胞因子。抗生素(例如，青霉素和链霉素)仅包含于实验培养物，而不包含于待注入受试者体内的细胞培养物。靶细胞保持处于支持生长所需的条件下，例如适当的温度(例如，37℃)和大气(例如，空气加5％CO₂)。暴露于不同刺激时间的免疫细胞(例如T细胞)可能展现出不同的。/>

在一些实施例中，可以通过与组织或细胞共培养来扩增本公开的细胞。细胞也可以在体内扩增，例如在将所述细胞施用于受试者后在受试者的血液中扩增。

另一方面，本公开提供了包括本公开的任何细胞或包括此类细胞群体的组合物(如药物组合物)。在一些实施例中，所述组合物包括根据本公开的经工程化的免疫细胞(例如经工程化的T细胞)，所述经工程化的免疫细胞包括编码第一抗原结合蛋白(例如CAR)的第一多核苷酸和编码第二CD70结合蛋白(例如CD70 CAR)的第二多核苷酸，并且任选地被进一步修饰或工程化，例如被基因修饰来相对于未经如此进一步修饰的细胞以降低的水平表达CD70、TRAC和CD52中的一种或多种(例如被修饰以包括任一或两个基因座的敲除)。在一些实施例中，一种多核苷酸编码第一抗原结合蛋白(例如CAR)和第二CD70结合蛋白(例如CD70 CAR)两者。在一些实施例中，组合物包括此类经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞，例如10³个、10⁴个、10⁵个、10⁶个、10⁷个、10⁸个、10⁹个或10¹⁰个此类经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞或介于这些值中任两个之间的一些数量的细胞群体。在各种实施例中，本文公开的组合物进一步包括一种或多种药学上可接受的载剂或赋形剂。

在一些实施例中，从供体中分离的原代细胞如本文所述进行工程化以提供细胞群体，其中所得细胞的亚群(例如，比例小于100％，如10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％)包括所有期望的修饰。包括包含所有修饰的细胞和不包含所有修饰的细胞的混合物的此类所得群体可以用于本公开的治疗方法中并且用于制备本公开的组合物。可替代地，此细胞群体(“起始群体”)可以通过已知方法，例如细胞分选和/或具有期望修饰的细胞的扩增进行操纵，以提供富集包括期望修饰中的一种或多种的细胞的细胞群体(例如，富集表达期望的抗原结合蛋白两者的细胞以及任选地进一步富集相对于未相对于CD70、TRAC和/或CD52工程化的比较性细胞以降低的水平表达CD70、TRAC和CD52中的一种或多种的细胞)，即，包括比起始群体更高百分比的此类经修饰或工程化的细胞的细胞群体。然后，富集经修饰的细胞群体可以用于本公开的治疗方法中，并且用于制备例如本公开的组合物。在一些实施例中，富集的细胞群体含有或含有至少例如20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％具有修饰中的一种或多种的细胞。在其它实施例中，包括修饰中的一种或多种的富集的细胞群体的细胞的比例比包括期望的修饰的起始细胞群体中的细胞的比例高至少30％。

CD70结合蛋白或CD70特异性CAR以及其制备方法

在相关方面，本公开提供了如本文所述的CD70结合蛋白，其中所述CD70结合蛋白包括胞外配体或与CD70结合的抗原结合结构域(或CD70结合结构域)和跨膜结构域。CD70结合蛋白可以包括如本文所述的没有至一个或多个胞内信号传导结构域。

本公开提供CD70结合蛋白，包含但不限于与CD70结合的CAR(例如，人CD70)(例如，SEQ ID NO：601)，如根据布达佩斯条约(Budapest Treaty)的规定交存并分配登录号：P32970-1的那些。本文提供的CD70特异性CAR包含单链CAR和多链CAR。在一些实施例中，CAR能够以非MHC限制性方式将T细胞特异性和反应性重定向到CD70，从而利用单克隆抗体的抗原结合特性。非MHC限制性抗原识别使表达CAR的T细胞能够识别独立于抗原处理的抗原，从而绕开了肿瘤逃逸的主要机制。

在一些实施例中，本文提供的CD70结合蛋白包括胞外结构域(例如，单链可变片段(scFv))和跨膜结构域。在一些实施例中，本文提供的CD70结合蛋白或CD70 CAR包括胞外配体结合结构域(例如scFv)、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。在一些实施例中，所述CD70结合蛋白包括一个或多个选自由以下组成的组的胞内信号传导结构域：CD3ζ信号传导结构域、CD3δ信号传导结构域、CD3γ信号传导结构域、CD3ε信号传导结构域、CD28信号传导结构域、CD2信号传导结构域、OX40信号传导结构域和4-1BB信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，所述胞内信号传导结构域包括SEQ ID NO：265、271-278、281-295、311-337、580-591或616-617中的一个或多个的氨基酸序列。在一些实施例中，所述胞内信号传导结构域包括SEQ ID NO：271、616、272、617、276、275、582、583、585或586中的一个或多个的氨基酸序列。在一些实施例中，所述CD70结合蛋白包括CD3ζ或CD3γ信号传导结构域或其变体，并且不包括共刺激结构域。在一些实施例中，所述CD70结合蛋白包括4-1BB信号传导结构域或其变体，并且不包括CD3信号传导结构域。在一些实施例中，所述CD70结合蛋白包括4-1BB信号传导结构域和CD3ζ信号传导结构域。在一些实施例中，所述CD70结合蛋白不包括胞内信号传导结构域。不同的胞内信号传导结构域或其组合可以赋予不同的信号传导强度，这可以有助于T细胞增殖、效力、存活率、持久性和/或对宿主免疫细胞排斥的抗性。本文描述了CD70结合蛋白，其包括没有至一个或多个胞内信号传导结构域。

在一些实施例中，包括本文所述的CD70结合蛋白的经工程化的免疫细胞可以表现出不同水平的持久性和/或对宿主免疫细胞的排斥的抗性，并且当施用于患者时可以适用于体内淋巴细胞清除。在一些实施例中，包括本文所述的CD70结合蛋白的经工程化的免疫细胞可以抑制宿主免疫细胞的增殖和/或活性达到不同的程度，这可以允许在施用于患者时微调体内淋巴细胞清除的深度。例如，在例如MLR测定中表现出宿主免疫细胞增殖或活性的延长扩增和/或抑制的包括CD70结合蛋白的经工程化的免疫细胞可用于延长淋巴细胞清除。相比之下，当需要不太完全或不太彻底的淋巴细胞清除时，可以使用在相同或类似的测定中表现出宿主免疫细胞的较少的延长扩增和/或抑制的包括CD70结合蛋白的经工程化的免疫细胞。

在一些实施例中，本文提供的CAR进一步包括“铰链”或“茎”结构域，所述结构域可以位于胞外配体结合结构域与跨膜结构域之间。在一些实施例中，胞外配体结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域在一个多肽中，即，在单链中。本文还提供了多链CAR和多肽。在一些实施例中，多链CAR包括：第一多肽，所述第一多肽包括跨膜结构域和至少一个胞外配体结合结构域；以及第二多肽，所述第二多肽包括跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域，其中所述多肽组装在一起以形成多链CAR。在一些实施例中，CAR是诱导性的，如通过小分子(例如，AP1903)或蛋白质(例如，Epo、Tpo或PD-1)。在一些实施例中，CD70特异性多链CAR基于IgE的高亲和力受体(FcεRI)。在肥大细胞和嗜碱性粒细胞上表达的FcεRI触发过敏反应。FcεRI是由单个α亚基、单个β亚基和两个二硫键连接的γ亚基组成的四聚体复合物。α亚基含有IgE结合结构域。β和γ亚基含有介导信号转导的ITAM。在一些实施例中，FcRα链的胞外结构域被缺失并且被CD70特异性胞外配体结合结构域替换。在一些实施例中，多链CD70特异性CAR包括与CD70特异性结合的scFv、CD8α铰链和FcRβ链的ITAM。在一些实施例中，CAR可以或可以不包括FcRγ链。

在一些实施例中，胞外配体结合结构域包括scFv，所述scFv包括通过柔性接头连接的靶抗原(即，CD70)特异性单克隆抗体的轻链可变(VL)区和重链可变(VH)区。单链可变区片段是通过使用短连接肽连接轻链和/或重链可变区来制备的(Bird等人，《科学》242：423-426，1988)。连接肽的实例是具有氨基酸序列(GGGGS)₃(SEQ ID NO：296)的GS接头，所述接头在一个可变区的羧基末端与另一个可变区的氨基末端之间桥接大约3.5nm。已设计并使用其它序列的接头(Bird等人，1988，同上)。其它示例性接头通常可以包含其它GS接头通常可以包含(GGGGS)x，其中x为1、2、3、4、5(SEQ ID NO：604)。在一些实施例中，x为6、7、8、9、10、11、12、13、14、1 5或小于约20的任何整数。在一些实施例中，接头是(GGGGS)₄(SEQ IDNO：602)。在一些实施例中，接头是GSTSGSGKPGSGEGSTKG(SEQ ID NO：603)，如Whitlow等人，《蛋白质工程化(Protein Eng.)》(1993)6(8)：989-895中所述。通常，接头可以是短的柔性多肽，在一些实施例中所述多肽包含约20个或更少的氨基酸残基。进而接头可以被修饰用于另外的功能，如附着药物或附着在固相载体上。单链变体可以通过重组或合成产生。对于scFv的合成生产，可以使用自动合成仪。对于scFv的重组生产，可以将含有编码scFv的多核苷酸的合适质粒引入合适的宿主细胞(如酵母、植物、昆虫或哺乳动物细胞等真核细胞或如大肠杆菌等原核细胞)中。编码所关注的scFv的多核苷酸可以通过如多核苷酸的连接等常规操作来制备。可以使用本领域已知的标准蛋白质纯化技术分离所得scFv。

另一方面，提供了CAR，其与CD70特异性结合，其中所述CAR包括胞外配体结合结构域，所述胞外配体结合结构域包括：VH区，所述VH区包括具有如以下所示的VH序列的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46或48；和/或VL区，所述VL区包括具有如以下所示的VL序列的VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3：SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45或47。在一些实施例中，VH和VL通过柔性接头连接在一起。在一些实施例中，柔性接头包括SEQ ID NO：296中所示的氨基酸序列。

在一些实施例中，本公开的CAR包括胞外配体结合结构域，所述胞外配体结合结构域具有如表1中列出的部分轻链序列中的任一个和/或如表1中列出的部分重链序列中的任一个。在表1中，加下划线的序列是根据Kabat的CDR序列，并且根据Chothia呈粗体。

表1

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本文还提供了针对CD70的CAR的胞外配体结合结构域的CDR部分(包含Chothia、Kabat CDR和CDR接触区)。CDR区的确定完全在本领域的技术范围内。应当理解，在一些实施例中，CDR可以是Kabat和Chothia CDR的组合(也被称为“组合的CR”或“延长的CDR”)。在一些实施例中，CDR是Kabat CDR。在其它实施例中，CDR是Chothia CDR。换句话说，在具有多于一个CDR的实施例中，CDR可以是Kabat、ChothiaCDR、组合CDR中的任何一种或其组合。表2A-2B提供了本文提供的CDR序列的实例。

表2A

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表2B

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本公开涵盖对表1或2A-2B中所示的CAR和包括序列的多肽的修饰，包含具有不显著影响其特性的修饰的功能等同的CAR和具有增强的或降低的活性和/或亲和力的变体。例如，可以使氨基酸序列突变以获得具有对CD70的期望结合亲和力的抗体。多肽的修饰是本领域的常规实践并且不需要在本文中详细描述。经修饰的多肽的实例包含具有不会显著有害地改变功能活性或使多肽对其配体的亲和力成熟(增强)的氨基酸残基保守取代、氨基酸的一个或多个缺失或添加的多肽或使用化学类似物。

氨基酸序列插入包含长度在一个残基至含有一百个或更多的残基的多肽范围内的氨基和/或羧基末端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包含具有N端甲硫氨酰基残基的抗体或与表位标签融合的抗体。抗体分子的其它插入变体包含融合到酶或多肽的抗体的N末端或C末端，所述融合增加抗体在血液循环中的半衰期。

取代变体去除了抗体分子中的至少一个氨基酸残基，并且在其位置中插入了不同的残基。用于取代诱变的最受关注的位点包含高变区，但是还考虑了FR改变。在表3中以标题“保守取代”示出了保守取代。如果此类取代引起生物活性的变化，那么可以引入表3中命名为“示例性取代”或如下文关于氨基酸类别进一步描述的更多实质性变化并且筛选产物。

表3：氨基酸取代

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在一些实施例中，本公开提供了一种CD70结合蛋白，(例如，CD70CAR)，所述蛋白包括胞外配体结合结构域，所述胞外配体结合结构域与CD70结合并且与本文所述的CAR竞争与CD70结合，本文所述的CAR包含包括胞外结构域的CAR，所述胞外结构域包括ScFv，所述ScFv包括以下序列：31H1、63B2、40E3、42C3、45F11、64F9、72C2、2F10、4F11、10H10、17G6、65E11、P02B10、P07D03、P08A02、P08E02、P08F08、P08G02、P12B09、P12F02、P12G07、P13F04、P15D02、P16C05、10A1、10E2、11A1、11C1、11D1、11E1、12A2、12C4、12C5、12D3、12D6、12D7、12F5、12H4、8C8、8F7、8F8、9D8、9E10、9E5、9F4或9F8。

在一些实施例中，与CD70(或CD70结合结构域)结合的胞外配体结合结构域包括ScFv，所述ScFv包括SEQ ID NO：599的氨基酸序列，或任选地作为scFv的抗体，所述抗体与所述scFv竞争与CD70结合，所述scFv包括氨基酸序列SEQ ID NO：599。在一些实施例中，与CD70(或CD70结合结构域)结合的胞外配体结合结构域包括ScFv，所述ScFv包括SEQ ID NO：600的氨基酸序列，或scFv，所述scFv与所述scFv竞争与CD70结合，所述scFv包括SEQ IDNO：600的氨基酸序列。在一些实施例中，与CD70(或CD70结合结构域)结合的胞外配体结合结构域包括ScFv，所述ScFv包括SEQ ID NO：370和371的氨基酸序列，或scFv，所述scFv与所述scFv竞争与CD70结合，所述scFv包括SEQ ID NO：370和371的氨基酸序列。用于确定结合竞争的方法是本领域已知的，包含例如ELISA或Biacore SPR测定。

在一些实施例中，CD70结合结构域包括与CD70的膜远侧位点结合的抗CD70抗体。在一些实施例中，CD70结合结构域包括与CD70的膜近侧位点结合的抗CD70抗体。CD70结构分析可见于例如，Liu等人，2021，《生物化学杂志(J.Biol.Chem)》。“共刺激CD27：CD70复合物的结构描绘和相依赖性活化(Structural delineation and phase-dependentactivation of the costimulatory CD27：CD70 complex.)”297(4)：101102。

在一些实施例中，本公开提供了一种CAR，其与CD70特异性结合，其中所述CAR包括：VH区，所述VH区包括SEQ ID NO：20中所示的序列；和/或VL区，所述VL区包括SEQ ID NO：19中所示的序列。在一些实施例中，本公开提供了一种CAR，其与CD70特异性结合，其中所述CAR包括：VH区，所述VH区包括SEQ ID NO：22中所示的序列；和/或VL区，所述VL区包括SEQID NO：21中所示的序列。在一些实施例中，本公开提供了一种CAR，其与CD70特异性结合，其中所述CAR包括：VH区，所述VH区包括SEQ ID NO：28中所示的序列；和/或VL区，所述VL区包括SEQ ID NO：27中所示的序列。在一些实施例中，本公开提供了一种CAR，其与CD70特异性结合，其中所述CAR包括：VH区，所述VH区包括SEQ ID NO：36中所示的序列；和/或VL区，所述VL区包括SEQ ID NO：35中所示的序列。在一些实施例中，本公开提供了一种CAR，其与CD70特异性结合，其中所述CAR包括：VH区，所述VH区包括SEQ ID NO：46中所示的序列；和/或VL区，所述VL区包括SEQ ID NO：45中所示的序列。在一些实施例中，本公开提供了一种CAR，其与CD70特异性结合，其中所述CAR包括：VH区，所述VH区包括SEQ ID NO：18中所示的序列；和/或VL区，所述VL区包括SEQ ID NO：17中所示的序列。在一些实施例中，本公开提供了一种CAR，其与CD70特异性结合，其中所述CAR包括：VH区，所述VH区包括SEQ ID NO：34中所示的序列；和/或VL区，所述VL区包括SEQ ID NO：33中所示的序列。在一些实施例中，本公开还提供了CAR，其包括基于CDR接触区的针对CD70抗体的抗体的CDR部分。CDR接触区是赋予抗体对抗原的特异性的抗体的区。通常，CDR接触区包含CDR和Vernier区中的残基位置，所述区被限制以便维持抗体结合特定抗原的正确环结构。参见例如，Makabe等人，《生物化学杂志》，283：1156-1166，2007。CDR接触区的确定完全在本领域的技术范围内。

如本文所述的CD70特异性CAR的配体结合结构域与CD70(如人CD70)的结合亲和力(KD)可以例如为约0.1至约1000nM，例如约0.5nM至约500nM，或例如约1nM至约250nM。在一些实施例中，结合亲和力是以下中的约任一个：1000nm、750nm、500nm、400nm、300nm、250nm、200nM、100 nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、45nM、40nM、35nM、30nM、25nM、20nM、19nm、18nm、17nm、16nm、15nM、10nM、8nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.5nM、0.3nM或0.1nM。

在一些实施例中，如本文所描述的CD70特异性CAR的配体结合结构域的scFv与CD70的结合亲和力(KD)是约10nM至约100nM、约10nM至约90nM、约10 nM至约80nM、约20nM至约70nM、约25nM至约75nM或约40nM至约110nM。在一些实施例中，本段落中描述的scFv的结合亲和力是针对人CD70的。

在一些实施例中，结合亲和力小于以下中的约任一个：1000nm、900nm、800nm、250nM、200nM、100nM、50nM、30nM、20nM、10nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5nM。

根据本公开的CAR的胞内信号传导结构域负责在胞外配体结合结构域与靶标结合之后的胞内信号传导，从而导致免疫细胞的活化和免疫应答。胞内信号传导结构域能够活化表达CAR的免疫细胞的正常效应子功能中的至少一种。例如，T细胞的效应子功能可以是细胞溶解活性或辅助活性(包含细胞因子的分泌)。

在一些实施例中，用于CAR中的胞内信号传导结构域可以是例如但不限于T细胞受体和共受体的胞质序列，以及这些序列的任何衍生物或变体以及具有相同功能能力的任何合成序列，所述T细胞受体和共受体在抗原受体接合后协同作用以启动信号转导。胞内信号传导结构域包括两种不同类型的胞质信号传导序列：启动抗原依赖性主要活化的胞质信号传导序列，以及以抗原非依赖性方式起作用以提供次级或共刺激信号的胞质信号传导序列。主要胞质信号传导序列可以包括被称为ITAM的基于免疫受体酪氨酸的活化基序的信号传导基序。ITAM是在充当syk/zap70类酪氨酸激酶的结合位点的各种受体的胞质内尾区发现的明确定义的信号传导基序。本公开中使用的ITAM的实例可以包含作为非限制性实例的源自TCRζ、FcRγ、FcRβ、FcRε、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的那些。在一些实施例中，CAR的胞内信号传导结构域可以包括CD3ζ信号传导结构域，所述CD3ζ信号传导结构域具有与SEQ ID NO：272或617中所示的氨基酸序列至少约70％、至少80％、至少90％、95％、97％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，本公开的CAR的胞内信号传导结构域包括共刺激分子的结构域。

在一些实施例中，本公开的CAR的胞内信号传导结构域包括选自由41BB(GenBank：AAA53133)和CD28(NP_006130.1)的片段组成的组的共刺激分子的一部分。在一些实施例中，本公开的CAR的胞内信号传导结构域包括与SEQ ID NO：271或616中所示的氨基酸序列包括至少70％、至少80％、至少90％、95％、97％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，本公开的CAR的胞内信号传导结构域包括与SEQ ID NO：271或616中所示的氨基酸序列包括至少70％、至少80％、至少90％、95％、97％或99％序列同一性和/或与SEQ ID NO：276中所示的氨基酸序列包括至少70％、至少80％、至少90％、95％、97％或99％序列同一性的氨基酸序列。

CAR在细胞的表面膜上表达。因此，CAR可以包括跨膜结构域。本文所公开的CAR的合适跨膜结构域具有以下能力：(a)在细胞，所述细胞在一些实施例中是免疫细胞，如但不限于淋巴细胞，如T辅助(T_h)细胞、细胞毒性T(T_c)细胞、T调节(T_reg)细胞或自然杀伤(NK)细胞的表面处表达；和/或(b)与配体结合结构域和胞内信号传导结构域相互作用，以指导免疫细胞对预定靶细胞的细胞应答。跨膜结构域可以源自天然的或源自合成的来源。跨膜结构域可以源自任何膜结合或跨膜蛋白。作为非限制性实例，跨膜多肽可以是T细胞受体的子序列或亚基，如α、β、γ或δ；构成CD3复合物的多肽；IL-2受体p55(a链)、p75(β链)或γ链；Fc受体，具体地Fcγ受体III的亚基链；或CD蛋白。可替代地，跨膜结构域可以是合成的并且可以主要包括疏水残基，如亮氨酸和缬氨酸。在一些实施例中，所述跨膜结构域源自人CD8a链(例如，NP_001139345.1)。跨膜结构域可以进一步包括位于胞外配体结合结构域和所述跨膜结构域之间的茎结构域。茎结构域可以包括至多300个氨基酸-在一些实施例中，10至100个氨基酸或在一些实施例中，25至50个氨基酸。茎区可以源自天然存在的分子的全部或部分，如源自CD8、CD4、CD28、4-1BB或IgG(具体地IgG的铰链区)的胞外区的全部或部分，或源自抗体重链恒定区的全部或部分。可替代地，茎结构域可以是对应于天然存在的茎序列的合成序列，或者可以是完全合成的茎序列。在一些实施例中，所述茎结构域是人CD8α链的一部分(例如，NP 001139345.1)。在另一个特定实施例中，所述铰链和跨膜结构域包括人CD8α链的一部分，在一些实施例中，所述部分包括与选自由SEQ ID NO：268和270组成的组的氨基酸序列至少70％、至少80％、至少90％、95％、97％或99％的序列同一性。在一些实施例中，本文所述的CAR的茎结构域包括CD8α、IgG1或FcγRIIIα的子序列，具体地CD8α、IgG1或FcγRIIIα中的任一个的铰链区。在一些实施例中，茎结构域包括人CD8α铰链、人IgG1铰链或人FcγRIIIα铰链。在一些实施例中，本文所公开的CAR可以包括与CD70特异性结合的胞外配体结合结构域。在一些实施例中，本文所公开的CAR包括scFv、CD8α人铰链和跨膜结构域、CD3ζ信号传导结构域和4-1BB信号传导结构域。

表4提供了可以用于本文所公开的CAR中的结构域的示例性序列。

表4：其它示例性序列

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靶抗原的下调或突变通常在癌细胞中观察到，从而产生抗原丢失逃逸变体。因此，为了抵消肿瘤逃逸并使免疫细胞对靶标更具特异性，CD70特异性CAR可以包括一个或多个另外的胞外配体结合结构域，以同时与靶标中的不同元件结合，从而增强免疫细胞活化和功能。在一些实施例中，胞外配体结合结构域可以串联放置在相同的跨膜多肽上，并且任选地可以通过接头分开。在一些实施例中，所述不同的胞外配体结合结构域可以置于构成CAR的不同跨膜多肽上。在一些实施例中，本公开涉及CAR的群体，每个CAR包括不同的胞外配体结合结构域。具体地，本公开涉及一种将免疫细胞工程化的方法，所述方法包括提供免疫细胞以及在细胞表面处表达CAR的群体，每个CAR包括不同的胞外配体结合结构域。在另一个特定实施例中，本公开涉及一种将免疫细胞工程化的方法，所述方法包括提供免疫细胞以及将编码多肽的多核苷酸引入到细胞中，所述多肽构成CAR的群体，每个CAR包括不同的胞外配体结合结构域。CAR的群体意指至少两个、三个、四个、五个、六个或更多个CAR，每个CAR包括不同的胞外配体结合结构域。在一些实施例中，根据本公开的不同胞外配体结合结构域可以同时与靶标中的不同元件结合，从而增强免疫细胞活化和功能。本公开还涉及一种分离的免疫细胞，其包括CAR的群体，每个CAR包括不同的胞外配体结合结构域。

另一方面，本公开提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸编码本文所述的CAR和多肽中的任一种。可以通过本领域已知的程序制备和表达多核苷酸。

另一方面，本公开提供了包括本公开的任何细胞的组合物(如药物组合物)。在一些实施例中，组合物包括细胞，所述细胞包括编码本文所描述的CAR中的任一种的多核苷酸。在仍其它实施例中，组合物包括以下中所示的多核苷酸中的任一者或两者：下文SEQ IDNO：297和SEQ ID NO：298，SEQ ID NO：299和SEQ ID NO：300，SEQ ID NO：301和SEQ ID NO：302，SEQ ID NO：303和SEQ ID NO：304，SEQ ID NO：305和SEQ ID NO：306，SEQ ID NO：307和SEQ ID NO：308或SEQ ID NO：309和SEQ ID NO 310：4F11重链可变区

4F11轻链可变区

在仍其它实施例中，组合物包括以下中所示的多核苷酸中的任一者或两者：下文SEQ ID NO：299和SEQ ID NO 300：

17G6重链可变区

17G6轻链可变区

在仍其它实施例中，组合物包括以下中所示的多核苷酸中的任一者或两者：下文SEQ ID NO：301和SEQ ID NO 302：

10H10重链可变区

10H10轻链可变区

在仍其它实施例中，组合物包括以下中所示的多核苷酸中的任一者或两者：下文SEQ ID NO：303和SEQ ID NO 304：

P07D03重链可变区

P07D03轻链可变区

在仍其它实施例中，组合物包括以下中所示的多核苷酸中的任一者或两者：下文SEQ ID NO：305和SEQ ID NO 306：

P08G02重链可变区

P08G02轻链可变区

在仍其它实施例中，组合物包括以下中所示的多核苷酸中的任一者或两者：下文SEQ ID NO：307和SEQ ID NO：308：

P08F08重链可变区

P08F08轻链可变区

在仍其它实施例中，组合物包括以下中所示的多核苷酸中的任一者或两者：下文SEQ ID NO：309和SEQ ID NO 310：

P15D02重链可变区

P15D032轻链可变区

本文进一步描述了表达载体和多核苷酸组合物的施用。

另一方面，本公开提供了制备本文所述的任何多核苷酸的方法。

与任何此类序列互补的多核苷酸也涵盖在本公开内。多核苷酸可以是单链(编码或反义)或双链的，并且可以是DNA(基因组、cDNA或合成的)或RNA分子。RNA分子包含含有内含子并以一对一的方式对应于DNA分子的hnRNA分子，以及不含有内含子的mRNA分子。另外的编码或非编码序列可以但不必存在于本公开的多核苷酸内，并且多核苷酸可以但不必连接到其它分子和/或载体材料。

多核苷酸可以包括天然序列(即，编码抗体或其部分的内源性序列)，或者可以包括此类序列的变体。多核苷酸变体含有一个或多个取代、添加、缺失和/或插入，使得经编码的多肽的免疫反应性相对于天然免疫反应性分子没有减弱。通常可以如本文所描述地评估对经编码的多肽的免疫反应性的效果。变体表现出与编码天然抗体或其部分的多核苷酸序列至少约70％同一性、至少约80％同一性、至少约90％同一性或至少约95％同一性。

如果两个序列中的核苷酸或氨基酸的序列在如下文所述比对最大对应性时是相同的，则两个多核苷酸或多肽序列被称为“相同”。两个序列之间的比较通常通过在比较窗口上比较序列来进行，以鉴定和比较具有序列类似性的局部区。如本文所使用的，“比较窗口”是指具有至少约20个连续位置，通常30个至约75个或40个至约50个连续位置的区段，其中在两个序列进行最佳比对后，序列可以与具有相同数量的连续位置的参考序列进行比较。

可以使用默认参数，使用Lasergene生物信息学软件套件(威斯康星州麦迪逊市的DNASTAR公司)中的Megalign程序对序列进行最佳比对以进行比较。此程序体现了以下参考文献中所描述的若干比对方案：Dayhoff，M.O.，1978，“蛋白质中演化变化的模型-用于检测远距离关系的矩阵”Dayhoff，M.O.(编辑)《蛋白质序列和结构图谱》，华盛顿特区全国生物医学研究基金会第5卷，增刊3，第345-358页；HeinJ.，1990《比对和发生学的统一方法》第626-645页《酶学方法》第183卷，加利福尼亚州圣地亚哥的学术出版社公司；Higgins，D.G.和Sharp，P.M.，1989，《计算机在生物科学中的应用》5：151-153；Myers，E.W.和Muller W.，1988，《计算机在生物科学中的应用》4：11-17；Robinson，E.D.，1971，《组合理论》11：105；Santou，N.，Nes，M.，1987，《分子生物学进化》4：406-425；Sneath，P.H.A.和Sokal，R.R.，1973，《数值分类法-数值分类法的原理与实践》，加利福尼亚州圣弗朗西斯市的弗里曼出版社；Wilbur，W.J.和Lipman，D.J.，1983，《美国国家科学院院刊》80∶726-730。

“序列同一性的百分比”通过在具有至少20个位置的比较窗口上比较两个最佳比对序列来确定，其中比较窗口中的多核苷酸或多肽序列的部分可以包括与参考序列(所述参考序列不包括添加或缺失)相比添加或缺失(即，空位)20百分比或更少、通常5至15百分比或10至12百分比以进行两个序列的最佳比对。百分比通过以下计算：确定在两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置的数量，以得出匹配的位置的数量；将匹配的位置的数量除以参考序列(即窗口尺寸)中的位置的总数量；并且将结果乘以100，以得出序列同一性的百分比。

变体还可以或可替代地，与天然基因或其部分或补体基本上同源。此类多核苷酸变体能够在中等严格条件下与天然存在的编码天然抗体的DNA序列(或互补序列)杂交。

合适的“中等严格条件”包含在5倍SSC、0.5％SDS、1.0mM EDTA(pH 8.0)的溶液中预洗涤；在50℃-65℃、5倍SSC下杂交过夜；随后在65℃下用含0.1％SDS的2倍、0.5倍和0.2倍SSC中的每一者洗涤两次持续20分钟。

如本文所使用的，“高度严格条件”或“高严格性条件”是指以下中的那些：(1)采用用于洗涤的低离子强度和高温，例如在50℃下0.015M氯化钠/0.0015M柠檬酸钠/0.1％十二烷基硫酸钠：(2)在42℃下在杂交期间采用变性剂，如甲酰胺，例如，pH 6.5下的具有0.1％牛血清白蛋白/0.1％聚蔗糖/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸钠缓冲液的50％(v/v)甲酰胺与750mM氯化钠、75mM柠檬酸钠；或(3)在42℃下采用50％甲酰胺、5倍SSC(0.75MNaCl、0.075M柠檬酸钠)、50mM磷酸钠(pH6.8)、0.1％焦磷酸钠、5倍Denhardt溶液、经超声处理的鲑鱼精子DNA(50μg/ml)、0.1％SDS和10％硫酸葡聚糖，在42℃下在0.2倍SSC(氯化钠/柠檬酸钠)中以及在55℃下在50％甲酰胺中洗涤，随后在55℃下进行由含有EDTA的0.1倍SSC组成的高严格性洗涤。技术人员将认识到如何根据需要调节温度、离子强度等以适应如探针长度等因素。

本领域的普通技术人员应理解，由于遗传密码的简并性，存在编码如本文所述的多肽的许多核苷酸序列。这些多核苷酸中的一些与任何天然基因的核苷酸序列具有最小的同源性。然而，本公开具体考虑了由于密码子使用的差异而变化的多核苷酸。进一步地，包括本文所提供的多核苷酸序列的基因的等位基因在本公开的范围内。等位基因是由于核苷酸的一个或多个突变，如缺失、添加和/或取代而改变的内源性基因。所得mRNA和蛋白质可能但不必具有改变的结构或功能。可以使用标准技术(如杂交、扩增和/或数据库序列比较)来识别等位基因。

可以使用化学合成、重组方法或PCR来获得本公开的多核苷酸。化学多核苷酸合成的方法是本领域众所周知的并且不需要在本文中详细描述。本领域技术人员可以使用本文所提供的序列和商业DNA合成仪来产生期望的DNA序列。

为了使用重组方法制备多核苷酸，可以将包括期望的序列的多核苷酸插入到合适的载体中，并且进而可以将所述载体引入到合适的宿主细胞中用于复制和扩增，如本文进一步讨论的。可以通过本领域已知的任何方式将多核苷酸插入到宿主细胞中。通过直接摄取、胞吞作用、转染、F-交配或电穿孔引入外源性多核苷酸来转化细胞。一旦引入，外源性多核苷酸可以作为非整合载体(如质粒)维持在细胞内或整合到宿主细胞基因组中。如此扩增的多核苷酸可以通过本领域众所周知的方法从宿主细胞中分离出来。参见例如，Sambrook等人，1989。

可替代地，PCR允许复制DNA序列。PCR技术在本领域中是众所周知的并且描述于美国专利第4,683,195号、第4,800,159号、第4,754,065号和第4,683,202号以及《PCR：聚合酶链反应聚合酶链反应》，Mullis等人编辑，波士顿的博克豪斯出版社，1994。

可以通过在合适的载体中使用分离的DNA并且将其插入到合适的宿主细胞来获得RNA。当细胞复制并且DNA转录到RNA中时，然后可以使用本领域技术人员众所周知的方法分离RNA，例如，如Sambrook等人，1989，同上所述。

合适的克隆载体可以根据标准技术构建或可以选自本领域可用的大量克隆载体。虽然选择的克隆载体可能会根据要使用的宿主细胞而有所不同，但有用的克隆载体通常将具有自我复制的能力，可以具有针对特定限制性核酸内切酶的单一靶标和/或可以携带可以用于选择含有载体的克隆的标志物的基因。合适的实例包含质粒和细菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript(例如，pBS SK+)及其衍生物、mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA以及穿梭载体，如pSA3和pAT28。这些和许多其它克隆载体可从商业供应商处获得，如伯乐公司、Strategene公司和英杰公司。

表达载体通常是含有根据本公开的多核苷酸的可复制多核苷酸构建体。这意味着表达载体必须在宿主细胞中作为附加体或作为染色体DNA的组成部分是可复制的。合适的表达载体包含但不限于质粒、病毒载体，包含腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、粘粒和PCT公开第WO87/04462号中所公开的表达载体或由Clonetech可得的慢病毒pLVX载体。载体组分通常可以包含但不限于以下中的一者或多者：信号序列；复制起点；一种或多种标志物基因；合适的转录控制元件(如启动子、增强子和终止子)。对于表达(即，翻译)，通常还需要一种或多种翻译控制元件，如核糖体结合位点、翻译起始位点和终止密码子。

含有所关注的多核苷酸的载体可以通过多种适当方式中的任何方式被引入到宿主细胞中，所述适当方法包含电穿孔；采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-葡聚糖或其它物质进行转染；微粒轰击；脂质转染；以及感染(例如，其中载体是如牛痘病毒等感染原)。引入载体或多核苷酸的选择通常将取决于宿主细胞的特征。

编码本文所公开的CD70特异性CAR的多核苷酸可以存在于表达盒或表达载体(例如，用于引入到细菌宿主细胞中的质粒或用于转染昆虫宿主细胞的如杆状病毒载体等病毒载体或用于转染哺乳动物宿主细胞的如慢病毒等质粒或病毒载体)中。在一些实施例中，多核苷酸或载体可以包含编码核糖体跳跃序列的核酸序列，如但不限于编码2A肽的序列。在由密码子编码的两个氨基酸之间没有形成肽键的情况下，在小核糖核酸病毒的口疮病毒亚群中鉴定的2A肽使核糖体从一个密码子“跳跃”到下一个密码子(参见(Donnelly和Elliott2001；Atkins，Wills等人2007；Doronina，Wu等人2008))。“密码子”意指mRNA上(或DNA分子的有义链上)的三个核苷酸，所述核苷酸被核糖体翻译成一个氨基酸残基。因此，当多肽被框中的2A寡肽序列分隔时，可以由mRNA内的单个连续开放阅读框合成两个多肽。此类核糖体跳跃机制在本领域中是众所周知的，并且已知被若干种载体用于表达由单个信使RNA编码的若干种蛋白质。

为了将跨膜多肽引导到宿主细胞的分泌途径中，在一些实施例中，在多核苷酸序列或载体序列中提供分泌信号序列(也称为前导序列、前原序列或前序列)。分泌信号序列与跨膜核酸序列可操作地连接，即，这两个序列在正确的阅读框中被连接并且被定位以将新合成的多肽引导到宿主细胞的分泌途径中。分泌信号序列通常定位于编码所关注的多肽的核酸序列的5′，但是某些分泌信号序列可能定位于所关注的核酸序列的其它地方(参见例如，Welch等人，美国专利第5,037,743号；Holland等人，美国专利第5,143,830号)。在一些实施例中，信号肽包括SEQ ID NO：266或277中所示的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，鉴于遗传密码的简并性，在这些多核苷酸分子中可能存在相当大的序列变异。在一些实施例中，本公开的核酸序列针对在哺乳动物细胞中的表达，或者在一些实施例中针对在人细胞中的表达进行了密码子优化。密码子优化是指在所关注的序列中，将给定物种的高表达基因中通常罕见的密码子与此类物种的高表达基因中通常常见的密码子进行交换，编码氨基酸的此类密码子作为正在被交换的密码子。

包括或功能性地表达CD70结合蛋白的免疫细胞以及其使用方法

本文提供了包括或功能性地表达如本文所述的CD70结合蛋白(例如CD70 CAR)的经工程化的免疫细胞以及其使用方法。

一方面，本公开提供了在有需要的患者中进行淋巴细胞清除的方法，所述方法包括向所述患者施用经工程化的免疫细胞，所述经工程化的免疫细胞包括或功能性地表达CD70结合蛋白，其中所述经工程化的免疫细胞抑制CD70阳性细胞在所述患者中的增殖和/或活性。在一些实施例中，所述经工程化的免疫细胞源自或开发自或制备自外周血单核细胞(PBMC)、T细胞、NK细胞、单核细胞或巨噬细胞或其混合物，或者衍生自iPSC或由其产生或制备。在一些实施例中，所述经工程化的免疫细胞对于所述患者是自体的或同种异体的。在一些实施例中，所述患者患有或预期患有宿主抗移植物排斥或宿主抗移植物反应。在一些实施例中，所述患者需要移植，所述移植包含但不限于骨髓移植、干细胞移植或组织移植，其中与未施用所述经工程化的免疫细胞的对照相比，所述移植在所述患者中表现出更长的持久性或对宿主排斥更大的抗性。在一些实施例中，所述患者正在接受过继细胞疗法，任选地其中所述过继细胞疗法是嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法。在一些实施例中，所述患者正在接受同种异体CAR T疗法。

在一些实施例中，相对于接受比较性但未经工程化的细胞或不包括此类经工程化的细胞的比较性群体的对照，施用如本文所公开的经工程化的免疫细胞，或施用包括如本文所公开的此类经工程化的免疫细胞的细胞群体，降低了患者中的例如移植或过继细胞疗法的宿主排斥。在一些实施例中，包括或功能性地表达如本文所述的CD70结合蛋白的经工程化的免疫细胞与一种或多种淋巴细胞清除剂联合(例如，之前、同时或之后)施用于患者中，并且任选地，淋巴细胞清除剂中的一些可以被省略或以低于未施用如本文所述的经工程化的免疫细胞的患者的水平施用。在一些实施例中，一种或多种淋巴细胞清除剂是化疗剂或抗体。在一些实施例中，一种或多种淋巴细胞清除剂是氟达拉滨、环磷酰胺或抗CD52抗体，例如阿仑单抗(alemtuzumab)。

在某些实施例中，所述经工程化的免疫细胞进一步包括或功能性地表达对所关注的靶标具有特异性的另外的抗原结合结构域，任选地所述抗原结合结构域包括与所述所关注的靶标结合的抗体。在一些实施例中，一种蛋白质包括所述另外的抗原结合结构域和所述CD70结合蛋白，并且其中所述另外的抗原结合结构域包括与所述所关注的靶标结合的抗体，并且任选地，所述另外的抗原结合结构域包括scFv。在一些实施例中，所述另外的抗原结合蛋白表达为与所述CD70结合蛋白分离的蛋白质。在一些实施例中，包括或功能性地表达如本文所述的CD70结合蛋白的经工程化的免疫细胞与一种或多种淋巴细胞清除剂联合(例如，之前、同时或之后)施用于患者中，并且有利地淋巴细胞清除剂中的一些可以被省略或以低于未施用如此处所述的经工程化的免疫细胞的对照的水平施用。

CD70特异性抗体以及其制备方法

本文提供了CD70抗体。

在一些实施例中，本公开的CD70抗体包括如表1中列出的部分轻链序列中的任一个和/或如表1中列出的部分重链序列中的任一个。在表1中，加下划线的序列是根据Kabat的CDR序列，并且根据Chothia呈粗体。

表2A-2B提供了本文提供的CD70抗体的CDR序列的实例。

在一些实施例中，本公开提供了一种抗体(例如包含抗体片段，如与分化簇70(CD70)特异性结合的单链可变片段(scFv)，其中所述抗体包括：(a)重链可变(VH)区，所述VH区包括：(i)VH互补决定区一(CDR1)，所述CDR1包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：49、50、51、55、56、57、61、62、63、67、68、69、73、74、75、79、80、81、85、86、87、91、92、93、97、98、99、103、104、105、109、110、111、115、116、117、121、122、123、127、128、129、133、134、135、139、140、141、145、146、147、151、152、153、157、158、159、163、164、165、169、170、171、175、176、177、181、182、183、187、188、189、382、383、384、388、389、390、394、395、396、400、401、402、406、407、408、412、413、414、418、419、420、424、425、426、430、431、432、607、608、609、436、437、438、442、443、444、448、449、450、454、455、456、460、461、462、466、467、468、472、473、474、478、479、480、484、485、486、490、491、492、496、497、498、502、503、504、508、509或510；(ii)VH CDR2，所述VH CDR2包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：52、53、58、59、64、65、70、71、76、77、82、83、88、89、94、95、100、101、106、107、112、113、118、119、124、125、130、131、136、137、142、143、148、149、154、155、160、161、166、167、172、173、178、179、184、185、190、191、385、386、391、392、397、398、403、404、409、410、415、416、421、422、427、428、433、434、610、661、439、440、445、446、451、452、457、458、463、464、469、470、475、476、481、482、487、488、493、494、499、500、505、506、511或512；以及iii)VH CDR3，所述VH CDR3包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、387、393、399、405、411、41 7、423、429、435、612、441、447、453、459、465、471、477、483、489、495、501、507或513；和/或轻链可变(VL)区，所述VL区包括：(i)VLCDR1，所述VL CDR1包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：193、196、199、202、205、208、211、214、217、220、223、226、229、232、235、238、241、244、247、250、253、256、259、262、514、517、520、523、526、529、532、535、538、613、541、544、547、550、553、556、559、562、565、568、571、574或577；(ii)VLCDR2，所述VLCDR2包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：194、197、200、203、206、209、212、215、218、221、224、227、230、233、236、239、242、245、248、251、254、257、260、263、515、518、521、524、527、530、533、536、539、614、542、545、548、551、554、557、560、563、566、569、572、575或578；以及(iii)VLCDR3，所述VLCDR3包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：195、198、201、204、207、21 0、213、216、219、222、225、228、231、234、237、240、243、246、249、252、255、258、261、264、516、519、522、525、528、531、534、537、540、615、543、546、549、552、555、558、561、564、567、570、573、576或579。

在一些实施例中，本公开提供了一种抗体(例如，scFv)，所述抗体与分化簇70(CD70)特异性结合，其中所述抗体包括重链可变(VH)区，所述VH区包括具有如以下所示的VH序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、339、341、343、345、347、349、351、353、355、606、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379或381；和/或轻链可变(VL)区，所述VL区包括具有如以下所示的VL序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3：SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、338、340、342、344、346、348、350、352、354、605、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378或380。

在一些实施例中，本公开提供了一种分离的抗体，所述分离的抗体与CD70特异性结合并与前述抗体中的任一种竞争。

在一些实施例中，本发明提供了一种抗体，所述抗体与CD70结合并与如本文所述的抗体竞争，所述抗体包含31H1、63B2、40E3、42C3、45F11、64F9、72C2、2F10、4F11、10H10、17G6、65E11、P02B10、P07D03、P08A02、P08E02、P08F08、P08G02、P12B09、P12F02、P12G07、P13F04、P15D02、P16C05、10A1、10E2、11A1、11C1、11D1、11E1、12A2、12C4、12C5、12D3、12D6、12D7、12F5、12H4、8C8、8F7、8F8、9D8、9E10、9E5、9F4或9F8。

在一些实施例中，本发明还提供了基于CDR接触区的针对CD70抗体的抗体的CDR部分。CDR接触区是赋予抗体对抗原的特异性的抗体的区。通常，CDR接触区包含CDR和Vernier区中的残基位置，所述区被限制以便维持抗体结合特定抗原的正确环结构。参见例如，Makabe等人，《生物化学杂志》，283：1156-1166，2007。CDR接触区的确定完全在本领域的技术范围内。

如本文所述的CD70抗体与CD70(如人CD70(例如(SEQ ID NO：601))的结合亲和力(K_D)可以为约0.001至约5000nM。在一些实施例中，结合亲和力为以下中的约任一个：5000nM、4500nM、4000nM、3500nM、3000nM、2500nM、2000nM、1789nM、1583nM、1540nM、1500nM、1490nM、1064nM、1000nM、933nM、894nM、750nM、705nM、678nM、532nM、500nM、494nM、400nM、349nM、340nM、353nM、300nM、250nM、244nM、231nM、225nM、207nM、200nM、186nM、172nM、136nM、113nM、104nM、101nM、100nM、90nM、83nM、79nM、74nM、54nM、50nM、45nM、42nM、40nM、35nM、32nM、30nM、25nM、24nM、22nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、12nM、10nM、9nM、8nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.5nM、0.3nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM。在一些实施例中，结合亲和力小于以下中的约任一个：5000nM、4000nM、3000nM、2000nM、1000nM、900nM、800nM、250nM、200nM、100nM、50nM、30nM、20nM、10nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM或0.5nM。

在一些实施例中，本公开提供了编码前述分离的抗体中的任一种的核酸。在一些实施例中，本公开提供了一种包括此类核酸的载体。在一些实施例中，本公开提供了一种包括此类核酸的宿主细胞。

本公开进一步提供了用作药物的前述抗体中的任何抗体。在一些实施例中，所述药物用于治疗选自由以下组成的组的CD70相关癌症：肾细胞癌、胶质母细胞瘤、如低级别胶质瘤等胶质瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin′s Lymphoma，NHL)、霍奇金氏病(Hodgkin′s Disease，HD)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom′s macroglobulinemia)、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤或非小细胞肺癌。

在一些实施例中，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括提供前述抗体中的任一种，以及将所述抗体施用于所述受试者。

在一些实施例中，本公开提供了一种药物组合物，其包括前述抗体中的任一种。

在一些实施例中，本公开提供了一种治疗受试者中与表达CD70的恶性细胞相关的病状的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的前述抗体中的任何一种或包括前述抗体中的任一种的药物组合物。在一些实施例中，所述病状是癌症。在一些实施例中，所述癌症是选自由以下组成的组的CD70相关癌症：肾细胞癌、胶质母细胞瘤、如低级别胶质瘤等胶质瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、霍奇金氏病(HD)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤或非小细胞肺癌。

在一些实施例中，本公开提供了一种抑制患有表达CD70的恶性细胞的受试者中的肿瘤生长或进展的方法，所述方法包括向有需要的受试者向受试者施用有效量的本公开的药物组合物。

在一些实施例中，本公开提供了一种抑制受试者中表达CD70的恶性细胞的转移的方法，所述方法包括向有需要的受试者向受试者施用有效量的本公开的药物组合物。

在一些实施例中，本公开提供了一种诱导患有表达CD70的恶性细胞的受试者中的肿瘤消退的方法，所述方法包括向有需要的受试者向受试者施用有效量的本公开的药物组合物。

在一些实施例中，所述抗体包括在导致抗体产生的条件下培养本公开的宿主细胞，并且将抗体与宿主细胞或培养物分离。

可用于本发明的抗体可以涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段(例如，Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、Fc等)、嵌合抗体、双特异性抗体、复缀合物抗体、单链(ScFv)、其突变体，包括抗体部分(例如，结构域抗体)的融合蛋白、人源化抗体、以及包括所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它经修饰的构型，包含抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和共价修饰的抗体。抗体可以是鼠、大鼠、人或任何其它来源(包含嵌合或人源化抗体)。

在一些实施例中，如本文所述的CD70单特异性抗体是单克隆抗体。例如，CD70单特异性抗体是人单克隆抗体。

本公开进一步提供了以下说明性实施例：

1.一种单独的抗体，其与分化簇70(CD70)特异性结合，其中所述抗体包括：

(a)重链可变(VH)区，所述VH区包括：(i)VH互补决定区一(CDR1)，所述CDR1包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：49、50、51、55、56、57、61、62、63、67、68、69、73、74、75、79、80、81、85、86、87、91、92、93、97、98、99、103、104、105、109、110、111、115、116、117、121、122、123、127、128、129、133、134、135、139、140、141、145、146、147、151、152、153、157、158、159、163、164、165、169、170、171、175、176、177、181、182、183、187、188、189、382、383、384、388、389、390、394、395、396、400、401、402、406、407、408、412、413、414、418、419、420、424、425、426、430、431、432、607、608、609、436、437、438、442、443、444、448、449、450、454、455、456、460、461、462、466、467、468、472、473、474、478、479、480、484、485、486、490、491、492、496、497、498、502、503、504、508、509或510；(ii)VH CDR2，所述VH CDR2包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：52、53、58、59、64、65、70、71、76、77、82、83、88、89、94、95、100、101、106、107、112、113、118、119、124、125、130、131、136、137、142、143、148、149、154、155、160、161、166、167、172、173、178、179、184、185、190、191、385、386、391、392、397、398、403、404、409、410、415、416、421、422、427、428、433、434、610、611、439、440、445、446、451、452、457、458、463、464、469、470、475、476、481、482、487、488、493、494、499、500、505、506、511或512；以及iii)VH CDR3，所述VH CDR3包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、387、393、399、405、411、41 7、423、429、435、612、441、447、453、459、465、471、477、483、489、495、501、507或513；和/或

(b)轻链可变(VL)区，所述VL区包括：(i)VLCDR1，所述VLCDR1包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：193、196、199、202、205、208、211、214、217、220、223、226、229、232、235、238、241、244、247、250、253、256、259、262、514、517、520、523、526、529、532、535、538、613、541、544、547、550、553、556、559、562、565、568、571、574或577；(ii)VL CDR2，所述VL CDR2包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：194、197、200、203、206、209、212、215、218、221、224、227、230、233、236、239、242、245、248、251、254、257、260、263、515、518、521、524、527、530、533、536、539、614、542、545、548、551、554、557、560、563、566、569、572、575或578；以及(iii)VLCDR3，所述VL CDR3包括以下中所示的序列：SEQ ID NO：195、198、201、204、207、210、213、216、219、222、225、228、231、234、237、240、243、246、249、252、255、258、261、264、516、519、522、525、528、531、534、537、540、615、543、546、549、552、555、558、561、564、567、570、573、576或579。

2.一种单独的抗体，其与分化簇70(CD70)特异性结合，其中所述抗体包括：

(a)VH区，所述VH区包括具有如以下所示的VH序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、339、341、343、345、347、349、351、353、355、606、357、359、361、363、365、367、369、371、373、375、377、379或381；和/或

(b)VL区，所述VL区包括具有如以下所示的VL序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3：SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、338、340、342、344、346、348、350、352、354、605、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378或380。

3.一种分离的抗体，其与CD70特异性结合并与根据实施例1所述的抗体竞争。

4.一种核酸，其编码根据实施例1至3中任一项所述的抗体。

5.一种载体，其包括根据实施例4所述的核酸。

6.一种宿主细胞，其包括根据实施例4所述的核酸。

7.根据实施例1至3中任一项所述的抗体用作药物。

8.根据实施例7所述的抗体，其中所述药物用于治疗选自由以下组成的组的CD70相关癌症：肾细胞癌、胶质母细胞瘤、如低级别胶质瘤等胶质瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、霍奇金氏病(HD)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤或非小细胞肺癌。

9.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括：

a.提供根据实施例1至3中任一项所述的抗体；以及

b.将所述抗体施用于所述受试者。

10.一种药物组合物，其包括根据实施例1至3中任一项所述的抗体。

11.一种治疗受试者中与表达CD70的恶性细胞相关的病状的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的根据实施例1至3中任一项所述的抗体或根据实施例10所述的药物组合物。

12.根据实施例11所述的方法，其中所述病状是癌症。

13.根据实施例12所述的方法，其中所述癌症是选自由以下组成的组的CD70相关癌症：肾细胞癌、胶质母细胞瘤、如低级别胶质瘤等胶质瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、霍奇金氏病(HD)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤或非小细胞肺癌。

14.一种抑制患有表达CD70的恶性细胞的受试者的肿瘤生长或进展的方法，所述方法包括向有需要的受试者向受试者施用有效量的根据实施例10所述的药物组合物。

15.一种抑制受试者中表达CD70的恶性细胞的转移的方法，所述方法包括向有需要的受试者向受试者施用有效量的根据实施例10所述的药物组合物。

16.一种诱导患有表达CD70的恶性细胞的受试者的肿瘤消退的方法，所述方法包括向有需要的受试者向受试者施用有效量的根据实施例10所述的药物组合物。

17.一种产生抗体的方法，所述方法包括在导致所述抗体产生的条件下培养根据实施例6所述的宿主细胞，以及将所述抗体与所述宿主细胞或培养物分离。

治疗立法

任选地通过本文所描述的方法获得的本文所描述的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞，本文所描述的源自此类经工程化的免疫细胞或经工程化的T细胞的细胞系，以及本文所描述的包括此类细胞的组合物可用作药物。在一些实施例中，此类药物可用于治疗病症，如病毒性疾病、细菌性疾病、癌症、炎性疾病、免疫疾病或衰老相关疾病。在一些实施例中，所述癌症可以选自由以下组成的组：胃癌(gastric cancer)、肉瘤、淋巴瘤(包含非霍奇金氏淋巴瘤)、白血病、头颈癌、胸腺癌、上皮癌、唾液癌、肝癌、胃癌(stomachcancer)、甲状腺癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、食道癌、胰腺癌、神经胶质瘤、白血病、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、膀胱癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、口腔癌、皮肤癌和黑色素瘤。在一些实施例中，受试者是先前治疗的患有局部晚期或转移性黑色素瘤、鳞状细胞头颈癌(SCHNC)、卵巢癌、肉瘤或复发性或难治性经典霍奇金氏淋巴瘤(cHL)的成年受试者。

在一些实施例中，根据本公开的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞，或源自经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞的细胞系可用于制备用于治疗有需要的受试者的病症的药物。在一些实施例中，病症可以是例如癌症、自身免疫性病症、宿主抗移植物排斥或反应或感染。

本文还提供了用于治疗受试者的方法。在一些实施例中，所述方法包括将本公开的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞或包括此类细胞的组合物施用于或提供给有需要的受试者。在一些实施例中，所述方法包括将本公开的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞或包括此类细胞的组合物施用于有需要的受试者的步骤。

在一些实施例中，本公开的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞可以经历强劲的体内细胞扩增并且可以持续延长的时间量。本公开的治疗方法可以是改善性、治愈性或预防性的。本公开的方法可以是自体免疫疗法的一部分或同种异体免疫疗法治疗的一部分。本公开具体地适用于同种异体免疫疗法。可以使用标准方案将由供体提供的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞转化为非同种异体反应性细胞并且根据需要进行复制，从而产生例如可以施用于一名或若干名受试者的CAR-T细胞。此类CAR-T细胞疗法可以作为同种异体ALLO CAR T^TM治疗产物可得进行制备。

另一方面，本公开提供了一种抑制患有肿瘤的受试者的肿瘤生长或进展的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如本文所描述的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞。另一方面，本公开提供了一种抑制或预防受试者中的癌细胞的转移的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的如本文所描述的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞。另一方面，本公开提供了一种诱导患有肿瘤的受试者的肿瘤消退的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如本文所描述的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞。

在一些实施例中，本文所提供的免疫细胞(例如T细胞)可以经肠胃外施用于受试者。在一些实施例中，所述受试者是人。

在一些实施例中，所述方法可以进一步包括施用有效量的第二治疗剂。在一些实施例中，所述第二治疗剂是例如克唑替尼(crizotinib)、帕博西尼(palbociclib)、抗CTLA4抗体、抗4-1BB抗体、PD-1抗体或PD-L1抗体。

还提供了一种本文所提供的免疫细胞(例如T细胞)中的任一种在制备用于治疗癌症或用于抑制有需要的受试者的肿瘤生长或进展的药物中的用途。

在某些实施例中，在本公开的经工程化的免疫细胞中，根据本公开被敲低或敲除的任何基因的功能性表达水平相对于适当的对照细胞中的对应表达水平降低了或降低了至少约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％。表达水平可以通过如FACS或MAC等任何已知方法确定。在一些实施例中，本文所公开的经工程化的免疫细胞功能性地表达根据本公开敲低或敲除的任何基因，其水平是适当的对照细胞中，例如在其它方面与经工程化的免疫细胞相同，例如包括与经工程化的免疫细胞相同的组分的未经工程化的免疫细胞中的表达水平的不大于75％、不大于50％、不大于25％、不大于10％或0％的水平。在一些实施例中，一个基因的两个等位基因都被敲除，使得本文所公开的经工程化的免疫细胞中的基因的表达水平是对照细胞的表达水平的0％。在一些实施例中，一个基因的两个等位基因中的一个被敲除，使得本文所公开的经工程化的免疫细胞中的基因的表达水平是对应的未经工程化的细胞的表达水平的50％或约50％(例如，如果补偿机制导致剩余等位基因的表达高于正常水平)。如本文所描述，如果例如通过除敲除之外的一些方式降低表达，则可以观察到中等表达水平。

在一些实施例中，在本公开的经工程化的细胞中的根据本公开被操纵的任何基因的表达水平可以通过使用本领域技术人员已知的标准技术(例如，RT-qPCR、核酸测序、抗体染色、流式细胞术或技术的一些组合)测定细胞的基因产物以及其性质来测量。可以将这些测量结果与在未经工程化以降低对应基因的功能性表达水平的比较性细胞上进行的对应测量结果进行比较。在包括本发明的经工程化的细胞(例如，经工程化的免疫细胞)的细胞群体中，被测量的材料(例如，RNA或蛋白质或细胞)的合并样品将反映这样的事实，即一些细胞不表达已敲除了两个等位基因的所关注基因，例如，一些细胞以50％或约50％的未经工程化的水平表达仅敲除了一个等位基因的所关注的基因，并且如果所述群体包括未经工程化的细胞，则一些细胞表达正常水平的所关注的基因。

在一些实施例中，相对于比较性但未经工程化的细胞或不包括此类经工程化的细胞的比较性群体，施用如本文所公开的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞，或施用包括此类经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞的细胞群体，降低了所施用的细胞或细胞群体的宿主排斥。在一些实施例中，相对于比较性但未经工程化的细胞或不包括此类经工程化的细胞群体，施用包括抗原结合蛋白(例如CAR)和CD70结合蛋白或CD70 CAR的本公开的经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞，或施用包括此类经工程化的免疫细胞，例如经工程化的T细胞的细胞群体，降低了所施用细胞或细胞群体的宿主排斥。例如，与相同但未经工程化以表达CD70 CAR的细胞的宿主排斥相比，此类施用将宿主排斥降低了1％至99％，例如5％至95％、10％至90％、50％至90％，例如降低了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。在一些实施例中，宿主排斥降低了超过90％。

在一些实施例中，与相同但未经工程化以表达CD70 CAR的细胞的持久性相比，施用包括抗原结合蛋白(例如CAR)和CD70结合蛋白(例如CD70CAR)的本公开的免疫细胞(例如T细胞)或施用包括此类免疫细胞(例如T细胞)的细胞群体，增强或改善了持久性和/或增加了细胞的持久性。在一些实施例中，持久性增加了例如1天至7天、增加了1周至12周(例如，1周至4周、4周至8周或8周至12周)、或增加了1个月至12个月、或增加了落入这些范围内的特定时间长度。在一些实施例中，持久性的差异通过比较所施用的细胞在群体或组合物中的半衰期来测量，其中，例如所述半衰期增加了例如1至7天、1至12周(例如，1至4周，4至8周或8至12周)或1至12个月或落入这些范围内的特定时间长度。在一些实施例中，持久性的差异通过比较施用之后可以检测到的所施用细胞的时间长度来测量。在一些实施例中，持久性的提高通过比较在存在例如免疫细胞，如T细胞或NK细胞的情况下，CD70 CAR和非CD70 CAR细胞例如在混合之后约72小时、5天、7天或13天的存活率来在体外进行测量。在一些实施例中，在此类体外测定中，在测量时，存活的经工程化的细胞是未经工程化的细胞的约1.5至10倍。表达CD70 CAR的细胞的改善的持久性或存活率的程度部分地取决于共温育(例如，“攻击”或宿主)免疫细胞中CD70的表达水平。

在一些实施例中，通过本领域普通技术人员已知的各种技术中的任一种来确定宿主排斥的减少和/或所施用的如本文所公开的细胞的持久性的增加。在一些实施例中，使用以下中的任一种或组合：流式细胞术、PCR，例如定量PCR，以及与患者或接受者免疫细胞的离体共温育。

在一些实施例中，所述治疗可以与一种或多种选自下组的抗癌疗法组合：抗体疗法、化疗、细胞因子疗法、树突细胞疗法、基因疗法、激素疗法、激光疗法和放射疗法。

在一些实施例中，治疗可以施用于经历免疫抑制性治疗的受试者。实际上，本公开可以依赖于由于编码此类免疫抑制剂的受体的基因灭活而对至少一种免疫抑制剂产生抗性的细胞或细胞群体(例如，在一些实施例中，被施用以治疗的经工程化的免疫细胞可以包括CD52敲除以避免如阿仑单抗等抗CD52淋巴细胞清除抗体的效果)。在此方面，免疫抑制性治疗可以有助于受试者体内的根据本公开的T细胞的选择和扩增。

根据本公开的细胞或细胞群体的施用可以任何方便的方式进行，所述方式包含通过气溶胶吸入、注射、摄取、输血、植入或移植。本文所描述的组合物可以经皮下、皮内、瘤内、结内、髓内、肌内、通过静脉内或淋巴管内注射或腹膜内施用于受试者。在一个实施例中，本公开的细胞组合物通过静脉内注射施用。

在一些实施例中，根据本公开的细胞或细胞群体的施用可以包括例如，每kg体重约10³个或10⁴个至约10⁹个本文所公开的经工程化的免疫细胞的施用，包含这些范围内的细胞数的所有整数值。在一些实施例中，细胞或细胞群体的施用可以包括每kg体重约10⁵个至约10⁶个本文所公开的经工程化的免疫细胞的施用，包含这些范围内的细胞数的所有整数值，或者每kg体重0.1x10⁶至5x10⁶个本文所公开的经工程化的免疫细胞，或总计0.1x10⁸至5x10⁸个本文所公开的经工程化的免疫细胞的施用。细胞或细胞群体可以一次或多次剂量进行施用。在一些实施例中，有效量的细胞可以作为单剂量施用。在一些实施例中，有效量的细胞可以在一段时间内作为多于一个剂量施用。施用时间在主治医师的判断范围内并且取决于受试者的临床状况。细胞或细胞群体可以从任何来源，如血库或供体获得。虽然个体需求不同，但对于特定疾病或病状的给定细胞类型的有效量的最佳范围的确定在本领域的技术范围内。有效量意指提供治疗性或预防性益处的量。施用的剂量将取决于接受者的年龄、健康和体重、同期治疗(如果有的话)的种类、治疗频率和期望的效果的性质。在一些实施例中，有效量的细胞或包括那些细胞的组合物经肠胃外施用。在一些实施例中，施用可以是静脉内施用。在一些实施例中，施用可以通过注射到肿瘤内直接进行。

在本公开的一些实施例中，将细胞与任何数量的相关治疗模态联合(例如，之前、同时或之后)施用于受试者，所述相关治疗模态包含但不限于用如单克隆抗体疗法、CCR2拮抗剂(例如INC-8761)、抗病毒疗法、西多福韦(cidofovir)和白细胞介素-2、阿糖胞苷(也称为ARA-C)等药剂的治疗或用于MS受试者的那他利珠单抗(nataliziimab)治疗或用于银屑病受试者的依法替单抗(efaliztimab)的治疗或用于PML受试者的其它治疗。在一些实施例中，将BCMA特异性CAR-T细胞与以下中的一种或多种联合施用于受试者：抗PD-1抗体(例如，纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、抗PD-L1抗体(例如，阿维单抗(avelumab)、阿特朱单抗(atezolizumab)或德瓦鲁单抗(durvalumab))、抗OX40抗体、抗4-1BB抗体(例如，乌托鲁单抗(Utolimumab))、抗MCSF抗体、抗GITR抗体和/或抗TIGIT抗体。在另外的实施例中，本公开的免疫细胞(例如T细胞)可以与化疗、放射、如环孢菌素(cyclosporin)、硫唑嘌呤(azathioprine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、麦考酚酯(mycophenolate)和FK506等免疫抑制剂、抗体或如CAMPATH(阿仑单抗)等其它免疫清除剂、抗CD3抗体或其它抗体疗法、磷酰胺(cytoxan)、氟达拉滨、环磷酰胺、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸(mycoplienolic acid)、类固醇、FR901228、细胞因子和/或辐射组合使用。这些药物抑制钙依赖性磷酸酶钙调磷酸酶(环孢菌素和FK506)或抑制对生长因子诱导的信号传导重要的p70S6激酶(雷帕霉素)(Henderson，Naya等人《免疫学(Immunology.)》1991年7月；73(3)：316-321；Liu，Albers等人《生物化学(Biochemistry)》1992年4月28日；31(16)：3896-901；Bierer，Hollander等人《当代免疫学观点(Curr Opin Immunol.)》1993年10月；5(5)：763-73)。

在另外的实施例中，本公开的细胞组合物与骨髓移植、使用如氟达拉滨等化疗剂的T细胞消融疗法、外束放射疗法(XRT)、环磷酰胺或如CAMPATH(阿仑单抗)等抗体联合(例如，之前、同时或之后)施用于受试者。在一些实施例中，在B细胞消融疗法(如与CD20反应的药剂，例如美罗华(Rituxan))后，施用本公开的细胞组合物。例如，在一个实施例中，受试者可以经历标准治疗，其中高剂量化疗之后是外周血干细胞移植。在某些实施例中，在移植后，受试者接受本公开的扩增的免疫细胞的输注。在一些实施例中，在外科手术之前或之后施用扩增的细胞。

试剂盒

本公开还提供了用于本发明方法的试剂盒。本公开的试剂盒包含一个或多个容器，所述一个或多个容器包括本公开的组合物或本公开的免疫细胞，例如T细胞或包括本公开的免疫细胞(例如经工程化的T细胞)的细胞群体。在各种实施例中，免疫细胞(例如T细胞)包括编码第一和第二抗原结合蛋白(例如，第一CAR和第二CD70 CAR)的一种或多种多核苷酸，并且任选地被进一步工程化以表达降低水平的TRAC和/或CD52。所述试剂盒进一步包括根据本文所描述的本公开的任何方法的使用说明。通常，这些说明书包括对用于上文所描述的治疗性治疗的本文所描述的组合物、免疫细胞(例如，T细胞)或细胞群体的施用的描述。

与试剂盒组分的使用相关的说明书通常包含关于剂量、给药方案和针对预期治疗的施用途径的信息。容器可以是单位剂量、散装包装(例如多剂量包装)或亚单位剂量。本公开的试剂盒中提供的说明书通常是在标签或包装插页(例如，包含在试剂盒中的纸张)上的书面说明，但机器可读说明书(例如，磁性或光学存储盘上携带的说明书)也是可接受的。

本公开的试剂盒采用适合的包装。适合的包装包含但不限于小瓶、瓶、广口瓶、软包装(例如密封的密拉(Mylar)或塑料袋)等。还考虑了与具体装置(如吸入器、鼻腔施用装置(例如，雾化器)或输注装置(如微型泵))组合使用的包装。试剂盒可以具有无菌进入端口(例如，容器可以是静脉输液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。容器也可以具有无菌进口端(例如，容器可以是具有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。根据本公开，组合物中的至少一种活性剂是免疫细胞(例如T细胞)。容器可以进一步包括第二药物活性剂。

试剂盒可以任选地提供如缓冲液等另外的组分以及解释性信息。通常，试剂盒包括容器和在容器上或与容器相关的标签或包装插页。

分选和清除的方法

在一些实施例中，提供了用于体纾分选免疫细胞群体的方法，其中所述免疫细胞群体的亚群包括如本文所述进行工程化以表达一个或多个抗原结合蛋白的免疫细胞。在各个实施例中，所述方法包括使所述免疫细胞群体与对经工程化的细胞独特的表位(例如，模拟表位，如US2018/0002435中提供的那些模拟表位)(例如抗原结合蛋白的表位或掺入到抗原结合蛋白中的模拟表位)具有特异性的单克隆抗体接触，并且选择与单克隆抗体结合的免疫细胞，以获得在表达抗原结合蛋白的经工程化的免疫细胞中富集的细胞群体。

在一些实施例中，对所述表位具有特异性的所述单克隆抗体任选地与荧光团缀合。在此实施例中，所述选择与单克隆抗体结合的细胞的步骤可以通过荧光活化细胞分选(FACS)来完成。

在一些实施例中，对所述表位具有特异性的所述单克隆抗体任选地与磁颗粒缀合。在此实施例中，所述选择与单克隆抗体结合的细胞的步骤可以通过磁活化细胞分选(MACS)来完成。

在一些实施例中，对表达抗原结合蛋白(例如CAR)的免疫细胞进行分选的方法中所使用的mAb选自阿仑单抗、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、莫罗单抗(muromonab)-CD3、托西莫单抗(tositumomab)、阿昔单抗(abciximab)、巴利昔单抗(basiliximab)、布伦图昔单抗(brentuximab)、贝多汀(vedotin)、西妥昔单抗(cetuximab)、英利昔单抗(infliximab)、利妥昔单抗、贝伐单抗(bevacizumab)、聚乙二醇化赛妥珠单抗(certolizumab)、达利珠单抗(certolizumab)、依库丽单抗(eculizumab)、依法利珠单抗(efalizumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、那他珠单抗(natalizumab)、奥马珠单抗(omalizumab)、帕利珠单抗(palivizumab)、雷珠单抗(ranibizumab)、托珠单抗(tocilizumab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、维多珠单抗(vedolizumab)、阿达木单抗(adalimumab)、贝利木单抗(belimumab)、康纳单抗(canakinumab)、地诺单抗(denosumab)、戈利木单抗(golimumab)、伊匹单抗(golimumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、帕尼单抗(panitumumab)、QBEND-10和/或优特克单抗(ustekinumab)。在一些实施例中，所述mAb是利妥昔单抗。在另一个实施例中，所述mAb是QBEND-10。

在一些实施例中，当使用上文所描述的用于体外分选表达CAR的免疫细胞的方法时获得的表达CAR的免疫细胞群体包括至少70％、75％、80％、85％、90％、95％的CAR表达性免疫细胞。在一些实施例中，当使用用于体外分选表达CAR的免疫细胞的方法时获得的表达CAR的免疫细胞群体包括至少85％的表达CAR的免疫细胞。

在一些实施例中，当使用上文所描述的用于体外分选表达CAR的免疫细胞的方法时获得的表达CAR的免疫细胞群体与初始(未分选的)细胞群体相比，显示出增强的体外细胞毒性活性。在一些实施例中，所述体外细胞毒性活性增加了10％、20％、30％或50％。在一些实施例中，所述免疫细胞是T细胞。

将施用于接受者的表达CAR的免疫细胞可以由来源群体在体外富集。扩大来源群体的方法可以包含使用密度离心、免疫磁珠纯化、亲和色谱法和荧光活化细胞分选的组合来选择表达如CD34抗原等抗原的细胞。

流式细胞术可以用于对细胞群体内的特定细胞类型进行定量。通常，流式细胞术是用于主要通过光学手段对细胞的组分或结构特征进行定量的方法。由于可以通过定量结构特征来区分不同的细胞类型，流式细胞术和细胞分选可以用于对混合物中不同表型的细胞进行计数和分选。

流式细胞术分析涉及两个主要步骤：1)用一种或多种标记的标志物来标记所选细胞类型，以及2)确定标记的细胞相对于群体中细胞的总数的数量。在一些实施例中，标记细胞类型的方法包含将经标记的抗体与由特定细胞类型表达的标志物结合。抗体可以直接用荧光化合物标记或使用例如识别第一抗体的荧光标记的第二抗体间接标记。

在一些实施例中，用于对表达CAR的T细胞进行分选的方法为磁活化细胞分选(MACS)。磁活化细胞分选(MACS)是一种用于通过使用超顺磁纳米颗粒和柱、根据各种细胞群体的表面抗原(CD分子)来分离各种细胞群的方法。MACS可以用于获得纯的细胞群体。单细胞悬浮液中的细胞可以用微珠磁性标记。将样品施加于由铁磁性球体构成的柱，所述柱覆盖有允许快速和平缓分离细胞的细胞友好型涂层。未经标记的细胞通过而磁标记的细胞保留在柱中。流出物可被收集作为未标记的细胞级分。在洗涤步骤后，将柱从分离器中取出，并且经磁标记的细胞从柱中洗脱。

用于纯化特定细胞群体(如T细胞)的详细方案可以在Basu S等人(2010)中找到。(Basu S，Campbell HM，Dittel BN，Ray A.《通过荧光活化细胞分选(FACS)纯化特定细胞群体(Purification of specific cell population by fluorescence activated cellsorting)》《可视化实验期刊(J.Vis.Exp.)》(41)：1546)。

实例

实例1：CD70 dagger可以防止同种异体排斥并提高CAR T细胞的抗肿瘤功效。

图1展示了CD70 dagger(或CD70 dagger蛋白或CD70结合蛋白)如何保护同种异体CAR T细胞免受同种异体排斥。携带有CD70 dagger的细胞可以识别经活化的同种异体反应性细胞的细胞表面上的CD70。因此，接近CD70 dagger CART细胞的任何经活化的同种异体反应性细胞将被识别并杀伤(图1)。消除同种异体反应性细胞将进而允许CD70 daggerCART细胞持续更久并进行肿瘤细胞杀伤。

实例2：证实针对致敏的同种异体反应性T细胞的CD70 CAR抗排斥功能。

同种异体反应性T细胞被认为是同种异体排斥的主要介质。因此，使用CD70 CART细胞作为靶细胞进行致敏的同种异体反应性T细胞混合的淋巴细胞反应(MLR)，以评估CD70CAR作为潜在的抗排斥dagger(CD70dagger)。本实验中测试的CD70 CAR包含源自呈scFv的形式的抗CD70克隆4F11的CD70结合结构域、CD3ζ信号传导结构域和4-1BB共刺激结构域。简而言之，将来自八个接受者供体的PBMC与经照射的移植物供体T细胞共培养7天，以允许同种异体反应性受体T细胞(“RTC”)的致敏和扩增。然后将致敏的同种异体反应性RTC(效应子细胞)分离并与移植物供体T细胞受体α常数(TRAC)敲除(KO)CD70 CART细胞或与移植物供体T细胞受体α常数(TRAC)敲除(KO)未经转导的T细胞以1∶1的比率共培养48小时(图2A)。通过流式细胞术评估移植物供体细胞的杀伤。未经转导的对照T细胞(NTD)被同种异体反应性RTC有效杀伤，而大部分CD70 CAR T细胞在同种异体反应性RTC的存在下存活(图2B)。CD70CART细胞的存活率与CD70+RTC的减少相关(图2C和2D)，从而证实充当CD70 dagger的CD70CAR表达可导致同种异体反应性细胞的杀伤并改善移植物细胞的持久性。

实例3：测试针对同种异体PBMC的CD70 dagger活性。

为了确定来自实例2的发现是否延长到更生理相关的场景，使用CD70CAR T细胞作为靶细胞进行PBMC MLR。此处，使用多个移植物供体而不是接受者供体来评估CD70 dagger活性。将来自接受者供体的PBMC与由三个不同供体生成的移植物供体TRAC KO CD70 CAR T细胞以1：1的比率共培养6天。通过流式细胞术评估接受者T细胞的杀伤。结果与实例2的发现一致，因为充当CD70 dagger的CD70 CAR T细胞减少了RTC计数和频率(图3A和3B)。除了消除CD70+RTC之外，CD70 CAR T细胞还消除了CD70+同种异体B和NK细胞(图4A和4B)。总之，这些数据证实，CD70dagger可用于减少宿主免疫细胞的同种异体CAR T细胞的同种异体排斥。

实例4：通过LVV转导生成的表达不同CD70 dagger(CD70结合蛋白)的经工程化的T 细胞的检查。

生成了一系列克隆基于4F11的CD70 dagger构建体，其作为第一代CAR(即，无共刺激结构域)或第二代CAR(即，具有共刺激结构域)。另外，测试了具有或不具有基于模拟表位的安全开关的构建体。图5A-C中示出了结果。除非另有说明，否则所有测试的CD70 dagger都含有野生型CD3z信号传导结构域(“z”)和CD8跨膜结构域。在作为第一代CAR的CD70dagger中：QR3z：进一步含有QR3安全开关(包括利妥昔单抗模拟表位R的两部分安全开关(SEQ ID NO：592)；随后是SEQ ID NO：595)；进一步含有QQ安全开关的QQz(SEQ ID NO：596)；Qz：进一步含有Q安全开关(SEQ ID NO：594)；以及QR328TMz：除了QR3安全开关以外，进一步含有CD28跨膜结构域而不是CD8跨膜结构域。作为第二代CAR的所有构建体除了CD8跨膜结构域和CD3z信号传导结构域之外，还含有共刺激4-1BB信号传导结构域：其中“CD70CAR”进一步含有QR3安全开关，并且名称QQbbz、Qbbz和bbz分别进一步含有QQ安全开关、Q安全开关和无安全开关。对所有细胞进行进一步修饰以敲除TRAC基因座。

分离原代T细胞并用表达不同CD70 dagger构建体的慢病毒载体(LVV)转导。用经测试的构建体转导的细胞均成功生产，指定为Qz、z和Qbbz的构建体示出最高的表达水平(图5A)，并且构建体Qz和z具有最低水平的活化标志物表达(图5C)。通常，表达CD70 dagger的细胞与NTD细胞相比表现出类似的CD4：CD8 T细胞比率(图5B)和分化状态(数据未示出)。

为了评估CD70 dagger构建体的活性，用选定的表达CD70 dagger的细胞进行同种异体反应性T细胞MLR。对于同种异体反应性T细胞MLR和MLTC，在圆底96孔板中补充有10％FBS和20U/mL重组人IL-2的200uL RPMI培养基中将致敏的同种异体反应性T细胞与移植物T细胞或移植物T细胞和肿瘤靶标的组合以指定比率共培养。如果MLR共培养超过4天，则在第4天替换一半培养基。然后每2-3天更换培养基。在指定的时间点通过流式细胞术分析细胞。对于PBMC MLR，在圆底96孔板中补充有10％FBS和20U/mL重组人IL-2的200uL RPMI培养基中将宿主PBMC与移植物T细胞以10∶1的比率共培养。为了对同种异体反应性T细胞进行致敏，以30Gy照射未经编辑的移植物供体T细胞并且在补充有10％FBS和20U/mL重组人IL-2、IL-7和IL-15的RPMI中与宿主PBMC以1∶1的比率共培养。在共培养的第4天，用补充有10％FBS的新鲜RPMI替换一半培养基。在第7天，如制造商方案所述，使用EasySep^TM人T细胞分离试剂盒(干细胞技术公司(STEMCELL Technologies))分离T细胞。

如图6A所示，表达“CD70 CAR”dagger的T细胞抵抗同种异体反应性T细胞介导的排斥，而NTD T细胞则完成排斥。与NTD T细胞相比，表达CD70dg-Qbbz、CD70dg-Qz和CD70dg-z的T细胞示出不同程度的改善的存活率(图6A)。接下来，测试了CD70 dagger在PBMC MLR中的活性，其中NK细胞同种异体反应性可有助于排斥，并且宿主T细胞的致敏动力学响应于同种异体T细胞而自然发生。在PBMC MLR测定中，与NTD对照细胞相比，所有测试的CD70dagger都显著增加了移植物T细胞的存活率，所述对照细胞在第9天时被消除(图6B)。在相同的PBMC MLR测定中，CD70 daggerT细胞显著降低了HTC和宿主NK细胞的绝对数量，这是有效dagger活性的证据。参见图6C-D。与之相反，当与NTDT细胞共培养时HTC和宿主NK细胞扩增。

还测试了在CD3z信号传导结构域中含有修饰的另外的构建体，包含含有命名为1XX和XX3的ITAM变体的CD3z结构域(分别为SEQ ID NO：585和586)。参见Feucht等人《自然医学(Nat Med.)》2019，25(1)：82-88。进一步修饰细胞以敲除TRAC基因座。在与同种异体PBMC一起温育的MLR测定中测试CD70 dagger活性。与表达野生型CD3z的移植物细胞相比，表达CD3z变体的移植物细胞扩增相当或更佳(图6E)，并且所有移植物细胞展示出对宿主T细胞相当的杀伤水平(图6F)。因此，CD70 dagger活性不被CD3z胞内结构域中的修饰显著影响。

实例5：测试表达通过位点特异性整合生成的不同CD70结合蛋白(CD70dagger)的 经工程化的免疫细胞的CD70 dagger活性。

接下来，生成了表达各种CD70 dagger的细胞，其中通过位点特异性整合(SSI)将构建体引入T细胞中。在此实验中，通过同源重组将CD70 dagger构建体引入到CD52基因座中。在此实验中测试了另外的构建体：CD28HTMz：含有CD28铰链和跨膜结构域以及CD3z信号传导结构域；CD8H-CD28TM-z：含有CD8铰链和CH28跨膜结构域以及CD3z结构域；bbz是指除CD3信号传导结构域之外的4-1BB信号传导结构域。

与第二代变体相比，表达作为第一代CAR的CD70 dagger构建体的SSI衍生的T细胞具有更高水平的表面表达和更低水平的活化标志物(图7A-C)。与表达由LVV或NTD T细胞对照衍生的CD70 CAR的T细胞相比，在SSI衍生的CD70 dagger T细胞中观察到CD4：CD8比率的适度增加(图7D)。然后在PBMC MLR测定中测试选定的CD70 dagger细胞。除了CD70dg-QR3z之外，所有测试的CD70 dagger T细胞在第13天扩增或持续。参见图7E。CD70dg-QR3z T细胞比NTD T细胞对照持续更久，但所述细胞最终在第13天被排斥。所有CD70 dagger细胞都示出对宿主T细胞和宿主NK细胞的活性(图7F-G)。CD70dg-z在所有测试的CD70 dagger构建体中扩增到最高程度，并且示出与表达CD70 CAR的细胞相当的dagger活性。

实例6：含有不同CD70结合结构域的CD70 dagger。

接下来，除了克隆4F11之外，还测试了含有源自抗CD70抗体的CD70结合结构域的CD70 dagger。呈scFv的形式的克隆4F11、8C8和8F8的结合亲和力在彼此的10倍内。参见WO2019/152742。

当在第二代CAR中表达为scFv时，进一步分析抗CD70抗体的结合性质。将表达荧光素酶的ACHN细胞用CARLVV转导，并以2.5μg/mL用His标记的Fab，随后用以1：50稀释的抗His抗体进行染色。在掩蔽测定中分析不同抗CD70抗体的结合位点(即，表位)。简言之，在每个CD70 CAR的胞外结构域中表达的scFv与ACHN细胞的表面上的抗原CD70蛋白结合。结合掩盖细胞表面上的CD70蛋白的表位，并阻断与同一表位结合的其它抗CD70抗体(Fab)结合，但允许与不同表位结合的其它抗CD70 Fab的结合。结果示出，表达8F8 scFv的CAR阻断了4F11Fab与细胞的结合，并且反之亦然(数据未示出)。因此，8F8和4F11竞争与CD70结合，并且因此可能与相同或重叠的表位结合。另一方面，表达8C8 scFv的CAR不阻断8F8或4F11 Fab与细胞的结合(数据未示出)。因此，克隆8C8不与4F11或8F8竞争与CD70结合，而可能与4F11和8F8结合不同的表位。

通过蛋白质结构和诱变分析确认每个克隆的结合位点。将CD70三聚体复合物的暴露表面上的二十八个残基单独突变以产生一组CD70三聚体突变体。将抗CD70嵌合抗原受体(CAR)的结合区重新格式化为抗体片段，并通过生物传感器分析评估与各种三聚体突变体的结合。在Biacore T200 SPR仪器(马萨诸塞州马尔堡的思拓凡公司(Cytiva，Marlborough，MA))上确定CD70抗原单点突变上清液样品的SPR分析。所有CD70抗原单点突变样品通过与BirA共表达进行位点特异性生物素化，随后在SPR分析之前透析和过滤。所有这些经生物素化的CD70样品均在Biacore的CAP表面上作为纯上清液捕获。然后用20μM胺-PEG2-生物素(APB)阻断所有流动细胞。将缓冲液和100nM所有经测试的抗CD70 Fab作为分析物注射2分钟，并以30微升/分钟监测解离15分钟。根据制造商方案再生表面。使用三个独立的分析物稀释系列和捕获的样品一式三份地测量所有相互作用。所有传感图都与来自缓冲液分析物注射的数据重复引用(Myszka，1999)。使用Biacore T200评估软件(2.0版本)将数据拟合到具有质量传输的1：1Langmuir结合模型。

鉴定对于每个CAR的结合重要的残基，并将其映射到CD70三聚体复合物的结构上，用于在膜远侧的CAR结合或用于在膜近侧的CAR结合。图8A-C中的结构图指示对于与CD70三聚体复合物结合重要的残基，即分别是克隆8F8、4F11和8C8的结合位点或表位。诱变研究证实克隆4F11和8F8与CD70蛋白的膜远侧位点结合，并且克隆8C8与CD70三聚体复合物的膜近侧位点结合。

接下来，生成含有呈scFv的形式的抗CD70抗体克隆8C8、8F8和4F11的CD70 dagger构建体。在T细胞MLR测定中测试通过LVV转导表达不同CD70 dagger的T细胞。所有三个CD70dagger都含有CD3ζ胞内信号传导结构域和4-1BB共刺激结构域。如图8D-E中所示，表达CD70dagger的T细胞都在MLR测定中扩增，但表现出不同程度的持久性。所有三种CD70dagger构建体都抑制宿主T细胞增殖，其中与CD70的膜远侧位点结合的4F11和8F8衍生的CD70dagger比8C8衍生的CD70 dagger更有效。

结果显示，通过LVV转导或位点特异性整合生成的具有与不同表位结合的不同CD70结合结构域和/或不同胞内信号传导结构域的所有经测试的CD70 dagger构建体通过减少宿主T细胞和/或NK细胞而表现出dagger活性。不同构建体表现出的不同程度的扩增和dagger活性表明，可以微调CD70dagger活性以实现所需水平的淋巴细胞清除，以用于例如过继细胞疗法或CAR T细胞疗法。

实例7：CD70 dagger与对非CD70靶标具有特异性的CAR结合表达。

接下来，检查了当与对非CD70肿瘤靶标具有特异性的CAR结合表达时的CD70dagger活性。构建包括抗CD70克隆4F11 scFv和抗CD19克隆4G7 scFv的串联CAR(US10,874,693)。在T细胞MLR或PBMC MLR测定或MLTC测定中测试表达串联CAR的CART细胞。在MLR测定中测量表达CD70 dagger的CART细胞的扩增以及宿主T细胞和/或NK细胞的抑制。

检查dagger是否会影响CD19-CD70串联CAR T细胞对表达CD19的靶细胞的细胞毒性。图9中的结果显示，CD19-CD70串联CAR T细胞表现出对CD19靶细胞系Raii的强劲细胞毒性，如通过在效应子细胞和荧光素酶标记的靶细胞共培养后48小时测量残余荧光素酶活性所确定的。在本实验中，由于在Raji细胞上存在CD70，没有CDl9结合结构域的单独的dagger细胞也表现出细胞毒性活性。结果表明，串联CAR中CD70结合结构域的存在对CDl9 CAR的细胞毒性活性没有负面影响。当CD70 dagger在单独的T细胞上表达时，观察到类似的结果，并且在长期杀伤测定中，单独的CD70dagger细胞的存在不会不利地影响对另一种非CD70靶标具有特异性的CAR T细胞的细胞毒性(数据未示出)。本实验中的数据显示，CD70 dagger无论是在单独的dagger细胞上表达还是在相同的CAR T细胞上表达(例如，作为串联CAR的一部分)，都不会对CAR对其特异性肿瘤抗原的细胞毒性活性产生负面影响。

序列表

<110> 同种异体治疗公司（ALLOGENE THERAPEUTICS, INC.）

<120> 对宿主CD70+同种异体反应性细胞进行选择性靶向以延长同种

异体CAR T细胞持久性

<130> AT-049/03

<150> 63/351,223

<151> 2022-06-10

<150> 63/210,979

<151> 2021-06-15

<160> 617

<170> 序列对比软件套件1.175

<210> 1

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-31H1

<400> 1

Asp Ile Val Met Thr Gln Asn Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Thr Gln Phe Pro Leu Thr Ile Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 2

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-31H1

<400> 2

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ile Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Ser Ser Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 3

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-63B2

<400> 3

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Thr Gln Phe Pro Leu Thr Ile Gly Gly Gly Ser Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 4

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-63B2

<400> 4

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Phe

65 70 75 80

Met Glu Leu Ile Ser Leu Arg Ser Glu Tyr Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Ser Ser Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 5

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-40E3

<400> 5

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 6

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-40E3

<400> 6

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Ile Arg Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 7

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-42C3

<400> 7

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser

20 25 30

Asp Glu Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Leu Arg Arg Leu Ile Tyr Gln Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Met Gln Gly

85 90 95

Thr Tyr Trp Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 8

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-42C3

<400> 8

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Ser

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asn Ile Lys Arg Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gln Thr Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 9

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-45F11

<400> 9

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Met Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Gly Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ile Asn Trp Pro His

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 10

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-45F11

<400> 10

Gln Val Gln Leu Arg Gly Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Asp Ser Ile Ser Val Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Val Tyr Ser Ser Gly Asn Ile Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Glu

50 55 60

Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Ser Arg Phe Ser Leu

65 70 75 80

Asn Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Leu Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 11

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-64F9

<400> 11

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ile Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Ala Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Phe Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 12

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-64F9

<400> 12

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Val Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ile Ile Ser Gly Val Ala Phe Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp His Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Lys Val Asp Gly Glu Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 13

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-72C2

<400> 13

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Ile Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ser Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Trp Pro Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 14

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-72C2

<400> 14

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ile Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Ser

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gln Trp Glu Leu Phe Phe Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Pro

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 15

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-2F10

<400> 15

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 16

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-2F10

<400> 16

Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Tyr Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser His Ile Ser Ile Arg Ser Ser Thr Ile Tyr Phe Ala Asp Ser Ala

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Gly Trp Tyr Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 17

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-4F11

<400> 17

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Met Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Leu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Phe Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Asn

100 105

<210> 18

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-4F11

<400> 18

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala

20 25 30

Arg Met Gly Val Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Thr Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ile Arg Asp Tyr Tyr Asp Ile Ser Ser Tyr Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Ser

115 120

<210> 19

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-10H10

<400> 19

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Phe Ser Phe Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 20

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-10H10

<400> 20

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn His

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Arg Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp His Ala Gln Trp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 21

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-17G6

<400> 21

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Tyr Asn Asn Lys Asn Tyr Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Asn Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 22

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-17G6

<400> 22

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Val Asn Trp Gly Trp Arg Leu Tyr Trp His Phe Asp

100 105 110

Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 23

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-65E11

<400> 23

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 24

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-65E11

<400> 24

Glu Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser His Ser Ser Ile Ser Arg Gly Asn Ile Tyr Phe Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Gly Trp Tyr Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 25

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P02B10

<400> 25

Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro

1 5 10 15

Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly

20 25 30

Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys

35 40 45

Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg

50 55 60

Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp

85 90 95

Ser Leu Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 26

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P02B10

<400> 26

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Phe Ile Ser Gly Thr Trp Tyr Pro Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 27

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P07D03

<400> 27

Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro

1 5 10 15

Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly

20 25 30

Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys

35 40 45

Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg

50 55 60

Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Gly

85 90 95

Ser Leu Ser Ala Val Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 28

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P07D03

<400> 28

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Ile Tyr Pro Asp Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Ser Thr Val Asp Tyr Pro Gly Tyr Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 29

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P08A02

<400> 29

Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro

1 5 10 15

Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly

20 25 30

Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys

35 40 45

Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg

50 55 60

Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp

85 90 95

Ser Leu Gly Ser Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 30

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P08A02

<400> 30

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Asp Gly Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Ile Thr Ser Trp Tyr Tyr Gly Glu Pro Ala Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 31

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P08E02

<400> 31

Glu Leu Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser

1 5 10 15

Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser

20 25 30

Arg Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ile Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr

85 90 95

Thr Met Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 32

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P08E02

<400> 32

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Leu Ser Gln Ala Met Thr Gly Phe Gly Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 33

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P08F08

<400> 33

Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro

1 5 10 15

Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly

20 25 30

Ser Asn Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys

35 40 45

Leu Leu Ile Tyr Gly Asp Tyr Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg

50 55 60

Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Arg Asp Asp

85 90 95

Ser Leu Ser Gly Ser Val Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val

100 105 110

Leu

<210> 34

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P08F08

<400> 34

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile His Pro Asp Asp Ser Asp Thr Lys Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Ser Tyr Leu Arg Gly Leu Trp Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 35

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P08G02

<400> 35

Glu Leu Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser

1 5 10 15

Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Tyr

20 25 30

Asp Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr

85 90 95

Pro Leu Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 36

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P08G02

<400> 36

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Pro Ser Ser

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Asp Thr Ser His Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Ser Tyr Phe Asp Arg Gly Thr Gly Tyr Ser Ser Trp Trp

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 37

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P12B09

<400> 37

Glu Leu Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser

1 5 10 15

Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Gly

20 25 30

Arg Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Arg Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile His Gly Ala Thr Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr

85 90 95

Thr Ser Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 38

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P12B09

<400> 38

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Gly Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Asp Ile Ser Asp Ser Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 39

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P12F02

<400> 39

Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro

1 5 10 15

Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly

20 25 30

Arg Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys

35 40 45

Leu Leu Ile Tyr Arg Thr Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg

50 55 60

Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp

85 90 95

Ser Leu Ser Gly Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 40

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P12F02

<400> 40

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Gly Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Val Arg Ala Gly Ile Asp Pro Thr Ala Ser Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 41

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P12G07

<400> 41

Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro

1 5 10 15

Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly

20 25 30

Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys

35 40 45

Pro Leu Ile Tyr Met Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg

50 55 60

Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp

85 90 95

Ser Leu Ser Ala Val Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 42

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P12G07

<400> 42

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Phe

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Arg Asp Ile Gly Leu Gly Trp Tyr Ser Tyr Tyr Leu Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 43

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P13F04

<400> 43

Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro

1 5 10 15

Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly

20 25 30

Thr Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys

35 40 45

Leu Leu Ile Tyr Arg Ser Ser Arg Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg

50 55 60

Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly

85 90 95

Ser Leu Ser Gly His Trp Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val

100 105 110

Leu

<210> 44

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P13F04

<400> 44

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Gly Trp Asp Asp Ser Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 45

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P15D02

<400> 45

Glu Leu Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser

1 5 10 15

Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp

20 25 30

Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr

85 90 95

Thr Ala Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 46

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P15D02

<400> 46

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Tyr Pro Gly Thr Ser Glu Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gly Leu Ser Ala Ser Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Gln Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 47

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-P16C05

<400> 47

Glu Leu Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser

1 5 10 15

Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly

20 25 30

Gln Ser Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr

85 90 95

Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 48

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-P16C05

<400> 48

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Met Ile Ser Pro Gly Gly Ser Thr Thr Ile Tyr Arg Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Met Tyr Thr Gly Gly Tyr Gly Gly Ser Trp Tyr Phe Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 49

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:31H1 Kabat

<400> 49

Ser Tyr Gly Phe Ser

1 5

<210> 50

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:31H1 Chothia

<400> 50

Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 51

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:31H1延长

<400> 51

Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Phe Ser

1 5 10

<210> 52

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:31H1 Kabat

<400> 52

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 53

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:31H1 Chothia

<400> 53

Ile Pro Ile Phe Gly Ser

1 5

<210> 54

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:31H1

<400> 54

Gly Gly Ser Ser Ser Pro Phe Ala Tyr

1 5

<210> 55

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:63B2 Kabat

<400> 55

Ser Tyr Gly Phe Ser

1 5

<210> 56

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:63B2 Chothia

<400> 56

Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 57

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:63B2延长

<400> 57

Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Phe Ser

1 5 10

<210> 58

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:63B2 Kabat

<400> 58

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 59

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:63B2 Chothia

<400> 59

Ile Pro Ile Phe Gly Thr

1 5

<210> 60

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:63B2

<400> 60

Gly Gly Ser Ser Ser Pro Phe Ala Tyr

1 5

<210> 61

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:40000 kabat

<400> 61

Ser Tyr Tyr Trp Asn

1 5

<210> 62

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:40000 Chothia

<400> 62

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210> 63

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:40000延长

<400> 63

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Asn

1 5 10

<210> 64

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:40E3 Kabat

<400> 64

Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 65

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:40E3 Chothia

<400> 65

Tyr Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 66

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:40E3

<400> 66

Asp Ile Arg Thr Trp

1 5

<210> 67

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:42C3 Kabat

<400> 67

Asn Ser Trp Met Ser

1 5

<210> 68

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:42C3 Chothia

<400> 68

Gly Phe Thr Phe Arg Asn Ser

1 5

<210> 69

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:42C3延长

<400> 69

Gly Phe Thr Phe Arg Asn Ser Trp Met Ser

1 5 10

<210> 70

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:42C3 Kabat

<400> 70

Asn Ile Lys Arg Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 71

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:42C3 Chothia

<400> 71

Lys Arg Asp Gly Ser Glu

1 5

<210> 72

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:42C3

<400> 72

Asp Gln Thr Gly Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 73

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:45F11 Kabat

<400> 73

Val Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 74

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:45F11 Chothia

<400> 74

Asp Asp Ser Ile Ser Val Tyr

1 5

<210> 75

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:45F11延长

<400> 75

Asp Asp Ser Ile Ser Val Tyr Tyr Trp Ser

1 5 10

<210> 76

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:45F11 Kabat

<400> 76

Val Tyr Ser Ser Gly Asn Ile Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Glu Ser

1 5 10 15

<210> 77

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:45F11 Chothia

<400> 77

Tyr Ser Ser Gly Asn

1 5

<210> 78

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:45F11

<400> 78

Gly Leu Asp Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 79

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:64F9 Kabat

<400> 79

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 80

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:64F9 Chothia

<400> 80

Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 81

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:64F9延长

<400> 81

Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 82

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:64F9 Kabat

<400> 82

Arg Val Tyr Ser Ser Gly Asn Ile Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Glu Ser

1 5 10 15

<210> 83

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:64F9 Chothia

<400> 83

Tyr Ser Ser Gly Asn

1 5

<210> 84

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:64F9

<400> 84

Gly Leu Asp Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 85

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:72C2 Kabat

<400> 85

Thr Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 86

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:72C2 Chothia

<400> 86

Gly Gly Thr Phe Ile Thr Tyr

1 5

<210> 87

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:72C2延长

<400> 87

Gly Gly Thr Phe Ile Thr Tyr Ala Ile Ser

1 5 10

<210> 88

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:72C2 Kabat

<400> 88

Gly Ile Ile Pro Phe Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 89

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:72C2 Chothia

<400> 89

Ile Pro Phe Phe Gly Thr

1 5

<210> 90

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:72C2

<400> 90

Trp Glu Leu Phe Phe Phe Asp Phe

1 5

<210> 91

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:2F10 Kabat

<400> 91

Tyr Tyr Ser Met Asn

1 5

<210> 92

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:2F10 Chothia

<400> 92

Gly Phe Thr Phe Thr Tyr Tyr

1 5

<210> 93

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:2F10延长

<400> 93

Gly Phe Thr Phe Thr Tyr Tyr Ser Met Asn

1 5 10

<210> 94

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:2F10 Kabat

<400> 94

His Ile Ser Ile Arg Ser Ser Thr Ile Tyr Phe Ala Asp Ser Ala Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 95

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:2F10 Chothia

<400> 95

Ser Ile Arg Ser Ser Thr

1 5

<210> 96

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:2F10

<400> 96

Gly Ser Gly Trp Tyr Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 97

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:4F11 Kabat

<400> 97

Asn Ala Arg Met Gly Val Thr

1 5

<210> 98

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:4F11 Chothia

<400> 98

Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala Arg Met

1 5

<210> 99

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:4F11延长

<400> 99

Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala Arg Met Gly Val Thr

1 5 10

<210> 100

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:4F11 Kabat

<400> 100

His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 101

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:4F11 Chothia

<400> 101

Phe Ser Asn Asp Glu

1 5

<210> 102

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:4F11

<400> 102

Ile Arg Asp Tyr Tyr Asp Ile Ser Ser Tyr Tyr Asp Tyr

1 5 10

<210> 103

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:10H10 Kabat

<400> 103

Asn His Asn Ile His

1 5

<210> 104

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:10H10 Chothia

<400> 104

Gly Phe Thr Phe Ser Asn His

1 5

<210> 105

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:10H10延长

<400> 105

Gly Phe Thr Phe Ser Asn His Asn Ile His

1 5 10

<210> 106

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:10H10 Kabat

<400> 106

Tyr Ile Ser Arg Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 107

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:10H10 Chothia

<400> 107

Ser Arg Ser Ser Ser Thr

1 5

<210> 108

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:10H10

<400> 108

Asp His Ala Gln Trp Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 109

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:17G6 Kabat

<400> 109

Ser Tyr Trp Met Ser

1 5

<210> 110

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:17G6 Chothia

<400> 110

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 111

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:17G6延长

<400> 111

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met Ser

1 5 10

<210> 112

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:17G6 Kabat

<400> 112

Ser Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 113

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:17G6 Chothia

<400> 113

Lys Gln Asp Gly Ser Glu

1 5

<210> 114

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:17G6

<400> 114

Glu Gly Val Asn Trp Gly Trp Arg Leu Tyr Trp His Phe Asp Leu

1 5 10 15

<210> 115

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:6.5E+12 kabat

<400> 115

Ser Tyr Ser Met Asn

1 5

<210> 116

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:6.5E+12 Chothia

<400> 116

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 117

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:6.5E+12延长

<400> 117

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn

1 5 10

<210> 118

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:65E11 Kabat

<400> 118

His Ser Ser Ile Ser Arg Gly Asn Ile Tyr Phe Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 119

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:65E11 Chothia

<400> 119

Ser Ile Ser Arg Gly Asn

1 5

<210> 120

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:65E11

<400> 120

Gly Ser Gly Trp Tyr Gly Asp Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 121

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P02B10 Kabat

<400> 121

Asn Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 122

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P02B10 Chothia

<400> 122

Gly Phe Ala Phe Ser Asn Tyr

1 5

<210> 123

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P02B10延长

<400> 123

Gly Phe Ala Phe Ser Asn Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 124

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P02B10 Kabat

<400> 124

Ala Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 125

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P02B10 Chothia

<400> 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 126

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P02B10

<400> 126

Asp Phe Ile Ser Gly Thr Trp Tyr Pro Asp Tyr

1 5 10

<210> 127

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P07D03 Kabat

<400> 127

Ser Tyr Trp Ile Gly

1 5

<210> 128

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P07D03 Chothia

<400> 128

Gly Tyr Arg Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 129

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P07D03延长

<400> 129

Gly Tyr Arg Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 130

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P07D03 Kabat

<400> 130

Ser Ile Tyr Pro Asp Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 131

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P07D03 Chothia

<400> 131

Tyr Pro Asp Asp Ser Asp

1 5

<210> 132

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P07D03

<400> 132

Ser Thr Val Asp Tyr Pro Gly Tyr Ser Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 133

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08A02 Kabat

<400> 133

Asn Tyr Trp Ile Ala

1 5

<210> 134

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08A02 Chothia

<400> 134

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

1 5

<210> 135

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08A02延长

<400> 135

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Trp Ile Ala

1 5 10

<210> 136

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P08A02 Kabat

<400> 136

Ile Ile Tyr Pro Asp Gly Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 137

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P08A02 Chothia

<400> 137

Tyr Pro Asp Gly Ser Asp

1 5

<210> 138

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P08A02

<400> 138

Asp Ile Thr Ser Trp Tyr Tyr Gly Glu Pro Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 139

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08E02 Kabat

<400> 139

Ser Ser Trp Ile Gly

1 5

<210> 140

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08E02 Chothia

<400> 140

Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser

1 5

<210> 141

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08E02延长

<400> 141

Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 142

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P08E02 Kabat

<400> 142

Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 143

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P08E02 Chothia

<400> 143

Tyr Pro Gly Asp Ser Asp

1 5

<210> 144

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P08E02

<400> 144

Gly Leu Ser Gln Ala Met Thr Gly Phe Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 145

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08F08 Kabat

<400> 145

Ser Tyr Trp Ile Gly

1 5

<210> 146

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08F08 Chothia

<400> 146

Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 147

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08F08延长

<400> 147

Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 148

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P08F08 Kabat

<400> 148

Ile Ile His Pro Asp Asp Ser Asp Thr Lys Tyr Ser Pro Ser Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 149

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P08F08 Chothia

<400> 149

His Pro Asp Asp Ser Asp

1 5

<210> 150

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P08F08

<400> 150

Ser Tyr Leu Arg Gly Leu Trp Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 151

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08G02 Kabat

<400> 151

Ser Ser Trp Ile Gly

1 5

<210> 152

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08G02 Chothia

<400> 152

Gly Tyr Thr Phe Pro Ser Ser

1 5

<210> 153

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P08G02延长

<400> 153

Gly Tyr Thr Phe Pro Ser Ser Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 154

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P08G02 Kabat

<400> 154

Ile Ile Tyr Pro Asp Thr Ser His Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln

1 5 10 15

<210> 155

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P08G02 Chothia

<400> 155

Tyr Pro Asp Thr Ser His

1 5

<210> 156

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P08G02

<400> 156

Ala Ser Tyr Phe Asp Arg Gly Thr Gly Tyr Ser Ser Trp Trp Met Asp

1 5 10 15

Val

<210> 157

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P12B09 Kabat

<400> 157

Gln Tyr Ser Met Ser

1 5

<210> 158

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P12B09 Chothia

<400> 158

Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr

1 5

<210> 159

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P12B09延长

<400> 159

Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr Ser Met Ser

1 5 10

<210> 160

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P12B09 Kabat

<400> 160

Ala Ile Ser Gly Gly Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 161

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P12B09 Chothia

<400> 161

Ser Gly Gly Gly Val Ser

1 5

<210> 162

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P12B09

<400> 162

Asp Ile Ser Asp Ser Gly Gly Ser His Trp Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 163

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P12F02 Kabat

<400> 163

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 164

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P12F02 Chothia

<400> 164

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 165

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P12F02延长

<400> 165

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 166

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P12F02 Kabat

<400> 166

Thr Ile Ser Gly Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 167

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P12F02 Chothia

<400> 167

Ser Gly Thr Gly Gly Thr

1 5

<210> 168

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P12F02

<400> 168

Val Arg Ala Gly Ile Asp Pro Thr Ala Ser Asp Val

1 5 10

<210> 169

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P12G07 Kabat

<400> 169

Asn Phe Ala Met Ser

1 5

<210> 170

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P12G07 Chothia

<400> 170

Gly Phe Thr Phe Asn Asn Phe

1 5

<210> 171

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P12G07延长

<400> 171

Gly Phe Thr Phe Asn Asn Phe Ala Met Ser

1 5 10

<210> 172

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P12G07 Kabat

<400> 172

Gly Ile Ser Gly Ser Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 173

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P12G07 Chothia

<400> 173

Ser Gly Ser Gly Asp Asn

1 5

<210> 174

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P12G07

<400> 174

Asp Arg Asp Ile Gly Leu Gly Trp Tyr Ser Tyr Tyr Leu Asp Val

1 5 10 15

<210> 175

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P13F04 Kabat

<400> 175

Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 176

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P13F04 Chothia

<400> 176

Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 177

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P13F04延长

<400> 177

Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5 10

<210> 178

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P13F04 Kabat

<400> 178

Glu Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 179

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P13F04 Chothia

<400> 179

Ile Pro Ile Phe Gly Thr

1 5

<210> 180

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P13F04

<400> 180

Ala Gly Trp Asp Asp Ser Trp Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 181

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P15D02 Kabat

<400> 181

Ser Tyr Trp Ile Gly

1 5

<210> 182

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P15D02 Chothia

<400> 182

Gly Tyr Ser Phe Ala Ser Tyr

1 5

<210> 183

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P15D02延长

<400> 183

Gly Tyr Ser Phe Ala Ser Tyr Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 184

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P15D02 Kabat

<400> 184

Val Ile Tyr Pro Gly Thr Ser Glu Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 185

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P15D02 Chothia

<400> 185

Tyr Pro Gly Thr Ser Glu

1 5

<210> 186

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P15D02

<400> 186

Gly Leu Ser Ala Ser Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Gln Tyr

1 5 10

<210> 187

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P16C05 Kabat

<400> 187

Asp Tyr Trp Ile Gly

1 5

<210> 188

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P16C05 Chothia

<400> 188

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

1 5

<210> 189

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:P16C05延长

<400> 189

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 190

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P16C05 Kabat

<400> 190

Met Ile Ser Pro Gly Gly Ser Thr Thr Ile Tyr Arg Pro Ser Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 191

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:P16C05 Chothia

<400> 191

Ser Pro Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 192

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:P16C05

<400> 192

Met Tyr Thr Gly Gly Tyr Gly Gly Ser Trp Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 193

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：31H1 CDRL1

<400> 193

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser

1 5 10 15

<210> 194

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：31H1 CDRL2

<400> 194

Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 195

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：31H1 CDRL3

<400> 195

Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 196

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：63B2 CDRL1

<400> 196

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser

1 5 10 15

<210> 197

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：63B2 CDRL2

<400> 197

Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 198

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：63B2 CDRL3

<400> 198

Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 199

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：40E3 CDRL1

<400> 199

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 200

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：40E3 CDRL2

<400> 200

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 201

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：40E3 CDRL3

<400> 201

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 202

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：42C3 CDRL1

<400> 202

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asp Glu Asn Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 203

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：42C3 CDRL2

<400> 203

Gln Val Ser Asn Arg Asp Ser

1 5

<210> 204

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：42C3 CDRL3

<400> 204

Met Gln Gly Thr Tyr Trp Pro Pro Thr

1 5

<210> 205

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：45F11 CDRL1

<400> 205

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Leu Ala

1 5 10

<210> 206

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：45F11 CDRL2

<400> 206

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 207

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：45F11 CDRL3

<400> 207

Gln Gln Tyr Ile Asn Trp Pro His

1 5

<210> 208

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：64F9 CDRL1

<400> 208

Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 209

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：64F9 CDRL2

<400> 209

Gly Ala Ser Asn Leu Glu Thr

1 5

<210> 210

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：64F9 CDRL3

<400> 210

Gln Gln Tyr Asp Asn Phe Pro Ile Thr

1 5

<210> 211

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：72C2 CDRL1

<400> 211

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 212

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：72C2 CDRL2

<400> 212

Ser Ala Ser Thr Arg Ala Ser

1 5

<210> 213

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：72C2 CDRL3

<400> 213

Gln Gln Tyr Asp Asn Trp Pro Pro Leu Thr

1 5 10

<210> 214

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：2F10 CDRL1

<400> 214

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 215

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：2F10 CDRL2

<400> 215

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 216

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：2F10 CDRL3

<400> 216

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu Thr

1 5

<210> 217

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：4F11 CDRL1

<400> 217

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 218

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：4F11 CDRL2

<400> 218

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 219

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：4F11 CDRL3

<400> 219

Leu Gln Leu Asn Ser Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 220

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：10H10 CDRL1

<400> 220

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 221

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：10H10 CDRL2

<400> 221

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 222

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：10H10 CDRL3

<400> 222

Gln Gln Ala Phe Ser Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 223

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：17G6 CDRL1

<400> 223

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Tyr Asn Asn Lys Asn Tyr Val

1 5 10 15

Ala

<210> 224

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：17G6 CDRL2

<400> 224

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 225

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：17G6 CDRL3

<400> 225

Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr

1 5

<210> 226

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：65E11 CDRL1

<400> 226

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 227

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：65E11 CDRL2

<400> 227

Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 228

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：65E11 CDRL3

<400> 228

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu Thr

1 5

<210> 229

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P02B10 CDRL1

<400> 229

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr

1 5 10

<210> 230

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P02B10 CDRL2

<400> 230

Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 231

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P02B10 CDRL3

<400> 231

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val

1 5 10

<210> 232

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P07D03 CDRL1

<400> 232

Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr

1 5 10

<210> 233

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P07D03 CDRL2

<400> 233

Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 234

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P07D03 CDRL3

<400> 234

Ala Ser Trp Asp Gly Ser Leu Ser Ala Val Val

1 5 10

<210> 235

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08A02 CDRL1

<400> 235

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr

1 5 10

<210> 236

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08A02 CDRL2

<400> 236

Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 237

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08A02 CDRL3

<400> 237

Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Gly Ser Pro Val

1 5 10

<210> 238

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08E02 CDRL1

<400> 238

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 239

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08E02 CDRL2

<400> 239

Ala Ala Ser Ile Leu Gln Thr

1 5

<210> 240

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08E02 CDRL3

<400> 240

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Thr Met Trp Thr

1 5 10

<210> 241

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08F08 CDRL1

<400> 241

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Asn

1 5 10

<210> 242

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08F08 CDRL2

<400> 242

Gly Asp Tyr Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 243

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08F08 CDRL3

<400> 243

Ala Thr Arg Asp Asp Ser Leu Ser Gly Ser Val Val

1 5 10

<210> 244

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08G02 CDRL1

<400> 244

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Asp Tyr Leu His

1 5 10

<210> 245

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08G02 CDRL2

<400> 245

Asp Ala Ser Asn Leu Gln Ser

1 5

<210> 246

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P08G02 CDRL3

<400> 246

Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Leu Phe Thr

1 5 10

<210> 247

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P12B09 CDRL1

<400> 247

Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Gly Arg Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 248

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P12B09 CDRL2

<400> 248

Gly Ala Thr Ser Leu Ala Ser

1 5

<210> 249

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P12B09 CDRL3

<400> 249

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Thr Ser Pro Thr

1 5 10

<210> 250

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P12F02 CDRL1

<400> 250

Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Arg Asn Tyr Val Tyr

1 5 10

<210> 251

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P12F02 CDRL2

<400> 251

Arg Thr Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 252

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P12F02 CDRL3

<400> 252

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Arg Val

1 5 10

<210> 253

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P12G07 CDRL1

<400> 253

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr

1 5 10

<210> 254

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P12G07 CDRL2

<400> 254

Met Asn Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 255

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P12G07 CDRL3

<400> 255

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Ala Val Val

1 5 10

<210> 256

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P13F04 CDRL1

<400> 256

Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Gly Thr Asn Tyr Val Ser

1 5 10

<210> 257

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P13F04 CDRL2

<400> 257

Arg Ser Ser Arg Arg Pro Ser

1 5

<210> 258

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P13F04 CDRL3

<400> 258

Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu Ser Gly His Trp Val

1 5 10

<210> 259

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P15D02 CDRL1

<400> 259

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp Thr Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 260

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P15D02 CDRL2

<400> 260

Ser Ala Ser Ser Leu His Ser

1 5

<210> 261

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P15D02 CDRL3

<400> 261

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Thr Ala Trp Thr

1 5 10

<210> 262

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P16C05 CDRL1

<400> 262

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gln Ser Leu Asn

1 5 10

<210> 263

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P16C05 CDRL2

<400> 263

Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 264

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：P16C05 CDRL3

<400> 264

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr

1 5

<210> 265

<211> 225

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ζ连接的胞质结构域

<400> 265

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln

115 120 125

Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu

130 135 140

Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly

145 150 155 160

Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln

165 170 175

Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu

180 185 190

Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr

195 200 205

Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro

210 215 220

Arg

225

<210> 266

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD8-α信号肽

<400> 266

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro

20

<210> 267

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：Fc-γ-RIII-α铰链

<400> 267

Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln

1 5 10 15

<210> 268

<211> 45

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD8-α铰链

<400> 268

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 269

<211> 231

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：IgG1铰链

<400> 269

Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 270

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD8-α跨膜（TM）结构域

<400> 270

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

20

<210> 271

<211> 42

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：41BB胞内信号传导结构域（ISD）

<400> 271

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 272

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3-ζ胞内信号传导结构域（ISD）

<400> 272

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 273

<211> 52

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：Fc-ε-RI -α-TM-IC（Fc-ε-RI -α链跨膜和胞内结构域）

<400> 273

Phe Phe Ile Pro Leu Leu Val Val Ile Leu Phe Ala Val Asp Thr Gly

1 5 10 15

Leu Phe Ile Ser Thr Gln Gln Gln Val Thr Phe Leu Leu Lys Ile Lys

20 25 30

Arg Thr Arg Lys Gly Phe Arg Leu Leu Asn Pro His Pro Lys Pro Asn

35 40 45

Pro Lys Asn Asn

50

<210> 274

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：Fc-ε-RI-β-δ-ITAM（没有ITAM的Fc-ε-RI -β 链）

<400> 274

Met Asp Thr Glu Ser Asn Arg Arg Ala Asn Leu Ala Leu Pro Gln Glu

1 5 10 15

Pro Ser Ser Val Pro Ala Phe Glu Val Leu Glu Ile Ser Pro Gln Glu

20 25 30

Val Ser Ser Gly Arg Leu Leu Lys Ser Ala Ser Ser Pro Pro Leu His

35 40 45

Thr Trp Leu Thr Val Leu Lys Lys Glu Gln Glu Phe Leu Gly Val Thr

50 55 60

Gln Ile Leu Thr Ala Met Ile Cys Leu Cys Phe Gly Thr Val Val Cys

65 70 75 80

Ser Val Leu Asp Ile Ser His Ile Glu Gly Asp Ile Phe Ser Ser Phe

85 90 95

Lys Ala Gly Tyr Pro Phe Trp Gly Ala Ile Phe Phe Ser Ile Ser Gly

100 105 110

Met Leu Ser Ile Ile Ser Glu Arg Arg Asn Ala Thr Tyr Leu Val Arg

115 120 125

Gly Ser Leu Gly Ala Asn Thr Ala Ser Ser Ile Ala Gly Gly Thr Gly

130 135 140

Ile Thr Ile Leu Ile Ile Asn Leu Lys Lys Ser Leu Ala Tyr Ile His

145 150 155 160

Ile His Ser Cys Gln Lys Phe Phe Glu Thr Lys Cys Phe Met Ala Ser

165 170 175

Phe Ser Thr Glu Ile Val Val Met Met Leu Phe Leu Thr Ile Leu Gly

180 185 190

Leu Gly Ser Ala Val Ser Leu Thr Ile Cys Gly Ala Gly Glu Glu Leu

195 200 205

Lys Gly Asn Lys Val Pro Glu

210 215

<210> 275

<211> 45

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3 δ胞质结构域

<400> 275

Gly His Glu Thr Gly Arg Leu Ser Gly Ala Ala Asp Thr Gln Ala Leu

1 5 10 15

Leu Arg Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala

20 25 30

Gln Tyr Ser His Leu Gly Gly Asn Trp Ala Arg Asn Lys

35 40 45

<210> 276

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD28-IC（CD28共刺激结构域）

<400> 276

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 277

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：Fc-ε-RI-γ-SP（信号肽）

<400> 277

Met Ile Pro Ala Val Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Val Glu Gln Ala

1 5 10 15

Ala Ala

<210> 278

<211> 43

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：Fc-ε-RI -γ-δ-ITAM

（没有ITAM的Fc-ε-RI -γ 链）

<400> 278

Leu Gly Glu Pro Gln Leu Cys Tyr Ile Leu Asp Ala Ile Leu Phe Leu

1 5 10 15

Tyr Gly Ile Val Leu Thr Leu Leu Tyr Cys Arg Leu Lys Ile Gln Val

20 25 30

Arg Lys Ala Ala Ile Thr Ser Tyr Glu Lys Ser

35 40

<210> 279

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：GSG-P2A（GSG-P2A核糖体跳跃多肽）

<400> 279

Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val

1 5 10 15

Glu Glu Asn Pro Gly Pro

20

<210> 280

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：GSG-T2A（GSG-T2A核糖体跳跃多肽）

<400> 280

Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu

1 5 10 15

Glu Asn Pro Gly Pro

20

<210> 281

<211> 55

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ε胞质结构域

<400> 281

Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala

1 5 10 15

Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro

20 25 30

Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser

35 40 45

Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile

50 55

<210> 282

<211> 45

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3γ胞质结构域

<400> 282

Gly Gln Asp Gly Val Arg Gln Ser Arg Ala Ser Asp Lys Gln Thr Leu

1 5 10 15

Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Gln Pro Leu Lys Asp Arg Glu Asp Asp

20 25 30

Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn Gln Leu Arg Arg Asn

35 40 45

<210> 283

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ1

<400> 283

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

1 5 10 15

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

20 25

<210> 284

<211> 28

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ2

<400> 284

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

1 5 10 15

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met

20 25

<210> 285

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ3

<400> 285

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

1 5 10 15

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

20 25

<210> 286

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3δ ITAM δ

<400> 286

Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg

1 5 10 15

Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr Ser His Leu Gly Gly Asn

20 25

<210> 287

<211> 28

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ε ITAM ε

<400> 287

Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys

1 5 10 15

Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg

20 25

<210> 288

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3γ ITAM γ

<400> 288

Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Gln Pro Leu Lys

1 5 10 15

Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn

20 25

<210> 289

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ变体（dzz）

<400> 289

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg

1 5 10 15

Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr

20 25 30

Ser His Leu Gly Gly Asn Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 290

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ变体（ezz）

<400> 290

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro

1 5 10 15

Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser

20 25 30

Gly Leu Asn Gln Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

35 40 45

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

50 55 60

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

65 70 75 80

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

85 90 95

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 291

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ变体（gzz）

<400> 291

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro

1 5 10 15

Asn Asp Gln Leu Tyr Gln Pro Leu Lys Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr

20 25 30

Ser His Leu Gln Gly Asn Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 292

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ变体（deg）

<400> 292

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg

1 5 10 15

Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr

20 25 30

Ser His Leu Gly Gly Asn Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys

50 55 60

Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Lys Gly Asp Lys

65 70 75 80

Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Gln Pro Leu Lys Asp Arg

85 90 95

Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 293

<211> 225

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ζ（zdzezg）

<400> 293

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg

50 55 60

Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr Ser His Leu Gly Gly Asn Lys Gly Pro

65 70 75 80

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

85 90 95

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Glu Arg Pro Pro Pro Val

115 120 125

Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr

130 135 140

Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

145 150 155 160

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

165 170 175

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Lys Gly Asp

180 185 190

Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Gln Pro Leu Lys Asp

195 200 205

Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn Ala Leu Pro Pro

210 215 220

Arg

225

<210> 294

<211> 225

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ζ（dzezgz）

<400> 294

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg

1 5 10 15

Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr

20 25 30

Ser His Leu Gly Gly Asn Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

50 55 60

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Lys Gly Glu

65 70 75 80

Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys Gly

85 90 95

Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Pro Arg Arg Lys Asn Pro

115 120 125

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

130 135 140

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

145 150 155 160

Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Gln Pro Leu Lys

165 170 175

Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn Lys Gly Glu

180 185 190

Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr

195 200 205

Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro

210 215 220

Arg

225

<210> 295

<211> 225

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3 ζ ζ（zzzdeg）

<400> 295

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Asp Thr Gln Ala Leu Leu

115 120 125

Arg Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala Gln

130 135 140

Tyr Ser His Leu Gly Gly Asn Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly

145 150 155 160

Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg

165 170 175

Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Lys Gly Asp

180 185 190

Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Gln Pro Leu Lys Asp

195 200 205

Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn Ala Leu Pro Pro

210 215 220

Arg

225

<210> 296

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：(GGGGS)3

<400> 296

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 297

<211> 369

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：4F11重链可变区

<400> 297

Cys Ala Gly Gly Thr Cys Ala Cys Cys Thr Thr Gly Ala Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Thr Cys Cys Thr Gly Thr Gly Cys Thr

20 25 30

Gly Gly Thr Gly Ala Ala Ala Cys Cys Cys Ala Cys Ala Gly Ala Gly

35 40 45

Ala Cys Cys Cys Thr Cys Ala Cys Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Thr

50 55 60

Gly Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Thr Cys Thr Gly Gly Gly Thr Thr

65 70 75 80

Cys Thr Cys Ala Cys Thr Cys Ala Gly Thr Ala Ala Thr Gly Cys Thr

85 90 95

Ala Gly Ala Ala Thr Gly Gly Gly Thr Gly Thr Gly Ala Cys Cys Thr

100 105 110

Gly Gly Ala Thr Cys Cys Gly Thr Cys Ala Gly Cys Cys Cys Cys Cys

115 120 125

Ala Gly Gly Gly Ala Ala Gly Gly Cys Cys Cys Thr Gly Gly Ala Gly

130 135 140

Thr Gly Gly Cys Thr Thr Gly Cys Ala Cys Ala Cys Ala Thr Thr Thr

145 150 155 160

Thr Thr Thr Cys Gly Ala Ala Thr Gly Ala Cys Gly Ala Ala Ala Ala

165 170 175

Ala Thr Cys Cys Thr Ala Cys Ala Gly Thr Ala Cys Ala Thr Cys Thr

180 185 190

Cys Thr Gly Ala Ala Gly Ala Gly Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Ala

195 200 205

Cys Cys Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys

210 215 220

Thr Thr Cys Cys Ala Ala Ala Ala Cys Cys Cys Ala Gly Gly Thr Gly

225 230 235 240

Gly Thr Cys Cys Thr Thr Ala Cys Cys Ala Thr Gly Ala Cys Cys Ala

245 250 255

Ala Cys Ala Thr Gly Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala

260 265 270

Cys Ala Cys Ala Gly Cys Cys Ala Cys Ala Thr Ala Thr Thr Ala Cys

275 280 285

Thr Gly Thr Gly Cys Ala Cys Gly Gly Ala Thr Ala Cys Gly Ala Gly

290 295 300

Ala Thr Thr Ala Cys Thr Ala Thr Gly Ala Cys Ala Thr Thr Ala Gly

305 310 315 320

Thr Ala Gly Thr Thr Ala Thr Thr Ala Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys

325 330 335

Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Cys Cys Cys

340 345 350

Thr Gly Gly Thr Cys Ala Gly Cys Gly Thr Cys Thr Cys Cys Thr Cys

355 360 365

Ala

<210> 298

<211> 321

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：4F11轻链可变区

<400> 298

Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Cys Cys Cys

1 5 10 15

Ala Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Thr Cys Thr Gly Cys Cys Ala Thr

20 25 30

Gly Thr Cys Thr Gly Cys Ala Thr Cys Thr Gly Thr Ala Gly Gly Ala

35 40 45

Gly Ala Cys Ala Gly Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala

50 55 60

Cys Thr Thr Gly Thr Cys Gly Gly Gly Cys Gly Ala Gly Thr Cys Ala

65 70 75 80

Gly Gly Ala Cys Ala Thr Thr Ala Gly Cys Ala Ala Thr Thr Ala Thr

85 90 95

Thr Thr Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Thr Thr Cys Ala Gly Cys

100 105 110

Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Ala Gly Thr

115 120 125

Cys Cys Cys Thr Ala Ala Gly Cys Gly Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys

130 135 140

Thr Ala Thr Gly Cys Thr Gly Cys Ala Thr Cys Cys Ala Gly Thr Thr

145 150 155 160

Thr Gly Cys Ala Ala Ala Gly Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Cys

165 170 175

Ala Thr Cys Ala Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys

180 185 190

Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Cys Gly Gly Gly Gly Ala Cys Ala Gly

195 200 205

Ala Ala Thr Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Cys Ala Ala Thr

210 215 220

Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Cys Cys Thr

225 230 235 240

Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Thr Thr Gly Cys Ala Ala Cys Thr Thr

245 250 255

Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Thr

260 265 270

Thr Ala Ala Thr Ala Gly Thr Thr Thr Cys Cys Cys Gly Thr Thr Cys

275 280 285

Ala Cys Thr Thr Thr Thr Gly Gly Cys Gly Gly Ala Gly Gly Gly Ala

290 295 300

Cys Cys Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala

305 310 315 320

Cys

<210> 299

<211> 372

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：17G6重链可变区

<400> 299

Gly Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly

1 5 10 15

Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Cys Thr Thr

20 25 30

Gly Gly Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Gly

35 40 45

Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Ala Cys Thr Cys Thr Cys Cys Thr

50 55 60

Gly Thr Gly Thr Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Thr

65 70 75 80

Cys Ala Cys Cys Thr Thr Thr Ala Gly Thr Ala Gly Thr Thr Ala Thr

85 90 95

Thr Gly Gly Ala Thr Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Thr Cys Cys

100 105 110

Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Gly

130 135 140

Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Thr Ala Ala Ala Gly Cys Ala Ala Gly

145 150 155 160

Ala Thr Gly Gly Ala Ala Gly Thr Gly Ala Gly Ala Ala Ala Thr Ala

165 170 175

Cys Thr Ala Thr Gly Thr Gly Gly Ala Cys Thr Cys Thr Gly Thr Gly

180 185 190

Ala Ala Gly Gly Gly Cys Cys Gly Ala Thr Thr Cys Ala Cys Cys Ala

195 200 205

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370

<210> 300

<211> 336

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：17G6轻链可变区

<400> 300

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195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

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275 280 285

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290 295 300

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305 310 315 320

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<210> 301

<211> 357

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：10H10重链可变区

<400> 301

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355

<210> 302

<211> 321

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：10H10轻链可变区

<400> 302

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1 5 10 15

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Gly Ala Cys Ala Gly Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala

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210 215 220

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275 280 285

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290 295 300

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Ala

<210> 303

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<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：P07D03重链可变区

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<210> 304

<211> 336

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：P07D03轻链可变区

<400> 304

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1 5 10 15

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325 330 335

<210> 305

<211> 378

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：P08G02重链可变区

<400> 305

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245 250 255

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<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：P08G02轻链可变区

<400> 306

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1 5 10 15

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<210> 307

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：P08F08重链可变区

<400> 307

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<210> 308

<211> 339

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：P08F08轻链可变区

<400> 308

Gly Ala Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Cys Gly Thr Gly Cys

1 5 10 15

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195 200 205

Gly Cys Gly Gly Cys Ala Cys Cys Ala Gly Cys Gly Cys Ala Thr Cys

210 215 220

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275 280 285

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325 330 335

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<210> 309

<211> 366

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：P15D02重链可变区

<400> 309

Gly Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Thr Thr Gly Thr Cys Cys

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210 215 220

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355 360 365

<210> 310

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：P15D032轻链可变区

<400> 310

Gly Ala Gly Cys Thr Cys Gly Ala Thr Ala Thr Thr Cys Ala Gly Ala

1 5 10 15

Thr Gly Ala Cys Cys Cys Ala Gly Ala Gly Cys Cys Cys Thr Ala Gly

20 25 30

Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Gly Cys Ala Ala Gly Cys

35 40 45

Gly Thr Gly Gly Gly Cys Gly Ala Thr Ala Gly Ala Gly Thr Gly Ala

50 55 60

Cys Cys Ala Thr Thr Ala Cys Cys Thr Gly Thr Ala Gly Gly Gly Cys

65 70 75 80

Cys Thr Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Cys Ala Thr Cys Gly Ala Cys

85 90 95

Ala Cys Ala Thr Ala Thr Thr Thr Ala Ala Ala Cys Thr Gly Gly Thr

100 105 110

Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Cys Gly Gly

115 120 125

Gly Ala Ala Ala Gly Cys Ala Cys Cys Cys Ala Ala Ala Cys Thr Gly

130 135 140

Cys Thr Gly Ala Thr Thr Thr Ala Thr Thr Cys Ala Gly Cys Thr Ala

145 150 155 160

Gly Thr Ala Gly Cys Cys Thr Ala Cys Ala Cys Ala Gly Thr Gly Gly

165 170 175

Cys Gly Thr Thr Cys Cys Thr Thr Cys Ala Cys Gly Thr Thr Thr Thr

180 185 190

Ala Gly Cys Gly Gly Thr Ala Gly Cys Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly

195 200 205

Gly Cys Ala Cys Cys Gly Ala Thr Thr Thr Cys Ala Cys Cys Cys Thr

210 215 220

Gly Ala Cys Cys Ala Thr Thr Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Thr

225 230 235 240

Cys Ala Gly Cys Cys Cys Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Thr Cys Gly

245 250 255

Cys Thr Ala Cys Gly Thr Ala Thr Thr Ala Thr Thr Gly Cys Cys Ala

260 265 270

Ala Cys Ala Ala Thr Cys Ala Thr Ala Cys Ala Gly Cys Ala Cys Ala

275 280 285

Ala Cys Thr Gly Cys Thr Thr Gly Gly Ala Cys Ala Thr Thr Cys Gly

290 295 300

Gly Cys Cys Ala Gly Gly Gly Thr Ala Cys Cys Ala Ala Ala Gly Thr

305 310 315 320

Gly Gly Ala Ala Ala Thr Cys Ala Ala Ala

325 330

<210> 311

<211> 225

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ζ（degzzz）

<400> 311

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg

1 5 10 15

Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr

20 25 30

Ser His Leu Gly Gly Asn Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys

50 55 60

Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Lys Gly Asp Lys

65 70 75 80

Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Gln Pro Leu Lys Asp Arg

85 90 95

Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln

115 120 125

Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu

130 135 140

Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly

145 150 155 160

Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln

165 170 175

Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu

180 185 190

Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr

195 200 205

Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro

210 215 220

Arg

225

<210> 312

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ YA

<400> 312

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Ala Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 313

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ YAYAYA

<400> 313

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Ala Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Ala Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Ala Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 314

<211> 43

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ YAtrunc

<400> 314

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Ala Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Ala Leu Pro Pro Arg

35 40

<210> 315

<211> 225

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ζ（zdzezg-6xYA）

<400> 315

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Ala Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg Asn Asp Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg

50 55 60

Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr Ser His Leu Gly Gly Asn Lys Gly Pro

65 70 75 80

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Ala Glu Leu Gln Lys Asp

85 90 95

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Glu Arg Pro Pro Pro Val

115 120 125

Pro Asn Pro Asp Tyr Ala Pro Ile Arg Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr

130 135 140

Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

145 150 155 160

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Ala Gly Leu Ser

165 170 175

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Lys Gly Asp

180 185 190

Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Ala Pro Leu Lys Asp

195 200 205

Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn Ala Leu Pro Pro

210 215 220

Arg

225

<210> 316

<211> 225

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ζ（dzezgz-6xYA）

<400> 316

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg

1 5 10 15

Asn Asp Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr

20 25 30

Ser His Leu Gly Gly Asn Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Ala Glu Leu Asn

50 55 60

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Lys Gly Glu

65 70 75 80

Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Ala Pro Ile Arg Lys Gly

85 90 95

Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Pro Arg Arg Lys Asn Pro

115 120 125

Gln Glu Gly Leu Tyr Ala Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

130 135 140

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

145 150 155 160

Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Ala Pro Leu Lys

165 170 175

Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn Lys Gly Glu

180 185 190

Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Ala Gly Leu Ser Thr

195 200 205

Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro

210 215 220

Arg

225

<210> 317

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ1 YA

<400> 317

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Ala Glu Leu Asn

1 5 10 15

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

20 25

<210> 318

<211> 28

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ2 YA

<400> 318

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Ala Glu Leu Gln Lys

1 5 10 15

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met

20 25

<210> 319

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ3 YA

<400> 319

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Ala Gly Leu Ser

1 5 10 15

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

20 25

<210> 320

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3δ ITAM δ YA

<400> 320

Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg Asn Asp Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg

1 5 10 15

Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr Ser His Leu Gly Gly Asn

20 25

<210> 321

<211> 28

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ε ITAM ε YA

<400> 321

Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Ala Pro Ile Arg Lys

1 5 10 15

Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg

20 25

<210> 322

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3γ ITAM γ YA

<400> 322

Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Ala Pro Leu Lys

1 5 10 15

Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn

20 25

<210> 323

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ1 YA

<400> 323

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Ala Glu Leu Asn

1 5 10 15

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

20 25

<210> 324

<211> 28

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ2 YA

<400> 324

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Ala Glu Leu Gln Lys

1 5 10 15

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met

20 25

<210> 325

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ3 YA

<400> 325

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Ala Gly Leu Ser

1 5 10 15

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

20 25

<210> 326

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3δ ITAM δ YA

<400> 326

Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg Asn Asp Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg

1 5 10 15

Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr Ser His Leu Gly Gly Asn

20 25

<210> 327

<211> 28

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ε ITAM ε YA

<400> 327

Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Ala Pro Ile Arg Lys

1 5 10 15

Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg

20 25

<210> 328

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3γ ITAM γ YA

<400> 328

Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Ala Pro Leu Lys

1 5 10 15

Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn

20 25

<210> 329

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ1 YA

<400> 329

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Ala Glu Leu Asn

1 5 10 15

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

20 25

<210> 330

<211> 28

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ2 YA

<400> 330

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Ala Glu Leu Gln Lys

1 5 10 15

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met

20 25

<210> 331

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ3 YA

<400> 331

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Ala Gly Leu Ser

1 5 10 15

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

20 25

<210> 332

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3δ ITAM δ YA

<400> 332

Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg Asn Asp Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg

1 5 10 15

Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr Ser His Leu Gly Gly Asn

20 25

<210> 333

<211> 28

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ε ITAM ε YA

<400> 333

Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Ala Pro Ile Arg Lys

1 5 10 15

Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg

20 25

<210> 334

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3γ ITAM γ YA

<400> 334

Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr Ala Pro Leu Lys

1 5 10 15

Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly Asn

20 25

<210> 335

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ ITAM ζ1 YA

<400> 335

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Ala Glu Leu Asn

1 5 10 15

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

20 25

<210> 336

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD28胞内

<400> 336

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 337

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD28.YMFM胞内

<400> 337

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Phe Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 338

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-10A1

<400> 338

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ile Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Ser His

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 339

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-10A1

<400> 339

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr

20 25 30

Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Leu Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Glu Gly Ser Leu Asp Ala Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 340

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-10E2

<400> 340

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Phe Ser Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 341

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-10E2

<400> 341

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asn Trp Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser

<210> 342

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-11A1

<400> 342

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly His Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 343

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-11A1

<400> 343

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Asp Tyr Tyr

20 25 30

Phe Trp Asn Trp Phe Arg Gln Ser Pro Val Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Val Tyr Asp Ile Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Glu Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Glu Gly Ala Leu Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 344

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-11C1

<400> 344

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ile Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Thr Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Ser His

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 345

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-11C1

<400> 345

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Asn Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr

20 25 30

Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Val Ile Tyr Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Arg Ala Glu Gly Ser Leu Asp Ala Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 346

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-11D1

<400> 346

Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp

20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Tyr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 347

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-11D1

<400> 347

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Met Gly Gln Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Lys Tyr Ser Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Glu Val Gly Thr Phe Gly Ala Phe Asp Phe Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Lys Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 348

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-11E1

<400> 348

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Ser Ile Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Lys Val Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ala Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Tyr Asn Ser Gly Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 349

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-11E1

<400> 349

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Leu Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Asn Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Met Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Thr Arg Asp Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 350

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-12A2

<400> 350

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Val Pro Glu Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ala Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Tyr Asn Ser Ala Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 351

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-12A2

<400> 351

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Asp

20 25 30

Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Arg Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Asn Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr

100 105 110

Leu Val Ala Val Ser Ser

115

<210> 352

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-12C4

<400> 352

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Val Leu Ile Leu Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Val Ser Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Met Gln Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Thr

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 353

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-12C4

<400> 353

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ile Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Arg Gly Val Thr Met Ile Val Asp Gly Met Asp Asp Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 354

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-12C5

<400> 354

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asn Ser His

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Val Thr Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn His Tyr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Asp Ile Asn

100 105

<210> 355

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-12C5

<400> 355

Glu Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Met Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Met Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Glu Val Gly Phe Val Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 356

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-12D3

<400> 356

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 357

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-12D3

<400> 357

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Met Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr Tyr His Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 358

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-12D6

<400> 358

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 359

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-12D6

<400> 359

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp

20 25 30

Ala Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Met Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Asp Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 360

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-12D7

<400> 360

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Phe

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Val Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu His Val Tyr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Arg

100 105

<210> 361

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-12D7

<400> 361

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Met Gly Gln Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Lys Tyr Ser Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Glu Val Gly Thr Phe Gly Ala Phe Asp Phe Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Lys Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 362

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-12F5

<400> 362

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Asp Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys

65 70 75 80

Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln

85 90 95

Arg Ile Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile

100 105 110

Lys

<210> 363

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-12F5

<400> 363

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Gly Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala

50 55 60

Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ser Leu Ile Val Gly Ala Ile Ser Leu Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 364

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-12H4

<400> 364

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ala Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Thr Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gln Thr Phe Ser His

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 365

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-12H4

<400> 365

Gln Val Gln Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Ile Ser Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr

20 25 30

Phe Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gln Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Ser Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Thr Ser Val Thr Val Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Arg Ala Glu Gly Ser Leu Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Ala Val Ser Ser

115

<210> 366

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-8C8

<400> 366

Asp Met Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Leu Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ala Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 367

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-8C8

<400> 367

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile His Tyr Ala Asp Ser Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Lys Gly Thr Thr Leu Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Leu Trp

100 105 110

Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 368

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-8F7

<400> 368

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Met Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Ile Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 369

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-8F7

<400> 369

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Gly Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Leu

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Tyr Ser Gly Ser Ser Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 370

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-8F8

<400> 370

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Cys

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 371

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-8F8

<400> 371

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Asn Tyr Met Gly Asn Thr Ile Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asp Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Thr Ser Val Ser Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Arg Ala Glu Gly Ser Leu Asp Ala Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Ala Val Ser Leu

115

<210> 372

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-9D8

<400> 372

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Ile Ile Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asp Trp Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Leu Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 373

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-9D8

<400> 373

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Thr Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Ala Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Arg Lys Arg Glu Tyr Tyr Tyr Asn Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Thr

115 120

<210> 374

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-9E10

<400> 374

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ile Leu Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Leu Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 375

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-9E10

<400> 375

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Thr Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His

20 25 30

Tyr Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Asp Arg Val Thr Met Ala Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Arg Lys Arg Glu Tyr Tyr Tyr Asn Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 376

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-9E5

<400> 376

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ile Leu Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Leu Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 377

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-9E5

<400> 377

Gln Val Gln Leu Val Gln Phe Gly Val Glu Val Arg Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser His

20 25 30

Tyr Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Asp Arg Val Thr Met Ala Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ser Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Lys Asp Arg Lys Arg Glu Tyr Tyr Tyr Asn Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 378

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-9F4

<400> 378

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 379

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-9F4

<400> 379

Glu Val Gln Met Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ile Tyr

20 25 30

Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Phe Gly Gly Arg Gly Ser Ser Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ala Ser Glu Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu His Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Glu Lys Asp Trp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 380

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-9F8

<400> 380

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Phe Leu Asn Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 381

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-9F8

<400> 381

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Ile Gly Trp Glu Val Phe Thr Leu Gly Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 382

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:10A1 Kabat

<400> 382

Tyr Tyr Tyr Trp Thr

1 5

<210> 383

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:10A1 Chothia

<400> 383

Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr

1 5

<210> 384

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:10A1延长

<400> 384

Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr Tyr Trp Thr

1 5 10

<210> 385

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:10A1 Kabat

<400> 385

His Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 386

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:10A1 Chothia

<400> 386

Tyr Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 387

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:10A1

<400> 387

Ala Glu Gly Ser Leu Asp Ala Phe Asp Phe

1 5 10

<210> 388

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:1000 kabat

<400> 388

Ser Asn Tyr Met Thr

1 5

<210> 389

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:1000 Chothia

<400> 389

Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn

1 5

<210> 390

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:1000延长

<400> 390

Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn Tyr Met Thr

1 5 10

<210> 391

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:10E2 Kabat

<400> 391

Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 392

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:10E2 Chothia

<400> 392

Tyr Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 393

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:10E2

<400> 393

Asn Trp Gly Asp Tyr Trp

1 5

<210> 394

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:11A1 Kabat

<400> 394

Tyr Tyr Phe Trp Asn

1 5

<210> 395

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:11A1 Chothia

<400> 395

Gly Gly Ser Ile Asp Tyr Tyr

1 5

<210> 396

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:11A1延长

<400> 396

Gly Gly Ser Ile Asp Tyr Tyr Phe Trp Asn

1 5 10

<210> 397

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:11A1 Kabat

<400> 397

His Val Tyr Asp Ile Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 398

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:11A1 Chothia

<400> 398

Tyr Asp Ile Gly Asn

1 5

<210> 399

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:11A1

<400> 399

Gly Glu Gly Ala Leu Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 400

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:11C1 Kabat

<400> 400

Tyr Tyr Tyr Trp Thr

1 5

<210> 401

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:11C1 Chothia

<400> 401

Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr

1 5

<210> 402

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:11C1延长

<400> 402

Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr Tyr Trp Thr

1 5 10

<210> 403

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:11C1 Kabat

<400> 403

His Val Ile Tyr Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 404

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:11C1 Chothia

<400> 404

Ile Tyr Ser Gly Thr

1 5

<210> 405

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:11C1

<400> 405

Ala Glu Gly Ser Leu Asp Ala Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 406

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:11D1 Kabat

<400> 406

Asp Tyr Gly Ile His

1 5

<210> 407

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:11D1 Chothia

<400> 407

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 408

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:11D1延长

<400> 408

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Ile His

1 5 10

<210> 409

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:11D1 Kabat

<400> 409

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Lys Tyr Ser Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 410

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:11D1 Chothia

<400> 410

Trp Tyr Asp Gly Ser Ile

1 5

<210> 411

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:11D1

<400> 411

Asp Glu Val Gly Thr Phe Gly Ala Phe Asp Phe

1 5 10

<210> 412

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:110 kabat

<400> 412

Ser Asp Gly Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 413

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:110 Chothia

<400> 413

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp Gly Tyr

1 5

<210> 414

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:110延长

<400> 414

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp Gly Tyr Tyr Trp Ser

1 5 10

<210> 415

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:11E1 Kabat

<400> 415

Tyr Met Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 416

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:11E1 Chothia

<400> 416

Tyr Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 417

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:11E1

<400> 417

Asp Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5

<210> 418

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12A2 Kabat

<400> 418

Ser Asp Gly Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 419

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12A2 Chothia

<400> 419

Gly Gly Ser Val Ser Ser Asp Gly Tyr

1 5

<210> 420

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12A2延长

<400> 420

Gly Gly Ser Val Ser Ser Asp Gly Tyr Tyr Trp Ser

1 5 10

<210> 421

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12A2 Kabat

<400> 421

Tyr Ile Tyr Tyr Arg Arg Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 422

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12A2 Chothia

<400> 422

Tyr Tyr Arg Arg Ile

1 5

<210> 423

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:12A2

<400> 423

Asp Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5

<210> 424

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12C4 Kabat

<400> 424

Gly Tyr Tyr Leu His

1 5

<210> 425

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12C4 Chothia

<400> 425

Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

1 5

<210> 426

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12C4延长

<400> 426

Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Leu His

1 5 10

<210> 427

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12C4 Kabat

<400> 427

Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 428

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12C4 Chothia

<400> 428

Asn Pro Asn Ser Gly Gly

1 5

<210> 429

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:12C4

<400> 429

Asp Arg Gly Val Thr Met Ile Val Asp Gly Met Asp Asp

1 5 10

<210> 430

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12C5 Kabat

<400> 430

Asp Tyr Gly Met His

1 5

<210> 431

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12C5 Chothia

<400> 431

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 432

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12C5延长

<400> 432

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 433

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12C5 Kabat

<400> 433

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 434

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12C5 Chothia

<400> 434

Trp Tyr Asp Gly Ser Asn

1 5

<210> 435

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:12C5

<400> 435

Asp Glu Val Gly Phe Val Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 436

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12D3 Kabat

<400> 436

Ser Asp Gly Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 437

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12D3 Chothia

<400> 437

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp Gly Tyr

1 5

<210> 438

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12D3延长

<400> 438

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp Gly Tyr Tyr Trp Ser

1 5 10

<210> 439

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12D3 Kabat

<400> 439

Tyr Met Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr Tyr His Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 440

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12D3 Chothia

<400> 440

Tyr Tyr Ser Gly Ile

1 5

<210> 441

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:12D3

<400> 441

Asp Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5

<210> 442

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12D6 Kabat

<400> 442

Ser Asp Ala Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 443

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12D6 Chothia

<400> 443

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp Ala Tyr

1 5

<210> 444

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12D6延长

<400> 444

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp Ala Tyr Tyr Trp Ser

1 5 10

<210> 445

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12D6 Kabat

<400> 445

Tyr Met Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 446

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12D6 Chothia

<400> 446

Tyr Tyr Ser Gly Ile

1 5

<210> 447

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:12D6

<400> 447

Asp Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5

<210> 448

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12D7 Kabat

<400> 448

Asp Tyr Gly Ile His

1 5

<210> 449

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12D7 Chothia

<400> 449

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 450

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12D7延长

<400> 450

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Ile His

1 5 10

<210> 451

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12D7 Kabat

<400> 451

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Lys Tyr Ser Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 452

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12D7 Chothia

<400> 452

Trp Tyr Asp Gly Ser Ile

1 5

<210> 453

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:12D7

<400> 453

Asp Glu Val Gly Thr Phe Gly Ala Phe Asp Phe

1 5 10

<210> 454

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12F5 Kabat

<400> 454

Asn Ala Trp Met Ser

1 5

<210> 455

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12F5 Chothia

<400> 455

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala

1 5

<210> 456

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12F5延长

<400> 456

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser

1 5 10

<210> 457

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12F5 Kabat

<400> 457

Arg Ile Lys Ser Lys Thr Gly Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 458

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12F5 Chothia

<400> 458

Lys Ser Lys Thr Gly Gly Gly Thr

1 5

<210> 459

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:12F5

<400> 459

Leu Ile Val Gly Ala Ile Ser Leu Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 460

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12H4 Kabat

<400> 460

Tyr Tyr Phe Trp Thr

1 5

<210> 461

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12H4 Chothia

<400> 461

Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr

1 5

<210> 462

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12H4延长

<400> 462

Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr Phe Trp Thr

1 5 10

<210> 463

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12H4 Kabat

<400> 463

Gln Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Ser Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 464

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12H4 Chothia

<400> 464

Tyr Tyr Ser Gly Asn

1 5

<210> 465

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:12H4

<400> 465

Ala Glu Gly Ser Leu Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 466

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:8C8 Kabat

<400> 466

Ser Tyr Ser Met Asn

1 5

<210> 467

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:8C8 Chothia

<400> 467

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 468

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:8C8延长

<400> 468

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn

1 5 10

<210> 469

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:8C8 Kabat

<400> 469

Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile His Tyr Ala Asp Ser Leu Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 470

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:8C8 Chothia

<400> 470

Ser Thr Ser Ser Asn Tyr

1 5

<210> 471

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:8C8

<400> 471

Asp Lys Gly Thr Thr Leu Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 472

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:8F7 Kabat

<400> 472

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 473

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:8F7 Chothia

<400> 473

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 474

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:8F7延长

<400> 474

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 475

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:8F7 Kabat

<400> 475

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Leu Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 476

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:8F7 Chothia

<400> 476

Trp Tyr Asp Gly Ser Asn

1 5

<210> 477

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:8F7

<400> 477

Asp Gly Tyr Ser Gly Ser Ser Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 478

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:8F8 Kabat

<400> 478

Tyr Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 479

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:8F8 Chothia

<400> 479

Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr

1 5

<210> 480

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:8F8延长

<400> 480

Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr Tyr Trp Ser

1 5 10

<210> 481

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:8F8 Kabat

<400> 481

Asn Ile Asn Tyr Met Gly Asn Thr Ile Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 482

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:8F8 Chothia

<400> 482

Asn Tyr Met Gly Asn

1 5

<210> 483

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:8F8

<400> 483

Ala Glu Gly Ser Leu Asp Ala Phe Asp Phe

1 5 10

<210> 484

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:9D8 Kabat

<400> 484

Gly Tyr Tyr Ile Tyr

1 5

<210> 485

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:9D8 Chothia

<400> 485

Gly Tyr Ile Phe Thr Gly Tyr

1 5

<210> 486

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:9D8延长

<400> 486

Gly Tyr Ile Phe Thr Gly Tyr Tyr Ile Tyr

1 5 10

<210> 487

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:9D8 Kabat

<400> 487

Trp Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 488

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:9D8 Chothia

<400> 488

Asn Pro Ser Ser Gly Gly

1 5

<210> 489

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:9D8

<400> 489

Asp Arg Lys Arg Glu Tyr Tyr Tyr Asn Phe Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 490

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:90000000000 kabat

<400> 490

Ser His Tyr Ile Tyr

1 5

<210> 491

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:90000000000 Chothia

<400> 491

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His

1 5

<210> 492

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:90000000000延长

<400> 492

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His Tyr Ile Tyr

1 5 10

<210> 493

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:9E10 Kabat

<400> 493

Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Asp

<210> 494

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:9E10 Chothia

<400> 494

Asn Pro Asn Ser Gly Gly

1 5

<210> 495

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:9E10

<400> 495

Asp Arg Lys Arg Glu Tyr Tyr Tyr Asn Phe Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 496

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:900000 kabat

<400> 496

Ser His Tyr Ile Tyr

1 5

<210> 497

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:900000 Chothia

<400> 497

Gly Phe Thr Phe Thr Ser His

1 5

<210> 498

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:900000延长

<400> 498

Gly Phe Thr Phe Thr Ser His Tyr Ile Tyr

1 5 10

<210> 499

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:9E5 Kabat

<400> 499

Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Asp

<210> 500

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:9E5 Chothia

<400> 500

Asn Pro Asn Ser Gly Gly

1 5

<210> 501

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:9E5

<400> 501

Asp Arg Lys Arg Glu Tyr Tyr Tyr Asn Phe Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 502

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:9F4 Kabat

<400> 502

Ile Tyr Ala Ile His

1 5

<210> 503

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:9F4 Chothia

<400> 503

Gly Phe Thr Leu Ser Ile Tyr

1 5

<210> 504

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:9F4延长

<400> 504

Gly Phe Thr Leu Ser Ile Tyr Ala Ile His

1 5 10

<210> 505

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:9F4 Kabat

<400> 505

Ser Phe Gly Gly Arg Gly Ser Ser Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 506

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:9F4 Chothia

<400> 506

Gly Gly Arg Gly Ser Ser

1 5

<210> 507

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:9F4

<400> 507

Glu Lys Asp Trp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 508

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:9F8 Kabat

<400> 508

Asn Tyr Ser Met Asn

1 5

<210> 509

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:9F8 Chothia

<400> 509

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

1 5

<210> 510

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:9F8延长

<400> 510

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ser Met Asn

1 5 10

<210> 511

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:9F8 Kabat

<400> 511

Ser Ile Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 512

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:9F8 Chothia

<400> 512

Ser Ser Ser Thr Ile Tyr

1 5

<210> 513

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:9F8

<400> 513

Asp Ile Gly Trp Glu Val Phe Thr Leu Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 514

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：10A1 CDRL1

<400> 514

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 515

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：10A1 CDRL2

<400> 515

Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 516

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：10A1 CDRL3

<400> 516

Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Ser His Thr

1 5

<210> 517

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：10E2 CDRL1

<400> 517

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 518

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：10E2 CDRL2

<400> 518

Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 519

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：10E2 CDRL3

<400> 519

Gln Gln Tyr Lys Ser Phe Ser Leu Thr

1 5

<210> 520

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11A1 CDRL1

<400> 520

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 521

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11A1 CDRL2

<400> 521

Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser

1 5

<210> 522

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11A1 CDRL3

<400> 522

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr Thr

1 5

<210> 523

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11C1 CDRL1

<400> 523

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 524

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11C1 CDRL2

<400> 524

Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 525

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11C1 CDRL3

<400> 525

Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Ser His Thr

1 5

<210> 526

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11D1 CDRL1

<400> 526

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly

1 5 10

<210> 527

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11D1 CDRL2

<400> 527

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 528

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11D1 CDRL3

<400> 528

Leu Gln Asp Tyr Asn Tyr Pro Phe Thr

1 5

<210> 529

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11E1 CDRL1

<400> 529

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 530

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11E1 CDRL2

<400> 530

Ala Ala Ser Ala Leu Gln Ser

1 5

<210> 531

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：11E1 CDRL3

<400> 531

Gln Asn Tyr Asn Ser Gly Pro Arg Thr

1 5

<210> 532

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12A2 CDRL1

<400> 532

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Thr

1 5 10

<210> 533

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12A2 CDRL2

<400> 533

Ala Ala Ser Ala Leu Gln Ser

1 5

<210> 534

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12A2 CDRL3

<400> 534

Gln Asn Tyr Asn Ser Ala Pro Arg Thr

1 5

<210> 535

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12C4 CDRL1

<400> 535

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 536

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12C4 CDRL2

<400> 536

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 537

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12C4 CDRL3

<400> 537

Met Gln Thr Leu Gln Thr Pro Phe Thr

1 5

<210> 538

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12C5 CDRL1

<400> 538

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asn Ser His Leu Ala

1 5 10

<210> 539

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12C5 CDRL2

<400> 539

Tyr Ala Ser Thr Leu Pro Ser

1 5

<210> 540

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12C5 CDRL3

<400> 540

Gln Gln Leu Asn His Tyr Pro Ile Thr

1 5

<210> 541

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12D3 CDRL1

<400> 541

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 542

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12D3 CDRL2

<400> 542

Ala Ala Ser Thr Leu His Ser

1 5

<210> 543

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12D3 CDRL3

<400> 543

Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Arg Thr

1 5

<210> 544

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12D6 CDRL1

<400> 544

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 545

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12D6 CDRL2

<400> 545

Ala Ala Ser Thr Leu His Ser

1 5

<210> 546

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12D6 CDRL3

<400> 546

Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Arg Thr

1 5

<210> 547

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12D7 CDRL1

<400> 547

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Phe Leu Ala

1 5 10

<210> 548

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12D7 CDRL2

<400> 548

Val Ala Ser Thr Leu Gln Ser

1 5

<210> 549

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12D7 CDRL3

<400> 549

Gln Gln Leu His Val Tyr Pro Ile Thr

1 5

<210> 550

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12F5 CDRL1

<400> 550

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Asp Gly Asn Thr Tyr Leu

1 5 10 15

Asp

<210> 551

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12F5 CDRL2

<400> 551

Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser

1 5

<210> 552

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12F5 CDRL3

<400> 552

Met Gln Arg Ile Glu Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 553

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12H4 CDRL1

<400> 553

Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Thr Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 554

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12H4 CDRL2

<400> 554

Lys Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 555

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12H4 CDRL3

<400> 555

Gln Gln Tyr Gln Thr Phe Ser His Thr

1 5

<210> 556

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：8C8 CDRL1

<400> 556

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 557

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：8C8 CDRL2

<400> 557

Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser

1 5

<210> 558

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：8C8 CDRL3

<400> 558

Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Leu Thr

1 5

<210> 559

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：8F7 CDRL1

<400> 559

Arg Ser Ser Gln Thr Leu Val His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 560

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：8F7 CDRL2

<400> 560

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 561

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：8F7 CDRL3

<400> 561

Met Gln Ala Ile Gln Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 562

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：8F8 CDRL1

<400> 562

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 563

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：8F8 CDRL2

<400> 563

Lys Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 564

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：8F8 CDRL3

<400> 564

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Cys Thr

1 5

<210> 565

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9D8 CDRL1

<400> 565

Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Leu His

1 5 10

<210> 566

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9D8 CDRL2

<400> 566

Asp Ala Ser Asp Trp Glu Thr

1 5

<210> 567

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9D8 CDRL3

<400> 567

Gln Gln Tyr Asp His Leu Pro Ile Thr

1 5

<210> 568

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9E10 CDRL1

<400> 568

Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu His

1 5 10

<210> 569

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9E10 CDRL2

<400> 569

Asp Ala Ser Asp Leu Glu Thr

1 5

<210> 570

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9E10 CDRL3

<400> 570

Gln Gln Tyr Asp His Leu Pro Ile Thr

1 5

<210> 571

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9E5 CDRL1

<400> 571

Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu His

1 5 10

<210> 572

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9E5 CDRL2

<400> 572

Asp Ala Ser Asp Leu Glu Thr

1 5

<210> 573

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9E5 CDRL3

<400> 573

Gln Gln Tyr Asp His Leu Pro Ile Thr

1 5

<210> 574

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9F4 CDRL1

<400> 574

Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 575

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9F4 CDRL2

<400> 575

Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr

1 5

<210> 576

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9F4 CDRL3

<400> 576

Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Tyr Thr

1 5

<210> 577

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9F8 CDRL1

<400> 577

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 578

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9F8 CDRL2

<400> 578

Leu Asn Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 579

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：9F8 CDRL3

<400> 579

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 580

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD28.AYAA胞内

<400> 580

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Ala Tyr Ala Ala

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 581

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD28变体

<400> 581

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Phe Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Ala Arg Arg Ala Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 582

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD2 胞内（完全）；

<400> 582

Lys Arg Lys Lys Gln Arg Ser Arg Arg Asn Asp Glu Glu Leu Glu Thr

1 5 10 15

Arg Ala His Arg Val Ala Thr Glu Glu Arg Gly Arg Lys Pro His Gln

20 25 30

Ile Pro Ala Ser Thr Pro Gln Asn Pro Ala Thr Ser Gln His Pro Pro

35 40 45

Pro Pro Pro Gly His Arg Ser Gln Ala Pro Ser His Arg Pro Pro Pro

50 55 60

Pro Gly His Arg Val Gln His Gln Pro Gln Lys Arg Pro Pro Ala Pro

65 70 75 80

Ser Gly Thr Gln Val His Gln Gln Lys Gly Pro Pro Leu Pro Arg Pro

85 90 95

Arg Val Gln Pro Lys Pro Pro His Gly Ala Ala Glu Asn Ser Leu Ser

100 105 110

Pro Ser Ser Asn

115

<210> 583

<211> 85

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD2 胞内（截短）

<400> 583

Lys Arg Lys Lys Gln Thr Pro Gln Asn Pro Ala Thr Ser Gln His Pro

1 5 10 15

Pro Pro Pro Pro Gly His Arg Ser Gln Ala Pro Ser His Arg Pro Pro

20 25 30

Pro Pro Gly His Arg Val Gln His Gln Pro Gln Lys Arg Pro Pro Ala

35 40 45

Pro Ser Gly Thr Gln Val His Gln Gln Lys Gly Pro Pro Leu Pro Arg

50 55 60

Pro Arg Val Gln Pro Lys Pro Pro His Gly Ala Ala Glu Asn Ser Leu

65 70 75 80

Ser Pro Ser Ser Asn

85

<210> 584

<211> 42

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：OX40胞内

<400> 584

Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His

1 5 10 15

Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln

20 25 30

Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile

35 40

<210> 585

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ变体（1XX）

<400> 585

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Phe Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Phe Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 586

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ变体（XX3）

<400> 586

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Phe Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Phe Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 587

<211> 48

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD27胞内

<400> 587

Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser Pro Val Glu Pro

1 5 10 15

Ala Glu Pro Cys His Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Thr

20 25 30

Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Cys Ser Pro

35 40 45

<210> 588

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ变体（X2X）

<400> 588

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 589

<211> 48

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ变体（δ12）

<400> 589

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly

1 5 10 15

His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr

20 25 30

Asp Ala Leu His Met Gln Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

<210> 590

<211> 48

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ变体（δ23）

<400> 590

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

<210> 591

<211> 37

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3ζ变体（δ13）

<400> 591

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln

1 5 10 15

Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Arg Gly Arg Asp Pro

20 25 30

Glu Met Gly Gly Lys

35

<210> 592

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：R-利妥昔单抗模拟表位

<400> 592

Cys Pro Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Cys

1 5

<210> 593

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：Q- QBEND-10表位

<400> 593

Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser

1 5 10 15

<210> 594

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：Q- QBEND-10表位

<400> 594

Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser

1 5 10 15

Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Ala

20

<210> 595

<211> 55

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：QR3

<400> 595

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Cys Pro Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Cys

1 5 10 15

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn

20 25 30

Val Ser Thr Asn Val Ser Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Ala Cys Pro

35 40 45

Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Cys

50 55

<210> 596

<211> 62

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：QQ

<400> 596

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser

1 5 10 15

Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Ala Gly

20 25 30

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Leu Pro Thr Gln Gly Thr Phe Ser Asn

35 40 45

Val Ser Thr Asn Val Ser Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Ala

50 55 60

<210> 597

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD28铰链

<400> 597

Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu

20 25 30

Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro

35

<210> 598

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD28 TM

<400> 598

Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu

1 5 10 15

Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

20 25

<210> 599

<211> 250

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：4F11 scFv

<400> 599

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala

20 25 30

Arg Met Gly Val Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Thr Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ile Arg Asp Tyr Tyr Asp Ile Ser Ser Tyr Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp

130 135 140

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Met Ser Ala Ser Val Gly Asp

145 150 155 160

Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu

165 170 175

Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Arg Leu Ile Tyr

180 185 190

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

195 200 205

Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Leu Pro Glu

210 215 220

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Phe Pro Phe Thr

225 230 235 240

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Asn

245 250

<210> 600

<211> 245

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：8F8 scFv

<400> 600

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Tyr Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Asn Tyr Met Gly Asn Thr Ile Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asp Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Thr Ser Val Ser Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Arg Ala Glu Gly Ser Leu Asp Ala Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Ala Val Ser Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln

130 135 140

Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr

145 150 155 160

Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

165 170 175

Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Asn Leu

180 185 190

Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu

195 200 205

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr

210 215 220

Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Cys Thr Phe Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240

Lys Leu Glu Ile Lys

245

<210> 601

<211> 193

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD70

<400> 601

Met Pro Glu Glu Gly Ser Gly Cys Ser Val Arg Arg Arg Pro Tyr Gly

1 5 10 15

Cys Val Leu Arg Ala Ala Leu Val Pro Leu Val Ala Gly Leu Val Ile

20 25 30

Cys Leu Val Val Cys Ile Gln Arg Phe Ala Gln Ala Gln Gln Gln Leu

35 40 45

Pro Leu Glu Ser Leu Gly Trp Asp Val Ala Glu Leu Gln Leu Asn His

50 55 60

Thr Gly Pro Gln Gln Asp Pro Arg Leu Tyr Trp Gln Gly Gly Pro Ala

65 70 75 80

Leu Gly Arg Ser Phe Leu His Gly Pro Glu Leu Asp Lys Gly Gln Leu

85 90 95

Arg Ile His Arg Asp Gly Ile Tyr Met Val His Ile Gln Val Thr Leu

100 105 110

Ala Ile Cys Ser Ser Thr Thr Ala Ser Arg His His Pro Thr Thr Leu

115 120 125

Ala Val Gly Ile Cys Ser Pro Ala Ser Arg Ser Ile Ser Leu Leu Arg

130 135 140

Leu Ser Phe His Gln Gly Cys Thr Ile Ala Ser Gln Arg Leu Thr Pro

145 150 155 160

Leu Ala Arg Gly Asp Thr Leu Cys Thr Asn Leu Thr Gly Thr Leu Leu

165 170 175

Pro Ser Arg Asn Thr Asp Glu Thr Phe Phe Gly Val Gln Trp Val Arg

180 185 190

Pro

<210> 602

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：(GGGGS)4

<400> 602

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 603

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：Witlow接头

<400> 603

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 604

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：GGGGS接头

<400> 604

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 605

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链-12C6

<400> 605

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asn Ser His

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Val Thr Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn His Tyr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 606

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-12C6

<400> 606

Glu Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Met Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Met Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Glu Val Gly Phe Val Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 607

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12C6 Kabat

<400> 607

Asp Tyr Gly Met His

1 5

<210> 608

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12C6 Chothia

<400> 608

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 609

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH1:12C6延长

<400> 609

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 610

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12C6 Kabat

<400> 610

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 611

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH2:12C6 Chothia

<400> 611

Trp Tyr Asp Gly Ser Asn

1 5

<210> 612

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：重链-CDRH3:12C6

<400> 612

Asp Glu Val Gly Phe Val Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 613

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12C6 CDRL1

<400> 613

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asn Ser His Leu Ala

1 5 10

<210> 614

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12C6 CDRL2

<400> 614

Tyr Ala Ser Thr Leu Pro Ser

1 5

<210> 615

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：轻链：12C6 CDRL3

<400> 615

Gln Gln Leu Asn His Tyr Pro Ile Thr

1 5

<210> 616

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：41BB胞内信号传导结构域（ISD）

<400> 616

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

1 5 10 15

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

20 25 30

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 617

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：结构域：CD3-ζ胞内信号传导结构域（ISD）

<400> 617

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

Claims (103)

1.一种抑制CD70阳性细胞在体外或在患者中的增殖和/或活性的方法，所述方法包括使所述CD70阳性细胞与经工程化的免疫细胞接触的步骤，所述经工程化的免疫细胞包括或功能性地表达包括CD70结合结构域和跨膜结构域的CD70结合蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述使所述CD70阳性细胞与经工程化的免疫细胞接触的步骤在患者中进行，所述步骤包括向所述患者施用所述经工程化的免疫细胞。

3.一种在有需要的患者中进行淋巴细胞清除的方法，所述方法包括向所述患者施用经工程化的免疫细胞的步骤，其中所述经工程化的免疫细胞包括或功能性地表达包括CD70结合结构域和跨膜结构域的CD70结合蛋白，并且其中所述经工程化的免疫细胞抑制CD70阳性细胞在所述患者中的增殖和/或活性。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CD70结合结构域包括CD70抗体或CD70的受体或其CD70结合片段。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CD70结合结构域包括抗CD70抗体，任选地所述抗CD70抗体是scFv。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CD70结合蛋白进一步包括铰链结构域，任选地所述铰链结构域包括CD8铰链。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CD70结合蛋白进一步包括一个或多个选自由以下组成的组的胞内信号传导结构域：CD3ζ信号传导结构域、CD3δ信号传导结构域、CD3γ信号传导结构域、CD3ε信号传导结构域、CD28信号传导结构域、CD2信号传导结构域、OX40信号传导结构域和4-1BB信号传导结构域或其变体。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CD70结合蛋白包括CD3ζ或CD3γ信号传导结构域并且不包括共刺激结构域。

9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述CD70结合蛋白包括4-1BB信号传导结构域并且不包括CD3ζ信号传导结构域。

10.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述CD70结合蛋白包括4-1BB信号传导结构域和CD3ζ信号传导结构域。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一个或多个胞内结构域包括SEQID NO：265、271-278、281-295、311-337、580-591或616-617中的一个或多个的氨基酸序列。

12.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述CD70结合蛋白不包括胞内信号传导结构域。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CD70阳性细胞是所述患者中的正常或非癌淋巴细胞。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述CD70阳性细胞是T细胞、B细胞或NK细胞。

15.根据13或14所述的方法，其中所述CD70阳性细胞是经活化的T细胞。

16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经工程化的免疫细胞是外周血单核细胞(PBMC)、T细胞、NK细胞或其混合物，或者衍生自iPSC或由其产生。

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经工程化的免疫细胞对于所述患者是自体的或同种异体的。

18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经工程化的免疫细胞进一步包括内源性TCRa基因、内源性CD52基因和内源性CD70基因中的一种或多种的一个或多个基因组修饰，其中所述经工程化的免疫细胞与不具有所述一个或多个基因组修饰的对照免疫细胞相比表现出TCRa、CD52和/或CD70蛋白表达和/或活性的水平降低。

19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述患者患有或预期患有宿主抗移植物排斥。

20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述患者需要移植。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述患者需要骨髓移植、干细胞移植或组织移植，其中与未施用所述经工程化的免疫细胞的对照相比，所述移植在所述患者中表现出更长的持久性。

22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述患者正在接受过继细胞疗法，任选地其中所述过继细胞疗法是嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法。

23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述患者被进一步施用对所关注的靶标具有特异性的CAR T细胞。

24.根据权利要求23所述的方法，其中在所述患者被施用对所述所关注的靶标具有特异性的所述CAR T细胞之前、同时或之后，所述患者被施用所述经工程化的免疫细胞，并且任选地，在所述患者被施用所述CAR T细胞之前、同时或之后，所述患者被进一步施用淋巴细胞清除剂，并且任选地，所述淋巴细胞清除剂是化疗剂或抗CD52抗体。

25.根据权利要求23或24所述的方法，其中在所述患者被施用所述CART细胞之前、同时或之后，所述患者被进一步施用化疗剂，并且任选地，所述化疗剂是环磷酰胺。

26.根据权利要求23或24所述的方法，其中在所述患者被施用所述CAR T细胞之前、同时或之后，所述患者未被施用氟达拉滨。

27.根据权利要求23至26中任一项所述的方法，其中所述CART细胞在施用所述经工程化的免疫细胞的患者中表现出比未施用所述经工程化的免疫细胞的对照更长的持久性。

28.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述经工程化的免疫细胞进一步包括或功能性地表达对所关注的靶标具有特异性的另外的抗原结合结构域，任选地所述抗原结合结构域包括与所述所关注的靶标结合的抗体。

29.根据权利要求28所述的方法，其中一种蛋白质包括所述另外的抗原结合结构域和所述CD70结合蛋白，并且其中所述另外的抗原结合结构域包括与所述所关注的靶标结合的抗体，并且任选地，所述另外的抗原结合结构域包括scFv。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述一种蛋白质是双特异性CAR。

31.根据权利要求28所述的方法，其中所述另外的抗原结合蛋白表达为与所述CD70结合蛋白分离的蛋白质。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述分离的蛋白质进一步包括跨膜结构域和胞内信号传导结构域。

33.根据权利要求32所述的方法，其中所述分离的蛋白质包括选自由以下组成的组的胞内信号传导结构域：CD3ζ信号传导结构域、CD28信号传导结构域和4-1BB信号传导结构域。

34.根据权利要求31至33中任一项所述的方法，其中所述分离的蛋白质是对所述所关注的靶标具有特异性的CAR。

35.根据权利要求23至34中任一项所述的方法，其中所述所关注的靶标是与疾病病状相关的靶标。

36.根据权利要求35所述的方法，其中所述疾病病状是癌症。

37.根据权利要求35或36所述的方法，其中所述所关注的靶标是BCMA、EGFRvIII、Flt-3、WT-1、CD20、CD22、CD23、CD30、CD38、CD33、CD133、WT1、TSPAN10、MHC-PRAME、HER2、MSLN、PSMA、PSCA、GPC3、Livl、ADAM10、CHRNA2、LeY、NKG2D、CS1、CD44v6、ROR1、CD19、Claudin-18.2(Claudin-18A2或Claudin18同种型2)、DLL3(δ样蛋白3、果蝇属δ同源物3(DrosophilaDelta homolog 3)、δ3)、Muc17、Muc3、Muc16、FAPα(成纤维细胞活化蛋白α)、Ly6G6D(淋巴细胞抗原6复合基因座蛋白G6d、c6orf23、G6D、MEGT1、NG25)或RNF43(E3泛素蛋白连接酶RNF43，环指蛋白43)。

38.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经工程化的免疫细胞在CD70基因座处被基因修饰以降低CD70表达的水平。

39.根据权利要求1至37中任一项所述的方法，其中所述经工程化的免疫细胞在所述CD70基因座处未被基因修饰以降低CD70表达的水平。

40.一种治疗有需要的患者的疾病病状的方法，所述方法包括向所述患者施用经工程化的免疫细胞的步骤，所述经工程化的免疫细胞包括或功能性地表达包括CD70结合结构域和跨膜结构域的CD70结合蛋白，以及任选地单独的治疗剂，其中所述经工程化的免疫细胞抑制CD70阳性细胞在所述患者中的增殖和/或活性。

41.根据权利要求40所述的方法，其中所述CD70结合结构域包括CD70抗体或CD70的受体或其CD70结合片段。

42.根据权利要求40或41所述的方法，其中所述CD70结合结构域包括抗CD70抗体，任选地其中所述抗CD70抗体是scFv。

43.根据权利要求40至42中任一项所述的方法，其中所述CD70阳性细胞是正常或非癌淋巴细胞。

44.根据权利要求43所述的方法，其中所述正常淋巴细胞是T细胞、B细胞或NK细胞。

45.根据权利要求40至44中任一项所述的方法，其中所述经工程化的免疫细胞是PBMC。

46.根据权利要求40至45中任一项所述的方法，其中所述经工程化的免疫细胞是T细胞或NK细胞或其混合物，或者衍生自iPSC或由其产生。

47.根据权利要求40至46中任一项所述的方法，其中所述患者被施用治疗剂，所述治疗剂包括对所关注的靶标具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)T细胞。

48.根据权利要求47所述的方法，其中在所述患者被施用对所述所关注的靶标具有特异性的所述CAR T细胞之前、同时或之后，所述患者被施用所述经工程化的免疫细胞，并且任选地，在所述患者被施用所述CAR T细胞之前、同时或之后，所述患者被进一步施用化疗剂。

49.根据47或48所述的方法，其中在所述患者被施用所述CART细胞之前、同时或之后，所述患者被施用化疗剂，并且任选地，所述化疗剂是环磷酰胺。

50.根据权利要求47至49中任一项所述的方法，其中在所述患者被施用所述CART细胞之前、同时或之后，所述患者未被施用氟达拉滨。

51.根据权利要求47至50中任一项所述的方法，其中所述CART细胞在施用所述经工程化的免疫细胞的患者中表现出比未施用所述经工程化的免疫细胞的对照更长的持久性。

52.根据权利要求40至46中任一项所述的方法，其中所述经工程化的免疫细胞进一步包括或功能性地表达对所关注的靶标具有特异性的另外的抗原结合结构域，任选地所述抗原结合结构域包括与所述所关注的靶标结合的抗体。

53.根据权利要求52所述的方法，其中一种蛋白质包括所述另外的抗原结合结构域和所述CD70结合蛋白。

54.根据权利要求53所述的方法，其中所述一种蛋白质是双特异性CAR。

55.根据权利要求52至54中任一项所述的方法，其中所述另外的抗原结合结构域包括与所述所关注的靶标结合的抗体，并且任选地，与所述所关注的靶标结合的所述抗体包括scFv。

56.根据权利要求52所述的方法，其中所述另外的抗原结合结构域表达为与所述CD70结合蛋白分离的蛋白质。

57.根据权利要求56所述的方法，其中所述分离的蛋白质是对所述所关注的靶标具有特异性的CAR。

58.根据权利要求57所述的方法，其中对所述所关注的靶标具有特异性的所述CAR进一步包括跨膜结构域和胞内信号传导结构域。

59.根据权利要求58所述的方法，其中所述胞内信号传导结构域包括CD3z信号传导结构域、CD28信号传导结构域或4-1BB信号传导结构域。

60.根据权利要求47至59中任一项所述的方法，其中所述所关注的靶标是与疾病病状相关的靶标。

61.根据权利要求47至60中任一项所述的方法，其中所述所关注的靶标是BCMA、EGFRvIII、Flt-3、WT-1、CD20、CD22、CD23、CD30、CD38、CD33、CD133、WT1、TSPAN10、MHC-PRAME、HER2、MSLN、PSMA、PSCA、GPC3、Liv1、ADAM1v、CHRNA2、LeY、NKG2D、CS1、CD44v6、ROR1、CD19、Claudin-18.2(Claudin-18A2或Claudin18同种型2)、DLL3(δ样蛋白3、果蝇属δ同源物3、δ3)、Muc17、Muc3、Muc16、FAPα(成纤维细胞活化蛋白α)、Ly6G6D(淋巴细胞抗原6复合基因座蛋白G6d、c6orf23、G6D、MEGT1、NG25)或RNF43(E3泛素蛋白连接酶RNF43，环指蛋白43)。

62.根据权利要求47至61中任一项所述的方法，其中所述疾病病状是癌症。

63.根据权利要求62所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：胃癌(gastriccancer)、肉瘤、淋巴瘤(包含非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin′s lymphoma))、白血病、头颈癌、胸腺癌、上皮癌、唾液癌、肝癌、胃癌(stomach cancer)、甲状腺癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、食道癌、胰腺癌、神经胶质瘤、白血病、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、膀胱癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、口腔癌、皮肤癌和黑色素瘤。在一些实施例中，受试者是先前治疗的患有局部晚期或转移性黑色素瘤、鳞状细胞头颈癌(SCHNC)、卵巢癌、肉瘤或复发性或难治性经典霍奇金氏淋巴瘤(classic Hodgkin′s Lymphoma，cHL)的成年受试者。

64.一种治疗或预防有需要的患者中的宿主抗移植物排斥或反应的方法，所述方法包括向所述患者施用经工程化的免疫细胞，所述经工程化的免疫细胞包括或功能性地表达包括CD70结合结构域和跨膜结构域的CD70结合蛋白，其中所述CD70结合蛋白抑制CD70阳性细胞在所述患者中的增殖和/或活性。

65.一种经工程化的免疫细胞，其功能性地表达包括第一抗原结合结构域的蛋白质和包括第二抗原结合结构域的蛋白质，其中所述第一抗原结合结构域与所关注的靶标特异性结合，并且所述第二抗原结合结构域与CD70特异性结合，其中任选地所述第二抗原结合结构域包括抗CD70 scFv、抗CD70VHH、抗CD70 VH或CD70的受体，其中任选地所述CD70的受体是CD27或其CD70结合片段。

66.根据权利要求65所述的经工程化的免疫细胞，其中所述包括所述第一抗原结合结构域的蛋白质是第一CAR，并且所述包括所述第二抗原结合结构域的蛋白质是第二CAR。

67.根据权利要求65所述的经工程化的免疫细胞，其中一种蛋白质包括所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域两者。

68.根据权利要求67所述的经工程化的免疫细胞，其中所述一种蛋白质是双特异性CAR。

69.根据权利要求65至68中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述所关注的靶标是选自由以下组成的组的蛋白质：BCMA、EGFRvIII、Flt-3、WT-1、CD20、CD22、CD23、CD30、CD38、CD33、CD133、WT1、TSPAN10、MHC-PRAME、HER2、MSLN、PSMA、PSCA、GPC3、Liv1、ADAM10、CHRNA2、LeY、NKG2D、CS1、CD44v6、ROR1、CD19、Claudin-18.2(Claudin-18A2或Claudin18同种型2)、DLL3(δ样蛋白3、果蝇属δ同源物3、δ3)、Muc17、Muc3、Muc16、FAPα(成纤维细胞活化蛋白α)、Ly6G6D(淋巴细胞抗原6复合基因座蛋白G6d、c6orf23、G6D、MEGT1、NG25)或RNF43(E3泛素蛋白连接酶RNF43，环指蛋白43)。

70.根据权利要求65至68中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述所关注的靶标是选自由以下组成的组的蛋白质的人形式：BCMA、EGFRvIII、Flt-3、WT-1、CD20、CD22、CD23、CD30、CD38、CD33、CD133、WT1、TSPAN10、MHC-PRAME、HER2、MSLN、PSMA、PSCA、GPC3、Liv1、ADAM10、CHRNA2、LeY、NKG2D、CS1、CD44v6、ROR1、CD19、Claudin-18.2(Claudin-18A2或Claudin18同种型2)、DLL3(δ样蛋白3、果蝇属δ同源物3、δ3)、Muc1 7、Muc3、Mucl 6、FAPα(成纤维细胞活化蛋白α)、Ly6G6D(淋巴细胞抗原6复合基因座蛋白G6d、c6orf23、G6D、MEGT1、NG25)或RNF43(E3泛素蛋白连接酶RNF43，环指蛋白43)。

71.根据权利要求65至70中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述经工程化的免疫细胞进一步包括内源性TCRa基因、内源性CD52基因和内源性CD70基因中的一种或多种的一个或多个基因组修饰。

72.根据权利要求65至70中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述细胞包括以下中的一种或多种：

(a)在TRAC的一个或两个等位基因处的破坏，

(b)在CD52的一个或两个等位基因处的破坏，以及

(c)在CD70的一个或两个等位基因处的破坏，

任选地其中任何一个或多个破坏包括敲除。

73.根据权利要求65至72中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述经工程化的免疫细胞表达TRAC、CD52和CD70中的一种或多种的水平是未经工程化的免疫细胞中的表达水平的不大于90％、不大于75％、不大于50％、不大于25％或不大于10％。

74.根据权利要求65至73中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述经工程化的免疫细胞是经工程化的T细胞。

75.根据权利要求65至74中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述经工程化的免疫细胞包括编码所述包括第一抗原结合结构域的蛋白质的第一核酸和编码所述包括第二抗原结合结构域的蛋白质的第二核酸。

76.根据权利要求75所述的经工程化的免疫细胞，其中单个核酸包括所述第一核酸和所述第二核酸两者。

77.根据权利要求75所述的经工程化的免疫细胞，其中第一载体包括所述第一核酸，并且第二载体包括所述第二核酸，并且任选地其中一个或两个载体是慢病毒载体。

78.根据权利要求75所述的经工程化的免疫细胞，其中一个载体包括所述第一核酸和所述第二核酸两者，并且任选地其中所述载体是慢病毒载体或腺病毒载体。

79.根据权利要求76所述的经工程化的免疫细胞，其中载体包括所述核酸，并且任选地其中所述载体是慢病毒载体。

80.根据权利要求75所述的经工程化的免疫细胞，其中所述第一核酸和/或所述第二核酸位于破坏的TRAC基因座、破坏的CD52基因座或破坏的CD70基因座内。

81.根据权利要求76所述的经工程化的免疫细胞，其中所述单个核酸位于破坏的TRAC基因座、破坏的CD52基因座或破坏的CD70基因座内。

82.根据权利要求65至81中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述免疫细胞是或源自从健康志愿者获得的免疫细胞、从患者获得或衍生自iPSC。

83.一种根据权利要求71至82中任一项所述的经工程化的免疫细胞群体，其中不超过75％的所述经工程化的免疫细胞功能性地表达TRAC、CD52和CD70中的一种或多种。

84.根据权利要求83所述的经工程化的免疫细胞群体，其中所述经工程化的免疫细胞群体包括至少10％经工程化的T细胞、至少20％经工程化的T细胞、至少30％经工程化的T细胞、至少40％经工程化的T细胞、至少50％经工程化的T细胞、至少75％经工程化的T细胞或至少90％经工程化的T细胞。

85.根据权利要求83至84中任一项所述的经工程化的免疫细胞群体，其中至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少75％或至少90％的所述经工程化的细胞包括内源性TCRa基因、内源性CD52基因和内源性CD70基因中的一种或多种的一个或多个基因组修饰。

86.根据权利要求83至85中任一项所述的经工程化的免疫细胞群体，其中所述群体包括10³个至10¹⁰个细胞。

87.一种细胞群体，其包括10³个至10¹⁰个根据权利要求65至82中的一项或多项所述的经工程化的免疫细胞。

88.根据权利要求83至87中任一项所述的经工程化的免疫细胞群体，其中所述经工程化的免疫细胞群体源自从健康志愿者获得的一种或多种免疫细胞，源自从患者获得的一种或多种免疫细胞或者衍生自一种或多种iPSC。

89.一种药物组合物，其包括根据权利要求65至82中任一项所述的经工程化的免疫细胞中的一种或多种或根据权利要求83至88中任一项所述的经工程化的免疫细胞群体，并且进一步包括至少一种药学上可接受的载剂或赋形剂。

90.一种制备根据权利要求71至82中任一项所述的经工程化的免疫细胞的方法，所述方法包括使用一种或多种选自由TALEN、锌指、Cas-CLOVER和CRISPR/Cas系统组成的组的基因编辑技术来降低TRAC、CD52和CD70中的一种或多种在免疫细胞中的功能性表达。

91.一种制备根据权利要求65至82中任一项所述的经工程化的免疫细胞的方法，所述方法包括将编码所述包括第一抗原结合结构域的蛋白质的第一核酸和编码所述包括第二抗原结合结构域的蛋白质的第二核酸引入到免疫细胞中。

92.根据权利要求91所述的方法，其中一个载体包括所述第一核酸和所述第二核酸两者，任选地其中所述载体是慢病毒载体或腺相关病毒载体。

93.根据权利要求91所述的方法，其中第一载体包括所述第一核酸并且第二载体包括所述第二核酸，任选地其中所述第一载体和所述第二载体中的任一者或两者是慢病毒载体，或者所述第一载体和所述第二载体中的任一者或两者是腺相关病毒载体。

94.根据93所述的方法，其中所述第一核酸和所述第二核酸通过位点特异性整合引入到所述经工程化的免疫细胞中，并且任选地，所述第一载体和所述第二载体中的任一者或两者是腺相关病毒载体。

95.一种治疗患者的病状或疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用根据权利要求65至82中任一项所述的经工程化的免疫细胞中的一种或多种、根据权利要求83至88中任一项所述的经工程化的免疫细胞群体或根据权利要求89所述的药物组合物。

96.根据权利要求95所述的方法，其中所述病状或疾病是实体瘤或血液瘤。

97.根据权利要求95所述的方法，其中所述病状或疾病是病毒性疾病、细菌性疾病、癌症、炎性疾病、免疫疾病或衰老相关疾病。

98.根据权利要求95所述的方法，其中所述病状或疾病选自由以下组成的组：胃癌(gastric cancer)、肉瘤、淋巴瘤(包含非霍奇金氏淋巴瘤)、白血病、头颈癌、胸腺癌、上皮癌、唾液癌、肝癌、胃癌(stomach cancer)、甲状腺癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、食道癌、胰腺癌、神经胶质瘤、白血病、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、膀胱癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、口腔癌、皮肤癌和黑色素瘤。

99.根据权利要求95所述的方法，其中所述患者是先前治疗的患有局部晚期或转移性黑色素瘤、鳞状细胞头颈癌(SCHNC)、卵巢癌、肉瘤或复发性或难治性经典霍奇金氏淋巴瘤(cHL)的成年受试者。

100.根据权利要求95至99中任一项所述的方法，其中所述方法包括施用每kg体重约10³个或10⁴个至约10⁹个根据权利要求65至82中任一项所述的经工程化的免疫细胞或每kg体重约10⁵个至约10⁶个根据权利要求65至82中任一项所述的经工程化的免疫细胞或每kg体重0.1x10⁶个至5x10⁶个根据权利要求65至82中任一项所述的经工程化的免疫细胞。

101.根据权利要求100所述的方法，其中所述细胞以单剂量施用。

102.根据权利要求100所述的方法，其中所述经工程化的免疫细胞在一定时间段内以多于一个剂量施用。

103.根据权利要求95至102中任一项所述的方法，其中所述经工程化的免疫细胞抑制CD70阳性淋巴细胞在所述患者中的增殖和/或活性。