CN117482072A - 山梨糖醇在制备治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抗病毒药物技术领域，具体公开山梨糖醇在制备治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中的应用。本发明提供的山梨糖醇在制备治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中的应用中，证实了山梨糖醇可抑制呼吸道合胞病毒的增殖及对宿主细胞的感染，可用作治疗呼吸道合胞病毒感染引起的疾病的特效药。同时，山梨糖醇是低毒高效的抗呼吸道合胞病毒的药物，可满足作为治疗6个月以下婴儿患合胞病毒所致细支气管炎和肺炎等下呼吸道感染疾病的药物的要求，并达到对合胞病毒在细胞内外复制的显著抑制作用。
Description
技术领域
本发明涉及抗病毒药物技术领域，具体涉及山梨糖醇在制备治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中的应用。
背景技术
呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)属于副黏病毒科的肺病毒属(Pneumovirus)，只有一种血清型。病毒形态为球形，直径为120-300nm，有包膜，基因组为非分节段的单负链RNA。其主要引起6个月以下婴儿患细支气管炎和肺炎等下呼吸道感染，以及较大儿童和成人的鼻炎、感冒等上呼吸道感染。到目前为止，尚没有任何特效药物能够治愈呼吸道合胞病毒引起的6个月以下婴儿患细支气管炎和肺炎等下呼吸道感染疾病。利巴韦林是美国FDA唯一批准的RSV抗病毒治疗药物，通过抑制IMP阻碍病毒核酸的合成，但对病毒无直接灭活作用。美国儿科学会不推荐常规使用利巴韦林，但在严重RSV感染或具有高危因素的RSV感染患儿可以考虑应用，比如患有严重RSV感染并导致需要机械通气的婴儿、婴儿肺移植群体(Tiffany L Turner et al.Respiratory syncytial virus:current andemerging treatment options[J].Clinicoecon Outcomes Res.2014(6):217-225)。
山梨糖醇，其化学名称为1,2,3,4,5,6-己六醇，分子式C6H14O6，相对分子质量182.17。英文名：Sorbitol，CAS：50-70-4，其结构式如下：
山梨糖醇是一种甜味剂，广泛存在于自然界的植物果实中，工业生产中主要由淀粉水解后的葡萄糖加氢制得，是淀粉深加工的重要产品之一。同时山梨糖醇也是一种重要的工业原料，应用于医疗、化工、轻工、食品等行业，在国内山梨糖醇主要用于生产维生素C。现有山梨糖醇具有利尿、脱水的特性，可以直接作为药物用于治疗脑水肿、青光眼以及心肾功能正常的水肿少尿等疾病，以达到降低颅内压、防止水肿的效果。口服山梨醇能促进胆囊收缩，刺激胰腺分泌胰脂肪酶，增加肝胆汁的分泌，同时山梨醇不被胃酶分解，可以加速小肠的蠕动，因而可以用于改善慢性肝胆、胃肠疾病患者的症状。但现有公开报道中均未公开其具有抗呼吸道合胞病毒的相关作用。
发明内容
为了克服现有抗呼吸道合胞病毒药物技术的不足，本发明提供了山梨糖醇在制备治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中的应用，并通过大量实验证明其可用作治疗呼吸道合胞病毒感染引起的疾病，并具有低毒高效的特点，可满足6个月以下婴儿的药物服用要求。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
山梨糖醇在制备治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中的应用。
所述山梨糖醇的分子式为：
优选的，所述药物中包含山梨糖醇。
优选的，所述药物中还包括药学上可接受的载体或辅料。
优选的，所述药物的剂型为固体或液体。
本发明提供的山梨糖醇在制备治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中的应用中，通过抗呼吸道合胞病毒药物体外筛选模型，证实了山梨糖醇在作为治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中，可抑制呼吸道合胞病毒的增殖及感染宿主细胞，可用作治疗呼吸道合胞病毒感染引起的疾病的特效药。同时，山梨糖醇是小分子化合物，其CC50为72.25μM，能够剂量依赖的抑制呼吸道合胞病毒的复制，其IC50(半数抑制浓度)为0.86μM，选择指数(SI)约为84，说明该山梨糖醇是低毒高效的抗呼吸道合胞病毒的药物，可满足作为治疗6个月以下婴儿患合胞病毒所致细支气管炎和肺炎等下呼吸道感染疾病的药物的要求，并达到对合胞病毒在细胞内外复制的显著抑制作用。
附图说明
图1为山梨糖醇对Hela细胞的细胞毒性检测曲线图；
图2为基于荧光定量PCR检测山梨糖醇对细胞内呼吸道合胞病的抑制率检测曲线图；
图3为基于荧光定量PCR检测山梨糖醇对细胞外呼吸道合胞病的抑制率检测曲线图；
图4为基于酶联免疫吸附实验ELISA检测山梨糖醇对细胞外呼吸道合胞病的抑制率检测曲线图；
图5为对比例中利巴韦林和山里糖醇对胞外呼吸道合胞病毒的抑制率检测图；
图6为对比例中利巴韦林和山里糖醇对胞内呼吸道合胞病毒的抑制率检测图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为常规市售商品，或者可以通过常规方法制备。
目前，抗呼吸道合胞病毒药物体外筛选的细胞培养模型是最常用的筛选模型，其优点在于：可提供大量遗传性状相同的细胞为研究对象，操作方便，可消除其它外界因素的影响，并可以检测药物的有效浓度和治疗指数，为后期机理研究提供更多基础。
实施例采用细胞培养筛选法检测所述山梨糖醇对呼吸道合胞病毒感染Hela细胞的影响，基于对上清和细胞内病毒核酸拷贝数的检测和基于酶联免疫吸附实验(ELISA)的病毒抗原检测定量分析山梨糖醇抗呼吸道合胞病毒活性。
实施例
山梨糖醇抗呼吸道合胞病毒活性的检测。
1.实验材料
1.1细胞、病毒和药物
HeLa细胞购自ATCC(货号：HTB-037)。
呼吸道合胞病毒为实验室冻存。
山梨糖醇(CAS:73573-88-3)购于Sigma公司。
1.2试剂
DMEM培养基和FBS购自GIBCO公司。
CCK8细胞活性检测试剂盒购自Thermofisher公司。
SYBR混合液(iTaqTMUniversalGreen Supermix)购自Bio-Rad公司。
1.3实验仪器
定量RCP仪(Bio-Rad CFX96 TouchTMReal-Time PCR detection system)购自Bio-Rad公司。
多标记微孔板读取仪购自PerkinElmer公司。
1.0R型冷冻离心机和细胞培养箱购自Thermofisher公司。
2.实验方法与结果
2.1 HeLa细胞培养
37℃、5％的CO2加湿培养箱中培养。使用含有10％FBS、100U/mL的青霉素和链霉素的DMEM培养基。细胞至90％汇合度后传代，传代比例为1/3-1/4。
2.2病毒保存
200μl/管分装并置-70℃冻存备用。
2.3山梨糖醇的细胞毒性检测
Hela细胞按6×103细胞/孔(100μl)接种于96孔细胞培养板中，细胞贴壁后备用；用细胞维持液(DMEM+2％血清)将山梨糖醇以100μM为最高浓度按照2倍梯度稀释共计6个梯度(100μM，50μM，25μM，12.5μM，6.25μM，3.125μM)进行处理，每梯度3个复孔。培养48h后弃掉培养上清，于每孔中加入10μl含有CCK8试剂，置细胞培养箱中继续培养1h，1h后用酶标仪测定在450nm处的吸光度，计算细胞存活率。
检测结果如图1所示，山梨糖醇对Hela细胞的CC50为72.25μM/L。在小于6.25μM范围内对Hela细胞完全没有细胞毒性，说明山梨糖醇有比较安全的适用范围，即山梨糖醇的给药剂量按照细胞实验用量为0.25μM-4.0μM。
2.4基于荧光定量PCR检测山梨糖醇抑制呼吸道合胞病毒复制的效率。以下实验均在BSL-2实验室中进行。
2.4.1将Hela细胞按1.0×104细胞/孔接种于48孔细胞培养板中，37℃细胞培养箱中培养，待细胞长成单层后备用。将孔板中培养基弃去，PBS清洗两遍后，加入1.0MOI病毒液和各浓度梯度药物共500μl于37℃细胞培养箱中培养。药物以4.0μM为起始浓度，连续2倍梯度稀释5个梯度，每梯度设置3个复孔。培养120h后取各实验孔上清和细胞提取RNA，逆转录为cDNA，然后进行荧光定量PCR检测。
2.4.2 120h后收样，用Trizol收取细胞上清与细胞，病毒灭活后带出生物安全二级(BSL-2)实验室，用于RNA提取。
2.4.3按天漠科技公司TR205-50试剂盒说明提取病毒样品中的RNA。
2.4.4得到的RNA按庄盟ZR102反转录试剂盒说明逆转录为cDNA。
2.4.5通过基因组定量PCR方法(QPCR)检测基因组复制水平。定量RCR引物针对呼吸道合胞病毒的N基因序列，定量RCR引物的碱基序列如下：
上游引物：5'-TGACAGCAGAAGAACTAGGGC-3'；
下游引物：5'-TGGGTGATGTGAATTTGCCCT-3'。
同时选择管家基因GADPH作为校正的内参对照基因，针对GADPH的定量RCR引物如下：
上游引物：5'-GCTCCCTCTTTCTTTGCAGCAAT-3'；
下游引物：5'-TACCATGAGTCCTTCCACGATAC-3'。
2.4.6定量的Ct值通过内参基因(GAPDH)进行校对，各组数据以组作为标准组进行归一计算，计算公式为：病毒复制抑制率＝1-药物组/阴性对照组×100％。结果通过GraphPad Prism 8软件计算出平均值、标准差及IC50。
2.4.7利用步骤(2.4.6)中的计算结果绘制山梨糖醇抑制呼吸道合胞病毒复制的结果图。结果如图2和图3所示。
图2显示：在Hela细胞中，山梨糖醇能剂量依赖地抑制呼吸道合胞病毒的复制水平，其对呼吸道合胞病毒复制的IC50(半数抑制浓度)为0.74μM/L。
图3显示：在Hela细胞培养液上清中，山梨糖醇能剂量依赖地抑制呼吸道合胞病毒的复制水平，其对呼吸道合胞病毒复制的IC50(半数抑制浓度)为0.86μM/L升。
2.5基于酶联免疫吸附实验(ELISA)检测山梨糖醇抑制呼吸道合胞病毒复制的效率。以下实验均在BSL-2实验室中进行。
2.5.1将Hela细胞按1.0×104细胞/孔接种于48孔细胞培养板中，37℃细胞培养箱中培养，待细胞长成单层后备用。将孔板中培养基弃去，PBS清洗两遍后，加入1.0MOI病毒液和各浓度梯度药物共500μl于37℃细胞培养箱中培养。药物以4.0μM为起始浓度，连续2倍梯度稀释5个梯度，每梯度设置3个复孔。培养120h后取各实验孔上清和细胞进行酶联免疫吸附实验(ELISA)检测。
2.5.2 120h后收样，收取细胞上清与细胞，病毒灭活后带出生物安全二级(BSL-2)实验室。
2.5.3在收取的细胞中加入细胞裂解液100μl(50mM Tris，0.5％NP-40，1mM EDTA和100mM NaCl)，4℃摇床上裂解1小时，转移到1.5毫升EP管中，然后在离心机上4℃，12000rpm离心10分钟，收取上清。
2.5.4按百济神州SEK11049(呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒)的说明书检测上述细胞上清和细胞裂解液上清。
2.5.5测定OD450值的计算公式为：病毒复制抑制率(％)＝1-药物组OD450值/阴性对照组OD450值×100％。结果通过GraphPad Prism 8软件绘出抑制曲线。
2.5.6利用步骤(2.5.5)中的计算结果绘制山梨糖醇抑制呼吸道合胞病毒的复制的结果图。结果如图4所示。
图4结果分别显示：在Hela细胞外(上清)中，山梨糖醇能剂量依赖地抑制呼吸道合胞病毒的复制水平。
对比例
利用实施例中的荧光定量PCR检测方法，检测利巴韦林对呼吸道合胞病毒的抑制水平。经检测，若要使利巴韦林达到与山梨糖醇对呼吸道合胞病毒的抑制水平，利巴韦林的使用浓度要远高于山梨糖醇，如图5-6所示。图5为利巴韦林和山里糖醇对胞外呼吸道合胞病毒抑制率达到相当水平，所使用的利巴韦林的浓度(50uM)和山里糖醇的浓度(2uM)。图6为利巴韦林和山里糖醇对胞内呼吸道合胞病毒抑制率达到相当水平，所使用的利巴韦林的浓度(50uM)和山里糖醇的浓度(2uM)。
这进一步证实了本申请提供的山梨糖醇在抑制呼吸道合胞病毒中起到针对性和高效性的特点。
Claims (4)
1.山梨糖醇在制备治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的山梨糖醇在制备治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中的应用，其特征在于：所述药物中包含山梨糖醇。
3.如权利要求2所述的山梨糖醇在制备治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中的应用，其特征在于：所述药物中还包括药学上可接受的载体或辅料。
4.如权利要求1-3任一项所述的山梨糖醇在制备治疗呼吸道合胞病毒所致疾病的药物中的应用，其特征在于：所述药物的剂型为固体或液体。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4145252A (en) * | 1977-08-17 | 1979-03-20 | Merck & Co., Inc. | Respiratory syncytial vaccine |
| GB1560185A (en) * | 1977-02-09 | 1980-01-30 | Merck & Co Inc | Respiratory syncytical virus vaccine |
| CN104271119A (zh) * | 2012-03-05 | 2015-01-07 | 由卫生福利和体育大臣代表的荷兰王国 | 用于稳定干燥的生物材料的方法和组合物 |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1560185A (en) * | 1977-02-09 | 1980-01-30 | Merck & Co Inc | Respiratory syncytical virus vaccine |
| US4145252A (en) * | 1977-08-17 | 1979-03-20 | Merck & Co., Inc. | Respiratory syncytial vaccine |
| CN104271119A (zh) * | 2012-03-05 | 2015-01-07 | 由卫生福利和体育大臣代表的荷兰王国 | 用于稳定干燥的生物材料的方法和组合物 |
| US20150030629A1 (en) * | 2012-03-05 | 2015-01-29 | De Staat der Nederlanden, Vert. Door De Minister Van VWS, Ministerie van Volksgezondheid, Welzijn | Methods and compositions for stabilizing dried biological materials |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| GUPTA, CK等: "Stabilization of respiratory syncytial virus (RSV) against thermal inactivation and freeze-thaw cycles for development and control of RSV vaccines and immune globulin", 《VACCINE》, vol. 14, no. 15, 1 October 1996 (1996-10-01), pages 1417 - 1420, XP004070953, DOI: 10.1016/S0264-410X(96)00096-5 * |
| 向延根编著: "《临床标本的正确采集及运送》", 28 February 2007, 湖南科学技术出版社, pages: 116 * |
| 王明俊等主编: "《兽医生物制品学》", 31 July 1997, 中国农业出版社, pages: 346 * |
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