CN117481130A - 一种烟草根结线虫的防治方法 - Google Patents

一种烟草根结线虫的防治方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于植物保护技术领域，具体公开了一种烟草根结线虫的防治方法，所述方法为使用原百部碱或墙草碱应用在烟草根结线虫的防治中，本发明对从植物中提取出的有效生物碱成分进行了筛选，混配了新的杀线虫剂，提供了新的线虫防治方法，通过对植物源杀线虫剂更深入的科学研究，为开发高效、安全的植物源杀线虫剂新产品提供了依据，具有重要的经济意义、生态意义和社会意义。

Description

一种烟草根结线虫的防治方法
技术领域
本发明属于植物保护技术领域，具体涉及一种烟草根结线虫的防治方法。
背景技术
根结线虫(Meloidogynespp.)在烟草根组织内为害，使根系畸形呈结状，故称为烟草根结线虫病。发病烟株因根系受损，吸收水分及养分能力下降，叶片表现黄化、植株矮小，导致烟叶产量和品质降低，从而造成严重的经济损失。近年来，由于烟草种植标准化、集中化的发展，重茬率不断提高，因此，烟草根结线虫病的发生逐年加重，已成为烟草种植中的主要病害之一。
国内外关于根结线虫的防治方法有很多，化学防治仍然是根结线虫防治最主要的方法，但抗药性的产生始终是是化学防治中的一大问题，虽然目前对根结线虫抗药性的研究报道比较少，但许多地区在杀线虫剂的使用过程中，已出现一些药剂防治效果越来越差的情况，因此对根结线虫的抗药性应足够警惕和加强监测。
与化学杀虫剂相比，植物源天然产物杀虫剂的有效成分主要为天然化合物，施用后较易降解为无毒物质，对环境无不良影响,植物源杀虫剂与有害生物之间的相互作用是自然演化形成的生化过程，不易产生耐药性。植物源生物碱类杀虫剂是植物源杀虫剂的重要组成部分，研究发现，大多生物碱类化合物对昆虫有触杀、胃毒及拒食作用，已经发现的生物碱约有12000种，有500种以上植物中含杀虫活性生物碱，这些生物碱分布于豆科、茄科、毛茛科、百合科、卫矛科等100多科植物中，其中藜芦碱、小檗碱、苦参碱等已广泛应用于农业生产，尤其是杀虫剂开发的重点，近些年来，杀线虫剂的登记数量增长迅速，但对线虫有效植物源杀线剂研究相对较少，登记产品仅有苦参碱，因此筛选更多对线虫有效的植物源杀线剂对烟草根结线虫的防治十分有必要。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种植物源杀线虫剂，为烟草根结线虫的防治提供具有潜在开发和应用前景的绿色杀虫剂，以减少化学杀线虫剂对环境的污染，以及抗药性问题带来的防治困境。
为实现以上目的，本发明提供以下技术方案：
原百部碱或墙草碱在烟草根结线虫的防治中的应用。
一种烟草根结线虫的防治方法，所述方法为施用杀线虫剂，所述杀线虫剂由阿维菌素与墙草碱复配而成，阿维菌素与墙草碱的质量比为1～8:8～1。
优选的，所述阿维菌素与墙草碱的质量比为1:4。
本发明还提供了另一种一种烟草根结线虫的防治方法，所述方法为施用杀线虫剂，所述杀线虫剂由阿维菌素与原百部碱复配而成，阿维菌素与原百部碱的质量比为1：2。
本发明达到的技术效果：
本发明经过对多种植物源生物碱的筛选，得出墙草碱对烟草根结线虫的防治效果最好，原百部碱和芥子碱次之，将三种生物碱与阿维菌素按照一定比例混合后，通过测试后计算混配后的共毒因子(CTF)，发现阿维菌素与墙草碱、原百部碱分别混配后，具有增效作用，通过进一步的不同比例混配室内毒力测试，发现阿维菌素与原百部碱的最佳混配比为1:2，共毒系数(CTC)为158.68，具有增效作用，阿维菌素与墙草碱增效作用最为明显，阿维菌素与墙草碱最佳混配比为1:4，共毒系数(CTC)达到778.39，相对其他配比增效作用极其显著。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，并不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域的普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他所有实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例1
一种烟草根结线虫的防治方法，所述方法为施用杀线虫剂，所述杀线虫剂由阿维菌素与墙草碱复配而成，阿维菌素与墙草碱的质量比为1:4。
实施例2
一种烟草根结线虫的防治方法，所述方法为施用杀线虫剂，所述杀线虫剂由阿维菌素与原百部碱复配而成，阿维菌素与原百部碱的质量比为1:2。
试验验证
1材料和方法
1.1供试根结线虫
根结线虫选自在贵州省毕节烟区栽培的烟草(品种：“云烟87”)上繁育的烟草根结线虫，后经贝尔曼漏斗法分离所得的二龄根结线虫，制成2500条/ml二龄线虫悬液。
1.2供试药剂
药剂(原药) CAS号 纯度 生产厂家
水苏碱 471-87-4 98％ 四川维克奇生物科技有限公司
葫芦巴碱 535-83-1 98％ 上海源叶生物科技有限公司
原百部碱 27495-40-5 98％ 上海源叶生物科技有限公司
墙草碱 18836-52-7 95％ 上海源叶生物科技有限公司
莲碱 548-08-3 98％ 上海源叶生物科技有限公司
吴茱萸碱 518-17-2 98％ 山西玉宁生物科技有限公司
胡蔓藤碱乙 82375-29-9 98％ 上海源叶生物科技有限公司
芥子碱 18696-26-9 98％ 上海源叶生物科技有限公司
阿维菌素 71751-41-2 90％ 华北制药爱诺股份有限公司生产
2室内毒力测定
2.1药剂初筛
水苏碱、葫芦巴碱和芥子碱用水溶解，其他药剂用丙酮(分析纯)溶解，试验采用直接接触法进行,首先，进行生物碱类化合物筛选，将药剂用0.1％的吐温80分别配制成1.25g/L的母液，以0.1％的吐温80做对照，在96孔细胞培养板上分别滴加100μL药液和100μL二龄线虫悬液，置于25℃(黑暗)条件下的培养箱中培养24h后统计线虫死亡数量和存活数量，接着将死亡率超过90％的药剂配100mg/L的溶液再次进行上述实验。
2.2优选生物碱室内毒力测定
参考《NT/Y 1833.1-2009农药室内生物测定试验准则杀线虫剂第1部分抑制植物病原线虫试验浸虫法》将选取的化合物，分别稀释为100mg/L、50mg/L、25mg/L、12.5mg/L、6.25mg/L、3.125mg/L、1.5625mg/L，在96孔细胞培养板上分别滴加100μL药液和100μL二龄线虫悬液，以0.1％的吐温80水溶液做空白对照，每个浓度重复4次,置于25℃(黑暗)条件下的培养箱中培养24h后统计线虫死亡数量和存活数量。
死亡率(％)＝死亡线虫数量/(存活线虫数量+死亡线虫数量)×100％
校正死亡率(％)＝(处理组死亡率-对照组死亡率)/(1-对照组死亡率)×100％。
2.3混合药剂对烟草根结线虫的增效作用
采用Mansour法，将药剂按照LC50浓度减半配置后，用阿维菌素与生物碱两两混配后处理烟草根结线虫，计算死亡率、共毒因子，利用每个混剂的共毒因子判断其增效程度。
共毒因子(CTF)＝(实际死亡率-预期死亡率)/预期死亡率×100
共毒因子≥20为增效作用；共毒因子≤-20为拮抗作用；共毒因子在-20至+20之间表示为相加作用。
确定最佳混剂组合后，按照孙云沛法，以单剂LC50浓度，按不同比例混合，配制出相应的混剂，在96孔细胞培养板上分别滴加100μL药液和100μL二龄线虫悬液，以0.1％的吐温80水溶液做空白对照，每个浓度重复4次,置于25℃(黑暗)条件下的培养箱中培养24h后统计线虫死亡数量和存活数量,对混剂进行室内毒力测定，计算共毒系数(co-toxicitycofficient，CTC)判定增效程度，计算公式如下(P为单剂A和B在混剂中的含量)：
毒力指数(TI)＝标准药剂LC50/供试药剂LC50×100；
混剂的实测毒力指数(ATI)＝标准药剂LC50/混剂LC50×100；
混剂的理论毒力指数(TTI)＝TIa×Pa+TIb×Pb；
混剂的共毒系数(CTC)＝ATI/TTI×100。
共毒系数≥120为增效作用，共毒系数≤80为拮抗作用，共毒系数在80至120之间为相加作用。
3结果
3.1初筛结果
由表1，通过试验对生物碱药剂的2次筛选结果可以看出，当浓度较高时，原百部碱、墙草碱、吴茱萸碱、胡蔓藤碱乙、芥子碱对烟草二龄根结线虫都具有较好的致死效果，当浓度降低时，仅有原百部碱、墙草碱和芥子碱效果达到了90％以上。
表1试剂初筛结果
3.2三种生物碱对烟草根结线虫的毒力
由表2，从试验结果可以看出，三种生物碱对烟草根结线虫的毒力从大到小依次为墙草碱、原百部碱、芥子碱，其LC50值分别为1.7821mg/L、4.0851mg/L、11.7218mg/L。
表2三种生物碱及阿维菌素对烟草根结线虫的毒力(24h)
药剂 回归方程 LC50(mg/L) 95％置信区间 相关系数R2
原百部碱 y＝1.2424+2.0324x 4.0851 3.0464-5.4765 0.9989
墙草碱 y＝0.4577+1.8246x 1.7821 1.6730-1.8965 0.9801
芥子碱 y＝1.9573+1.8318x 11.7218 9.8121-14.0043 0.9726
阿维菌素 y＝0.7303+1.9971x 2.3213 1.5332-3.5148 0.9840
由表3，从试验结果可以看出，当阿维菌素同三种生物碱进行混配后，对烟草根结线虫进行测试，阿维菌素与原百部碱、阿维菌素与墙草碱混配后呈现增效作用，且阿维菌素与墙草碱增效作用最为明显，大于其他配组。
表3不同配组混剂对烟草根结线虫毒杀效果
由表4，从试验结果可以看出，阿维菌素和原百部碱不同比例混配时，药效评价为相加或增效，当阿维菌素和原百部碱混配比为1:2时，共毒系数(CTC)值最高为158.68，说明阿维菌素和原百部碱最佳配比为1:2。
表4阿维菌素和原百部碱不同混配比例对烟草根结线虫毒杀效果
注：阿维菌素的浓度为2.3mg/L，原百部碱浓度为4.1mg/L，按照上述比例混合后与烟草根结线虫1:1混合，药品稀释后均在4℃冰箱保存备用。
由表5，从试验结果可以看出，阿维菌素和墙草碱混配时，药效评价为相加或增效，当阿维菌素和墙草碱混配比为1:4时，共毒系数(CTC)值最高为778.39，说明阿维菌素和墙草碱最佳混配比为1:4。
表5阿维菌素和墙草碱不同混配比例对烟草根结线虫毒杀效果
注：阿维菌素的浓度为2.3mg/L，墙草碱浓度为1.8mg/L，按照上述比例混合后与烟草根结线虫1:1混合，药品稀释后均在4℃冰箱保存备用。
室内毒力测试结果表明，不同植物源生物碱对烟草根结线虫的毒力有着较为明显的差别，经过两次筛选，得出墙草碱对烟草根结线虫的防治效果最好，原百部碱和芥子碱次之，将三种生物碱与阿维菌素按照一定比例混合后，通过计算混配后的共毒因子(CTF)，发现阿维菌素与墙草碱、原百部碱分别混配后，具有增效作用，通过进一步的不同比例混配，室内毒力测试发现阿维菌素与原百部碱的最佳混配比为1:2，具有增效作用；阿维菌素与墙草碱增效作用最为明显，阿维菌素与墙草碱最佳混配比为1:4，共毒系数(CTC)达到778.39，相对其他配比增效作用极其显著。
农药混配具有投资少、用药量少、用药次数少、成本低、增加效果快、延长持效期、扩大防治对象、克服或延缓抗药性等特点，是目前对农业害虫综合治理及其抗药性综合治理的重要有力措施之一，目前在烟草中使用虽未检测到显著的抗药性，但宫远福等在大连地区检测到南方根结线虫种群对阿维菌素产生了抗性，抗性水平是敏感种群的5.13倍，可见一些常用杀线虫剂的抗药性积累，使得根结线虫的防治工作更加艰巨，试验中发现，阿维菌素与墙草碱具有显著的互补增效作用，极大的降低了阿维菌素的使用量，阿维菌素是目前根结线虫防治最常用的药物之一，通过药物复配的方式，极大的降低了阿维菌素带来的抗药性问题，为解决生产过程中的实际问题，提供了新的应对方法。
我国拥有丰富的植物资源，但长期以来，我国对植物源杀虫剂的研究与开发主要集中在筛选和发现更多的植物源上，而未对植物源的有效成分深入研究，本发明对从植物中提取出的有效生物碱成分进行了筛选，混配了新的杀线虫剂，增加了烟草根结线虫防治方法，通过对植物源杀线虫剂更深入的科学研究，为开发高效、安全的植物源杀线虫剂新产品提供了依据，具有重要的经济意义、生态意义和社会意义。

Claims (4)

1.原百部碱或墙草碱在烟草根结线虫的防治中的应用。
2.一种烟草根结线虫的防治方法，其特征在于，所述方法为施用杀线虫剂，所述杀线虫剂由阿维菌素与墙草碱复配而成，阿维菌素与墙草碱的质量比为1～8:8～1。
3.根据权利要求2所述的防治方法，其特征在于，所述阿维菌素与墙草碱的质量比为1:4。
4.一种烟草根结线虫的防治方法，其特征在于，所述方法为施用杀线虫剂，所述杀线虫剂由阿维菌素与原百部碱复配而成，阿维菌素与原百部碱的质量比为1：2。
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