CN117441105A - 用于危重病患者中皮质类固醇疗法分层的成熟肾上腺髓质素 - Google Patents

用于危重病患者中皮质类固醇疗法分层的成熟肾上腺髓质素 Download PDF

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Abstract

本发明的主题内容是一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者的方法，所述方法包括测定所述患者的体液样品中ADM‑NH2或其片段的水平，将所述ADM‑NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM‑NH2或其片段的水平进行比较，并在值高于所述阈值时指定使用皮质类固醇的疗法，在值低于所述阈值时放弃使用皮质类固醇的疗法。本发明的主题内容也是一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，所述方法包括提供所述患者的体液样品，并测定所述样品中ADM‑NH2或其片段的水平，以及将所述ADM‑NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM‑NH2或其片段的水平进行比较，其中所述ADM‑NH2或其片段的水平指示是否需要开始皮质类固醇疗法。

Description

用于危重病患者中皮质类固醇疗法分层的成熟肾上腺髓质素
技术领域
本发明的主题内容是一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者的方法，所述方法包括测定所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平，将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，并在值高于所述阈值时指定使用皮质类固醇的疗法，在值低于所述阈值时放弃使用皮质类固醇的疗法。本发明的主题内容也是一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，所述方法包括提供所述患者的体液样品，并测定所述样品中ADM-NH2或其片段的水平，以及将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，其中所述ADM-NH2或其片段的水平指示是否需要开始皮质类固醇疗法。
本发明的主题内容还是一种危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，所述方法包括：
·提供所述患者的体液样品，并
·测定所述样品中ADM-NH2或其片段的水平，以及
·将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，
其中所述ADM-NH2或其片段的水平指示是否需要皮质类固醇疗法或开始皮质类固醇疗法。
背景技术
肾上腺髓质素(ADM)这种肽首次在Kitamura等(Kitamura等，1993.Biochemical and Biophysical Research Communications 192(2):553-560)中被描述为一种新的降压肽，其包含52个氨基酸，并从人嗜铬细胞瘤中分离出来。同一年，也描述了编码包含185个氨基酸的前体肽的cDNA和这种前体肽的完整氨基酸序列。所述前体肽(其尤其在N-端处包含21个氨基酸的信号序列)被称为“前肾上腺髓质素原”(pre-proADM)。Pre-proADM包含185个氨基酸(SEQ ID No.：1)。Pro-ADM被进一步加工成Pro-ADM N-端20肽(PAMP；SEQ ID No.2)、中段pro-ADM(MR-proADM；SEQ ID No.3)、肾上腺升压素pro-ADM 153–185(CT-pro ADM；SEQID No.：6)和未成熟ADM这种ADM的C-端甘氨酸延伸版本(ADM-Gly；SEQ ID No.5)。它通过C-端的酶促酰胺化而转化成包含52个氨基酸的ADM的成熟生物活性形式(bio-ADM；ADM-NH2；SEQ ID No.4)。
1993年ADM的发现和表征引发了深入的研究活动，其结果已在本说明书的上下文中总结在各种综述文章中，特别是参考可以在“肽”期刊的专门讨论ADM的一期中找到的文章(Takahashi 2001.Peptides 22:1691；Eto 2001.Peptides 22:1693-1711)。进一步的综述是Hinson等，2000(Hinson等，2000.Endocrine Reviews 21(2):138-167)。在迄今为止的科学研究中，尤其发现ADM可以被视为一种多功能调节肽。如上所述，它以被甘氨酸延伸的无活性形式释放到循环中(Kitamura等，1998.Biochem Biophys Res Commun 244(2):551- 555)。还存在对ADM特异并同样可能调节ADM的作用的结合蛋白(Pio等，2001.The Journal of Biological Chemistry 276(15):12292-12300)。在迄今为止的研究中ADM以及PAMP的最为重要的生理作用是影响血压的作用。
因此，ADM是一种有效的血管舒张剂，并因此可以将降压作用与ADM的C-端部分中的的特定肽段相关联。此外还发现，上述从pre-proADM形成的生理活性肽PAMP同样表现出降压作用，即使它似乎具有不同于ADM的作用机制(除了上述综述文章之外，Eto等，2001和Hinson等，2000，也参见Kuwasaki等，1997.FEBS Lett 414(1):105-110；Kuwasaki等， 1999.Ann.Clin.Biochem.36:622-628；Tsuruda等，2001 Life Sci.69(2):239-245和EP-A2 0 622 458)。此外还发现，在大量病理状态下，可以在循环和其他生物液体中测量到的ADM的浓度显著高于健康对照受试者中的浓度。因此，在充血性心力衰竭、心肌梗死、肾脏疾病、高血压障碍、糖尿病、休克急性期、脓毒症和脓毒性休克患者中ADM的水平显著升高，尽管程度不同。在某些所述病理状态下PAMP浓度也提高，但相对于ADM来说血浆水平较低(Eto2001.Peptides22:1693-1711)。已报道在脓毒症中观察到高浓度的ADM，并且在脓毒性休克中观察到最高浓度ADM(Eto2001. Peptides 22:1693-1711；Hirata等，Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 81(4):1449-1453；Ehlenz等，1997.Exp Clin Endocrinol Diabetes 105:156-162；Tomoda等，2001.Peptides 22:1783-1794；Ueda等， 1999. Am.J.Respir.Crit.Care Med.160:132-136和Wang等，2001.Peptides 22:1835- 1840)。此外，在心力衰竭患者中ADM的血浆浓度升高，并与疾病严重程度相关(Hirayama等， 1999.J Endocrinol 160:297–303；Yu等，2001.Heart 86:155–160)。在这些受试者中，高血浆ADM是独立的负面预后指标(Poyner等，2002.Pharmacol Rev 54:233–246
适应症
脓毒症是宿主对感染的病原体的多方面响应，其可能被内源性因素显著放大。脓毒症最初的概念是具有4个SIRS标准中的至少2个标准的感染，仅聚焦于炎症过度。然而，SIRS作为败血症病理生物学描述符的有效性受到了挑战。脓毒症现在被认为涉及促炎性和抗炎性响应两者的早期激活，以及非免疫途径例如心血管、神经元、自主神经、激素、生物能量、代谢和凝血的重大改变。如今，根据《脓毒症和脓毒性休克第三次国际共识定义》(ThirdInternational Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock)(sepsis-3)，脓毒症被定义为由宿主对感染的响应失调引起的危及生命的器官功能障碍(Singer等， 2016.JAMA.315(8):801–10)。对于临床操作化而言，器官功能障碍可以通过连续[脓毒症相关]器官衰竭评估(SOFA)评分增加2分或更多来表示，其与住院死亡率大于10％相关。
脓毒性休克是一种潜在致命的医学病症，其在脓毒症(一种对感染做出响应而引起的器官损伤或损坏)导致危险的低血压和细胞代谢异常时发生。《脓毒症和脓毒性休克第三次国际共识定义》(Third International Consensus Definitions for Sepsis andSeptic Shock)(sepsis-3)将脓毒性休克定义为脓毒症的一个子集，其中特别严重的循环、细胞和代谢异常与比单独的脓毒症更高的死亡风险相关。脓毒性休克患者在临床上可以通过在没有低血容量的情况下需要血管升压药来维持平均动脉压为65mm Hg或更高、血清乳酸盐水平大于2mmol/L(>18mg/dL)来鉴定。这种组合与医院死亡率大于40％相关(Singer 等，2016.JAMA.315(8):801–10)。原发性感染最通常由细菌引起，但也可以由真菌、病毒或寄生虫引起。它可以位于身体的任何部位，但最常见的是肺、大脑、泌尿道、皮肤或腹部器官。它会导致多器官功能障碍综合征(以前称为多器官衰竭)和死亡。脓毒性休克患者通常在重症监护室中监护。它最常影响儿童、免疫功能低下的个体和老年人，因为他们的免疫系统无法像健康成年人那样有效地应对感染。脓毒性休克的死亡率为约25-50％。
《2016年脓毒症生存运动国际脓毒症和脓毒性休克管理指南》(The SurvivingSepsis Campaign International Guidelines for the management of sepsis andseptic shock 2016)建议在无法通过流体复苏和血管加压药疗法来获得血液动力学稳定性的脓毒性休克(难治性脓毒性休克)患者中使用IV氢化可的松。所述指南建议，在充分的流体复苏和血管加压药给药可以使血液动力学稳定的情况下，不要使用IV氢化可的松治疗脓毒性休克患者(Rhodes等，2017.Intensive Care Med 43(3):304-377)。
在脓毒性休克中测试氢化可的松疗法的大型临床试验产生了相互矛盾的结果。亚组可能受益于氢化可的松治疗，这取决于他们的个体免疫应答。尽管前瞻性随机对照的多中心试验一致报告了更快的休克消退(Annane等，2009.JAMA.(2009)301:2362–75； Venkatesh等，2018.N Engl J Med.378:797–808)，但“低剂量”(200mg/天)氢化可的松(HC)在脓毒性休克患者中的效用仍存在争议。然而，法国的两项研究报告了氢化可的松加上口服氟氢可的松的组合对结果的益处(Annane等，2002.JAMA 288:862–71；Annane等，2018.N Engl J Med 378:809–18)，泛欧洲CORTICUS试验和5国ADRENAL试验发现单独的氢化可的松没有存活效果(Venkatesh等，2018.N Engl J Med.378:797–808；Sprung等，2008.N Engl J Med 358:111–24)。人们越来越认识到，出现脓毒性休克的患者是高度发炎的，但同时也是免疫抑制的(Hotchkiss等，2013.Nat Rev Immunol 13:862–746；Kaufmann等，2018.Nat Rev Drug Discov 17:35–56)。皮质类固醇传统上被认为通过糖皮质激素受体(GR)及其对促炎性转录因子例如AP-1和NFkB的阻遏作用来诱导免疫抑制(Baschant等，2013.Mol Cell Endocrinol 380:108–18)。因此，处于免疫抑制总体状态下的患者可能因免疫抑制药物的给药而受到潜在损害。然而，越来越多的证据暗示皮质类固醇和GR参与免疫重建过程，使得这一争论变得复杂。皮质类固醇的这种免疫激活作用已被描述为是对急性应激的响应，增强了外周免疫应答，而长期皮质类固醇暴露导致免疫抑制(Cruz-Topete等， 2015.Neuroimmunomodulation 22:20–32)。皮质类固醇在时间和相对于副作用的益处方面的这些分歧的作用支持了需要生物标志物来指导它们的应用。
在一项双盲试验中观察到了氢化可的松疗法在严重肺炎患者中的有益效果，所述试验研究了在有脓毒症风险的患者中早期给药低剂量氢化可的松的效果。这项研究的发现支持了使用氢化可的松的早期治疗阻止发生危及生命的脓毒症相关并发症例如脓毒性休克的潜力(Confalonieri等，2005.Am J Respir Crit Care Med Vol 171:242–248)，但为了证实这些发现的一项更大的随机双盲临床试验(HYPRESS研究)发现，预防性给药氢化可的松并不能降低14天内脓毒性休克的风险。其他次要终点例如死亡率，也没有通过所述治疗得到改善(Keh等，2016.JAMA316(17):1775-1785)。
文献中描述了氢化可的松的副作用。在CORTICUS研究中报告了较高数量的继发感染，而ADRENAL和HYPRESS研究无法证实这些发现。
最近已显示，血清干扰素γ(IFγ)与白介素10(IL-10)的比率是一种用于指导使用或不使用氢化可的松的治疗决策的有前途的生物标志物(Koenig等，2021.Front Immunol 12:607217)。
在小鼠模型中，已显示低剂量皮质类固醇在脓毒症的早期阶段中显著降低pro-ADM水平(Prasteyo等，2014.MKB 46(2):68-72)。相反，在对高血压患者进行氟氢可的松或地塞米松治疗后，MR-proADM浓度没有显著变化(Vogt等，2012.Clinical and Experimental Hypertension 34(8):582–587)。
WO2019077082描述了一种在受试者中监测疗法的方法，其中所述受试者正在用针对肾上腺髓质素的结合剂治疗，所述方法包括在从所述受试者获得的体液中测定选自中段肾上腺髓质素原(MR-proADM)、C-端肾上腺髓质素原(CT-proADM)和/或肾上腺髓质素原N-端20肽(PAMP)或其片段(但不是成熟ADM)的前肾上腺髓质素原片段的水平；以及将所述前肾上腺髓质素原片段的水平与改变所述患者的治疗措施的需求相关联，其中所述治疗措施选自包含氢化可的松的组。
冠状病毒广泛存在于人类和其他几种脊椎动物中，并引起呼吸道、肠道、肝脏和神经系统疾病。值得注意的是，2003年的严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)和2012年的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)引起了人类流行病。与SARS-CoV的比较显示出几个显著的差异和相似之处。MERS-CoV和SARS-CoV两者都具有高得多的病死率(分别为40％和10％)(de Wit等，2016.SARS和MERS：对新出现的冠状病毒的最新见解(SARS and ERS: recent insights into emerging coronaviruses)，Nat Rev Microbiol 14(8):523–34； Zhou等，2020.与一种可能源自蝙蝠的新型冠状病毒有关的肺炎疫情爆发(Apneumonia outbreak associated with a new coronavirus of probable bat origin)，Nature 579 (7798):270-273)。尽管目前的SARS CoV-2与SARS-CoV共享79％的基因组，但它似乎更具传播性。由SARS-CoV-2引起的疾病被称为2019冠状病毒病(COVID-19)。
COVID-19没有特效、有效的治疗或治愈方法(Siemieniuk等，2020.BMJ.370: m2980)。因此，COVID-19管理的基石是支持性护理，包括缓解症状的治疗、流体治疗、氧气支持和必要时采取俯卧位，以及支持其他受影响重要器官的药物或设备，如体外膜式氧合(ECMO)。类固醇在这种疾病中的作用也一直存在争议。在COVID-19中使用糖皮质激素治疗引发了有争议的讨论(综述参见Golamari等，2021.J Com Hosp Int Med Perspect 11(2): 187–193)。一项研究报告了甲基泼尼松龙可能是有益的，导致ARDS患者的死亡风险降低(Wu 等，2020.JAMA Intern Med.2020；180(7):934-943)。一些研究显示，在患有COVID-19的癌症患者中使用低剂量泼尼松具有有益效果(Russell等，2020.ecancer14:1023)。一项随机对照试验和22项组群研究的荟萃分析表明，糖皮质激素疗法缩短发烧时长，但不影响死亡率、住院时长或肺部炎症吸收(Lu等，2020.Ann Transl Med 8(10):627)。
最近发表的一项研究地塞米松与常规护理的比较的开放标签试验显示，在接受有创机械通气或氧气的使用地塞米松的患者中28天的死亡率获益(恢复试验)。然而，正面结果仅适用于接受呼吸氧支持的患者(Horby等，2020.NEJM DOI:10.1056/NEJMoa 2021436)。
总之，对危重病患者(患有例如脓毒症、脓毒性休克或COVID-19)进行使用皮质类固醇、特别是糖皮质激素例如氢化可的松或地塞米松治疗的分层，是一种尚未满足的医疗需求。对脓毒症患者进行使用氢化可的松治疗的分层以预防脓毒性休克，是一种具体的尚未满足的医疗需求。对COVID-19患者进行使用地塞米松治疗的分层，是另一个具体的尚未满足的医疗需求。
本发明的令人吃惊的发现是，在危重病患者中，当所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平低于预定阈值时，在所述患者中给药皮质类固醇是禁忌的。
急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是一种以肺部广泛炎症的迅速发作为特征的呼吸衰竭。症状包括呼吸短促、呼吸急促和皮肤发青。ARDS伴有高死亡率(35-45％)(Bellani等， 2016.JAMA 315(8):788–800)。对于幸存者来说，生活质量下降很常见。病因可能包括脓毒症、胰腺炎、创伤、肺炎和吸入性肺炎。潜在机制包括对形成肺部微观气囊屏障的细胞的弥漫性损伤、表面活性剂功能障碍、免疫系统激活以及身体凝血调节功能障碍。实际上，ARDS损害肺部交换氧气和二氧化碳的能力。尽管呼气末正压(PEEP)大于5cm H2O，但诊断是基于PaO2/FiO2比率(动脉氧分压与吸入氧分数的比率)小于300mm Hg。主要治疗包括机械通气以及针对基础病因的治疗。通气策略包括使用低容量和低压力。如果氧合仍然不足，可以使用肺复张术和神经肌肉阻滞剂。如果这还不够，体外膜式氧合(ECMO)可能是一种选项。
九项试验研究了ARDS的长期糖皮质激素治疗(综述参见Annane等， 2017.Intensive Care Med 43:1751–1763)。这些试验之一在由社区获得性肺炎引起的ARDS患者中进行(Confalonieri等，2005.Am J Respir Crit Care Med 171(3):242– 24859)，另一项是在脓毒性休克中对初始皮质类固醇试验的亚组分析(Annane等， 2006.Crit Care Med 34(1):22–30)。这些试验一致地发现，糖皮质激素治疗与全身性炎症标志物(炎性细胞因子和/或C反应蛋白水平)显著降低、机械通气持续时间缩短约7天以及在轻度和重度ARDS患者中住院死亡率可能分别降低约7％和11％相关。然而，它们在ARDS中的使用仍然存在争议，目前的重症监护医学学会指南对在中重度ARDS患者中使用糖皮质激素有条件地推荐(Annane等，2017.Intensive Care Med 43:1751–1763)。所述指南有条件地推荐在早期ARDS(直至发病第7天)中使用剂量为1mg/kg/d的甲基泼尼松龙；对于晚期持续性ARDS(发病第6天后)，所述指南推荐剂量为2mg/kg/d，然后逐渐减少。开始糖皮质激素治疗ARDS的时机是另一个令人感兴趣的问题。在ARDS发作1周内开始糖皮质激素治疗提供了显著的生存率益处，而在ARDS诊断后>1周开始治疗则没有。这表明在不可逆肺损伤阶段后使用糖皮质激素可能没有多大益处。因此，需要一种工具来区分ARDS患者、尤其是晚期患者中谁将受益于糖皮质激素疗法。因此，本发明能够选择晚期持续性ARDS患者进行使用皮质类固醇的治疗/疗法。
显示皮质类固醇治疗严重CAP患者具有临床显著的死亡率益处的数据是有限的。一些荟萃分析发现，在此类患者中使用皮质类固醇降低了死亡风险(Horita等，2015.Sci Rep 5:14061；Siemienieuk等，2015.Ann Intern Med 163(7):519-528；Jiang等， 2019.Medicine(Baltimore)98(26):e16239)，但其他分析则没有此类发现(Briel等， 2018.Clin Infect Dis66(3):346-354；Chen等，2015.World J Emerg Med 6(3):172- 178)，并且包括在所述荟萃分析中的研究在质量和对严重CAP的定义方面各不相同。此外，没有证据表明皮质类固醇在轻度至中度CAP患者中降低死亡率或其他不良临床结果。新的ATS/IDSA指南建议不要对CAP或流感性肺炎进行辅助皮质类固醇治疗，除非患者有其他使用它们的适应症例如哮喘、COPD或自身免疫疾病(Metlay等，2019.Am J Respir Crit Care Med Vol 200,Iss 7,pp e45–e67)。因此，对CAP患者、尤其是轻度至中度CAP患者进行皮质类固醇疗法分层是一种尚未满足的医疗需求。因此，本发明能够选择轻度至中度CAP患者进行使用皮质类固醇的治疗/疗法。
使用心肺旁路的心脏手术导致全身性炎症反应；皮质类固醇已被广泛用于减轻这种反应的潜在有害影响。在也被称为“心肺机”的心肺旁路手术(CPB)中，将插管放置在患者的主要血管中，将血液引导到体外，添加氧气，除去二氧化碳，然后将血液泵回体内。这允许心脏停止跳动并排空血液，从而允许外科医生在无血区对不跳动的心脏进行手术(Barry 等，2015.Anesthesia and Analgesia 120(4):749–769)。结果，白细胞和血小板被激活，并出现凝血级联反应(Tarnok等，2001.Shock 16(Suppl 1):24–32)，以及由细胞因子引起的末端信号传导。内皮通透性增加，并发生由自由基引起的实质损伤(Fudulu等， 2016.Oxidative Medicine and Cellular Longevity2016:1971452；Pesonen等， 2016.Acta Anaesthesiologica Scandinavica 60(10):1386–1394)。流体从循环中泄漏并进入组织，血管扩张，发生低血容量血症，从而导致血压下降。包括多器官衰竭和死亡在内的心脏手术的许多并发症都由这些机制引起(Huffmyer等，2015.Best Practice&Research Clinical Anaesthesiology 29(2):163–175)。然而，预防性皮质类固醇对心脏手术后临床结果的影响，尤其是对儿童的影响，仍不清楚。对于是否给予皮质类固醇(Fudulu等， 2018.World Journal for Pediatric and Congenital Heart Surgery 9(3):289–293)或关于皮质类固醇的类型、剂量方案或它们在何时可能有益(例如术前还是术中还是术后)，还没有达成共识。因此，对接受心肺旁路手术的患者进行皮质类固醇疗法分层，是一个尚未满足的医疗需求。
美国每年有超过40万患者发生心脏骤停，心脏骤停的总体死亡率仍然糟糕，存活率低于10％(Go等，2014.Circulation 129(3):e28–292)。为了提高生存率和生活质量，国际心脏骤停指南不仅强调了优化停搏内治疗的重要性，还强调了在心脏骤停后时间段中患者的管理(Field等，2010.Circulation 122(18Suppl 3):S640–56；Nolan等， 2010.Resuscitation.81(10):1219–1276)。心脏骤停后综合征的特征在于具有各种与脓毒性休克状态类似的病理生理特点，包括全身性炎症反应和血液动力学紊乱，其中可能包括微循环功能障碍和心肌抑制(Adrie等，2002.Circulation 106(5):562–568；Nolan等， 2008.Resuscitation 79(3):350–379)。然而，皮质类固醇疗法在心脏骤停后休克患者中的效用和潜在疗效仍然未知，只存在少数研究并得出不同结果(Mentzelopoulos等， 2013.JAMA.310(3):270–279；Donnino等，2016.Critical Care 20:82)。
细菌性脑膜炎是一种严重的脑膜(大脑和脊髓的膜内衬)感染，尽管有最佳的抗生素疗法和重症监护的进展，但仍然伴有高死亡率和高发病率。它是由通常从耳或呼吸道感染传播的细菌引起，并用抗生素治疗。在5％至40％的患者中出现晚期后遗症，例如颅神经损伤，特别是是听力损失。在实验动物研究中，使用皮质类固醇的治疗显示出可减少脑脊液(CSF)中的炎症反应，逆转脑水肿并改善结果(Scheld等，1980.Journal of Clinical Investigation 66(2):243-253)；Tauber等，1985.Journal of Infectious Diseases 51 (3):528-534)。这些病理生理学见解促使研究人员评估皮质类固醇作为急性细菌性脑膜炎的辅助疗法。然而，评估皮质类固醇对细菌性脑膜炎患者的影响的临床试验显示出冲突的结果(综述参见Brouwer等，2015.Cochrane Database of Systematic Reviews Issue 9.Art.No.:CD004405)。因此，对将从皮质类固醇疗法获益的脑膜炎患者、特别是细菌性脑膜炎患者进行皮质类固醇疗法分层，是一个尚未满足的医学需求。
发明内容
本发明的主题内容是一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者的方法，所述方法包括测定所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平，将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，并在值高于所述阈值时指定使用皮质类固醇的疗法，在值低于所述阈值时放弃使用皮质类固醇的疗法。
本发明的主题内容也是一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，所述方法包括
a.提供所述患者的体液样品，并
b.测定所述样品中ADM-NH2或其片段的水平，
c.将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，
其中所述ADM-NH2或其片段的水平指示是否需要开始皮质类固醇疗法。
本发明的一个实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中所述危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
在本发明的情形中，危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
在本申请的一个实施方式中，患者是患有脓毒症或脓毒性休克的患者。
在本申请的一个实施方式中，患者被冠状病毒感染，其中所述冠状病毒选自Sars-CoV-1、Sars-CoV-2、MERS-CoV，特别是Sars-CoV-2。
在本申请的一个实施方式中，患者是患有急性呼吸综合症(ARDS)的患者。在更特定实施方式中，所述患有ARDS的患者处于从症状发作起7天或更多天的晚期。
在本申请的一个实施方式中，患者是患有社区获得性肺炎(CAP)的患者。在更特定实施方式中，所述患者患有轻度至中度(非重度)CAP。CAP的严重程度目前由生理损伤程度定义，正如通过IDSA/ATS 2007标准所分类的(Piffer等，2007.Breathe 4(2):110-115)。
在本申请的一个实施方式中，所述患者是患有脑膜炎、特别是细菌性脑膜炎的患者。
在本申请的情形中，危重病患者不使用导致所述患者中ADM-NH2或其片段水平增加的任何药物、药品、抗体和/或其他药剂或疗法，特别是特异性结合ADM-NH2的抗体、抗体片段或非Ig支架进行治疗。
在本申请的情形中，除了皮质类固醇外，危重病患者还可以使用不导致ADM-NH2或其片段水平增加的任何药物、药品或治疗剂进行治疗。所述另外的药物、药品或治疗剂可以选自血管加压药、流体疗法、抗微生物疗法(包括抗生素和抗病毒剂)、肾脏替代疗法。
本发明的另一个实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中通过将所述体液样品与特异性结合ADM-NH2或其片段的捕获结合剂接触来测定ADM-NH2或其片段的水平。
本发明的另一个实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中通过将所述体液样品与特异性结合ADM-NH2的C-端部分的捕获结合剂接触来测定ADM-NH2或其片段的水平，并且其中所述捕获结合剂的结合具体来说需要ADM-NH2的C-端酰胺。
本发明的另一个特定实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述测定包括使用特异性结合ADM-NH2或其片段的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂可以选自抗体、抗体片段或非IgG支架。
本发明的另一个优选实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中测定所述受试者体液样品中的ADM-NH2水平，并且其中所述测定包括使用特异性结合ADM-NH2的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂被固定在表面上。
本发明的另一个实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中ADM-NH2的水平通过不同方法例如免疫测定法、活性测定法、质谱法来测定。
本发明的另一个实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述用于检测ADM-NH2的测定法的测定灵敏度能够定量健康受试者的ADM-NH2，并且<70pg/ml，优选地<40pg/ml，更优选地<10pg/ml。
本发明的一个实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述患者用选自糖皮质激素或盐皮质激素的皮质类固醇治疗。
本发明的另一个实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述糖皮质激素可以选自可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松或倍他米松。
本发明的另一个特定实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述盐皮质激素可以选自氟氢可的松。
本发明的一个实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述冠状病毒选自Sars-CoV-1、Sars-CoV-2、MERS-CoV，特别是Sars-CoV-2。
本发明的另一个实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述体液选自全血、血清和血浆。
本发明的另一个优选实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述ADM-NH2的阈值水平在20至150pg/mL之间，更优选地在30至100pg/mL之间，甚至更优选地在40至80pg/mL之间，最优选地所述阈值水平为70pg/mL。
本发明的另一个实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中除了ADM-NH2或其片段之外还可以测量其他生物标志物。
本发明的另一个实施方式涉及一种在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述其他生物标志物选自D-二聚体、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、乳酸盐、penKid、NT-proBNP、BNP、白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、血红蛋白、血小板计数、白蛋白、丙氨酸转氨酶、肌酐、血尿素、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、凝血酶原时间、血清铁蛋白、白介素-6(IL-6)、IL-10、IL-2、IL-7、干扰素γ(IF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、IP-10、MCP-1、MIP-1α。
本申请的另一个实施方式涉及一种选择脓毒症患者进行使用氢化可的松的治疗以预防脓毒性休克的方法，所述方法包括测定所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平，将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，并且在值高于所述阈值时指定使用氢化可的松的疗法，并在值低于所述阈值时放弃使用氢化可的松的疗法。
本申请的另一个实施方式涉及一种在脓毒症患者中进行氢化可的松疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层以预防脓毒性休克的方法，所述方法包括：
a.提供所述患者的体液样品，并
b.测定所述样品中ADM-NH2或其片段的水平，以及
c.将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，
其中所述ADM-NH2或其片段的水平指示是否需要开始氢化可的松疗法。
本申请的另一个实施方式涉及一种选择COVID-19患者进行使用地塞米松的治疗的方法，所述方法包括测定所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平，将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，并且在值高于所述阈值时指定使用地塞米松的疗法，并在值低于所述阈值时放弃使用地塞米松的疗法。
本申请的另一个实施方式涉及一种在COVID-19患者中进行地塞米松疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，所述方法包括：
a.提供所述患者的体液样品，并
b.测定所述样品中ADM-NH2或其片段的水平，以及
c.将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，
其中所述ADM-NH2或其片段的水平指示是否需要开始地塞米松疗法。
所述氢化可的松可以作为连续输注液以1至10mg/h的剂量施用到所述患者。所述氢化可的松可以作为连续输注液以10mg/h的剂量施用，只要并行地向所述患者给药血管加压药即可。所述氢化可的松可以在停止血管加压药后作为连续输注液以5mg/h的剂量施用。所述氢化可的松的剂量可以逐步减少(每天减少1mg/h)至1mg/h。
所述氢化可的松可以作为50mg的静脉推注施用，然后进行24小时连续输注，在第5天200mg，第6和7天100mg，第8和9天50mg，并且第10和11天25mg。
氢化可的松可以与氟氢可的松联合。在特定实施方式中，每6小时施用50mg氢化可的松的推注，并补充每日口服氟氢可的松(50μg)。
在本申请的另一个特定实施方式中，当所述ADM-NH2的水平高于阈值水平时开始所述皮质类固醇疗法，所述阈值水平在20至150pg/mL之间，更优选地在30至100pg/mL之间，甚至更优选地在40至80pg/mL之间，最优选地所述阈值水平为70pg/mL。
在本申请的另一个特定实施方式中，当所述ADM-NH2的水平高于阈值水平时继续所述皮质类固醇疗法，所述阈值水平在20至150pg/mL之间，更优选地在30至100pg/mL之间，甚至更优选地在40至80pg/mL之间，最优选地所述阈值水平为70pg/mL。
在本申请的另一个特定实施方式中，当所述ADM-NH2的水平低于阈值水平时终止所述皮质类固醇疗法，所述阈值水平在20至150pg/mL之间，更优选地在30至100pg/mL之间，甚至更优选地在40至80pg/mL之间，最优选地所述阈值水平为70pg/mL。
在本申请的另一个实施方式中，测定所述受试者的体液样品中ADM-NH2的水平，并且其中所述测定包括使用特异性结合ADM的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂是抗体。
在本申请的另一个实施方式中，测定所述受试者的体液样品中ADM-NH2的水平，并且其中所述测定包括使用特异性结合ADM-NH2的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂被固定在表面上。
在本申请的另一个实施方式中，所述患者用皮质类固醇治疗，其中所述皮质类固醇选自糖皮质激素或盐皮质激素。
在本申请的另一个实施方式中，糖皮质激素可以选自可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松或倍他米松。
在本申请的一个实施方式中，所述盐皮质激素可以选自氟氢可的松。
在一个特定实施方式中，根据本发明的体液是血液样品。血液样品可以选自全血、血清和血浆。在诊断方法的特定实施方式中，所述样品选自人柠檬酸盐血浆、肝素血浆和EDTA血浆。
在一个实施方式中，所述用于检测ADM-NH2的测定法的测定灵敏度能够定量健康受试者的ADM-NH2，并且<70pg/ml，优选地<40pg/ml，更优选地<10pg/ml。
除了ADM-NH2或其片段之外还可以测量其他生物标志物。所述其他生物标志物可以选自D-二聚体、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、乳酸盐、penKid、NT-proBNP、BNP、白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、血红蛋白、血小板计数、白蛋白、丙氨酸转氨酶、肌酐、血尿素、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、凝血酶原时间、血清铁蛋白、白介素-6(IL-6)、IL-10、IL-2、IL-7、干扰素γ(IF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、IP-10、MCP-1、MIP-1α。
本发明的主题内容还是一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者的方法，所述方法包括提供所述患者的体液样品，测定所述样品中ADM-NH2或其片段的水平，将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，并在值高于所述阈值时指定使用皮质类固醇的疗法，在值低于所述阈值时放弃使用皮质类固醇的疗法。
本发明的一个实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者的方法，其进一步包括在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的步骤，所述方法包括
a.提供所述患者的体液样品，并
b.测定所述样品中ADM-NH2或其片段的水平，以及
c.将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，
其中所述ADM-NH2或其片段的水平指示是否需要开始皮质类固醇疗法。
本发明的另一个实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
本发明的另一个实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中通过将所述体液样品与特异性结合肾上腺髓质素原或其片段的捕获结合剂接触来测定所述ADM-NH2或其片段的水平。
本发明的另一个优选实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述测定包括使用特异性结合ADM-NH2或其片段的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂可以选自抗体、抗体片段或非IgG支架。
本发明的另一个特定实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中在所述受试者的体液样品中测定ADM-NH2的水平，并且其中所述测定包括使用特异性结合ADM-NH2的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂被固定在表面上。
本发明的另一个实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中通过不同方法例如免疫测定法、活性测定法、质谱法来测定ADM-NH2的水平。
本发明的另一个优选实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述用于检测ADM-NH2的测定法的测定灵敏度能够定量健康受试者的ADM-NH2，并且<70pg/ml，优选地<40pg/ml，更优选地<10pg/ml。
本发明的另一个实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述患者用选自糖皮质激素或盐皮质激素的皮质类固醇治疗。
本发明的另一个特定实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述糖皮质激素可以选自可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松或倍他米松。
本发明的一个实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述盐皮质激素可以选自氟氢可的松。
本发明的另一个实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述冠状病毒选自Sars-CoV-1、Sars-CoV-2、MERS-CoV，特别是Sars-CoV-2。
本发明的另一个优选实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述体液选自全血、血清和血浆。
本发明的另一个特定实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述ADM-NH2的阈值水平在20至150pg/mL之间，更优选地在30至100pg/mL之间，甚至更优选地在40至80pg/mL之间，最优选地所述阈值水平为70pg/mL。
本发明的另一个实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中除了ADM-NH2或其片段之外还可以测量其他生物标志物。
本发明的另一个优选实施方式涉及一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者和在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述其他生物标志物选自D-二聚体、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、乳酸盐、penKid、NT-proBNP、BNP、白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、血红蛋白、血小板计数、白蛋白、丙氨酸转氨酶、肌酐、血尿素、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、凝血酶原时间、血清铁蛋白、白介素-6(IL-6)、IL-10、IL-2、IL-7、干扰素γ(IF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、IP-10、MCP-1、MIP-1α。
本申请的主题内容还是用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述患者的特征在于当将所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较时，所述ADM-NH2或其片段的水平为高于所述预定阈值或高于先前测量的ADM-NH2或其片段的水平的值，其中所述危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
本发明的另一个实施方式涉及用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述患者的特征在于所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平已被测定，其中已将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，并且在值高于所述阈值时指定使用皮质类固醇的疗法，其中所述危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
本发明的另一个优选实施方式涉及用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述患者用选自糖皮质激素或盐皮质激素的皮质类固醇治疗。
本发明的另一个实施方式涉及用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述糖皮质激素可以选自可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松或倍他米松。
本发明的一个实施方式涉及用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述糖皮质激素可以选自可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松或倍他米松。
本发明的另一个实施方式涉及用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述冠状病毒选自Sars-CoV-1、Sars-CoV-2、MERS-CoV，特别是Sars-CoV-2。
本发明的另一个优选实施方式涉及用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述体液选自全血、血清和血浆。
本发明的另一个实施方式涉及用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中通过将所述体液样品与特异性结合ADM-NH2或其片段的捕获结合剂接触来测定ADM-NH2或其片段的水平。
本发明的另一个实施方式涉及用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述测定包括使用特异性结合ADM-NH2或其片段的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂可以选自抗体、抗体片段或非IgG支架。
本发明的另一个实施方式涉及用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中测定所述受试者的体液样品中ADM-NH2的水平，并且其中所述测定包括使用特异性结合ADM-NH2的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂被固定在表面上。
本发明的另一个实施方式涉及用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中通过不同方法例如免疫测定法、活性测定法、质谱法测定ADM的水平。
本发明的另一个实施方式涉及用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述用于检测ADM-NH2的测定法的测定灵敏度能够定量健康受试者的ADM-NH2，并且是<70pg/ml，优选地<40pg/ml，更优选地<10pg/ml。
定义
疾病的严重程度被定义为患者器官系统紊乱或生理失代偿的程度。可以使用例如评分系统将严重程度分类为不同阶段。
本文所使用的器官功能障碍表示器官不能发挥其预期功能的状况或健康状态。“器官衰竭”是指器官功能障碍到了没有外部临床干预就无法维持正常体内平衡的程度。所述器官衰竭可涉及选自肾、肝、心、肺、神经系统的器官。相比之下，器官功能代表相应器官在生理范围内的预期功能。本领域技术人员知道器官在医学检查期间的相应功能。
器官功能障碍可以通过顺序器官衰竭评估评分(SOFA评分)或其组分来定义。以前被称为脓毒症相关器官衰竭评估评分的SOFA评分(Singer等，2016.JAMA 315(8):801-10)被用于跟踪一个人在重症监护室(ICU)期间的状态，以确定一个人的器官功能的程度或衰竭率。所述评分基于六个不同评分，分别各自针对呼吸、心血管、肝脏、凝血、肾脏和神经系统，每个评分从0到4，评分增加反映了器官功能障碍的恶化。SOFA评分的评估标准描述在例如Lamden等中(综述参见Lambden等，2019.Critical Care 23:374)。SOFA评分传统上可以在入住ICU时以及随后的每个24-h时间段计算。具体来说，所述器官功能障碍选自肾功能下降、心脏功能障碍、肝功能障碍或呼吸道功能障碍。
快速SOFA评分(quickSOFA或qSOFA)由Sepsis-3组于2016年2月作为SOFA评分的简化版本引入，作为鉴定具有不良结果的高风险的感染患者的初始方法(Angus等， 2016.Critical Care Medicine.44(3):e113–e121)。qSOFA只包括其3项临床标准，并包括“任何精神状态改变”而不要求GCS<15，从而大大简化了SOFA评分。qSOFA可以在患者身上容易且快速地连续重复。评分范围为0至3分。1分用于：低血压(SBP≤100mmHg)、高呼吸频率(≥22次呼吸/分钟)和精神状态改变(GCS≤15)。在感染发作附近qSOFA为2分或更多分与更大的死亡风险或重症监护室住院时间延长有关。这些结果在可能患有脓毒症的感染患者中比在无并发症感染的患者中更加常见。基于这些发现，脓毒症第三次国际共识定义建议将qSOFA作为一种简单的提示，以鉴定ICU外可能发生脓毒症的感染患者(Seymour等， 2016.JAMA315(8):762-774)。
危及生命的恶化被定义为与高死亡风险相关的患者的急性病症，其涉及重要器官系统衰竭，包括中枢神经系统衰竭、肾衰竭、肝衰竭、代谢衰竭或呼吸衰竭。
不良事件被定义为死亡、器官功能障碍或休克。
所述临床参数或临床评分选自低血压史、血管加压药需求、插管、机械通气、Horovitz指数、SOFA评分、快速SOFA评分。
术语“疗法分层”具体来说是指将患者分组、选择或分类为不同的组，例如根据其分类接受或不接受治疗性措施的疗法组。
分层的患者组可以包括需要开始治疗的患者和不需要开始治疗的患者。
本文所使用的术语“疗法指导”是指基于一个或多个生物标志物和/或临床参数和/或评分的值应用某些疗法或医疗干预，以及监测疗法，包括调整所述患者的皮质类固醇治疗，例如通过获得对疗法疗效的反馈。
在本发明的一个实施方式中，所述ADM-NH2或其片段的测定在一位危重病患者中进行超过一次。
在本发明的另一个实施方式中，进行所述监测是为了评估所述危重病患者对使用皮质类固醇的治疗的响应。
此外，可以将所述患者分层为下述组之一：
(i)对所述疾病的所述皮质类固醇治疗的响应者，其在接受所述治疗后显示出有利效果，
(ii)对所述疾病的所述皮质类固醇治疗的非响应者，其在接受所述皮质类固醇治疗后没有显示出效果(既没有有利效果也没有不利效果)，
(iii)在接受所述皮质类固醇治疗后显示出不利效果的患者。
实施例6中的数据清楚地证实，在脓毒症患者中使用ADM-NH2的皮质类固醇(尤其是氢化可的松)疗法分层可以防止脓毒性休克的发展，并表明患者可以获得缩短住院时间和减少额外治疗的益处。
本发明的另一个特别优点在于所述方法可以区分更有可能受益于所述疗法的患者和不太可能受益于所述疗法的患者。
从皮质类固醇疗法获得的所述益处可以是例如疾病症状(病理生理症状、生物标志物值等)的消退、其他生命支持疗法的停用或患者的正面结果(例如存活)。
在优选实施方式中，治疗在提供指示样品中ADM-NH2水平的样品分析结果后立即开始或改变。在其他实施方式中，治疗可以在收到所述样品分析结果后12小时内，优选地6、4、2、1、0.5、0.25小时内或立即开始。
皮质类固醇是由脊椎动物生理上产生的(天然皮质类固醇)或人工制造的甾类激素(合成皮质类固醇)。内源性皮质类固醇在肾上腺皮质中合成并分泌到血液中，以调节广泛的生理系统。所有甾类激素都从胆固醇合成，并且在人类中，肾上腺皮质的主要分泌物是皮质醇(糖皮质激素家族的成员)和醛固酮(盐皮质激素家族的成员)(综述参见Williams 2018.Respir Care 63(6):655–670)。糖皮质激素调节脂质、葡萄糖和蛋白质代谢，发挥抗炎/免疫抑制作用和血管收缩作用，而盐皮质激素是电解质和水平衡的主要调控物。除了氟氢可的松和醋酸脱氧皮质酮之外，大多数合成皮质类固醇模拟内源性糖皮质激素的作用(参见表1)。事实上，它们的临床效力远高于皮质醇，并且没有表现出盐皮质激素的作用。全身性使用的皮质类固醇根据效力、盐皮质激素作用和下丘脑-垂体-肾上腺轴抑制的持续时间进行分类。效力相对于氢化可的松来表示，并可用于确定可比剂量。盐皮质激素活性也相对于氢化可的松进行描述，并且设计了对甾类分子的结构修饰，以在将这些药剂以药理学剂量用于预防或治疗过敏、炎性或免疫反应时提高效力并使盐皮质激素作用最小化。根据下丘脑-垂体-肾上腺轴抑制的持续时间，这些药剂被分类为短效、中效或长效。
表1：皮质类固醇比较图(改编自Samuel等，2017.J Neurocrit Care 10(2):53- 59)
所述疗法或干预是选自糖皮质激素或盐皮质激素的皮质类固醇。糖皮质激素可以选自可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松或倍他米松。盐皮质激素可以选自氟氢可的松。
所述皮质类固醇可以作为静脉推注或连续输注施用到患者，或者可以口服给药。
本文所使用的术语“患者”是指正在接受医疗护理或因疾病而应接受医疗护理的活的人类或非人类生物体。这包括没有明确疾病，正在接受病理学迹象的调查的人。因此，本文描述的方法和测定法适用于人类疾病和兽医疾病两者。
术语“危重病患者”是指患有急性疾病或急性病症的患者。所述危重病患者可以选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停。
患有此类急性疾病或病症的患者可能患有共病如慢性病(例如癌症)。根据本发明的治疗尤其旨在治疗急性疾病或病症。它可以是在癌症患者中治疗急性疾病或病症，这并不一定意味着癌症本身得到治疗。在本发明的特定实施方式中，所述危重病患者并非主要患有慢性疾病或病症。在本发明的非常特定的实施方式中，所述危重病患者不患有艾迪生病。
阈值水平可以从例如Kaplan-Meier分析中获得，其中疾病的发生与群体中生物标志物的四分位数相关。根据这种分析，生物标志物水平高于第75百分位数的受试者患有根据本发明的疾病的风险显著提高。通过Cox回归分析并对经典风险因子进行全面调整，进一步支持了这一结果：与所有其他受试者相比，最高四分位数与患有根据本发明的疾病的风险提高非常显著地相关。
其他优选的截止值是例如正常群体的第90、95或99百分位数。通过使用比第75百分位数更高的百分位数，可以减少鉴定出的假阳性受试者的数量，但可能无法鉴定出风险中等(但仍然提高)的受试者。因此，可以采用所述截止值，这取决于是否认为以也鉴定出“假阳性”为代价而鉴定出大多数有风险受试者更加合适，或者是否认为以遗漏几个中等风险受试者为代价而主要鉴定出高风险受试者更加合适。
上述阈值在其他测定法中可能不同，如果这些测定法与本发明中使用的测定系统已进行了不同校准的话。因此，将校准的差异考虑在内，上述阈值应相应地适用于此类不同校准的测定法。定量校准差异的一种可能性是通过使用两种方法测量样品中的相应生物标志物(例如bio-ADM)，将所讨论的测定法(例如bio-ADM测定法)与本发明中使用的相应生物标志物测定法进行方法比较分析(相关性)。另一种可能性是，鉴于所讨论的测定法具有足够的分析灵敏度，使用该测试来测定代表性正常群体的中值生物标志物水平，将结果与文献中描述的中值生物标志物水平进行比较(例如Weber等，2017.JALM 2(2):222-233)，并在通过该比较获得的差异的基础上重新计算校准。利用本发明中使用的校准，已测量了来自正常(健康)受试者的样品：中值血浆bio-ADM(成熟ADM-NH2)为13.7pg/ml(四分位间距[IQR]9.6–18.7pg/mL)(Weber等，2017.JALM 2(2):222-233)。
在整个本说明书中，根据本发明的“抗体”或“抗体片段”或“非Ig支架”能够结合ADM，因此针对ADM，并且因此可以被称为“抗ADM抗体”、“抗ADM抗体片段”或“抗ADM非Ig支架”。
成熟ADM、bio-ADM和ADM-NH2在整个本申请中被同义使用，并且是根据SEQ IDNo.：4的分子。
在诊断方法的具体实施方式中，所述结合剂对肾上腺髓质素原或其片段(其不是根据SEQ ID No.：4的ADM-NH2)和ADM-NH2表现出至少107M-1、优选地108M-1的结合亲和性，优选的亲和性大于109M-1、最优选地大于1010M-1。本领域技术人员知道，可以考虑通过施用较高剂量的化合物来补偿较低的亲和性，并且这种措施不会导致超出本发明的范围。
为了测定抗体对肾上腺髓质素的亲和性，使用Biacore 2000系统(GE HealthcareEurope GmbH,Freiburg,Germany)，通过无标记物表面等离子体共振测定肾上腺髓质素与固定化抗体结合的动力学。根据制造商的说明书(小鼠抗体捕获试剂盒；GE Healthcare)，使用以高密度共价偶联到CM5传感器表面的抗小鼠Fc抗体进行抗体的可逆固定化(Lorenz 等，2011.Antimicrob Agents Chemother.55(1):165–173).
在所述方法的特定实施方式中，使用测定法来测定ADM-NH2水平，其中这种测定法是夹心测定法，优选为全自动测定法。
在本发明的一个实施方式中，它可以是所谓的POC(护理点)测试，这是一种允许在患者附近在不到1小时以内进行测试，而不需全自动测定系统的测试技术。这种技术的一个实例是免疫层析测试技术，例如微流体装置。
在所述诊断方法的一个实施方式中，这种测定法是使用任何种类的检测技术(包括但不限于酶标记、化学发光标记、电化学发光标记)的夹心免疫测定法，优选为全自动测定法。在所述诊断方法的一个实施方式中，这种测定法是酶标记的夹心测定法。自动或全自动测定法的实例包括可用于下述系统之一的测定法：RocheAbbott/>Siemens/>Brahms/>Biomerieux/>Alere/>
各种免疫测定法是已知的，可用于本发明的测定法和方法中，这些测定法包括放射免疫测定法(“RIA”)、均相酶倍增免疫测定法(“EMIT”)、酶联免疫吸附测定法(“ELISA”)、脱辅基酶再激活免疫测定法(“ARIS”)、试纸条免疫测定法和免疫层析测定法。
在优选实施方式中，所述标记物选自化学发光标记物、酶标记物、荧光标记物、放射性碘标记物。
所述测定法可以是均相或非均相测定法、竞争性和非竞争性测定法。在一个实施方式中，所述测定法采取夹心测定法的形式，这是一种非竞争性免疫测定法，其中将待检测和/或定量的分子结合到第一抗体和第二抗体。所述第一抗体可以结合到固相，例如珠子、孔或其他容器的表面、芯片或条，所述第二抗体是用例如染料、放射性同位素或反应性或催化活性部分标记的抗体。然后通过适合的方法测量与分析物结合的标记的抗体的量。与“夹心测定法”相关的一般性组合物和程序是已确立的，并且为本领域技术人员所知(The Immunoassay Handbook,Ed.David Wild,ElsevierLTD,Oxford；3rd ed.(May 2005),ISBN- 13:978-0080445267；HultschigC等，Curr Opin Chem Biol.2006Feb；10(1):4-10.PMID: 16376134)。
在另一个实施方式中，所述测定法包含两种捕获分子，优选为均以分散体的形式存在于液体反应混合物中的抗体，其中第一标记组分被附连到第一捕获分子，其中所述第一标记组分是基于荧光或化学发光猝灭或扩增的标记系统的一部分，并且所述标记系统的第二标记组分被附连到第二捕获分子，使得在两个捕获分子与分析物结合后产生可测量的信号，其允许检测在包含所述样品的溶液中形成的夹心复合物。
在另一个实施方式中，所述标记系统包含稀土穴合物或稀土螯合物与荧光染料或化学发光染料、特别是花青类型的染料的组合。
在本发明的情形中，基于荧光的测定法包括使用染料，所述染料可以例如选自FAM(5-或6-羧基荧光素)、VIC、NED、荧光素、荧光素异硫氰酸酯(FITC)、IRD-700/800、花青染料例如CY3、CY5、CY3.5、CY5.5、Cy7、呫吨、6-羧基-2’,4’,7’,4,7-六氯荧光素(HEX)、TET、6-羧基-4’,5’-二氯-2’,7’-二甲氧基荧光素(JOE)、N,N,N’,N’-四甲基-6-羧基罗丹明(TAMRA)、6-羧基-X-罗丹明(ROX)、5-羧基罗丹明-6G(R6G5)、6-羧基罗丹明-6G(RG6)、罗丹明、罗丹明绿、罗丹明红、罗丹明110、BODIPY染料例如BODIPY TMR、俄勒冈绿、香豆素类例如伞形酮、苯甲酰亚胺类例如Hoechst 33258、菲啶类例如德克萨斯红、雅吉瓦黄、Alexa Fluor、PET、溴化乙锭、吖啶染料、咔唑染料、吩嗪染料、卟啉染料、聚甲炔染料等。
在本发明的情形中，基于化学发光的测定法包括使用基于文献中为化学发光材料所描述的物理原理的染料(Kirk-Othmer，《化学技术百科全书》(Encyclopedia of chemical technology)，第4版，执行主编J.I.Kroschwitz；编辑M.Howe-Grant,John Wiley&Sons,1993,vol.15,p.518-562，通过引用并入本文，包括第551-562页上的引用)。优选的化学发光染料是吖啶酯类。
如本文中所述，“测定法”或“诊断测定法”可以是应用于诊断领域的任何类型。这种测定法可以基于待检测的分析物与具有一定亲和性的一种或多种捕获探针的结合。关于捕获分子与靶分子或感兴趣的分子之间的相互作用，亲和常数优选地大于108M-1。
在所述方法的特定实施方式中，所述两种结合剂中的至少一者被标记，以便被检测。
本发明还涉及一种用于执行本发明的方法的试剂盒，其包含用于测定来自患者的样品中的ADM-NH2水平的检测试剂和对应于所述样品中的ADM-NH2水平的参比数据，例如参比和/或阈值水平，其在20至150pg/mL之间，更优选地在30至100pg/mL之间，甚至更优选地在40至80pg/mL之间，最优选为70pg/mL，其中所述参比数据优选地存储在计算机可读介质上和/或以计算机可执行代码的形式使用，所述代码被配置成用于将所述测定的ADM-NH2水平与所述参比数据进行比较。
在本文描述的方法的一个实施方式中，所述方法另外包括将所述在危重病患者中测定的ADM-NH2水平与参比和/或阈值水平进行比较，其中所述比较在计算机处理器中使用计算机可执行代码进行。
本发明的方法可以部分地由计算机实现。例如，可以在计算机系统中执行将检测到的标志物例如ADM-NH2的水平与参比和/或阈值水平进行比较的步骤。例如，可以将所述测定的值输入(由卫生专业人员手动地或者从测定相应标志物水平的装置自动地)到计算机系统中。计算机系统可以直接位于护理点(例如初级监护病房或ED)，也可以位于通过计算机网络连接的远程位置(例如通过因特网或专业医疗云系统，任选地可以与其他IT系统或平台例如医院信息系统(HIS)相组合)。可选地或除此之外，将为用户(通常是卫生专业人员例如医生)显示和/或打印相关的疗法指导和/或疗法分层。
使用上述情形，下面的连续编号的实施方式提供了本发明的其他特定方面：
1.一种为使用皮质类固醇的治疗选择危重病患者的方法，所述方法包括测定所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平，将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，并在值高于所述阈值时指定使用皮质类固醇的疗法，在值低于所述阈值时放弃使用皮质类固醇的疗法。
2.根据实施方式1所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，所述方法包括：
a.提供所述患者的体液样品，并
b.确定所述样品中ADM-NH2或其片段的水平，以及
c.将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，
其中所述ADM-NH2或其片段的水平指示是否需要开始皮质类固醇疗法。
3.根据实施方式1和2所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中所述危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
4.根据实施方式1至3所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中所述ADM-NH2或其片段的水平通过将所述体液样品与特异性结合肾上腺髓质素原或其片段的捕获结合剂接触来测定。
5.根据实施方式1至4所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中所述测定包括使用特异性结合ADM-NH2或其片段的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂可以选自抗体、抗体片段或非IgG支架。
6.根据实施方式1至5所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中测定所述受试者体液样品中的ADM水平，并且其中所述测定包括使用特异性结合ADM的捕获结合剂，其中所述捕获结合剂被固定在表面上。
7.根据实施方式1至6所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中通过不同方法例如免疫测定法、活性测定法、质谱法测定ADM的水平。
8.根据实施方式1至7所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中用于检测ADM-NH2的所述测定法的测定灵敏度能够定量健康受试者的ADM-NH2，并且<70pg/ml，优选地<40pg/ml，更优选地<10pg/ml。
9.根据实施方式1至8所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中所述患者用选自糖皮质激素或盐皮质激素的皮质类固醇治疗。
10.根据实施方式1至9所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中所述糖皮质激素可以选自可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松或倍他米松。
11.根据实施方式1至10所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中所述盐皮质激素可以选自氟氢可的松。
12.根据实施方式1至11所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中所述冠状病毒选自Sars-CoV-1、Sars-CoV-2、MERS-CoV，特别是Sars-CoV-2。
13.根据实施方式1至12所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中所述体液选自全血、血清和血浆。
14.根据实施方式1至13所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中所述ADM-NH2的阈值水平在20至150pg/mL之间，更优选地在30至100pg/mL之间，甚至更优选地在40至80pg/mL之间，最优选地所述阈值水平为70pg/mL。
15.根据实施方式1至14所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中除了ADM-NH2或其片段之外还可以测量其他生物标志物。
16.根据实施方式1至15所述的用于在危重病患者中进行皮质类固醇疗法指导和/或分层的方法，其中所述其他生物标志物选自D-二聚体、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、乳酸盐、penKid、NT-proBNP、BNP、白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、血红蛋白、血小板计数、白蛋白、丙氨酸转氨酶、肌酐、血尿素、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、凝血酶原时间、血清铁蛋白、白介素-6(IL-6)、IL-10、IL-2、IL-7、干扰素γ(IF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、IP-10、MCP-1、MIP-1α。
使用上述情形，下面的连续编号的实施方式提供了本发明的其他特定方面：
1.一种危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，所述方法包括：
·提供所述患者的体液样品，并
·测定所述样品中ADM-NH2或其片段的水平，以及
·将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，
其中所述ADM-NH2或其片段的水平指示是否需要开始皮质类固醇疗法。
2.根据实施方式1所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中在ADM-NH2或其片段的水平高于所述阈值时指定使用皮质类固醇的疗法，并且其中在ADM-NH2或其片段的水平低于所述阈值时拒绝使用皮质类固醇的疗法。
3.根据实施方式1所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
4.根据实施方式1和3所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述ADM-NH2或其片段的水平通过将所述体液样品与特异性结合ADM-NH2或其片段的捕获结合剂接触来测定。
5.根据实施方式4所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述捕获结合剂与ADM-NH2的C-端部分(SEQ ID No.9)特异性结合，并且其中所述捕获结合剂的结合具体来说需要ADM-NH2的C-端酰胺。
6.根据实施方式4和5所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述捕获结合剂可以选自抗体、抗体片段或非IgG支架。
7.根据实施方式4至6所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述捕获结合剂被固定在表面上。
8.根据实施方式1至7所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中通过选自免疫测定法、活性测定法、质谱法的方法来测定ADM-NH2的水平。
9.根据实施方式8所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中用于检测ADM-NH2的所述免疫测定法的测定灵敏度能够定量健康受试者的ADM-NH2，并且是<70pg/ml，优选为<40pg/ml，更优选为<10pg/ml。
10.根据实施方式1至9所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述患者用选自糖皮质激素或盐皮质激素的皮质类固醇治疗。
11.根据实施方式10所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述糖皮质激素可以选自可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松或倍他米松。
12.根据实施方式10所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述盐皮质激素可以选自氟氢可的松。
13.根据实施方式3所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述冠状病毒选自Sars-CoV-1、Sars-CoV-2、MERS-CoV，特别是Sars-CoV-2。
14.根据实施方式1至13所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述体液选自全血、血清和血浆。
15.根据实施方式1至14所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述ADM-NH2的阈值水平在20至150pg/mL之间，更优选地在30至100pg/mL之间，甚至更优选地在40至80pg/mL之间，最优选地所述阈值水平为70pg/mL。
16.根据实施方式1至15所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中除了ADM-NH2或其片段之外还可以测量其他生物标志物。
17.根据实施方式1至16所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述其他生物标志物选自D-二聚体、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、乳酸盐、penKid、NT-proBNP、BNP、白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、血红蛋白、血小板计数、白蛋白、丙氨酸转氨酶、肌酐、血尿素、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、凝血酶原时间、血清铁蛋白、白介素-6(IL-6)、IL-10、IL-2、IL-7、干扰素γ(IF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、IP-10、MCP-1、MIP-1α。
18.一种用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述患者的特征在于当将所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较时，所述ADM-NH2或其片段的水平为高于所述预定阈值或高于先前测量的ADM-NH2或其片段的水平的值，其中所述危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
19.一种用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述患者的特征在于所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平已被测定，其中已将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，并且在值高于所述阈值时指定使用皮质类固醇的疗法，其中所述危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
附图说明
图1：示出了典型的bio-ADM剂量/信号曲线和在100μg/mL抗体NT-H存在下的bio-ADM剂量信号曲线。
图2：bio-ADM>/<70pg/mL和治疗组(PP群体)的患者发生脓毒性休克(浅灰色)的百分率(p＝0.033)。
图3：bio-ADM>/<70pg/mL和治疗组(PP群体)的90天死亡率。
图4：bio-ADM>/<70pg/mL和治疗组(PP群体)的住院时长。
实施例
实施例1-抗体的产生及其亲和常数的确定
我们开发了与bio-ADM的N-端(NT-ADM)、中段(MR-ADM)和C-端(CT-ADM)部分结合的小鼠单克隆抗体，并确定了它们的亲和常数(表2)。
用于免疫接种的肽
肽由JPT Peptide Technologies GmbH(Berlin,Germany)提供。使用Sulfo-SMCC交联方法将肽偶联到BSA。所述交联程序按照制造商的说明书进行(Thermo Fisher/Pierce)。
鼠类抗体的产生
将Balb/c小鼠在第0和14天用100μg肽-BSA-偶联物(在100μl完全弗氏佐剂中乳化)免疫接种，并在第21和28天用50μg所述偶联物(在100μl不完全弗氏佐剂中)免疫接种。在进行融合实验前3天，动物接受溶解在100μl盐水中的50μg偶联物，其作为一次腹膜内注射和一次静脉内注射提供。
用1ml 50％聚乙二醇将来自免疫接种小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞系SP2/0的细胞在37℃下融合30s。在清洗后，将细胞接种在96孔细胞培养板中。通过在HAT培养基(增补有20％胎牛血清和HAT增补剂的RPMI 1640培养基)中生长来选择杂交克隆。两周后，将HAT培养基用HT培养基替换进行三次传代，然后返回到正常细胞培养基。
融合后三周对细胞培养上清液进行抗原特异性IgG抗体的初步筛选。将测试呈阳性的微量培养物转移到24孔板中进行繁殖。在重新测试后，使用有限稀释技术对所选培养物进行克隆和再克隆，并确定同种型(Lane,1985.J.Immunol.Meth.81:223-228；Ziegler 等，1996.Horm.Metab.Res.28:11-15)。
表2：
单克隆抗体产生
抗体通过标准的抗体产生方法产生(Marx等，1997.Monoclonal Antibody Production,ATLA25,121)并通过蛋白A进行纯化。基于SDS凝胶电泳分析，抗体纯度>95％。
亲和常数
为了确定抗体对肾上腺髓质素的亲和性，使用Biacore 2000系统(GE HealthcareEurope GmbH,Freiburg,Germany)通过无标记物表面等离子体共振测定肾上腺髓质素与固定化抗体结合的动力学。按照制造商的说明书(小鼠抗体捕获试剂盒；GE Healthcare)，使用以高密度共价偶联到CM5传感器表面的抗小鼠Fc抗体进行抗体的可逆固定化。
标记程序(示踪剂)
将100μg(100μl)抗体(1mg/ml，在pH 7.4的PBS中)与10μl NHS-吖啶酯(1mg/ml，在乙腈中，InVent GmbH,Germany)混合(EP 0 353 971)，并在室温下温育20min。在SEC 400-5(Bio-Rad Laboratories,Inc.,USA)上通过凝胶过滤HPLC纯化标记的CT-H。将纯化的标记抗体在(300mmol/L磷酸钾，100mmol/L NaCl，10mmol/L Na-EDTA，5g/L牛血清白蛋白，pH 7.0)中稀释。终浓度为每200μL大约800.000个相对光单位(RLU)的标记化合物(约20ng标记的抗体)。使用AutoLumat LB 953(Berthold Technologies GmbH&Co.KG)测量吖啶酯化学发光。
固相
将聚苯乙烯管(Greiner Bio-One International AG,Austria)用抗体(1.5μg抗体/0.3mL 100mmol/L NaCl，50mmol/L TRIS/HCl，pH 7.8)包被(在室温下18h)。在用5％牛血清白蛋白阻断后，将管用pH 7.4的PBS清洗并真空干燥。
校准品
使用50mM Tris/HCl，250mM NaCl，0.2％ Triton X-100，0.5％BSA，20片/L的全蛋白酶抑制剂混合物片剂(Roche AG)，pH 7.8将合成的人ADM(hADM)(Bachem,Switzerland)线性稀释。校准品在使用前储存在-20℃下。
实施例2-产生高信噪比的抗体组合的确定
ADM免疫测定
将50μl样品(或校准品)移液到包被的管中，在添加标记的第二抗体(200μl)后，将管在室温下温育2h。通过用清洗溶液(20mM PBS，pH 7.4，0.1％Triton X-100)清洗5次(每次1ml)除去未结合的示踪剂。使用LB 953(Berthold Technologies GmbH&Co.KG)测量管结合的化学发光。
所有抗体均在夹心免疫测定法中作为包被的管和标记的抗体使用，并以下述变化形式组合(参见表3)。如在hADM免疫测定法下所描述的进行温育。结果作为特异性信号(在10ng/ml ADM下)/背景(不含ADM的样品)信号的比率给出。
表3：
信噪比 NT-ADM示踪剂 MR-ADM示踪剂 CT-ADM示踪剂
NT-ADM / 195 241
MR-ADM 204 / 904
CT-ADM 260 871 /
令人吃惊的是，我们发现MR-ADM和CT-ADM的组合是具有最高信噪比的组合。
随后，我们使用这种抗体组合进行进一步研究，以测量bio-ADM。我们使用抗MR-ADM抗体作为固相抗体，并使用抗CT-ADM抗体作为标记抗体。典型的剂量/信号曲线示出在图1中。所述测定法的分析灵敏度(10次运行的平均值，无ADM样品+2SD)为2pg ADM/ml。
实施例3-人肾上腺髓质素的稳定性
将人ADM在人柠檬酸盐血浆中稀释(n＝5，终浓度10ng ADM/ml)并在24℃下温育。在所选的时间点，将等分试样在-20℃下冷冻。在将样品解冻后，立即使用上述hADM免疫测定法定量hADM。
表4示出了在24℃下hADM在人血浆中的稳定性。
令人吃惊的是，在夹心免疫测定法中使用MR-ADM和CT-ADM的抗体组合，分析物的分析前稳定性高(免疫反应性的平均损失仅为0.9％/h)。相反，使用其他测定方法，报告了血浆半衰期仅为22min(Hinson等，2000 Endocrine Reviews 21(2):138-167)。由于在医院常规操作中从取样到分析的时间少于2h，因此所使用的ADM检测方法适合于常规诊断。值得注意的是，为了达到可接受的ADM免疫反应性稳定性，不需要向样品添加任何非常规添加剂(如抑肽酶(Ohta等，1999.Clin Chem 45(2):244-251))。
实施例4-校准品制剂的可重复性
我们发现制备用于ADM测定的校准品的结果具有很大可变性(平均CV 8.5％，参见表4)。这可能是由于hADM高度吸附到塑料和玻璃表面(Lewis等，1998.Clinical Chemistry 44(3):571-577)。通过添加去污剂(高达1％ Triton X 100或1％ Tween 20)、蛋白质(高达5％BSA)和高离子强度(高达1M NaCl)或其组合，这种效应仅略微降低。令人吃惊的是，如果将过量的抗ADM抗体(10μg/ml)添加到校准品稀释缓冲液，则ADM测定法校准品制剂的回收率和可重复性显著提高到制剂间CV<1％(表5)。
幸运的是，N-端抗体的存在不影响由MR-和C-端抗体的组合产生的bio-ADM信号(图1)。
表5：
校准品的制剂间变化
如上所述制备了含有和不含10μg/ml NT-ADM抗体的ADM测定法校准品。从5次独立的制备运行给出变异系数。使用上述的ADM测定法测量校准品(s/n-r＝信噪比)。对于所有下述研究来说，我们使用的ADM测定法是基于在示踪剂缓冲液中存在10μg/ml NT-ADM抗体和10μg/ml NT-ADM抗体作为增补剂的情况下制备的校准品。
实施例5
灵敏度
测定灵敏度的目的是完全覆盖健康受试者的ADM浓度。
健康受试者中的Bio-ADM浓度
使用bio-ADM测定法测量健康受试者(n＝100，平均年龄56岁)。中位数值为24.7pg/ml，最低值为11pg/ml，第99百分位数为43pg/ml。由于测定灵敏度为2pg/ml，因此使用所描述的bio-ADM测定法可以检测100％的所有健康受试者。
实施例6-HYPRESS研究
研究详情
HYPRESS研究是一项双盲随机临床试验，于2009年1月13日至2013年8月27日进行，并随访180天，直至2014年2月23日(Keh等，2016.JAMA316(17):1775-1785)。所述试验在德国大学和社区医院的34个中症或重症监护室进行，包括380名未处于脓毒性休克中的严重脓毒症成年患者。
在大学和社区医院的中症监护室或重症监护室(ICU)中对患者进行资格筛选，并从患者、患者授权代表或法律代表获得书面知情同意书。如果患者符合所有入选标准则被纳入：(1)提供知情同意书；(2)有感染的证据；(3)有证据表明对感染有全身响应，其被定义为至少2种全身炎症反应综合征标准12；以及(4)具有存在不超过48小时的器官功能障碍的证据。主要的排除标准是脓毒性休克。其他排除标准是年龄小于18岁，已知对氢化可的松或甘露糖醇(安慰剂)有超敏反应，或有糖皮质激素用药史并有继续治疗的指征或用糖皮质激素治疗的其他指征。不排除在入组前72小时内使用依托咪酯、在入组前72小时内短期使用糖皮质激素或使用局部或吸入性糖皮质激素的患者。
脓毒性休克被定义为由脓毒症引起的低血压(尽管有充足的容量状态)超过4小时(即平均动脉压<65mm Hg，收缩动脉压<90mm Hg，或使用血管加压药保持平均动脉压≥65mmHg或收缩动脉压≥90mm Hg)。当随机分组时未出现脓毒性休克时，在最初复苏期间短暂需要血管加压药但没有低血压且至少2小时没有使用血管加压药的患者有资格入选。充足的容量状态被定义为中央静脉压力大于或等于8mm Hg(在通气患者中≥12mm Hg)和中央静脉血氧饱和度大于70％。对于流体置换来说，患者应在30分钟内接受至少500至1000mL晶体液或300至500mL胶体。由于可能对肾功能产生有害影响，因此不鼓励使用羟乙基淀粉制剂。血管加压药的使用被定义为以至少5μg/kg/min的剂量使用多巴胺或任何剂量的肾上腺素、去甲肾上腺素、血管加压素或其他血管加压药的疗法。
研究药物(氢化可的松和安慰剂)由BAG Health Care GmbH生产和发放。药物以盒形式交付，每盒含有17个棕色玻璃瓶，供1名患者使用。每个小瓶含有100mg冻干的氢化可的松琥珀酸氢盐或同样量的作为安慰剂的冻干甘露糖醇，其与氢化可的松无法区分。药物以50mg的静脉推注形式给药，然后进行24小时连续输注，在第5天200mg，在第6和7天100mg，在第8和9天50mg，并在第10和11天25mg。
对于本分析来说，从SepNet研究HYPRESS研究(ClinicalTrials.gov编号：NCT00670254)的意向治疗数据集选择了总共n＝110例病例和对照，其中n＝97例按照方案进行治疗并被选择用于分析。在ICU期间出现和未出现脓毒性休克的患者按1:1的比例选择。对照患者根据人口统计学、器官功能障碍、合并用药和其他结果进行匹配。
病例对照研究的主要终点是在28天内发生脓毒性休克或从ICU出院。目的是鉴定bio-ADM水平(</>70pg/mL)和治疗组(氢化可的松相比于安慰剂)之间的潜在相互作用。
结果
在来自PP群体的n＝97名患者中，n＝47(49％)用氢化可的松治疗，n＝41(42％)在入组时具有高bio-ADM(>70pg/mL)，n＝25(26％)在90天内死亡。用氢化可的松治疗的患者的中值bio-ADM为67pg/mL，安慰剂组为56pg/mL(p＝0.279)。bio-ADM预测脓毒性休克，与治疗组无关：61％(n＝25/41)的bio-ADM>70pg/mL的患者发生脓毒性休克；而如果bio-ADM<70pg/mL，则只有36％(n＝20/56)发生脓毒性休克(p＝0.024)。
在bio-ADM<70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，40％的患者发生休克，安慰剂组的这一比例为32.3％。在bio-ADM>70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，50％的患者出现休克，而安慰剂组的这一比例为73.7％(比较所有4个组的p值＝0.033；相互作用的p值＝0.119，图2)。
在bio-ADM<70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，76.0％的患者在90天的随访中存活，而安慰剂组的存活率为76.7％。在bio-ADM>70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，72.7％的患者在90天的随访中存活，而安慰剂组的存活率为68.4％(相互作用的p值＝n.s.，图3)。
支持这一发现的是，对照组中bio-ADM>70pg/mL的患者住院时间更长，并需要更多的额外治疗。在bio-ADM>70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，中值住院时长为25天，而安慰剂组为35天。在bio-ADM<70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，中值住院时长为22天，而安慰剂组为22天(比较所有4个组的p值＝0.597，图4)。
在bio-ADM>70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，只有27.3％的患者需要手术干预，而安慰剂组的这一比例为57.9％。在bio-ADM<70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，48.0％的患者需要手术干预，而安慰剂组的这一比例为61.3％(比较所有4个组的p值＝0.085)。
在bio-ADM>70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，只有4.5％的患者需要使用丙泊酚的额外治疗，而安慰剂组的这一比例为31.6％。在bio-ADM<70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，16.0％的患者需要使用丙泊酚的额外治疗，而安慰剂组的这一比例为12.9％(比较所有4个组的p值＝0.114)。
在bio-ADM>70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，只有13.6％的患者需要使用苯二氮的额外治疗，而安慰剂组的这一比例为31.6％。在bio-ADM<70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，12.0％的患者需要使用苯二氮/>的额外治疗，而安慰剂组的这一比例为12.9％(比较所有4个组的p值＝0.282)。
在bio-ADM>70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，只有31.8％的患者需要使用阿片类药物的额外治疗，而安慰剂组的这一比例为57.9％。在bio-ADM<70pg/mL的患者中，如果使用氢化可的松治疗，40.0％的患者需要使用阿片类药物的额外治疗，而安慰剂组的这一比例为41.9％(比较所有4个组的p值＝0.401)。
序列
SEQ ID No.：1(preproADM：185个氨基酸)
MKLVSVALMYLGSLAFLGADTARLDVASEFRKKWNKWALSRGKRELRMSSSYPTGLADVKAGPAQTLIRPQDMKGASRSPEDSSPDAARIRVKRYRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYGRRRRRSLPEAGPGRTLVSSKPQAHGAPAPPSGSAPHFL
SEQ ID No.：2(肾上腺髓质素原N-端20肽，PAMP：preproADM的第22–41位氨基酸)
ARLDVASEF RKKWNKWALS R
SEQ ID No.：3(中段肾上腺髓质素原，MR-proADM：preproADM的第45–92位氨基酸)
ELRMSS SYPTGLADVK AGPAQTLIRP QDMKGASRSP EDSSPDAARI RV
SEQ ID No.：4(成熟的人肾上腺髓质素(成熟ADM)；酰胺化ADM；bio-ADM)：pro-ADM的第1-52位氨基酸或第95–146位氨基酸
YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVA PRSKISPQGY-CONH2
SEQ ID No.：5(肾上腺髓质素1-52-Gly(ADM 1-52-Gly)：preproADM的第95–147位氨基酸)
YRQSMN NFQGLRSFGC RFGTCTVQKL AHQIYQFTDK DKDNVAPRSK ISPQGYG
SEQ ID No.：6(C-端肾上腺髓质素原，CT-proADM：preproADM的第148–185位氨基酸)
RRR RRSLPEAGPG RTLVSSKPQA HGAPAPPSGS APHFL
SEQ ID No.：7(人ADM 1-21)
YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC
SEQ ID No.：8(ADM 21-32)
CTVQKLAHQIYQ
SEQ ID No.：9(ADM C-42-52)
CAPRSKISPQGY-CONH2
序列表
<110> 思芬构技术有限公司（SphingoTec GmbH）
<120> 用于危重病患者中皮质类固醇疗法分层的成熟肾上腺髓质素
<130> S75460WO
<150> EP21172844.9
<151> 2021-05-07
<150> EP21201767.7
<151> 2021-10-08
<160> 9
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 185
<212> PRT
<213> 人
<400> 1
Met Lys Leu Val Ser Val Ala Leu Met Tyr Leu Gly Ser Leu Ala Phe
1 5 10 15
Leu Gly Ala Asp Thr Ala Arg Leu Asp Val Ala Ser Glu Phe Arg Lys
20 25 30
Lys Trp Asn Lys Trp Ala Leu Ser Arg Gly Lys Arg Glu Leu Arg Met
35 40 45
Ser Ser Ser Tyr Pro Thr Gly Leu Ala Asp Val Lys Ala Gly Pro Ala
50 55 60
Gln Thr Leu Ile Arg Pro Gln Asp Met Lys Gly Ala Ser Arg Ser Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ser Pro Asp Ala Ala Arg Ile Arg Val Lys Arg Tyr Arg
85 90 95
Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys Arg Phe
100 105 110
Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln Phe Thr
115 120 125
Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser Pro Gln
130 135 140
Gly Tyr Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser Leu Pro Glu Ala Gly Pro Gly
145 150 155 160
Arg Thr Leu Val Ser Ser Lys Pro Gln Ala His Gly Ala Pro Ala Pro
165 170 175
Pro Ser Gly Ser Ala Pro His Phe Leu
180 185
<210> 2
<211> 20
<212> PRT
<213> 人
<400> 2
Ala Arg Leu Asp Val Ala Ser Glu Phe Arg Lys Lys Trp Asn Lys Trp
1 5 10 15
Ala Leu Ser Arg
20
<210> 3
<211> 48
<212> PRT
<213> 人
<400> 3
Glu Leu Arg Met Ser Ser Ser Tyr Pro Thr Gly Leu Ala Asp Val Lys
1 5 10 15
Ala Gly Pro Ala Gln Thr Leu Ile Arg Pro Gln Asp Met Lys Gly Ala
20 25 30
Ser Arg Ser Pro Glu Asp Ser Ser Pro Asp Ala Ala Arg Ile Arg Val
35 40 45
<210> 4
<211> 52
<212> PRT
<213> 人
<400> 4
Tyr Arg Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys
1 5 10 15
Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln
20 25 30
Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser
35 40 45
Pro Gln Gly Tyr
50
<210> 5
<211> 53
<212> PRT
<213> 人
<400> 5
Tyr Arg Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys
1 5 10 15
Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln
20 25 30
Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser
35 40 45
Pro Gln Gly Tyr Gly
50
<210> 6
<211> 38
<212> PRT
<213> 人
<400> 6
Arg Arg Arg Arg Arg Ser Leu Pro Glu Ala Gly Pro Gly Arg Thr Leu
1 5 10 15
Val Ser Ser Lys Pro Gln Ala His Gly Ala Pro Ala Pro Pro Ser Gly
20 25 30
Ser Ala Pro His Phe Leu
35
<210> 7
<211> 21
<212> PRT
<213> 人
<400> 7
Tyr Arg Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys
1 5 10 15
Arg Phe Gly Thr Cys
20
<210> 8
<211> 12
<212> PRT
<213> 人
<400> 8
Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln
1 5 10
<210> 9
<211> 12
<212> PRT
<213> 人
<400> 9
Cys Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser Pro Gln Gly Tyr
1 5 10

Claims (16)

1.一种危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，所述方法包括：
·提供所述患者的体液样品，并
·测定所述样品中ADM-NH2或其片段的水平，以及
·将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，
其中所述ADM-NH2或其片段的水平指示是否需要皮质类固醇疗法或开始皮质类固醇疗法。
2.根据权利要求1所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中在ADM-NH2或其片段的水平高于所述阈值时指定使用皮质类固醇的疗法，并且其中在ADM-NH2或其片段的水平低于所述阈值时拒绝使用皮质类固醇的疗法。
3.根据权利要求1所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
4.根据权利要求1和3所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述ADM-NH2或其片段的水平通过将所述体液样品与特异性结合ADM-NH2或其片段的捕获结合剂接触来测定。
5.根据权利要求4所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述捕获结合剂与ADM-NH2的C-端部分(SEQ ID No.9)特异性结合，并且其中所述捕获结合剂的结合具体来说需要ADM-NH2的C-端酰胺。
6.根据权利要求4和5所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述捕获结合剂可以选自抗体、抗体片段或非IgG支架。
7.根据权利要求1至6所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述患者用选自糖皮质激素或盐皮质激素的皮质类固醇治疗。
8.根据权利要求7所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述糖皮质激素可以选自可的松、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松或倍他米松。
9.根据权利要求7所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述盐皮质激素可以选自氟氢可的松。
10.根据权利要求3所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述冠状病毒选自Sars-CoV-1、Sars-CoV-2、MERS-CoV，特别是Sars-CoV-2。
11.根据权利要求1至10所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述体液选自全血、血清和血浆。
12.根据权利要求1至11所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述ADM-NH2的阈值水平在20至150pg/mL之间，更优选地在30至100pg/mL之间，甚至更优选地在40至80pg/mL之间，最优选地所述阈值水平为70pg/mL。
13.根据权利要求1至12所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中除了ADM-NH2或其片段之外还可以测量其他生物标志物。
14.根据权利要求1至13所述的危重病患者的皮质类固醇疗法指导和/或皮质类固醇疗法分层的方法，其中所述其他生物标志物选自D-二聚体、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、乳酸盐、DPP3、penKid、NT-proBNP、BNP、白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、血红蛋白、血小板计数、白蛋白、丙氨酸转氨酶、肌酐、血尿素、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、凝血酶原时间、血清铁蛋白、白介素-6(IL-6)、IL-10、IL-2、IL-7、干扰素γ(IF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、IP-10、MCP-1、MIP-1α。
15.一种用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述患者的特征在于当将所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较时，所述ADM-NH2或其片段的水平为高于所述预定阈值或高于先前测量的ADM-NH2或其片段的水平的值，
其中所述危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
16.一种用于治疗危重病患者的皮质类固醇，其中所述患者的特征在于所述患者的体液样品中ADM-NH2或其片段的水平已被测定，其中已将所述ADM-NH2或其片段的水平与预定阈值或先前测量的ADM-NH2或其片段的水平进行比较，并且在值高于所述阈值时指定使用皮质类固醇的疗法，
其中所述危重病患者是患有选自严重感染、脓毒症、脓毒性休克、急性呼吸综合症(ARDS)、社区获得性肺炎(CAP)、脑膜炎(例如细菌性或病毒性脑膜炎)、冠状病毒感染疾病(例如COVID-19)、心肺旁路手术(CPB)和心脏骤停的疾病的患者。
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