CN117286140A - 一种探针组合及其构建靶向细胞原位成像的方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于分子生物学的技术领域，具体涉及一种探针组合及其构建靶向细胞原位成像的方法和应用。本发明提供的探针组合SEQ ID No.1～SEQ IDNo.8，能够基于临近杂交反应触发肿瘤细胞形成树枝状纳米结构，进而在肿瘤细胞的表面形成荧光信号，具有高效、快速、准确的特点。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学的技术领域，具体涉及一种探针组合及其构建靶向细胞原位成像的方法和应用。
背景技术
细胞表面受体是一种独特的蛋白质，它可以识别细胞外基质的多种成分作为其配体，并在细胞信号传导和细胞间通信中发挥至关重要的作用。因此，靶向肿瘤细胞表面特异的细胞表面受体可以实现对肿瘤细胞的原位成像及检测，对于肿瘤早期诊断、治疗选择、预后评估等起着重要的作用。
目前研究者们已经开发了多种基于DNA纳米技术的细胞表面受体的识别表征方法，其中以临近杂交反应(proximityligation assay，PLA)应用最为广泛。PLA通过成对的临近探针同时识别细胞表面的目标分子，经临近探针的连接后利用核酸扩增法可将细胞表面受体识别信号转化为DNA检测，然而由于核酸扩增法需要对细胞或组织进行固定和预先透化，这大大限制了PLA在肿瘤细胞原位成像中的应用，不利于将健康细胞和非健康细胞进行高效、快速、准确的区分。
发明内容
本发明的目的在于提供一种探针组合及其构建靶向细胞原位成像的方法和应用，具有高效、快速、准确区分肿瘤细胞和正常细胞的特点。
本发明提供了一种探针组合，所述探针组合包括识别探针和成像探针；所述识别探针包括探针T-1和探针T-2；
所述成像探针包括探针SA、探针SB、探针AA和探针AB；
所述探针SA由SA-F和SA-Q合成；所述探针SB由SB-F和SB-Q合成；
所述探针T-1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；
所述探针T-2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；
所述SA-F的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；
所述SA-Q的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；
所述SB-F的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；
所述SB-Q的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；
所述探针AA的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；
所述探针AB的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。
优选的，所述探针SA的合成方法包括：将所述SA-F和SA-Q按摩尔比1：1.5～2进行第一混合，得到所述探针SA；
所述探针SB的合成方法包括：将所述SB-F和SB-Q按摩尔比1：1.5～2进行第二混合，得到所述探针SB。
本发明提供了上述技术方案所述的探针组合在制备检测肿瘤的产品中的应用。
优选的，所述肿瘤包括肿瘤细胞。
优选的，所述肿瘤细胞包括肝癌细胞。
优选的，所述产品包括试剂盒和/或试剂。
本发明还提供了一种基于临近杂交反应构建靶向细胞原位成像的方法，包括如下步骤：
将待测样本与上述技术方案所述探针组合中的识别探针进行混合，得到孵育后的待测样本；
将所述待测样本与上述技术方案所述探针组合中的成像探针进行非线性杂交链式反应后，形成靶向细胞；
对所述靶向细胞依次进行固定、染色和激光共聚焦成像分析；
所述待测样本、SA、SB、AA、AB、T-1和T-2的摩尔比为0.5：1：2：2：4：0.5：0.5。
优选的，所述激光共聚焦成像分析包括：当靶向细胞的细胞边缘有橘红色荧光信号时，则待测样本为肿瘤细胞；当靶向细胞的细胞边缘无荧光信号时，则待测样本为正常细胞。
优选的，所述非线性杂交链式反应时间为1h，温度为37℃。
优选的，所述固定和染色的时间分别为15min。
有益效果：
本发明提供了一种探针组合，所述探针组合包括识别探针和成像探针；所述识别探针包括探针T-1和探针T-2；所述成像探针包括探针SA、探针SB、探针AA和探针AB；所述探针SA由SA-F和SA-Q合成；所述探针SB由SB-F和SB-Q合成；所述各探针的核苷酸序列如SEQID No.1～SEQ ID No.8所示。本发明提供的探针组合能够基于临近杂交反应触发肿瘤细胞形成树枝状纳米结构，进而在肿瘤细胞的表面形成荧光信号。
基于上述技术有优势，本发明还提供了一种基于临近杂交反应构建靶向肿瘤细胞原位成像的方法，包括如下步骤：将待测样本与上述技术方案所述探针组合中的识别探针进行混合，得到孵育后的待测样本；将所述待测样本与上述技术方案所述探针组合中的成像探针进行非线性杂交链式反应后，形成靶向细胞；对所述靶向细胞依次进行固定、染色和激光共聚焦成像分析；所述待测样本、SA、SB、AA、AB、T-1和T-2的摩尔比为0.5：1：2：2：4：0.5：0.5。实验证明，采用本发明提供的技术方案，HepG2细胞边缘有强烈的橘红色荧光信号，而正常L-02细胞则没有橘红色荧光信号，且HepG2细胞表面的荧光强度是L-02细胞的200倍(P＜0.001)。因此，本发明提供的技术方案可以进行肿瘤细胞的表面成像，从而高效、快速、准确地区分开肿瘤细胞和正常细胞。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为实验例1中基于临近杂交反应触发的树枝状纳米结构自组装的靶向肿瘤细胞原位成像技术示意图；
图2为实验例1～实验例14中非线性杂交链式反应形成的聚丙烯酰氨凝胶电泳图；
图3为实验例1～2中进行非线性杂交链反应时监测的荧光光谱图；
图4为实验例1～2中形成和未形成树枝状纳米结构的原子力显微镜图；
图5为实施例1～2中HepG2细胞和L-02细胞表面成像的激光共聚焦图及荧光强度定量分析图。
具体实施方式
本发明提供了一种探针组合，所述探针组合包括识别探针和成像探针；所述识别探针包括探针T-1和探针T-2；所述成像探针包括探针SA、探针SB、探针AA和探针AB；所述探针SA由SA-F和SA-Q合成；所述探针SB由SB-F和SB-Q合成；所述探针T-1的核苷酸序列如SEQID No.1所示；所述探针T-2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述SA-F的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述SA-Q的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述SB-F的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述SB-Q的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；所述探针AA的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；所述探针AB的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。
如无特殊说明，本发明所涉及的核苷酸序列均由上海生工生物工程有限公司合成。
在本发明中，所述探针T-1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，具体为：5’-CACTACAGAGGTTGCGTCTGTCCCACGTTGTCATGGGGGGTTGGCCTGT TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCACTCCTTTTGATG AAGCTG-3’；所述探针T-2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，具体为：5’-TGACGAACTAGTTGGAGTGATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTACAGCATCCCCATGTGAACAATCGCATTGTGATTGTTACGGTT TCCGCCTCATGGACGTGCTG-3’。本发明所述识别探针优选为肝癌细胞表面特异性蛋白上皮细胞粘附分子EpCAM和TLS11a的适配体分别设计得到，所述识别探针T-1优选为依据EpCAM适配体及其延伸出来的临近序列(c和c*区)和触发序列(d和e区)序列得到；所述EpCAM适配体的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，具体为：5’-CACTACAGAGGTTGCGTCTGTCCCACGTTGTCATGGGGGGTTGGCCTG-3’；所述识别探针T-2优选为依据TLS11a的适配体及其延伸出来的临近序列(c和c*区)和触发序列(d和e区)序列得到；所述TLS11a适配体的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，具体为：5’ACAGCATCCCCATGTGAACAATCGCATTGTGATTGTTACGGTTTCCGCCT CATGGACGTGCTG-3’。
因此，本发明所述识别探针能够对细胞表面受体进行特异性识别进而触发非线性杂交链式反应(non-linear HCR)，有利于组装出DNA纳米树，进行信号输出。
本发明优选合成探针SA，所述SA的合成方法优选包括：将SA-F和SA-Q进行第一混合，冷却后得到探针SA；所述SA-F和SA-Q的摩尔比优选为1：1.5～2，更优选为1：1.5；所述第一混合的时间优选为5min；所述第一混合的温度优选为95℃；所述冷却的温度优选为16～25℃。通过碱基A-T、G-C配对且使用不同摩尔比的SA-F和SA-Q，有利于SA-F的充分反应，进而得到完整的双链探针SA，同时降低溶液中的背景信号。
本发明所述SA-F的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，具体为：5’-GTGCTCCATGACGTTCCTGACGTTCTCCTGTGCTCCATGACGTTCCTGAC GTTCTCCTCAGCTTCATCAACTAGTTCGTCA-3’；所述SA-F的5’端添加Cy3，具体为：5’-Cy3-GTGCTCCATGACGTTCCTGACGTTCTCCTGTGCTCCATGACGTTCCT GACGTTCTCCTCAGCTTCATCAACTAGTTCGTCA-3’；所述SA-Q的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，具体为：5’-AACTAGTTGATGAAGCTGAGGAACGTCATGGAGCACAGGAACGTCATG GAGCAC-3’；所述SA-Q的3’端添加BHQ2，具体为：5’-AACTAGTTGATGAAGCTGAGGAACGTCATGGAGCACAGGAACGTCATGGAGCAC-BHQ2-3’。通过添加荧光标记集团有利于后续成像时荧光信号的释放。
同时，本发明优选合成探针SB，所述SB的合成方法优选包括：将SB-F和SB-Q进行第二混合，冷却后得到探针SB；所述SB-F和SB-Q的摩尔比优选为1：1.5～2，更优选为1：1.5；所述第二混合的方式与第一混合的方式相同，所述第一混合的方式已在上文进行详细的说明，在此不再赘述；所述冷却的温度优选为16～25℃。通过碱基A-T、G-C配对且使用不同摩尔比的SB-F和SB-Q，有利于SB-F的充分反应，进而得到完整的双链探针SB，同时降低溶液中的背景信号。
本发明所述SB-F的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，具体为：5’-AGGAGAACGTCAGGAACGTCATGGAGCACAAAATGACGAACTAGTTGA TGAAGCTG-3’；所述SB-F的5’端添加Cy3，具体为：5’-Cy3-AGGAGAACGTCAGGAACGTCATGGAGCACAAAATGACGAACTAGT TGATGAAGCTG-3’；所述SB-Q的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，具体为：5’-CAGCTTCATCAACTAGGTGCTCCATGACGTTCCTGACGTT-3’；所述SB-Q的3’端添加BHQ2，具体为：5’-CAGCTTCATCAACTAGGTGCTCCATGACGTTCCTGACGTT-BHQ2-3’。通过添加荧光标记集团有利于后续成像时荧光信号的释放。
在本发明中，所述探针AA的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，具体为：5’-CATGACGTTCCTGTGCTCCATGACGTTCCTCAGCTT-5’；所述探针AB的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示，具体为5’-GCACCTAGTTGATGAAGC-3’。通过将上述识别探针和成像探针组合能够基于临近杂交反应触发肿瘤细胞形成树枝状纳米结构，进而在肿瘤细胞的表面形成荧光信号。
本发明提供了上述技术方案所述的探针组合在制备检测肿瘤的产品中的应用。在本发明中，所述肿瘤优选为肿瘤细胞；所述肿瘤细胞优选为肝癌细胞；所述肝癌细胞优选为HepG2细胞；所述产品优选为试剂盒和/或试剂，更优选为试剂盒。
本发明还提供了一种基于临近杂交反应构建靶向细胞原位成像的方法，包括如下步骤：将待测样本、上述技术方案所述的SA、SB、AA、AB、T-1和T-2进行非线性杂交链式反应后，形成靶向细胞；对所述靶向细胞依次进行固定、染色和激光共聚焦成像分析；所述待测样本、SA、SB、AA、AB、T-1和T-2的摩尔比为0.5：1：2：2：4：0.5：0.5。
本发明将待测样本与识别探针进行混合孵育。本发明所述混合孵育时，待测样本与识别探针T-1和T-2的摩尔比优选为0.5：0.5：0.5；所述识别探针T-1和T-2的核苷酸序列已在上文进行详细的说明，在此不再赘述；所述待测样本、孵育的时间和方式没有特殊的要求，采用本领域熟知的技术即可；在本发明的具体实施例中，所述待测样本为HepG2细胞和L-O2细胞，即分别将HepG2细胞和L-O2细胞与识别探针混合后在共聚焦培养皿上进行过夜孵育，以此有利于适配体的序列与待测样本进行充分的结合。
所述孵育后，本发明将孵育后的待测样本与成像探针进行非线性杂交链式反应。进行所述非线性杂交链式反应时，待测样本与成像探针SA、SB、AA和AB的摩尔比优选为0.5：1：2：2：4；所述SA、SB、AA、AB的核苷酸序列、合成已在上文进行了详细的说明，在此不再赘述；所述非线性杂交链式反应的时间优选为1h；反应的温度优选为37℃；通过上述反应，有利于待测样本形成靶向细胞。
得到所述靶向细胞后，本发明对所述靶向细胞进行固定。在本发明中，所述固定的时间优选为15min；所述固定的试剂优选为多聚甲醛；所述多聚甲醛的浓度优选为4wt.％。
所述固定后，本发明对固定后的靶向细胞进行染色。在发明中，所述染色的时间优选为15min；所述染色的试剂优选为Hoechst溶液；所述Hoechst溶液为Hoechst33258溶液。
所述染色后，本发明对染色后的靶向细胞进行激光共聚焦成像分析。在本发明中，进行所述激光共聚焦成像分析时，所用仪器优选为ZEISS LSM780；所述激光共聚焦成像分析优选为当靶向细胞的细胞边缘有橘红色荧光信号时，则待测样本为肿瘤细胞；当靶向细胞的细胞边缘无荧光信号时，则待测样本为正常细胞。
采用本发明提供的技术方案，肿瘤细胞边缘有强烈的橘红色荧光信号，而正常细胞则没有橘红色荧光信号。因此，本发明提供的技术方案可以进行肿瘤细胞的表面成像，从而高效、快速、准确地区分开肿瘤细胞和正常细胞。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的一种探针组合及其构建靶向细胞原位成像的方法和应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实验例1
一种模拟靶向细胞原位成像的方法，步骤为：其中，基于临近杂交反应触发靶向肿瘤细胞原位成像示意图见图1。
1)识别探针：基于肝癌细胞表面特异性蛋白选择上皮细胞粘附分子EpCAM的适配体及其延伸出来的临近序列(c和c*区)和触发序列(d和e区)序列而设计得到了识别探针T-1(SEQ ID No.1)；根据TLS11a的适配体及其延伸出来的临近序列(c和c*区)和触发序列(d和e区)序列设计得到了识别探针T-2(SEQ ID No.2)；EpCAM适配体序列为SEQ ID No.9，TLS11a适配体序列为SEQ ID No.10。
2)模拟链：根据步骤1)中EpCAM和TLS11a的适配体序列设计了一条互补模拟链(Ω)，模拟链(Ω)的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，具体为：5’-CAGCACGTCCATGAGGCGGAAACCGTAACAATCACAATGCGATTGTTCA CATGGGGATGCTGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCAGGCCAACCCCCCATGA CAACGTGGGACAGACGCAACCTCTGTAGTG-3’，即模拟链(Ω)是和肝癌的EpCAM和TLS11a的适配体完全互补的，可以作为没有细胞存在时的模拟情况，进而达到模拟肝癌细胞的目的。
3)成像探针：将SA-F(SEQ ID No.3)与SA-Q(SEQ ID No.4)按照摩尔比1：1.5在95℃下混合5min，逐渐冷却至室温后，形成完整的双链探针SA；
将SB-F(SEQ ID No.5)与SB-Q(SEQ ID No.6)按照摩尔比1：1.5在95℃下混合5min，逐渐冷却至室温，形成完整的双链探针SB；
探针AA(SEQ ID No.7)和AB(SEQ ID No.8)。
4)将步骤1)～3)中的SA、SB、AA、AB、Ω、T-1、T-2按照摩尔比1：2：2：4：0.5：0.5：0.5混合孵育1h形成non-linear HCR，之后利用12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析。
实验例2
与实验例1的区别在于步骤4)中将SA、SB、AA、AB、T-1、T-2按照摩尔比1：2：2：4：0.5：0.5混合孵育1h形成non-linear HCR，后利用12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析。
实验例3
与实验例1的区别在于步骤4)中将SA、SB、AA、AB、T-2按照摩尔比1：2：2：4：0.5混合孵育1h形成non-linear HCR，后利用12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析。
实验例4
与实验例1的区别在于步骤4)中将SA、SB、AA、AB、T-1按照摩尔比1：2：2：4：0.5混合孵育1h形成non-linear HCR，后利用12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析。
实验例5
与实验例1的区别在于步骤4)中对Ω进行12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)分析。
实验例6
与实验例1的区别在于步骤4)中将T-1和T-2按照摩尔比0.5：0.5混合孵育1h，后利用12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析。
实验例7
与实验例1的区别在于步骤4)中对T-2进行12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)分析。
实验例8
与实验例1的区别在于步骤4)中对T-1进行12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析。
实验例9
与实验例1的区别在于步骤4)中对AB进行12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析。
实验例10
与实验例1的区别在于步骤4)中对AA进行12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析。
实验例11
与实验例1的区别在于步骤4)中对BB进行12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析，BB是AB和SB-Q产生的双链，即non-linearHCR过程中形成的副产物。
实验例12
与实验例1的区别在于步骤4)中对BA进行12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析，BA是AA和SA-Q产生的双链，即non-linearHCR过程中形成的副产物。
实验例13
与实验例1的区别在于步骤4)中对SB进行12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析。
实验例14
与实验例1的区别在于步骤4)中对SA进行12％聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)进行分析。
结果与分析
1.凝胶电泳检测
分别对实验例1～4的non-linear HCR进行凝胶电泳，并对实验例5～14形成的序列进行凝胶电泳，结果见图2(在图2中，14泳道表示实验例1的结果、13泳道表示表示实验例2的结果，以此类推，1泳道表示表示实验例14的结果，泳道M为20bp的DNAmarker)。
由图2可以看出，实验例1中模拟链(Ω)及双识别探针(T-1和T-2)同时存在，因而形成了有效的触发序列来触发non-linear HCR(第14泳道，红框)；而实验例2～4中缺少模拟链(Ω)，在此情况下单个受体识别探针或者双识别单针(第11-13泳道)无法形成有效的触发序列来触发non-linearHCR。
2.荧光检测
将实验例1～实验例14中的non-linear HCR进行荧光检测，结果见图3(在图3中，橘色峰型表示实验例1的荧光结果，其余为实验例2～14的荧光结果)。
由图3可以看出，实验例1中的non-linear HCR产生了放大的荧光信号。也就是说，只有当模拟链(Ω)及双识别探针(T-1和T-2)均存在时non-linear HCR能被触发，最终级联组装形成DNA纳米树，荧光信号才能被放大输出。
3.原子力显微镜观察
将实验例1和实验例2形成的分别non-linear HCR通过液相模式原子力显微镜(AFM)在预处理的干燥云母基底上进行扫描观察，结果见图4(在图4中，withoutΩ表示实验例2的结果，withΩ表示实验例1的结果)。
由图4可以看出，在缺少模拟链(Ω)的情况下未形成DNA纳米树；而当模拟链(Ω)存在的情况下，生成了DNA纳米树。因此，采用发明提供的方案能够特异性识别触发非线性杂交链式反应，从而组装出DNA纳米树，进行信号输出。
实施例1
一种基于临近杂交反应构建靶向细胞原位成像的方法，步骤为：
1)取1mL的HepG2细胞(1×105/mL)并加入100nM的识别探针T-1(SEQ ID No.1)和100nM的T-2(SEQ ID No.1)，在共聚焦培养皿上进行过夜孵育，形成待测样本；
2)合成成像探针：探针SA：将SA-F(SEQ ID No.3)与SA-Q(SEQ ID No.4)按照摩尔比1：1.5在95℃下混合5min，逐渐冷却至室温后，形成完整的双链探针SA；
探针SB：将SB-F(SEQ ID No.5)与SB-Q(SEQ ID No.6)按照摩尔比1：1.5在95℃下混合5min，逐渐冷却至室温，形成完整的双链探针SB；
探针AA(SEQ ID No.7)和AB(SEQ ID No.8)；
3)在步骤1)孵育后的HepG2细胞中加入步骤2)中的成像探针SA、SB、AA和AB混合孵育1h形成靶向细胞(其中，添加200nM的SA、400nM的SB、400nM的AA和800nM的AB)，之后利用4wt.％的多聚甲醛靶向细胞进行固定15min，再用Hoechst染色15min，最后使用ZEISSLSM780(ZEISS,germany-many)进行激光共聚焦成像分析。
实施例2
与实施例1的不同之处在于，步骤1)中取1mL的L-O2细胞(1×105/mL)。
结果与分析
1.激光共聚焦成像及荧光强度定量分析
分别对实施例1和实施例2中的激光共聚焦成像及荧光强度定量结果进行统计，结果见图5(在图5中，CY3代表细胞成像发出来的光；DAPI代表细胞核的成像结果；MERGE代表CY3和DAPI合并在一起后的成像结果)。
由图5可以看出，HepG2细胞边缘有强烈的橘红色荧光信号，而正常对照L-02细胞则没有；此外通过荧光强度定量分析可知，HepG2细胞荧光强度平均为4.03，L-02细胞组荧光强度平均为0.02，可见HepG2细胞表面的荧光强度是L-02细胞的200倍(P＜0.001)，因此，本发明提供的技术方案可以进行肿瘤细胞的表面成像，从而区分开肿瘤细胞和正常细胞。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (10)
1.一种探针组合，其特征在于，所述探针组合包括识别探针和成像探针；所述识别探针包括探针T-1和探针T-2；
所述成像探针包括探针SA、探针SB、探针AA和探针AB；
所述探针SA由SA-F和SA-Q合成；所述探针SB由SB-F和SB-Q合成；
所述探针T-1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；
所述探针T-2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；
所述SA-F的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；
所述SA-Q的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；
所述SB-F的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；
所述SB-Q的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；
所述探针AA的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；
所述探针AB的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。
2.根据权利要求1所述的探针组合，其特征在于，所述探针SA的合成方法包括：将所述SA-F和SA-Q按摩尔比1：1.5～2进行第一混合，得到所述探针SA；
所述探针SB的合成方法包括：将所述SB-F和SB-Q按摩尔比1：1.5～2进行第二混合，得到所述探针SB。
3.权利要求1或2所述的探针组合在制备检测肿瘤的产品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肿瘤细胞。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞包括肝癌细胞。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂盒和/或试剂。
7.一种基于临近杂交反应构建靶向细胞原位成像的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将待测样本与权利要求1或2所述探针组合中的识别探针进行混合，得到孵育后的待测样本；
将所述待测样本与权利要求1或2所述探针组合中的成像探针进行非线性杂交链式反应后，形成靶向细胞；
对所述靶向细胞依次进行固定、染色和激光共聚焦成像分析；
所述待测样本与SA、SB、AA、AB、T-1和T-2的摩尔比为0.5：1：2：2：4：0.5：0.5。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述激光共聚焦成像分析包括：当靶向细胞的细胞边缘有橘红色荧光信号时，则待测样本为肿瘤细胞；当靶向细胞的细胞边缘无荧光信号时，则待测样本为正常细胞。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述非线性杂交链式反应时间为1h，温度为37℃。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述固定和染色的时间分别为15min。
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