CN117286138A - 一种胆固醇修饰的核酸纳米结构及其作为药物载体的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种胆固醇修饰的核酸纳米结构及其作为药物载体的应用，胆固醇修饰的核酸纳米结构由若干条胆固醇修饰的核酸单链并由核酸单链进行碱基互补配对组装成具有空间几何构型的纳米结构，所述空间几何构型选自二维结构或三维结构中的任意一种，所述三维结构的直径≤50nm，所述胆固醇修饰的核酸纳米结构作为特异性分布于肾脏的药物载体。与现有技术相比，本发明作为一种新型的肾脏递送的药物载体，不仅具备极高的生物安全性，而且提高了药物向肾脏递送的效率。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学技术领域，尤其是涉及一种胆固醇修饰的核酸纳米结构及其作为药物载体的应用。
背景技术
肾脏作为重要的代谢和排泄器官，在生命体中发挥着极其重要的作用。胆固醇是生物体内常见的一种亲脂性小分子，在细胞膜的组成、物质代谢和生长发育等生命过程中发挥着不可替代的作用(D.S.Schade,L.Shey,R.P.Eaton,Cholesterol Review:AMetabolically Important Molecule,Endocrine practice:official journal of theAmerican College of Endocrinology and the American Association of ClinicalEndocrinologists,26(2020)1514-1523.)。
由于肾脏对药物具有极强的排泄能力，因此制备良好的肾脏特异性分布的药物载体，可以增加肾脏的药物分布浓度以及储留的时间。
目前常用的为利用纳米结构材料作为药物载体，如脂质体、纳米乳、纳米粒等，如专利CN101953797A公开的一种载药缓控释纳米材料的制备方法与应用，其提供了一种以夹心二氧化硅纳米粒为载体，空腔中装载药物后作用于体内肿瘤部位。但有证据表明，不易降解的纳米结构，其往往在肾脏中充当结晶核，增加肾结石的风险(F.A.Shiekh,M.Khullar,S.K.Singh,Lithogenesis:induction of renal calcifications by nanobacteria,Urological research,34(2006)53-57.)。
核酸作为生物来源的物质，具有良好生物相容性和低免疫原性(S.Surana,A.R.Shenoy,Y.Krishnan,Designing DNAnanodevices for compatibility with theimmune system of higher organisms,Nature nanotechnology,10(2015)741-747.)，核酸纳米结构的尺寸可操控，结构易于修饰，而被广泛作为药物载体进行研究。部分小分子药物本身就可以与DNA双螺栓结构发生相互作用，例如多柔比星，其可以插入GC碱基配对的区域，被输送到作用的部位(F.Yao,J.Duan,Y.Wang,Y.Zhang,Y.Guo,H.Guo,X.Kang,Nanoporesingle-molecule analysis of DNA-doxorubicin interactions,Analyticalchemistry,87(2015)338-342.)。Berggren的团队设计了一种DNA纳米筏，搭载细胞因子，成功地利用DNA纳米结构的尺寸，使其富集到肾脏，用于治疗急性肾衰竭(W.Li,C.Wang,H.Lv,Z.Wang,M.Zhao,S.Liu,L.Gou,Y.Zhou,J.Li,J.Zhang,L.Li,Y.Wang,P.Lou,L.Wu,L.Zhou,Y.Chen,Y.Lu,J.Cheng,Y.P.Han,Q.Cao,W.Huang,N.Tong,X.Fu,J.Liu,X.Zheng,P.O.Berggren,A DNA Nanoraft-Based Cytokine Delivery Platform for Alleviationof Acute Kidney Injury,ACS nano,(2021).)。因此，核酸纳米结构是一种适用于搭载小分子以及大分子药物的优良载体。
因此，本申请预将结合胆固醇与核酸纳米作为一种药物载体，以实现在肾脏内的特异性分布。
发明内容
本发明的目的就是为了克服肾脏对药物的排泄能力以及药物载体不易降解等缺陷而提供一种胆固醇修饰的核酸纳米结构及其作为特异性在肾脏中分布的药物载体的应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
本发明的技术方案之一为提供一种胆固醇修饰的核酸纳米结构，由若干条胆固醇修饰的核酸单链并由核酸单链进行碱基互补配对组装成具有空间几何构型的纳米结构，所述空间几何构型选自二维结构或三维结构中的任意一种，所述三维结构的直径≤50nm。
在一些具体实施方式中，所述核酸单链选自DNA单链或RNA单链中的任意一种。
在一些具体实施方式中，所述二维结构包括Y型，所述Y型的结构包括呈120°弯折且两两平行后组成Y型的三条DNA单链，分别为DNA单链E-A、DNA单链E-B、DNA单链E-C，与所述DNA单链E-A、DNA单链E-B、DNA单链E-C的弯折部分碱基进行碱基互补配对并一体成Y型结构的DNA单链C，与所述DNA单链E-A、DNA单链E-B、DNA单链E-C中每两条单链的端部碱基进行碱基互补配对的DNA单链S-A、DNA单链S-B、DNA单链S-C，分别与所述DNA单链S-A、DNA单链S-B、DNA单链S-C端部的剩余碱基进行碱基互补配对的DNA单链S-comp，所述DNA单链E-A、DNA单链E-B、DNA单链E-C中的任意一条或多条还修饰有胆固醇。
在一些具体实施方式中，所述DNA单链C的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，所述DNA单链E-A的碱基序列如SEQ ID NO.2所示，所述DNA单链E-B的碱基序列如SEQ ID NO.3所示，所述DNA单链E-C的碱基序列如SEQ ID NO.4所示，所述DNA单链S-A的碱基序列如SEQ IDNO.5所示，所述DNA单链S-B的碱基序列如SEQ ID NO.6所示，所述DNA单链S-C的碱基序列如SEQ ID NO.7所示，所述DNA单链S-comp的碱基序列如SEQ ID NO.8所示，所述DNA单链E-A、DNA单链E-B、DNA单链E-C中的任意一条或多条DNA单链的3’端部修饰有胆固醇。
在一些具体实施方式中，所述三维结构包括正三角体，所述正三角体的结构包括四条分别在四个平面内呈三角状并两两相互进行碱基互补配对后呈正三角立体结构的DNA单链，分别为DNA单链T1、DNA单链T2、DNA单链T3、DNA单链T4，位于正三角体任意一到三个顶点处的任意一条或多条不同的DNA单链修饰有胆固醇。
在一些具体实施方式中，所述DNA单链T1的碱基序列如SEQ ID NO.9所示，所述DNA单链T2的碱基序列如SEQ ID NO.10所示，所述DNA单链T3的碱基序列如SEQ ID NO.11所示，所述DNA单链T4的碱基序列如SEQ ID NO.12所示，所述DNA单链T1、DNA单链T3、DNA单链T4中的任意一条或多条DNA单链的3’端部修饰有胆固醇。
本发明的技术方案之二为提供一种如上述技术方案之一所述胆固醇修饰的核酸纳米结构的应用，所述胆固醇修饰的核酸纳米结构作为药物载体的应用。
在一些具体实施方式中，所述药物载体为特异性在肾脏中分布的药物载体。
在一些具体实施方式中，所述药物载体搭载的药物分子连接在任意一条核酸单链上。
在一些具体实施方式中，所述药物分子包括小分子药物和大分子药物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)胆固醇作为一种亲脂性小分子，与亲水性的核酸结合，产生了一种两亲性的材料即本发明的胆固醇修饰的核酸纳米结构，使得核酸纳米结构不仅易于被细胞吸收，而且可以延长核酸纳米结构在体循环时间，使得整个核酸纳米结构在体内产生特异性的分布。
(2)本发明提供的胆固醇修饰的核酸纳米结构能特异性地在肾脏分布，作为一种新型的肾脏递送的药物载体，不仅具备极高的生物安全性，而且提高了药物向肾脏递送的效率。
附图说明
图1为实施例1、2分别制备得到的Y型胆固醇修饰的核酸纳米结构(3PS，图a)和正三角体型胆固醇修饰的核酸纳米结构(TDN，图b)的示意图。
图2为实施例1中利用非变性PAGE胶电泳表征Y型胆固醇修饰的核酸纳米结构的合成。
图3为实施例1中通过粒径分析表征Y型胆固醇修饰的核酸纳米结构的合成。
图4为实施例1制备得到的Y型胆固醇修饰的核酸纳米结构在动物在体中的分布成像。
图5为实施例1制备得到的Y型胆固醇修饰的核酸纳米结构在动物离体器官中的分布定量结果。
图6为实施例2中利用非变性PAGE胶电泳表征正三角体型胆固醇修饰的核酸纳米结构的合成。
图7为实施例2中通过粒径分析表征正三角体型胆固醇修饰的核酸纳米结构的合成。
图8为实施例2制备得到的正三角体型胆固醇修饰的核酸纳米结构在动物在体中的分布成像。
图9为实施例2制备得到的正三角体型胆固醇修饰的核酸纳米结构在动物离体器官中的分布定量结果。
图10为实施例3制备得到的搭载siRNA的TDN-3Chol在动物离体器官中的分布定量结果。
图11为实施例3制备得到的TDN-3Chol-siP53对动物肾靶向的药效作用。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。本实施例以本发明技术方案为前提进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
以下各实施例和对比例中，如无特别说明的原料或处理技术，则表明其均为本领域的常规市售原料产品或常规处理技术。
实验材料来源：
(1)Poloxamer 188购于MCE；
(2)HEPES、氯化钾和氯化镁购于生工；
(3)BALB/c-Nu小鼠购于集萃药康；C57BL/6小鼠购于集萃药康
(4)DNA和RNA序列由艾科瑞生物工程有限公司生物(Accurate Biology)合成；
(5)p53抗体购于Abcam。
分析仪器：
(1)粒径分析采用的是Malvern Zetasizer Nano ZS90；
(2)小动物活体成像系统为PerkinElmer的IVIS Lumina III。
实施例1：Y型结构的胆固醇修饰的核酸纳米结构的组装与表征
1、组装
根据如下组别进行组装，将各组别中的等化学计量的寡核苷酸链(组装终浓度为100nM)混合在1×组装缓冲液(25mM HEPES，140mM氯化钾，10mM氯化镁，调pH＝7，0.1％Poloxamer 188)中，在95至4℃下进行热退火(分别为依次在95、65、50、42、37、22和4℃下保持5分钟)。
组别1-1为无胆固醇修饰的核酸纳米结构(命名为：3point start，简称3PS)：组装链为DNA单链C、DNA单链E-A、DNA单链E-B、DNA单链E-C、DNA单链S-A、DNA单链S-B、DNA单链S-C、3条相同碱基序列的DNA单链S-comp。
组别1-2为一个胆固醇修饰的核酸纳米结构(简称为3PS-1Chol)：组装链为DNA单链C、DNA单链E-A-CHOL、DNA单链E-B、DNA单链E-C、DNA单链S-A、DNA单链S-B、DNA单链S-C、3条相同碱基序列的DNA单链S-comp。
组别1-3为三个胆固醇修饰的核酸纳米结构(简称为3PS-3Chol)：组装链为DNA单链C、DNA单链E-A-CHOL、DNA单链E-B-CHOL、DNA单链E-C-CHOL、DNA单链S-A、DNA单链S-B、DNA单链S-C、3条相同碱基序列的DNA单链S-comp。
具体序列如表1所示。
表1组成Y型胆固醇修饰的核酸纳米结构的序列信息表
2、表征：通过非变性PAGE胶电泳和粒径分析表征产物，如图2和图3所示。
从图2中可以看出，组别1-2和组别1-3中胆固醇的修饰对其无胆固醇修饰的核酸纳米的电泳位置(参考组别1-1)的影响并不明显，且DNA单链C+DNA单链E-A+DNA单链E-B+DNA单链E-C由于结构不稳定，出现了两种结构大小的条带，而完整的结构以单一的条带出现。
而图3的粒径分析显示，胆固醇的修饰使得纳米结构在水相中更加紧凑，粒径的结果要更小，如组别1-2所示的3PS-1Chol的粒径在12.22±0.23nm，组别1-3所示的3PS-3Chol的粒径在10.11±1.19，而组别1-1所示的3PS的粒径在18.89±1.61nm。
3、在BALB/c-Nu小鼠体内外的特异性分布
(1)Dylight750标记的3PS、Dylight750标记的3PS-1Chol、Dylight750标记的3PS-3Chol的构建：将DNA单链C-Dylight750(其碱基序列如SEQ ID NO.1所示，表1)替换上述DNA单链C，Dylight750标记的3PS-3Chol的结构示意图如图1所示。
(2)组装液的置换：用50kD的超滤管，将浓缩的核酸纳米结构用含有0.1％Poloxamer 188的PBS进行洗涤和置换。通过nanodrop测定样品浓度，计算摩尔浓度。
(3)将浓缩产物使用0.22μm孔径CA滤膜进行过滤除菌，置于4℃存储，用于后续动物实验。
(4)将样品用含有0.1％ Poloxamer 188的PBS稀释至5μM备用。
(5)小鼠尾静脉注射：将小鼠称重，使用小鼠尾静脉注射显像仪以5μL/g的量对小鼠尾静脉进行注射。
(6)小鼠在体成像：将完成尾静脉注射的小鼠放入麻醉仓，待小鼠麻醉后，放入小动物活体成像系统，戴好麻醉面罩。在15min，30min和60min时间点，以750nm激发光检测小鼠在体的Dylight750荧光信号分布，如图4所示。
图4的结果表明，Dylight750标记的3PS-1Chol、3PS-3Chol比3PS有更长的在体循环时间，膀胱的信号更晚出现。
(7)小鼠离体成像：待小鼠在体的Dylight750荧光信号稳定后，将小鼠取出，脱颈处死。将小鼠各部分器官迅速剥离，浸入PBS中，漂洗干净后，放入小动物活体成像系统，对各个器官的荧光信号进行成像。计算各个器官的荧光信号的总值和均值，如图5所示。
图5的结果表明，Dylight750标记的3PS-1Chol、3PS-3Chol比3PS在肾脏分布的平均荧光信号增加了一倍，并且超过了其它器官的平均分布量。
实施例2：正三角体型结构的胆固醇修饰的核酸纳米结构的组装与表征
1、组装
根据如下组别进行组装，将各组别中的等化学计量的寡核苷酸链(组装终浓度为100nM)混合在1×组装缓冲液(25mM HEPES，140mM氯化钾，10mM氯化镁，调pH＝7，0.1％Poloxamer 188)中，在在95至4℃下进行热退火(分别为依次在95、65、50、42、37、22和4℃下保持5分钟)。
组别2-1为无胆固醇修饰的核酸纳米结构(命名为Tetrahedron，简称TDN)：组装链为DNA单链T1、DNA单链T2、DNA单链T3以及DNA单链T4。
组别2-2为一个胆固醇修饰的核酸纳米结构(简称为TDN-1Chol)：组装链为DNA单链T1-CHOL、DNA单链T2、DNA单链T3以及DNA单链T4。
组别2-3为三个胆固醇修饰的核酸纳米结构(简称为TDN-3Chol)：组装链为DNA单链T1-CHOL、DNA单链T2、DNA单链T3-CHOL以及DNA单链T4-CHOL。
具体序列如表2所示。
表2组成胆固醇修饰的纳米结构TDN的序列信息表
2、表征：通过非变性PAGE胶电泳和粒径分析表征产物，如图6和图7所示。
从图6可以看出，组别2-2和组别2-3中胆固醇的修饰对其无胆固醇修饰的核酸纳米的电泳位置(参考组别2-1)的影响并不明显。
而图7的粒径分析显示，胆固醇的修饰使得纳米结构在水相中更加紧凑，粒径的结果要更小。如组别2-2所示的TDN-1Chol的粒径在9.22±0.99nm，组别2-3所示的TDN-3Chol的粒径在6.22±0.62nm，而组别2-1所示的TDN的粒径在11.55±1.77nm。
3、在BALB/c-Nu小鼠体内外的特异性分布
(1)Dylight750标记的TDN、Dylight750标记的TDN-1Chol、Dylight750标记的TDN-3Chol的构建：将DNA单链T2-Dylight750(其碱基序列如SEQ ID NO.10所示，表2)替换上述DNA单链T2，Dylight750标记的TDN-3Chol的结构示意图如图1所示。
(2)组装液的置换：用50kD的超滤管，将浓缩的纳米结构用含有0.1％Poloxamer188的PBS进行洗涤和置换。通过nanodrop测定样品浓度，计算摩尔浓度。
(3)将浓缩产物使用0.22μm孔径CA滤膜进行过滤除菌，置于4℃存储，用于后续动物实验。
(4)将样品用含有0.1％ Poloxamer 188的PBS稀释至5μM备用。
(5)小鼠尾静脉注射：将小鼠称重，使用小鼠尾静脉注射显像仪以5μL/g的量对小鼠尾静脉进行注射。
(6)小鼠在体成像：将完成尾静脉注射的小鼠放入麻醉仓，待小鼠麻醉后，放入小动物活体成像系统，戴好麻醉面罩。在15min，30min和60min时间点，以750nm激发光检测小鼠在体的Dylight750荧光信号分布，如图8所示。
图8结果表明，Dylight750标记的TDN-1Chol、TDN-3Chol比TDN有更长的在体循环时间，膀胱的信号更晚出现。
(7)小鼠离体成像：待小鼠在体的Dylight750荧光信号稳定后，将小鼠取出，脱颈处死。将小鼠各部分器官迅速剥离，浸入PBS中，漂洗干净后，放入小动物活体成像系统，对各个器官的荧光信号进行成像。计算各个器官的荧光信号的总值和均值，如图9所示。
图9结果显示，Dylight750标记的TDN-1Chol、TDN-3Chol比TDN在肾脏分布的平均荧光信号更多，且随着胆固醇修饰的数量增加，其在肾脏分布的平均荧光信号越多，并且超过了其它器官的平均分布量。
实施例3：
本实施例以正三角体的胆固醇修饰的核酸纳米结构为例，搭载能干扰p53蛋白表达的siRNA，测试胆固醇修饰的核酸纳米结构的靶向肾脏的能力。
(1)Cy3标记的TDN-3Chol-siP53的合成：组装链为T1-CHOL、T2-siP53(其碱基序列如SEQ ID NO.13所示，表2)、T3-CHOL、siRNA-Cy3(其碱基序列如SEQ ID NO.14所示，表2)以及T4-CHOL在95至4℃下进行热退火(分别在95、65、50、42、37、22和4℃下保持5分钟)，其中T2-siP53中含有与siRNA-Cy3碱基互补配对的序列。用50kD的超滤管，将浓缩的纳米结构用含有0.1％ Poloxamer188的PBS进行洗涤和置换。通过nanodrop测定样品浓度，计算摩尔浓度。过滤除菌后，将样品用含有0.1％ Poloxamer 188的PBS稀释至5μM备用。
(2)C57BL/6小鼠尾静脉注射：将小鼠称重，使用小鼠尾静脉注射显像仪以5μL/g的量对小鼠尾静脉进行注射。
(3)小鼠离体成像：待小鼠在体的Cy3荧光信号稳定后，将小鼠取出，脱颈处死。将小鼠各部分器官迅速剥离，浸入PBS中，漂洗干净后，放入小动物活体成像系统，对各个器官的荧光信号进行成像。计算各个器官的Cy3荧光信号的总值和均值，如图10所示。
图10结果显示，Cy3标记的TDN-3Chol-siP53在搭载siRNA后仍然在肾脏中保持着非常明显平均荧光信号，表明其具有显著的肾脏靶向递送的作用。
(4)TDN-3Chol-siP53的合成：组装链为T1-CHOL、T2-siP53(其碱基序列如SEQ IDNO.13所示，表2)、T3-CHOL、siRNA(其碱基序列如SEQ ID NO.14所示，表2)以及T4-CHOL在95至4℃下进行热退火(分别依次在95、65、50、42、37、22和4℃下保持5分钟)，其中T2-siP53中含有与siRNA碱基互补配对的序列。用50kD的超滤管，将浓缩的纳米结构用含有0.1％Poloxamer 188的PBS进行洗涤和置换。通过nanodrop测定样品浓度，计算摩尔浓度。过滤除菌后，将样品用含有0.1％ Poloxamer 188的PBS稀释至5μM备用。
(5)药效检测：分别以0.75mg/kg、1.5mg/kg的剂量对小鼠尾静脉进行注射上述TDN-3Chol-siP53，3天后，取小鼠肾脏进行IHC切片染色，如图11所示。
图11结果显示，TDN-3Chol在搭载能干扰p53的siRNA后，能以剂量依赖的方式降低了肾脏中p53蛋白的量。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种胆固醇修饰的核酸纳米结构，其特征在于，由若干条胆固醇修饰的核酸单链并由核酸单链进行碱基互补配对组装成具有空间几何构型的纳米结构，所述空间几何构型选自二维结构或三维结构中的任意一种，所述三维结构的直径≤50nm。
2.根据权利要求1所述的一种胆固醇修饰的核酸纳米结构，其特征在于，所述核酸单链选自DNA单链或RNA单链中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的一种胆固醇修饰的核酸纳米结构，其特征在于，所述二维结构包括Y型，所述Y型的结构包括呈120°弯折且两两平行后组成Y型的三条DNA单链，分别为DNA单链E-A、DNA单链E-B、DNA单链E-C，与所述DNA单链E-A、DNA单链E-B、DNA单链E-C的弯折部分碱基进行碱基互补配对并一体成Y型结构的DNA单链C，与所述DNA单链E-A、DNA单链E-B、DNA单链E-C中每两条单链的端部碱基进行碱基互补配对的DNA单链S-A、DNA单链S-B、DNA单链S-C，分别与所述DNA单链S-A、DNA单链S-B、DNA单链S-C端部的剩余碱基进行碱基互补配对的DNA单链S-comp，所述DNA单链E-A、DNA单链E-B、DNA单链E-C中的任意一条或多条还修饰有胆固醇。
4.根据权利要求3所述的一种胆固醇修饰的核酸纳米结构，其特征在于，所述DNA单链C的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，所述DNA单链E-A的碱基序列如SEQ ID NO.2所示，所述DNA单链E-B的碱基序列如SEQ ID NO.3所示，所述DNA单链E-C的碱基序列如SEQ ID NO.4所示，所述DNA单链S-A的碱基序列如SEQ ID NO.5所示，所述DNA单链S-B的碱基序列如SEQ IDNO.6所示，所述DNA单链S-C的碱基序列如SEQ ID NO.7所示，所述DNA单链S-comp的碱基序列如SEQ ID NO.8所示，所述DNA单链E-A、DNA单链E-B、DNA单链E-C中的任意一条或多条DNA单链的3’端部修饰有胆固醇。
5.根据权利要求1所述的一种胆固醇修饰的核酸纳米结构，其特征在于，所述三维结构包括正三角体，所述正三角体的结构包括四条分别在四个平面内呈三角状并两两相互进行碱基互补配对后呈正三角立体结构的DNA单链，分别为DNA单链T1、DNA单链T2、DNA单链T3、DNA单链T4，位于正三角体任意一到三个顶点处的任意一条或多条不同的DNA单链修饰有胆固醇。
6.根据权利要求5所述的一种胆固醇修饰的核酸纳米结构，其特征在于，所述DNA单链T1的碱基序列如SEQ ID NO.9所示，所述DNA单链T2的碱基序列如SEQ ID NO.10所示，所述DNA单链T3的碱基序列如SEQ ID NO.11所示，所述DNA单链T4的碱基序列如SEQ ID NO.12所示，所述DNA单链T1、DNA单链T3、DNA单链T4中的任意一条或多条DNA单链的3’端部修饰有胆固醇。
7.一种如权利要求1-6任一所述的胆固醇修饰的核酸纳米结构的应用，其特征在于，所述胆固醇修饰的核酸纳米结构作为药物载体的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物载体为特异性在肾脏中分布的药物载体。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物载体搭载的药物分子连接在任意一条核酸单链上。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物分子包括小分子药物和大分子药物。
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