CN117279633A

CN117279633A - 用于治疗癌症的组合疗法

Info

Publication number: CN117279633A
Application number: CN202280032289.8A
Authority: CN
Inventors: 万虹; B·J·希姆; S·兰多夫; J·庞斯; T·C-C·郭
Original assignee: Alx Cancer Biotechnology Co
Current assignee: Alx Cancer Biotechnology Co
Priority date: 2021-05-13
Filing date: 2022-05-12
Publication date: 2023-12-22

Abstract

本发明提供了治疗癌症的方法，其包括将包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽(例如融合多肽)与至少一种化疗剂和/或至少一种治疗性抗体组合施用。还提供了相关的试剂盒。

Description

用于治疗癌症的组合疗法

相关申请的交叉引用

本申请要求2021年5月13日提交的美国临时申请号63/188,388和2021年5月26日提交的美国临时申请号63/193,581的优先权权益，每个所述申请的内容通过引用整体并入本文。

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技术领域

本发明涉及治疗癌症的方法，其包括施用阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间的相互作用的剂联合化疗剂和至少一种另外的抗癌剂和/或至少一种另外的癌症治疗方式。

背景技术

许多癌症的预后较差，即使在用可用的治疗剂治疗时也是如此。本领域需要新的治疗方法以提供另外的治疗选择并改善癌症患者的结果。

肿瘤细胞操纵髓系室以逃避抗肿瘤宿主免疫反应(Gabrilovich等人,Nat RevImmunol(2012)12(4):253-68)。例如，虽然在正常细胞的表面上表达的CD47结合巨噬细胞上的SIRPα并提供“不要吃我”信号，但还发现肿瘤细胞过表达CD47以逃避免疫监视的巨噬细胞组分(Oldenborg,ISRN Hematol(2013)614619)。

巨噬细胞介导的癌细胞破坏需要破坏“不要吃我”信号(例如CD47-SIRPα)和激活“吃我”信号。两种组分单独都不足以引发针对肿瘤细胞的最大吞噬反应。如上所述，CD47通过其与巨噬细胞上的SIRPα的相互作用提供基本的“不要吃我”信号。促吞噬“吃我”信号可以通过与其激活性Fcγ受体结合而被提供给相同的巨噬细胞。例如，促吞噬“吃我”信号可以通过抗肿瘤抗体与巨噬细胞上的Fc受体的结合来提供。

本文引用的所有参考文献，包括专利申请、专利出版物和UniProtKB/Swiss-Prot登录号均通过引用整体并入本文，如同每个单独的参考文献被具体和单独地指示为通过引用并入。

发明内容

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的(a)包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGF2抗体，和(d)紫杉醇；其中所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列；其中所述Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引，其中所述癌症是胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌，并且其中所述个体已接受过至少一种用于胃癌或GEJ癌的先前治疗。在一些实施方案中，所述胃癌或GEJ癌是HER2过表达(例如，HER2⁺)的胃癌或HER2过表达的GEJ癌。在一些实施方案中，所述个体已接受过抗HER2抗体、抗HER2抗体和氟嘧啶、抗HER2抗体和铂基化疗剂、或铂基化疗剂的先前治疗。在一些实施方案中，个体在抗HER2抗体、抗HER2抗体和氟嘧啶、抗HER2抗体和铂基化疗剂、或铂基化疗剂的治疗期间或之后已进展。在一些实施方案中，所述抗HER2抗体是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，所述抗VEGF抗体是雷莫芦单抗。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以约10至约60mg/kg的剂量每周一次(qw)，诸如10mg/kg、15mg/kg或30mg/kg每周一次施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以10mg/kg、15mg/kg或30mg/kg的剂量每两周一次施用。在一些实施方案中，所述曲妥珠单抗以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用。在一些实施方案中，所述曲妥珠单抗以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用(例如，6mg/kg的初始剂量，然后是初始6mg/kg剂量后两周时的4mg/kg剂量，然后是第一次4mg/kg剂量后每两周的4mg/kg剂量)。在一些实施方案中，所述紫杉醇以80mg/m2的剂量在28天周期的第1、8和15天施用。在一些实施方案中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。

在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽形成同源二聚体。在一些实施方案中，所述个体是人。

在一些实施方案中，提供了一种试剂盒，其包含在药学上可接受的载剂中的包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，所述多肽用于与抗HER2抗体、抗VEGFR2抗体和紫杉醇组合；其中所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列；其中所述Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引，并且其中所述试剂盒包含用于向患有胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌、已接受过至少一种用于胃癌或GEJ癌的先前治疗的个体施用所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽与所述抗HER2抗体、所述抗VEGFR2抗体和所述紫杉醇组合的说明书。在一些实施方案中，所述胃癌或GEJ癌是HER2⁺胃癌或HER2⁺GEJ癌。在一些实施方案中，所述抗HER2抗体是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，所述抗VEGFR2抗体是雷莫芦单抗。在一些实施方案中，所述个体接受了使用抗HER2抗体(例如曲妥珠单抗)和/或氟嘧啶和/或铂基化疗剂的先前治疗(或多种治疗)。在一些实施方案中，所述个体的所述胃癌或GEJ癌在包含抗HER2抗体(例如曲妥珠单抗)和/或氟嘧啶和/或铂基化疗剂的先前治疗(或多种治疗)期间或之后进展。在一些实施方案中，所述个体的包含抗HER2抗体(例如曲妥珠单抗)和/或氟嘧啶和/或铂基化疗剂的先前治疗(或多种治疗)失败(例如，在之后复发或没有反应)。在一些实施方案中，所述先前治疗(或多种治疗)包含抗HER2抗体和氟嘧啶(例如，在相同的治疗线期间或在不同的治疗线期间施用)。在一些实施方案中，所述先前治疗(或多种治疗)包含抗HER2抗体和铂基化疗剂(例如，在相同的治疗线期间或在不同的治疗线期间施用)。

附图说明

专利或申请文件包含至少一幅以彩色绘制的附图。专利局将根据申请人的要求，在支付必要的费用后，提供本专利或专利申请公布的带彩色附图的副本。

图1提供了为确定在小鼠MC38 m:h嵌合结肠癌模型中药物A与(a)抗HER2抗体、(b)抗PD-L1抗体或(c)抗HER2抗体和抗PD-L1组合对肿瘤生长的影响而进行的实验的结果。

图2A提供了实施例2E所述的研究中每个患者的基线可测量病灶最佳变化％的图。

图2B提供了示出实施例2E所述的研究中每个患者的基线可测量病灶随时间的变化％的图。

图3示出了为评估在CT26同源移植(syngeneic)小鼠肿瘤模型中药物B是否增强抗小鼠VEGFR-2+紫杉醇双联治疗的抗肿瘤活性而进行的实验的结果。

图4A示出了为评估在小鼠CT26 m:h HER2表达嵌合肿瘤模型中药物B是否增强曲妥珠单抗+抗小鼠VEGFR-2+紫杉醇三联治疗的抗肿瘤活性而进行的实验的结果。

图4B示出了为评估在小鼠CT26 m:h HER2表达嵌合肿瘤模型中药物B+曲妥珠单抗+抗小鼠VEGFR-2+紫杉醇的四联治疗与曲妥珠单抗+抗小鼠VEGFR-2+紫杉醇的三联治疗相比是否增加生存概率而进行的实验的结果。

具体实施方式

以下描述阐述了示例性方法、参数等。然而，应当认识到，此类描述并非旨在限制本公开的范围，而是作为对示例性实施方式的描述而提供的。

定义

术语“约”或“大致”是指在本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，其将部分取决于如何测量或测定该值，即测量系统的限制。例如，根据本领域的实践，“约”可意指在1或大于1个的标准偏差内。可替代地，“约”可意指给定值的至多20％、至多10％、至多5％或至多1％的范围。可替代地，特别是对于生物系统或方法，所述术语可以指在数值的数量级内，优选5倍内，更优选2倍内。在本申请和权利要求中描述特定值的情况下，除非另有说明，否则应假定术语“约”意指在特定值的可接受误差范围内。

这里使用的术语仅仅是为了描述特定的情况，而不是为了限制。如本文所用，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“所述”也旨在包括复数形式，除非上下文另外明确指出。此外，就在详细说明或权利要求中使用术语“包括(including)”、“包括(includes)”、“具有(having)”、“具有(has)”、“具有(with)”或其变体而言，此类术语旨在以类似于术语“包含(comprising)”的方式为包含性的。

如本文所用，术语“治疗(treatment)”，“治疗(treating)”等是指出于获得效果的目的施用剂或实施程序。在一些实施方案中，就完全或部分预防疾病或其症状而言，所述作用是预防性的。在一些实施方案中，就实现疾病或疾病症状的部分或完全治愈而言，所述效果是治疗性的。

如本文所用，术语“抗体”是指完整抗体；抗体片段，条件是它们表现出所需的生物活性(例如表位结合)；单克隆抗体；多克隆抗体；单特异性抗体；多特异性抗体(例如双特异性抗体)；以及抗体样蛋白。

如本文所用，术语“抗体可变结构域”是指抗体的轻链和重链的部分，其包括互补决定区(CDR，例如CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3)和框架区(FR)的氨基酸序列。

如本文所用，术语“接头”是指两个元件(例如蛋白质结构域)之间的键联。在一些实施方案中，接头可以是共价键或间隔物。术语“间隔物”是指存在于两个多肽或多肽结构域之间以提供两个多肽或多肽结构域之间的空间或柔性(或空间和柔性)的部分(例如，聚乙二醇(PEG)聚合物)或氨基酸序列(例如，1-200个氨基酸序列)。在一些实施方案中，氨基酸间隔物是多肽的一级序列的一部分(例如，通过多肽骨架连接到间隔的多肽或多肽结构域)。

如本文所用，术语“有效量”是指在治疗患有疾病(诸如癌症，例如实体瘤或血液癌症)的患者中足以且有效实现所需治疗效果的多肽或含有本文所述多肽(例如具有SIRPαD1结构域的多肽或其变体)的药物组合物的量。在一些实施方案中，有效量的多肽将避免不良副作用。

如本文所用，术语“药物组合物”是指包含活性成分以及赋形剂或稀释剂(或赋形剂和稀释剂两者)并且使活性成分能够通过合适的施用方法施用的医药或药物制剂。在一些实施方案中，本文公开的药物组合物包含与多肽相容的药学上可接受的组分。在一些实施方案中，药物组合物为用于口服施用的片剂或胶囊形式或用于静脉或皮下施用(例如通过注射)的水性形式。

如本文所用，术语“受试者”、“个体”和“患者”可互换使用以指代脊椎动物，例如哺乳动物。哺乳动物包括但不限于鼠类、猿猴、人类、农场动物、运动动物和宠物。也包括体内获得或体外培养的生物实体的组织、细胞及其后代。这些术语都不需要医学专业人员的监督。

如本文所用，术语“亲和力”或“结合亲和力”是指两个分子之间的结合相互作用的强度。通常，结合亲和力是指分子与其结合配偶体(诸如SIRPαD1结构域变体和CD47)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指明，否则结合亲和力是指固有结合亲和力，其反映结合对成员之间的1:1相互作用。两个分子之间的结合亲和力通常由解离常数(KD)或缔合常数(KA)描述。彼此具有低结合亲和力的两个分子通常结合缓慢，倾向于容易解离，并表现出大KD。彼此具有高亲和力的两个分子通常容易结合，倾向于保持结合更长，并表现出小KD。在一些实施方案中，使用已知的方法和技术，例如表面等离子体共振(SPR)测定两个相互作用分子的KD。KD可以计算为koff/kon的比率。

如本文所用，术语“小于K_D”是指数值上较小的K_D值和相对于所述KD值增加的结合亲和力。如本文所用，术语“大于KD”是指数值上较大的KD值和相对于所述KD值降低的结合亲和力。

如本文所用，“联合”是指除另一种治疗方式之外还施用一种治疗方式。因此，“联合”是指在向个体施用另一种治疗方式之前、期间或之后施用一种治疗方式。

概述

本文提供了治疗个体(例如人类个体)的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂和(b)化疗剂(例如，至少一种化疗剂，诸如至少两种、至少三种或至少四种化疗剂)。在一些实施方案中，所述方法还包括向个体施用有效量的治疗性抗体(例如，至少一种治疗性抗体，诸如至少两种、至少三种或至少四种治疗性抗体)。另外地或可替代地，在一些实施方案中，所述方法还包括向个体施用有效量的免疫治疗剂(例如，至少一种免疫治疗剂，诸如至少两种、至少三种或至少四种免疫治疗剂)。另外地或可替代地，在一些实施方案中，所述方法包括与一种或多种另外的治疗方式(包括但不限于例如放射治疗、手术、冷冻消融和骨髓移植)组合施用多肽和化疗剂。

在一些实施方案中，阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂是CD47-SIRPα途径的小分子抑制剂(例如，RRX-001等)。参见，例如，Miller等人(2019)“Quantitative high-throughput screening assays for the discovery anddevelopment of SIRPα-CD47 interaction inhibitors.”PLoS ONE 14(7):e0218897和Sasikumar等人ACR-NCI-EORTC International Conference:Molecular Targets andCancer Therapeutics；2017年10月26-30日；Philadelphia,PA；摘要B007。

在一些实施方案中，阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂结合CD47(例如，hCD47)。在一些实施方案中，所述剂以约10nM或更好的K_D(诸如至少约9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、3nM、2nM、1nM、750pM、500pM、250pM、200pM、100pM、50pM、25pM、20pM10pM或小于10pM中的任一个)结合CD47(例如，hCD47)。在一些实施方案中，在人受试者中，所述结合CD47(例如，hCD47)的剂表现出至少约50％的CD47受体占据(例如，至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或约100％中的任一个)。在一些实施方案中，所述结合CD47(例如，hCD47)的剂具有约80ng/ml或更小的EC50，例如约75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10或5ng/ml中的任一个。在一些实施方案中，所述结合CD47(例如，hCD47)的剂是抗CD47抗体(例如，治疗性抗CD47抗体)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗原结合片段是Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、scFv、单臂抗体或双抗体。在一些实施方案中，所述抗CD47抗体是单特异性抗体。在一些实施方案中，所述抗CD47抗体是多特异性(例如，双特异性)抗体。在一些实施方案中，术语“抗CD47抗体”涵盖基于抗体的构建体(诸如多特异性构建体)，所述构建体包括但不限于三抗体(triomabs)、DART(即，双亲和重靶向抗体)、TandAb(即，串联双抗体)、串联scFv、CrossMab、DNL(即，停靠和锁定(Dock and Lock)抗体)、DVD-Ig(即，双可变结构域免疫球蛋白)、四价双特异性IgG、纳米抗体、双重靶向结构域和ART-Ig(即，不对称重组技术-免疫球蛋白)。关于示例性抗体构建体(单特异性和多特异性两者)的另外的细节提供于Husain等人(2018)Biodrugs 32(5):441-464，和Spiess等人(2015)Molecular Immunology 67(2):95-106。在一些实施方案中，所述抗CD47抗体是Hu5F9-G4、B6H12.2、BRIC126、CC-90002、SRF231或IBI188(来自Innovent Biologics)(参见，例如，Zhao等人(2011),PNAS USA 108:18342-18347；Chao等人(2010)Cell142:699-713,Kim等人(2012)Leukemia 26:2538-2545；Chao等人(2011)Blood 118:4890-4891；Goto等人(2014)Eur J.Cancer 50:1836-1846；以及Edris等人(2012)PNAS USA 109:6656-61以了解有关这些抗CD47抗体的另外的信息)。

在一些实施方案中，阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂结合SIRPα(例如，hSIRPα)。在一些实施方案中，所述剂以约10nM或更好的K_D(诸如至少约9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、3nM、2nM、1nM、750pM、500pM、250pM、200pM、100pM、50pM、25pM、20pM、10pM或小于10pM中的任一个)结合SIRPα(例如，hSIRPα)。在一些实施方案中，在人受试者中，所述结合SIRPα(例如，hSIRPα)的剂表现出至少约50％的SIRPα受体占位(例如，至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或约100％中的任一个)。在一些实施方案中，所述结合SIRPα(例如，hSIRPα)的剂具有约80ng/ml或更低的EC50，例如约75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10或5ng/ml中的任一个。在一些实施方案中，所述结合SIRPα的剂(例如，hSIRPα)是抗SIRPα抗体(例如，治疗性抗SIRPα抗体)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗原结合片段是Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、scFv、单臂抗体或双抗体。在一些实施方案中，所述抗SIRPα抗体是单特异性抗体或单特异性抗体构建体(包括但不限于上述那些)。在一些实施方案中，所述抗SIRPα抗体是多特异性(例如，双特异性)抗体或多特异性抗体构建体(包括但不限于上述那些)。在一些实施方案中，所述抗SIRPα抗体是KWAR23、SE12C3、040或MY-1(参见，例如，Ring等人(2017)PN ASUSA 114(49):E10578-E10585)；Murata等人(2018)Cancer Sci 109(5):1300-1308；和Yanigata等人(2017)JCI Insight 2:e89140以了解有关这些抗SIRPα抗体的另外的信息)。在一些实施方案中，抗SI RPα抗体是在WO 2018/057669；US-2018-0105600-A1；US20180312587；WO2018107058；WO2019023347；US20180037652；WO2018210795；WO2017178653；WO2018149938；WO2017068164；和WO 2016063233中描述的抗体，所述专利的内容以引用的方式整体并入本文。

在一些实施方案中，阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂是抗SIRPβ抗体或抗SIRPγ抗体(例如，能够结合SIRPα的抗SIRPβ抗体或抗SIRPγ抗体)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述剂是能够结合SIRPα、SIRPβ和SIRPγ中的两者或更多者的抗体(或其抗原结合片段)。在一些实施方案中，此类抗体以约10nM或更好的K_D(诸如至少约9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、3nM、2nM、1nM、750pM、500pM、250pM、200pM、100pM、50pM、25pM、20pM、10pM或小于10pM中的任一个)结合SIRPα(例如，hSIRPα)。在一些实施方案中，在人受试者中，所述抗体表现出至少约50％的SIRPα受体占位(例如，至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或约100％中的任一个)。在一些实施方案中，所述抗体具有约80ng/ml或更小的EC50，例如约75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10或5ng/ml中的任一个。在一些实施方案中，所述抗原结合片段是Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、scFv、单臂抗体或双抗体。在一些实施方案中，所述抗体是单特异性抗体或单特异性抗体构建体(包括但不限于上述那些)。在一些实施方案中，所述抗体是多特异性(例如，双特异性)抗体或多特异性抗体构建体(包括但不限于上述那些)。

在一些实施方案中，阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂是包含结合CD47的部分的融合多肽。在一些实施方案中，所述融合多肽包含抗体Fc区和结合CD47的部分。在一些实施方案中，结合CD47(例如，hCD47)的融合多肽的部分以约10nM或更好的K_D(诸如至少约9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、3nM、2nM、1nM、750pM、500pM、250pM、200pM、100pM、50pM、25pM、20pM、10pM或小于10pM中的任一个)结合CD47(例如，hCD47)。在一些实施方案中，在人受试者中，所述融合多肽表现出至少约50％的CD47受体占位(例如，至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或约100％中的任一个)。在一些实施方案中，所述融合多肽具有约80ng/ml或更小的EC50，例如约75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10或5ng/ml中的任一个。在一些实施方案中，所述融合多肽包含WT人抗体Fc区。在一些实施方案中，所述融合多肽包含与WT Fc区相比表现出降低的(例如，诸如消融的)效应子功能的Fc变体(例如，WT人抗体Fc区的变体)。示例性Fc变体描述于WO 2017/027422和US2017/0107270中，其内容以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，结合CD47(例如，hCD47)的部分是WT SIRPα(例如hSIRPα)或WT SIRPγ(例如hSIRPγ)。在一些实施方案中，结合CD47(例如，hCD47)的部分是WT SIRPα(例如hS IRPα)或WTSIRPγ(例如hSIRPγ)的CD47结合片段(例如d1结构域)。在一些实施方案中，结合CD47(例如，hCD47)的部分是SIRPα变体、SIRPγ变体、SIRPβ变体或其CD47结合片段(例如d1结构域)。示例性SIRPγ变体、SIRPβ1变体和SIRPβ2变体描述于例如WO 2013/109752；US2015/0071905；USP 9,944,911；WO 2016/023040；WO 2017/027422；US2017/0107270；USP 10,259,859；US9845345；WO 2016187226；US20180155405；WO2017177333；WO2014094122；US2015329616；US20180312563；WO2018176132；WO2018081898；WO2018081897；PCT/US2019/048921；US20180141986A1和EP3287470A1中，所述专利的内容以引用的方式整体并入本文。

在一些实施方案中，阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂是包含抗体Fc区和SIRPα变体的融合多肽。在一些实施方案中，SIRPα变体以约10nM或更好的K_D(诸如至少约9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、3nM、2nM、1nM、750pM、500pM、250pM、200pM、100pM、50pM、25pM、20pM、10pM或小于10pM中的任一个)结合CD47(例如，hCD47)。在一些实施方案中，在人受试者中，所述融合多肽表现出至少约50％的CD47受体占位(例如，至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或约100％中的任一个)。在一些实施方案中，所述融合多肽具有约80ng/ml或更小的EC50，例如约75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10或5ng/ml中的任一个。在一些实施方案中，所述融合多肽包含WT人抗体Fc区。在一些实施方案中，所述融合多肽包含与WT Fc区(诸如在本文引用的参考文献中描述的那些)相比表现出降低的(例如，诸如消融的)效应器功能的Fc变体(例如，WT人抗体Fc区的变体)。在一些实施方案中，所述融合多肽包含在WO 2013/109752；US2015/0071905；WO 2016/023040；WO 2017/027422；US2017/0107270；USP 10,259,859；US9845345；WO2016187226；US20180155405；WO 2017177333；WO2014094122；US2015329616；US20180312563；WO2018176132；WO2018081898；WO2018081897；US20180141986A1和EP3287470A1中描述的SIRPα变体，所述专利的内容以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，所述包含抗体Fc区和SIRPα变体的融合多肽是TTI-621、TTI-622或IMM01(参见例如Petrova等人(2017)Clin Cancer Res 23:1086-1079；Russ等人(2018)Blood RevS0268-960X(17)30093-0；Zhang,X,Chen,W,Fan,J等人Disr upting CD47-SIRPαaxisalone or combined with autophagy depletio n for the therapy ofglioblastoma.Carcinogenesis 2018；39:689–99)。

在一些实施方案中，阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂是包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的融合多肽。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体(例如，人类个体)的癌症(例如，胃癌或胃食管癌)的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇。在一些实施方案中，所述阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂是包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，其中所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列，其中所述Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引。

关于用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽治疗的方法的进一步细节描述如下。还参见WO 2017/027422、美国专利号10,259,859和PCT/US20/62402，所述专利的内容各自以引用的方式整体并入本文。

信号调节蛋白α(SIRPα)D1结构域及其变体

在一些实施方案中，本文公开了包含信号调节蛋白α(SIRP-α)D1变体的多肽，所述变体包含SIRPαD1结构域或其片段，所述SIRPαD1结构域相对于野生型SIRPαD1结构域(例如，在SEQ ID NO:1或2中列出的野生型SIRPαD1结构域)在残基80处包含氨基酸突变；并且相对于野生型SIRPαD1结构域(例如，在SEQ ID NO:1或2中列出的野生型SIRPαD1结构域)在选自由以下组成的组的残基处具有至少一个另外的氨基酸突变：残基6、残基27、残基31、残基47、残基53、残基54、残基56、残基66和残基92。

在一些实施方案中，本文还公开了包含Fc结构域变体的多肽，其中所述Fc结构域变体二聚体包含两个Fc结构域变体，其中每个Fc结构域变体独立地选自(i)由突变L234A、L235A、G237A和N297A组成的人IgG1 Fc区；(ii)由突变A330S、P331S和N297A组成的人IgG2Fc区；或(iii)包含突变S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A的人IgG4 Fc区。

信号调节蛋白α(“SIRP-α”或“SIRP-alpha”)是属于Ig超家族的跨膜糖蛋白，其在骨髓细胞的膜上广泛表达。SIRPα与CD47相互作用，CD47是在体内许多细胞类型上广泛表达的蛋白质。SIRPα与CD47的相互作用防止“自身”细胞的吞噬，否则“自身”细胞可被免疫系统识别。已经观察到，肿瘤细胞上的高CD47表达可以在急性髓系白血病和几种实体瘤癌症中作为存活的负性预后因子。

天然SIRPα包含3个高度同源的免疫球蛋白(Ig)样细胞外结构域—D1、D2和D3。SIRPαD1结构域(“D1结构域”)是指SIRPα的膜远端细胞外结构域并且介导SIRPα与CD47的结合。如本文所用，术语“SIRPα多肽”是指能够结合CD47的任何SIRPα多肽或其片段。存在至少十种野生型人SIRPα的变体。表1显示了天然存在的野生型人SIRPαD1结构域变体的D1结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:1和2)。在一些实施方案中，SIRPα多肽包含SIRPαD1结构域。在一些实施方案中，SIRPα多肽包含野生型D1结构域，诸如在SEQ ID NO:1和2中提供的那些。在一些实施方案中，SIRPα多肽包含野生型人SIRPα的D2或D3结构域(或D2和D3结构域两者)(参见表3)。

表1.野生型SIRPαD1结构域的序列

如本文所用，术语“SIRPαD1结构域变体”是指包含SIRPαD1结构域或SIRPα多肽的CD47结合部分的多肽，其对CD47的亲和力高于野生型SIRPα。SIRPαD1结构域变体相对于野生型SIRPα包含至少一个氨基酸取代、缺失或插入(或其组合)。

在一些实施方案中，本文公开的SIRPαD1结构域变体包含SIRPαD1结构域或其变体。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体相对于在SEQ ID NO:1和2中所示的野生型D1结构域包含一个或多个氨基酸取代、插入、添加或缺失。表2列出了每个SIRPαD1结构域变体中的示例性氨基酸取代(SEQ ID NO:13-14)。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域多肽或SIRPαD1结构域变体包含D1结构域的片段。在一些实施方案中，SIRPα多肽片段或SIRPαD1结构域变体片段包含长度小于10个氨基酸、长度约10个氨基酸、长度约20个氨基酸、长度约30个氨基酸、长度约40个氨基酸、长度约50个氨基酸、长度约60个氨基酸、长度约70个氨基酸、长度约80个氨基酸、长度约90个氨基酸、长度约100个氨基酸、或长度多于约100个氨基酸的氨基酸序列。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域片段保留结合CD47的能力。

在一些实施方案中，包含SIRPαD1结构域变体的本公开多肽以比野生型人SIRPαD1结构域更高的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体以天然存在的D1结构域的亲和力至少1倍(例如，至少1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、5倍或大于5倍)的亲和力结合人CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体以天然存在的D1结构域的亲和力至少1倍(例如，至少10倍、100倍、1000倍或大于1000倍)的亲和力结合人CD47。

如本文所用，术语“优化的亲和力”或“优化的结合亲和力”是指本文公开的多肽(包括SIRPαD1结构域变体)与CD47之间的优化的结合相互作用强度。例如，在一些实施方案中，多肽主要或以较高亲和力结合癌细胞上的CD47，而基本上不结合或以较低亲和力结合非癌细胞上的CD47。在一些实施方案中，优化多肽和CD47之间的结合亲和力，使得与以最大亲和力结合的变体相比，相互作用不引起临床相关毒性或降低毒性。在一些实施方案中，为了实现本文提供的多肽与CD47之间的优化的结合亲和力，包含SIRPαD1结构域变体的多肽被开发为对CD47的结合亲和力比最大可实现的结合亲和力更低。在一些实施方案中，本文公开的SIRPαD1结构域变体与啮齿动物、非人灵长类动物(NHP)和人CD47交叉反应。

如本文所用，术语“免疫原性”是指在宿主中引起免疫反应的蛋白质(例如治疗性蛋白质)的特性，就像它是外来抗原一样。蛋白质的免疫原性可以在体外以多种不同的方式测定，诸如通过体外T细胞增殖测定。

如本文所用，术语“最小免疫原性”是指经修饰(例如通过氨基酸取代)的蛋白质(例如治疗性蛋白质)的免疫原性低于(例如低至少10％、25％、50％或100％)引入氨基酸取代之前的免疫原性(例如未修饰的蛋白质)。在一些实施方案中，修饰蛋白质(例如，治疗性蛋白质)以具有最小免疫原性并且即使它是外来抗原也不引起或引起非常少的宿主免疫反应。

在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体显示最小免疫原性。在一些实施方案中，施用于受试者的本公开的SIRPα多肽具有与受试者的生物样品中的SIRPα多肽相同的氨基酸序列，除了增加SIRPαD1结构域变体的亲和力的氨基酸改变之外。在一些实施方案中，与抗CD47抗体或野生型SIRPα相比，本文公开的多肽变体降低了副作用的风险。在一些实施方案中，与抗CD47抗体或野生型SIRPα相比，本文公开的多肽变体降低贫血的风险。在一些实施方案中，本文公开的多肽变体在啮齿动物或非人灵长类动物(NHP)研究中不引起急性贫血。

表2列出了SIRPαD1结构域变体中相对于每个D1结构域序列的特定氨基酸取代。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体包括表2中所列的一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或更多个)取代。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体相对于野生型D1结构域包含至多十四个氨基酸取代。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体相对于野生型D1结构域包含至多十个氨基酸取代。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体相对于野生型D1结构域包含至多七个氨基酸取代。在一些实施方案中，本公开的SIRPαD1结构域变体与野生型D1结构域的序列具有至少90％(例如，至少92％、95％、97％或大于97％)氨基酸序列同一性。

在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体是嵌合SIRPαD1结构域变体，其包含两个或更多个野生型D1结构域或其变体的一部分(例如，一个野生型D1结构域或其变体的一部分和另一野生型D1结构域或其变体的一部分)。在一些实施方案中，嵌合SIRPαD1结构域变体包含野生型D1结构域或其变体的至少两个部分(例如，三个、四个、五个或更多个部分)，其中每个部分来自不同的野生型D1结构域。在一些实施方案中，嵌合SIRPαD1结构域变体进一步包括表2中所列的一个或多个氨基酸取代。

表2.SIRPαD1结构域变体中的氨基酸取代

在一些实施方案中，多肽包含SIRPαD1结构域变体，所述变体包括以下序列：EEEX₁QX₂IQPDKSVLVAAGETX₃TLRCTX₄TSLX₅PVGPIQWFRGAGPGRX₆LIYNQX₇X₈GX₉FPRVTTVSDX₁₀TX₁₁RNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCX₁₂KX₁₃RKGSPDDVEX₁₄KSGAGTELSVRAKPS(SEQ ID NO:13)，其中X₁为L、I或V；X2为V、L或I；X₃为A或V；X₄为A、I或L；X₅为I、T、S或F；X₆为E、V或L；X₇为K或R；X₈为E或Q；X₉为H、P或R；X₁₀为L、T或G；X₁₁为K或R；X₁₂为V或I；X₁₃为F、L或V；并且X₁₄为F或V；并且其中所述变体相对于包含SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少一个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽包含SIRPαD1结构域变体，所述变体包含SEQ ID NO:13的序列，其中X₁为L、I或V。在任一上述实施方案中，X₂为V、L或I。在一些实施方案中，X₃为A或V。在一些实施方案中，X₄为A、I或L。在一些实施方案中，X₅为I、T、S或F。在一些实施方案中，X₆为E、V或L。在一些实施方案中，X₇为K或R。在一些实施方案中，X₈为E或Q。在一些实施方案中，X₉为H、P或R。在一些实施方案中，X₁₀为L、T或G。在一些实施方案中，X₁₁为K或R。在一些实施方案中，X₁₂为V或I。在一些实施方案中，X₁₃为F、L、V。在一些实施方案中，X₁₄为F或V。在一些实施方案中，本公开的该方面的多肽相对于包含SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含不超过六个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽以包含SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域至少10倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以包含SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域至少100倍的结合亲和力结合CD47在一些实施方案中，多肽以包含SEQ IDNO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域至少1000倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以小于1x10^-8M、小于5x10^-9M、小于1x10^-9M、小于5x10^-10M、小于1x10^-10M或小于1x10^-11M的KD结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以介于约500nM和100nM之间、介于约100nM和50nM之间、介于约50nM和10nM之间、介于约10nM和5nM之间、介于约5nM和1nM之间、介于约1nM和500pM之间、介于约500pM和100pM之间、介于约100pM和50pM之间或介于约50pM和10pM之间的KD结合CD47。

在一些实施方案中，多肽包含SIRPαD1结构域变体，所述变体包括以下序列：EEEX₁QX₂IQPDKSVSVAAGESX₃ILHCTX₄TSLX₅PV GPIQWFRGAGPARX₆LIYNQX₇X₈GX₉FPRVTTVSEX₁₀TX₁₁RENMDF SISISNITPADAGTYYCX₁₂KX₁₃RKGSPDTEX₁₄KSGAGTELSVRAKP S(SEQ ID NO:14)，其中X₁为L、I或V；X₂为V、L或I；X₃为A或V；X₄为V、I或L；X₅为I、T、S或F；X₆为E、V或L；X₇为K或R；X₈为E或Q；X₉为H、P或R；X₁₀为S、T或G；X₁₁为K或R；X₁₂为V或I；X₁₃为F、L或V；并且X₁₄为F或V；并且其中所述变体相对于包含SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少一个氨基酸取代。

在本公开的该方面的一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:14的序列，其中X₁为L、I或V。在一些实施方案中，X₂为V、L或I。在一些实施方案中，X₃为A或V。在一些实施方案中，X₄为V、I或L。在一些实施方案中，X₅为I、T、S或F。在一些实施方案中，X₆为E、V或L。在一些实施方案中，X₇为K或R。在一些实施方案中，X₈为E或Q。在一些实施方案中，X₉为H、P或R。在一些实施方案中，X₁₀为S、T或G。在一些实施方案中，X₁₁为K或R。在一些实施方案中，X₁₂为V或I。在一些实施方案中，X₁₃为F、L或V。在一些实施方案中，X₁₄为F或V。在一些实施方案中，本公开的该方面的多肽相对于包含SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含不超过六个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少10倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少100倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ IDNO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少1000倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以小于1x10^-8M、小于5x10^-9M、小于1x10^-9M、小于5x10^-10M、小于1x10^-10M或小于1x10^-11M的K_D结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以介于约500nM和100nM之间、介于约100nM和50nM之间、介于约50nM和10nM之间、介于约10nM和5nM之间、介于约5nM和1nM之间、介于约1nM和500pM之间、介于约500pM和100pM之间、介于约100pM和50pM之间或介于约50pM和10pM之间的K_D结合CD47。

在一些实施方案中，多肽包含SIRPαD1结构域变体，所述变体具有以下序列：EEX₁X₂QX₃IQPDKX₄VX₅VAAGEX₆X₇X₈LX₉CTX₁₀TS LX₁₁PVGPIQWFRGAGPX₁₂RX₁₃LIYNQX₁₄X₁₅GX₁₆FPRVTTVSX₁₇X₁₈TX₁₉RX₂₀NMDFX₂₁IX₂₂IX₂₃NITPADAGTYYCX₂₄KX₂₅RKGSPDX₂₆X₂₇EX₂₈KSGAGTELSVRX₂₉KPS(SEQID NO:23)，其中X₁为E或G；X₂为L、I或V；X₃为V、L或I；X₄为S或F；X₅为L或S；X₆为S或T；X₇为A或V；X₈为I或T；X₉为H或R；X₁₀为A、V、I或L；X₁₁为I、T、S或F；X₁₂为A或G；X₁₃为E、V或L；X₁₄为K或R；X₁₅为E或Q；X₁₆为H、P或R；X₁₇为D或E；X₁₈为S、L、T或G；X₁₉为K或R；X₂₀为E或D；X₂₁为S或P；X₂₂为S或R；X₂₃为S或G；X₂₄为V或I；X₂₅为F、L、V；X₂₆为D或不存在；X₂₇为T或V；X₂₈为F或V；并且X₂₉为A或G；并且其中所述变体相对于包含SEQ ID NO:1或2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少一个氨基酸取代。

在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₂为L、I或V。在任一上述实施方案中，X₃为V、L或I。在实施方案中，X₄为S或F。在一些实施方案中，X₅为L或S。在一些实施方案中，X₆为S或T。在一些实施方案中，X₇为A或V。在一些实施方案中，X₈为I或T。在一些实施方案中，X₉为H或R。在一些实施方案中，X₁₀为A、V、I或L。在一些实施方案中，X₁₁为I、T、S或F。在一些实施方案中，X₁₂为A或G。在一些实施方案中，X₁₃为E、V或L。在一些实施方案中，X₁₄为K或R。在一些实施方案中，X₁₅为E或Q。在一些实施方案中，X₁₆为H、P或R。在一些实施方案中，X₁₇为D或E。在一些实施方案中，X₁₈为S、L、T或G。在一些实施方案中，X₁₉为K或R。在一些实施方案中，X₂₀为E或D。在一些实施方案中，X₂₁为S或P。在一些实施方案中，X₂₂为S或R。在一些实施方案中，X₂₃为S或G。在一些实施方案中，X₂₄为V或I。在一些实施方案中，X₂₅为F、L、V。在一些实施方案中，X₂₆为D或不存在。在一些实施方案中，X₂₇为T或V。在一些实施方案中，X₂₈为F或V。在一些实施方案中，X₂₉为A或G。在一些实施方案中，本公开的该方面的多肽相对于具有SEQ ID NO:1或2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含不超过六个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:1或2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少10倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:1或2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少100倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:1或2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少1000倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以小于1x10^-8M、小于5x10^-9M、小于1x10^-9M、小于5x10^-10M、小于1x10^-10M或小于1x10^-11M的K_D结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以介于约500nM和100nM之间、介于约100nM和50nM之间、介于约50nM和10nM之间、介于约10nM和5nM之间、介于约5nM和1nM之间、介于约1nM和500pM之间、介于约500pM和100pM之间、介于约100pM和50pM之间或介于约50pM和10pM之间的K_D结合CD47。

在一些实施方案中，包含SIRPαD1结构域变体的本公开的多肽还包含表3中所示的野生型人SIRPα的具有SEQ ID NO:24的序列的D2结构域、具有SEQ ID NO:25的序列的D3结构域，或具有SEQ ID NO:24的序列的D2结构域和具有SEQ ID NO:25的序列的D3结构域。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体还包含D2结构域的片段或变体或D3结构域的片段或变体。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体还包含D2结构域的片段或变体和D3结构域的片段或变体。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体通过接头连接至D2或D3结构域。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体通过接头连接至D2和D3结构域。

表3.SIRPαD2和D3结构域的氨基酸序列

在一些实施方案中，包含SIRPαD1结构域变体的本公开的多肽附接至Fc结构域变体以便改善多肽的药代动力学特性，例如增加血清半衰期。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体附接至不能二聚化的Fc结构域变体。在一些实施方案中，Fc结构域变体用于增加本文所述多肽的血清半衰期。在一些实施方案中，包含SIRPαD1结构域变体的本公开的多肽不包含表4中所示的SEQ ID NO:26-36中任一者的序列。

表4.

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在一些实施方案中，本文所述的多肽和多肽构建体在体外用于结合测定，诸如免疫测定。例如，在一些实施方案中，本文所述的多肽和多肽构建体在液相中使用或与固相载剂结合。在一些实施方案中，用于免疫测定的多肽以各种方式被可检测地标记。

在一些实施方案中，本文所述的多肽和多肽构建体与各种载剂结合并用于检测特定抗原表达细胞的存在。载剂的实例包括玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龙、淀粉酶、天然和改性纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁铁矿。载剂的性质可以是可溶的或不可溶的。

各种不同的标记和标记方法是已知的。标记的实例包括酶、放射性同位素、荧光化合物、胶体金属、化学发光化合物和生物发光化合物。可利用各种技术将标记结合到本文公开的多肽上。

在一些实施方案中，多肽与低分子量半抗原偶联。然后通过第二反应特异性检测这些半抗原。例如，在一些实施方案中，半抗原生物素与抗生物素蛋白一起使用，或者将半抗原二硝基苯酚、吡哆醛或荧光素用特异性抗半抗原抗体(例如分别为抗二硝基苯酚抗体、抗吡哆醛抗体和抗荧光素抗体)检测。

具有改变的糖基化模式的SIRPαD1结构域变体

在一些实施方案中，本文公开了包含信号调节蛋白α(SIRP-α)D1变体的多肽，所述变体包含SIRPαD1结构域或其片段，所述SIRPαD1结构域相对于野生型SIRPαD1结构域(例如，在SEQ ID NO:1或2中列出的野生型SIRPαD1结构域)在残基80处具有氨基酸突变；并且相对于野生型SIRPαD1结构域(例如，在SEQ ID NO:1或2中列出的野生型SIRPαD1结构域)在选自由以下组成的组的残基处具有至少一个另外的氨基酸突变：残基6、残基27、残基31、残基47、残基53、残基54、残基56、残基66和残基92。

在一些实施方案中，本文还公开了包含Fc结构域变体的多肽，其中Fc结构域变体二聚体包含两个Fc结构域变体，其中每个Fc结构域变体独立地选自(i)由L234A、L235A、G237A和N297A突变组成的人IgG1 Fc区；(ii)由A330S、P331S和N297A突变组成的人IgG2Fc区；或(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区。

在一些实施方案中，本文公开的组合物中的多肽包含具有减少的或最小的糖基化的SIRPαD1结构域变体。表1中的SEQ ID NO:1和2的D1结构域均在序列N80ITP中的氨基酸N80处含有单个潜在的N连接的糖基化位点。SIRPαD1结构域在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达产生16kDa的主要条带(非糖基化的)和通过Endo Hf去除的较高分子量的次要条带。Endo Hf是内切糖苷酶H和麦芽糖结合蛋白的重组蛋白融合体。Endo Hf在高甘露糖的壳二糖核心和来自N连接糖蛋白的一些杂合寡糖内切割。这意味着氨基酸位置83处的脯氨酸可降低糖基化的效率，从而导致蛋白质具有不同程度的糖基化并因此具有异质性。对于药物开发，异质性可在工艺开发中引起挑战。因此，为了研究产生同质、非糖基化形式的SIRPαD1结构域变体的可能性，在一些实施方案中，将SIRPαD1变体的氨基酸N80突变为Ala。在一些实施方案中，为了制备非糖基化的SIRPαD1结构域变体，SIRPαD1结构域变体中的氨基酸N80被任何氨基酸替代，包括任何天然和非天然存在的氨基酸，例如N80A和N80Q。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体包含N80A突变和至少1个另外的突变(例如，至少2、3、4、5、6、7、8、9或10个另外的突变或更多个)。在一些实施方案中，另外的突变在CD47结合位点中。在一些实施方案中，另外的突变在D1结构域的疏水核心中。

在一些实施方案中，本文公开的组合物中的多肽包含相对于野生型SIRPαD1结构域具有增加的糖基化的SIRPαD1结构域变体。增加最终产物的同质性的另一选择是增强氨基酸N80处的糖基化效率并产生相对于野生型具有增加的糖基化的SIRPαD1结构域变体。在一些实施方案中，序列NITP83中的氨基酸P83影响氨基酸N80处的糖基化程度。在一些实施方案中，将P83改变为任何氨基酸增加N80处的糖基化效率。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体中的氨基酸P83被任何氨基酸替代，包括天然和非天然氨基酸，例如P83V、P83A、P83I和P83L。在一些实施方案中，本公开的多肽在这样的细胞中表达，所述细胞被优化成不会使由此类细胞表达的蛋白质糖基化，例如通过细胞系的基因工程化(例如基因工程化的酵母或哺乳动物宿主)或细胞培养条件的修改诸如添加几夫碱或通过使用天然非糖基化宿主诸如原核生物(大肠杆菌等)。

表5列出了SIRPαD1结构域变体中相对于每个D1结构域变体序列的特定氨基酸取代。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体包括表5中所列的一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或更多个)取代。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体未被糖基化或最低限度地被糖基化。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体被完全糖基化或几乎被完全糖基化。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体相对于野生型D1结构域包含至多十四个氨基酸取代。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体相对于野生型D1结构域包含至多十个氨基酸取代。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体相对于野生型D1结构域包含至多七个氨基酸取代。在一些实施方案中，本公开的SIRPαD1结构域变体与野生型D1结构域的序列具有至少90％(例如，至少92％、95％、97％或大于97％)氨基酸序列同一性。

在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体是嵌合SIRPαD1结构域变体，其包含两个或更多个野生型D1结构域或其变体的一部分(例如，一个野生型D1结构域或其变体的一部分和另一野生型D1结构域或其变体的一部分)。在一些实施方案中，嵌合SIRPαD1结构域变体包含野生型D1结构域或其变体的至少两个部分(例如，三个、四个、五个或更多个部分)，其中每个部分来自不同的野生型D1结构域。在一些实施方案中，嵌合SIRPαD1结构域变体还包括表5中所列的一个或多个氨基酸取代。

表5.SIRPαD1结构域变体中的氨基酸取代

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在一些实施方案中，多肽包含具有以下序列的SIRPαD1结构域变体：EEEX₁QX₂IQPDKSVLVAAGETX₃TLRCTX₄TSLX₅PVGPIQWFRGAGPGRX₆LIYNQX₇X₈GX₉FPRVTTVSDX₁₀TX₁₁RNNMDFSIRIGX₁₂ITX₁₃ADAGTYYCX₁₄KX₁₅RKGSPDDVEX₁₆KSGAGTELSVRAKPS(SEQ ID NO:37)，其中X₁为L、I或V；X₂为V、L或I；X₃为A或V；X₄为A、I或L；X₅为I、T、S或F；X₆为E、V或L；X₇为K或R；X₈为E或Q；X₉为H、P或R；X₁₀为L、T或G；X₁₁为K或R；X₁₂为N、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y；X₁₃为P、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y；X₁₄为V或I；X₁₅为F、L或V；并且X₁₆为F或V；并且其中所述变体相对于具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少一个氨基酸取代。

在本公开的该方面的一些实施方案中，多肽包含具有SEQ ID NO:37的序列的SIRPαD1结构域变体，其中X₁为L、I或V。在一些实施方案中，X₂为V、L或I。在一些实施方案中，X₃为A或V。在一些实施方案中，X₄为A、I或L。在一些实施方案中，X₅为I、T、S或F。在一些实施方案中，X₆为E、V或L。在一些实施方案中，X₇为K或R。在一些实施方案中，X₈为E或Q。在一些实施方案中，X₉为H、P或R。在一些实施方案中，X₁₀为L、T或G。在一些实施方案中，X₁₁为K或R。在一些实施方案中，X₁₂为N、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些实施方案中，X₁₃为P、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些实施方案中，X₁₄为V或I。在一些实施方案中，X₁₅为F、L或V。在一些实施方案中，X₁₆为F或V。

在一些实施方案中，本文提供的多肽相对于具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含不超过十个氨基酸取代。在一些实施方案中，本文提供的多肽相对于具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含不超过七个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域至少10倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域至少100倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ IDNO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域至少1000倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以小于1x10^-8M、小于5x10^-9M、小于1x10^-9M、小于5x10^-10M、小于1x10^-10M或小于1x10^-11M的K_D结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以介于约500nM和100nM之间、介于约100nM和50nM之间、介于约50nM和10nM之间、介于约10nM和5nM之间、介于约5nM和1nM之间、介于约1nM和500pM之间、介于约500pM和100pM之间、介于约100pM和50pM之间或介于约50pM和10pM之间的K_D结合CD47。

在一些实施方案中，多肽包含具有以下序列的SIRPαD1结构域变体：EEEX₁QX₂IQPDKSVSVAAGESX₃ILHCTX₄TSLX₅PVGPIQWFRGAGPARX₆LIYNQX₇X₈GX₉FPRVTTVSEX₁₀TX₁₁RENMDFSISISX₁₂ITX₁₃ADAGTYYCX₁₄KX₁₅RKGSPDTEX₁₆KSGAGTELSVRAKPS(SEQ ID NO:38)，其中X₁为L、I或V；X₂为V、L或I；X₃为A或V；X₄为V、I或L；X₅为I、T、S或F；X₆为E、V或L；X₇为K或R；X₈为E或Q；X₉为H、P或R；X₁₀为S、T或G；X₁₁为K或R；X₁₂为N、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y；X₁₃为P、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y；X₁₄为V或I；X₁₅为F、L或V；并且X₁₆为F或V；并且其中所述变体相对于具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少一个氨基酸取代。

在本公开的该方面的一些实施方案中，多肽包含具有SEQ ID NO:38的序列的SIRPαD1结构域变体，其中X₁为L、I或V。在一些实施方案中，X₂为V、L或I。在一些实施方案中，X₃为A或V。在一些实施方案中，X₄为V、I或L。在一些实施方案中，X₅为I、T、S或F。在一些实施方案中，X₆为E、V或L。在一些实施方案中，X₇为K或R。在一些实施方案中，X₈为E或Q。在一些实施方案中，X₉为H、P或R。在一些实施方案中，X₁₀为S、T或G。在一些实施方案中，X₁₁为K或R。在一些实施方案中，X₁₂为N、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些实施方案中，X₁₃为P、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些实施方案中，X₁₄为V或I。在一些实施方案中，X₁₅为F、L或V。在一些实施方案中，X₁₆为F或V。

在一些实施方案中，多肽包含相对于具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域具有不超过十个氨基酸取代的SIRPαD1结构域变体。在一些实施方案中，多肽包含相对于具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域具有不超过七个氨基酸取代的SIRPαD1结构域变体。

在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少10倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少100倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ IDNO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少1000倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以小于1x10^-8M、小于5x10^-9M、小于1x10^-9M、小于5x10^-10M、小于1x10^-10M或小于1x10^-11 M的K_D结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以介于约500nM和100nM之间、介于约100nM和50nM之间、介于约50nM和10nM之间、介于约10nM和5nM之间、介于约5nM和1nM之间、介于约1nM和500pM之间、介于约500pM和100pM之间、介于约100pM和50pM之间或介于约50pM和10pM之间的K_D结合CD47。

在另一方面，本公开提供了包含具有以下序列的SIRPαD1结构域变体的多肽：EEX₁X₂QX₃IQPDKX₄VX₅VAAGEX₆X₇X₈LX₉CTX₁₀TSLX₁₁PVGPIQWFRGAGPX₁₂RX₁₃LIYNQX₁₄X₁₅GX₁₆FPRVTTVSX₁₇X₁₈TX₁₉RX₂₀NMDFX₂₁IX₂₂IX₂₃X₂₄ITX₂₅ADAGTYYCX₂₆KX₂₇RKGSPDX₂₈X₂₉EX₃₀KSGAGTELSVRX₃₁KPS(SEQ ID NO:47)，其中X₁为E或G；X₂为L、I或V；X₃为V、L或I；X₄为S或F；X₅为L或S；X₆为S或T；X₇为A或V；X₈为I或T；X₉为H、R或L；X₁₀为A、V、I或L；X₁₁为I、T、S或F；X₁₂为A或G；X₁₃为E、V或L；X₁₄为K或R；X₁₅为E或Q；X₁₆为H、P或R；X₁₇为D或E；X₁₈为S、L、T或G；X₁₉为K或R；X₂₀为E或N；X₂₁为S或P；X₂₂为S或R；X₂₃为S或G；X₂₄为任何氨基酸；X₂₅为任何氨基酸；X₂₆为V或I；X₂₇为F、L、V；X₂₈为D或不存在；X₂₉为T或V；X₃₀为F或V；并且X₃₁为A或G；并且其中所述变体相对于具有SEQ ID NO:1或2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少一个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:47的序列，其中X₁为E或G。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₂为L、I或V。在任一上述实施方案中，X₃为V、L或I。在任一上述实施方案中，X₄为S或F。在任一上述实施方案中，X₅为L或S。在任一上述实施方案中，X₆为S或T。在任一上述实施方案中，X₇为A或V。在任一上述实施方案中，X₈为I或T。在任一上述实施方案中，X₉为H或R。在任一上述实施方案中，X₁₀为A、V、I或L。在任一上述实施方案中，X₁₁为I、T、S或F。在任一上述实施方案中，X₁₂为A或G。在任一上述实施方案中，X₁₃为E、V或L。在任一上述实施方案中，X₁₄为K或R。在任一上述实施方案中，X₁₅为E或Q。在任一上述实施方案中，X₁₆为H、P或R。在任一上述实施方案中，X₁₇为D或E。在任一上述实施方案中，X₁₈为S、L、T或G。在任一上述实施方案中，X₁₉为K或R。在任一上述实施方案中，X₂₀为E或N。在任一上述实施方案中，X₂₁为S或P。在任一上述实施方案中，X₂₂为S或R。在任一上述实施方案中，X₂₃为S或G。在任一上述实施方案中，X₂₄为N、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在任一上述实施方案中，X₂₅为P、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。在任一上述实施方案中，X₂₆为V或I。在任一上述实施方案中，X₂₇为F、L、V。在任一上述实施方案中，X₂₈为D或不存在。在任一上述实施方案中，X₂₉为T或V。在任一上述实施方案中，X₃₀为F或V。在任一上述实施方案中，X₃₁为A或G。

在一些实施方案中，本公开的该方面的多肽相对于具有SEQ ID NO:1或2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含不超过十个氨基酸取代。在一些实施方案中，本公开的该方面的多肽相对于具有SEQ ID NO:1或2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含不超过七个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽包含具有以下序列的SIRPαD1结构域变体：EEELQX₁IQPDKSVX₂VAAGEX₃AX₄LX₅CTX₆TSLX₇PVGPIQWFRGAGPX₈RX₉LIYNQX₁₀X₁₁GX₁₂FPRVTTVSX₁₃X₁₄TKRX₁₅NMDFSIX₁₆IX₁₇X₁₈ITPADAGTYYCX₁₉KFRKGX₂₀X₂₁X₂₂DX₂₃EFKSGAGTELSVRAKPS(SEQ ID NO:48)，或其片段，其中X₁为V或I；X₂为L或S；X₃为T或S；X₄为T或I；X₅为R或H；X₆为A、V或I；X₇为I、R、Y、K或F；X₈为G或A；X₉为E或V；X₁₀为K或R；X₁₁为E、D或Q；X₁₂为H或P；X₁₃为D或E；X₁₄为S、L或T；X₁₅为N或E；X₁₆为R或S；X₁₇为G或S；X₁₈为N或A；X₁₉为V或I；X₂₀为S、I或M；X₂₁为P或不存在；X₂₂为D或P；并且X₂₃为V或T。

在另一方面，本公开提供了包含具有以下序列的SIRPαD1结构域变体的多肽：EEELQX₁IQPDKSVLVAAGETATLRCTX₂TSLX₃PVG PIQWFRGAGPGRX₄LIYNQX₅X₆GX₇FPRVTTVSDX₈TKRNNMDFSI RIGX₉ITPADAGTYYCX₁₀KFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS(SEQ ID NO:49)，其中X₁为V、L或I；X₂为A、I、V或L；X₃为I、F、S或T；X₄为E、V或L；X₅为K或R；X₆为E或Q；X₇为H、P或R；X₈为L、T、S或G；X₉为A；并且X₁₀为V或I；并且其中所述变体相对于具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少一个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:49的序列，其中X₁为V、L或I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₂为A、I、V或L。在任一上述实施方案中，X₃为I、F、S或T。在任一上述实施方案中，X₄为E、V或L。在任一上述实施方案中，X₅为K或R。在任一上述实施方案中，X₆为E或Q。在任一上述实施方案中，X₇为H、P或R。在任一上述实施方案中，X₈为L、T、S或G。在任一上述实施方案中，X₉为A。在任一上述实施方案中，X₁₀为V或I。

在一些实施方案中，多肽包含与SEQ ID NO:49包含至少85％序列同一性(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的SIRPαD1结构域，其中X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇、X₈、X₉和X₁₀中的每个不是野生型氨基酸。

在一些实施方案中，本公开的该方面的多肽相对于具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含不超过十个氨基酸取代。在一些实施方案中，本公开的该方面的多肽相对于具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含不超过七个氨基酸取代。

在另一方面，本公开提供了包含具有以下序列的SIRPαD1结构域变体的多肽：EEELQX₁IQPDKSVSVAAGESAILHCTX₂TSLX₃PVG PIQWFRGAGPARX₄LIYNQX₅X₆GX₇FPRVTTVSEX₈TKRENMDFSISI SX₉ITPADAGTYYCX₁₀KFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPS,(SE Q ID NO:50)，其中X₁为V或I；X₂为V或I；X₃为I或F；X₄为E或V；X₅为K或R；X₆为E或Q；X₇为H或P；X₈为S或T；X₉为N或A；并且X₁₀为V或I；并且其中所述变体相对于具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少一个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:50的序列，其中X₁为V或I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₂为V或I。在任一上述实施方案中，X₃为I或F。在任一上述实施方案中，X₄为E或V。在任一上述实施方案中，X₅为K或R。在任一上述实施方案中，X₆为E或Q。在任一上述实施方案中，X₇为H或P。在任一上述实施方案中，X₈为S或R。在任一上述实施方案中，X₉为N或A。在任一上述实施方案中，X₁₀为V或I。

在一些实施方案中，多肽包含与SEQ ID NO:50包含至少85％序列同一性(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的SIRPαD1结构域，其中X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇、X₈、X₉和X₁₀中的每个不是野生型氨基酸。

在一些实施方案中，本公开的该方面的多肽相对于具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含不超过十个氨基酸取代。在一些实施方案中，本公开的该方面的多肽相对于具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含不超过七个氨基酸取代。

在另一方面，本公开提供了包含具有以下序列的SIRPαD1结构域变体的多肽：EEELQX₁IQPDKSVLVAAGETATLRCTX₂TSLX₃PVG PIQWFRGAGPGRX₄LIYNQX₅EGX₆FPRVTTVSDX₇TKRNNMDFSIRI GX₈ITPADAGTYYCX₉KFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS(SE Q ID NO:51)，其中X₁为V或I；X₂为A或I；X₃为I或F；X₄为E或V；X₅为K或R；X₆为H或P；X₇为L或T；X₈为N或A；并且X₉为V或I；并且其中所述变体相对于具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少一个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:51的序列，其中X₁为V或I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₂为A或I。在任一上述实施方案中，X₃为I或F。在任一上述实施方案中，X₄为E或V。在任一上述实施方案中，X₅为K或R。在任一上述实施方案中，X₆为H或P。在任一上述实施方案中，X₇为L或T。在任一上述实施方案中，X₈为N或A。在任一上述实施方案中，X₉为V或I。在一些实施方案中，X₄不为V。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:51的序列，其中X₈为A。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₈为A且X₁为V或I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₈为A且X₂为A或I。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₃为I或F。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₄为E或V。在一些实施方案中，X₄不为V。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₅为K或R。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₆为H或P。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₇为A或V。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₉为V或I。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:51的序列，其中X₈为A。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₈为A且X₁为I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₈为A且X₂为I。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₃为F。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₄为V。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₅为R。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₆为P。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₇为T。在任一上述实施方案中，X₈为A且X₉为I。

在一些实施方案中，多肽包含与SEQ ID NO:51包含至少85％序列同一性(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的SIRPαD1结构域变体，其中X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇、X₈和X₉中的每个不是野生型氨基酸。

在另一方面，本公开提供了包含具有以下序列的SIRPαD1结构域变体的多肽：EEELQX₁IQPDKSVLVAAGETATLRCTX₂TSLX₃PVGPIQWFRGAGPGRELIYNQX₄EGX₅FPRVTTVSDX₆TKRNNMDFSIRIGX₇ITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS(SE Q ID NO:222)，其中X₁为V、L或I；X₂为A、I或L；X₃为I、T、S或F；X₄为K或R；X₅为H或P；X₆为L、T或G；X₇为N或A；并且其中所述变体相对于具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少一个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:222的序列，其中X₁为V、L或I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₂为A、I或L。在任一上述实施方案中，X₃为I、T、S或F。在任一上述实施方案中，X₄为K或R。在任一上述实施方案中，X₅为H或P。在任一上述实施方案中，X₆为L、T或G。在任一上述实施方案中，X₇为N或A。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:222的序列，其中X₁为V或I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₂为A或I。在任一上述实施方案中，X₃为I或F。在任一上述实施方案中，X₄为K或R。在任一上述实施方案中，X₅为H或P。在任一上述实施方案中，X₆为L或T。在任一上述实施方案中，X₇为N或A。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:222的序列，其中X₇为A。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₇为A且X₁为V或I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₇为A且X₂为A或I。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₃为I或F。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₄为K或R。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₅为H或P。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₆为L或T。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:222的序列，其中X₇为A。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₇为A且X₁为I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₇为A且X₂为I。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₃为F。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₄为R。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₅为P。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₆为T。

在一些实施方案中，多肽包含与SEQ ID NO:222包含至少85％序列同一性(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的SIRPαD1结构域，其中X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆和X₇中的每个不是野生型氨基酸。

在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域至少10倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域至少100倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ IDNO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域至少1000倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，片段包括长度小于10个氨基酸、长度约10个氨基酸、长度约20个氨基酸、长度约30个氨基酸、长度约40个氨基酸、长度约50个氨基酸、长度约60个氨基酸、长度约70个氨基酸、长度约80个氨基酸、长度约90个氨基酸、长度约100个氨基酸、或长度超过约100个氨基酸的多肽。片段保留与CD47结合的能力。优选地，SIRPαD1结构域变体多肽及其片段以比SIRPα多肽结合CD47更高的亲和力结合CD47。例如，在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以小于1x10^-8M、小于5x10^-9M、小于1x10^-9M、小于5x10^-10M、小于1x10^-10M或小于1x10^-11M的K_D结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以介于约500nM和100nM之间、介于约100nM和50nM之间、介于约50nM和10nM之间、介于约10nM和5nM之间、介于约5nM和1nM之间、介于约1nM和500pM之间、介于约500pM和100pM之间、介于约100pM和50pM之间或介于约50pM和10pM之间的K_D结合CD47。

在另一方面，本公开提供了包含具有以下序列的SIRPαD1结构域变体的多肽：EEELQX₁IQPDKSVSVAAGESAILHCTX₂TSLX₃PVG PIQWFRGAGPARELIYNQX₄EGX₅FPRVTTVSEX₆TKRENMDFSISIS X₇ITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPS(SEQ ID NO:212)，其中X₁为V、L或I；X₂为V、I或L；X₃为I、T、S或F；X₄为K或R；X₅为H、P或R；X₆为S、T或G；X₇为N或A；并且其中所述变体相对于具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少一个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:212的序列，其中X₁为V、L或I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₂为V、I或L。在任一上述实施方案中，X₃为I、T、S或F。在任一上述实施方案中，X₄为K或R。在任一上述实施方案中，X₅为H或P。在任一上述实施方案中，X₆为S、T或G。在任一上述实施方案中，X₇为N或A。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:212的序列，其中X₁为V或I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₂为V或I。在任一上述实施方案中，X₃为I或F。在任一上述实施方案中，X₄为K或R。在任一上述实施方案中，X₅为H或P。在任一上述实施方案中，X₆为S或T。在任一上述实施方案中，X₇为N或A。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:212的序列，其中X₇为A。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₇为A且X₁为V或I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₇为A且X₂为V或I。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₃为I或F。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₄为K或R。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₅为H或P。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₆为S或T。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:212的序列，其中X₇为A。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₇为A且X₁为I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₇为A且X₂为I。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₃为F。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₄为R。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₅为P。在任一上述实施方案中，X₇为A且X₆为T。

在一些实施方案中，多肽包含与SEQ ID NO:212具有至少85％序列同一性(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的SIRPαD1结构域，其中X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆和X₇中的每个不是野生型氨基酸。

在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少10倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ ID NO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少100倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，多肽以具有SEQ IDNO:2的序列的野生型SIRPαD1结构域至少1000倍的结合亲和力结合CD47。在一些实施方案中，片段包括长度小于10个氨基酸、长度约10个氨基酸、长度约20个氨基酸、长度约30个氨基酸、长度约40个氨基酸、长度约50个氨基酸、长度约60个氨基酸、长度约70个氨基酸、长度约80个氨基酸、长度约90个氨基酸、长度约100个氨基酸、或长度超过约100个氨基酸的多肽。片段保留与CD47结合的能力。优选地，SIRPαD1结构域变体多肽及其片段以比SIRPα多肽结合CD47更高的亲和力结合CD47。例如，在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以小于1x10^-8M、小于5x10^-9M、小于1x10^-9M、小于5x10^-10M、小于1x10^-10M或小于1x10^-11M的K_D结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以介于约500nM和100nM之间、介于约100nM和50nM之间、介于约50nM和10nM之间、介于约10nM和5nM之间、介于约5nM和1nM之间、介于约1nM和500pM之间、介于约500pM和100pM之间、介于约100pM和50pM之间或介于约50pM和10pM之间的K_D结合CD47。

在一些实施方案中，本文描述了包含具有根据以下的序列的SIR PαD1结构域变体的多肽：EEELQX₁IQPDKSVLVAAGETATLRCTX₂TSLX₃PVGPIQWFRGAGPGRX₄LIYNQX₅X₆GX₇FPRVTTVSDX₈TKR NNMDFSIRIGX₉X₁₀X₁₁X₁₂ADAGTYYCX₁₃KFRKGSPDDVEFKSGAG TELSVRAKPS(SEQ ID NO:218)，其中X₁为V、L或I；X₂为A、V、L或I；X₃为I、S、T或F；X₄为E、L或V；X₅为K或R；X₆为E或Q；X₇为H、R或P；X₈为S、G、L或T；X₉为任何氨基酸；X₁₀为任何氨基酸；X₁₁为任何氨基酸；X₁₂为任何氨基酸；并且X₁₃为V或I；并且其中所述SIRPαD1结构域变体相对于具有根据SEQID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少两个氨基酸取代。

在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:212的序列，其中X₁，其中X₉为A。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₉为N。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₁₀为I。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₉为N且X10为P。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₉为N且X11为除S、T或C之外的任何氨基酸。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₁₁为T。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₁₁为除T之外的氨基酸。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₁₂为P。在本公开的该方面的任一上述实施方案中，X₉为N且X₁₂为除P之外的任何氨基酸。

在一些实施方案中，本文描述了包含具有根据以下的序列的SIRPαD1结构域变体的多肽：EEELQX₁IQPDKSVLVAAGETATLRCTX₂TSLX₃PVGPIQWFRGAGP GRX₄LIYNQX₅X₆GX₇FPRVTTVSDX₈TKRNNMDFSIRIGX₉ITX₁₀AD AGTYYCX₁₁KFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS(SEQ ID NO:219)，其中X₁为V、L或I；X₂为A、V、L或I；X₃为I、S、T或F；X₄为E、L或V；X₅为K或R；X₆为E或Q；X₇为H、R或P；X₈为S、G、L或T；X₉为N；X₁₀为除P之外的任何氨基酸；并且X₁₁为V或I；并且其中所述SIRPαD1结构域变体相对于具有根据SEQ ID NO:1的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少两个氨基酸取代。

在本公开的另一方面，本文公开了组合物，其包含具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的SIRPαD1结构域变体多肽，或其片段。在一些实施方案中，与SIRPα多肽结合CD47的亲和力相比，SIRPαD1结构域变体多肽或其片段以更高的亲和力结合CD47。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽以小于1x10^-8M、或小于1x10^-9M、小于1x10^-10M或小于1x10^-11M的K_D结合CD47。在一些实施方案中，上述SIRPαD1结构域变体多肽与第二多肽附接或融合。在一些实施方案中，第二多肽包括但不限于Fc多肽、Fc变体或前述的片段。

不限制前述，在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽选自表6中所示的SEQID NO:53-87和213中的任一者。

表6.SIRPα变体多肽

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在一些实施方案中，多肽包含与表6中提供的任何变体具有至少85％序列同一性(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的SIRPαD1结构域变体。

在一些实施方案中，多肽包含与表6中的SEQ ID NO:80、81或85具有至少85％序列同一性(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的SIRPαD1结构域。

Fc结构域变体和包含其的融合多肽

在一些实施方案中，本文还公开了Fc结构域变体二聚体，其中所述Fc结构域变体二聚体包含两个Fc结构域变体，其中每个Fc结构域变体独立地选自(i)由突变L234A、L235A、G237A和N297A组成的人IgG1 Fc区；(ii)由突变A330S、P331S和N297A组成的人IgG2Fc区；或(iii)包含突变S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A的人IgG4 Fc区。

靶向细胞表面抗原的抗体可触发与免疫细胞上的Fc受体(FcR)接合相关的免疫刺激性和效应子功能。存在许多对特定类别的抗体具有特异性的Fc受体，包括IgG(γ受体)、IgE(η受体)、IgA(α受体)和IgM(μ受体)。Fc区与细胞表面上的Fc受体的结合可引发许多生物反应，包括抗体包被的颗粒的吞噬作用(抗体依赖性细胞介导的吞噬作用或ADCP)、免疫复合物的清除、抗体包被的细胞被杀伤细胞裂解(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性或ADCC)和炎性介质的释放、胎盘转移和免疫球蛋白产生的控制。另外，补体的C1组分与抗体的结合可激活补体系统。补体的激活对于细胞病原体的裂解是重要的。然而，补体的激活也可以刺激炎症反应，并且也可以参与自身免疫超敏反应或其他免疫病症。具有降低的或消除的结合某些Fc受体的能力的变体Fc区可用于开发治疗性抗体和Fc-融合多肽构建体，其通过靶向、激活或中和配体功能起作用，同时不损伤或破坏局部细胞或组织。

在一些实施方案中，SIRPαD1多肽构建体包含与Fc结构域变体连接的非天然存在的SIRPαD1结构域变体，所述Fc结构域变体形成具有消除或降低的效应子功能的Fc结构域。

在一些实施方案中，Fc结构域变体是指包括第二和第三抗体恒定结构域(例如，CH2和CH3)的多肽链。在一些实施方案中，Fc结构域变体还包括铰链结构域。在一些实施方案中，Fc结构域变体是任何免疫球蛋白抗体同种型，包括IgG、IgE、IgM、IgA和IgD。另外，在一些实施方案中，Fc结构域变体是任何IgG亚型(例如IgG1、IgG2、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3和IgG4)。在一些实施方案中，Fc结构域变体相对于野生型Fc结构域单体序列包含多达十个氨基酸修饰(例如插入、缺失和/或取代)(例如1-10、1-8、1-6、1-4个氨基酸取代、添加或插入、缺失或其组合)，其改变Fc结构域和Fc受体之间的相互作用。

如本文所用，术语“Fc结构域二聚体”是指两个Fc结构域的二聚体。在野生型Fc结构域二聚体中，两个野生型Fc结构域通过两个CH3抗体恒定结构域之间的相互作用以及在两个二聚化Fc结构域的铰链结构域之间形成的一个或多个二硫键而二聚化。

如本文所用，术语“Fc结构域二聚体变体”包含至少一个Fc结构域变体。在一些实施方案中，Fc结构域二聚体变体包含突变以缺乏效应子功能的Fc结构域变体，例如“死的Fc结构域二聚体变体”。在一些实施方案中，Fc结构域二聚体变体中的每个Fc结构域在CH2抗体恒定结构域中包含氨基酸取代，以减少Fc结构域二聚体变体与Fc受体(诸如Fcγ受体(FcγR)、Fcα受体(FcαR)或Fcε(FcεR))之间的相互作用或结合。

在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体(例如，表2、5和6中所述的任一变体)与免疫球蛋白的Fc结构域变体或Fc结构域变体的片段融合。在一些实施方案中，免疫球蛋白的Fc结构域变体或Fc结构域变体的片段能够与另一Fc结构域变体形成Fc结构域二聚体。在一些实施方案中，免疫球蛋白的Fc结构域变体或Fc结构域变体的片段不能与另一Fc结构域变体形成Fc结构域二聚体。在一些实施方案中，Fc结构域变体或Fc结构域变体的片段与本公开的多肽融合以增加多肽的血清半衰期。在一些实施方案中，与本公开的多肽融合的Fc结构域变体或Fc结构域变体的片段与第二Fc结构域变体二聚化以形成结合Fc受体的Fc结构域二聚体变体，可替代地，Fc结构域变体结合Fc受体。在一些实施方案中，与多肽融合以增加多肽的血清半衰期的Fc结构域变体或Fc结构域变体的片段不诱导任何免疫系统相关的反应。

在一些实施方案中，本文提供的SIRPα多肽或构建体包含与第一Fc结构域变体连接的SIRPαD1结构域或其变体和与第二Fc结构域变体连接的抗体可变结构域，其中第一和第二Fc结构域变体组合以形成Fc结构域二聚体变体(例如异二聚体Fc结构域二聚体变体)。Fc结构域二聚体是在免疫球蛋白的C末端发现的蛋白质结构。Fc结构域二聚体包括通过CH3抗体恒定结构域之间的相互作用二聚化的两个Fc结构域。野生型Fc结构域二聚体形成结合Fc受体的最小结构，所述Fc受体例如FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb和FcγRIV。

Fc结构域二聚体不直接参与抗体与其靶标的结合，但可参与各种效应子功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。在一些实施方案中，本公开的SIRPα多肽或构建体中的Fc结构域包含氨基酸取代、添加或插入、缺失或其任何组合，其导致降低的效应子功能，诸如降低的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、降低的补体依赖性细胞溶解(CDC)、降低的抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)或其任何组合。在一些实施方案中，本公开的SIRPα多肽或构建体的特征在于降低的与人Fc受体的结合(例如，最小结合或不存在结合)和降低的与补体蛋白C1q的结合(例如，最小结合或不存在结合)。在一些实施方案中，本公开的SIRPα构建体的特征在于降低的与人FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、FcγRIIIB或其任何组合和C1q的结合(例如，最小结合或不存在结合)。为改变或降低抗体依赖性效应子功能，诸如ADCC、CDC、ADCP或其任何组合，在一些实施方案中，本公开的SIRPα构建体中的Fc结构域是IgG类别且在E233、L234、L235、G236、G237、D265、D270、N297、E318、K320、K322、A327、A330、P331或P329处包含一个或多个氨基酸取代(根据Kabat的EU索引编号(Sequences ofProteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,MD.(1991)))。

在一些实施方案中，与包含天然Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的非天然Fc区的多肽构建体表现出降低的或消除的与Fcγ受体CD16a、CD32a、CD32b、CD32c和CD64中的至少一种的结合。在一些情况下，本文所述的多肽构建体表现出降低的或消除的与CD16a、CD32a、CD32b、CD32c和CD64 Fcγ受体的结合。

CDC是指一种细胞毒性形式，其中补体级联被补体组分C1q与抗体Fc结构域的结合激活。在一些实施方案中，与包含野生型Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的非天然Fc区的多肽构建体在C1q结合方面表现出至少5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大的降低。在一些情况下，与包含野生型Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的非天然Fc区的多肽构建体表现出降低的CDC。在一些实施方案中，与包含野生型Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的非天然Fc区的多肽构建体在CDC方面表现出至少5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大的降低。在一些情况下，与包含野生型Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的非天然Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体的多肽构建体表现出可忽略的CDC。

在一些实施方案中，相对于野生型序列，本文所述的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体被最低限度糖基化或具有降低的糖基化。在一些实施方案中，去糖基化通过N297A的突变或通过将N297突变为不是N的任何氨基酸来实现。在一些实施方案中，去糖基化通过破坏基序N-Xaa1-Xaa2-Xaa3来实现，其中N＝天冬酰胺；Xaa1＝除P(脯氨酸)以外的任何氨基酸；Xaa2＝T(苏氨酸)、S(丝氨酸)或C(半胱氨酸)；并且Xaa3＝除P(脯氨酸)以外的任何氨基酸。在一个实施方案中，N-Xaa1-Xaa2-Xaa3基序是指根据Kabat等人,1991指定的残基297-300。在一些实施方案中，N、Xaa1、Xaa2或Xaa3中任一个或多个的突变导致Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体的去糖基化。

在一些实施方案中，抗体IgG恒定区的变体(例如Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体)具有降低的特异性结合Fcγ受体的能力或具有降低的诱导吞噬作用的能力。在一些实施方案中，抗体IgG恒定区的变体(例如Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体)具有降低的特异性结合Fcγ受体的能力并且具有降低的诱导吞噬作用的能力。例如，在一些实施方案中，Fc结构域变体被突变以缺乏效应子功能，典型的是“死的”Fc结构域变体。例如，在一些实施方案中，Fc结构域变体包括已知使Fc结构域二聚体和Fcγ受体之间的相互作用最小化的特定氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc结构域变体来自IgG1抗体并且包括氨基酸取代L234A、L235A、G237A和N297A中的一个或多个(根据Kabat等人,1991的EU编号系统指定)。在一些实施方案中，此类IgG1 Fc结构域变体中包含一个或多个另外的突变。人IgG1 Fc结构域变体的此类另外的突变的非限制性实例包括E318A和K322A。在一些情况下，人IgG1 Fc结构域变体与野生型人IgG1序列相比总共具有多达12、11、10、9、8、7、6、5或4个或更少的突变。在一些实施方案中，此类IgG1 Fc结构域变体中包含一个或多个另外的缺失。例如，在一些实施方案中，表7中SEQ ID NO:88所提供的Fc结构域IgG1重链恒定区的C端赖氨酸被缺失，例如，以便在细菌或哺乳动物细胞中产生多肽时，增加多肽的同质性。在一些情况下，人IgG1 Fc结构域变体与野生型人IgG1序列(参见例如以下SEQ ID NO:161)相比总共具有多达12、11、10、9、8、7、6、5或4个或更少的缺失。在一些实施方案中，IgG1 Fc结构域变体具有根据SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136或SEQ ID NO:137中任一者的序列。

SEQ ID NO:161：

DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

在一些实施方案中，Fc结构域变体来自IgG2或IgG4抗体并且包括氨基酸取代A330S、P331S或A330S和P331S两者。上述氨基酸位置根据Kabat,等人(1991)定义。对于给定的抗体，氨基酸残基的Kabat编号可以通过将抗体序列的同源区域与“标准”Kabat编号序列进行比对来确定。在一些实施方案中，Fc结构域变体包含人IgG2 Fc结构域序列，其包含A330S、P331S和N297A氨基酸取代中的一个或多个(根据Kabat,等人(1991)的EU编号系统指定)。在一些实施方案中，在此类IgG2 Fc结构域变体中包含一个或多个另外的突变。人IgG2Fc结构域变体的此类另外的突变的非限制性实例包括V234A、G237A、P238S、V309L和H268A(根据Kabat,等人(1991)的EU编号系统指定)。在一些情况下，人IgG2 Fc结构域变体与野生型人IgG2序列相比总共具有多达12、11、10、9、8、7、6、5、4、3个或更少的突变。在一些实施方案中，此类IgG2 Fc结构域变体中包含一个或多个另外的缺失。例如，在一些实施方案中，表7中SEQ ID NO:89所提供的Fc结构域IgG2重链恒定区的C端赖氨酸被缺失，例如，以便在细菌或哺乳动物细胞中产生多肽时，增加多肽的同质性。在一些情况下，人IgG2 Fc结构域变体与野生型人IgG2序列(参见例如以下SEQ ID NO:162)相比总共具有多达12、11、10、9、8、7、6、5或4个或更少的缺失。

SEQ ID NO:162：

ERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

当Fc结构域变体是IgG4 Fc结构域变体时，在一些实施方案中，此类Fc结构域变体包含S228P突变(如根据Kabat,等人(1991)指定)。在一些情况下，人IgG4 Fc结构域变体与野生型人IgG4序列相比总共具有多达12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个突变。在一些实施方案中，Fc结构域变体包含人IgG4 Fc序列，其包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236氨基酸取代中的一个或多个(根据Kabat,等人(1991)的EU编号系统指定)。在一些实施方案中，Fc结构域变体包含人IgG4 Fc序列，其包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A氨基酸取代中的一个或多个(根据Kabat,等人(1991)的EU编号系统指定)。

在一些实施方案中，Fc结构域变体包含IgG1 Fc区的突变L234A、L235A、G237A或N297A中的至少一个或IgG2 Fc区的突变A330S、P331S或N297A中的至少一个。在一些实施方案中，Fc结构域变体包含IgG1 Fc区的突变L234A、L235A、G237A或N297A中的至少两个或IgG2 Fc区的突变A330S、P331S或N297A中的至少两个。在一些实施方案中，Fc结构域变体包含IgG1 Fc区的突变L234A、L235A、G237A或N297A中的至少三个或由IgG2 Fc区的突变A330S、P331S和N297A组成。在一些实施方案中，Fc结构域变体由突变L234A、L235A、G237A和N297A组成。

在一些实施方案中，与野生型人IgG Fc区相比，Fc结构域变体表现出降低的与受试者的Fc受体的结合。在一些实施方案中，与野生型人IgG Fc区相比，Fc结构域变体表现出消除的与受试者的Fc受体的结合。在一些实施方案中，与野生型人IgG Fc区相比，Fc结构域变体表现出吞噬作用降低。在一些实施方案中，与野生型人IgG Fc区相比，Fc结构域变体表现出消除的吞噬作用。

SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89提供了Fc结构域IgG1和IgG2重链恒定区的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fc结构域变体是如表7中所示的SEQ ID NO:90-95的任何变体。

表7.Fc结构域变体的氨基酸序列

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抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(在本文中也称为ADCC)是指一种细胞毒性形式，其中分泌的Ig结合到某些细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞和嗜中性粒细胞)上存在的Fc受体(FcR)上，使得这些细胞毒性效应细胞能够特异性地结合携带抗原的靶细胞，并随后杀伤靶细胞。抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(在本文中也称为ADCP)是指一种细胞毒性形式，其中分泌的Ig结合到存在于某些吞噬细胞(例如巨噬细胞)上的Fc受体(FcR)上，使得这些吞噬效应细胞能够特异性地结合携带抗原的靶细胞，并随后吞噬和消化靶细胞。针对靶细胞表面的配体特异性高亲和力IgG抗体可刺激细胞毒性或吞噬细胞并可用于这种杀伤。在一些实施方案中，与包含野生型Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体的多肽构建体表现出降低的ADCC或ADCP。在一些实施方案中，与包含野生型Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体的多肽构建体在ADCC或ADCP方面表现出至少5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大的降低。在一些实施方案中，与包含野生型Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体的多肽构建体表现出消除的ADCC或ADCP。

补体定向的细胞毒性(在本文中也称为CDC)是指一种细胞毒性形式，其中补体级联被补体组分C1q与抗体Fc结构域的结合激活。在一些实施方案中，与包含野生型Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体的多肽构建体在C1q结合方面表现出至少5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大的降低。在一些情况下，与包含野生型Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体的多肽构建体表现出降低的CDC。在一些实施方案中，与包含野生型Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体的多肽构建体在CDC方面表现出至少5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大的降低。在一些情况下，与包含野生型Fc区的多肽构建体相比，包含本文所述的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体的多肽构建体表现出可忽略的CDC。

本文的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体包括与野生型人IgG Fc区相比表现出降低的与Fcγ受体的结合的那些。例如，在一些实施方案中，与野生型人IgG Fc区所表现出的与Fcγ受体的结合相比，Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体表现出更小的与Fcγ受体的结合，如实施例中所述。在一些情况下，Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体与Fcγ受体的结合降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％(完全消除的效应子功能)。在一些实施方案中，降低的结合是针对任一种或多种Fcγ受体，例如CD16a、CD32a、CD32b、CD32c或CD64。

在一些情况下，本文公开的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体与其野生型人IgG Fc区相比表现出吞噬作用降低。此类Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体与其野生型人IgG Fc区相比表现出吞噬作用降低，其中吞噬活性降低例如10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。在一些情况下，Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体与其野生型人IgG Fc区相比表现出消除的吞噬作用。

在一些实施方案中，本文公开的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体与一个或多个融合配偶体偶联。在一些情况下，融合配偶体是治疗性部分。在一些情况下，选择融合配偶体以能够靶向表达的蛋白质、纯化、筛选、展示等。在一些实施方案中，融合配偶体还影响与Fc受体的结合程度或吞噬作用减少的程度。如本文所述，在一些实施方案中，当Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体与融合配偶体偶联时，其形成如下所述的多肽构建体。

在一些实施方案中，融合配偶体通过接头序列与Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体序列连接。在一些实施方案中，接头序列通常包含少量氨基酸，诸如少于十个氨基酸，尽管也使用更长的接头。在一些情况下，接头具有小于10、9、8、7、6或5个氨基酸或更短的长度。在一些情况下，接头具有至少10、11、12、13、14、15、20、25、30或35个氨基酸或更长的长度。任选地，在一些实施方案中，使用可切割的接头。

在一些实施方案中，融合配偶体是将Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体蛋白质和任何相关融合配偶体定向至所需细胞位置或细胞外介质的靶向或信号序列。在一些实施方案中，某些信号传导序列靶向分泌到生长培养基中或位于细胞内膜和外膜之间的周质空间中的蛋白质。在一些实施方案中，融合配偶体是编码能够纯化或筛选的肽或蛋白质的序列。此类融合配偶体包括但不限于多聚组氨酸标签(His-标签)(例如His6(SEQ ID NO:223)和His10(SEQ ID NO:224))或用于固定化金属亲和色谱(IMAC)系统(例如Ni+2亲和柱)的其他标签、GST融合体、MBP融合体、Strep-标签、细菌酶BirA的BSP生物素化靶序列、以及抗体靶向的表位标签(例如c-myc标签、flag-标签等)。

在一些实施方案中，此类标签可用于纯化、筛选或两者。例如，在一些实施方案中，Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体使用His-标签通过将其固定至Ni+2亲和柱来纯化，然后在纯化后，将相同的His-标签用于将抗体固定至Ni+2包被的板以进行ELISA或其他结合测定，如本文别处所述。在一些实施方案中，融合配偶体使得能够使用选择方法来筛选如本文所述的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体。

可使用能够实现多种选择方法的各种融合配偶体。例如，通过将Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体文库的成员与基因III蛋白融合，可以使用噬菌体展示。在一些实施方案中，融合配偶体Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体被标记。可替代地，在一些实施方案中，融合配偶体与表达载体上的特定序列结合，使得融合配偶体和相关的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体能够与编码它们的核酸共价或非共价连接。

在一些实施方案中，当融合配偶体是治疗性部分时，所述治疗性部分是例如肽、蛋白质、抗体、siRNA或小分子。与本公开的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体偶联的治疗性抗体的非限制性实例包括但不限于识别CD47的抗体。与本公开的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体偶联的治疗性多肽的非限制性实例包括但不限于CD47结合多肽，包括SIRPα多肽。在此类情况下，CD47结合多肽与本公开的Fc结构域变体或Fc结构域二聚体变体附接或融合。CD47结合多肽的实例包括但不限于抗CD47抗体或其片段，以及CD47的配体诸如SIRPα或其片段。CD47结合多肽的其他实例包括但不限于SIRPα的天然存在形式及其突变体。

在一些实施方案中，本文公开了包含Fc结构域二聚体变体的多肽，其中所述Fc结构域二聚体变体包含两个Fc结构域变体，其中每个Fc结构域变体独立地选自(i)由L234A、L235A、G237A和N297A突变组成的人IgG1 Fc区；(ii)由A330S、P331S和N297A突变组成的人IgG2 Fc区；或(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区。在一些实施方案中，Fc结构域变体是相同的(即，同源二聚体)。在一些实施方案中，Fc结构域变体是不同的(即，异源二聚体)。在一些实施方案中，Fc结构域二聚体中的至少一个Fc结构域变体是由突变L234A、L235A、G237A和N297A组成的人IgG1 Fc区。在一些实施方案中，Fc结构域二聚体中的至少一个Fc结构域变体是由突变A330S、P331S和N297A组成的人IgG2 Fc区。在一些实施方案中，与野生型型式的人IgG Fc区相比，Fc结构域二聚体变体表现出消除的或降低的与Fcγ受体的结合。在一些实施方案中，与野生型型式的人IgG Fc区相比，Fc结构域二聚体变体表现出消除的或降低的与CD16a、CD32a、CD32b、CD32c和CD64 Fcγ受体的结合。在一些实施方案中，与野生型型式的人IgG Fc融合体相比，Fc结构域二聚体变体表现出消除的或降低的与C1q的结合。在一些实施方案中，Fc结构域二聚体变体中的至少一个Fc结构域变体是包含突变S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A的人IgG4 Fc区。在一些实施方案中，与野生型人IgG4 Fc区相比，Fc结构域二聚体变体表现出消除的或降低的与Fcγ受体的结合。在一些实施方案中，与野生型型式的其人IgG4 Fc区相比，Fc结构域二聚体变体表现出消除的或降低的与CD16a和CD32b Fcγ受体的结合。在一些实施方案中，Fc结构域二聚体变体以大于约5x10^-6M的KD结合Fcγ受体。

在一些实施方案中，Fc结构域二聚体变体还包含CD47结合多肽。在一些实施方案中，与野生型型式的人IgG Fc区相比，Fc结构域二聚体变体表现出消除的或降低的与Fcγ受体的结合。在一些实施方案中，CD47结合多肽在啮齿动物和非人灵长类动物中不引起急性贫血。在一些实施方案中，CD47结合多肽不引起人急性贫血。

在一些实施方案中，CD47结合多肽是信号调节蛋白α(SIRP-α)多肽或其片段。在一些实施方案中，SIRPα多肽包含含有以下氨基酸序列的SIRPαD1结构域变体：EEELQX₁IQPDKSVLVAAGETATLRC TX₂TSLX₃PVGPIQWFRGAGPGRX₄LIYNQX₅EGX₆FPRVTTVSDX₇TKRNNMDFSIRIGX₈ITPADAGTYYCX₉KFRKGSPDDVEFKSGAGTE LSVRAKPS(SEQ ID NO:221)，其中X₁为V或I；X₂为A或I；X₃为I或F；X₄为E或V；X₅为K或R；X₆为H或P；X₇为L或T；X₈为除N之外的任何氨基酸；并且X₉为V或I。在一些实施方案中，SIRPα多肽包含SIRPαD1结构域变体，其中X₁为V或I；X₂为A或I；X₃为I或F；X₄为E；X₅为K或R；X₆为H或P；X₇为L或T；X₈不为N；并且X₉为V。

在一些实施方案中，本文公开了一种多肽，其包含：SIRPαD1结构域变体，其中所述SIRPαD1结构域变体是非天然存在的高亲和力SIRPαD1结构域，其中所述SIRPαD1结构域变体以天然存在的D1结构域的亲和力至少10倍的亲和力结合人CD47；和Fc结构域变体，其中所述Fc结构域变体与包含第二Fc结构域变体的第二多肽连接以形成Fc结构域二聚体变体，其中所述Fc结构域二聚体变体具有消除或降低的效应子功能。在一些实施方案中，非天然存在的高亲和力SIRPαD1结构域在残基80处包含氨基酸突变。

在一些实施方案中，本文公开了一种SIRPαD1结构域变体，其中所述SIRPαD1结构域变体以小于250nM的K_D结合来自第一物种的CD47；并且其中所述SIRPαD1结构域变体以小于250nM的K_D结合来自第二物种的CD47；并且来自第一物种的CD47的K_D和来自第二物种的CD47的K_D在彼此的100倍以内；其中所述第一物种和所述第二物种选自由以下组成的组：人、啮齿动物和非人灵长类动物。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体结合来自至少3个不同物种的CD47。在一些实施方案中，非人灵长类动物是食蟹猴。

在一些实施方案中，本文公开了一种多肽，其包含(a)以小于250nM的KD结合人CD47的SIRPαD1结构域；和(b)与SIRPαD1结构域的N末端或C末端连接的Fc结构域或其变体，其中所述多肽在啮齿动物和非人灵长类动物中不引起急性贫血。在一些实施方案中，所述多肽是人SIRP-α的非天然存在的变体。在一些实施方案中，体内施用所述多肽导致施用后第一周内血红蛋白降低小于50％。在一些实施方案中，在人体内施用所述多肽导致在施用后第一周内血红蛋白降低小于50％。在一些实施方案中，多肽还包含至少一个Fc结构域二聚体变体，其中所述Fc结构域二聚体变体包含选自以下的Fc结构域变体：(i)由L234A、L235A、G237A和N297A突变组成的人IgG1 Fc区；(ii)由A330S、P331S和N297A突变组成的人IgG2 Fc区；或(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区。在一些实施方案中，Fc结构域变体是由突变L234A、L235A、G237A和N297A组成的人IgG1 Fc区。在一些实施方案中，Fc结构域变体是由突变A330S、P331S和N297A组成的人IgG2 Fc区。

本公开的SIRPα构建体包括SIRPα结构域或其变体，其C末端通过接头使用常规遗传或化学手段(例如化学缀合)连接至Fc结构域或其变体的N末端。在一些实施方案中，接头(例如间隔物)插入在多肽和Fc结构域或其变体之间。在一些实施方案中，包含SIRPαD1结构域变体的本公开的多肽与不能形成二聚体的Fc结构域变体融合。在一些实施方案中，本公开的多肽与Fc结构域或其变体融合，所述Fc结构域或其变体能够与另一Fc结构域或其变体形成二聚体，例如异源二聚体。在一些实施方案中，本发明的多肽与Fc结构域或其变体融合，并且该融合蛋白形成同源二聚体。在一些实施方案中，本公开的多肽与第一Fc结构域或其变体融合，并且不同的蛋白质或肽(例如，抗体可变区)与第二Fc结构域或其变体融合。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域或其变体与第一Fc结构域或其变体连接并且治疗性蛋白质(例如细胞因子、白介素、抗原、类固醇、抗炎剂或免疫调节剂)与第二Fc结构域或其变体连接。在一些实施方案中，第一和第二Fc结构域或其变体形成异源二聚体。

在不限制前述内容的情况下，在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽(例如，表2、5和6中所述的任一变体)与Fc多肽或Fc变体多肽(诸如Fc结构域或其变体)融合。包含SIRPαD1结构域变体多肽和融合Fc结构域变体多肽的多肽实例包括但不限于表8中所示的SEQ ID NO:96-137、214和216。

表8.包含与Fc结构域变体融合的SIRPαD1结构域变体的多肽

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在一些实施方案中，多肽包含与表8中提供的任何变体具有至少85％序列同一性(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的SIRPαD1变体结构域。

在一些实施方案中，多肽包含与表8中的SEQ ID NO:98-104、107-113、116-122或135-137具有至少85％序列同一性(例如，至少86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的SIRPαD1结构域变体。

在一些实施方案中，多肽包含(a)信号调节蛋白α(SIRP-α)D1变体，其中所述SIRPαD1结构域变体包含氨基酸序列，EEX₁X₂QX₃IQPDKX₄VX₅VAAGEX₆X₇X₈LX₉CTX₁₀TSLX₁₁PVGPIQWFRGAGPX₁₂RX₁₃LIYNQX₁₄X₁₅GX₁₆FPRVTTVSX₁₇X₁₈TX₁₉RX₂₀NMDFX₂₁IX₂₂IX₂₃X₂₄ITX₂₅ADAGTYYCX₂₆KX₂₇RKGSPDX₂₈X₂₉EX₃₀KSGAGTELSVRX₃₁KPS(SEQ ID NO:47)，其中X₁为E或G；X₂为L、I或V；X₃为V、L或I；X₄为S或F；X₅为L或S；X₆为S或T；X₇为A或V；X₈为I或T；X₉为H、R或L；X₁₀为A、V、I或L；X₁₁为I、T、S或F；X₁₂为A或G；X₁₃为E、V或L；X₁₄为K或R；X₁₅为E或Q；X₁₆为H、P或R；X₁₇为D或E；X₁₈为S、L、T或G；X₁₉为K或R；X₂₀为E或N；X₂₁为S或P；X₂₂为S或R；X₂₃为S或G；X₂₄为任何氨基酸；X₂₅为任何氨基酸；X₂₆为V或I；X₂₇为F、L或V；X₂₈为D或不存在；X₂₉为T或V；X₃₀为F或V；并且X₃₁为A或G；并且其中所述SIRPαD1结构域变体相对于具有根据SEQ ID NO:1至10中任一个的序列的野生型SIRPαD1结构域包含至少两个氨基酸取代；以及(b)具有两个Fc结构域变体的Fc结构域二聚体变体，其中每个Fc结构域变体独立地为(i)包含N297A突变的人IgG1 Fc区；(ii)包含L234A、L235A和G237A突变的人IgG1 Fc区；(iii)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区；(iv)包含N297A突变的人IgG2 Fc区；(v)包含A330S和P331S突变的人IgG2 Fc区；(vi)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区；(vii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区；或(viii)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区。

在一些实施方案中，多肽包含SIRPαD1结构域变体，其中所述SIRPαD1结构域变体包含根据SEQ ID NO:47的氨基酸序列；具有两个Fc结构域的Fc结构域二聚体，其中所述Fc结构域中的一个是包含人IgG1 Fc区的Fc结构域变体，所述人IgG1 Fc区包含L234A、L235A、G237A和N297A突变。

Fc结构域的二聚化

在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体多肽(例如，表2、5和6中所述的任一变体)在N末端或C末端与第一Fc结构域(例如，Fc结构域变体)融合。在一些实施方案中，第一Fc结构域是不能形成二聚体的变体。在一些实施方案中，第一Fc结构域与第二Fc结构域形成二聚体。在一些实施方案中，第一和第二Fc结构域包含促进第一和第二结构域Fc结构域之间的异源二聚化的氨基酸取代。

在一些实施方案中，Fc结构域二聚体中的两个Fc结构域中的每一个包含促进两个单体的异源二聚化的氨基酸取代。在一些实施方案中，SIRPα构建体例如由包含与第一Fc结构域融合的SIRPαD1结构域变体多肽的第一亚基和包含第二Fc结构域的第二亚基(例如，没有SIRPαD1结构域变体多肽或任何其他多肽)形成。在一些实施方案中，构建体具有连接至Fc结构域二聚体的单个SIRPαD1结构域变体多肽(例如，单臂)。在一些实施方案中，构建体具有连接至Fc结构域二聚体的两个SIRPαD1结构域变体多肽(例如，双臂)。在一些实施方案中，K_D约500nM的SIRPαD1结构域变体可特别用于双臂构建体。在一些实施方案中，KD约50nM的SIRPαD1结构域变体可特别用于双臂构建体。在一些实施方案中，KD约5nM的SIRPαD1结构域变体可用于双臂构建体和单臂构建体。在一些实施方案中，K_D约500pM的SIRPαD1结构域变体可用于双臂构建体和单臂构建体。在一些实施方案中，K_D约100pM的SIRPαD1结构域变体可用于双臂构建体和单臂构建体。在一些实施方案中，K_D约50pM的SIRPαD1结构域变体可用于双臂构建体和单臂构建体。在一些实施方案中，K_D约10pM的SIRPαD1结构域变体可用于双臂构建体和单臂构建体。

在一些实施方案中，通过在两个Fc结构域中引入不同但相容的取代，诸如“杵臼(knob-into-hole)”残基对和电荷残基对，促进Fc结构域的异源二聚化。杵(knob)和臼(hole)相互作用有利于异源二聚体形成，而杵-杵和臼-臼相互作用由于空间冲突和有利相互作用的缺失而阻碍同源二聚体形成。臼是指当蛋白质中的原始氨基酸被具有较小侧链体积的不同氨基酸替代时产生的空隙。杵是指当蛋白质中的原始氨基酸被具有较大侧链体积的不同氨基酸替代时产生的凸起。例如，在一些实施方案中，被替代的氨基酸在Fc结构域的CH3抗体恒定结构域中并且参与两个Fc结构域的二聚化。在一些实施方案中，在一个CH3抗体恒定结构域中产生臼以容纳另一CH3抗体恒定结构域中的杵，使得杵和臼氨基酸用于促进或有利于两个Fc结构域的异源二聚化。在一些实施方案中，在一个CH3抗体恒定结构域中产生臼以更好地容纳另一CH3抗体恒定结构域中的原始氨基酸。在一些实施方案中，在一个CH3抗体恒定结构域中产生杵以与另一CH3抗体恒定结构域中的原始氨基酸形成另外的相互作用。

在一些实施方案中，通过用具有较小侧链的氨基酸诸如丙氨酸、缬氨酸或苏氨酸替代具有较大侧链的氨基酸诸如酪氨酸或色氨酸来构建臼，例如CH3抗体恒定结构域中的Y407V突变。类似地，在一些实施方案中，通过用具有较大侧链的氨基酸替代具有较小侧链的氨基酸来构建杵，例如CH3抗体恒定结构域中的T366W突变。在一些实施方案中，一个Fc结构域包含杵突变T366W，而另一Fc结构域包含臼突变T366S、L358A和Y407V。在一些实施方案中，包含SIRPαD1结构域变体的本公开的多肽与包含杵突变T366W的Fc结构域融合以限制不需要的杵-杵同源二聚体形成。杵臼氨基酸对的实例包括但不限于表9，并且表10提供了杵臼Fc结构域变体和SIRPα-Fc融合体的实例。

表9.杵臼氨基酸对

表10.示例性Fc结构域变体和SIRPαD1结构域变体-Fc结构域变体融合多肽

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除了杵臼策略，在一些实施方案中，还使用静电转向来控制Fc结构域的二聚化。静电转向是指利用肽、蛋白质结构域和蛋白质中带相反电荷的氨基酸之间有利的静电相互作用来控制更高有序的蛋白质分子的形成。特别地，为了使用静电转向来控制Fc结构域的二聚化，用带正电荷或带负电荷的氨基酸残基替代构成CH3-CH3界面的一个或多个氨基酸残基，使得相互作用变得静电有利或不利，这取决于所引入的特定带电荷的氨基酸。在一些实施方案中，界面中带正电荷的氨基酸(诸如赖氨酸、精氨酸或组氨酸)被带负电荷的氨基酸(诸如天冬氨酸或谷氨酸)替代。在一些实施方案中，界面中带负电荷的氨基酸被带正电荷的氨基酸替代。在一些实施方案中，将带电荷的氨基酸引入相互作用的CH3抗体恒定结构域中的一个或两个。在一些实施方案中，将带电荷的氨基酸引入两个Fc结构域的相互作用的CH3抗体恒定结构域促进Fc结构域的异源二聚体的选择性形成，如通过由带电荷的氨基酸之间的相互作用产生的静电转向效应控制的。静电转向氨基酸对的实例包括但不限于表11。

表11.静电转向氨基酸对

可使用用于控制Fc结构域的异源二聚化的其他方法，特别是在构建双特异性抗体的上下文中。

在一些实施方案中，相对于人IgG1的序列，第一Fc结构域和第二Fc结构域各自包括以下氨基酸取代中的一个或多个：T366W、T366S、L368A、Y407V、T366Y、T394W、F405W、Y349T、Y349E、Y349V、L351T、L351H、L351N、L351K、P353S、S354D、D356K、D356R、D356S、E357K、E357R、E357Q、S364A、T366E、L368T、L368Y、L368E、K370E、K370D、K370Q、K392E、K392D、T394N、P395N、P396T、V397T、V397Q、L398T、D399K、D399R、D399N、F405T、F405H、F405R、Y407T、Y407H、Y407I、K409E、K409D、K409T和K409I。

在一些实施方案中，Fc结构域包含：(a)相对于野生型人IgG1的以下氨基酸取代中的一个：T366W、T366S、L368A、Y407V、T366Y、T394W、F405W、Y349T、Y349E、Y349V、L351T、L351H、L351N、L351K、P353S、S354D、D356K、D356R、D356S、E357K、E357R、E357Q、S364A、T366E、L368T、L368Y、L368E、K370E、K370D、K370Q、K392E、K392D、T394N、P395N、P396T、V397T、V397Q、L398T、D399K、D399R、D399N、F405T、F405H、F405R、Y407T、Y407H、Y407I、K409E、K409D、K409T或K409I；或(b)(i)相对于人IgG1 Fc区的N297A突变；(ii)相对于人IgG1 Fc区的L234A、L235A和G237A突变；(iii)相对于人IgG1 Fc区的L234A、L235A、G237A和N297A突变；(iv)相对于人IgG2 Fc区的N297A突变；(v)相对于人IgG2 Fc区的A330S和P331S突变；(vi)相对于人IgG2 Fc区的A330S、P331S和N297A突变；(vii)相对于人IgG4 Fc区的S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变；或(viii)相对于人IgG4 Fc区的S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变。在一些实施方案中，Fc结构域变体包含：(a)相对于野生型人IgG1的以下氨基酸取代中的一个：T366W、T366S、L368A、Y407V、T366Y、T394W、F405W、Y349T、Y349E、Y349V、L351T、L351H、L351N、L351K、P353S、S354D、D356K、D356R、D356S、E357K、E357R、E357Q、S364A、T366E、L368T、L368Y、L368E、K370E、K370D、K370Q、K392E、K392D、T394N、P395N、P396T、V397T、V397Q、L398T、D399K、D399R、D399N、F405T、F405H、F405R、Y407T、Y407H、Y407I、K409E、K409D、K409T或K409I；并且(b)还包含(i)相对于人IgG1Fc区的N297A突变；(ii)相对于人IgG1 Fc区的L234A、L235A和G237A突变；(iii)相对于人IgG1 Fc区的L234A、L235A、G237A和N297A突变；(iv)相对于人IgG2 Fc区的N297A突变；(v)相对于人IgG2 Fc区的A330S和P331S突变；(vi)相对于人IgG2 Fc区的A330S、P331S和N297A突变；(vii)相对于人IgG4 Fc区的S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变；或(viii)相对于人IgG4 Fc区的S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变。

在一些实施方案中，第一和第二Fc结构域包含不同的氨基酸取代。在一些实施方案中，第一Fc结构域包含T366W。在一些实施方案中，第二Fc结构域包含T366S、L368A和Y407V。在一些实施方案中，第一Fc结构域包含D399K。在一些实施方案中，第二Fc结构域包含K409D。

接头

在一些实施方案中，本文公开了包含信号调节蛋白α(SIRP-α)D1变体的多肽，所述变体包含SIRPαD1结构域或其片段，所述SIRPαD1结构域相对于野生型SIRPαD1结构域在残基80处具有氨基酸突变；并且相对于野生型SIRPαD1结构域在选自由以下组成的组的残基处具有至少一个另外的氨基酸突变：残基6、残基27、残基31、残基47、残基53、残基54、残基56、残基66和残基92。

在一些实施方案中，本文还公开了包含Fc变体的多肽，其中所述Fc变体包含Fc结构域二聚体，所述Fc结构域二聚体包含两个Fc结构域变体，其中每个Fc结构域变体独立地选自(i)由L234A、L235A、G237A和N297A突变组成的人IgG1 Fc区；(ii)由A330S、P331S和N297A突变组成的人IgG2 Fc区；或(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区。

在本公开中，接头用于描述多肽或蛋白质结构域或相关的非蛋白质部分之间的键联或连接。在一些实施方案中，接头是Fc结构域(或其变体)和SIRPαD1结构域变体之间的键联或连接。在一些实施方案中，接头连接SIRPαD1结构域变体的C末端和Fc结构域变体的N末端，使得两个多肽以串联方式彼此连接。

在一些实施方案中，接头是简单的共价键，例如肽键、合成聚合物、或由化学反应(例如化学缀合)产生的任何种类的键。当接头是肽键时，在一些实施方案中，一个蛋白质结构域的C末端的羧酸基团与另一蛋白质结构域的N末端的氨基基团在缩合反应中反应以形成肽键。在一些实施方案中，肽键由合成手段通过常规有机化学反应形成，或通过宿主细胞的自然产生而形成，其中编码串联的两种蛋白质(例如Fc结构域变体和SIRPαD1结构域变体)的DNA序列的核酸分子可通过宿主细胞中必需的分子机制(例如DNA聚合酶和核糖体)直接转录和翻译成编码两种蛋白质的连续多肽。

当接头是合成聚合物时，在一些实施方案中，聚合物在每个末端用反应性化学官能团官能化以与两种蛋白质的连接末端处的末端氨基酸反应。

当接头(除了上述肽键)由化学反应制得时，在一些实施方案中，化学官能团(例如，胺、羧酸、酯、叠氮化物或其他官能团)分别以合成方式附接至一种蛋白质的C末端和另一种蛋白质的N末端。在一些实施方案中，然后两个官能团通过合成化学手段反应以形成化学键，从而将两种蛋白质连接在一起。

间隔物

在本公开中，在一些实施方案中，Fc结构域单体和本公开的SI RPαD1变体多肽之间的接头是包含约1-200个氨基酸的氨基酸间隔物。合适的肽间隔物包括含有柔性氨基酸残基诸如甘氨酸和丝氨酸的肽接头。表12中提供了接头序列的实例。在一些实施方案中，间隔物含有GS、GG、GGS、GGG、GGGGS(SEQ ID NO:163)、GGS G(SEQ ID NO:164)或SGGG(SEQ IDNO:165)的基序，例如多个或重复基序。在一些实施方案中，间隔物含有2至12个氨基酸，包括GS基序，例如GS、GSGS(SEQ ID NO:166)、GSGSGS(SEQ ID NO:167)、GSGSGSGS(SEQ ID NO:168)、GSGSGSGSGS(SE Q ID NO:169)或GSGSGSGSGSGS(SEQ ID NO:170)。在一些实施方案中，间隔物含有3至12个氨基酸，包括GGS基序，例如GG S、GGSGGS(SEQ ID NO:171)、GGSGGSGGS(SEQ ID NO:172)和GGSGGSGGSGGS(SEQ ID NO:173)。在一些实施方案中，间隔物含有4至12个氨基酸，包括GGSG(SEQ ID NO:164)基序，例如GGSG(SEQ ID NO:164)、GGSGGGSG(SEQ ID NO:174)或GGSGGGSGGGSG(SEQ ID NO:175)。在一些实施方案中，间隔物含有GGGGS(SEQ ID NO:163)基序，例如GGGGSGGGGSGGGG S(SEQ ID NO:176)。在一些实施方案中，间隔物含有除甘氨酸和丝氨酸以外的氨基酸，例如AAS(SEQ ID NO:177)、AAAL(SEQID NO:178)、AAAK(SEQ ID NO:179)、AAAR(SEQ ID NO:180)、EGKSSGSGSESKST(SEQ ID NO:181)、GSAGSAAGSGEF(SEQ ID NO:182)、AEAAAKEAAAKA(SEQ ID NO:183)、KESGSVSSEQLAQFRSLD(SEQ ID NO:184)、GGGGAGGGG(SEQ ID NO:185)、GENLYFQSGG(SEQ IDNO:186)、SACYCELS(SEQ ID NO:187)、RSIAT(SEQ ID NO:188)、RPACKIPNDLKQKVMNH(SEQ IDNO:189)、GGSAGGSGSGSSGGSSGASGTGTAGGTGSGSGTGSG(SEQ ID NO:190)、AAANSSIDLISVPVDSR(SEQ ID NO:191)或GGSGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSGGGS(SEQ ID NO:192)。

在一些实施方案中，间隔物含有EAAAK(SEQ ID NO:193)的基序，例如多个或重复基序。在一些实施方案中，间隔物含有富含脯氨酸的序列诸如(XP)n的基序，例如多个或重复基序，其中X为任何氨基酸(例如A、K或E)，并且n为1-5，和PAPAP(SEQ ID NO:194)的基序。

表12.接头序列

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在一些实施方案中，根据所涉及的两种蛋白质和最终蛋白质融合多肽中所需的柔性程度来调节所使用的肽间隔物和氨基酸的长度。在一些实施方案中，调节间隔物的长度以确保适当的蛋白质折叠并避免聚集体形成。在一些实施方案中，间隔物是A或AAAL(SEQID NO:178)。

载体、宿主细胞和蛋白质产生

在一些实施方案中，本文还公开了包含Fc变体的多肽，其中所述Fc变体包含具有两个Fc结构域单体的Fc结构域二聚体，其中每个Fc结构域单体独立地选自(i)由突变L234A、L235A、G237A和N297A组成的人IgG1 Fc区；(ii)由突变A330S、P331S和N297A组成的人IgG2 Fc区；或(iii)包含突变S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A的人IgG4 Fc区。

在一些实施方案中，本公开的多肽由宿主细胞产生。宿主细胞是指包括由其对应的核酸表达本文所述的多肽和融合多肽所需的必要细胞组分(例如细胞器)的媒介物。在一些实施方案中，核酸包含在通过转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀、直接显微注射、感染等引入宿主细胞的核酸载体中。在一些实施方案中，核酸载体的选择取决于待使用的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是原核(例如细菌)或真核(例如哺乳动物)来源的。

在一些实施方案中，多肽，例如包含SIRPαD1结构域变体(例如表2、5和6中提供的任何变体)和融合配偶体(诸如Fc变体)的多肽构建体，通过在诱导或引起所述多肽构建体表达的适当条件下培养用核酸、优选含有编码所述多肽构建体(例如Fc变体、接头和融合配偶体)的核酸的表达载体转化的宿主细胞来产生。在一些实施方案中，适于表达的条件随所选择的表达载体和宿主细胞而变化。在一些实施方案中，使用多种适当的宿主细胞，包括但不限于哺乳动物细胞、细菌、昆虫细胞和酵母。例如，在可从美国典型培养物保藏中心获得的细胞系目录中描述了可用于本公开的各种细胞系。在一些实施方案中，本公开的Fc结构域变体在这样的细胞中表达，所述细胞被优化成不会使由此类细胞表达的蛋白质糖基化，通过细胞系的基因工程化或细胞培养条件的修改诸如添加几夫碱或通过使用天然非糖基化宿主诸如原核生物(大肠杆菌等)，并且在一些情况下，不需要修饰Fc中的糖基化序列。

核酸载体构建和宿主细胞

编码本公开的多肽的氨基酸序列的核酸序列可以通过多种方法制备。这些方法包括但不限于寡核苷酸介导的(或定点)诱变和PCR诱变。在一些实施方案中，使用标准技术(例如基因合成)获得编码本公开的多肽的核酸分子。可替代地，使用标准技术(例如，QuikChange^TM诱变)使编码野生型SIRPαD1结构域的核酸分子突变以包括特定氨基酸取代。在一些情况下，使用核苷酸合成仪或PCR技术合成核酸分子。

在一些实施方案中，将编码多肽构建体(例如包含SIRPαD1结构域变体(例如表2、5和6中提供的任何变体)和融合配偶体(诸如Fc变体)的多肽构建体)的核酸掺入表达载体中以表达蛋白质。多种表达载体可用于蛋白质表达。表达载体可包含自我复制的染色体外载体或整合到宿主基因组中的载体。载体还可以包括各种组分或元件。例如，在一些实施方案中，载体组分包括但不限于转录和翻译调节序列，诸如启动子序列、核糖体结合位点、信号序列、转录起始和终止序列、翻译起始和终止序列、3'和5'非翻译区(UTR)和增强子或激活物序列；复制起点；选择标记基因；以及编码感兴趣的多肽的核酸序列和转录终止序列。在一些实施方案中，表达载体包含与控制或调节序列、选择标记、任何融合配偶体、另外的元件或其任何组合可操作地连接的蛋白质。术语“可操作地连接”是指核酸与另一核酸序列处于功能关系中。通常，这些表达载体包含可操作地连接至编码Fc变体的核酸的转录和翻译调节核酸，并且通常适合用于表达蛋白质的宿主细胞。选择基因或标记(诸如但不限于抗生素抗性基因或荧光蛋白基因)可用于选择含有表达载体的宿主细胞，例如通过抗生素或荧光表达。可使用各种选择基因。

在一些实施方案中，优化载体的组分或元件，使得表达载体与宿主细胞类型相容。可用于本公开的表达载体包括但不限于能够在哺乳动物细胞、细菌、昆虫细胞、酵母和体外系统中表达蛋白质的那些。

在一些实施方案中，哺乳动物细胞用作宿主细胞以产生本公开的多肽。哺乳动物细胞类型的实例包括但不限于人胚胎肾(HEK)(例如HEK293、HEK 293F)、中国仓鼠卵巢(CHO)、HeLa、COS、PC3、Vero、MC3T3、NS0、Sp2/0、VERY、BHK、MDCK、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20、T47D、NS0(不内源性产生任何免疫球蛋白链的鼠骨髓瘤细胞系)、CRL7O3O和HsS78Bst细胞。在一些实施方案中，大肠杆菌细胞用作宿主细胞以产生本公开的多肽。大肠杆菌菌株的实例包括但不限于大肠杆菌294(31,446)、大肠杆菌λ1776(/>31,537、大肠杆菌BL21(DE3)(/>BAA-1025)和大肠杆菌RV308(/>31,608)。

不同的宿主细胞对于蛋白质产物的翻译后加工和修饰(例如糖基化)具有特征性和特异性机制。在一些实施方案中，选择适当的细胞系或宿主系统以确保表达的多肽的正确修饰和加工。一旦将载体引入宿主细胞中用于蛋白质产生，将宿主细胞在适于诱导启动子、选择转化体或扩增编码所需序列的基因而改良的常规营养培养基中培养。

在一些实施方案中，多肽构建体，例如包含SIRPαD1结构域变体(例如表2、5和6中提供的任何变体)和融合配偶体(诸如Fc变体)的多肽构建体，在哺乳动物表达系统中表达，包括其中使用病毒诸如逆转录病毒或腺病毒将表达构建体引入哺乳动物细胞的系统。在一些实施方案中，使用人、小鼠、大鼠、仓鼠或灵长类动物细胞。合适的细胞还包括已知的研究细胞，包括但不限于Jurkat T细胞、NIH3T3、CHO、COS和293细胞。或者，在一些实施方案中，蛋白质在细菌细胞中表达。细菌表达系统是本领域熟知的，并且包括大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、乳脂链球菌(Streptococcuscremoris)和青紫链球菌(Streptococcus lividans)。在一些情况下，包含Fc结构域变体的多肽构建体在昆虫细胞(诸如但不限于Sf9和Sf21细胞)或酵母细胞(诸如但不限于来自酵母属(Saccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、汉逊酵母属(Hansenula)和耶氏酵母属(Yarrowia)的生物体)中产生。在一些情况下，使用无细胞翻译系统在体外表达包含Fc结构域变体的多肽构建体。来源于两种原核生物(例如大肠杆菌)和真核生物(例如，小麦胚芽、兔网织红细胞)细胞的体外翻译系统是可用的，并且在一些实施方案中，基于感兴趣的蛋白质的表达水平和功能特性进行选择。例如，如本领域技术人员所理解的，一些展示技术例如核糖体展示需要体外翻译。此外，在一些实施方案中，Fc结构域变体通过化学合成方法产生，诸如但不限于液相肽合成和固相肽合成。在使用非糖基化系统诸如细菌提取物进行体外转录的情况下，Fc即使在天然糖基化位点存在下也不会被糖基化，因此Fc的失活将等同地获得。

在一些实施方案中，多肽构建体包含以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的非天然氨基酸、氨基酸类似物、氨基酸模拟物或其任何组合。天然编码的氨基酸通常是指20种常见氨基酸(丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸)以及吡咯赖氨酸和硒代半胱氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(例如与氢、羧基、氨基和R基团结合的碳)的化合物，诸如高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基锍。在一些实施方案中，此类类似物具有修饰的R基团(诸如正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但通常保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。

蛋白质产生、回收和纯化

在一些实施方案中，用于产生本公开的多肽的宿主细胞在适于培养所选宿主细胞的培养基中生长。用于哺乳动物宿主细胞的合适培养基的实例包括最小必需培养基(MEM)、Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)、Expi293^TM表达培养基、补充有胎牛血清(FBS)的DMEM、和RPMI-1640。用于细菌宿主细胞的合适培养基的实例包括Luria肉汤(LB)加上必需的补充物，诸如选择剂，例如氨苄青霉素。在一些实施方案中，宿主细胞在合适的温度(诸如约20℃至约39℃，例如约25℃至约37℃，优选37℃)和CO₂水平(诸如约5％至10％)下培养。在一些实施方案中，培养基的pH为约pH 6.8至pH 7.4，例如pH 7.0，这主要取决于宿主生物体。如果在表达载体中使用诱导型启动子，则可以在适于启动子激活的条件下诱导蛋白质表达。

在一些实施方案中，蛋白质回收涉及破坏宿主细胞，例如通过渗透压休克、超声处理或裂解。一旦细胞被破坏，通过离心或过滤除去细胞碎片。然后可以进一步纯化蛋白质。在一些实施方案中，本公开的多肽通过各种蛋白质纯化方法进行纯化，例如通过色谱(例如离子交换色谱、亲和色谱和尺寸排阻柱色谱)、离心、差异溶解度或通过任何其他用于纯化蛋白质的标准技术。例如，在一些实施方案中，通过适当选择和组合亲和柱诸如蛋白A柱(例如，POROS蛋白A色谱)与色谱柱(例如，POROS HS-50阳离子交换色谱)、过滤、超滤、脱盐和透析程序来分离和纯化蛋白质。在一些实施方案中，多肽与标记序列(诸如肽)缀合以促进纯化。标记氨基酸序列的实例是六组氨酸肽(His6-标签(SEQ ID NO:223))，其可以微摩尔亲和力结合镍功能化的琼脂糖亲和柱。作为替代方案，可以使用对应于来源于流感血凝素蛋白的表位的血凝素“HA”标签。

在一些实施方案中，本公开的多肽，例如包含SIRPαD1结构域变体(例如表2、5和6中提供的任何变体)和融合配偶体(诸如Fc变体)的多肽构建体由受试者(例如人)的细胞例如在基因疗法的上下文中通过施用含有编码本公开的多肽的核酸分子的载体诸如病毒载体(例如逆转录病毒载体、腺病毒载体、痘病毒载体(例如痘苗病毒载体，诸如改良安卡拉痘苗(MVA))、腺相关病毒载体和α病毒载体)来产生。载体一旦在受试者的细胞内(例如，通过转化、转染、电穿孔、磷酸钙沉淀、直接显微注射、感染等)可用于表达本文公开的多肽。在一些情况下，多肽由细胞分泌。在一些实施方案中，如果疾病或病症的治疗是期望的结果，则不需要进一步的动作。在一些实施方案中，如果需要收集蛋白质，则从受试者采集血液并通过各种方法从血液纯化蛋白质。

治疗癌症的方法

本文提供了治疗个体(例如人类个体)的癌症的方法，其包含向所述个体施用有效量的(a)包含SIRPαD1结构域变体(例如本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如本文所述的Fc结构域变体)的多肽和(b)化疗剂(例如，至少一种化疗剂，诸如至少两种、至少三种或至少四种化疗剂)。在一些实施方案中，所述方法还包括向个体施用有效量的治疗性抗体(例如，至少一种治疗性抗体，诸如至少两种、至少三种或至少四种治疗性抗体)。另外地或可替代地，在一些实施方案中，所述方法还包括向个体施用有效量的免疫治疗剂(例如，至少一种免疫治疗剂，诸如至少两种、至少三种或至少四种免疫治疗剂)。另外地或可替代地，在一些实施方案中，所述方法包括与一种或多种另外的治疗方式(包括但不限于例如放射治疗、手术、冷冻消融和骨髓移植)组合施用多肽和化疗剂。

包含化疗剂的组合疗法和示例性化疗剂

可用于本文所述的治疗癌症的方法中的示例性化疗剂包括但不限于例如甲氨蝶呤(Amethopterin)、环磷酰胺/>阿比特龙、阿贝西利(abemaciclib)、阿曲他明、沙利度胺/>吖啶甲酰胺、/>放线菌素、放线菌素-D、阿法替尼、17-N-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素、艾乐替尼(alectinib)、阿培利司(alpelisib)、氨基蝶呤、安吖啶、安罗替尼(anlotinib)、蒽环类、抗肿瘤药、抗肿瘤药、阿帕替尼(apartinib)、5-阿扎胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、阿昔替尼(axitinib)、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、BL22、苯达莫司汀、比美替尼(binimetinib)、比立考达(biricodar)、博来霉素、硼替佐米、波舒替尼(bosutinib)、布加替尼(brigatinib)、苔藓抑素、白消安、卡博替尼(cabozantinib)、花萼海绵体诱癌素(calyculin)、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、色瑞替尼、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯法拉滨、考比替尼(cobimetinib)、克唑替尼(crizotinib)、阿糖胞苷、达拉菲尼(dabrafenib)、达卡巴嗪、达可替尼(dacomitinib)、达沙替尼(dasatinib)、柔红霉素、地塞米松、二氯乙酸、圆皮海绵内酯(discodermolide)、多西他赛、多柔比星、恩考芬尼(encorafenib)、表柔比星、恩曲替尼(entrectinib)、恩杂鲁胺、埃博霉素、厄达替尼(erdafitinib)、艾日布林(eribulin)、厄洛替尼(erlotinib)、雌莫司汀、依托泊苷、依维莫司、艾沙替康(exatecan)、依昔舒林、弥罗松酚、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶(诸如5-氟尿嘧啶)、亚叶酸、磷雌酚、福莫司汀、呋喹替尼(fruquintinib)、更昔洛韦、吉非替尼(gefitinib)、吉西他滨、吉瑞替尼(gilteritinib)、戈舍瑞林、六甲嘧胺、羟基脲(hydroxycarbamide)、羟基脲(hydroxyurea)、IT-101、依鲁替尼、埃克替尼、伊达比星(idarubicin)、艾代拉里斯(idelalisib)、异环磷酰胺、伊马替尼、irinoimiquimod、伊立替康、伊洛福芬、伊洛替尼(ivosidenib)、伊沙匹隆(ixabepilone)、拉尼喹达(laniquidar)、拉帕替尼、拉罗替尼(larotrectinib)、来那度胺、乐伐替尼、劳拉替尼(lorlatinib)、罗氮芥、勒托替康、马磷酰胺、马索罗酚、氮芥、美法仑、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、甲基强的松龙、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、奈拉滨、来那替尼、尼拉帕尼、尼洛替尼、尼达尼布、奥利默森(oblimersen)、奥拉帕尼、奥希替尼(osimertinib)、奥沙利铂、奈达铂、菲铂、吡铂、PAC-1、紫杉醇、帕博西尼、帕唑帕尼、培美曲塞、培非格司亭、喷司他丁、哌泊溴烷、匹克生琼、普卡霉素、强的松、帕纳替尼、甲苄肼、蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米)、吡咯替尼(pyrotinib)、雷替曲塞、蝴蝶霉素(rebeccamycin)、/>瑞格拉非尼、瑞博西尼(ribociclib)、鲁比替康(rubitecan)、鲁卡帕尼(rucaparib)、鲁索利替尼(ruxolitinib)、SN-38、salinosporamide A、沙铂、西罗莫司、索尼得吉(sonidegib)、索拉非尼(sorafenib)、链脲佐菌素、链脲佐菌素、舒尼替尼、苦马豆素、他拉唑帕尼(Talazoparib)、他立奎达(tariquidar)、紫杉烷、替加福/尿嘧啶、替西罗莫司、替尼泊苷、替莫唑胺、睾内酯、噻替哌、硫鸟嘌呤、拓扑替康、曲贝替定、曲美替尼、维甲酸、三氟尿苷、四硝酸三铂(triplatintetranitrate)、三(2-氯乙基)胺、曲沙他滨、乌拉莫司汀、戊柔比星、凡德他尼(vandetanib)、维莫非尼、维奈托克(ABT-199)、那维托克(ABT-263)、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、维莫德吉、伏立诺他、阿柏西普/>唑喹达等。

在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂与特定类别的化疗剂。在一些实施方案中，阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂是本文所述的多肽(例如，包含SIRPαd1结构域变体和Fc变体的融合多肽；包含SIRPγ变体、SIRPβ1变体或SIRPβ2变体和Fc变体的融合多肽)。例如，在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽(例如融合多肽)与肾上腺抑制剂(包括但不限于本文所述的肾上腺抑制剂)。例如，在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与蒽环类药物(包括但不限于本文所述的蒽环类药物)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与烷化剂(包括但不限于本文所述的烷化剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与雄激素抑制剂(包括但不限于本文所述的雄激素抑制剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与抗代谢物例如嘌呤类似物(包括但不限于本文所述的抗代谢物，例如嘌呤类似物)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与抗肿瘤抗生素(包括但不限于本文所述的抗肿瘤抗生素)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与BLC-2抑制剂(包括但不限于本文所述的BLC-2抑制剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与BTK抑制剂(包括但不限于本文所述的BTK抑制剂。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与CDK 4/6抑制剂(包括但不限于本文所述的CDK 4/6抑制剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与集落刺激因子(包括但不限于本文所述的集落刺激因子)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与皮质类固醇(包括但不限于本文所述的皮质类固醇)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与EGFR抑制剂(包括但不限于本文所述的EGFR抑制剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(包括但不限于本文所述的GnRH激动剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与有丝分裂抑制剂/微管抑制剂(包括但不限于本文所述的有丝分裂抑制剂/微管抑制剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与mTOR激酶抑制剂(包括但不限于本文所述的mTOR激酶抑制剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与蛋白酶体抑制剂(包括但不限于本文所述的蛋白酶体抑制剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与信号转导抑制剂，例如蛋白-酪氨酸激酶抑制剂、PAK4抑制剂、PI3K抑制剂(包括但不限于本文所述的信号转导抑制剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与拓扑异构酶抑制剂(包括但不限于本文所述的拓扑异构酶抑制剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与酪氨酸激酶抑制剂(包括但不限于本文所述的酪氨酸激酶抑制剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与VEGF抑制剂，诸如VEGF1抑制剂、VEGF2抑制剂和/或VEGF3抑制剂(包括但不限于本文所述的VEGF抑制剂。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与调节细胞凋亡的剂，例如通过调节Bcl-2、Mcl1、Bcl-1x等的活性(包括但不限于本文所述的调节细胞凋亡的剂，例如通过调节Bcl-2、Mcl1、Bcl-1x等的活性)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与铂基剂(包括但不限于本文所述的铂基剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与NTRK1、NTRK2和/或NTRK3的抑制剂、ALK抑制剂、ROS抑制剂、FLT3抑制剂、BRAF抑制剂、MEK1和/或MEK2抑制剂、HER2、HER3和/或HER 4抑制剂、RET/PTC抑制剂、BCR-ABL抑制剂、c-KIT抑制剂、PDGFR-α和/或PDGFR-β抑制剂、FGFR1、FGFR2、FGFR3和/或FGFR4抑制剂、Smoothened抑制剂和/或PARP1、PARP2和/或PARP3的抑制剂(包括但不限于本文所述的抑制剂)。在一些实施方案中，抑制剂是反义多核苷酸(诸如siRNA或RNAi)。在一些实施方案中，抑制剂是小分子抑制剂，如下文进一步详细描述的。

在一些实施方案中，化疗剂是小分子抗癌剂(诸如小分子抑制剂)。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽与VEGFR和/或PDGFR小分子抑制剂、小分子EGFR抑制剂、小分子ALK抑制剂、小分子CDK4/6抑制剂、小分子PARP抑制剂、小分子PAK4抑制剂、小分子mTOR抑制剂、小分子KRAS抑制剂、小分子TRK抑制剂、小分子BCL2抑制剂、小分子B-raf抑制剂、小分子IDH抑制剂、小分子PI3K抑制剂、小分子DDR(DNA损伤反应)抑制剂或小分子低甲基化剂。在其他情况下，靶向小分子，例如IDO/TDO抑制剂、AhR抑制剂、精氨酸酶抑制剂、A2a R抑制剂、TLR激动剂、STING激动剂或Rig-1激动剂调节表达CD47的细胞的细胞信号传导途径。

在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用本文所述的多肽(例如，包含SIRPαd1结构域变体和Fc变体的融合多肽)与至少一种、至少两种、至少三种或至少四种化疗剂。在施用两种或更多种化疗剂的一些实施方案中，所述两种或更多种化疗剂来自不同的类别(如上所述)和/或通过不同的作用机制发挥它们的抗癌作用。

关于本文描述的融合多肽的示例性药物组合物和制剂、示例性剂量和示例性施用途径的进一步细节提供于WO 2017/027422和美国专利号10,259,859中，所述专利的内容各自以引用的方式整体并入本文。

包含治疗性抗体的组合疗法和示例性治疗性抗体

在一些实施方案中，本文提供的治疗癌症的方法包括向个体施用有效量的治疗性抗体(例如，至少一种治疗性抗体，诸如至少两种、至少三种或至少四种治疗性抗体)，即与阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα之间的相互作用的剂(例如，本文所述的融合多肽)和本文所述的化疗剂(例如，至少一种化疗剂，诸如至少两种、至少三种或至少四种化疗剂)组合。在一些实施方案中，治疗性抗体与药物缀合(即，抗体-药物缀合物或“ADC”)。

用于本文方法的示例性治疗性抗体(例如，治疗性单克隆抗体)包括但不限于，例如，3F8、8H9、阿巴伏单抗(Abagovomab)、阿昔单抗(Abciximab)、阿比珠单抗(Abituzumab)、阿利鲁单抗(Abrilumab)、阿卡单抗(Actoxumab)、阿达木单抗(Adalimumab)、阿达卡莫单抗(Adecatumumab)、阿杜单抗(Aducanumab)、阿非莫单抗(Afelimomab)、阿芙土珠单抗(Afutuzumab)、培阿珠单抗(Alacizumab pegol)、ALD518、阿仑单抗(Alemtuzumab)、阿妥莫单抗(Alirocumab)、喷替酸阿妥莫单抗(Altumomab pentetate)、阿马昔单抗(Amatuximab)、马安那莫单抗(Anatumomab mafenatox)、雷星-安替单抗(Anetumabravtansine)、阿尼鲁单抗(Anifrolumab)、安芦珠单抗(IMA-638)、阿泊珠单抗(Apolizumab)、阿西莫单抗(Arcitumomab)、阿伐苏单抗(Ascrinvacumab)、阿塞珠单抗(Aselizumab)、阿特珠单抗(Atezolizumab)、阿替奴单抗(Atinumab)、阿特利单抗(Atlizumab)(托珠单抗(tocilizumab))、阿托木单抗(Atorolimumab)、阿维鲁单抗(Avelumab)、巴匹珠单抗(Bapineuzumab)、巴利昔单抗(Basiliximab)、巴维昔单抗(Bavituximab)、贝妥莫单抗(Bectumomab)、贝戈洛单抗(Begelomab)、贝利木单抗(Belimumab)、贝拉珠单抗(Benralizumab)、柏替木单抗(Bertilimumab)、贝索单抗(Besilesomab)、贝伐珠单抗(Bevacizumab)、贝佐洛单抗(Bezlotoxumab)、比西单抗(Biciromab)、双马单抗(Bimagrumab)、贝美珠单抗(Bimekizumab)、莫星-比瓦妥单抗(Bivatuzumab mertansine)、博纳吐单抗(Blinatumomab)、布洛唑单抗(Blosozumab)、伯考赛珠单抗(Bococizumab)、维布妥昔单抗(Brentuximab vedotin)、布里亚明单抗(Briakinumab)、布罗达单抗(Brodalumab)、布洛赛珠单抗(Brolucizumab)、布隆妥珠单抗(Brontictuzumab)、卡比利珠单抗(Cabiralizumab)(FPA008)、卡瑞利珠单抗(Camrelizumab)、卡那奴单抗(Canakinumab)、莫星-坎妥珠单抗(Cantuzumabmertansine)、雷星-坎妥珠单抗(Cantuzumab ravtansine)、卡拉西单抗(Caplacizumab)、卡罗单抗-喷地肽(Capromab pendetide)、卡芦单抗(Carlumab)、卡妥索单抗(Catumaxomab)、cBR96-多柔比星免疫缀合物、CC49、西利珠单抗(Cedelizumab)、培赛妥珠单抗(Certolizumab pegol)、西妥昔单抗(Cetuximab)、Ch.14.18、泊西他组单抗(Citatuzumab bogatox)、西妥木单抗(Cixutumumab)、克拉扎珠单抗(Clazakizumab)、克立昔单抗(Clenoliximab)、泰坦-克利妥珠单抗(Clivatuzumab tetraxetan)、考曲妥珠单抗(Codrituzumab)、雷星-考妥昔单抗(Coltuximab ravtansine)、康妥单抗(Conatumumab)、康昔单抗(Concizumab)、克伦单抗(Crenezumab)、CR6261、达塞珠单抗(Dacetuzumab)、达利珠单抗(Daclizumab)、达妥珠单抗(Dalotuzumab)、培达匹利珠单抗(Dapirolizumabpegol)、达雷木单抗(Daratumumab)、癸曲单抗(Dectrekumab)、地昔单抗(Demcizumab)、玛汀-地宁妥珠单抗(Denintuzumab mafodotin)、地诺单抗(Denosumab)、地洛昔单抗-生物素(Derlotuximab biotin)、地莫单抗(Detumomab)、丁妥昔单抗(Dinutuximab)、地利达莫单抗(Diridavumab)、阿托度单抗(Dorlimomab aritox)、屈西他单抗(Drozitumab)、杜利他单抗(Duligotumab)、杜普单抗(Dupilumab)、杜鲁伐单抗(Durvalumab)、杜昔单抗(Dusigitumab)、依美昔单抗(Ecromeximab)、依库珠单抗(Eculizumab)、埃巴单抗(Edobacomab)、依屈洛单抗(Edrecolomab)、依法珠单抗(Efalizumab)、依芬古单抗(Efungumab)、埃尔德单抗(Eldelumab)、埃格曼图姆单抗(Elgemtumab)、伊洛珠单抗(Elotuzumab)、艾西莫单抗(Elsilimomab)、艾马珠单抗(Emactuzumab)(RG7155)、依米妥珠单抗(Emibetuzumab)、恩伐珠单抗(Enavatuzumab)、维恩诺单抗(Enfortumab vedotin)、培恩莫单抗(Enlimomab 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mertansine)、卢卡珠单抗(Lucatumumab)、培鲁利珠单抗(Lulizumabpegol)、鲁米昔单抗(Lumiliximab)、鲁曲单抗(Lumretuzumab)、MSB0010718C(阿维鲁单抗(avelumab))、马塔单抗(Mapatumumab)、马妥昔单抗(Margetuximab)、马司莫单抗(Maslimomab)、马维里单抗(Mavrilimumab)、马妥单抗(Matuzumab)、MEDI6469、MEDI0680、MEDI6383、美泊利单抗(Mepolizumab)、迈他珠单抗(Metelimumab)、米拉珠单抗(Milatuzumab)、明妥莫单抗(Minretumomab)、米托单抗(Mitumomab)、莫加利单抗(Mogamulizumab)、莫洛莫单抗(Morolimumab)、莫他珠单抗(Motavizumab)、莫昔单抗-帕多毒素(Moxetumomab pasudotox)、穆罗莫纳-CD3(Muromonab-CD3)、塔非那托克-塔芬毒素(Nacolomab tafenatox)、纳霉单抗(Namilumab)、萘妥莫单抗-衣塔芬毒素(Naptumomabestafenatox)、纳妥单抗(Narnatumab)、那他珠单抗(Natalizumab)、奈巴库单抗(Nebacumab)、奈米单抗(Necitumumab)、奈莫珠单抗(Nemolizumab)、奈利莫单抗(Nerelimomab)、奈西伐单抗(Nesvacumab)、尼妥珠单抗(Nimotuzumab)、纳武单抗(Nivolumab)、巯诺莫单抗-美培坦(Nofetumomab merpentan)、奥比妥昔单抗(Obiltoxaximab)、奥匹妥珠单抗(Obinutuzumab)、奥卡鲁单抗(Ocaratuzumab)、奥克里昔单抗(Ocrelizumab)、奥杜莫单抗(Odulimomab)、阿法单抗(Ofatumumab)、奥拉他单抗(Olaratumab)、奥昔单抗(Olokizumab)、奥马珠单抗(Omalizumab)、阿那妥单抗(Onartuzumab)、恩妥昔单抗(Ontuxizumab)、阿昔单抗(Opicinumab)、莫妥组单抗(Oportuzumab 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govitecan)、沙马利单抗(Samalizumab)、SAR650984(伊沙昔单抗(Isatuximab))沙利鲁单抗(Sarilumab)、沙妥单抗-喷地肽(Satumomab pendetide)、塞库单抗(Secukinumab)、塞巴坦单抗(Seribantumab)、塞妥昔单抗(Setoxaximab)、赛韦单抗(Sevirumab)、西布曲单抗(Sibrotuzumab)、SGN-CD19A、SGN-CD33A、西伐单抗(Sifalimumab)、西妥昔单抗(Siltuximab)、西妥珠单抗(Simtuzumab)、信迪利单抗(Sintilimab)、西普利单抗(Siplizumab)、西鲁库单抗(Sirukumab)、维索菲妥单抗(Sofituzumab vedotin)、索冷珠单抗(Solanezumab)、索利单抗(Solitomab)、索普昔单抗(Sonepcizumab)、索妥单抗(Sontuzumab)、丝塔单抗(Stamulumab)、舒乐单抗(Sulesomab)、苏维珠单抗(Suvizumab)、他巴单抗(Tabalumab)、泰坦-他珠单抗(Tacatuzumab tetraxetan)、塔多珠单抗(Tadocizumab)、塔利单抗(Talizumab)、坦纳单抗(Tanezumab)、普利妥单抗-帕普毒素(Taplitumomab paptox)、塔雷克斯顿单抗(Tarextumab)、替非珠单抗(Tefibazumab)、阿替莫单抗(Telimomab aritox)、替纳单抗(Tenatumomab)、替尼昔单抗(Teneliximab)、替普珠单抗(Teplizumab)、四丙珠单抗(Teprotumumab)、司他洛单抗(Tesidolumab)、TGN1412、替西木单抗(Ticilimumab)(曲美木单抗(Tremelimumab))、替拉珠单抗(Tildrakizumab)、替加珠单抗(Tigatuzumab)、TNX-650、托珠单抗(Tocilizumab)(阿特利单抗(Atlizumab))、托拉珠单抗(Toralizumab)、特瑞普利单抗(Toripalimab)、托沙单抗(Tosatoxumab)、托西莫单抗(Tositumomab)、托维妥单抗(Tovetumab)、曲罗芦单抗(Tralokinumab)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、曲妥珠单抗-厄塔毒素(trastuzumab-emtansine)、TRBS07、曲利单抗(Tregalizumab)、曲美木单抗(Tremelimumab)、图卡珠单抗-西莫白介素(Tucotuzumab celmoleukin)、妥韦单抗(Tuvirumab)、乌布妥昔单抗(Ublituximab)、优隆单抗(Ulocuplumab)、乌洛单抗(Urelumab)、乌索单抗(Urtoxazumab)、乌司他单抗(Ustekinumab)、乌托单抗(Utomilumab)(PF-05082566)、维凡多鲁单抗(Vandortuzumab vedotin)、范蒂姆单抗(Vantictumab)、维库珠单抗(Vanucizumab)、伐昔单抗(Vapaliximab)、伐利单抗(Varlilumab)、伐他珠单抗(Vatelizumab)、维多珠单抗(Vedolizumab)、维妥珠单抗(Veltuzumab)、维帕莫单抗(Vepalimomab)、维森单抗(Vesencumab)、维西珠单抗(Visilizumab)、伏罗昔单抗(Volociximab)、珀伽利珠单抗(Vonlerolizumab)(RG7888)、玛汀-沃塞妥单抗(Vorsetuzumab mafodotin)、伏妥单抗(Votumumab)、扎鲁单抗(Zalutumumab)、扎诺米单抗(Zanolimumab)、扎妥昔单抗(Zatuximab)、齐拉明单抗(Ziralimumab)或阿佐莫单抗(Zolimomab aritox)，包括前述任何治疗性抗体的生物类似药。

可以在本文方法中使用的其他示例性治疗性抗体(例如，治疗性单克隆抗体)是以下抗体，包括但不限于，例如，抗CD20抗体、抗EGFR抗体、抗Her2/Neu(ERBB2)抗体、抗EPCAM抗体、抗GL2抗体、抗GD2、抗GD3、抗CD2、抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD I 9、抗CD22、抗CD30、抗CD33、抗CD39、抗CD45、抗CD47、抗CD52、抗CD56、抗CD70、抗CD73、抗CD117、抗SIRPα抗体、抗LILRB1、抗LILRB2、抗LILRB4抗体、抗PD-1抗体(例如，抗PD-1拮抗剂抗体)、抗PD-L1抗体(例如，抗PD-L1拮抗剂抗体)、抗PD-L2抗体或任何设计用于与肿瘤细胞、病毒或细菌感染的细胞、免疫细胞或健康正常细胞或任何种类的细胞因子、趋化因子或激素结合的抗体。

在一些实施方案中，本文方法中使用的治疗性抗体是结合例如CS1/SLAMF7、Trop-2、VWF、波形蛋白、VEGFR2、VEGFR-1、VEGF、VEGF-A、TYRP1(糖蛋白75)、TWEAK受体、MUC1的肿瘤特异性糖基化、肿瘤抗原CTAA16.88、TRAIL-R2、TRAIL-R1、TNF-α、TGF-β、TGFβ2、TGFβ1、TFPI、肌腱蛋白C、TEM1、TAG-72、T细胞受体、STEAP1、1-磷酸鞘氨醇、SOST、SLAMF7、BCL-2、选择素P、SDC1、骨硬化蛋白、RTN4、RON、恒河猴因子、RHD、呼吸道合胞病毒、RANKL、狂犬病病毒糖蛋白、血小板衍生生长因子受体β、磷脂酰丝氨酸、磷酸钠协同转运蛋白、PDGF-Rα、PDCD1、PD-1、PD-L1、PCSK9、oxLDL、OX-40、NRP1、Notch受体4、Notch受体3、Notch受体2、Notch受体1、NOGO-A、NGF、神经凋亡调节蛋白酶1、NCA-90(粒细胞抗原)、NARP-1、N-羟乙酰神经氨酸、肌肉生长抑制素、髓鞘相关糖蛋白、粘蛋白CanAg、MUC1、MSLN、MS4A1、MIF、间皮素、MCP-1、LTA、LOXL2、脂磷壁酸、LINGO-1、LFA-1(CD11a)、Lewis-Y抗原、L-选择素(CD62L)、KIR2D、ITGB2(CD18)、ITGA2、干扰素α/β受体、干扰素受体、干扰素γ诱导蛋白、整合素αvβ3、整合素αIIβ3、整合素α7β7、整合素α5β1、整合素α4β7、整合素α4、胰岛素样生长因子I受体、甲型流感血凝素、ILGF2、IL9、IL6、IL4、IL3 IRA、IL23、ILI 7A、IL-6受体、IL-6、IL-S、IL-4、IL-23、IL-22、IL-I、IL-I 7A、IL-I 7、IL-13、IL-I 2、IL-I、IL 20、IGHE、IgG4、IGF-I、IGF-I受体、IgE Fc区、IFN-γ、IFN-α、ICAM-1(CD54)、人TNF、人分散因子受体激酶、Hsp90、HNGF、HLA-DR、HIV-1、组蛋白复合物、HHGFR、HGF、HER3、HER2、HER2/neu、HER1、乙型肝炎表面抗原、血凝素、GUCY2C、GPNMB、GMCSF受体α链、磷脂酰肌醇聚糖3、GD3神经节苷脂、GD2、神经节苷脂GD2、Frizzled受体、叶酸受体1、叶酸水解酶、纤连蛋白额外结构域-B、纤维蛋白IIβ链、FAP、呼吸道合胞病毒F蛋白、ERBB3、episialin、EpCAM、内毒素、EGFR、EGFL7、大肠杆菌志贺毒素2型、大肠杆菌志贺毒素I型、DRS、DPP4、DLL4、达比加群、巨细胞病毒糖蛋白B、CTLA-4、CSF2、CSF1R、凝集因子A、CLDN18.2、ch4DS、CFD、CEA相关抗原、CEA、CD80、CD79B、CD74、CD73、CD70、CD6、CD56、CD52、CD51、CD5、CD44 v6、CD41、CD40配体、CD40、CD4、CD39、CD38、CD37、CD33、CD30(TNFRSF8)、CD123、CD138、CD3ε、CD3、CD28、CD274、CD27、CD2S(IL-2受体链)、CD23(IgE受体)、CD221、CD22、CD200、CD20、CD2、CD19、CD137、CD154、CD152、CD15、CD147(basigin)、CD140a、CD125、CD11、CD-18、CCR5、CCR4、CCL11(嗜酸性粒细胞趋化因子-I)、心肌肌球蛋白、碳酸酐酶9(CA-IX)、犬IL31、CA-125、C5、C242抗原、C-X-C趋化因子受体4型、β-淀粉样蛋白、BAFF、B7-H3、B淋巴瘤细胞、AOC3(VAP-I)、炭疽毒素、保护性抗原、血管生成素3、血管生成素2、α-甲胎蛋白、AGS-22M6、腺癌抗原、ACVR2B、激活素受体样激酶I、5T4、5AC、4-IBB或1-40-β淀粉样蛋白的抗体。

在一些实施方案中，本文方法中使用的治疗性抗体与癌细胞表达的(例如，在癌细胞表面上表达的)抗原结合。由癌症表达的示例性抗原是本领域已知的并且包括但不限于例如CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD52、CD56、CD70、CD74、CD79b、CD123、CD138、CS1/SLAMF7、Trop-2、5T4、BCMA、粘蛋白1、粘蛋白16、PTK7、PD-L1、STEAP1、内皮素B受体、间皮素、EGFRvIII、ENPP3、SLC44A4、GNMB、nectin 4、NaPi2b、LIV-1A、鸟苷酸环化酶C、DLL3、EGFR、HER2、VEGF、VEGFR、整合素αVβ3、整合素α5β1、MET、IGF1R、TRAILR1、TRAILR2、RANKL、FAP、肌腱蛋白、Le^y、EpCAM、CEA、gpA33、PSMA、TAG72、粘蛋白、CAIX、EPHA3、叶酸受体α、GD2、GD3以及MHC/肽复合物，其包含来自NY-ESO-1/LAGE、SSX-2、MAGE家族蛋白、MAGE-A3、gp100/pmel17、Melan-A/MART1、gp75/TRP1、酪氨酸酶、TRP2、CEA、PSA、TAG-72、未成熟层粘连蛋白受体、MOK/RAGE-1、WT-1、SAP-1、BING-4、EpCAM、MUC1、PRAME、存活素(survivin)、BRCA1、BRCA2、CDK4、CML66、MART-2、p53、Ras、β-连环蛋白、TGF-βRII、HPV E6或HPV E7的肽。例如，在一些实施方案中，组合施用本文所述的多肽与化学治疗剂(例如，至少一种化学治疗剂)和结合CD123(也称为IL-3受体α)的单克隆抗体，诸如塔妥珠单抗(也称为CSL362和JNJ-56022473)。

在一些实施方案中，本文方法中使用的治疗性抗体(例如治疗性单克隆抗体)是结合由NK细胞表达的抗原的抗体。由NK细胞表达的示例性抗原包括但不限于NKR-P1A(KLRB1)、CD94(NKG2A)、KLRG1、KIR2DL5A、KIR2DL5B、KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR2DS2、KIR2DS3、KIR2DS4、KIR2DS5、KIR3DS1、KIR2DS1、CD94(NKG2C/E)、NKG2D、CD160(BY55)、CD16(FcγRIIIA)、NKp46(NCR1)、NKp30(NCR3)、NKp44(NCR2)、DNAM1(CD226)、CRTAM、CD27、NTB-A(SLAMF6)、PSGL1、CD96(触觉)、CD100(SEMA4D)、NKp80(KLRF1、CLEC5C)、SLAMF7(CRACC、CS1、CD319)和CD244(2B4、SLAMF4)。

包含免疫治疗剂的组合疗法和示例性免疫治疗剂

在一些实施方案中，本文提供的治疗癌症的方法包括向个体施用有效量的免疫治疗剂(例如，至少一种免疫治疗剂，诸如至少两种、至少三种或至少四种免疫治疗剂)，即与阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα之间的相互作用的剂(例如，本文所述的多肽)和本文所述的化疗剂(例如，至少一种化疗剂，诸如至少两种、至少三种或至少四种化疗剂)组合。

在一些实施方案中，免疫治疗剂是指靶向免疫系统并促进免疫系统的治疗重定向的任何治疗剂，诸如共刺激途径的调节物、癌症疫苗、重组修饰的免疫细胞等。示例性和非限制性免疫治疗剂描述于下文中。在一些实施方案中，免疫治疗剂是抗体或包含抗体。免疫治疗抗体的示例性靶标是本领域已知的并且包括但不限于BDCA2、BDCA4、ILT7、LILRB1、LILRB2、LILRB3、LILRB4、LILRB5、Siglec-3、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-10、Siglec-15、FGL-1、CD200、CD200R、CSF-1R、CD24、CD40、CD40L、CD163、CD206、DEC205、CD47、CD123、精氨酸酶、IDO、TDO、AhR、EP2、COX-2、CCR2、CCR-7、CXCR1、CX3CR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR7、TGF-βRI、TGF-βRII、c-Kit、CD244、L-选择素/CD62L、CD11b、CD11c、CD68、41BB、CTLA4、PD1、PD-L1、PD-L2、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3、CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM、CCR4、CD25、CD103、KIrg1、Nrp1、CD278、Gpr83、TIGIT、CD154、CD160、TNFR2、PVRIG、DNAM和ICOS。

已批准或处于后期临床试验的免疫治疗剂包括但不限于伊匹木单抗、派姆单抗、纳武单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、杜鲁伐单抗等。在某些实施方案中，组合施用阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂(诸如本文描述的多肽)与PD-L1/PD-1途径的抑制剂例如抗体、小分子或阻断PD-L1和PD-1之间的相互作用(例如，通过与PD-1或PD-L1结合)的多肽。在一些实施方案中，PD-L1/PD-1途径的抑制剂是反义多核苷酸。在一些实施方案中，PD-L1/PD-1途径的抑制剂是抗PD-L1或抗PD-1拮抗剂抗体(例如，本文别处所述的抗PD-1或抗PD-L1拮抗剂抗体)。如本文所证明的，阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂(诸如本文所述的多肽)与PD-L1/PD-1途径抑制剂的组合施用可导致协同抗肿瘤活性。在一些实施方案中，免疫治疗剂是或包含疫苗、溶瘤病毒、过继细胞疗法、细胞因子或小分子免疫治疗剂。此类免疫治疗剂的实例是本领域已知的。例如，过继细胞疗法和治疗剂可包括但不限于嵌合抗原受体T细胞疗法(CAR-T)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、TCR工程化T细胞、TCR工程化NK细胞和巨噬细胞产品。疫苗可包括但不限于多核苷酸疫苗、多肽疫苗或基于细胞的(例如，基于肿瘤或树突细胞的)疫苗。可用于治疗癌症的各种细胞因子是已知的并且包括但不限于IL-2、IL-15、IL-7、IL-10、IL-12、IL21、TNFa、IFN、GM-CSF和工程化细胞因子突变体。小分子免疫治疗剂可包括但不限于IDO/TDO抑制剂、AhR抑制剂、精氨酸酶抑制剂、A2a R抑制剂、TLR激动剂、STING激动剂和Rig-1激动剂。

在一些实施方案中，其中阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂(诸如本文所述的多肽)和化疗剂(例如，至少一种化疗剂)与本文所述的其他剂(例如，治疗性抗体、小分子抑制剂、免疫治疗剂等)组合施用，所述其他剂来自不同的类别和/或通过不同的作用机制发挥其抗癌作用。例如，在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用阻断CD47和SIRPα之间的相互作用的剂(诸如本文所述的多肽)与化疗剂(包括但不限于本文所述的那些)和治疗性抗体(包括但不限于本文所述的那些，例如抗HER2抗体)。在一些实施方案中，组合施用阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂(诸如本文所述的多肽)与化疗剂(包括但不限于本文所述的那些)和小分子抑制剂(包括但不限于不限于本文所述的那些)。其他组合也被预期。

在一些实施方案中，组合施用阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂(诸如本文所述的多肽)与一种或多种剂，所述剂包括但不限于例如止泻剂、止吐剂、镇痛剂、阿片类和/或非甾体抗炎剂。

包含另外的治疗方式的组合疗法

在一些实施方案中，组合施用阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂(诸如本文所述的多肽)与至少一种化疗剂和一种或多种另外的治疗方式。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗方式包括放射疗法(例如，伽马射线、X射线和/或将放射性同位素定向递送至肿瘤细胞、微波、UV辐射或基因疗法。例如，用于基因疗法的治疗性基因包括但不限于细胞增殖诱导剂的反义形式(癌基因)、细胞增殖抑制剂(肿瘤抑制因子)或程序性细胞死亡诱导剂(促凋亡基因)。在一些实施方案中，本文所述的任何一种或多种组合疗法与手术(例如，切除术)联合施用。

示例性疗法组合

在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括向有需要的个体组合施用阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂与曲妥珠单抗和选自以下的一种或多种剂：来那度胺、依鲁替尼、帕博西尼、恩杂鲁胺、培美曲塞、尼洛替尼、阿比特龙、伊马替尼、帕博西尼、厄洛替尼、硼替佐米、恩杂鲁胺、环磷酰胺、卡铂、顺铂、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、阿糖胞苷、吉西他滨、甲氨蝶呤、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、多西他赛、雌莫司汀、紫杉醇、长春花碱、依托泊苷、伊立替康、替尼泊苷、拓扑替康、强的松、甲基强的松龙和地塞米松。在一些实施方案中，阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂是本文所述的多肽(例如，包含SIRPαD1结构域变体和Fc变体的融合多肽)。

在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括组合施用阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂与曲妥珠单抗、雷莫芦单抗和紫杉醇。在一些实施方案中，阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂是本文所述的多肽(例如，包含SIRPαD1结构域变体和Fc变体的融合多肽)。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的(a)包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGF2抗体，和(d)紫杉醇；其中所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列；其中所述Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引，其中所述癌症是胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌，并且其中所述个体已接受过至少一种用于胃癌或GEJ癌的先前治疗。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SEQ ID NO:136或SEQ ID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成二聚体(例如，同源二聚体)。在一些实施方案中，所述胃癌或GEJ癌是HER2过表达(例如，HER2⁺)的胃癌或HER2过表达的GEJ癌。在一些实施方案中，所述个体已接受过抗HER2抗体、抗HER2抗体和氟嘧啶、或抗HE R2抗体和铂基化疗剂的先前治疗。在一些实施方案中，所述个体在使用曲妥珠单抗和含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体在使用曲妥珠单抗和含铂化疗的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体在使用曲妥珠单抗、含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)和含铂化疗的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体未接受过抗CD47剂或抗SIRPα剂的先前治疗。在一些实施方案中，所述抗HER2抗体是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，所述抗VEGF抗体是雷莫芦单抗。在一些实施方案中，包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以下文所述的剂量和频率施用于个体。在一些实施方案中，抗HER2抗体(例如曲妥珠单抗)以下文所述的剂量和频率施用于个体。在一些实施方案中，抗HER2抗体(例如曲妥珠单抗)根据处方标签中所指示的剂量和频率施用于个体。例如，在美国，关于曲妥珠单抗的施用剂量和频率的细节可见于www(dot)accessdata(dot)fda(dot)gov/drugsatfda_docs/label/2010/103792s5250lbl(dot)pdf。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以约10至约60mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以约10至约60mg/kg的剂量每两周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以10mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以15mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以20mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以30mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以40mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以50mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以60mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SI RPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以10mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以15mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以20mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以30mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以40mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以50mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以60mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽包含含有SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的SIRPα变体并且Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的‘EU索引。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SEQ ID NO:136或SEQ ID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成二聚体(例如，同源二聚体)。在一些实施方案中，包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽与(a)抗HER2抗体，(b)抗VEGF2抗体，和(c)紫杉醇组合施用于个体。在一些实施方案中，癌症是胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌。在一些实施方案中，所述个体已接受过至少一种用于胃癌或GEJ癌的先前治疗。在一些实施方案中，所述胃癌或GEJ癌是HER2过表达(例如，HER2⁺)的胃癌或HER2过表达的GEJ癌。在一些实施方案中，所述个体已接受过抗HER2抗体、抗HER2抗体和氟嘧啶、或抗HER2抗体和铂基化疗剂的先前治疗。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和含铂化疗的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)、含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)和含铂化疗的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体未接受过抗CD47剂或抗SIRPα剂的先前治疗。在一些实施方案中，所述抗HER2抗体是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，所述抗VEGF抗体是雷莫芦单抗。在一些实施方案中，抗VEGFR-2抗体(例如雷莫芦单抗)根据处方标签中所指示的剂量和频率施用于个体。例如，在美国，关于雷莫芦单抗的施用剂量和频率的细节可见于www(dot)accessdata(dot)fda(dot)gov/drugsatfda_docs/label/2020/125477s034lbl(dot)pdf。在一些实施方案中，抗HER2抗体(例如曲妥珠单抗)以下文所述的剂量和频率施用于个体。在一些实施方案中，抗HER2抗体(例如曲妥珠单抗)根据处方标签中所指示的剂量和频率施用于个体。例如，在美国，关于曲妥珠单抗的施用剂量和频率的细节可见于www(dot)accessdata(dot)fda(dot)gov/drugsatfda_docs/label/2010/103792s5250lbl(dot)pdf。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以10mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用(例如，第1周期间8mg/kg的初始剂量，然后是第二周期间给予的6mg/kg剂量，和第一次6mg/kg剂量后每三周一次的6mg/kg剂量)。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以10mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每隔一周一次施用(例如，每个28天周期期间的第1和15天)。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以10mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每隔一周一次施用(例如，每个28天周期期间的第1和15天)，和紫杉醇，以80mg/m²的剂量每周一次在每4周周期期间的三周施用(例如，每28天周期期间的第1、8和15天)。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽包含含有SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的SIRPα变体并且Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的‘EU索引。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SEQ ID NO:136或SEQ ID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成二聚体(例如，同源二聚体)。在一些实施方案中，癌症是胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌。在一些实施方案中，所述个体已接受过至少一种用于胃癌或GEJ癌的先前治疗。在一些实施方案中，所述胃癌或GEJ癌是HER2过表达(例如，HER2⁺)的胃癌或HER2过表达的GEJ癌。在一些实施方案中，所述个体已接受过抗HER2抗体、抗HER2抗体和氟嘧啶、或抗HER2抗体和铂基化疗剂的先前治疗。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和含铂化疗的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)、含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)和含铂化疗的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体未接受过抗CD47剂或抗SIRPα剂的先前治疗。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以15mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用(例如，第1周期间8mg/kg的初始剂量，然后是第二周期间给予的6mg/kg剂量，和第一次6mg/kg剂量后每三周一次的6mg/kg剂量)。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以15mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每隔一周一次施用(例如，每个28天周期期间的第1和15天)。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以15mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每隔一周一次(例如，每个28天周期期间的第1和15天)施用，和紫杉醇，以80mg/m²的剂量每周一次在每4周周期期间的三周施用(例如，每28天周期期间的第1、8和15天)。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽包含含有SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的SIRPα变体并且Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的‘EU索引。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SEQ ID NO:136或SEQ ID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成二聚体(例如，同源二聚体)。在一些实施方案中，癌症是胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌。在一些实施方案中，所述个体已接受过至少一种用于胃癌或GEJ癌的先前治疗。在一些实施方案中，所述胃癌或GEJ癌是HER2过表达(例如，HER2⁺)的胃癌或HER2过表达的GEJ癌。在一些实施方案中，所述个体已接受过抗HER2抗体、抗HER2抗体和氟嘧啶、或抗HER2抗体和铂基化疗剂的先前治疗。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和含铂化疗的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)、含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)和含铂化疗的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体未接受过抗CD47剂或抗SIRPα剂的先前治疗。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以30mg/kg的剂量每两周一次施用，组合曲妥珠单抗，以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用(例如，6mg/kg的初始剂量，然后是初始6mg/kg剂量后两周时的4mg/kg剂量，然后是第一次4mg/kg剂量后每两周的4mg/kg剂量)。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以30mg/kg的剂量每两周一次施用，组合曲妥珠单抗，以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用(例如，如本文其他地方所述)，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每两周一次施用(例如，每28天周期的第1和15天)。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以30mg/kg的剂量每两周一次施用，组合曲妥珠单抗，以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用(例如，如本文其他地方所述)，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每两周一次施用(例如，每28天周期的第1和15天)，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量每周一次在每4周周期的三周施用(例如，28天周期的第1、8和15天)。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽包含含有SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的SIRPα变体并且Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的‘EU索引。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SEQ ID NO:136或SEQ ID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成二聚体(例如，同源二聚体)。在一些实施方案中，癌症是胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌。在一些实施方案中，所述个体已接受过至少一种用于胃癌或GEJ癌的先前治疗。在一些实施方案中，所述胃癌或GEJ癌是HER2过表达(例如，HER2⁺)的胃癌或HER2过表达的GEJ癌。在一些实施方案中，所述个体已接受过抗HER2抗体、抗HER2抗体和氟嘧啶、或抗HER2抗体和铂基化疗剂的先前治疗。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和含铂化疗的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体在使用抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)、含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)和含铂化疗的先前治疗期间或之后进展(例如，经历疾病进展)。在一些实施方案中，所述个体未接受过抗CD47剂或抗SIRPα剂的先前治疗。

示例性的癌症

在一些实施方案中，通过本文提供的方法治疗的癌症是乳腺癌、肺癌、肺腺癌、鳞状细胞肺癌、小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、头颈癌、间皮瘤、脑癌、脑肿瘤、腹部癌、结肠癌、结直肠癌、食道癌、咽旁癌、胃肠道癌、神经胶质瘤、肝癌、胃癌、口腔癌、舌癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、卵巢癌、肾癌、膀胱癌、肾盂癌、胰腺癌、视网膜母细胞瘤、宫颈癌、子宫癌、维尔姆斯瘤、多发性骨髓瘤、皮肤癌、淋巴瘤、白血病、血癌、甲状腺癌、骨癌、腺样囊性肿瘤、软骨肉瘤、胰岛细胞肿瘤、神经内分泌肿瘤、前列腺癌、胶质母细胞瘤、子宫内膜癌(endometrial carcinoma)、子宫内膜癌(endometrial cancer)、平滑肌肉瘤、胆囊癌、肝细胞癌、黑色素瘤或实体瘤。

在一些实施方案中，通过本文提供的方法治疗的癌症是胃癌。在一些实施方案中，通过本文提供的方法治疗的癌症是胃腺癌。在一些实施方案中，通过本文提供的方法治疗的癌症是胃食管连接部腺癌。在一些实施方案中，通过本文提供的方法治疗的癌症是HER2过表达的胃食管连接部腺癌。

治疗实体瘤的方法

在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如，人类个体)的实体瘤的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂和(b)铂基化疗剂。在一些实施方案中，实体瘤是结肠癌(colon cancer)(例如结肠癌(colon carcinoma))、肺癌、头颈癌、食道癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、宫颈癌、睾丸癌、脑瘤、间皮瘤或神经母细胞瘤。在一些实施方案中，铂基化疗剂是卡铂、顺铂、奥沙利铂、奈达铂、四硝酸三铂、菲铂、吡铂和/或沙铂。在一些实施方案中，铂基化疗剂是顺铂。在一些实施方案中，剂是包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽(例如，融合多肽)。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SIRPαD1结构域变体，所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引。在一些实施方案中，施用至个体的多肽(例如融合多肽)包含SEQ ID NO:136或SEQID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成同源二聚体。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)和铂基化疗剂(例如顺铂)同时、并行或依次施用。

铂剂(如卡铂、顺铂、奥沙利铂、奈达铂、四硝酸三铂、菲铂、吡铂和沙铂)是广泛使用的抗肿瘤药物，其可引起DNA交联为单加合物、链间交联物、链内交联物或DNA蛋白交联物。铂剂通常作用于鸟嘌呤的相邻N-7位，形成1、2链内交联物(Poklar等人(1996).Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93(15):7606–11；Rudd等人(1995).CancerChemother.Pharmacol.35(4):323–6)。产生的交联抑制癌细胞中的DNA修复和/或DNA合成。

顺铂是用于本文所述方法的示例性铂配位化合物。顺铂的化学名为二氨二氯合铂，并且顺铂的结构式如下：

顺铂是一种无机水溶性铂络合物，分子式为Pt(NH₃)₂Cl₂，分子量为300.046。经历水解后，它与DNA反应产生链内和链间交联物。这些交联物似乎损害了DNA的复制和转录。顺铂的细胞毒性与细胞周期中G2期的细胞阻滞相关。顺铂，已分配CAS登记号为15663-27-1，可作为CDDP、CISPLAN、CI SPLAT、PLATIKEM、PLATIONCO、PRACTICIS、PLATICIS、BL ASTOLEM、CISMAX、CISPLAN、CISPLATINUM、CISTEEN、DUPLAT、KEMOPLAT、ONCOPLATIN-AQ、PLATINEX、PLATIN、TEVAPLATIN等商购获得。有关顺铂制备、配药、剂量和施用时间表的完整信息可参见当地包装插页(对于美国，参见例如，www(dot)accessdata(dot)fda(dot)gov/drugsatfda_docs/label/2011/018057s080lbl(dot)pdf和www(dot)accessdata(dot)fda(dot)gov/drugsatfda_docs/label/2015/018057s083lbl(dot)pdf)。在一些实施方案中，根据当地包装插页中推荐的剂量和频率施用顺铂。

卡铂是用于本文所述方法的另一种示例性铂配位化合物。卡铂的化学名为[1,1环丁烷-二羧酸(2-)-0,0]-二氨合铂,(SP-4-2)，并且卡铂的结构式如下：

卡铂是一种水溶性铂络合物，分子式为C₆H₁₂N₂O₄Pt，分子量为373.26。卡铂已分配CAS登记号为41575-94-4，并且其作用机制与顺铂相似。卡铂通常比顺铂在处方中更普遍。卡铂可作为等商购获得。有关卡铂制备、配药、剂量和施用时间表的完整信息可参见当地包装插页(对于美国，参见例如，www(dot)accessdata(dot)fda(dot)gov/drugsatfda_docs/label/2010/020452s005lbl(dot)pdf和www(dot)accessdata.fda(dot)gov/drugsatfda_docs/label/2012/077139Orig1s016lbl(dot)pdf)。在一些实施方案中，根据当地包装插页中推荐的剂量和频率施用卡铂。

在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如，人类个体)的实体瘤的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体和(c)抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，抗HER2抗体是曲妥珠单抗(CAS登记号180288-69-1)。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗(CAS登记号1380723-44-3)、阿维鲁单抗(CAS登记号1537032-82-8)或杜鲁伐单抗(CAS登记号1428935-60-7)。在一些实施方案中，剂是包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽(例如，融合多肽)。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SIRPαD1结构域变体，所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引。在一些实施方案中，施用至个体的多肽(例如融合多肽)包含SEQ IDNO:136或SEQ ID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成同源二聚体。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)、抗HER2抗体、抗PD-L1抗体(例如抗PD-L1拮抗剂抗体)同时、并行或依次施用。在一些实施方案中，所述实体瘤是结肠癌、肺癌、头颈癌、食管癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、宫颈癌、睾丸癌、子宫内膜癌、肝癌、胃癌、胃食管连接部癌、脑瘤、间皮瘤或神经母细胞瘤。在一些实施方案中，所述实体瘤是HER2⁺实体瘤。在一些实施方案中，所述实体瘤是结肠癌(例如，HER2⁺结肠癌)。

治疗胃癌(GC)或胃食管连接部(GEJ)癌的方法

在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇。在一些实施方案中，抗HER2抗体是曲妥珠单抗(CAS登记号180288-69-1)。在一些实施方案中，抗VEGFR2抗体是雷莫芦单抗(CAS登记号947687-13-0)。在一些实施方案中，剂是包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽(例如，融合多肽)。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SIRPαD1结构域变体，所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引。在一些实施方案中，施用至个体的多肽(例如融合多肽)包含SEQ ID NO:136或SEQ ID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成二聚体(例如，同源二聚体)。在一些实施方案中，多肽(例如，融合多肽)、抗HER2抗体、抗VEGFR2抗体和紫杉醇同时、并行或依次施用。在一些实施方案中，将多肽(例如融合多肽)以10mg/kg每周一次或15mg/kg每周一次或30mg/kg每两周一次的剂量施用至个体。在一些实施方案中，接受治疗的个体患有胃癌或GEJ腺癌。在一些实施方案中，接受治疗的个体患有HER2⁺胃癌或HER2⁺GEJ癌(例如，HER2过表达的胃癌或GEJ癌)。在一些实施方案中，HER2⁺胃癌或HER2⁺GEJ癌是晚期和/或转移性的。在一些实施方案中，接受治疗的个体患有在包含抗HER2抗体(例如曲妥珠单抗)的先前治疗期间或之后进展的胃癌或GEJ癌。在一些实施方案中，接受治疗的个体患有在包含抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和氟嘧啶(例如，氟尿嘧啶，也称为5-氟尿嘧啶)的先前治疗期间或之后进展的胃癌或GEJ癌。在一些实施方案中，接受治疗的个体患有在包含氟嘧啶(例如，氟尿嘧啶)的先前治疗期间或之后进展的胃癌或GEJ癌。在一些实施方案中，接受治疗的个体患有在包含铂基化疗剂(例如，卡铂或顺铂)的先前治疗期间或之后进展的胃癌或GEJ癌。在一些实施方案中，接受治疗的个体患有在包含抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和铂基化疗剂(例如，卡铂或顺铂)的先前治疗期间或之后进展的胃癌或GEJ癌。在一些实施方案中，接受治疗的个体患有在包含抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和/或氟嘧啶(例如，氟尿嘧啶)和/或铂基化疗剂(例如，卡铂或顺铂)的先前治疗期间或之后进展的胃癌或GEJ癌(例如，HER2⁺胃癌或GEJ癌)。在一些实施方案中，接受治疗的个体患有在包含抗HER2抗体(例如，曲妥珠单抗)和/或氟嘧啶(例如，氟尿嘧啶)的先前治疗期间或之后进展的胃癌或GEJ癌(例如，HER2⁺胃癌或GEJ癌)。在一些实施方案中，接受治疗的个体患有在使用铂基化疗剂(例如，卡铂或顺铂)的先前治疗期间或之后进展的胃癌或GEJ癌(例如，HER2⁺胃癌或GEJ癌)。在一些实施方案中，个体在使用抗HER2抗体、抗HER2抗体和氟嘧啶(例如，氟尿嘧啶)、抗HER2抗体和铂基化疗剂(例如，卡铂或顺铂)、或铂基化疗剂(例如，卡铂或顺铂)的先前治疗中失败(例如，在之后复发或没有反应)。在一些实施方案中，氟嘧啶是氟尿嘧啶(也称为5-氟尿嘧啶)。在一些实施方案中，接受治疗的个体已经历过用于胃癌或GEJ癌的先前的含有抗VEGFR2抗体的治疗。在一些实施方案中，先前的含有抗VEGFR2抗体的治疗是包含雷莫芦单抗的治疗。在一些实施方案中，接受治疗的个体未经历过用于胃癌或GEJ癌的先前的含有抗VEGFR2抗体的治疗(例如，包含雷莫芦单抗的治疗)。在一些实施方案中，接受治疗的个体已经历过至少一种、至少两种、至少三种或至少四种用于胃癌或GEJ癌的先前治疗。在一些实施方案中，用多肽、抗HER2抗体、抗VEGFR2抗体和紫杉醇治疗不会导致副作用。在一些实施方案中，用多肽、抗HER2抗体、抗VEGFR2抗体和紫杉醇治疗仅导致低级别的副作用。

在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗PD-1抗体(例如，抗PD-1拮抗剂抗体)，(c)抗HER2抗体，(d)5-氟尿嘧啶和(e)铂基化疗剂。在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗PD-1抗体(例如，抗PD-1拮抗剂抗体)，(c)抗HER2抗体，(d)卡培他滨和(e)铂基化疗剂。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是派姆单抗(CAS登记号1374853-91-4)。在一些实施方案中，抗HER2抗体是曲妥珠单抗(CAS登记号180288-69-1)。在一些实施方案中，铂基化疗剂是顺铂。在一些实施方案中，剂是包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽(例如，融合多肽)。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SIRPαD1结构域变体，所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引。在一些实施方案中，施用至个体的多肽(例如融合多肽)包含SEQ ID NO:136或SEQ ID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成二聚体(例如，同源二聚体)。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)、抗PD-1抗体、抗HER2抗体、5-氟尿嘧啶和铂基化疗剂同时、并行或依次施用。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)、抗PD-1抗体、抗HER2抗体、卡培他滨和铂基化疗剂同时、并行或依次施用。在一些实施方案中，接受治疗的个体患有HER2过表达的胃癌或HER2过表达的GEJ癌。在一些实施方案中，胃癌或GEJ癌是晚期和/或转移性的。在一些实施方案中，个体未接受过用于胃癌或GEJ癌的先前治疗。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以约10至约60mg/kg之间的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以约10至约60mg/kg之间的剂量每两周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以10mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以15mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以20mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以30mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以40mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以45mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以50mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以60mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以10mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以15mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以20mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以30mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以40mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以45mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以50mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以60mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽例如以本文所述的剂量和施用频率中的任一者施用，组合曲妥珠单抗，以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用(例如，如本文其他地方所述)，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每两周一次施用，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量在28天周期的第1、8和15天施用。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽多肽，以10mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用(例如，第1周期间8mg/kg的初始剂量，然后是第二周期间给予的6mg/kg剂量，和第一次6mg/kg剂量后每三周一次的6mg/kg剂量)。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以10mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量在每四周的第1和15天施用。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽多肽，以10mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量在每四周的第1和15天施用，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量在每四周的第1、8和15天施用。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以15mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以15mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量在每四周的第1和15天施用。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽多肽，以15mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量在每四周的第1和15天施用，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量在每四周的第1、8和15天施用。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体癌症的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以30mg/kg的剂量每两周一次施用，组合曲妥珠单抗，以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用(例如，6mg/kg的初始剂量，然后是初始6mg/kg剂量后两周时的4mg/kg剂量，然后是第一次4mg/kg剂量后每两周的4mg/kg剂量)，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每两周一次施用，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量在28天周期的第1、8和15天施用。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃腺癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以30mg/kg的剂量每两周一次施用，组合曲妥珠单抗，以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每两周一次施用，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量在28天周期的第1、8和15天施用。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃食管连接部腺癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以30mg/kg的剂量每两周一次施用，组合曲妥珠单抗，以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每两周一次施用，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量在28天周期的第1、8和15天施用。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃食管连接部癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以约10至约60mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以约10至约60mg/kg的剂量每两周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以10mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以15mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以20mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以30mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以40mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以45mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以50mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以60mg/kg的剂量每周一次(qw)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以10mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以15mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以20mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以30mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以40mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以45mg/kg的剂量每两周一次施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以50mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。在一些实施方案中，所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以60mg/kg的剂量每2周一次(q2w)施用。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃食管连接部癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以10mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃食管连接部癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以10mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量在每四周的第1和15天施用。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃食管连接部癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽多肽，以10mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量在每四周的第1和15天施用，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量在每四周的第1、8和15天施用。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃食管连接部癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以15mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃食管连接部癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以15mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量在每四周的第1和15天施用。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃食管连接部癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽多肽，以15mg/kg的剂量每周一次施用，组合曲妥珠单抗，以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用，雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量在每四周的第1和15天施用，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量在每四周的第1、8和15天施用。

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃食管连接部癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以30mg/kg的剂量每两周一次施用，组合曲妥珠单抗，以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每两周一次施用，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量在28天周期的第1、8和15天施用。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃食管连接部癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以30mg/kg的剂量每两周一次施用，组合曲妥珠单抗，以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用(例如，6mg/kg的初始剂量，然后是初始6mg/kg剂量后两周时的4mg/kg剂量，然后是第一次4mg/kg剂量后每两周的4mg/kg剂量)，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每两周一次施用，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量在28天周期的第1、8和15天施用。在一些实施方案中，提供了一种治疗个体胃食管连接部癌的方法，其包括向个体施用包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，以30mg/kg的剂量每两周一次施用，组合曲妥珠单抗，以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用(例如，6mg/kg的初始剂量，然后是初始6mg/kg剂量后两周时的4mg/kg剂量，然后是第一次4mg/kg剂量后每两周的4mg/kg剂量)，和雷莫芦单抗，以8mg/kg的剂量每两周一次施用，和紫杉醇，以80mg/m2的剂量在28天周期的第1、8和15天施用。

在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或GEJ癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇，其中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于50％。在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇，其中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于55％。在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇，其中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于60％。在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇，其中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于65％。在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇，其中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于70％。在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇，其中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于75％。在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇，其中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于80％。在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇，其中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于85％。在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇，其中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于90％。在一些实施方案中，提供了治疗个体(例如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGFR2抗体，和(d)紫杉醇，其中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于95％。在一些实施方案中，总反应率(ORR)是实现对治疗的部分反应(PR)或完全反应(CR)的患者群体的百分比。在一些实施方案中，根据RECIST标准(实体瘤反应评估标准(Response Evalua tion Criteria in Solid Tumors))确定PR和CR。关于RECIST的进一步细节提供于例如https://ctep(dot)cancer(dot)gov/protocolDevelopment/docs/recist_guideline.pdf或https://recist(dot)eortc(dot)org。

包含抗TROP2抗体的组合癌症疗法

在一些实施方案中，提供了一种治疗个体(例如，人类个体)的癌症的方法，所述方法包括向个体施用有效量的(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂和(b)抗TROP2抗体。在一些实施方案中，抗TROP2抗体是RS7，其描述于美国专利号10,179,171中，其内容整体并入本文。在一些实施方案中，抗TROP2抗体与药物缀合(即，抗体-药物缀合物或“ADC”)。在一些实施方案中，抗TROP2 ADC是戈沙妥珠单抗(也称为hRS7-SN38或IMMU-132)，其描述于US2017/0281791中，其内容以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，剂是包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽(例如，融合多肽)。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SIRPαD1结构域变体，所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ IDNO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引。在一些实施方案中，施用至个体的多肽(例如融合多肽)包含SEQ IDNO:136或SEQ ID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成同源二聚体。在一些实施方案中，多肽(例如，融合多肽)和抗TROP2抗体同时、并行或依次施用。在一些实施方案中，所述癌症是实体瘤、胃癌、鼻咽癌、胆囊癌、宫颈癌、结外NK/T细胞淋巴瘤、肺癌、喉鳞状细胞癌、结肠癌、肝门部胆管癌、胰腺癌、口腔鳞状细胞癌、子宫内膜样子宫内膜癌或卵巢癌。在一些实施方案中，癌症以TROP2的过表达为特征。在一些实施方案中，癌症不以TROP2的过表达为特征。

增加靶细胞吞噬作用的方法

在一些实施方案中，提供了增加靶细胞(例如，癌细胞)的吞噬作用的方法，所述方法包括使靶细胞与(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂和(b)抗TROP2抗体接触。在一些实施方案中，抗TROP2抗体是RS7，其描述于美国专利号10,179,171中，其内容整体并入本文。在一些实施方案中，抗TROP2抗体与药物缀合(即，抗体-药物缀合物或“ADC”)。在一些实施方案中，抗TROP2 ADC是戈沙妥珠单抗(也称为hRS7-SN38或IMMU-132)，其描述于US2017/0281791中，其内容以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，剂是包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽(例如，融合多肽)。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SIRPαD1结构域变体，所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引。在一些实施方案中，施用至个体的多肽(例如融合多肽)包含SEQ ID NO:136或SEQID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成同源二聚体。在一些实施方案中，所述靶细胞是癌细胞。在一些实施方案中，癌细胞是实体瘤细胞、胃癌细胞、鼻咽癌细胞、胆囊癌细胞、宫颈癌细胞、结外NK/T细胞淋巴瘤细胞、肺癌细胞、喉鳞状细胞癌细胞、结肠癌细胞、肝门部胆管癌细胞、胰腺癌细胞、口腔鳞状细胞癌细胞、子宫内膜样子宫内膜癌细胞或卵巢癌细胞。

在一些实施方案中，提供了增加靶细胞吞噬作用的方法，所述方法包括使靶细胞与(a)阻断CD47(例如，hCD47)和SIRPα(例如，hSIRPα)之间相互作用的剂和(b)能够增强吞噬作用的第二剂接触。在一些实施方案中，阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂是包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽(例如，融合多肽)。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)包含SIRPαD1结构域变体，所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引。在一些实施方案中，施用至个体的多肽(例如融合多肽)包含SEQ ID NO:136或SEQ ID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽(例如融合多肽)形成同源二聚体。在一些实施方案中，第二剂增强吞噬作用，例如通过阻断“不要吃我”信号。示例性剂包括但不限于，例如，抗LILRB2抗体、抗LILRB1抗体、抗SIGLEC-10抗体、抗CD24抗体、抗SIRPα抗体、抗PD1抗体(例如，抗PD1拮抗剂抗体)和抗PD-L1抗体(例如，抗PD-L1拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，第二剂增强吞噬作用，例如，通过增强“吃我”信号。示例性剂包括但不限于例如BTK激活剂、TLR激动剂、促进Mac-1和SLAMF7之间相互作用的剂以及促进钙网蛋白和LRP1之间相互作用的剂。增强吞噬作用的另外的示例性剂包括但不限于例如调节足体粘附的剂、调节核纤层蛋白A表达水平的剂、SHP-1磷酸酶活性的激活剂和肌球蛋白IIa组装的激活剂。在一些实施方案中，所述方法包括使靶细胞与(a)包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽(例如，融合多肽)和(b)抗LILBR2抗体、抗CD24抗体或抗SIGLEC-10抗体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使靶细胞与(a)融合多肽和(b)BTK激活剂接触。在一些实施方案中，所述方法包括使靶细胞与(a)融合多肽和(b)TLR激动剂接触。

在一些实施方案中，所述方法包括使靶细胞与(a)包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽(例如，融合多肽)和(b)能够增强吞噬作用的两种或更多种剂(例如，包括但不限于本文所述的两种或更多种剂)接触。在一些实施方案中，所述方法包括使靶细胞与(a)包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽(例如，融合多肽)，(b)抗LILBR2抗体、抗CD24抗体或抗SIGLEC-10抗体，和(c)抗PD1抗体(例如，抗PD-1拮抗剂抗体)或抗PD-L1抗体(例如，抗PD-L1拮抗剂抗体)接触。在一些实施方案中，所述方法包括使靶细胞与(a)融合多肽、(b)抗LILBR2抗体和(c)抗PD1抗体(例如，抗PD-1拮抗剂抗体)接触。在一些实施方案中，所述方法包括使靶细胞与(a)融合多肽、(b)抗LILBR2抗体和(c)抗PD-L1抗体(例如抗PD-L1拮抗剂抗体)接触。

在一些实施方案中，接触在体外进行。在一些实施方案中，接触在体内进行。在一些实施方案中，靶细胞是癌细胞。在一些实施方案中，使靶细胞与(a)包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽和(b)与一种或多种能够增强吞噬作用的剂接触，与使靶细胞与一种或多种能够增强吞噬作用的剂(即，在不存在包含SIRPαD1结构域变体(例如，本文所述的SIRPαD1结构域变体)和Fc结构域变体(例如，本文所述的Fc结构域变体)的多肽的情况下)接触相比，使靶细胞吞噬作用增加至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或大于99％中的任何一者。

试剂盒和制品

在本发明的另一实施方案中，提供了一种包含多肽(例如，本文所述的融合多肽)的制品或试剂盒，所述多肽包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体。在一些实施方案中，SIRPαD1结构域变体包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85。在一些实施方案中，Fc结构域变体是(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引。在一些实施方案中，所述Fc结构域变体包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽包含SEQ IDNO:135或SEQ ID NO:136的氨基酸序列。在一些实施方案中，试剂盒或制品根据本文提供的治疗方法使用。

在一些实施方案中，试剂盒或制品还包含抗HER2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗VEGFR2抗体(例如雷莫芦单抗)和紫杉醇。在一些实施方案中，试剂盒包含包装插页或标签，其具有例如根据本文所述方法，使用多肽(例如融合多肽)与抗HER2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗VEGFR2抗体(例如雷莫芦单抗)和紫杉醇组合治疗个体(诸如人类个体)的胃癌或胃食管连接部(GEJ)癌或延缓其进展的说明书。

在一些实施方案中，多肽(例如，融合多肽)和一种或多种另外的抗癌剂(例如，如以上实施方案中概述的)一起提供在试剂盒中。在一些实施方案中，多肽(例如，融合多肽)和一种或多种另外的抗癌剂提供在同一容器或分开的容器中。合适的容器包括例如瓶、小瓶、袋和注射器。容器可以由各种材料形成，诸如玻璃、塑料(诸如聚氯乙烯或聚烯烃)或金属合金(诸如不锈钢或哈氏合金)。在一些实施方案中，容器包含制剂以及保持在容器上或与容器相关联可指示使用说明的标签。制品或试剂盒还可包括从商业和用户观点来看期望的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针、注射器和具有使用说明书的包装插页。在一些实施方案中，制品还包含一种或多种其他剂(例如化疗剂、抗肿瘤剂、治疗性抗体等)。用于一种或多种剂的合适容器包括例如瓶、小瓶、袋和注射器。

本说明书被认为足以使本领域技术人员能够实施本发明。除了在此示出和描述的那些之外，根据前面的描述，本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见，并且落入所附权利要求的范围内。本文引用的所有出版物、专利和专利申请出于所有目的通过引用整体并入本文。

实施例

通过参考以下实施例将更充分地理解本公开。然而，这些实施例不应被解释为限制本公开的范围。应当理解，本文描述的实施例和实施方案仅用于说明目的，并且将向本领域的技术人员暗示根据这些实施例和实施方案的各种修改或改变，并将被包括在本申请的精神和范围内以及所附权利要求的范围内。

实施例1：药物A与曲妥珠单抗和抗PD-L1抗体组合在结肠癌模型中的抗肿瘤活性。

MC38小鼠/人HER2表达细胞(“MC38 m/h HER2细胞”)是通过用编码小鼠和人HER2跨膜和细胞外结构域的嵌合体的慢病毒载体感染MC38鼠结肠腺癌细胞而产生的。MC38 m/hHER2细胞在37℃、5％CO2孵育箱中维持在补充有10％FBS、1％青霉素-链霉素、1％GlutaMAX和1mM丙酮酸钠(Thermo Fisher Scientific 11360070)的DMEM(Thermo FisherScientific 11965092)中。所有组织培养均在无菌条件下进行。

在植入之前，生成每个细胞系的主细胞库，以确保后续实验中使用的细胞具有相同的传代数。收获细胞并在50mL冷PBS(Life Technologies 10010072)中洗涤两次。对于MC38 m/h HER2细胞系，最后一次洗涤后，将细胞以5x10⁶个细胞/mL重悬于PBS或RPMI中。对于MC38 m/h HER2，将100μL细胞悬液皮下注射到C57BL/6小鼠的右侧。当MC38 m/h HER2肿瘤的肿瘤大小平均达到65-69mm³时，将动物随机分成8组，每组10只小鼠。每组被分配到以下表A中列出的治疗组。

表A.治疗组-MC38 m/h肿瘤模型

药物A是包含以高亲和力结合hCD47的SIRPα变体和非活性Fc区(即，不展现ADCC效应子功能的Fc区)的示例性融合蛋白。

使用Mitutoyo数显卡尺(Mitutoyo America,Aurora,Illinois)评估肿瘤体积(mm³)。肿瘤体积和体重每周记录两次或三次。根据IACUC指南对肿瘤体积超过2000mm³或体重减轻超过20％的小鼠实施安乐死。计算肿瘤体积为([长度x{宽度x宽度}]x0.5＝体积，单位为mm³)。使用GraphPad Prism软件进行统计分析和计算p值。

具有来自人HER2的细胞外结构域和来自小鼠HER2的细胞内结构域的嵌合小鼠/人HER2在MC38结肠细胞上表达，以允许评估曲妥珠单抗对MC38鼠肿瘤的活性。如图1中所示，曲妥珠单抗单药治疗对肿瘤生长没有影响，而药物A单药治疗和抗PD-L1抗体单药治疗均对肿瘤生长有中度影响。与曲妥珠单抗单药治疗、药物A单药治疗和抗PD-L1单药治疗相比，使用药物A+抗PD-L1抗体双联或曲妥珠单抗+抗PD-L1抗体双联治疗显示出改善的肿瘤生长抑制。与每个双联治疗相比，使用药物A+抗PD-L1+曲妥珠单抗三联组合治疗显示出改善的肿瘤抑制作用。与药物A+抗PD-L1抗体双联或曲妥珠单抗+抗PD-L1抗体双联相比，三联组合在抑制肿瘤生长方面的作用在第19天和第22天(即最后一剂后3-6天)最明显。在图1中第19天和第22天用“*”指示。到第26天，与药物A+抗PD-L1抗体双联或曲妥珠单抗+抗PD-L1抗体双联相比，三联组合在减少肿瘤生长方面的作用稍微好一点。在MC38 m/h HER2结肠肿瘤模型的任何治疗队列中均未观察到副作用。

实例2A：评估药物A组合疗法对人类患者的抗肿瘤活性的示例性临床试验

胃腺癌或胃食管连接部(GEJ)腺癌中的药物A、曲妥珠单抗、雷莫芦单抗和紫杉醇

进行了一项临床试验，以评估药物A、曲妥珠单抗、雷莫芦单抗和紫杉醇的组合在患有HER2⁺过表达的晚期或转移性胃腺癌或GEJ腺癌的患者中的安全性、耐受性和功效，所述疾病已经在使用曲妥珠单抗和含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)的先前治疗期间或之后；在使用曲妥珠单抗和含铂化疗的先前治疗期间或之后；或在使用曲妥珠单抗、含氟嘧啶的化疗(例如，氟尿嘧啶)和含铂化疗的先前治疗期间或之后进展。入组试验的患者适合于使用曲妥珠单抗治疗。患者未接受过抗CD47剂或抗SIRPα剂的先前治疗。

实施例2B：来自示例性临床试验的初步安全性结果

一名患有未经治疗的晚期头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的患者接受了药物A(10mg/kg IV QW)、派姆单抗(200mg IV Q3W)、5-氟尿嘧啶(第1、2、3、4天每天1,000mg/m² Q3W x6)和卡铂(AUC＝第1天5mg/ml/min，Q3W x6)的治疗。(在扩展研究中，顺铂(100mg/m²Q3Wx6)或卡铂(AUC＝第1天5mg/ml/min，Q3W x 6)与药物A、派姆单抗和氟尿嘧啶组合施用。接受卡铂的患者在扩展研究期间继续接受卡铂；接受顺铂的患者在扩展研究期间继续接受顺铂)。

在使用曲妥珠单抗、氟尿嘧啶和铂剂的先前治疗后进展的3名HER2阳性胃癌/胃食管癌患者，接受了药物A(10mg/kg IV QW)、曲妥珠单抗(8mg/kg IV初始剂量，然后是6mg/kgQ3W)、雷莫芦单抗(8mg/kg，第1天和第15天Q4W)和紫杉醇(80mg/m2，第1、8和15天Q4W)的治疗。

在使用曲妥珠单抗、氟尿嘧啶和铂剂的先前治疗后进展的另外3名HER2阳性胃癌/胃食管癌患者，接受了药物A(15mg/kg IV QW)、曲妥珠单抗(8mg/kg IV初始剂量，然后是6mg/kg Q3W)、雷莫芦单抗(8mg/kg，第1天和第15天Q4W)和紫杉醇(80mg/m2，第1、8和15天Q4W)的治疗。

初步结果表明，当药物A在上述讨论的组合方案中以10mg/kg或15mg/kg QW的剂量施用时，耐受性良好，迄今为止没有剂量限制性毒性。3名(50％)被施用药物A+曲妥珠单抗+雷莫芦单抗+紫杉醇的患者以及没有(0％)被施用药物A+派姆单抗+氟尿嘧啶+卡铂治疗的患者经历了治疗相关不良事件(TRAE)。接受药物A+派姆单抗+氟尿嘧啶+卡铂或药物A+曲妥珠单抗+雷莫芦单抗+紫杉醇的患者没有剂量限制性毒性。以下3个队列中也没有发生两名或更多名患者的治疗相关不良事件(TRAE)：

药物A(10mg/kg QW)+派姆单抗+氟尿嘧啶+卡铂(N＝1)

药物A(10mg/kg QW)+曲妥珠单抗+雷莫芦单抗+紫杉醇(N＝3)

药物A(15mg/kg QW)+曲妥珠单抗+雷莫芦单抗+紫杉醇(N＝3)

并且最后，在用药物A+派姆单抗+氟尿嘧啶+卡铂或药物A+曲妥珠单抗+雷莫芦单抗+紫杉醇治疗的患者中，也没有报告3级或以上的治疗相关不良事件(TRAE≥3级)。

实施例2C：来自实施例2A中描述的示例性临床试验的初步功效结果

使用RECIST v1.1标准，基于研究者评估的反应，未经治疗的晚期头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)患者以实施例2B中描述的剂量和施用方案接受药物A、派姆单抗、5-氟尿嘧啶和铂剂治疗实现了部分反应(PR)。

在接受药物A(10mg/kg QW)、曲妥珠单抗、雷莫芦单抗和紫杉醇治疗(参见实施例2B)的三名HER2阳性胃癌/胃食管癌患者中，有两名尚不可评估。使用RECIST v1.1标准，基于研究者评估的反应，一名患者实现了PR。

在接受药物A(15mg/kg QW)、曲妥珠单抗、雷莫芦单抗和紫杉醇治疗(参见实施例2B)的三名HER2阳性胃癌/胃食管癌患者中，有两名尚不可评估。使用RECIST v1.1标准，基于研究者评估的反应，一名患者实现了PR。观察到较低的血细胞减少率。

药物A与派姆单抗、5-氟尿嘧啶和铂剂组合在治疗晚期1LHNSCC(即，作为对未接受过用于HNSCC的先前治疗的晚期HNSCC患者的首次治疗)中显示出临床活性。药物A与曲妥珠单抗、雷莫芦单抗和紫杉醇组合在治疗晚期≥2L胃癌/胃食管癌(即，作为对接受过用于胃癌或GEJ癌的至少一种先前治疗的患者的治疗)中显示出临床活性。

药效学分析结果表明，当与含化疗的方案组合时，在整个药物A给药间隔期间，保持几乎完全的CD47靶点占位(也称为受体占位)。

实施例2D：来自实施例2A中描述的示例性临床试验的附加结果

CD47是一种被肿瘤上调以逃避抗癌免疫反应的髓系检查点。药物A是一种示例性的高亲和力CD47阻断融合蛋白，其具有设计用于安全地增强抗癌治疗剂的非活性Fc区(Kauder等人(2018)PLoS ONE.13(8):e0201832；Chow等人(2020)Journal of ClinicalOncology.38:15_增刊,3056-3056；和Lakhani等人(2021)Lancet Oncology.22(12):1740-1751)。在患有晚期HER2阳性胃癌(GC)或头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的患者中评估了药物A与标准化疗和抗体方案的组合。

方法

先前治疗过晚期HER2阳性GC的患者接受了药物A(A)10mg/kg QW或15mg/kg QW与曲妥珠单抗(T)+雷莫芦单抗(ram)+紫杉醇(pac)组合作为二线或后续线治疗。GC患者在先前的氟嘧啶治疗(或含氟嘧啶的治疗)期间或之后进展。包括了在使用曲妥珠单抗和/或铂基化疗剂的先前治疗期间或之后进展的GC患者。未经治疗的晚期HNSCC患者接受了药物A(A)10mg/kg QW或15mg/kg QW与派姆单抗(P)+5FU+铂(顺铂或卡铂)组合作为一线治疗。主要终点是剂量限制性毒性(DLT)。在所有患者中评估肿瘤反应、药代动力学(PK)和药效学(PD)标志物。

结果

本研究入组了55名患者。患者基线特征如表B中所示:

表B：基线特征

1名≥2L GC的患者接受了A+T+ram+pac并进行了安全性评估。未报告剂量限制性毒性(DLT)，并且药物A的最大施用剂量为15mg/kg QW。在经历任何不良事件的9名患者中，8名患者报告了治疗相关不良事件(TRAE)。最常见的TRAE是低度腹泻、疲劳、瘙痒/荨麻疹和皮疹(各自n＝21％)。≥3级严重度的TRAE为低频率。在用A+T+ram+pac治疗的GC患者中，没有报告治疗相关SAE。在接受15mg/kg qw药物A+曲妥珠单抗+雷莫芦单抗+紫杉醇的11名GC患者中，7名表现出部分反应，3名表现出疾病稳定，以及1名表现出疾病进展。在接受10mg/kg qw药物A+曲妥珠单抗+雷莫芦单抗+紫杉醇的3名患者中，2名表现出部分反应，以及1名表现出疾病稳定。

如上所述，三名先前未经治疗的HNSCC患者被施用了A+P+5FU+铂。没有报告DLT。三名患者经历的任何不良事件(AE)，均不是治疗相关的。接受15mg/kg qw药物A+派姆单抗+5-氟尿嘧啶+铂基化疗剂的HNSCC患者是未经CPI治疗的(naive)并表现出部分反应。在接受10mg/kg qw药物A+派姆单抗+5-氟尿嘧啶+铂基化疗剂的三名患者中，全部都是未经CPI治疗的。一名患者表现出完全反应，一名患者表现出部分反应，一名患者表现出疾病进展。

药物A化疗组合在可评估反应的患者中的临床活性总结在下表C中：

表C：对药物A化疗组合的反应

初始时药物A组合的PK和CD47靶点占位与单药施用相似。当与含化疗的方案组合时，在整个药物A给药间隔期间，保持几乎完全(80％-100％)的CD47靶点占位。在药物A与含化疗的方案的组合之后，循环免疫细胞分布(CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD19⁺B细胞和CD16⁺CD56⁺NK细胞)总体上无变化。无论有无化疗，与派姆单抗或曲妥珠单抗组合治疗后的药物A的PK具有可比性。

结论

初步数据表明，药物A具有良好的耐受性，可以安全地与所研究的抗癌抗体+多药化疗方案组合，没有达到最大耐受剂量。在组合中药物A的最大施用剂量为15mg/kg QW。

药物A在≥2L HER2阳性GC患者中与曲妥珠单抗和雷莫芦单抗+紫杉醇组合中表现出的初始ORR为64％，这与在先前含曲妥珠单抗的方案后疾病进展的患者中的雷莫芦单抗+紫杉醇临床经验相媲美。

药物A与派姆单抗+5FU+铂组合时在未接受过用于晚期HNSCC的先前治疗的患者中表现出初始抗癌活性，包括完全和部分客观反应。

初步的药代动力学和药效学分析表明，组合配偶体对具有完全CD47受体占位的药物A暴露水平没有影响。

实施例2E：阻断CD47和SIRPα之间相互作用的剂即药物A与曲妥珠单抗、雷莫芦单抗和紫杉醇组合在患有二线HER2阳性晚期胃癌或胃食管(GC)癌的患者中的1期研究

本文提供的数据进一步支持了药物A作为单药以及与确立的抗癌剂即抗HER2抗体曲妥珠单抗、抗VEGFR2抗体雷莫芦单抗和紫杉醇组合的用途。将药物A以10mg/kg(mpk)QW或15mg/kg(mpk)QW的剂量与曲妥珠单抗、雷莫芦单抗和紫杉醇组合施用至患者，所述患者患有HER2过表达晚期或转移性胃癌(GC)或胃食管连接部(GEJ)腺癌，其在先前的HER2导向剂和含氟嘧啶的治疗或先前的含铂的化疗治疗之时或之后已进展。患者已接受过一种或两种用于GC或GEJ腺癌的先前治疗。在组合中药物A的最大施用剂量为15mg/kg QW。在接受药物A+曲妥珠单抗+雷莫芦单抗+紫杉醇组合治疗的患者中，没有关于研究死亡的剂量限制性毒性，或药物A相关的严重不良事件(SAE)。

简单地说，图2A和2B提供了药物A与(a)抗HER2抗体(曲妥珠单抗)、(b)抗VEGFR抗体(雷莫芦单抗)和(c)紫杉醇的组合治疗的1期临床研究结果。图2A提供了每个研究参与者的基线可测量病灶最佳变化％的图。3/18名患者实现了疾病稳定(SD)，12/18名患者实现了部分反应(PR)，并且1名患者实现了完全反应(CR)。图2B提供了示出每个研究参与者的基线可测量病灶随时间的变化％的图。

以下表D示出了药物A组合在患有≥2L HER2阳性GC或GEJ腺癌的患者中的临床活性的进一步分析。该表显示，接受药物A+曲妥珠单抗+雷莫芦单抗+紫杉醇治疗的患者中的总反应率(ORR)为约72％。

初步数据表明，药物A可以安全地与曲妥珠单抗、雷莫芦单抗和紫杉醇联合使用，没有达到最大耐受剂量。

初步的PK/PD分析表明，组合配偶体对具有完全CD47受体占位的药物A暴露水平没有影响。

药物A与曲妥珠单抗、雷莫芦单抗和紫杉醇组合表明，在先前含曲妥珠单抗的方案后已进展的≥2L HER2阳性GC或GEJ腺癌患者中，初始ORR为72.2％，12个月的估计总生存率(OS)为75.8％。这与RAINBOW(Wilke等人,Lancet 2014年10月)和DESTINY-01(参见Enhertu包装插页，和Shitara等人,NEJM 2020年6月18日)的临床试验历史对照相比具有优势。

先前曲妥珠单抗治疗后肿瘤已进展的患者接受药物A+曲妥珠单抗的最新数据表明，临床活性超出单独曲妥珠单抗或化疗时的预期。

实施例3：药物A在患有晚期HER2过表达胃腺癌/胃食管连接部腺癌的患者中的2/3期研究

本文所述的数据支持了测试本文所述组合疗法的功效的进一步试验。这是一项随机的2期(开放标签)/3期(双盲)、国际多中心研究，患者患有转移性HER2过表达胃腺癌/GEJ腺癌，其在先前的HER2导向治疗和含氟嘧啶或含铂的化疗之时或之后已进展，患者适合化疗(二线或三线)。预期将有大约450名成年患者入组这两个阶段的研究。

条件：胃癌；胃食管连接部腺癌；胃腺癌

实验：第2期-A组：药物A-30mg/kg Q2W IV，曲妥珠单抗(初始剂量为6mg/kg，随后为4mg/kg)Q2W IV，雷莫芦单抗8mg/kg Q2W IV，紫杉醇80mg/m2 IV，28天周期的第1、8和15天。活性对照：第2期-B组：曲妥珠单抗(初始剂量为6mg/kg，随后为4mg/kg)Q2W IV，雷莫芦单抗8mg/kg Q2W IV，紫杉醇80mg/m2 IV，28天周期的第1、8和15天。

实验：第3期-A组：药物A-30mg/kg Q2W IV，曲妥珠单抗(初始剂量为6mg/kg，随后为4mg/kg)Q2W IV，雷莫芦单抗8mg/kg Q2W IV，紫杉醇80mg/m2 IV，28天周期的第1、8和15天。活性对照：第3期-B组：雷莫芦单抗8mg/kg Q2W IV，紫杉醇80mg/m2 IV，28天周期的第1、8和15天。

结果测量：主要结果测量对于第2期包括按照RECIST 1.1的客观反应率，对于第3期为总生存率。

以下是本研究的资格标准：资格最小年龄：18岁；最大年龄：无。性别：所有；接受健康志愿者：否。

纳入标准：HER2过表达晚期或转移性胃腺癌或胃食管连接部(GEJ)腺癌，其在先前的HER2导向剂和含氟嘧啶或含铂的化疗(二线或三线)之时或之后已进展；足够的骨髓功能；足够的肾肝功能；足够的表现状态。

排除标准：患者患有已知的有症状的CNS转移或需要类固醇的柔脑膜疾病，先前用任何抗CD47或抗SIRPα剂治疗，先前用雷莫芦单抗治疗。

实施例4：药物B与抗小鼠VEGFR-2、紫杉醇和曲妥珠单抗组合在HER2⁺结直肠癌同源移植鼠模型中的效果

概述

药物A的鼠替代物即药物B包含对鼠CD47(“mCD47”)表现出高亲和力的SIRPα变体和非活性Fc结构域(即，不表现出效应子功能的Fc结构域)。在表达小鼠和人HER2的嵌合小鼠/人HER2 CT26(CT26 m:h HER2)鼠结直肠癌模型中，将药物B以与曲妥珠单抗(即，抗人HER2抗体)、抗小鼠VEGFR-2(即，鼠雷莫芦单抗替代物)和紫杉醇的四联组合治疗进行评估。曲妥珠单抗、紫杉醇和抗小鼠VEGFR-2的三联治疗表现出边际肿瘤生长抑制。然而，药物B添加到三联方案显著增强了肿瘤生长抑制并延长了生存期。

还评估了药物B在不存在曲妥珠单抗时的治疗效果。在CT26鼠结直肠癌模型中药物B与紫杉醇和抗小鼠VEGFR-2双联治疗的组合与紫杉醇和抗小鼠VEGFR-2治疗相比，没有显示出抗肿瘤活性增强。

这些数据表明，在HER2表达肿瘤模型中，用药物B抑制CD47-SIRPα轴增强了曲妥珠单抗、抗小鼠VEGFR-2和紫杉醇治疗的抗肿瘤功效。在没有曲妥珠单抗的情况下，药物B不增强紫杉醇和抗小鼠VEGFR-2双联治疗的抗肿瘤活性。

药物A被证明是先天免疫和适应性免疫的桥梁，以抗原特异性的方式减少免疫抑制和激活适应性免疫反应。在检查点抑制剂敏感的同源移植鼠癌症模型(即，使用鼠CT26结肠癌细胞系和鼠MC38结肠腺癌细胞系)和检查点抑制剂抗性同源移植鼠癌症模型(即，使用鼠4T1乳腺癌细胞系)两者中，药物A治疗与抗PD-1和抗PD-L1抗体组合使用，导致了增加的抗肿瘤反应、显著的肿瘤生长抑制和延长的生存期。参见Kauder等人(2018)PLoSOne.2018；13(8):e0201832。

在HER2阳性胃/胃食管连接部(G/GEJ)癌中，通过使用曲妥珠单抗特异性地靶向HER2抗原，同时通过其活性Fc IgG1结构域与巨噬细胞上的FcγR接合，提供了必要的促吞噬信号。这种选择性的促吞噬信号结合药物A对抗吞噬髓系检查点信号的阻断，使巨噬细胞的G/GEJ癌特异性ADCP活性最大化。通过提供对抗吞噬CD47-SIRPα相互作用的阻断结合由曲妥珠单抗提供的肿瘤靶向和巨噬细胞FcγR接合，组合形式的药物A，即使在曲妥珠单抗已被证明具有最小活性的临床环境中也能提供抗肿瘤活性，诸如在曲妥珠单抗治疗时已进展的疾病中在第二线环境中用曲妥珠单抗和紫杉醇对HER2阳性胃癌的治疗中(T-ACT试验；Makiyama等人(2020)Clin Oncol.8(17):1919-1927)。

研究目的

进行本实施例的实验是为了在同源移植鼠结直肠癌模型中，在曲妥珠单抗存在或不存在的情况下，对药物A的鼠替代物即药物B与紫杉醇和抗小鼠VEGFR-2组合的体内抗肿瘤活性进行表征。

材料和方法

本实施例中使用的试剂包括下表E中列出的试剂：

表E.试剂

体内研究动物

BALB/c购自Charles River Laboratories International(Hollister,CA)。所有动物按照IACUC指南圈养在无病原体的设施中。所有研究使用的动物为6-8周龄。

细胞系

CT26 m:h HER2由用接枝了曲妥珠单抗表位胞外结构域的表达鼠HER2的慢病毒转导CT26(ATCC CRL-2638)产生。

在37℃、5％ CO2孵育箱中，在由补充了10％胎牛血清(FBS)(Millipore TMS-013B)、1％青霉素-链霉素(Thermo Fisher Scientific 15140163)和1％ GlutaMAX(Thermo Fisher Scientific 35050061)的RPMI-1640(Thermo Fisher Scientific11875119)培养基组成的完全RPMI-1640培养基中培养CT26和CT26 m:h HER2。

小鼠皮下肿瘤模型

所有组织培养均在无菌条件下进行。收获CT26和CT26 m:h HER2细胞并在50mL冷PBS(Thermo Fisher Scientific 10010072)洗涤。最后一次洗涤后，将细胞以20x10⁶细胞/mL的CT26或CT26 m:h HER2重悬于无血清RPMI-1640中。将100mL细胞悬液皮下注射到BALB/c小鼠的右侧。

在CT26肿瘤模型中，当肿瘤平均达到47-85mm³时，将动物随机分成8只小鼠的组，并且开始给药。所有治疗剂均腹膜内(IP)施用。紫杉醇在方案的其余部分前1天以20mg/kg施用，每5天总计三次剂量。药物B以30mg/kg施用，间隔5天，5次。抗小鼠VEGFR-2以40mg/kg施用，每2-3天，5次。

在CT26 m:h HER2肿瘤模型中，当肿瘤平均达到45-73mm³时，将动物随机分成10只小鼠的组，并且开始给药。所有治疗剂均IP施用。紫杉醇在方案的其余部分前1天以20mg/kg施用，每3天总计三次剂量。药物B以30mg/kg施用，间隔5天，4次。抗小鼠VEGFR-2以40mg/kg施用，间隔4天，5次。曲妥珠单抗以30mg/kg施用，间隔5天，4次。

使用Mitutoyo数显卡尺(Mitutoyo America,Aurora,Illinois)评估肿瘤体积(mm³)。肿瘤体积和体重每周记录1-3次。计算肿瘤体积为([长度x{宽度x宽度}]x0.5＝体积，单位为mm³)。肿瘤体积使用学生t检验计算P值，并且通过Prism 9软件(GraphPad)使用Log-rank(Mantel-Cox)检验来计算生存期。根据IACUC指南对肿瘤体积超过2000mm³和体重减轻超过20％的小鼠实施安乐死。

结果和讨论

在CT26同源移植肿瘤模型中药物B与抗小鼠VEGFR-2和紫杉醇组合与抗小鼠 VEGFR-2+紫杉醇双联相比不增强抗肿瘤活性

在CT26结肠癌肿瘤模型中，使用20mh/kg紫杉醇和40mg/kg抗小鼠VEGFR-2的双联方案治疗的动物表现出次优的肿瘤生长抑制。如图3所示，包含20mg/kg紫杉醇、40mg/kg抗小鼠VEGFR-2和30mg/kg药物B的三联组合与单独的紫杉醇和抗小鼠VEGFR-2两联方案相比，没有抑制肿瘤生长。

在CT26 m:h HER2表达结肠癌肿瘤模型中药物B添加到曲妥珠单抗、抗小鼠VEGFR- 2和紫杉醇三联与三联相比增强抗肿瘤反应

在CT26 m:h HER2表达结肠癌肿瘤模型中，用30mg/kg曲妥珠单抗、20mg/kg紫杉醇和40mg/kg抗小鼠VEGFR-2的三联方案治疗的动物表现出边际肿瘤生长抑制。30mg/kg药物B添加到曲妥珠单抗+紫杉醇+抗小鼠VEGFR-2三联与不存在药物B的三联相比显著增强了肿瘤生长抑制(第26天非配对t检验，p<0.0022)。第26天，四联队列的10只动物中有3只表现出完全肿瘤根除。在三联或PBS队列中没有观察到肿瘤根除。参见图4A，其示出了每队列n＝10只小鼠的肿瘤生长±SEM。另外，药物B与曲妥珠单抗、抗小鼠VEGFR-2和紫杉醇三联方案组合与单独的三联或PBS队列相比显著增加了生存期。(Log-rank(Mantel-Cox)检验，p<0.0001)。参见图4B。

这些结果证明，在CT26 m:h HER2表达结肠癌肿瘤模型中，药物B与曲妥珠单抗、紫杉醇和抗小鼠VEGFR-2组合在所治疗动物的子集中显著增加了抗小鼠反应，增强了肿瘤生长抑制从而产生完全肿瘤根除，并且延长了生存期。

结论

药物B与紫杉醇和抗小鼠VEGFR2组合(即，没有曲妥珠单抗)的抗肿瘤效果在CT26同源移植小鼠肿瘤模型中进行评估。药物B+紫杉醇+抗小鼠VEGFR-2三联治疗与紫杉醇和抗小鼠VEGFR-2双联治疗相比未显示增强的抗肿瘤活性。

药物B与曲妥珠单抗、紫杉醇和抗小鼠VEGFR2组合的抗肿瘤效果在CT26 m:h HER2表达结肠癌肿瘤模型中进行评估。四联组合与曲妥珠单抗、紫杉醇和抗小鼠VEGFR2三联相比显著增加了肿瘤生长抑制，在所治疗动物的子集中产生了完全肿瘤根除和延长的生存期。曲妥珠单抗、紫杉醇和抗小鼠VEGFR-2三联与PBS对照相比，未显示出明显的肿瘤生长抑制作用。

实施例3和4的参考文献

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提供前述实施例仅用于说明目的，并不旨在以任何方式限制本发明的范围。除了在此示出和描述的那些之外，根据前面的描述，本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见，并且落入所附权利要求的范围内。

序列表

<110> ALX肿瘤生物技术公司

<120> 用于治疗癌症的组合疗法

<130> 75797-20016.40

<140> 尚未分配

<141> 同时随同提交

<150> US 63/188,388

<151> 2021-05-13

<150> US 63/193,581

<151> 2021-05-26

<160> 224

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 119

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 1

Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 2

<211> 118

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 2

Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Ile Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 3

<400> 3

000

<210> 4

<400> 4

000

<210> 5

<400> 5

000

<210> 6

<400> 6

000

<210> 7

<400> 7

000

<210> 8

<400> 8

000

<210> 9

<400> 9

000

<210> 10

<400> 10

000

<210> 11

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体(VARIANT)

<222> 3

<223> Xaa = E或G

<220>

<221> 变体

<222> 12

<223> Xaa = S或F

<220>

<221> 变体

<222> 14

<223> Xaa = L或S

<220>

<221> 变体

<222> 20

<223> Xaa = T或S

<220>

<221> 变体

<222> 22

<223> Xaa = T或I

<220>

<221> 变体

<222> 24

<223> Xaa = R, H,或L

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A或V

<220>

<221> 变体

<222> 45

<223> Xaa = G或A

<220>

<221> 变体

<222> 65

<223> Xaa = D或E

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = L或S

<220>

<221> 变体

<222> 70

<223> Xaa = N或E或D

<220>

<221> 变体

<222> 75

<223> Xaa = S或P

<220>

<221> 变体

<222> 77

<223> Xaa = R或S

<220>

<221> 变体

<222> 79

<223> Xaa = G或S

<220>

<221> 变体

<222> 99

<223> Xaa = P或不存在

<220>

<221> 变体

<222> 100

<223> Xaa = D或P

<220>

<221> 变体

<222> 102

<223> Xaa = V或T

<220>

<221> 变体

<222> 116

<223> Xaa = A或G

<400> 11

Glu Glu Xaa Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Xaa Val Xaa Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Xaa Ala Xaa Leu Xaa Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Ile Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Xaa Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Xaa Xaa Thr Lys Arg Xaa Asn Met Asp Phe Xaa Ile Xaa Ile Xaa Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Xaa Xaa Asp Xaa Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Xaa Lys Pro Ser

115

<210> 12

<400> 12

000

<210> 13

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 4

<223> Xaa = L, I, V

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, L, I

<220>

<221> 变体

<222> 21

<223> Xaa = A, V

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A, I, L

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, T, S, F

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, V, L

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 54

<223> Xaa = E, Q

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P, R

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = L, T, G

<220>

<221> 变体

<222> 68

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V, I

<220>

<221> 变体

<222> 94

<223> Xaa = F, L, V

<220>

<221> 变体

<222> 104

<223> Xaa = F, V

<400> 13

Glu Glu Glu Xaa Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Xaa Thr Leu Arg Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Xaa Thr Xaa Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Xaa Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Xaa Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 14

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 4

<223> Xaa = L, I, V

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, L, I

<220>

<221> 变体

<222> 21

<223> Xaa = A, V

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = V, I, L

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, T, S, F

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, V, L

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 54

<223> Xaa = E, Q

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P, R

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = S, T, G

<220>

<221> 变体

<222> 68

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V, I

<220>

<221> 变体

<222> 94

<223> Xaa = F, L, V

<220>

<221> 变体

<222> 103

<223> Xaa = F, V

<400> 14

Glu Glu Glu Xaa Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Xaa Ile Leu His Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Xaa Thr Xaa Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Xaa Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Xaa Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 15

<400> 15

000

<210> 16

<400> 16

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<400> 17

000

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<400> 18

000

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<400> 19

000

<210> 20

<400> 20

000

<210> 21

<400> 21

000

<210> 22

<400> 22

000

<210> 23

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

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<220>

<221> 变体

<222> 4

<223> Xaa = L, I, V

<220>

<221> 变体

<222> 6

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<220>

<221> 变体

<222> 12

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<220>

<221> 变体

<222> 14

<223> Xaa = L, S

<220>

<221> 变体

<222> 20

<223> Xaa = S, T

<220>

<221> 变体

<222> 21

<223> Xaa = A, V

<220>

<221> 变体

<222> 22

<223> Xaa = I, T

<220>

<221> 变体

<222> 24

<223> Xaa = H, R

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A, V, I, L

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, T, S, F

<220>

<221> 变体

<222> 45

<223> Xaa = A, G

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, V, L

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 54

<223> Xaa = E, Q

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P, R

<220>

<221> 变体

<222> 65

<223> Xaa = D, E

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = S, L, T, G

<220>

<221> 变体

<222> 68

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 70

<223> Xaa = E, D

<220>

<221> 变体

<222> 75

<223> Xaa = S, P

<220>

<221> 变体

<222> 77

<223> Xaa = S, R

<220>

<221> 变体

<222> 79

<223> Xaa = S, G

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V, I

<220>

<221> 变体

<222> 94

<223> Xaa = F, L, V

<220>

<221> 变体

<222> 101

<223> Xaa = D或不存在

<220>

<221> 变体

<222> 102

<223> Xaa = T, V

<220>

<221> 变体

<222> 104

<223> Xaa = F, V

<220>

<221> 变体

<222> 116

<223> Xaa = A, G

<400> 23

Glu Glu Xaa Xaa Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Xaa Val Xaa Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Xaa Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Xaa Xaa Thr Xaa Arg Xaa Asn Met Asp Phe Xaa Ile Xaa Ile Xaa Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Xaa Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Xaa Xaa Glu Xaa Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Xaa Lys Pro Ser

115

<210> 24

<211> 102

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 24

Ala Pro Val Val Ser Gly Pro Ala Ala Arg Ala Thr Pro Gln His Thr

1 5 10 15

Val Ser Phe Thr Cys Glu Ser His Gly Phe Ser Pro Arg Asp Ile Thr

20 25 30

Leu Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu Leu Ser Asp Phe Gln Thr Asn

35 40 45

Val Asp Pro Val Gly Glu Ser Val Ser Tyr Ser Ile His Ser Thr Ala

50 55 60

Lys Val Val Leu Thr Arg Glu Asp Val His Ser Gln Val Ile Cys Glu

65 70 75 80

Val Ala His Val Thr Leu Gln Gly Asp Pro Leu Arg Gly Thr Ala Asn

85 90 95

Leu Ser Glu Thr Ile Arg

100

<210> 25

<211> 99

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 25

Val Pro Pro Thr Leu Glu Val Thr Gln Gln Pro Val Arg Ala Glu Asn

1 5 10 15

Gln Val Asn Val Thr Cys Gln Val Arg Lys Phe Tyr Pro Gln Arg Leu

20 25 30

Gln Leu Thr Trp Leu Glu Asn Gly Asn Val Ser Arg Thr Glu Thr Ala

35 40 45

Ser Thr Val Thr Glu Asn Lys Asp Gly Thr Tyr Asn Trp Met Ser Trp

50 55 60

Leu Leu Val Asn Val Ser Ala His Arg Asp Asp Val Lys Leu Thr Cys

65 70 75 80

Gln Val Glu His Asp Gly Gln Pro Ala Val Ser Lys Ser His Asp Leu

85 90 95

Lys Val Ser

<210> 26

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 26

Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Ile Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Thr Thr Arg Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Val Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 27

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 27

Glu Glu Glu Val Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Leu Thr Ser Leu Ile Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Gly Thr Arg Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 28

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 28

Glu Glu Glu Val Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Val Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Thr Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Thr Thr Arg Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Leu Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 29

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 29

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Ser Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Gly Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Leu Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 30

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 30

Glu Glu Glu Ile Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Val Ile Ile His Cys Thr Val Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Arg Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Gly Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Val Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Val Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 31

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 31

Glu Glu Glu Val Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ile Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Arg Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Gly Thr Arg Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Leu Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 32

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 32

Glu Glu Glu Val Gln Leu Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Gly Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Val Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 33

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 33

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 34

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 34

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 35

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 35

Glu Glu Glu Val Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Lys Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Ile Ser

50 55 60

Glu Thr Thr Arg Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 36

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 36

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Thr Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Gly Thr Arg Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Val Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 37

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 4

<223> Xaa = L, I, V

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, L, I

<220>

<221> 变体

<222> 21

<223> Xaa = A, V

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A, I, L

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, T, S, F

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, V, L

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 54

<223> Xaa = E, Q

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P, R

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = L, T, G

<220>

<221> 变体

<222> 68

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = N, A, C, D, E, F, G, H, I, K, L,

M, P, Q, R, S, T, V, W, Y

<220>

<221> 变体

<222> 83

<223> Xaa = P, A, C, D, E, F, G, H, I, K, L,

M, N, Q, R, S, T, V, W, Y

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V, I

<220>

<221> 变体

<222> 94

<223> Xaa = F, L, V

<220>

<221> 变体

<222> 104

<223> Xaa = F, V

<400> 37

Glu Glu Glu Xaa Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Xaa Thr Leu Arg Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Xaa Thr Xaa Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Xaa Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Xaa Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Xaa Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 38

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 4

<223> Xaa = L, I, V

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, L, I

<220>

<221> 变体

<222> 21

<223> Xaa = A, V

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = V, I, L

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, T, S, F

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, V, L

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 54

<223> Xaa = E, Q

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P, R

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = S, T, G

<220>

<221> 变体

<222> 68

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = N, A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, Y

<220>

<221> 变体

<222> 83

<223> Xaa = P, A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W, Y

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V, I

<220>

<221> 变体

<222> 94

<223> Xaa = F, L, V

<220>

<221> 变体

<222> 103

<223> Xaa = F, V

<400> 38

Glu Glu Glu Xaa Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Xaa Ile Leu His Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Xaa Thr Xaa Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Xaa Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Xaa Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Xaa Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 39

<400> 39

000

<210> 40

<400> 40

000

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<400> 41

000

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<400> 42

000

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<400> 43

000

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<400> 44

000

<210> 45

<400> 45

000

<210> 46

<400> 46

000

<210> 47

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 3

<223> Xaa = E, G

<220>

<221> 变体

<222> 4

<223> Xaa = L, I, V

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, L, I

<220>

<221> 变体

<222> 12

<223> Xaa = S, F

<220>

<221> 变体

<222> 14

<223> Xaa = L, S

<220>

<221> 变体

<222> 20

<223> Xaa = S, T

<220>

<221> 变体

<222> 21

<223> Xaa = A, V

<220>

<221> 变体

<222> 22

<223> Xaa = I, T

<220>

<221> 变体

<222> 24

<223> Xaa = H, R, L

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A, V, I, L

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, T, S, F

<220>

<221> 变体

<222> 45

<223> Xaa = A, G

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, V, L

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 54

<223> Xaa = E, Q

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P, R

<220>

<221> 变体

<222> 65

<223> Xaa = D, E

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = S, L, T, G

<220>

<221> 变体

<222> 68

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 70

<223> Xaa = E, N

<220>

<221> 变体

<222> 75

<223> Xaa = S, P

<220>

<221> 变体

<222> 77

<223> Xaa = S, R

<220>

<221> 变体

<222> 79

<223> Xaa = S, G

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = 任何氨基酸

<220>

<221> 变体

<222> 83

<223> Xaa = 任何氨基酸

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V, I

<220>

<221> 变体

<222> 94

<223> Xaa = F, L, V

<220>

<221> 变体

<222> 101

<223> Xaa = D或不存在

<220>

<221> 变体

<222> 102

<223> Xaa = T, V

<220>

<221> 变体

<222> 104

<223> Xaa = F, V

<220>

<221> 变体

<222> 116

<223> Xaa = A, G

<400> 47

Glu Glu Xaa Xaa Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Xaa Val Xaa Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Xaa Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Xaa Xaa Thr Xaa Arg Xaa Asn Met Asp Phe Xaa Ile Xaa Ile Xaa Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Xaa Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Xaa Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Xaa Xaa Glu Xaa Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Xaa Lys Pro Ser

115

<210> 48

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, I

<220>

<221> 变体

<222> 14

<223> Xaa = L, S

<220>

<221> 变体

<222> 20

<223> Xaa = T, S

<220>

<221> 变体

<222> 22

<223> Xaa = T, I

<220>

<221> 变体

<222> 24

<223> Xaa = R, H

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A, V, I

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, R, Y, K, F

<220>

<221> 变体

<222> 45

<223> Xaa = G, A

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, V

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 54

<223> Xaa = E, D, Q

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P

<220>

<221> 变体

<222> 65

<223> Xaa = D, E

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = S, L, T

<220>

<221> 变体

<222> 70

<223> Xaa = N, E

<220>

<221> 变体

<222> 77

<223> Xaa = R, S

<220>

<221> 变体

<222> 79

<223> Xaa = G, S

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = N, A

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V, I

<220>

<221> 变体

<222> 98

<223> Xaa = S, I, M

<220>

<221> 变体

<222> 99

<223> Xaa = P或不存在

<220>

<221> 变体

<222> 100

<223> Xaa = D, P

<220>

<221> 变体

<222> 102

<223> Xaa = V, T

<400> 48

Glu Glu Glu Leu Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Xaa Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Xaa Ala Xaa Leu Xaa Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Xaa Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Xaa Xaa Thr Lys Arg Xaa Asn Met Asp Phe Ser Ile Xaa Ile Xaa Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 49

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, I, L

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A, I, V, L

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, F, S, T

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, V, L

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 54

<223> Xaa = E, Q

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P, R

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = L, T, S, G

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = A

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V, I

<400> 49

Glu Glu Glu Leu Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Xaa Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 50

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, I

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = V, I

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, F

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, V

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 54

<223> Xaa = E, Q

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = S, T

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = N, A

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V, I

<400> 50

Glu Glu Glu Leu Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Xaa Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 51

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, I

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A, I

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, F

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, V

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = L, T

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = N, A

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V, I

<400> 51

Glu Glu Glu Leu Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Glu Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Xaa Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 52

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, L, I

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A, I, L

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, T, S, F

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P, R

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = L, T, G

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = N, A

<400> 52

Glu Glu Glu Leu Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Glu Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Xaa Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 53

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 53

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 54

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 54

Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Phe Pro

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35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115

<210> 55

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 55

Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 56

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 56

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 57

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 57

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 143

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

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Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

130 135 140

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

145 150 155 160

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

165 170 175

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

180 185 190

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

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210 215 220

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

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Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

325 330 335

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345

<210> 144

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 144

Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

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Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe

65 70 75 80

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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

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130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

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Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

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275 280 285

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Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

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Lys

<210> 145

<211> 346

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 145

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

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Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

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65 70 75 80

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Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Glu Lys Thr His Thr Cys Pro Glu Cys

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Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

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Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

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180 185 190

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Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

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340 345

<210> 146

<211> 346

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 146

Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

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Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

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Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

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Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

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Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

275 280 285

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290 295 300

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305 310 315 320

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

325 330 335

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345

<210> 147

<211> 227

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 147

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1 5 10 15

Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

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Pro Gly Lys

225

<210> 148

<211> 346

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 148

Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

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Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345

<210> 149

<211> 227

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 149

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225

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000

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<400> 151

000

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000

<210> 161

<211> 226

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 161

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Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

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180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

210 215 220

Pro Gly

225

<210> 162

<211> 227

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 162

Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val

1 5 10 15

Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

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Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

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Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro

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Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

Ser Pro Gly

225

<210> 163

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 163

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 164

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 164

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1

<210> 165

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 165

Ser Gly Gly Gly

1

<210> 166

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 166

Gly Ser Gly Ser

1

<210> 167

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 167

Gly Ser Gly Ser Gly Ser

1 5

<210> 168

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 168

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser

1 5

<210> 169

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 169

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser

1 5 10

<210> 170

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 170

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser

1 5 10

<210> 171

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 171

Gly Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 172

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 172

Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 173

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 173

Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 174

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 174

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly

1 5

<210> 175

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 175

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 176

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

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<210> 177

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 177

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1

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<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 178

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1

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 179

Ala Ala Ala Lys

1

<210> 180

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 180

Ala Ala Ala Arg

1

<210> 181

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 181

Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr

1 5 10

<210> 182

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 182

Gly Ser Ala Gly Ser Ala Ala Gly Ser Gly Glu Phe

1 5 10

<210> 183

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 183

Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala

1 5 10

<210> 184

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 184

Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser

1 5 10 15

Leu Asp

<210> 185

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 185

Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly

1 5

<210> 186

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 186

Gly Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Gly Gly

1 5 10

<210> 187

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 187

Ser Ala Cys Tyr Cys Glu Leu Ser

1 5

<210> 188

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 188

Arg Ser Ile Ala Thr

1 5

<210> 189

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 189

Arg Pro Ala Cys Lys Ile Pro Asn Asp Leu Lys Gln Lys Val Met Asn

1 5 10 15

His

<210> 190

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 190

Gly Gly Ser Ala Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser

1 5 10 15

Gly Ala Ser Gly Thr Gly Thr Ala Gly Gly Thr Gly Ser Gly Ser Gly

20 25 30

Thr Gly Ser Gly

35

<210> 191

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 191

Ala Ala Ala Asn Ser Ser Ile Asp Leu Ile Ser Val Pro Val Asp Ser

1 5 10 15

Arg

<210> 192

<211> 36

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 192

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly

1 5 10 15

Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser

20 25 30

Gly Gly Gly Ser

35

<210> 193

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 193

Glu Ala Ala Ala Lys

1 5

<210> 194

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 194

Pro Ala Pro Ala Pro

1 5

<210> 195

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 195

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Met Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 196

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 196

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Lys Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 197

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 197

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Arg Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 198

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 198

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Tyr Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 199

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 199

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Asp Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 200

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 200

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ile Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 201

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 201

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Met Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 202

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 202

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 203

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 203

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Ser Glu Pro Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu

100 105 110

Leu Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115 120

<210> 204

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 204

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Arg Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Asp Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 205

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 205

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Arg Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ile Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 206

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 206

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Arg Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Asp Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ile Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 207

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 207

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Tyr Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Asp Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 208

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 208

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Tyr Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ile Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 209

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 209

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Tyr Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Asp Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ile Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 210

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 210

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Asp Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ile Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 211

<211> 345

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 211

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Arg Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Asp Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ile Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

115 120 125

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

130 135 140

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

145 150 155 160

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

165 170 175

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

180 185 190

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

195 200 205

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

210 215 220

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

225 230 235 240

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

245 250 255

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

260 265 270

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

275 280 285

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

290 295 300

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

305 310 315 320

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

325 330 335

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

340 345

<210> 212

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, L, I

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = V, I, L

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, T, S, F

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K, R

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, P, R

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = S, T, G

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = N, A

<400> 212

Glu Glu Glu Leu Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Glu Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Glu Xaa Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser

100 105 110

Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 213

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 213

Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn

65 70 75 80

Ile Thr Val Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 214

<211> 346

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 214

Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Glu Arg Lys Ser Ser Val Glu Cys Pro

115 120 125

Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

130 135 140

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

145 150 155 160

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn

165 170 175

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

180 185 190

Glu Glu Gln Phe Ala Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

195 200 205

Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

210 215 220

Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys

225 230 235 240

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu

245 250 255

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

260 265 270

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

275 280 285

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

290 295 300

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

305 310 315 320

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

325 330 335

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

340 345

<210> 215

<400> 215

000

<210> 216

<211> 346

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 216

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

115 120 125

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

130 135 140

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

145 150 155 160

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

165 170 175

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

180 185 190

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

195 200 205

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

210 215 220

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

225 230 235 240

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

245 250 255

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

260 265 270

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

275 280 285

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

290 295 300

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

305 310 315 320

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

325 330 335

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345

<210> 217

<211> 346

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 217

Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Glu Lys Thr His Thr Cys Pro Glu Cys

115 120 125

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

130 135 140

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

145 150 155 160

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

165 170 175

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

180 185 190

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

195 200 205

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

210 215 220

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

225 230 235 240

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

245 250 255

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Glu Val Lys Gly Phe Tyr

260 265 270

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

275 280 285

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

290 295 300

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

305 310 315 320

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

325 330 335

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345

<210> 218

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, L,或I

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A, V, L,或I

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, S, T,或F

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, L,或V

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K或R

<220>

<221> 变体

<222> 54

<223> Xaa = E或Q

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, R或P

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = S,G, L或 T

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = 任何氨基酸

<220>

<221> 变体

<222> 81

<223> Xaa = 任何氨基酸

<220>

<221> 变体

<222> 82

<223> Xaa = 任何氨基酸

<220>

<221> 变体

<222> 83

<223> Xaa = 任何氨基酸

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V或I

<400> 218

Glu Glu Glu Leu Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Xaa Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Xaa

65 70 75 80

Xaa Xaa Xaa Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 219

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, L或I

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A, V, L,或I

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, S, T或F

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E, L,或V

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K或R

<220>

<221> 变体

<222> 54

<223> Xaa = E或Q

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H, R或P

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = S,G, L,或T

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = N

<220>

<221> 变体

<222> 83

<223> Xaa = 除P以外的任何氨基酸

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V或I

<400> 219

Glu Glu Glu Leu Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Xaa Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Xaa Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Xaa Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 220

<400> 220

000

<210> 221

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V或I

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A或I

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I或F

<220>

<221> 变体

<222> 47

<223> Xaa = E或V

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K或R

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H或P

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = L或T

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = 除N以外的任何氨基酸

<220>

<221> 变体

<222> 92

<223> Xaa = V或I

<400> 221

Glu Glu Glu Leu Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Xaa Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Glu Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Xaa Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Xaa Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 222

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<220>

<221> 变体

<222> 6

<223> Xaa = V, L,或I

<220>

<221> 变体

<222> 27

<223> Xaa = A, I,或L

<220>

<221> 变体

<222> 31

<223> Xaa = I, T, S,或F

<220>

<221> 变体

<222> 53

<223> Xaa = K或R

<220>

<221> 变体

<222> 56

<223> Xaa = H或P

<220>

<221> 变体

<222> 66

<223> Xaa = L, T,或G

<220>

<221> 变体

<222> 80

<223> Xaa = N或A

<400> 222

Glu Glu Glu Leu Gln Xaa Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Xaa Thr Ser Leu Xaa Pro

20 25 30

Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Gln Xaa Glu Gly Xaa Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser

50 55 60

Asp Xaa Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Xaa

65 70 75 80

Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys

85 90 95

Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu

100 105 110

Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 223

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 223

His His His His His His

1 5

<210> 224

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成构建体

<400> 224

His His His His His His His His His His

1 5 10

Claims

1.一种治疗个体的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的(a)包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，(b)抗HER2抗体，(c)抗VEGF2抗体，和(d)紫杉醇；

其中所述SIRPαD1结构域变体包含SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:85的氨基酸序列；

其中所述Fc结构域变体是

(i)包含L234A、L235A、G237A和N297A突变的人IgG1 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；

(ii)包含A330S、P331S和N297A突变的人IgG2 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；

(iii)包含S228P、E233P、F234V、L235A和delG236突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引；或

(iv)包含S228P、E233P、F234V、L235A、delG236和N297A突变的人IgG4 Fc区，其中编号是根据Kabat的EU索引，

其中所述癌症是胃癌(GC)或胃食管连接部(GEJ)癌，并且其中所述个体已接受过至少一种用于胃癌或GEJ癌的先前治疗。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述个体已接受过抗HER2抗体、抗HER2抗体和氟嘧啶、或抗HER2抗体和铂基化疗剂的先前治疗。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述抗HER2抗体是曲妥珠单抗。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述抗VEGF抗体是雷莫芦单抗。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述胃癌或GEJ癌是HER2⁺胃癌或HER2⁺GEJ癌。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以10mg/kg的剂量每周一次施用。

7.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以15mg/kg的剂量每周一次施用。

8.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以30mg/kg的剂量每周一次施用。

9.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以10mg/kg的剂量每两周一次施用。

10.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以15mg/kg的剂量每两周一次施用。

11.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽以30mg/kg的剂量每两周一次施用。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述曲妥珠单抗以8mg/kg的初始剂量然后是6mg/kg每三周一次施用。

13.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述曲妥珠单抗以6mg/kg的初始剂量然后是4mg/kg每两周一次施用。

14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述紫杉醇以80mg/m2的剂量每周一次在每四周周期的三周施用。

15.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述紫杉醇以80mg/m2的剂量在每28天周期的第1、8和15天施用。

16.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中，在接受治疗的患者群体中，所述群体的总反应率(ORR)大于65％。

17.一种试剂盒，其包含在药学上可接受的载剂中的包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽，所述多肽用于与抗HER2抗体、抗VEGFR2抗体和紫杉醇组合；

其中所述Fc结构域变体是

并且其中所述试剂盒包含用于向患有胃癌或胃食管(GEJ)癌、已接受过至少一种用于胃癌或GEJ癌的先前治疗的个体施用所述包含SIRPαD1结构域变体和Fc结构域变体的多肽与所述抗HER2抗体、所述抗VEGFR2抗体和所述紫杉醇组合的说明书。

18.如权利要求17所述的试剂盒，其中所述胃癌或GEJ癌是HER2⁺胃癌或HER2⁺GEJ癌。

19.如权利要求17或18所述的试剂盒，其中所述抗HER2抗体是曲妥珠单抗。

20.如权利要求17至19中任一项所述的试剂盒，其中所述抗VEGFR2抗体是雷莫芦单抗。

21.如权利要求17至20中任一项所述的试剂盒，其中所述个体已接受过抗HER2抗体、抗HER2抗体和氟嘧啶、或抗HER2抗体和铂基化疗剂的先前治疗。