CN117210568A - 一种检测家族遗传性结直肠癌的snp标志物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种检测家族遗传性结直肠癌的SNP标志物及其应用。本发明通过POLQ基因的SNP位点rs150312701来检测家族遗传性结直肠癌，能够预测提示受检者以及受检者家族内部罹患结直肠肿瘤的风险程度。本发明检测方法在不同人群的结直肠肿瘤发病风险预测中性能稳健，重复性好，可靠性高，检测技术便利，提供了为单个病患以及其家族内部遗传风险人群评估发病风险等级的可能性，而且无需做年龄限制、无需考虑性别差异，能够进行大规模人群普查、筛选结直肠癌发病高危人群，实现结直肠癌病风险预测、预警，提高早诊率，有利于识别结直肠癌高危个体以及家族遗传性风险的评估，可作为结直肠癌普筛项目的辅助手段之一。
Description
技术领域
本发明属于生物技术与医学领域，具体涉及一种检测家族遗传性结直肠癌的SNP标志物及其应用。
背景技术
结直肠癌2022年在全球癌症发病率位居第三位，而病死率则为第二位。遗传因素在结直肠癌的发生过程中扮演着重要的角色。约25％的结直肠癌患者至少有一个一级亲属患癌，这种家族聚集性现象提示结直肠癌具有遗传倾向，其中约10％的患者明确与遗传因素有关。及时准确的识别有遗传易感的个体非常重要，但这部分患者临床表现复杂多样，仅能分为息肉综合征和非息肉综合征，息肉综合征表现为结直肠多个息肉，而非息肉综合征通常没有或有极少息肉。这种基于临床表现的分类方式往往不能令人满意，所以对这些综合征的遗传缺陷探索是该病研究向前踏出的重要一步。目前根据遗传证据已成功鉴定了10种息肉综合征(APC息肉病、MUTYH息肉病、校正聚合酶相关息肉病等和1种非息肉综合征Lynch综合征)。这种基于遗传信息的临床综合征分类，可以改善多变的临床特征对临床诊断和治疗策略的干扰，同时遗传缺陷的致病性研究也能对相关遗传综合征的临床管理提供理论依据。而临床针对该部分患者和高危人群的早期诊断、早期治疗会大大改善其预后，从而达到降低死亡率的目的。
目前在临床实践中，对于遗传性结直肠癌患者以及其他高危人群的分子筛查，是针对以上所描述的已被证明的遗传缺陷构建，但这些已知基因的检出率通常无法解释所有拥有典型临床特征的患者，所以临床上只有约20％的家族遗传性结直肠癌患者或高风险人群可以得到有效的管理和及时的干预，绝大部分拥有典型临床特征和家族史的患者无法检测出已知致病基因，这部分患者最终可能因缺乏分子诊断而错失最佳治疗时机。
本发明基于发明人团队鉴定出的一个新的家族遗传性结直肠癌致病基因遗传变异位点，提出其在结直肠肿瘤家族遗传风险预测上的用途，并给出基于基因型分析的风险评估方法，旨在丰富目前临床上现有分子检测靶标，提高检出率，使得更多家族遗传性结直肠癌患者及高危人群得到有效干预，达到肿瘤预防及治疗的目的。
发明内容
根据上述技术问题，本发明拟提供一种检测家族遗传性结直肠癌的SNP标志物及其应用。本发明的目的在于提供：与家族遗传性结直肠癌发病相关性高且能够用于家族遗传性结直肠癌的风险判定和家族遗传性结直肠癌患者识别的单核苷酸多态性(SNP)遗传标记、能够作为用于检测该SNP的引物或探针使用的家族遗传性结直肠癌发病风险判定用多核苷酸、使用该SNP的家族遗传性结直肠癌发病风险判定方法，以及用于该SNP的分型的家族遗传性结直肠癌发病风险判定用试剂盒等。
本发明人进行了深入研究，通过调查家族遗传性结直肠癌家系内部患病个体和对照健康个体中的SNP并进行共分离分析，结果发现：POLQ基因的SNP(rs150312701)作为家族遗传性结直肠癌的遗传标记是非常有用的，能够准确地识别家族遗传性结直肠癌患者。
因此，本发明的第一方面提供一种检测家族遗传性结直肠癌的SNP标志物，所述标记物为POLQ基因的SNP(rs150312701)。SNP(rs150312701)为C/T多态性，由后述实施例的结果可知，家族遗传性结直肠癌家系内部携带CT等位基因个体易罹患肿瘤，该SNP作为家族遗传性结直肠癌的遗传标记是有用的。
本发明还保护上述SNP标志物在制备家族遗传性结直肠癌的诊断试剂中的应用。
本发明还保护利用上述SNP标志物检测家族遗传性结直肠癌的方法，包括以下步骤：
S1：核酸提取：从待测患者外周静脉血中提取DNA，
S2：基因检测：利用上述DNA测序获得患者含POLQ基因的SNP位点rs150312701的基因型信息
S3结果分析当被测试者携带所述标记物为POLQ基因的SNP(rs150312701)为CT基因型时，所检测个体易罹患结直肠肿瘤。
进一步地，当发现罹患结直肠癌肿瘤患者携带所述标记物为POLQ基因的SNP(rs150312701)为CT基因型时后，对患者所有内部家系成员进行POLQ基因的变异位点rs150312701测序检测。
本发明还保护一种家族遗传性结直肠癌发病风险预测试剂盒，所述的试剂盒包括特异性检测POLQ基因的SNP位点rs150312701的试剂。
进一步地，所述样品选自血液。
本发明的有益效果：
同现有技术相比，本发明提供了一种家族遗传性结直肠癌遗传风险评估的分子标记和检测评估方法，所述的SNP标志物为POLQ基因的SNP位点rs150312701，能够预测提示受检者及受检者家族罹患结直肠肿瘤的风险程度，在不同人群的结直肠肿瘤发病风险预测中性能稳健，重复性好，可靠性高，检测技术便利，提供了为单个以及其家族遗传性结直肠癌遗传风险人群评估发病风险等级的可能性，而且无需做年龄限制、无需考虑性别差异，能够进行大规模人群普查、筛选结直肠肿瘤发病高危人群，实现结直肠肿瘤风险预测、预警，提高早诊率，有利于识别结直肠肿瘤高危个体以及家族遗传性风险的评估，可作为结直肠肿瘤普筛项目的辅助手段之一。
附图说明
图1为筛选阶段目标家族遗传性结直肠癌家系图；
图2为LS7家系致病突变的可能遗传模式；
图3为LS7家系内部部分Sanger测序结果；
图4为LS7家系扩大验证阶段目标家系图，其中[○]代表正常女性[□]代表正常男性[●]代表女性患者代表男性患者[_]代表全外显子测序(WES),[+/-]代表杂合突变携带者,[+/+]代表野生型个体；
图5为LS13家系内部部分Sanger测序结果；
图6为新鉴定目标患者LS13家系图，其中[○]代表正常女性[□]代表正常男性[●]代表女性患者代表男性患者[_]代表全外显子测序(WES),[+/-]代表杂合突变携带者,[+/+]代表野生型个体。
图7突变细胞系的构建以及突变模式对POLQ表达的影响，其中7(A)突变位点示意图；7(B)突变细胞系的测序验证；7(C)突变患者和野生型患者血、癌和癌旁组织POLQ mRNA表达水平；7(D)POLQ Arg1953*和Gln1949*293T/HCT116杂合和纯合细胞POLQ mRNA表达水平；7(E)Myc抗体检测Myc-Vector和Myc-POLQ-Flag、Myc-POLQ-Arg1953*-Flag，以及N端特异性抗体对Arg1953*293T细胞和Gln1949*HCT116细胞进行POLQ蛋白表达检测。数据根据野生型对照组归一化，以mean±SD表示。ns，没有显著性；*，p＜0.05；**，p＜0.01；***，p＜0.001；****，p＜0.0001；通过Two-way ANOVA检验。
图8为突变细胞增殖和裸鼠成瘤能力检测，其中8(A)293T野生型和突变型细胞株在IR照射或不照射(4Gry)情况下的增殖曲线；8(B)在293T野生型和突变型细胞株，依托泊苷不同剂量(0-5uM)处理后的克隆形成实验；8(C)293T WT和1953het细胞DNA损伤诱导和裸鼠成瘤实验流程，结果提示损伤诱导后的1953het细胞成瘤能力更强。两种基因型细胞于接种前1小时采用DMSO/ETOP处理，接种后21天收肿瘤标本并对各组的肿瘤重量8(D)和肿瘤体积8(E)进行测量分析(n＝6/组)，数据以mean±SD表示。ns，没有显著性；*，p＜0.05；**，p＜0.01；***，p＜0.001；****，p＜0.0001；通过Two-way ANOVA检验。293T细胞系所有基因型均有3个单克隆细胞株的生物学重复。
具体实施方式
实施例1：POLQ基因的SNP(rs150312701)分型与家族遗传性结直肠癌的遗传风险相关性
1.研究对象：
收集12个家族遗传性结直肠癌家系。样本由昆明医科大学第一附属医院、云南省肿瘤医院等按照相关规定采集并提供。家系入组标准为：从先证者表型中筛选，结合家族遗传性结直肠癌家系表型高外显率的特点，特别关注了多发性肿瘤、发病年龄提前或多发肿瘤表型的家系先证者。所有先证者都罹患结直肠癌，家系内一级亲属或二级亲属有结直肠癌、结直肠腺瘤(≥5个)或其他结肠外肿瘤个体，且其中一名患者肿瘤发病年龄＜60岁。临床阶段对所有先证者个体通过微卫星不稳定性/错配修复蛋白表达或MMR基因突变检测筛查排除Lynch综合征。
2.核酸提取：
对入组的12个家系的所有家庭成员共106人使用基因组提取试剂盒AxyPrepTMBlood Genomic DNA Miniprep Kit从患者外周静脉血中提取基因组核苷酸(DNA)，提取方法按照说明书进行。
3.基因检测方法和分析：
3.1 DNA片段化和文库构建
用超声破碎仪将准备好的DNA样品打断为200bp左右的DNA片段。本研究采用Agilent SureSelect Human All Exon V6试剂盒(Agilent Technologies，CA，USA)进行建库，对DNA片段两端连接接头后，制备DNA文库。文库与5’端生物素标记的探针进行液相杂交，用磁珠捕获外显子，经PCR扩增构建文库。构建好的文库用Qubit2.0荧光定量仪进行定量，后用Agilent2100生物分析仪检测文库中的Insert size确定符合预期，后用qPCR法对文库的有效浓度进行定量。
3.2全外显子测序和数据处理
将准备好的文库用IlluminaHiSeq平台进行高通量测序。对测序结果原始数据碱基识别后以FASTQ文件格式储存并进行质控。
3.3全外显子组高通量测序结果分析和致病基因的筛选
(1)首先与人类基因组对比获取SNP后进行注释，BWA软件将所有高质量读长和人类基因组比对。去除PCR重读，结合Hapmap计划和Illumina公布的已知SNP进行控制和质控。
(2)用SeattleSeq进行多态位点注释，SeattleSeq和in-house按照遗传模型过滤变异位点，获得小插入缺失和SNP位点信息。
(3)从每个单独文件中，用GATK软件获得一个VCF文件。低匹配率、低质量、家系中非多态的基因和位点均去除。采用ANNOAR软件对变异进行注释和预测。接下来首先去除ExAC和Hapmap数据库中MAF＞0.01的位点，随后去除内含子、同义、基因间和非翻译区的位点，最后保留具有潜在危害、可能影响蛋白质结构变异的突变。
3.4候选基因及位点的验证信息
获得所有家系核心成员的候选致病位点列表后，选择临床表型没有完全外显的家系，进行共分离验证，找寻完全共分离的突变基因和位点，同时在千人计划组、ExAC和GnomAD等数据库进行验证突变频率。
3.5候选致病基因在阳性家系内部、其他家系和散发人群的Sanger测序验证
通过上一步的筛选和数据库验证，我们选择了LS7家系进一步研究，发现LS7家系内部存在罕见突变POLQ p.Arg1953*，与家系成员疾病状态共分离。由于二代测序有一定的误差，需要进行Sanger测序进一步确认全外显子测序的准确性。运用Primer3web设计Sanger测序引物，引物序列见表1，首先对候选家系内部所有成员外周血DNA进行Sanger测序验证，验证共分离结论。
Sanger测序验证过程首先通过PCR扩增，根据表2所列配好PCR mix，进行PCR扩增反应，条件为：(A)94℃，5min。(B)10个循环(94℃，10s；58℃，20s；72℃，25s)。(C)25个循环(94℃，10s；53℃，20s；72℃，25s)。(D)72℃，5min。
(E)16℃，∞min。
表1Sanger测序验证引物
本领域技术人员周知，采用任意位于目标位点上游与下游序列的寡核苷酸作为引物均可扩增目标片段与进行测序反应，测序引物为5’-CCTTAGGATCTTCATAACTTTG-3’。本例引物序列仅为举例说明本发明的实施，而不局限于此序列。测序数据按照领域标准流程进行处理与分析，最终获得肿瘤患者和健康家系成员的潜在致病基因的基因型信息。
表2Sanger测序验证PCR扩增反应体系
4.家系信息及检测结果
4.112个遗传性结直肠癌家系临床信息和家系图
首先对12个家系进行了全外显子测序。家系资料如图1，12个家系中部分患者临床信息(表3)。
表3入组家系核心成员及临床表型信息
表注3[*]代表先证者
4.2全外显子测序结果及候选家系(LS7)疾病相关突变的鉴定
(1)家系成员血DNA提取
收集12个家系所有成员血DNA，根据家系图和临床表型信息(表3)，每个家系选择核心家系成员(包括患病人员和健康成员共3-5人)进行血DNA提取。共提取了43个血DNA样本。样品浓度在30-60ng/ul之间，ODA260/280值在1.80-2.00之间。样品检测结果均符合全外显子测序要求。
(2)全外显子测序
全外显子组区域基于安捷伦全基因组外显子捕获探针获得，样本经过标准流程建库后，通过Illumina高通量测序平台进行测序，获得数据量每个体7G，覆盖度100倍以上。测序数据(raw read，原始读长)基于GATK(https://software.broadinstitute.org/gatk/)标准流程进行处理，获得了每个个体的所有变异位点。
(3)疾病相关突变鉴定和候选家系选择
通过ANNOAR软件对所有变异位点进行注释后，获得了潜在功能性位点或有害突变；并基于大规模公共数据(千人基因组与ExAC/GnomAD数据库)，进行了突变频率的筛查。突变在正常人群中频率较低(<5％)、且被预测为损坏编码蛋白功能的位点，我们进行了潜在致病突变的筛查。随后根据筛查结果排除含已知致病基因的LS6和LS9家系(表4)。
在无已知致病突变的家系中，未达到100％外显的家系在技术上可以进行突变与疾病状态的共分离分析，也有较高可能存在新的致病突变。因此，我们选择LS7家系作为候选家系进一步分析。
表4入组家系已知致病基因筛查
(4)LS7家系全外显子测序结果分析
通过对LS7-1、LS7-2、LS7-3的临床表型分析，LS7家系可能存在以下两种遗传模式(图2)。
经过基因组注释、频率、致病性以及遗传模式的筛选，获得了81个LS7家系符合上述两种遗传模式的所有低频致病性位点。这些突变均有可能是LS7-2和LS7-3个体患病的原因，不过仅仅上述筛选不足以确定具体是哪一个突变与其结直肠癌发生有关。
因此，进一步假设，潜在遗传性结直肠癌的突变可能在结直肠、子宫内膜等组织中表达水平较高，且其表达水平可能与相关肿瘤进展有关。因此，本发明检索了权威的蛋白表达数据库ProteinAtlas与肿瘤突变数据库COSMIC。COSMIC数据显示，COL4A4、WTIP、KRTAP1-4、RBL1、PDP2、POLQ、CHRNB3七个基因可能与结直肠、子宫内膜等组织的肿瘤有关(表5)；其中，仅POLQ基因的表达水平在ProteinAtlas数据库中与子宫内膜癌的预后有关。因此，POLQ基因的突变很有可能与本家系的疑似遗传性结直肠癌的发生有关。巧合的是，POLQ基因是DNA复制酶θ(DNA Polymeraseθ)，在DNA损伤修复中发挥重要作用，其突变也曾被报道与乳腺癌有关。本家系中观察到的POLQ基因突变是一个导致蛋白提前终止的突变(p.Arg1953*)，很大可能导致其功能失活。因此，我们推测，LS7家系的致病基因可能是POLQ基因。POLQ p.Arg1953*(rs150312701)可能是遗传性结直肠癌的一个新的致病突变。
这一潜在新致病基因的发现，为遗传性结直肠癌致病基因列表增加了新成员，也提示了可能的新机制。
表5结直肠癌或子宫内膜癌生物学相关证据
4.3候选基因POLQ的SNP(rs150312701)基因型的LS7家系内部验证
(1)Sanger测序方法对LS7家系内部验证
首先采用Sanger测序方法对LS7家系内部所有个体进行rs150312701基因型验证，测序引物序列和反应条件详见表1和表2。
(2)Sanger测序结果和验证后家系图
经过Sanger测序验证，LS7-2、LS7-3、LS7-5、LS7-8携带rs150312701基因型，LS7-1、LS7-4、LS7-9、LS7-7为野生型个体，测序结果如图3。完成验证后家系图如图4。
5.LS7家系内突变携带者的临床管理
经过Sanger测序验证结果显示，LS7家系有4名个体携带rs150312701基因型，其中3名均出现临床表型(图4)，家系中肿瘤表型涵盖了输尿管上皮癌、子宫内膜癌、结肠癌、子宫内膜异常增生，在家族中连续两代人中出现，符合显性遗传特征，临床表型和突变状态完全共分离。对突变携带者LS7-5个体进行临床筛查提示其患子宫内膜非典型增生，系家族遗传性结直肠癌相关肿瘤子宫内膜癌的癌前病变，通过临床干预实现了LS7-5个体的肿瘤一级预防。同时对LS7-8携带者个体将纳入家族遗传性结直肠癌的监测管理。
本实施例证明了POLQ基因的变异位点rs150312701能够指示家族遗传性结直肠癌的遗传风险，同时通过遗传筛查实现了家系内一名个体的肿瘤一级预防，以及一名存在患病风险个体的临床前管理。
实施例2：基于POLQ基因的SNP(rs150312701)分型鉴定新家族遗传性结直肠癌患者个体和家系内部筛查
1.研究对象：
74个家族遗传性结直肠癌患者外周血，样本由昆明医科大学第一附属医院、云南省肿瘤医院等按照相关规定采集并提供。患者入组标准为：从先证者表型中筛选，结合家族遗传性结直肠癌家系表型高外显率的特点，特别关注了多发性肿瘤、发病年龄提前或多发肿瘤表型的个体。所有入组患者均有一级亲属或二级亲属罹患结直肠癌、结直肠腺瘤(≥5个)或其他结肠外肿瘤，且其中一名发病年龄＜60岁。临床阶段对所有患者通过微卫星不稳定性/错配修复蛋白表达或MMR基因突变检测筛查排除Lynch综合征。
对携带rs150312701基因型患者，进一步收集其家系内部所有个体的外周血。
2.核酸提取：
同实施例1，对携带rs150312701基因型患者家系内部其他所有个体的血DNA以相同方法提取。
3.基因检测方法：
同实施例1，最终获得所有入组患者rs150312701位点的基因型信息。
4.数据分析方法
同实施例1获得所有潜在家族遗传性结直肠癌患者的rs150312701位点基因型信息后，对携带rs150312701位点患者进行其家系内部所有成员进行基因型鉴定。进一步筛选出潜在肿瘤患者以指导临床筛查和家系管理。
5.结果
通过对74个潜在家族遗传性结直肠癌患者的筛查，发现其中一个患者(LS13)携带rs150312701基因型，进一步对其家系内部所有个体进行基因型筛查，结果如图5和家系图图6。提示家系内有6名CT基因型携带者，通过临床筛查提示其中LS13-8、LS13-13、LS13-18个体罹患结肠腺瘤，为结直肠癌的癌前病变，通过临床干预实现了3名个体的肿瘤一级预防。对目前并无临床表型的个体(LS13-10和LS13-1)亦纳入了家族遗传性结直肠癌高风险人群的临床前管理(图6)。
本实施例鉴定了新的遗传性结直肠癌家系LS13，家系内部4名CT基因型个体出现结直肠癌、子宫内膜癌、结肠腺瘤等肿瘤表型，符合显性遗传模式，疾病与突变状态完全共分离，与LS7家系相似。通过遗传筛查和临床干预实现了家系内3名个体的肿瘤一级预防，以及2名存在患病风险个体的临床前管理。验证了POLQ基因的变异位点rs150312701用于预测家族遗传性结直肠癌的效力。
实施例3突变细胞系的构建以及突变模式对POLQ表达的影响
为了进一步探索突变模式对POLQ基因表达的影响，本发明通过CRISPR/Cas9为基础的基因编辑方法在293T和HCT116细胞系上成功构建POLQ Arg1953*和对照位点Gln1949*的CT、CC和TT等位基因细胞系(图7A-B)。随后收集LS7和LS13家系内POLQ rs150312701基因型患者4人和经测序确认POLQ野生型散发结直肠癌患者8人血RNA，通过qPCR检测POLQ mRNA表达变化提示CT基因型家系成员POLQ mRNA表达较野生型个体明显降低(图7C)。也收集了LS13-3突变个体的肿瘤及癌旁组织，和8名散发结直肠癌患者的肿瘤及癌旁组织进行对比，均提示突变后POLQ mRNA表达降低。同时针对POLQ Arg1953*和Gln1949*293T/HCT116细胞系的qPCR检测也得到了一致的结果，提示两类细胞系、两个无义突变位点的杂合和纯合突变均出现mRNA表达下降(图7D)。本发明接下来设计了N端特异性抗体对Arg1953*293T细胞和p.Gln1949*HCT116细胞POLQ表达进行检测。结果如图7E，两种细胞系的两个位点纯合突变均未见确切截短体蛋白存在。因此，实验结果表明，POLQ Arg1953*触发了无义介导的mRNA降解机制(NMD)，导致mRNA表达下降，截短mRNA完全降解，无截短蛋白残留。
实施例4POLQ基因变异位点rs150312701的CT等位基因细胞在DNA损伤压力下表现出促肿瘤表现
为了进一步功能研究，本发明对携带POLQ基因变异位点rs150312701的CT等位基因的293T细胞系进行肿瘤表型探索。首先对突变细胞增值能力进行检测，CCK8增殖实验结果提示与野生型相比，293T CT等位基因细胞(1953het)经过IR诱导损伤后表现出异常增强的增殖能力(图8A)。通过依托泊苷(ETOP)诱导的克隆形成实验结果也提示CT等位基因细胞在损伤压力下表现出更强的克隆形成能力(图8B)。随后用裸鼠移植瘤的方式进行体内实验验证，采用293T野生型等位基因(WT)和CT等位基因(1953het)细胞，在接种前1小时给予依托泊苷(5uM)处理。后建立裸鼠移植瘤模型，在整个过程中检测异种移植瘤的体积和小鼠的体重，待任意一组移植瘤生长至1.5cm3时，处死小鼠收获移植瘤。结果提示：没有DNA损伤诱导的情况下，WT和1953het的裸鼠成瘤能力无明显差异；但诱导DNA损伤后，1953het组的移植瘤体积和重量均较WT组明显增加(图8C-E)，提示拥有更强的成瘤能力。
结果说明：在外界因素DNA损伤诱导下，突变细胞增殖和裸鼠成瘤能力异常增强。因而，对于POLQ基因变异位点rs150312701突变携带者，外界环境因素长期慢性的作用是肿瘤发生的诱因，导致突变携带个体较野生型个体更易患肿瘤。采取恰当的生活方式和用药措施，规避DNA突变损伤，具有重要的临床意义，也为特点该基因突变携带者后期遗传咨询提供了直接的数据基础。
Claims (6)
1.一种检测家族遗传性结直肠癌的SNP标志物，其特征在于：所述的SNP标志物为POLQ基因的SNP位点rs150312701，当被测试者携带所述标记物为POLQ基因的SNP(rs150312701)为CT基因型时，所检测个体易罹患结直肠肿瘤。
2.根据权利要求1所述的SNP标志物在制备家族遗传性结直肠癌的诊断试剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的SNP标志物检测家族遗传性结直肠癌的方法，包括以下步骤：
S1：核酸提取：从待测患者外周静脉血中提取DNA，
S2：基因检测：利用上述DNA测序获得患者含POLQ基因的SNP位点rs150312701的基因型信息；
S3结果分析当被测试者携带所述标记物为POLQ基因的SNP(rs150312701)为CT基因型时，所检测个体易罹患结直肠肿瘤。
4.根据权利要求3所述的SNP标志物检测家族遗传性结直肠癌的方法检测携带者的家族成员，包括以下步骤：当发现罹患结直肠癌肿瘤患者携带所述标记物为POLQ基因的SNP(rs150312701)为CT基因型时后，对患者所有内部家系成员POLQ基因的变异位点rs150312701进行测序检测。
5.一种家族遗传性结直肠癌发病风险预测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括特异性检测POLQ基因的SNP位点rs150312701的试剂。
6.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述样本为血液。
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117210568B (zh) | 2024-06-21 |
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