CN117088837A - 乙烯基吡喃酮类化合物及其在治疗阿尔茨海默病中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种式(I)所示的乙烯基吡喃酮类化合物，且式(I)所示的乙烯基吡喃酮类化合物具有抑制Aβ沉积、抗炎、抗氧化以及治疗阿尔兹海默症的作用。

Description

乙烯基吡喃酮类化合物及其在治疗阿尔茨海默病中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及乙烯基吡喃酮类化合物及其在治疗阿尔茨海默病中的应用。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种神经系统疾病，会导致认知障碍、行为异常、人格改变，并最终导致痴呆和死亡。阿尔茨海默病发病机制尚不明确，但β-淀粉样蛋白(Amyloid-βprotein，Aβ)聚集、氧化损伤和神经炎症与其发生发展密切相关。

在诱发AD的多种因素中，Aβ聚集是AD病理学的中心事件。淀粉样斑块在中枢神经系统细胞外沉积，通过引发慢性炎症、线粒体和神经元功能受损，进而导致痴呆。因此，抑制Aβ聚集被认为是阻止AD进展的基础策略。与此同时，慢性神经炎症和氧化应激是导致AD记忆丧失和认知能力下降的两个主要因素。氧化应激作为AD的上游事件，可参与Aβ的积累和聚集，引发线粒体功能障碍和神经元损伤。而神经炎症，在AD的发生和发展过程中推动疾病的进展。小胶质细胞可被Aβ、Aβ低聚物、纤维或神经原纤维缠结等激活。活化的小胶质细胞分泌炎性细胞因子，诱导神经炎症和神经元损伤，加速AD的进展。因此，抑制小胶质细胞的过度活化，减少促炎介质和细胞因子的产生，是治疗神经炎症介导的AD疾病的有效途径。

离子钙结合适配器分子1(Ionized calcium binding adapter molecule1，Iba1)和诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase，iNOS)作为评估小胶质细胞炎症损伤的经典指标。最近，触发髓系细胞触发受体2(Triggering receptor expressedon myeloid cells，TREM2、脾酪氨酸激酶(Spleen tyrosine kinase，SYK)等靶点因与小胶质细胞吞噬Aβ功能密切相关，成为研究热点，随着相关分子生物学机制的阐明，可能为治疗AD提供全新视角。

由于参与AD发病和发展的不同病理途径的复杂性，传统的“一分子一靶点”的治疗策略很难阻止AD的进展。例如，乙酰胆碱酯酶抑制剂(多奈哌齐、加兰他明、利凡斯的明)和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂(美金刚)，在AD早期阶段提供的症状益处有限。最近，针对脑-肠轴通路的GV-971，被国家药品监督管理局(NMPA)批准用于轻至中度AD患者的治疗，以及靶向Aβ的Aducanumab，被美国FDA批准用于AD的治疗。然而，他们的批准都具有较大的争议，在AD中的疗效仍需进一步评估。因此，这表明单一的治疗靶点似乎不足以对抗具有复杂发病机制和不同病理表现的AD。相比之下，与AD病理进展的核心事件相对应，具有抗炎、抗氧化、抑制Aβ蛋白沉积作用的多靶点分子在AD的治疗中具有巨大的潜力。因此，寻找具有多靶点抗AD活性的新型多靶点化合物对治愈AD具有重要的意义。

发明内容

为了改善上述技术问题，本发明提供一种式(I)所示的乙烯基吡喃酮类化合物，且式(I)所示的乙烯基吡喃酮类化合物具有抑制Aβ蛋白沉积、抗炎、抗氧化以及治疗阿尔兹海默症的作用。

本发明提供一种式(I)所示的乙烯基吡喃酮类化合物、其立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐或前药，

R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代C1-10烷基；

R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C20芳基、5-20元杂芳基、3-20元杂环基；

R_a相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、羟基、硝基、氨基、氰基、C1-10烷基；

R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-10烷基、C1-10烷氧基、C1-10烷基酯基、C6-C20芳基、3-20元杂环基、5-20元杂芳基；其中，C1-10烷基、C1-10烷氧基、C1-10烷基酯基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C20芳基、3-20元杂环基、5-20元杂芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-10烷基、C1-10烷氧基、C1-10烷基酯基取代。

在一些实施方案中，R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代C1-6烷基；

优选的，R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代C1-3烷基；

进一步优选的，R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代的甲基；

例如，R₁选自被羟基取代的甲基。

在一些实施方案中，R_a相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、羟基、硝基、氨基、氰基；

优选的，R_a选自H、卤素、羟基；

进一步优选的，R_a选自羟基。

在一些实施方案中，R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C10芳基、5-10元杂芳基、3-10元杂环基；

优选的，R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C10芳基(例如C6芳基、C10芳基)。

在一些实施方案中，R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基、C6-C10芳基、3-10元杂环基、5-10元杂芳基；其中，C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C10芳基、3-10元杂环基、5-10元杂芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基取代；

优选的，R_b选自H、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基、C6-C10芳基；其中，C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C10芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基取代；

进一步优选的，R_b选自H、羟基、卤素、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C6-C10芳基；其中，C1-4烷基、C1-4烷氧基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C10芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基取代。

在一些实施方案中，R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C6芳基；其中，C1-4烷基、C1-4烷氧基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基取代。

在一些实施方案中，

R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代C1-10烷基；

R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C20芳基；

R_a相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、羟基、硝基、氨基、氰基、C1-10烷基；

R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-10烷基、C1-10烷氧基、C1-10烷基酯基、C6-C20芳基；其中，C1-10烷基、C1-10烷氧基、C1-10烷基酯基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C20芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-10烷基、C1-10烷氧基、C1-10烷基酯基取代。

在一些实施方案中，

R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代C1-6烷基；

R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C20芳基；

R_a相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、羟基、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基；

R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基、C6-C20芳基；其中，C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C20芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基取代。

在一些实施方案中，

R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代C1-6烷基；

R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C10芳基；

R_a相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、羟基、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基；

R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基、C6-C10芳基；其中，C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C10芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基取代。

在一些实施方案中，

R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代C1-3烷基；

R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C10芳基；

R_a相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、羟基、硝基、氨基、氰基；

R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基、C6-C10芳基；其中，C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C10芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基取代。

在一些实施方案中，

R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代的甲基；

R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C10芳基；

R_a相同或不同，彼此独立地选自羟基；

R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C6-C10芳基；其中，C1-6烷基、C1-6烷氧基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C10芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基取代。

在一些实施方案中，

R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代的甲基；

R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C10芳基；

R_a相同或不同，彼此独立地选自羟基；

R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C6-C10芳基；其中，C1-4烷基、C1-4烷氧基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C10芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基取代。

在一些实施方案中，

R₁选自被羟基取代的甲基；

R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C10芳基(例如C6芳基、C10芳基)；

R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C6芳基；其中，C1-4烷基、C1-4烷氧基任选的被一个、两个或多个卤素取代。

本发明还提供如下所示的乙烯基吡喃酮类化合物、其立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐或前药：

本发明还提供上述化合物的制备方法，

其中，R₁、R₂的定义如上文所述。

在一些实施方案中，所述制备方法为：

其中，R₂的定义如上文所述。

在一些实施方案中，步骤1中，反应条件为NBS、NH₄OAc、THF，65℃；

和/或，步骤2中，反应条件为BnBr、K₂CO₃、CH₃CN、70℃；

和/或，步骤3中，反应条件为TEA、Pd(OAc)₂、DMF、N₂、80℃；

和/或，步骤4中，反应条件为6N HCl、CH₃OH、90℃。

在一些实施方案中，制备化合物6I和/或6L的反应条件为BBr₃、CH₂Cl₂、0℃。

根据本发明的实施方案，在反应结束之后，可采用常规的后处理方法处理反应产物，例如制备型HPLC、制备型TLC或重结晶等常规技术手段进行分离纯化。

本发明提供一种药物组合物，包括上述乙烯基吡喃酮类化合物、其立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐、前药中的一种、两种或更多种。

根据本发明的实施方案，所述药物组合物还可以任选地包含至少一种药学上可接受的辅料。

药学上可接受的辅料包括溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、赋形剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂。

根据本发明的实施方案，所述药物组合物还可以任选地包含至少一种另外的活性成分；具体地，所述药物组合物还可以包含除上述乙烯基吡喃酮类化合物、其立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐、前药以外的一种或多种活性成分。

另外的活性成分包括胆碱酯酶抑制剂如多奈哌齐、利凡斯的明、加兰他敏、石杉碱甲、N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂美金刚、甘露特钠胶囊(GV-971)、阿杜那单Aduhelm。

在所述的药物组合物中，上述乙烯基吡喃酮类化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、酯、前药的剂量，可为治疗有效量。

根据本发明的实施方案，可以通过本领域已知的方法将本发明的药物组合物制成适于给药的剂型。

根据本发明的实施方案，所述的制剂(或药物组合物)包括：口服制剂和非口服制剂。

根据本发明的实施方案，所述的制剂包括：粉剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、吸入剂、酊剂、口服液、片剂、含片、或滴丸。

本发明还提供上述乙烯基吡喃酮类化合物、其立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐、前药在制备预防和/或治疗阿尔茨海默症的药物中的应用。

本发明还提供上述乙烯基吡喃酮类化合物、其立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐、前药在制备抑制Aβ蛋白沉积、抗炎、抗氧化的药物中的应用。

有益效果

本发明提供一种式(I)所示的乙烯基吡喃酮类化合物，且式(I)所示的乙烯基吡喃酮类化合物具有抑制Aβ蛋白沉积、抗炎、抗氧化以及治疗阿尔兹海默症的作用。

术语定义与说明除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当被理解为本申请说明书和/或权利要求书记载的范围内。

除非另有说明，本说明书和权利要求书记载的数值范围相当于至少记载了其中每一个具体的整数数值。例如，数值范围“1-40”相当于记载了数值范围“1-10”中的每一个整数数值即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，以及数值范围“11-40”中的每一个整数数值即11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40。应当理解，本文在描述取代基时使用的一个、两个或更多个中，“更多个”应当是指≥3的整数，例如3、4、5、6、7、8、9或10。

术语“卤素”或“卤”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。

一般而言，术语“取代的”表示所给结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代。进一步地，当该基团被1个以上所述取代基取代时，所述取代基之间是相互独立，即，所述的1个以上的取代基可以是互不相同的，也可以是相同的。除非其他方面表明，一个取代基团可以在被取代基团的各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不只一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。其中所述的取代基可以是，但并不限于，＝O、氢、氘、氰基、硝基、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、羧基、环烷基、环烷基氧基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳基烷基、芳基氧基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基氧基等。

另外，需要说明的是，除非以其他方式明确指出，在本发明中所采用的描述方式“…独立地选自”应做广义理解，是指所描述的各个个体之间是相互独立的，可以独立地选自相同或不同的具体基团。更详细地，描述方式“…独立地选自”既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响；也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。

在本说明书的各部分，本发明公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本发明包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“C_1-6烷基”特别指独立公开的C₁烷基、C₂烷基、C₃烷基、C₄烷基、C₅烷基或C₆烷基。

在本发明的各部分，描述了连接取代基。当该结构清楚地需要连接基团时，针对该基团所列举的马库什变量应理解为连接基团。例如，如果该结构需要连接基团并且针对该变量的马库什基团定义列举了“烷基”或“芳基”，则应该理解，该“烷基”或“芳基”分别代表连接的亚烷基基团或亚芳基基团。

术语“C1-10烷基”表示具有1～10个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。例如，“C_1-6烷基”表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链和支链烷基。其中，所述烷基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。在一些实施方案中，烷基基团含有1-10个碳原子；在另一些实施方案中，烷基基团含有1-6个碳原子；在又一些实施方案中，烷基基团含有1-4个碳原子。所述烷基的实例包含，但并不限于，甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。

术语“3-20元杂环基”应理解为表示饱和的一价单环、双环烃环或桥环烷烃，其包含1-5个独立选自N、O和S的杂原子的总成环原子数为3-20(如原子数为3、4、5、6、7、8、9、10等)的非芳族环状基团，优选“3-10元杂环基”。术语“3-10元杂环基”意指饱和的一价单环、双环烃环或桥环烷烃，其包含1-5个，优选1-3个独立选自N、O和S的杂原子，例如1、2、3个独立选自N、O和S的杂原子。所述杂环基可以通过所述碳原子中的任一个或氮原子(如果存在的话)与分子的其余部分连接。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或7元环，如二氮杂环庚烷基。任选地，所述杂环基可以是苯并稠合的。所述杂环基可以是双环的，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基环。含氮原子的环可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于2,5-二氢-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氢恶唑基或4H-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基。根据本发明，所述杂环基是无芳香性的。所述3-20元杂环基与其它基团相连构成本发明的化合物时，可以为3-20元杂环基上的碳原子与其它基团相连，也可以为3-20元杂环基环上杂环原子与其它基团相连。例如当3-20元杂环基选自哌嗪基时，可以为哌嗪基上的氮原子与其它基团相连。或当3-20元杂环基选自哌啶基时，可以为哌啶基环上的氮原子和其对位上的碳原子与其它基团相连。

术语“C_6-20芳基”应理解为表示具有6～20个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环，优选“C_6-14芳基”。术语“C_6-14芳基”应理解为优选表示具有6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环(“C_6-14芳基”)，特别是具有6个碳原子的环(“C₆芳基”)，例如苯基；或联苯基，或者是具有9个碳原子的环(“C₉芳基”)，例如茚满基或茚基，或者是具有10个碳原子的环(“C₁₀芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基，或者是具有13个碳原子的环(“C₁₃芳基”)，例如芴基，或者是具有14个碳原子的环(“C₁₄芳基”)，例如蒽基。当所述C_6-20芳基被取代时，其可以为单取代或者多取代。并且，对其取代位点没有限制，例如可以为邻位、对位或间位取代。

术语“5-20元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系，包括芳香性或部分芳香性的，其具有5～20个环原子且包含1-5个独立选自N、O和S的杂原子，例如“5-14元杂芳基”。术语“5-14元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个环原子，特别是5或6或9或10个碳原子，且其包含1-5个，优选1-3各独立选自N、O和S的杂原子并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、恶唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异恶唑基、异噻唑基、恶二唑基、三唑基、噻二唑基、噻-4H-吡唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并恶唑基、苯并异恶唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩恶嗪基等。当所述5-20元杂芳基与其它基团相连构成本发明的化合物时，可以为5-20元杂芳基环上的碳原子与其它基团相连，也可以为5-20元杂芳基环上的杂原子与其它基团相连。当所述5-20元杂芳基被取代时，其可以为单取代或者多取代。并且，对其取代位点没有限制，例如可以为杂芳基环上与碳原子相连的氢被取代，或者杂芳基环上与杂原子相连的氢被取代。

除非另有说明，杂环基、杂芳基或亚杂芳基包括其所有可能的异构形式，例如其位置异构体。因此，对于一些说明性的非限制性实例，可以包括在其1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、10-、11-、12-位等(如果存在)中的一个、两个或更多个位置上取代或与其他基团键合的形式，包括吡啶-2-基、亚吡啶-2-基、吡啶-3-基、亚吡啶-3-基、吡啶-4-基和亚吡啶-4-基；噻吩基或亚噻吩基包括噻吩-2-基、亚噻吩-2-基、噻吩-3-基和亚噻吩-3-基；吡唑-1-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基。

本发明所使用的立体化学定义和规则一般遵循S.P.Parker，Ed.，McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company，New York；andEliel，E.and Wilen，S.，“Stereo chemistry of Organic Compounds”，John Wiley&Sons，Inc.，New York，1994。

“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体，等等。

“对映异构体”是指一个化合物的两个不能重叠但互成镜像关系的异构体。

“非对映异构体”是指有两个或多个手性中心并且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体混合物可通过高分辨分析操作如电泳和色谱，例如HPLC来分离。

本发明公开化合物的任何不对称原子(例如，碳等)都可以以外消旋或对映体富集的形式存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型形式存在。在某些实施方案中，各不对称原子在(R)-或(S)-构型方面具有至少0％对映体过量，至少60％对映体过量，至少70％对映体过量，至少80％对映体过量，至少90％对映体过量，至少95％对映体过量，或至少99％对映体过量。

所得的任何立体异构体的混合物可以依据组分物理化学性质上的差异被分离成纯的或基本纯的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，例如，通过色谱法和/或分步结晶法。

在外消旋的胺的情况中，通过与光学活性的拆分试剂反应，从混合物制得非对映异构体。适当的拆分试剂的示例是光学活性的酸，例如R和S形式的酒石酸、二乙酰酒石酸、二苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸、适当的N-保护的氨基酸(例如N-苯甲酰脯氨酸或N-苯磺酰基脯氨酸)或各种光学活性的樟脑磺酸。借助光学活性的拆分试剂(例如固定在硅胶上的二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸、三乙酸纤维素或其它碳水化合物的衍生物或手性衍生化的异丁烯酸酯聚合物)，也可有利地进行色谱对映体拆分。用于此目的的适当的洗脱剂是含水或含醇的溶剂混合物，例如，己烷/异丙醇/乙腈。

术语“互变异构体”是指具有不同能量的可通过低能垒(low energy barrier)互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称为质子转移互变异构体(prototropictautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体(valen cetautomer)包括通过一些成键电子的重组来进行的互相转化。酮-烯醇互变异构的具体实例是戊烷-2,4-二酮和4-羟基戊-3-烯-2-酮互变异构体的互变。互变异构的另一个实例是酚-酮互变异构。酚-酮互变异构的一个具体实例是吡啶-4-醇和吡啶-4(1H)-酮互变异构体的互变。除非另外指出，本发明化合物的所有互变异构体形式都在本发明的范围之内。

本发明的“氮氧化物”是指当化合物含几个胺官能团时，可将1个或大于1个的氮原子氧化形成N-氧化物。N-氧化物的特殊实例是叔胺的N-氧化物或含氮杂环氮原子的N-氧化物。可用氧化剂例如过氧化氢或过酸(例如过氧羧酸)处理相应的胺形成N-氧化物(参见Advanced Organic Chemistry,Wiley Interscience,第4版,Jerry March,pages)。尤其是，N-氧化物可用L.W.Deady的方法制备(Syn.Comm.1977,7,509-514)，其中例如在惰性溶剂例如二氯甲烷中，使胺化合物与间-氯过氧苯甲酸(MCPBA)反应。

术语“同位素标记物”包括但不限于氢，碳，氮，氧，氟，硫和氯的同位素(例如²H，³H，¹³C，¹⁴C，¹⁵N，¹⁸O，¹⁷O，¹⁸F，³⁵S和³⁶Cl)标记的本发明化合物。同位素标记的本发明化合物可用于化合物及其前药和代谢物的组织分布的测定；用于此类测定的优选同位素包括³H和¹⁴C。此外，在某些情况下，用较重的同位素(例如氘(2H或D))取代可以提供增加的代谢稳定性，这提供了治疗优势，例如增加的体内半衰期或减少的剂量需求。本发明的同位素标记的化合物通常可以根据本文所述的方法通过用同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。

术语“药学上可接受的”是指当给人施用时生理上可耐受的并且一般不产生过敏或相似不适当的反应，例如肠胃不适、眩晕等的分子实体和组合物。

术语“载体”指与所述化合物一同施用的稀释剂、辅剂、赋形剂或基质。这些药物载体可以是无菌液体，例如水和油类，包括石油、动物、植物或合成来源的，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。水和水性溶液盐水溶液和水性葡萄糖与甘油溶液优选用作载体、特别是可注射溶液。适宜的药物载体描述于E.W.Martin的“Remington′s PharmaceuticalSciences”中。

本发明所使用的术语“前药”，代表一个化合物在体内转化为式(I)所示的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前体药物类化合物可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前体药物的有苯酯类，脂肪族(C_1-24)酯类，酰氧基甲基酯类，碳酸酯，氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。例如本发明里的一个化合物包含羟基，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前体药物形式包括磷酸酯，如这些磷酸酯类化合物是经母体上的羟基磷酸化得到的。关于前体药物完整的讨论可以参考以下文献：T.Higuchiand V.Stella,Pro-drugsas Novel Delivery Systems,Vol.14of the A.C.S.Symposium Series,Edward B.Roche,ed.,BioreversibleCarriersin Drug Design,American Pharmaceutical Associationand Pergamon Press,1987,J.Rautioetal.,Prodrugs:Designand Clinical Applications,Nature ReviewDrug Discovery,2008,7,255-270,and S.J.Heckeretal.,Prodrugs of PhosphatesandPhosphonates,Journal of Medicinal Chemistry,2008,51,2328-2345。

本发明所使用的术语“代谢产物”是指具体的化合物或其盐在体内通过代谢作用所得到的产物。一个化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过如本发明所描述的那样采用试验的方法进行表征。这样的产物可以是通过给药化合物经过氧化，还原，水解，酰氨化，脱酰氨作用，酯化，脱脂作用，酶裂解等等方法得到。相应地，本发明包括化合物的代谢产物，包括将本发明的化合物与哺乳动物充分接触一段时间所产生的代谢产物。

药学上可接受的盐可以是例如在链或环中具有氮原子的具有足够碱性的本发明的化合物的酸加成盐，例如与如下无机酸形成的酸加成盐：例如盐酸、氢氟酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、焦硫酸、磷酸或硝酸，或硫酸氢盐、或者与如下有机酸形成的酸加成盐：例如甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、己二酸、藻酸、马来酸、富马酸、D-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸或硫氰酸。

另外，具有足够酸性的本发明的化合物的另一种适合的药学上可接受的盐是碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐或镁盐)、铵盐，或与提供生理学可接受的阳离子的有机碱形成的盐，例如与如下物质形成的盐：钠离子、钾离子、N-甲基葡糖胺、二甲基葡糖胺、乙基葡糖胺、赖氨酸、二环己基胺、1,6-己二胺、乙醇胺、葡糖胺、葡甲胺、肌氨酸、丝氨醇、三羟基甲基氨基甲烷、氨基丙二醇、1-氨基-2,3,4-丁三醇。作为实例，所述药学上可接受的盐包括基团-COOH与如下物质形成的盐：钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、N-甲基葡糖胺、二甲基葡糖胺、乙基葡糖胺、赖氨酸、二环己基胺、1,6-己二胺、乙醇胺、葡糖胺、葡甲胺、肌氨酸、丝氨醇、三羟基甲基氨基甲烷、氨基丙二醇、1-氨基-2,3,4-丁三醇。

另外，碱性含氮基团可用如下试剂季铵化：低级烷基卤化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；长链卤化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物如苄基和苯乙基溴化物等。作为实例，药学上可接受的盐包括盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、氢溴酸盐、醋酸盐、草酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、甲酸盐或葡甲胺盐等。

由于本发明的化合物可存在多个成盐位点，所述药学上可接受的盐不仅包括本发明化合物其中1个成盐位点上形成的盐，而且还包括其中2、3或全部成盐位点上形成的盐。为此，所述药学上可接受的盐中式(I)化合物与成盐所需的酸的根离子(阴离子)或碱的阳离子摩尔比可以在较大的范围内变化，例如可以是4:1～1:4，如3:1、2:1、1:1、1:2、1:3等。

本发明的“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物所形成的缔合物。形成溶剂化物的溶剂包括，但并不限于，水，异丙醇，乙醇，甲醇，二甲亚砜，乙酸乙酯，乙酸和氨基乙醇。术语“水合物”是指溶剂分子是水所形成的缔合物。

本发明的“酯”是指含有羟基或羧基的化合物形成的体内可水解的酯。这样的酯是，例如在人或动物体内水解产生母体醇或酸的药学上可接受的酯。本发明式(I)化合物含有羧基，可以与适当的基团形成体内可水解的酯，这样的基团包括，但不限于，烷基、芳基烷基等。

如本发明所使用的术语“治疗”任何疾病或病症，在其中一些实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一些实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在另一些实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在另一些实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发生或恶化。

术语“有效量”或者“治疗有效量”是指足以实现预期应用(包括但不限于如下定义的疾病治疗)的本发明所述化合物的量。治疗有效量可以取决于以下因素而改变：预期应用(体外或者体内)，或者所治疗的受试者和疾病病症如受试者的重量和年龄、疾病病症的严重性和给药方式等，其可以由本领域普通技术人员容易地确定。具体剂量将取决于以下因素而改变：所选择的特定化合物、所依据的给药方案、是否与其它化合物组合给药、给药的时间安排、所给药的组织和所承载的物理递送系统。

所述的药用辅料可为药物生产领域中广泛采用的辅料。辅料主要用于提供一个安全、稳定和功能性的药物组合物，还可以提供方法，使受试者接受给药后活性成分以所期望速率溶出，或促进受试者接受组合物给药后活性成分得到有效吸收。所述的药用辅料可以是惰性填充剂，或者提供某种功能，例如稳定该组合物的整体pH值或防止组合物活性成分的降解。所述的药用辅料可以包括下列辅料中的一种或多种：粘合剂、助悬剂、乳化剂、稀释剂、填充剂、成粒剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘着剂、助流剂、润湿剂、胶凝剂、吸收延迟剂、溶解抑制剂、增强剂、吸附剂、缓冲剂、螯合剂、防腐剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。

可作为药学上可接受辅料的物质包括，但并不限于，离子交换剂，铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白，如人血清蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘氨酸，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶体硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，聚丙烯酸脂，蜡，聚乙烯-聚氧丙烯-阻断聚合体，羊毛脂，糖，如乳糖，葡萄糖和蔗糖；淀粉如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素和它的衍生物如羧甲基纤维素钠，乙基纤维素和乙酸纤维素；树胶粉；麦芽；明胶；滑石粉；辅料如可可豆脂和栓剂蜡状物；油如花生油，棉子油，红花油，麻油，橄榄油，玉米油和豆油；二醇类化合物，如丙二醇和聚乙二醇；酯类如乙基油酸酯和乙基月桂酸酯；琼脂；缓冲剂如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原的水；等渗盐；林格(氏)溶液；乙醇，磷酸缓冲溶液，和其他无毒的合适的润滑剂如月桂硫酸钠和硬脂酸镁，着色剂，释放剂，包衣衣料，甜味剂，调味剂和香料，防腐剂和抗氧化剂。

本发明的药物组合物可根据公开的内容使用本领域技术人员已知的任何方法来制备。例如，常规混合、溶解、造粒、乳化、磨细、包封、包埋或冻干工艺。

本发明药物的剂型可根据具体情况进行选择。药物剂型常常由药物、赋形剂和容器/密封系统组成。可将一种或多种赋形剂(又称为非活性成分)添加到本发明的化合物中来改善或促进药物的制造、稳定性、给药和安全性，并且可提供获得所需药物释放曲线的方法。因此，添加到药物中的赋形剂类型可视各种因素而定，例如药物的物理和化学特性、给药途径和制备步骤。在该领域中存在药用赋形剂并且包括各种药典中所列的那些。本发明的药物组合物可包括一种或一种以上生理学上可接受的非活性成分，这些非活性成分会促进活性分子被加工成用于医药用途的制剂。

适当的制剂视所需的给药途径而定。给药途径包括静脉注射、经粘膜或鼻给药、口服给药等。对于口服给药来说，化合物可配制成液体或固体剂型并作为速释或控释/缓释制剂。用于个体口服摄取的合适剂型包括片剂、药丸、糖衣药丸、硬壳和软壳胶囊、液体、凝胶、糖浆、膏剂、悬浮液和乳液。

固体口服剂型可使用赋形剂获得，所述赋形剂包括填充剂、崩解剂、粘合剂(干和湿)、溶解延缓剂、润滑剂、助流剂、抗粘剂、阳离子性交换树脂、湿润剂、抗氧化剂、防腐剂、着色剂和调味剂。这些赋形剂可为合成或天然来源。所述赋形剂的实例包括纤维素衍生物、柠檬酸、磷酸二钙、明胶、碳酸镁、月桂基硫酸镁/月桂基硫酸钠、甘露糖醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸盐、二氧化硅、苯甲酸钠、山梨糖醇、淀粉、硬脂酸或其盐、糖(即右旋糖、蔗糖、乳糖等)、滑石、西黄蓍胶浆、植物油(氢化)和蜡。乙醇和水可用作造粒助剂。在某些情况下，需要用例如掩味膜、抗胃酸膜或延缓释放膜来涂覆片剂。常常将天然和合成的聚合物与着色剂、糖和有机溶剂或水组合用于涂覆片剂，从而产生糖衣药丸。当胶囊优于片剂时，可以用兼容的硬壳或软壳胶囊形式递送其药物粉末、悬浮液或溶液。

治疗有效剂量可首先使用本领域中熟知的各种方法来估算。用于动物研究的初始剂量可基于细胞培养测定中所确立的有效浓度。适合于人体的剂量范围例如可使用从动物研究和细胞培养测定所获得的数据来确定。在某些实施方案中，可以将本发明的化合物制备为用于口服的药剂。

可根据本领域中已知的方法，考虑个体状况的特殊性来选择正确的制剂、给药途径、剂量和给药间隔时间。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

附图说明

图1式(I)化合物抑制Aβ聚集和促进解聚作用评价。

图2式(I)化合物的体外抗氧化活性评价。

图3化合物5n在原代培养小胶质细胞中对iba1和iNOS表达的影响。

图4化合物5n在原代培养小胶质细胞中对SYK和TREM2表达的影响。

图5式(I)化合物的制备流程路线图。

具体实施方式

下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

实施例1

(E)-3-羟基-6-(羟甲基)-2-苯乙烯基-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

将曲酸1(12.0g,84mmol)、NBS(18.0g,101mmol)和乙酸铵(6.5g,84mmol)依次加入到120mL四氢呋喃中，并在65℃下搅拌回流过夜。TLC监测反应完全。待反应混合物冷却至室温后，过滤除去不溶物。将滤液浓缩至干，得到淡黄色固体化合物2(13.6g,73％)。

步骤2：

将化合物2(15.0g,68mmol)、K₂CO₃(14.1g,102mmol)和溴化苄(10mL,81mmol)依次加入到150mL乙腈中，并在70℃下搅拌过夜。TLC监测反应完全。待反应混合物冷却至室温后，过滤除去不溶物。将滤液浓缩至干，得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析纯化，得到黄色油状液体化合物3(12.2g,58％)。

步骤3：

称取化合物3(1.50g,4.82mmol)和苯乙烯(0.60g,5.79mmol)添加到三乙胺(0.98g,9.64mmol)在15mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.10g,0.48mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4a(0.80g,50％)。

步骤4：

称取4a 0.50g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5a(0.22g,60％)。

实施例2

(E)-3-羟基-6-(羟甲基)-2-(4-甲基苯乙烯基)-4H-吡喃-4-酮

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步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.50g,4.82mmol)和4-甲基苯乙烯(0.68g,5.79mmol)添加到三乙胺(0.98g,9.64mmol)在15mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.10g,0.48mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4b(0.84g,50％)。

步骤4：

称取4b 0.50g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5b(0.20g,56％)。

实施例3

(E)-2-(4-(叔丁基)苯乙烯基)-3-羟基-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取化合物3(1.20g,3.86mmol)和4-叔丁基苯乙烯(0.74g,4.63mmol)添加到三乙胺(0.78g,7.71mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.39mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4c(0.70g,47％)。

步骤4：

称取4c 0.60g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5c(0.30g,66％)。

实施例4

(E)-3-羟基-6-(羟甲基)-2-(4-(三氟甲基)苯乙烯基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.20g,3.86mmol)和对三氟甲基苯乙烯(0.80g,4.63mmol)添加到三乙胺(0.78g,7.71mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.39mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4d(0.70g,45％)。

步骤4：

称取4d 0.60g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5d(0.26g,55％)。

实施例5

(E)-2-(3-氟-4-羟基苯乙烯基)-3-羟基-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.30g,4.18mmol)和2-氟-4-乙烯基苯酚(0.70g,5.01mmol)添加到三乙胺(0.85g,8.36mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.42mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4e(0.66mg,43％)。

步骤4：

称取4e 0.50g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5e(0.20g,53％)。

实施例6

(E)-2-(4-氟-3-羟基苯乙烯基)-3-羟基-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.30g,4.18mmol)和2-氟-5-乙烯基苯酚(0.70g,5.01mmol)添加到三乙胺(0.85g,8.36mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.42mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4f(0.69mg,45％)。

步骤4：

称取4f 0.50g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5f(0.22g,58％)。

实施例7

(E)-3-羟基-6-(羟甲基)-2-(4-硝基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.20g,3.86mmol)和4-硝基苯乙烯(0.69g,4.63mmol)添加到三乙胺(0.78g,7.71mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.39mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4g(0.70g,48％)。

步骤4：

称取4g 0.60g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5g(0.26g,56％)。

实施例8

(E)-3-羟基-6-(羟甲基)-2-(2-甲氧基苯乙烯基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.20g,3.86mmol)和2-甲氧基苯乙烯(0.62g,4.63mmol)添加到三乙胺(0.78g,7.71mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.39mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4h(0.70g,50％)。

步骤4：

称取4h 0.55g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5h(0.21g,51％)。

实施例9

(E)-3-羟基-6-(羟甲基)-2-(4-甲氧基苯乙烯基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.20g,3.86mmol)和4-甲氧基苯乙烯(0.62g,4.63mmol)添加到三乙胺(0.78g,7.71mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.39mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4i(0.68g,48％)。

步骤4：

称取4i 0.50g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5i(0.23g,61％)。

实施例10

(E)-3-羟基-2-(4-羟基-3-甲氧基苯乙烯基)-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.20g,3.86mmol)和2-甲氧基-4-乙烯基苯酚(0.70g,4.63mmol)添加到三乙胺(0.78g,7.71mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.39mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4j(0.72g,49％)。

步骤4：

称取4j 0.6g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5j(0.24g,52％)。

实施例11

(E)3-羟基-2-(3-羟基-4-甲氧基苯乙烯基)-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.20g,3.86mmol)和4-甲氧基-3羟基苯乙烯(0.70g,4.63mmol)添加到三乙胺(0.78g,7.71mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.39mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4k(0.70g,48％)。

步骤4：

称取4k 0.60g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5k(0.22g,48％)。

实施例12

(E)-2-(3,4-二甲氧基苯乙烯)-3-羟基-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.0g,3.21mmol)和3,4-二甲氧基苯乙烯(0.63g,3.86mmol)添加到三乙胺(0.65g,6.43mmol)在10mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.07g,0.32mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4l(0.71g,56％)。

步骤4：

称取4l 0.60g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5l(0.25g,54％)。

实施例13

(E)-2-(4-氟苯乙烯基)-3-羟基-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取化合物3(1.50g,4.82mmol)和4-氟苯乙烯(0.71g,5.79mmol)添加到三乙胺(0.98g,9.64mmol)在15mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.10g,0.48mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4m(0.73g,43％)。

步骤4：

称取4m 0.50g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5m(0.22g,59％)。

实施例14

(E)-2-(2-氯苯乙烯基)-3-羟基-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.20g,3.86mmol)和2-氯苯乙烯(0.64g,4.63mmol)添加到三乙胺(0.78g,7.71mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.39mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4n(0.68g,48％)。

步骤4：

称取4n 0.50g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5n(0.21g,56％)。

实施例15

(E)-2-(3-氯苯乙烯基)-3-羟基-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.20g,3.86mmol)和间氯苯乙烯(0.64g,4.63mmol)添加到三乙胺(0.78g,7.71mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.39mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4o(0.64g,45％)。

步骤4：

称取4o 0.50g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5o(0.20g,54％)。

实施例16

(E)-2-(4-氯苯乙烯基)-3-羟基-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.20g,3.86mmol)和对氯苯乙烯(0.64g,4.63mmol)添加到三乙胺(0.78g,7.71mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.39mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4p(0.70g,49％)。

步骤4：

称取4p 0.50g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5p(0.23g,61％)。

实施例17

(E)-3-羟基-6-(羟甲基)-2-(2-(萘-2-基)乙烯基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.20g,3.86mmol)和2-烯基萘(0.71g,4.63mmol)添加到三乙胺(0.78g,7.71mmol)在12mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.09g,0.39mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4q(0.74g,50％)。

步骤4：

称取4q 0.60g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5q(0.24g,53％)。

实施例18

(E)-2-(2-([1,1'-联苯]-4-基)乙烯基)-3-羟基-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

称取3(1.00g,3.21mmol)和4-乙烯基联苯(0.70g,3.86mmol)添加到三乙胺(0.65g,6.43mmol)在10mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的溶液中。在N₂保护下，将醋酸钯(0.07g,0.32mmol)加入反应混合物中，80℃搅拌过夜。通过TLC检测反应完成。向反应混合物中加入适量的水，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用水洗涤并用Na₂SO₄干燥。并将有机层减压浓缩至干得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到产物4r(0.70g,53％)。

步骤4：

称取4r 0.60g溶于5mL CH₃OH中，加入6mol/L盐酸，80℃搅拌，直至TLC显示原料完全消耗。室温抽滤后，再加入乙酸乙酯4mL搅拌1h，再抽滤得到产物5r(0.26g,56％)。

实施例19

(E)-3-羟基-6-(羟甲基)-2-(4-羟基苯乙烯基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

同实施例9的步骤3。

步骤4：

同实施例9的步骤4。

步骤5：

称取5i 0.20g，溶于10mL二氯甲烷中，在N₂保护下滴加BBr₃ 0.5mL，0℃下搅拌，TLC检测反应完全。加水淬灭反应，减压浓缩至干，得到粗品。粗品经硅胶色谱纯化，得到产物6I(0.11g,58％)。

实施例20

(E)-2-(3,4-二羟基苯乙烯基)-3-羟基-6-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮

步骤1：

同实施例1的步骤1。

步骤2：

同实施例1的步骤2。

步骤3：

同实施例12的步骤3。

步骤4：

同实施例12的步骤4。

步骤5：

称取5l 0.20g，溶于10mL二氯甲烷中，在N₂保护下滴加BBr₃ 0.5mL，0℃下搅拌，TLC检测反应完全。加水淬灭反应，减压浓缩至干，得到粗品。粗品经硅胶色谱纯化，得到产物6L(0.10g,55％)。

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效果例1：体外Aβ_1-42聚集抑制及解聚试验

1实验材料

化合物：实施例1-20；对比例白藜芦醇

2实验方法

所有化合物均在50μM的浓度进行筛选，实验设置3个复孔，独立实验3次。

1)自诱导Aβ_1-42聚集抑制实验

将10μL待测化合物(50μM，终浓度)或PBS(即空白组)与10μL Aβ_1-42(25μM，终浓度)在37℃避光孵育24h。孵育后，将20μL样品提取到黑色96孔板中，加180μL含有5μM ThT的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液(50mM，pH 8.5)稀释至200μL，低速振荡5min后用多功能酶标仪测定荧光强度。(激发波长为450nm，发射波长为490nm)

2)自诱导Aβ_1-42解聚实验

预先将10μL Aβ_1-42(25μM，终浓度)在37℃避光孵育24h后，加入10μL待测化合物(50μM，终浓度)或PBS(即空白组)继续37℃避光孵育24h。孵育后，将20μL样品提取到黑色96孔板中，加180μL含有5μM ThT的50mM gly-NaOH缓冲液(pH 8.5)稀释至200μL，低速振荡5min后用多功能酶标仪测定荧光强度。(激发波长为450nm，发射波长为490nm)

3实验结果

如图1所示，在50μM浓度下，实施例1-20的化合物均对Aβ_1-42具有抑制活性，抑制率从17.07％至73.92％不等，其中，化合物6L具有最高的抑制活性。

同时，50μM浓度下，化合物对Aβ_1-42纤维的解聚率的范围从1.26％到67.32％不等，化合物5g显示最强的解聚活性。

效果例2体外抗氧化活性评价

1实验材料

化合物：实施例1-20；对比例Trolox和白藜芦醇

2实验方法

所有化合物均在2μM的浓度进行筛选，实验设置3个复孔，独立实验3次。

将120μL荧光素(FL，70nM，终浓度)和20μL待测化合物(2μM，终浓度)添加到全黑96孔板中，37℃孵育15min后，用多道移液枪快速加入60μL 2,2'-偶氮二异丁基脒二盐酸盐溶液(AAPH，12mM，终浓度)，每分钟记录一次荧光，持续120min，在每次读取前自动摇晃孔板。用PBS代替测试化合物作为空白组。(激发波长为485nm；发射波长为535nm)

ORAC-FL值计算公式：

[(AUC_S-AUC₀)/(AUC_T-AUC₀)]×[C_T/C_S]

AUC_S：待测组的AUC；AUC₀：空白组的AUC；AUC_T：Trolox的AUC；

C_T：Trolox的浓度；C_S：样品的浓度

3实验结果

如图2所示，在测试的20个化合物中，与Trolox相比，绝大多数化合物都具有较好的抗氧化活性。其中，化合物6I(ORAC＝3.65eq.)的抗氧化活性表现最为突出，优于白藜芦醇(ORAC＝3.26eq.)。

效果例3.体外抗炎活性评价

1实验材料

化合物：实施例14(5n)；对比例白藜芦醇

2实验方法

本实验采用小鼠小胶质细胞(BV-2)为模型，首先通过MTT法测试化合物对BV-2是否有细胞毒性，排除化合物对细胞生长活性的干扰，取细胞存活率>90％时的药物浓度，采用Griess法测定培养基中NO含量。

(1)MTT法检测各化合物对BV-2细胞活力的影响

在96孔板中接种100μL BV-2细胞悬液(细胞密度为5×10³个/孔)，置于37℃，5％CO₂培养24h后给药。设置背景孔、待测组和空白组均为3个复孔，待测组加入不同浓度的样品溶液(空白组加入DMEM培养基)。继续培养24h后每孔加20μL MTT溶液(5mg/mL)，培养箱孵育4h后，形成结晶，吸去上清，每孔加入150μL DMSO，置摇床上低速振荡15min，使结晶物充分溶解。在酶标仪上测定490nm处各孔的吸光值，按下式计算细胞存活率。

细胞生存率＝(OD_s-OD_r)/(OD₀-OD_r)×100％

OD_s：样品组的吸光度；OD_r：背景组的吸光度；OD₀：空白组的吸光度。

(2)Griess法检测各化合物对LPS诱导BV-2细胞释放NO影响

在96孔板中接种100μL BV-2细胞悬液(细胞密度为5×10⁴个/孔)，培养24h后先加入LPS(1μg/mL)作用1h，再给药，继续培养24h后，取细胞上清液50μL转移至另一96孔板中，加入Griess A、B试剂各50μL，暗处避光反应10min，于540nm处测定OD值。根据NaNO₂制作的标准曲线计算NO的浓度。

实验设置空白组(加入DMEM培养基，无LPS刺激)、LPS模型组(加入DMEM培养基，有LPS刺激)、阳性药物组(白藜芦醇，有LPS刺激)、待测组(药物，有LPS刺激)，各3个复孔，独立实验3次。

3实验结果。

(1)MTT法检测各化合物对BV-2细胞活力的影响

采用MTT法测定化合物在浓度为5μM时，细胞存活率均大于90％，而其余浓度均小于90％，因此在这个条件进行下一步NO的测定。

(2)Griess法检测各化合物对LPS诱导BV-2细胞释放NO影响

化合物5n(NO的产生率为72.42％)的抗炎活性优于白藜芦醇(NO的生成率为81.77％)。

效果例4原代培养小胶质细胞抗炎活性评价

1实验材料

化合物：实施例14(5n)

2实验方法

2.1原代小胶microglia的制备

1)物品准备：将解剖器械用75％酒精消毒，超净台UV照射15-30min。取15mL的离心管，溶木盐中加入20U/mL的木瓜蛋白酶、0.5mM EDTA和0.2mg/mL的L-半胱氨酸(约2mL/只)配制木瓜蛋白酶溶液，先保存于4℃冰箱中。

2)取刚出生0-2天的C57BL/6J新生鼠，用75％酒精消毒，快速断头后取出全脑，分离出皮层组织。用吸管将大脑组织小心移入装有消化酶的50mL离心管内，37℃水浴锅内消化18min(期间每5分钟摇晃一次以保证组织充分与消化酶接触)。

3)将离心管取出静置待组织下沉至管底后弃木瓜蛋白酶溶液，加入适量含10％FBS的培养基终止消化并冲洗两遍，后加入1.2-1.5mL含10％FBS的DMEM培养基(GM，DMEM+10％FBS)，用1.0mL枪头吹打8-10次，使组织块分散，细胞均匀悬浮。

4)根据实际培养数量将细胞悬液接种到25cm²培养瓶(每瓶2.5ml)或6孔板(每孔1mL)。将培养皿放置于37℃、5％CO₂及饱和湿度的培养箱中常规培养。

5)小胶质细胞的收集与种植：上述细胞培养到第11-14天后可以进行小胶质细胞的收集。将培养皿中上层培养液收集到50mL离心管中，1200rpm离心10-12min，连续两遍。离心结束后大部分培养液转移到新的50mL离心管中，余下大概5-6mL吹打混匀，接种到24孔板PDL包被的玻片上，在加入细胞悬液2-5h后加入GDM+CSF(GDM一般是把GM加到长满的astrocyte处理5-16h，CSF浓度为25ng/mL)，2-3d后可开始实验。

2.2化合物5n对LPS刺激的原代小胶质细胞(microglia)炎症模型的干预作用

化合物5n对于LPS刺激microglia iNOS和Iba1的作用。

组别与干预：24孔板中microglia，培养24h后先加入LPS(10ng/mL)作用1h，再给予10μM 5n，继续培养24h。实验设置空白组(加入DMEM培养基，无LPS刺激)、LPS模型组(加入DMEM培养基，有LPS刺激)、待测组(5n，有LPS刺激)，各3个复孔，独立实

细胞免疫荧光：

细胞从37℃孵箱中取出；用室温的PBS洗2次；4％的多聚甲醛4℃固定15分钟，1×PBS洗3次，每次5分钟，然后用含有0.1％Triton X-100的封闭液室温封闭1.5小时。用一抗稀释液稀释相应一抗，4℃孵育过夜，然后TBST洗3次，每次10分钟。对应的二抗闭光孵育1小时，然后TBST洗3次，每次10分钟。最后，DAPI(1:1000)染核10分钟后封片。荧光显微镜拍摄。

2.3化合物5n对Aβ刺激的原代小胶质细胞(microglia)炎症模型的干预作用

采用1μM Aβ刺激microglia 24h用于制作原代小胶细胞的炎症模型，在此基础上加10μM 5n共孵育24h，免疫荧光法观察5n对于SYK和TREM2的作用。方法参见2.2。

3实验结果

从图3可以看出，在LPS的刺激下，Iba1和iNOS表达增加，说明LPS导致了microglia的炎症反应，在5n的作用，可明显下调Iba1和iNOS表达。提示，5n对LPS刺激的microglia炎症有显著的下调作用。

从图4可以看出，在Aβ的刺激下，SYK和TREM2表达下降，说明，Aβ的刺激导致了microglia的吞噬功能的下降，在5n的作用，可明显上调SYK和TREM2的表达。提示，5n可对抗Aβ刺激的microglia吞噬功能的下降。

以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种式(I)所示的乙烯基吡喃酮类化合物、其立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐或前药，

R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代C1-10烷基；

R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C20芳基、5-20元杂芳基、3-20元杂环基；

R_a相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、羟基、硝基、氨基、氰基、C1-10烷基；

R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-10烷基、C1-10烷氧基、C1-10烷基酯基、C6-C20芳基、3-20元杂环基、5-20元杂芳基；其中，C1-10烷基、C1-10烷氧基、C1-10烷基酯基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C20芳基、3-20元杂环基、5-20元杂芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-10烷基、C1-10烷氧基、C1-10烷基酯基取代。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，

R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代C1-6烷基；

优选的，R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代C1-3烷基；

进一步优选的，R₁选自任选的被一个、两个或多个R_a取代的甲基；

例如，R₁选自被羟基取代的甲基。

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，

R_a相同或不同，彼此独立地选自H、卤素、羟基、硝基、氨基、氰基。

4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，

R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C10芳基、5-10元杂芳基、3-10元杂环基；

优选的，R₂选自任选的被一个、两个或多个R_b取代的C6-C10芳基(例如C6芳基、C10芳基)。

5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物，其特征在于，

R_b相同或不同，彼此独立地选自H、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基、C6-C10芳基、3-10元杂环基、5-10元杂芳基；其中，C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C10芳基、3-10元杂环基、5-10元杂芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基取代；

优选的，R_b选自H、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基、C6-C10芳基；其中，C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基任选的被一个、两个或多个卤素取代，C6-C10芳基任选的被一个、两个或多个羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基酯基取代。

6.如下所示的乙烯基吡喃酮类化合物、其立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐或前药：

7.权利要求1-6任一项所述的化合物的制备方法，

其中，R₁、R₂的定义如权利要求1-6任一项所述。

8.一种药物组合物，包括权利要求1-6任一项所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐、前药中的一种、两种或更多种。

9.权利要求1-6任一项所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐、前药在制备预防和/或治疗阿尔茨海默症的药物中的应用。

10.权利要求1-6任一项所述的化合物、其立体异构体、互变异构体、同位素标记物、氮氧化物、溶剂化物、多晶型物、代谢产物、酯、药学上可接受的盐、前药在制备抑制Aβ蛋白沉积、抗炎、抗氧化的药物中的应用。