CN116925248A

CN116925248A - 一种蒲黄均一多糖及其制备方法与降血脂用途

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Publication number: CN116925248A
Application number: CN202210370057.5A
Authority: CN
Inventors: 王顺春; 徐永斌; 王辉俊; 施松善; 陈洁; 高唯; 赵咏麟; 龚欢
Original assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2022-04-08
Filing date: 2022-04-08
Publication date: 2023-10-24
Anticipated expiration: 2042-04-08
Also published as: CN116925248B

Abstract

本发明公开了一种蒲黄均一多糖，其分子量为5.4×10⁴±3.0×10⁴Da，由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖和半乳糖组成，单糖摩尔比为鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：半乳糖＝(10.00～20.00):(45.00～55.00):(4.00～5.00):(30.00～40.00)。该蒲黄均一多糖制备工艺简单，可用于预防和/或治疗高血脂症，具有开发成低毒高效的降血脂药品、食品和/或保健品的潜在价值。

Description

一种蒲黄均一多糖及其制备方法与降血脂用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地，涉及降血脂药物领域，更具体地，本发明涉及从蒲黄中提取的均一多糖。本发明还涉及含有它们的药物制剂、其制备方法、以及其用于预防和/或治疗高血脂症的用途。

背景技术

目前，高脂血症是一种脂质代谢紊乱，体内脂肪异常代谢，血浆脂质水平高于正常范围的疾病。目前临床治疗高脂血症的主要用药为他汀类，其药物作用机制决定了自身产生的毒副作用如肝损伤等，并且其与其他药物交互作用往往会呈现加大毒副作用或降低药效的状况，一定程度上制约了其更为广泛的应用。因此，从天然产物中寻找毒副作用小的有效物质来治疗高脂血症已经成为研究热点。

中药多糖被报道可以通过各种不同的机制发挥降血脂作用，但大多数中药多糖不能被直接消化和利用，必须经过肠道微生物发酵降解才能被吸收利用。肠道微生物与多种代谢性疾病密切相关，其代谢产物胆汁酸、短链脂肪酸是影响脂质代谢的关键介导因素，因此肠道菌群已成为防治高脂血症的新靶标。

蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲Typha angustifolia L.、东方香蒲Typhaorientalis Presl或同属植物的干燥花粉。蒲黄生物活性成分的研究主要集中在其小分子成分，特别是黄酮类成分，它们在改善微循环、调节脂质和糖代谢和免疫调节方面有很好的效果，但对蒲黄中的大分子成分的结构及其药效研究较少。

发明内容

正如背景技术部分所描述的，现有上市的降血脂药物存在严重的不良反应、毒性较大、药物作用机制较为单一的问题。为了解决上述问题，本发明提供了一种蒲黄均一多糖，分子量为5.4×10⁴±3.0×10⁴Da，由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖和半乳糖组成，单糖摩尔比为鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：半乳糖＝(10.00～20.00):(45.00～55.00):(4.00～5.00):(30.00～40.00)。

进一步地，该分子量为5.4×10⁴±2.0×10⁴Da。

进一步地，该分子量为5.4×10⁴±1.0×10⁴Da。

进一步地，峰高分子量为约5.4×10⁴Da。

关于数值的术语“约”或“大约”意指该数值的±5％，但明确地包括确切的数值。例如，“约5.4×10⁴Da”是指从5.13×10⁴Da至5.67×10⁴Da，但也明确地包括5.9×10⁴Da。

进一步地，该蒲黄为水烛香蒲、东方香蒲或其它蒲黄属植物的干燥花粉。

本发明的香蒲为沼泽多年生草本植物，高1～2m，根茎匍匐，有多数须根，其具有止血，化瘀，通淋等功效。

进一步地，鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：半乳糖＝(11.00～18.00):(46.00～53.00):(4.20～4.90):(31.00～38.00)。

进一步地，鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：半乳糖＝(12.00～16.00):(47.00～51.00):(4.30～4.80):(32.00～36.00)。

进一步地，鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：半乳糖＝(13.00～15.00):(47.00～50.00):(4.40～4.70):(32.00～35.00)。

进一步地，鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：半乳糖＝13.6:48.1:4.6:33.7。

进一步地，该蒲黄均一多糖的骨架包含鼠李糖和半乳糖。

进一步地，该蒲黄均一多糖的该骨架包含1,4-α-GalpA、1,2-β-Rhap。

进一步地，该蒲黄均一多糖的分支包含半乳糖、木糖和阿拉伯糖。

进一步地，该蒲黄均一多糖的该分支包含1,3-β-Galp、1,6-β-Galp、1,3,6-β-Galp、1,5-α-Araf、T-α-Araf、甲氧基团和T-β-Xylp。

根据本发明的另一个方面，提供了一种制备上述蒲黄均一多糖的方法，该方法包括下述步骤：

(1)将蒲黄药材用水进行加热提取，得到水提液；

(2)将该水提液进行浓缩后离心以除去不溶物，得到浓缩液；

(3)将该浓缩液进行乙醇沉淀，离心以分离沉淀，得到沉淀部分；

(4)将该沉淀部分洗涤后加入水溶解并冷冻干燥，得到蒲黄粗多糖；

(5)将该蒲黄粗多糖用水溶解后离心，得到第一上清液；以及

(6)将该第一上清液进行DEAE琼脂糖凝胶柱层析和Superdex^TM 75凝胶柱层析，采用H₂O和/或0.1～2.0mol/L氯化钠溶液进行洗脱，检测糖峰并收集含糖流份，得到该蒲黄均一多糖。

进一步地，该方法包括如下的[1]～[20]项中的任意一项或者多项：

[1]将该蒲黄药材进行粉碎；

[2]步骤(1)中所用水为蒸馏水或去离子水；

[3]步骤(1)中，该温度为50℃～100℃，优选为80℃～100℃，例如约100℃；

[4]将步骤(1)中的该加热提取的操作重复一次或者多次，例如3次，合并后得到该水提液；

[5]步骤(1)中水的用量为1～50倍量(L/kg)，优选为5～30倍量，更优选为6～20倍量，又优选为8～15倍量，例如约10倍量；

[6]步骤(1)中的该加热提取的时间为1～10小时，优选为2～8小时，更优选为3～5小时，例如约3小时；

[7]步骤(2)中，该离心的条件为在2000×g～6000×g转速下离心10～30分钟，优选为在3000×g～5000×g转速下离心15～30分钟，更优选为在3500×g～4500×g转速下离心15～25分钟，例如在约4000×g转速下离心约20分钟；

[8]步骤(3)中，该乙醇沉淀所用的该乙醇的浓度为60％～98％，优选为80％～98％，例如约95％；

[9]步骤(3)中所用的该乙醇的量为该浓缩液的1～5倍体积，例如约3倍体积；

[10]步骤(3)中该乙醇沉淀的时间为至少12小时、至少24小时、24～72小时或者48小时，例如约24小时；

[11]步骤(3)中，该离心的条件为在2000×g～6000×g转速下离心10～30分钟，优选为在3000×g～5000×g转速下离心15～30分钟，更优选为在3500×g～4500×g转速下离心15～25分钟，例如在约4000×g转速下离心约20分钟；

[12]该沉淀部分洗涤所用的该乙醇的浓度为60％～98％，优选为80％～98％，例如约95％；

[13]步骤(5)中水的用量为1～50倍量(mL/g)，优选为5～30倍量(mL/g)，更优选为6～20倍量(mL/g)，又优选为8～15倍量(mL/g)，例如约10倍量(mL/g)；

[14]步骤(5)中，该离心的条件为在6000×g～15000×g转速下离心5～20分钟，优选为在8000×g～12000×g转速下离心5～15分钟，例如在约10000×g转速下离心约10分钟；

[15]步骤(6)中，该第一上清液通过DEAE琼脂糖凝胶柱例如DEAE琼脂糖凝胶FF柱处理，分别用水、不同浓度的0.1－2.0mol/L氯化钠溶液依次洗脱，经浓缩、透析和冷冻干燥后，得到包含该蒲黄均一多糖的馏分；

[16]在[15]项中，将该包含该蒲黄均一多糖的馏分溶解在氯化钠溶液中并离心，得到第二上清液；

[17]在[16]项中，该氯化钠溶液的用量为0.01～0.1倍量(mL/mg)，优选为0.02～0.08倍量(mL/mg)，更优选为0.03～0.06倍量(mL/mg)，例如约0.04倍量(mL/mg)；

[18]在[16]项中，该氯化钠溶液的浓度为0.1～2.0mol/L，优选为0.1～1.0mol/L，例如约0.2mol/L，

[19]在[16]项中，该离心的条件为在6000×g～15000×g转速下离心5～20分钟，优选为在8000×g～12000×g转速下离心5～15分钟，例如在约10000×g转速下离心约10分钟；

[20]步骤(6)中，该第二上清液通过Superdex^TM 75凝胶柱层析，以0.1～2.0mol/L，优选为0.1～1.0mol/L，例如约0.2mol/L氯化钠溶液作为流动相进行洗脱。

关于数值的术语“约”或“大约”意指该数值的±5％，但明确地包括确切的数值。例如，“约10倍量”是指从9.5倍量至10.5倍量，但也明确地包括10倍量；“约3小时”是指从2.85小时至3.15小时，但也明确地包括3小时；“约4000×g转速”是指从3800×g转速至4200×g转速，但也明确地包括4000×g转速；“约20分钟”是指从19分钟至21分钟，但也明确地包括20分钟。

根据本发明的另一个方面，提供了一种蒲黄均一多糖，其由上述方法制得。

根据本发明的另一个方面，提供了一种蒲黄药物制剂，其包含上述蒲黄均一多糖，以及任选的药学上可接受的辅料。

进一步地，该蒲黄药物制剂进一步包含其它具有降血脂活性的药物或其它具有调整肠道菌群作用的药物。

进一步地，该蒲黄药物制剂为口服制剂、注射制剂或冻干粉针剂。

根据本发明的另一个方面，提供了一种上述蒲黄均一多糖或上述蒲黄药物制剂在制备用于预防和/或治疗高血脂症的药品、食品和/或保健品中的用途。

根据本发明的另一个方面，提供了一种上述蒲黄均一多糖或上述蒲黄药物制剂在制备用于调整肠道菌群的药品、食品和/或保健品中的用途。

进一步地，该调整为上调肠道内有益菌的丰度和/或下调肠道内有害菌的丰度。

进一步地，该有益菌选自以下的一种或多种：红蝽杆菌、毛螺菌和韦荣球菌。

进一步地，该有害菌为杜氏杆菌和/或粪杆菌。

根据本发明的另一个方面，提供了一种上述蒲黄均一多糖或上述蒲黄药物制剂，用于预防或治疗受试者中的高血脂症。

根据本发明的另一个方面，提供了一种上述蒲黄均一多糖或上述蒲黄药物制剂，用于预防或治疗受试者中的肠道菌群紊乱。

根据本发明的另一个方面，提供了一种预防或治疗受试者中的高血脂症的方法，包括向该受试者施用有效量的上述蒲黄均一多糖或上述蒲黄药物制剂。

根据本发明的另一个方面，提供了一种预防或治疗受试者中的肠道菌群紊乱的方法，包括向该受试者施用有效量的上述蒲黄均一多糖或上述蒲黄药物制剂。

本发明的有益效果：

在本发明中，从蒲黄中提取并纯化出一种均一多糖(PTPS-2-2)。通过一系列化学和物理分析方法对其结构进行表征，PTPS-2-2为一分子量为54kDa的RG-I型果胶多糖，其主链由-α-GalA-(4→1)-β-Rha-(2→1)-α-GalA-(4→1)-β-Rha-(2→组成，在1,2-β-Rhap的4位连有Araf-(1→5)-α-Araf-(1→5)-α-Araf-(1→，β-Gal-(1→6)-β-Gal-(1→6)-β-Gal-(1→3)-β-Gal-(1→3)-β-Gal-(1→，T-α-Araf等分支，在1,4-α-GalpA的3位连有甲氧基团以及T-β-Xylp。

在本发明中，PTPS-2-2可降低高血脂小鼠血清与肝脏中TC、TG、LDL-C水平，改善肝脏脂肪病变，且呈剂量依赖性；还可增加肠道Occludin蛋白和ZO-1蛋白的表达，促进肠紧密连接，减少LPS的释放，增加肠道乙酸、丁酸的浓度，保护肠道屏障。菌群测序发现PTPS-2-2上调了肠道内有益菌红蝽杆菌属(Coriobacteriaceae_UCG-002)、毛螺菌属(Lachnospiraceae)及韦荣球菌属(norank_f_Erysipelotrichaceae)丰度，下调有害菌属杜氏杆菌属(Dubosiella)、粪杆菌属(Faecalibaculum)丰度。进一步通过抗生素干扰以及粪菌移植实验验证，蒲黄均一多糖PTPS-2-2对于肠道红蝽杆菌的调控作用，是其发挥治疗高脂血症作用的关键。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图，而并不超出本发明要求保护的范围。

图1为蒲黄均一多糖(PTPS-2-2)纯化流程图。

图2为蒲黄PTPS-2馏分的分子筛凝胶色谱柱的洗脱曲线图。

图3为蒲黄均一多糖(PTPS-2-2)的HPLC图谱。

图4为PTPS-2-2单糖组成分析GC图谱。(a)单糖标准品；(b)均一多糖(PTPS-2-2)；(c)糖醛酸还原后的均一多糖(PTPS-2-2-Re)；(d)弱酸水解后的主链(PTPS-2-2-主)，其中1.鼠李糖；2.岩藻糖；3.阿拉伯糖；4.木糖；5.甘露糖；6.葡萄糖；7.半乳糖。

图5为PTPS-2-2的甲基化后GC图谱。(a)PTPS-2-2的甲基化后GC图；(b)PTPS-2-2-主的甲基化后GC图；(c)PTPS-2-2-Re的甲基化后GC图；(d)PTPS-2-2-RE-主的甲基化后GC图，其中T-Araf：端基呋喃环阿拉伯糖；1,5-Araf：1,5连接呋喃环阿拉伯糖；T-Xylp：端基吡喃环木糖；1,2-Rhap：1,2连接吡喃环鼠李糖；1,2,4-Rhap：1,2,4连接吡喃环鼠李糖；T-Galp：端基吡喃环半乳糖；1,4-Galp：1,4连接吡喃环半乳糖；1,3-Galp：1,3连接吡喃环半乳糖；1,6-Galp：1,6连接吡喃环半乳糖；1,3,4-Galp：1,3,4连接吡喃环半乳糖；1,3,6-Galp：1,3,6连接吡喃环半乳糖。

图6为蒲黄均一多糖(PTPS-2-2)的结构示意图。

图7为不同实验组对小鼠进食量和体重的影响；(a)动物实验流程；(b)小鼠进食量；(c)小鼠体重；n＝5；*P<0.05；**P<0.01 vs HFD组。

图8为不同实验组对小鼠血清中脂质的影响；(a)血清NEFA水平；(b)血清TC水平；(c)血清TG水平；(d)血清LDL-C水平；(e)血清HDL-C水平；n＝5；*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001 vs HFD组。

图9为不同实验组小鼠肝脏组织形态(HE染色)图。

图10为不同实验组小鼠肝组织形态(油红O染色)图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

除非另外说明，本文所用的所有技术和科学术语和缩略语具有本发明领域或该术语应用领域中普通技术人员通常所理解的含义。虽然本发明实施过程中可使用类似于或等价于本文公开的那些的任何药物组合、制备方法或材料，但本文描述了优选的药物组合、制备方法或材料。

本发明的术语“均一多糖”(homogeneous polysaccharide)具有本领域公知的含义，是指分子量和电荷均一的多糖。

本发明的术语“多糖”是指由通过配糖键或糖苷键连接的至少两个单糖单元制成的化合物。具有大于约10,000Da的分子量(以kDa表示，其中“Da”代表“道尔顿”且1kDa＝1,000Da)的多糖可被称为“高分子量多糖”。

在本发明中，摩尔比、当量、浓度或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“10.00～20.00”、“45.00～55.00”、“4.00～5.00”、“30.00～40.00”时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和非整数，且在上述数值范围内均能实现本发明的技术效果。

本发明所涉及的“其它具有降血脂活性的药物或其它具有调整肠道菌群作用的药物”包括但不限于他汀类药物(例如氟伐他汀、辛伐他汀、匹伐他丁汀、瑞舒伐他汀、阿托伐他汀等)、贝特类药物(例如非诺贝特)以及其他来源的生物多糖、中药有效成分等。

本发明的“口服制剂”包括但不限于散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂等。

本发明的术语“食品”、“保健品”、“食物产品”、“保健产品”、“保健组合物”或“食物组合物”的含义是期望被动物(包括人)摄入并向该动物提供营养或保健作用的产品或组合物。

在本发明中，术语“受试者”、“个体”或“患者”在此可互换地使用并且是指一种脊椎动物，优选一种哺乳动物。哺乳动物可以是人、非人灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马或牛，但不限于这些实例。除人以外的哺乳动物可以有利地用作代表高血脂模型的受试者。优选地，所述受试者是人。这样的受试者们典型地遭受或易于患有一种可以通过给予本发明的上述蒲黄均一多糖或上述蒲黄药物制剂来预防或治疗的病症。

本发明所用的药物组合物或制剂的“有效量”可以获得所需要的治疗和/或预防效果。对此用途有效的量将取决于例如递送的途径、所采用的具体的活性物质或制剂的活性、病症的类型、治疗的疾病的阶段和严重性、个体体重和总体健康状况、以及处方医师的判断。剂量的给予可以每周一次，或两天或每天一次，或甚至每天几次。可以在短期(例如数周至数月)或更长时间段(数月至数年)给予剂量单元。“有效量”具体指的是向所治疗的受试者赋予治疗作用(例如，控制、缓解、改善、缓和或减缓进展)；或预防(例如，延迟发作或降低发展风险)疾病、病症或病状或其症状的上述蒲黄均一多糖或上述蒲黄药物制剂的量。

需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，这些实施例不能理解为限制本申请所要求保护的范围。

实施例

1.制备蒲黄均一多糖(PTPS-2-2)

蒲黄生药材3kg加入30L水在100℃下提取3h，重复3次，然后合并提取物并浓缩，然后以4000×g离心20分钟以除去不溶物。浓缩液加入3倍体积的95％乙醇沉淀，然后在室温下过夜，4000×g离心20分钟分离沉淀。分离出的沉淀物用95％乙醇洗涤两次，然后重新溶解在纯水中并冷冻干燥，得到粗多糖(PTPS)，如图1所示。

将PTPS(8.0g)溶解在80mL水中并以10000×g离心10分钟。上清液通过DEAESepharose Fast Flow柱(500×55mm)处理，分别用水、NaCl溶液(0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L和2.0mol/L)和1.0mol/L氯化钠依次洗脱。浓缩、透析和冷冻干燥后，得到以下馏分(PTPS-W、PTPS-1、PTPS-2、PTPS-3、PTPS-5、PTPS-20和PTPS-OH)。随后，将PTPS-2(100mg)溶解在4mL 0.2mol/L NaCl中，并以10,000×g离心10分钟。上清液用Superdex 75柱进行洗脱，0.2mol/L NaCl作为流动相，分离出三个的多糖(PTPS-2-1、PTPS-2-2、PTPS-2-3)，第二个是PTPS-2-2，如图2所示。

2.蒲黄均一多糖PTPS-2-2均一性和分子量测定

通过高效凝胶渗透色谱(HPGPC)进行测量，色谱柱为KS-804和KS-802的凝胶线性色谱柱串联使用。使用已知分子量(P-5至P-800)的支链淀粉绘制标准曲线，并使用0.2mol/L NaCl以0.8mL/min的流速进行柱洗脱。样品制备浓度为2.0mg/mL，每次运行进样20μL。PTPS-2-2为一电荷与分子量均一多糖，它产生单个对称尖峰，其分子量(Mw＝54kDa)由HPGPC显示(图3)。

3.蒲黄均一多糖PTPS-2-2单糖组成的测定

PTPS-2-2(1mg)用1mL 2mol/L三氟乙酸(TFA)在120℃下水解2小时。减压旋蒸完全去除TFA后，将剩余的残留物重新溶解在200μL蒸馏水中，加入1mL溶解在含有0.5M NaBH₄的DMSO中于40℃下还原90分钟。反应结束后，再加入100μL乙酸中和后，用1mL乙酸酐和200μL1-甲基咪唑在40℃下处理样品10分钟进行乙酰化。使用HP-5ms色谱柱(长度：60m×0.25mm；液相厚度：0.25μm，安捷伦)。单糖分析的温度程序是从140℃以2℃/min的梯度升至198℃，保持4分钟，然后以4℃/分钟的梯度升至214℃，再以1℃/min梯度上升至217℃，保持4分钟，最后以3℃/分钟的速度最终升至250℃，保持4分钟。

将原多糖样品PTPS-2-2、还原后样品PTPS-2-2-Re以及部分酸水解后主链PTPS-2-2-主(酸水解条件：0.1M三氟乙酸100℃水解1h)分别完全酸水解，制备成糖醇乙酰化衍生物(PMAA)后，GC-MS分析其单糖组成。结果如图4-b，PTPS-2-2主要由阿拉伯糖及半乳糖组成，含有部分鼠李糖及木糖。还原后样品中(图4-c)半乳糖含量明显增加，说明PTPS-2-2中含有半乳糖醛酸。

部分酸水解反应是为了判断糖链中的主链及分支中的单糖组成及连接方式。如图4-d所示，PTPS-2-2经部分酸水解后主链(PTPS-2-2-主)中的阿拉伯糖及木糖基本消失，说明阿拉伯糖、木糖基本只存在于支链中。鼠李糖、半乳糖在存在于主链中，糖组成比例如表1所示。

表1 PTPS-2-2单糖组成比例

4.蒲黄均一多糖PTPS-2-2甲基化分析

将10mg多糖样品用(P₂O₅)在真空中干燥两天，然后放入充满氮气的茄子瓶中并溶解在2mL无水DMSO。加入200mg NaOH粉末后，样品在氮气氛下搅拌1小时。样品最初用0.5mLCH₃I甲基化20分钟，然后用1mL CH₃I进一步甲基化90分钟。最后，加入2mL水结束反应。加入3mL氯仿萃取，水洗氯仿层3次。将多糖甲基化四次，得到完全甲基化的多糖。将完全甲基化的PTPS-2-2水解并转化为部分甲基化的糖醇乙酸酯(PMAA)，并使用HP-5ms色谱柱(长度：60m×0.25mm；液相厚度：0.25μm，安捷伦)通过GC-MS进行分析)。升温程序如下：以2℃/min的梯度从140℃升至180℃，然后以1℃/min的速率升至200℃，最后升至250℃，并用3℃/min梯度，并保持5min。火焰离子化检测器设置为250℃，氦气(1.0mL/min)作为载气。

甲基化完全的PTPS-2-2、还原后多糖PTPS-2-2-Re、主链PTPS-2-2-主以及多糖还原后的主链PTPS-2-2-Re-主的GC-MS分析结果显示在图5和表2中。PTPS-2-2中连接方式有1,5-Araf和T-Araf，T-Xylp，1,2,4-Rhap，以及半乳糖的连接方式1,3-Galp、1,6-Galp、1,3,6-Galp和T-Galp等。

部分水解后，主链PTPS-2-2-主中1,5-Araf、T-Araf以及T-Xylp信号消失，且出现1,2-Rhap，说明,5-Araf、T-Araf以及T-Xylp均在分支上，且连接在1,2,4-Rhap的4位。

糖醛酸还原后，PTPS-2-2-Re中出现1,4-Galp和1,3,4-Galp的连接方式，由此可知PTPS-2-2-Re中的糖醛酸以1,4-GalpA和1,3,4-GalpA的形式存在，与单糖组成结果吻合。在糖醛酸还原后的主链PTPS-2-2-Re-主中同样出现1,4-Galp和1,3,4-Galp的连接方式，说明它们分布在主链上。甲基化结果显示PTPS-2-2的连接方式多样，需根据核磁信号谱进一步推导其具体连接方式。

表2 PTPS-2-2的连接方式

5.蒲黄均一多糖PTPS-2-2核磁分析

真空干燥后，将PTPS-2-2(60mg)和PTPS-2-2-主(60mg)溶解在0.5mL D₂O(Aldrich)中。¹H NMR、¹³CNMR，二维HSQC、HMBC和¹H-¹H COSY NMR光谱在D₂O中于25℃下使用Bruker Avance III 600进行测定。使用丙酮作为内标，¹³C和¹H NMR的化学位移以ppm表示，¹³C和¹H NMR相对于丙酮的位移分别为31.45和2.225ppm。所有数据均使用标准Bruker软件和MestReNova处理。PTPS-2-2以及主链PTPS-2-2-主的核磁信号归属见表3及表4。

得出PTPS-2-2以1,4-α-GalpA、1,2-β-Rhap为主链的RG-I型果胶多糖，在1,2-β-Rhap的4位连有1,3-β-Galp、1,6-β-Galp、1,3,6-β-Galp、1,5-α-Araf和T-α-Araf等多个分支，在1,4-α-GalpA的3位连有甲氧基团以及T-β-Xylp。结构如图6所示。

表3 PTPS-2-2的¹³C和¹H NMR核磁信号归属

表4 PTPS-2-2-on的¹³C和¹H NMR核磁信号归属

6.蒲黄多糖降血脂活性筛选

以高脂饮食诱导的高脂血症小鼠为模型，对蒲黄水提物、小分子、多糖成分进行降血脂活性筛选。通过灌胃给药六周后，对其脂代谢相关指标:体重、进食量、血清脂质进行测定，并对肝脏组织进行染色切片观察，以客观全面地评价蒲黄各成分的降血脂活性。

C57BL/6小鼠购回后，给予正常饲料喂养1周。取5只作为空白组(Chow组)，给予正常饲料喂养。其余30只为造模组，更换高脂饲料(Research Diets 60％脂肪热能的高脂饲料；货号D12492)喂养，持续8周，高脂饮食小鼠根据体重及血脂水平随机分组：高脂饮食组(HFD组)，阳性对照组(AS组)，蒲黄水提物(PTW组)，蒲黄小分子化合物(PTS组)，蒲黄粗多糖(PTPS组)和蒲黄部位多糖(PTPS-W组、PTPS-1组、PTPS-2组)。Chow组和HFD组小鼠灌胃饮用水，AS组给予阿托伐他汀10mg kg^-1day^-1，PTS组灌胃20mg kg^-1day^-1，PTW组、PTPS组、PTPS-W组、PTPS-1组、PTPS-2组分别灌胃200mg kg^-1day^-1。每5天测量小鼠的体重和进食量。

在给药6周后，小鼠禁食不禁水过夜，腹腔注射1％戊巴比妥溶液进行麻醉，进行摘眼球取血，血液于室温静置1h，4℃，2500rpm离心10分钟，得到血清。按照试剂盒的方法，测定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C及NEFA水平。取小鼠肝脏一半用多聚甲醛立即固定，另一半立即用液氮中冷冻，然后-80℃保存。

给药6周后，各组小鼠体重均有所增加，模型组小鼠(HFD组)体重大于空白组小鼠(Chow组)，具有极显著性差异(P<0.01)。而比较HFD组和给药组小鼠，给药6周后，AS组、PTW组、PTPS组、PTPS-2组的小鼠体重显著性低于HFD组。实验过程中，给药组小鼠与HFD组小鼠平均进食量无明显差异，结果表明，PTW组、PTPS组、PTPS-2组可以减缓高脂饲料引起的体重增长(如图7所示)。

如图8所示，相比于Chow组小鼠，HFD组小鼠的血清中TC、LDL-C、NEFA水平均显著增高(P<0.001)。给药干预六周后，与HFD组相比，阿托伐他汀组小鼠血清中NEFA、TC、LDL-C水平显著降低(P<0.01)；PTW组、PTPS组、PTPS-2组也显著性降低血清中NEFA、TC、LDL-C水平，缓解高脂饮食诱导的高脂血症。

小鼠肝脏组织HE染色病理切片结果如图9所示，与Chow组小鼠相比，HFD组小鼠肝脏出现脂肪性病变，肝细胞肿胀且呈现气球样变性，细胞胞浆内可见大量的脂肪空泡，部分肝细胞核因脂肪滴挤压而发生明显偏位，肝窦被挤压消失。与HFD组相比，AS组、PTW组、PTPS组、PTPS-2组可以明显改善肝细胞水样变性，缓解高脂血症小鼠的肝脏脂肪性病变。

小鼠肝脏组织油红O染色病理切片结果如图10所示，与普通饲料Chow组小鼠相比，高脂饲料HFD组小鼠肝脏脂滴生成增多。其中AS组、PTW组、PTPS组、PTPS-2组可以明显降低肝脏脂肪滴含量，缓解高脂血症小鼠的肝脏脂肪性病变。

7.蒲黄均一多糖PTPS-2-2的降血脂作用

体内降脂活性筛选结果表明蒲黄部位多糖PTPS-2具有良好的降血脂功效，使用Superdex^TM 75分子筛凝胶色谱柱对PTPS-2进行下一步的纯化，均一多糖PTPS-2-2为部位多糖PTPS-2的主要成分，占比52.3％。因此对PTPS-2-2的降脂作用进行考察。

C57BL/6小鼠适应性喂养1周后，取10只作为正常组(Chow组)，给予普通饲料饲养。其余60只为造模组，更换高脂饲料喂养。持续8周后，造模组小鼠根据体重及血脂水平随机分为6组：高脂饮食组(HFD组)，阿托伐他汀组(AS组)，蒲黄均一多糖高剂量组(PTPS-2-2-H组)，蒲黄均一多糖中剂量组(PTPS-2-2-M组)，蒲黄均一多糖低剂量组(PTPS-2-2-L组)，蒲黄均一多糖中剂量+阿托伐他汀组(PTPS-2-2+AS组)。Chow组和HFD组小鼠灌胃饮用水，阳性药组给予阿托伐他汀(AS)10mg kg^-1day^-1，PTPS-2-2-H组灌胃400mg kg^-1day^-1，PTPS-2-2-M组灌胃200mg kg^-1day^-1，PTPS-2-2-L组灌胃100mg kg^-1day^-1，PTPS-2-2+AS组灌胃200mg kg^-1day^-1+10mg kg^-1day^-1。每定期测量小鼠的体重和食物摄入量。实验过程中，各组小鼠体重均逐渐增长，高脂饲养的小鼠体重增长速度明显快于普通饲养的小鼠，PTPS-2-2干预后，小鼠体重增长明显缓解，且呈剂量依赖性。其中当PTPS-2-2与阳性药阿托伐他汀联用时，效果最明显。给药组小鼠与HFD组小鼠进食量均无明显差异。结果表明，PTPS-2-2减轻高脂饲料导致的体重增长，且呈剂量依赖性。

在给药4周后，小鼠禁食不禁水过夜，腹腔注射1％戊巴比妥溶液进行麻醉，进行摘眼球取血，血液于室温静置1h，4℃，2500rpm离心10分钟，得到血清。小鼠解剖后，取其肝脏组织。按照试剂盒的操作方法，测定小鼠血清肝脏中TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST和LPS水平。

结果显示，高脂饲料饲养后，HFD组小鼠血清中的TC、LDL-C、TG水平均极显著高于Chow组小鼠(P<0.001)，HDL-C水平极显著低于Chow组小鼠(P<0.001)。给药四周后，与HFD组相比，阿托伐他汀组小鼠血清中TC、LDL-C水平极显著降低(P<0.01)，TG水平显著降低(P<0.05)，HDL-C水平极显著升高(P<0.01)。PTPS-2-2干预四周后，与HFD组相比，PTPS-2-2高剂量组小鼠血清中TC、LDL-C、TG水平极显著降低(P<0.01)，HDL-C水平极显著升高(P<0.01)；PTPS-2-2中剂量组TC、TG、LDL-C水平显著降低(P<0.05)；当阿托伐他汀与PTPS-2-2中剂量联用时，药效最好，小鼠血清中TC、TG、LDL-C水平极显著降低(P<0.001)，HDL-C水平极显著升高(P<0.001)；结果表明，蒲黄均一多糖PTPS-2-2对高脂血症小鼠具有较好的降血脂作用，且于阿托伐汀联用时效果增强。

结果显示，与空白Chow组小鼠对比，HFD组小鼠肝脏中的TC、LDL-C及TG水平极显著升高(P<0.001)；与HFD组小鼠相比，阿托伐他汀组小鼠肝脏中TC、LDL-C水平极显著降低(P<0.01)，TG水平显著降低(P<0.05)；PTPS-2-2干预4周后，与HFD组相比，PTPS-2-2高剂量组小鼠肝脏中TC、LDL-C及TG水平极显著降低(P<0.01)；PTPS-2-2中剂量组小鼠肝脏中TC、LDL-C及TG水平显著降低(P<0.05)；当阿托伐他汀与PTPS-2-2中剂量联用时，药效最好，肝脏中TC、LDL-C、TG水平极显著降低(P<0.01)；结果表明，蒲黄均一多糖PTPS-2-2对高脂血症小鼠具有较好的降血脂作用。

肝脏是脂类、糖类以及蛋白质代谢的主要器官。血清与肝脏中ALT和AST水平是肝功能的代表性指标，可以判断肝脏的损伤程度。小鼠血清中转氨酶ALT和AST结果显示，与Chow组相比，HFD组小鼠血清中ALT和AST水平极显著升高；与HFD组相比，PTPS-2-2高剂量组小鼠肝脏ALT、AST水平极显著下降(P<0.01)；然而阿托伐他汀组与HFD组相比，无显著差异，当与PTPS-2-2中剂量联用时，血清中ALT、AST水平极显著下降(P<0.01)。肝脏中转氨酶ALT和AST结果显示，与Chow组相比，HFD组小鼠肝脏中ALT、AST水平极显著升高；与HFD组相比，PTPS-2-2高剂量组肝脏中ALT水平极显著下降(P<0.01)，AST水平显著下降(P<0.05)；阿托伐他汀组与HFD组相比，无显著差异，当与PTPS-2-2中剂量联用时，肝脏中ALT水平显著下降(P<0.05)，说明PTPS-2-2可以减轻阿托伐他汀的肝脏毒副作用。

各组小鼠肝脏组织HE染色病理切片结果显示，Chow组肝小叶结构完整清晰，肝细胞大小均匀，无明显脂肪变性；与Chow组比较，HFD组小鼠肝脏切片可见大量脂肪空泡，部分肝细胞因脂肪滴挤压而发生变形，肝窦被挤压消失，且肝脏脂肪变性程度和脂质堆积严重；与HFD组比较，AS组肝脏脂肪性病变明显改善；当AS与PTPS-2-2联用时，肝脏脂肪变性程度和脂质沉积得到缓解，且肝小叶结构较为清晰；与HFD组比较，PTPS-2-2高、中、低剂量肝小叶结构较为清晰，且肝脏脂肪变性程度明显减轻，缓解高脂血症小鼠的肝脏脂肪性病变。小鼠肝脏油红O染色切片结果显示，与Chow组小鼠相比，HFD组小鼠肝脏脂滴生成显著增多。与HFD组比较，AS组肝脏脂滴减少，肝脏脂肪性病变明显改善；PTPS-2-2高、中、低剂量均可以降低肝脏脂肪滴含量，缓解高脂血症小鼠的肝脏脂肪性病变，且呈剂量依赖性。当AS与PTPS-2-2中剂量联用时，降脂药效最好。小鼠附睾白色脂肪组织HE染色切片结果显示，Chow组小鼠附睾白色脂肪细胞大小均匀。与Chow组小鼠相比，HFD组小鼠的附睾脂肪细胞体积明显肿胀。与HFD组比较，AS组与PTPS-2-2高、中、低剂量组小鼠的附睾白色脂肪细胞体积均减小。小鼠肩胛棕色脂肪组织HE病理切片结果显示，Chow组小鼠肩胛棕色脂肪组织细胞排列整齐、大小均匀，毛细管丰富，线粒体分布均匀。HFD组小鼠的肩胛棕色脂肪体积明显肿胀，线粒体减少。而AS组与PTPS-2-2高、中、低剂量组小鼠的附睾白色脂肪细胞均减小，线粒体增多，毛细管更丰富。

8.蒲黄均一多糖PTPS-2-2对结肠以及肠道菌群的作用

小鼠结肠组织HE病理切片结果显示，Chow组小鼠结肠细胞间排列整齐，未见炎症浸润；HFD组小鼠结肠粘膜损伤，伴随大量的炎症细胞浸润；PTPS-2-2组小鼠结肠炎症明显改善，结肠粘膜趋向完整，粘膜下层出现的炎性细胞浸润情况减少。

当肠道上皮细胞间的紧密连接遭到破坏时，肠黏膜的通透性会大大增加，使细菌及其代谢产物溢出，对人体产生损伤。如细菌代谢物脂多糖(LPS)入血,会引起炎症反应，引发肠源性内毒血症等。为探讨PTPS-2-2对HFD小鼠肠道屏障的影响，小鼠给药四周后，检测其肠道紧密连接蛋白ZO-1、Occludin mRNA表达变化，以及血清中LPS的浓度。结果显示，高脂饲养后，ZO-1、Occludin mRNA表达明显下降，PTPS-2-2干预后，ZO-1、Occludin mRNA表达明显上调。高脂饲养后，血清中LPS明显升高，PTPS-2-2干预后，LPS的浓度显著降低，说明PTPS-2-2可以缓解高脂饲料导致的结肠壁屏障损伤。

为了明确蒲黄多糖改善高脂血症作用是否与其调节肠道菌群有关，我们利用基于细菌16S rDNA的方法，对小鼠盲肠内肠道菌的V3-V4可变区序列进行测序。16S rRNA测序结果显示，HFD小鼠肠道菌群发生明显紊乱，PTPS-2-2给药组小鼠肠道菌群与正常组类似。α多样性分析结果表明，HFD饲养后，拟杆菌门(Bacteroidetes)减少，厚壁菌门(Firmicute)增多，PTPS-2-2干预后，厚壁菌门/拟杆菌门丰度比显着降低。

在属(Genus)级别水平上，分析肠道菌的分布及组间差异，结果显示，小鼠的盲肠菌群主要由norank_f_Erysipelotrichaceae、Dubosiella、Faecalibaculum、norank_f_Muribaculaceae、unclassified_f_Lachnospiracea、Blautia、Coriobacteriaceae_UCG-002、Staphylococcus、Lachnospiraceae_NK4A136_group、norank_f_Lachnospiraceae等组成。与Chow组相比，HFD组norank_f_Erysipelotrichaceae、Dubosiella、Faecalibaculum、Blautia、Coriobacteriaceae_UCG-002菌群比例显著升高，norank_f_Muribaculaceae、Staphylococcus菌群比比例显著降低；PTPS-2-2干预后，Dubosiella、Faecalibaculum菌群比例显著降低。

9.抗生素干扰与粪菌移植对蒲黄均一多糖PTPS-2-2降血脂作用的影响

抗生素能够杀灭部分肠道细菌，致使肠道菌群失调，若使用抗生素使HFD-fed小鼠的肠道菌群紊乱后，蒲黄多糖对于高脂血症的作用也减弱或消除，则可以从反面证明蒲黄多糖降脂作用依赖于肠道菌群。因此，我们设计了抗生素诱导的菌群紊乱对蒲黄多糖药效的影响实验，即部分HFD小鼠在给予蒲黄多糖之前，分别用混合抗生素(青霉素、甲硝唑、万古霉素、新霉素)处理(ABS)，造成菌群紊乱模型，给药同时给予HFD小鼠自由饮用含抗生素的灭菌饮用水维持其肠道菌群紊乱状态,以观察肠道菌群紊乱对蒲黄多糖药效的影响。为了验证蒲黄多糖降脂作用是通过肠道菌群发挥作用的假设，我们还设计了粪便微生物移植(FMT)实验。选用了PTPS-2-2给药组、HFD组小鼠作为供体，分别将它们的粪便微生物移植到HFD小鼠体内，以观察PTPS-2-2的药效作用是否会随着粪便微生物移植而转移。若给药组的药效随着肠道菌群移植而转移，则说明PTPS-2-2的药效作用依赖于肠道菌群。

实验过程中，高脂饲养的小鼠体重增长速度明显快于普通饲养的小鼠。抗生素干预后，体重增长有所减慢，但不具显著差异；抗生素干扰后，PTPS-2-2干预没有减缓小鼠体重增长，说明抗生素干扰影响了PTPS-2-2的减轻小鼠体重的作用。此外，与ABS组相比，FMT组小鼠体重有一定缓解，但并不明显；而FMTPS组小鼠体重增长明显减慢，且具有显著性差异(P<0.05)。

对ABS与FMT小鼠的血脂水平进行测定，结果显示，与HFD组相比，ABS组与ABSPS组中血脂水平均无明显差异，说明抗生素干预影响了PTPS-2-2降血脂的作用；而相比于HFD组，FMTPS明显显著降低了血清中TC、LDL-C的水平(P<0.01)，且FMT组无显著性差异，说明PTPS-2-2调节的肠道菌群可通过体外移植，降低高脂血症小鼠的血脂。

对ABS与FMT小鼠的肝脏及脂肪组织病理切片进行分析，结果显示，与HFD组相比，PTPS-2-2组肝脏脂肪空泡减少，细胞排列整齐，脂滴减少，肩胛棕色脂肪组织线粒体增多，毛细管更丰富，附睾白色脂肪细胞体积均减小；而ABS组以及ABSPS组与HFD组相比，无明显差异，说明抗生素干扰影响了PTPS-2-2的降脂药效。

在FMT的受体小鼠中，FMT组小鼠肝脏干细胞轻度水肿，部分胞浆内可见大小不等的脂滴；FMTPS组小鼠肝脏肝小叶清晰，肝细胞内可见少量脂滴；与HFD组以及FMT组相比，FMTPS组肩胛棕色脂肪组织线粒体以及毛细管更丰富，附睾白色脂肪细胞体积减小；说明了通过移植PTPS-2-2组的粪便，可以减少高脂血症小鼠的肝脏脂肪病变以及脂肪组织的代谢。

ABS干预后，给药4周后，收集盲肠内容物，进行菌群多样性分析。与PTPS-2-2组相比，ABS组与ABSPS组小鼠菌群的Sobs、Chao、Ace指数极显著下降(P<0.001)，说明抗生素干预后小鼠菌群丰富度与多样性均下降。

在属水平上，对ABS三组中样本的物种丰度进行统计，结果显示，小鼠的菌群主要由Faecalibaculum、Blautia、Coriobacteriaceae_UCG-002、norank_f_Muribaculaceae、Lachnospiraceae_NK4A136_group、unclassified_f_Lachnospiracea、Bacteroides、norank_f_Lachnospiraceae等菌属组成。与ABS组相比，ABSPS组Coriobacteriaceae_UCG-002、Bacteroides菌群丰度显著升高，但低于PTPS-2-2组。

粪菌移植后，收集盲肠内容物，进行菌群多样性分析。与ABS组相比，FMT组与FMTPS组小鼠菌群的Sobs、Chao、shannon指数极显著上升(P<0.001)simpson指数极显著下降(P<0.01)，说明体外移植粪菌后小鼠菌群丰富度与多样性均上升。

在属水平上，对FMT三组中样本物种丰度进行统计，结果显示，各组小鼠的菌群主要由norank_f_Muribaculaceae、Faecalibaculum、Blautia、Lachnospiraceae_NK4A136_group、Coriobacteriaceae_UCG-002、Bacteroides、unclassified_f_Lachnospiracea、norank_f_Lachnospiraceae等菌属组成。与FMT组相比，FMTPS组红蝽杆菌Coriobacteriaceae_UCG-002菌群丰度明显更高。

结果表明，抗生素干预后，PTPS-2-2给药组小鼠(ABSPS组)的体重及血脂水平并未得到改善，PTPS-2-2治疗高脂血症的作用消失；而移植了PTPS-2-2给药组粪菌的小鼠(FMTPS组)体重及血脂水平与未粪菌移植的小鼠(ABS组)相比明显降低，并且FMTPS组小鼠肠道内红蝽杆菌属(Coriobacteriaceae_UCG-002)的丰度明显升高。以上结果说明，肠道红蝽杆菌可以通过粪菌移植在小鼠之间实现传递，从而影响小鼠的血脂水平。由此也说明了蒲黄均一多糖PTPS-2-2对于肠道红蝽杆菌的调控作用，是其发挥治疗高脂血症作用的关键。

以上对本发明实施例进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明仅用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。同时，本领域技术人员依据本发明的思想，基于本发明的具体实施方式及应用范围上做出的改变或变形之处，都属于本发明保护的范围。综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims

1.一种蒲黄均一多糖，其特征在于，分子量为5.4×10⁴±3.0×10⁴Da，由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖和半乳糖组成，单糖摩尔比为鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：半乳糖＝(10.00～20.00):(45.00～55.00):(4.00～5.00):(30.00～40.00)。

2.根据权利要求1所述的蒲黄均一多糖，其特征在于，所述分子量为5.4×10⁴±2.0×10⁴Da；

优选地，所述分子量为5.4×10⁴±1.0×10⁴Da；

更优选地，峰高分子量为约5.4×10⁴Da；

又优选地，所述蒲黄为水烛香蒲、东方香蒲或其它蒲黄属植物的干燥花粉。

3.根据权利要求1所述的蒲黄均一多糖，其特征在于，鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：半乳糖＝(11.00～18.00):(46.00～53.00):(4.20～4.90):(31.00～38.00)；

优选地，鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：半乳糖＝(12.00～16.00):(47.00～51.00):(4.30～4.80):(32.00～36.00)；

更优选地，鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：半乳糖＝(13.00～15.00):(47.00～50.00):(4.40～4.70):(32.00～35.00)；

尤其优选地，鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：半乳糖＝13.6:48.1:4.6:33.7。

4.根据权利要求1所述的蒲黄均一多糖，其特征在于，所述蒲黄均一多糖的骨架包含鼠李糖和半乳糖；

优选地，所述蒲黄均一多糖的所述骨架包含1,4-α-GalpA、1,2-β-Rhap。

5.根据权利要求1所述的蒲黄均一多糖，其特征在于，所述蒲黄均一多糖的分支包含半乳糖、木糖和阿拉伯糖；

优选地，所述蒲黄均一多糖的所述分支包含1,3-β-Galp、1,6-β-Galp、1,3,6-β-Galp、1,5-α-Araf、T-α-Araf、甲氧基团和T-β-Xylp。

6.一种制备权利要求1至5中任一项所述的蒲黄均一多糖的方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：

(1)将蒲黄药材用水进行加热提取，得到水提液；

(2)将所述水提液进行浓缩后离心以除去不溶物，得到浓缩液；

(3)将所述浓缩液进行乙醇沉淀，离心以分离沉淀，得到沉淀部分；

(4)将所述沉淀部分洗涤后加入水溶解并冷冻干燥，得到蒲黄粗多糖；

(5)将所述蒲黄粗多糖用水溶解后离心，得到第一上清液；以及

(6)将所述第一上清液进行DEAE琼脂糖凝胶柱层析和Superdex^TM75凝胶柱层析，采用H₂O和/或0.1～2.0mol/L氯化钠溶液进行洗脱，检测糖峰并收集含糖流份，得到所述蒲黄均一多糖。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下的[1]～[20]项中的任意一项或者多项：

[1]将所述蒲黄药材进行粉碎；

[2]步骤(1)中所用水为蒸馏水或去离子水；

[3]步骤(1)中，所述温度为50℃～100℃，优选为80℃～100℃，例如约100℃；

[4]将步骤(1)中的所述加热提取的操作重复一次或者多次，例如3次，合并后得到所述水提液；

[6]步骤(1)中的所述加热提取的时间为1～10小时，优选为2～8小时，更优选为3～5小时，例如约3小时；

[7]步骤(2)中，所述离心的条件为在2000×g～6000×g转速下离心10～30分钟，优选为在3000×g～5000×g转速下离心15～30分钟，更优选为在3500×g～4500×g转速下离心15～25分钟，例如在约4000×g转速下离心约20分钟；

[8]步骤(3)中，所述乙醇沉淀所用的所述乙醇的浓度为60％～98％，优选为80％～98％，例如约95％；

[9]步骤(3)中所用的所述乙醇的量为所述浓缩液的1～5倍体积，例如约3倍体积；

[10]步骤(3)中所述乙醇沉淀的时间为至少12小时、至少24小时、24～72小时或者48小时，例如约24小时；

[11]步骤(3)中，所述离心的条件为在2000×g～6000×g转速下离心10～30分钟，优选为在3000×g～5000×g转速下离心15～30分钟，更优选为在3500×g～4500×g转速下离心15～25分钟，例如在约4000×g转速下离心约20分钟；

[12]所述沉淀部分洗涤所用的所述乙醇的浓度为60％～98％，优选为80％～98％，例如约95％；

[14]步骤(5)中，所述离心的条件为在6000×g～15000×g转速下离心5～20分钟，优选为在8000×g～12000×g转速下离心5～15分钟，例如在约10000×g转速下离心约10分钟；

[15]步骤(6)中，所述第一上清液通过DEAE琼脂糖凝胶柱例如DEAE琼脂糖凝胶FF柱处理，分别用水、不同浓度的0.1－2.0mol/L氯化钠溶液依次洗脱，经浓缩、透析和冷冻干燥后，得到包含所述蒲黄均一多糖的馏分；

[16]在[15]项中，将所述包含所述蒲黄均一多糖的馏分溶解在氯化钠溶液中并离心，得到第二上清液；

[17]在[16]项中，所述氯化钠溶液的用量为0.01～0.1倍量(mL/mg)，优选为0.02～0.08倍量(mL/mg)，更优选为0.03～0.06倍量(mL/mg)，例如约0.04倍量(mL/mg)；

[18]在[16]项中，所述氯化钠溶液的浓度为0.1～2.0mol/L，优选为0.1～1.0mol/L，例如约0.2mol/L，

[19]在[16]项中，所述离心的条件为在6000×g～15000×g转速下离心5～20分钟，优选为在8000×g～12000×g转速下离心5～15分钟，例如在约10000×g转速下离心约10分钟；

[20]步骤(6)中，所述第二上清液通过Superdex^TM 75凝胶柱层析，以0.1～2.0mol/L，优选为0.1～1.0mol/L，例如约0.2mol/L氯化钠溶液作为流动相进行洗脱。

8.一种蒲黄均一多糖，其由权利要求6或7所述的方法制得。

9.一种蒲黄药物制剂，其包含权利要求1至5中任一项所述的蒲黄均一多糖或权利要求8所述的蒲黄均一多糖，以及任选的药学上可接受的辅料；

优选地，所述蒲黄药物制剂进一步包含其它具有降血脂活性的药物或其它具有调整肠道菌群作用的药物；

更优选地，所述蒲黄药物制剂为口服制剂、注射制剂或冻干粉针剂。

10.权利要求1至5中任一项所述的蒲黄均一多糖或权利要求8所述的蒲黄均一多糖或权利要求9所述的蒲黄药物制剂在制备用于预防和/或治疗高血脂症的药品、食品和/或保健品中的用途；

优选地，权利要求1至5中任一项所述的蒲黄均一多糖或权利要求8所述的蒲黄均一多糖或权利要求9所述的蒲黄药物制剂在制备用于调整肠道菌群的药品、食品和/或保健品中的用途；

更优选地，所述调整为上调肠道内有益菌的丰度和/或下调肠道内有害菌的丰度；

又优选地，所述有益菌选自以下的一种或多种：红蝽杆菌、毛螺菌和韦荣球菌；

又优选地，所述有害菌为杜氏杆菌和/或粪杆菌。