CN116848110A - 氘代集落刺激因子-1受体（csf-1r）抑制剂 - Google Patents

氘代集落刺激因子-1受体（csf-1r）抑制剂 Download PDF

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CN116848110A CN202180085787.4A CN202180085787A CN116848110A CN 116848110 A CN116848110 A CN 116848110A CN 202180085787 A CN202180085787 A CN 202180085787A CN 116848110 A CN116848110 A CN 116848110A
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小约翰·L·凯恩
N·A·哈根
M·A·菲茨杰拉德
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Abstract

本文公开了下式的氘代化合物，所述氘代化合物可用作集落刺激因子1受体抑制剂(“CSF‑1R抑制剂”)。

Description

氘代集落刺激因子-1受体(CSF-1R)抑制剂
本申请要求2020年12月23日提交的美国临时申请号63/129,939和2021年7月28日提交的美国临时申请号63/226,549的优先权权益，将所述临时申请出于任何目的通过引用以其整体并入本文。
背景技术
药物通常可能具有差的吸收、分布、代谢和/或排泄(ADME)特性，从而阻碍其更广泛的用途或限制其在某些适应症中的用途。差的ADME特性也可能是临床试验中药物候选物失败的主要原因。尽管在一些情况下可以采用配制品和前药策略以改善某些ADME特性，但是这些方法通常无法解决许多药物和药物候选物存在的根本ADME问题。
一个此类问题是快速代谢，其引起许多药物从身体中快速清除-否则所述药物将在治疗疾病方面非常有效。快速药物清除的可能解决方案是频繁给药或高剂量给药以获得足够高的血浆药物水平。然而，这种方法具有潜在的缺点，包括患者对给药方案的依从性较差、剂量越大副作用越严重以及治疗成本增加。快速代谢的药物也可能将患者暴露于不希望的毒性代谢物或反应性代谢物。
毒性代谢物或生物反应性代谢物的降解也可能是一个问题，导致一些接受药物的患者经历毒性，或者对安全给药的限制，使得患者接受次优量的活性药剂。有时，改变给药间隔或配制方法可以有助于降低临床不良反应，但是通常此类不希望的代谢物的形成是化合物代谢固有的。
活生物体中的酶(诸如醛氧化酶)可以导致不想要的代谢降解。醛氧化酶(AO)是含胞质钼的酶，涉及许多药物的生物转化。由AO介导的代谢代表的挑战是由几种重叠因素驱动的，包括酶的复杂生物学以及作为AO底物的结构基序(例如，氮杂杂环化合物和酰胺)的广泛使用。参见例如，Manevski,N.等人,Metabolism by Aldehyde Oxidase:Drug Designand Complementary Approaches to Challenges in Drug Discovery,J.Med.Chem.2019,62,10955-10994。此外，AO介导的代谢的差异(不仅在物种之间，而且还在个体之间)也有助于暴露的可变性并且使人剂量选择复杂化。
虽然简单地避免易受AO代谢影响的底物的策略可能似乎很有吸引力，但是这将不切实际地消除了广大潜在的药核(pharmacore)。因此，已经提出了各种策略来调节药物化合物的潜在AO代谢。这些策略包括试图阻止AO反应(例如，与AO抑制剂结合施用化合物)；试图降低AO反应的速率；以及使用AO代谢物作为新型支架或前药的灵感。参见例如，Manevski等人。此外，为了停止或减轻药核的AO代谢，必须确定AO与药核之间的反应位点。Manevski等人提供了减轻AO代谢的建议策略的表，诸如阻断AO反应的位点、将碳用杂原子替代、将氮用碳替代、去除芳香性、降低环大小、动力学氘代同位素效应(“KDIE”)和减少logD；但是在每个实例中AO降解位点的知识是至关重要的。参见Manevski等人的表4。这些策略均包括基于实验室测试来预测人体清除率的补充措施。换言之，对于普通技术人员来说，没有可预测的方法来了解任何一种建议的策略是否将能够开发出针对特定靶标的药物，出于其预期目的维持药物的预期效果(例如，高功效、靶结合或生物利用度)，同时还减轻AO降解，而无需使用适当的生物样品进行大量测试。
发明内容
令人惊讶地发现，用氘取代的如WO 2017/015267中所示的CSF-1R抑制剂化合物可以改善ADME特性。在本公开文本的一些方面，在特定位置处用氘取代的CSF-1R抑制剂化合物具有改善的ADME特性，特别是对AO降解的显著抗性，因此潜在地改善药物功效和体内药物的暴露。本文公开了对体内酶促降解具有抗性的氘代集落刺激因子-1受体抑制剂(“CSF-1R抑制剂”)。本公开文本的CSF-1R抑制剂是能够穿透血脑屏障以到达中枢神经系统(CNS)的小分子化合物。因为这些化合物能够有利地穿透血脑屏障(在神经适应症中高度希望的特性)，所以所述化合物需要能够展现出足够的吸收、代谢、分布和排泄(ADME)特性，以确保适当的给药。代谢问题可以包括快速代谢以及代谢降解，这二者均可以导致活性药剂的毒性和/或次优给药。
本公开文本涉及氘代CSF-1R抑制剂并且涉及氘代CSF-1R抑制剂和包含CSF-1R抑制剂的药物组合物治疗疾病的用途，所述抑制剂和所述药物组合物作为CSF-1R抑制剂治疗疾病具有令人惊讶地降低的AO降解和高的功效。
此类化合物包括式(I)的化合物：
和/或或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐，其中：
所述虚线表示任选的双键；
X1是C、N或CR7；
X2、X3、X4、X5、X6和X7各自独立地选自N、NR7或CR7；
X8和X9各自独立地选自N或C；
其中每个R7独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C10)烷基炔基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C2-C10)炔基胺、C(O)-、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基-、COOH-(C3-C10)环烷基-、(C1-C10)烷氧基-、R8-(C1-C10)烷基-、R8-(C3-C10)环烷基、R8-(C2-C9)杂环烷基、R8-(C6-C14)芳基、R8-(C2-C9)杂芳基、R8-(C2-C10)烷基炔基、R8-(C1-C10)烷基胺、R8-((C1-C10)烷基)2胺、R8-(C2-C10)炔基胺、R8-C(O)-、R8-(C1-C10)烷基-C(O)O-、R8-(C1-C10)烷氧基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、R8-(C3-C10)环烷基-O-、R8-(C2-C9)杂环烷基-O-、R8-(C6-C14)芳基-O-、R8-(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基、氰基、H2N-、(CH3)HN-、(CH3)2N-、R8R9N-、R8R9N(O)C-、R8(R9C(O))N-、R8R9NC(O)O-、R8C(O)-、R8R9NC(O)R8N-、(C1-C10)烷基-OC(O)R8N-、(C3-C10)环烷基-OC(O)R8N-、(C2-C9)杂环烷基-OC(O)R8N-、(C6-C14)芳基-OC(O)R8N-、(C2-C9)杂芳基-OC(O)R8N-、F3C-、F2HC-、CH3F2C-、FH2C-、CH3FHC-、(CH3)2FC-；NC-、(C1-C10)烷基(O)P-、(C1-C10)烷基-S-、(C1-C10)烷基-S-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-S-、(C6-C14)芳基-S-、(C2-C9)杂烷基-S-、(C2-C9)杂环烷基-S-、(C2-C9)杂芳基-S-、(C1-C10)烷基-S(O)-、(C3-C10)环烷基-S(O)-、(C6-C14)芳基-S(O)-、(C2-C9)杂环烷基-S(O)-、(C2-C9)杂芳基-S(O)-、(C3-C10)烷基-S(O)2-、(C3-C10)环烷基-S(O)2-、(C6-C14)芳基-S(O)2-、(C2-C9)杂环烷基-S(O)2-、(C2-C9)杂芳基-S(O)2-、R8R9NS(O)2-、(C1-C10)烷基-S(O)2R8N-、(C3-C10)环烷基-S(O)2R8N-、(C6-C14)芳基-S(O)2R8N-、(C2-C9)杂环烷基-SO2R8N-和(C2-C9)杂芳基-S(O)2R8N-；
其中R8和R9各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基、COOH-(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基、(CH3)2N-和H2N-；
或者R8和R9一起形成3至10元环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；
其中每个(C1-C10)烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C3-C10)环烷基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基、COOH-(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基或H2N-；
T1、T2和T3各自独立地选自各自独立地选自N或CR10，
其中每个R10独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C10)烷基炔基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C2-C10)炔基胺、C(O)-、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基-、COOH-(C3-C10)环烷基-、(C1-C10)烷氧基-、R10A-(C1-C10)烷基-、R10A-(C3-C10)环烷基、R10A-(C2-C9)杂环烷基、R10A-(C6-C14)芳基、R10A-(C2-C9)杂芳基、R10A-(C2-C10)烷基炔基、R10A-(C1-C10)烷基胺、R10A-((C1-C10)烷基)2胺、R10A-(C2-C10)炔基胺、R10A-C(O)-、R10A-(C1-C10)烷基-C(O)O-、R10A-(C1-C10)烷氧基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、R10A-(C3-C10)环烷基-O-、R10A-(C2-C9)杂环烷基-O-、R10A-(C6-C14)芳基-O-、R10A-(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基、氰基、H2N-、(CH3)HN-、(CH3)2N-、R10AR11N-、R10AR11N(O)C-、R10A(R11C(O))N-、R10AR11NC(O)O-、R10AC(O)-、R10AR11NC(O)R10AN-、(C1-C10)烷基-OC(O)R10AN-、(C3-C10)环烷基-OC(O)R10AN-、(C2-C9)杂环烷基-OC(O)R10AN-、(C6-C14)芳基-OC(O)R10AN-、(C2-C9)杂芳基-OC(O)R10AN-、F3C-、F2HC-、CH3F2C-、FH2C-、CH3FHC-、(CH3)2FC-；NC-、(C1-C10)烷基(O)P-、(C1-C10)烷基-S-、(C1-C10)烷基-S-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-S-、(C6-C14)芳基-S-、(C2-C9)杂烷基-S-、(C2-C9)杂环烷基-S-、(C2-C9)杂芳基-S-、(C1-C10)烷基-S(O)-、(C3-C10)环烷基-S(O)-、(C6-C14)芳基-S(O)-、(C2-C9)杂环烷基-S(O)-、(C2-C9)杂芳基-S(O)-、(C3-C10)烷基-S(O)2-、(C3-C10)环烷基-S(O)2-、(C6-C14)芳基-S(O)2-、(C2-C9)杂环烷基-S(O)2-、(C2-C9)杂芳基-S(O)2-、R10AR11NS(O)2-、(C1-C10)烷基-S(O)2R10AN-、(C3-C10)环烷基-S(O)2R10AN-、(C6-C14)芳基-S(O)2R10AN-、(C2-C9)杂环烷基-SO2R10AN-和(C2-C9)杂芳基-S(O)2R10AN-；
其中R10A和R11各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基、COOH-(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基、(CH3)2N-和H2N-；
或者R10A和R11一起形成3至10元环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；
其中每个(C1-C10)烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C3-C10)环烷基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基、COOH-(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基或H2N-
Y1是O、NR12或CR12R13，
其中R12不存在或者R12和R13各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基、COOH-(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基和H2N-；
R1与其附接的碳一起形成羰基并且R2不存在或者R1和R2各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基和H2N-，或者R1和R2与其附接的碳一起形成3至10元环；
R5不存在或选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基和H2N-；
R6选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C10)烷基炔基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C2-C10)炔基胺、C(O)-、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基-、COOH-(C3-C10)环烷基-、(C1-C10)烷氧基-、R14-(C1-C10)烷基-、R14-(C3-C10)环烷基、R14-(C2-C9)杂环烷基、R14-(C6-C14)芳基、R14-(C2-C9)杂芳基、R14-(C2-C10)烷基炔基、R14-(C1-C10)烷基胺、R14-((C1-C10)烷基)2胺、R14-(C2-C10)炔基胺、R14-C(O)-、R14-(C1-C10)烷基-C(O)O-、R14-(C1-C10)烷氧基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、R14-(C3-C10)环烷基-O-、R14-(C2-C9)杂环烷基-O-、R14-(C6-C14)芳基-O-、R14-(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基、氰基、H2N-、(CH3)HN-、(CH3)2N-、R14R15N-、R14R15N(O)C-、R14(R15C(O))N-、R14R15NC(O)O-、R14C(O)-、R14R15NC(O)R14N-、(C1-C10)烷基-OC(O)R14N-、(C3-C10)环烷基-OC(O)R14N-、(C2-C9)杂环烷基-OC(O)R14N-、(C6-C14)芳基-OC(O)R14N-、(C2-C9)杂芳基-OC(O)R14N-、F3C-、F2HC-、CH3F2C-、FH2C-、CH3FHC-、(CH3)2FC-；NC-、(C1-C10)烷基(O)P-、(C1-C10)烷基-S-、(C1-C10)烷基-S-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-S-、(C6-C14)芳基-S-、(C2-C9)杂烷基-S-、(C2-C9)杂环烷基-S-、(C2-C9)杂芳基-S-、(C1-C10)烷基-S(O)-、(C3-C10)环烷基-S(O)-、(C6-C14)芳基-S(O)-、(C2-C9)杂环烷基-S(O)-、(C2-C9)杂芳基-S(O)-、(C3-C10)烷基-S(O)2-、(C3-C10)环烷基-S(O)2-、(C6-C14)芳基-S(O)2-、(C2-C9)杂环烷基-S(O)2-、(C2-C9)杂芳基-S(O)2-、R14R15NS(O)2-、(C1-C10)烷基-S(O)2R14N-、(C3-C10)环烷基-S(O)2R14N-、(C6-C14)芳基-S(O)2R14N-、(C2-C9)杂环烷基-SO2R14N-和(C2-C9)杂芳基-S(O)2R14N-；
其中R14和R15各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基、COOH-(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、F2HC-O-、卤基、(CH3)2N-、H2N-、F3C-C(O)-、F3C-和F2HC-；
或者R14和R15一起形成3至10元环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；
其中每个(C1-C10)烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C3-C10)环烷基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基、COOH-(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基或H2N-；
Z1选自H、卤基、(C1-C10)烷基、(C2-C9)杂烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C2-C10)炔基胺、(C1-C10)烷氧基-或H2N-；
Y2是O、S、NR17或CR17R18，并且
其中R17不存在或者R17和R18各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基、COOH-(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、(C3-C10)环烷基-O-、(C2-C9)杂环烷基-O-、(C6-C14)芳基-O-、(C2-C9)杂芳基-O-、HO-、卤基或H2N-；
其中R7、R1或R2中的至少一个是D。
在至少一个方面，本公开文本涉及式(I)的化合物：
和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐，其中：
所述虚线表示任选的双键；
X1是C、N或CR7；
X2、X3、X4、X5、X6、X7各自独立地选自N、NR7或CR7；
X8和X9各自独立地选自N或C；
其中每个R7独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C10)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、(C1-C10)烷氧基-、R8-(C2-C9)杂环烷基、R8-(C2-C9)杂芳基、R8-(C2-C10)烷基炔基、R8-(C2-C10)炔基胺、R8-(C1-C10)烷氧基-、R8-(C2-C9)杂环烷基-O-、卤基、氰基、H2N-、(CH3)HN-、(CH3)2N-、R8C(O)-、F3C-、F2HC-、CH3F2C-、FH2C-、CH3FHC-和(CH3)2FC；
其中R8各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C1-C10)烷基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、(C1-C10)烷氧基-、HO-、卤基、(CH3)2N-和H2N-；
其中每个(C1-C10)烷基、(C2-C9)杂芳基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：氘、(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷基胺；
T1、T2和T3各自独立地选自N或CR10；
其中每个R10独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C2-C10)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基-、COOH-(C3-C10)环烷基-、(C1-C10)烷氧基-、R10A-(C1-C10)烷基-、R10A-(C1-C10)烷基胺、R10A-((C1-C10)烷基)2胺、R10A-(C2-C10)炔基胺、R10A-C(O)-、R10A-(C1-C10)烷基-C(O)O-、R10A-(C1-C10)烷氧基-、HO-和卤基、氰基、H2N-、(CH3)HN-、(CH3)2N-、R10AR11N-、R10AR11N(O)C-、R10A(R11C(O))N-、R10AR11NC(O)O-、R10AC(O)-、R10AR11NC(O)R10AN-、(C1-C10)烷基-OC(O)R10AN-、F3C-、F2HC-、CH3F2C-、FH2C-、CH3FHC-、(CH3)2FC-；
其中R10A和R11各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、HO-、卤基、(CH3)2N-和H2N-；
其中每个(C1-C10)烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：D、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、HO-、卤基或H2N-
Y1是O、NR12或CR12R13；
其中R12不存在或者R12和R13各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、HO-、卤基和H2N-；
R1和R2各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、HO-、卤基和H2N；
R5不存在或选自H、D、(C1-C10)烷基、HO-、卤基和H2N-；并且
R6选自D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、R14-(C3-C10)环烷基、R14-(C6-C14)芳基、R14-(C2-C9)杂芳基和R14-(C1-C10)烷基胺；
其中R14各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C10)烷氧基-、HO-、F2HC-O-、卤基、(CH3)2N-、F3C-C(O)-、F3C-和F2HC-；
其中每个(C1-C10)烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C3-C10)环烷基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、HO-、卤基或H2N-；并且
Z1选自H、卤基和(C1-C10)烷基；
Y2是O、NR17或CR17R18；
其中R17不存在或者R17和R18各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、HO-、卤基和H2N-；
其中R7、R1或R2中的至少一个是D。
在至少一个方面，本公开文本涉及式(I’)的化合物：
和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐，其中：
所述虚线表示任选的双键；
A选自H和D；
X3’是CR3’，其中R3’选自H和D；
X4’是CR4’，其中R4’选自H、D和R7；并且
X5’是CR5’，其中R5’选自H和D，
其中A、R3’、R4’和R5’中的至少一个是D。
本公开文本还涉及包含氘代CSF-1R抑制剂的药物配制品并且涉及氘代CSF-1R抑制剂和包含CSF-1R抑制剂的药物组合物用于治疗疾病的用途。本文进一步公开了氘代CSF-1R抑制剂和包含氘代CSF-1R抑制剂的药物组合物用于治疗免疫介导的疾病和神经系统疾病的用途，所述抑制剂具有醛氧化酶降解抗性，所述免疫介导的疾病包括多发性硬化症、狼疮性肾炎和类风湿性关节炎，所述神经系统疾病包括肌萎缩侧索硬化症(ALS)、多系统萎缩症(MSA)、进行性核上性麻痹(PSP)和亨廷顿病。
关于氘修饰，人们试图通过用氘原子替代一个或多个氢原子来减缓药物的CYP介导的代谢或减少不希望的代谢物的形成。氘是氢的安全、稳定的、非放射性同位素。与氢相比，氘与碳形成较强的键。在所选情况下，氘赋予的键强度增加可以积极地影响药物的ADME特性，产生改善的药物功效、安全性和/或耐受性的潜力。同时，由于氘的尺寸和形状与氢的尺寸和形状基本上相同，因此与仅含有氢的原始化学实体相比，氘替代氘预期将不会实质性地影响药物的生物化学效力和选择性。
应当注意，已经报道了对于非常小百分比的批准药物，氘取代对代谢速率的影响(参见例如，Blake,MI等人,J Pharm Sci,1975,64:367-91；Foster,AB,Adv Drug Res1985,14:1-40(“Foster”)；Kushner,DJ等人,Can J Physiol Pharmacol 1999,79-88；Fisher,MB等人,Curr Opin Drug Discov Devel,2006,9:101-09(“Fisher”))。然而，结果是可变的且不可预测的。对于一些化合物，氘代引起体内的代谢清除率降低。对于其他化合物，代谢没有变化。仍有其他化合物表现出增加的代谢清除率。氘效应的可变性也使专家质疑或不考虑氘修饰作为抑制不良代谢的可行药物设计策略(参见Foster的第35页和Fisher的第101页)。
本公开文本的化合物是用氘取代的如WO 2017/015267中所示的CSF-1R抑制剂化合物，并且具有改善的ADME特性并且特别是对AO降解的高抗性，因此潜在地改善药物功效和体内药物的暴露。鉴于如Manevski等人所描述的克服AO介导的代谢(例如，需要评估和平衡多种矛盾因素(诸如化合物结构基序))、实验确定体外和体内特性(例如，在肝微粒体或肝细胞中)的相互联锁且矛盾的挑战；和以上指出的用氘取代获得改善的ADME特性、特别是AO降解的降低的不确定性，这种结果非常令人惊讶和出乎意料。
在一个实施方案中，本公开文本涉及一种治疗需要此类治疗的受试者的由集落刺激因子-1受体(CSF-1R)介导的疾病或障碍或其中牵涉CSF-1R的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据式(I)或式(I’)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述疾病或障碍是需要此类治疗的受试者的神经系统疾病和免疫介导的疾病，包括多发性硬化症、ALS、MSA、PSP、亨廷顿病、狼疮、狼疮性肾炎和类风湿性关节炎，此类治疗包括向所述受试者施用有效量的根据式(I)或式(I’)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。
本公开文本还涉及包含根据式(I)或式(I’)的化合物的药物组合物。
附图说明
图1A和图1B示出了在CSF-1刺激后，示例性CSF-1R抑制性化合物(化合物24)对MCP-1趋化因子产生的影响。示出了平均值(图1A)和标准偏差(图1B)。
图2A和图2B示出了在CSF-1后，示例性氘代CSF-1R抑制性化合物(化合物6)对MCP-1趋化因子产生的影响。示出了平均值(图2A)和标准偏差(图2B)。
图3A和图3B示出了图1的实验的IC50曲线。
图4A和图4B示出了图2的实验的IC50曲线。
图5A-图5C示出了CSF-1R抑制剂化合物6(图5A)和PLX3397对照(图5C)以浓度依赖性方式显著降低了MCP-1产生。化合物49的结果示于图5B中。
图6A-图6C示出了CSF-1刺激显著增加了Iba1+面积，并且用CSF-1R抑制剂化合物6(图6A)和对照PLX3397(图6C)的处理以浓度依赖性方式显著消除了这种作用。化合物49的结果示于图6B中。
图7A-图7C示出了CSF-1刺激增加了培养物内的细胞数量(如通过DAPI+细胞证明)，以及CSF-1R抑制剂化合物6(图7A)和对照PLX3397(图7C)以浓度依赖性方式减少了这一数量。化合物49的结果示于图7B中。
图8A-图8B示出了在野生型(图8A)或SOD1(图8B)细胞中用DMSO(对照)或化合物6和CSF-1刺激进行预处理后的细胞活力。
图9A-图9B示出了在野生型(图9A)或SOD1(图9B)细胞中用DMSO(对照)或化合物6和LPS刺激进行处理后的细胞活力。
图10A-图10B示出了在野生型(图10A)或SOD1(图10B)细胞中用DMSO(对照)或化合物6和CSF-1刺激处理后的MCP-1产生。
图11A-图11B示出了在野生型(图11A)或SOD1(图11B)细胞中用DMSO(对照)或化合物6和LPS刺激处理后的IL-12p40产生。
图12A示出了在不存在AO抑制剂肼屈嗪的情况下在人冷冻保存的肝细胞中孵育后化合物24的体外代谢曲线。
图12B示出了在存在AO抑制剂肼屈嗪的情况下在人冷冻保存的肝细胞中孵育后化合物24的体外代谢曲线。
图13示出了提出的在不存在和存在AO抑制剂肼屈嗪的情况下在冷冻保存的人肝细胞中化合物24的代谢途径。
图14A示出了在不存在AO抑制剂肼屈嗪的情况下在人冷冻保存的肝细胞中孵育后化合物6的体外代谢曲线。
图14B示出了在存在AO抑制剂肼屈嗪的情况下在人冷冻保存的肝细胞中孵育后化合物6的体外代谢曲线。
图15示出了提出的在不存在和存在AO抑制剂肼屈嗪的情况下在冷冻保存的人肝细胞中化合物6的代谢途径。
图16示出了在CSF1R抑制剂处理和CSF1刺激后的细胞活力。
图17示出了在此实验中化合物6对CSF1诱导的MCP-1产生的阻断作用。
图18A-图18B将化合物6(图18A)与化合物24(图18B)的MCP1产生进行比较，显示了对MCP1的作用类似。
图19A-图19B示出了两种CSF1R抑制剂(化合物6和化合物24)显著地平均疾病得分。与非氘代化合物24相比，氘代CSF1R抑制剂化合物6以令人惊讶地更大的程度改善了麻痹症状。
图20示出了化合物6形式A的XRPD图。
图21示出了化合物6形式A的PLM图像。
图22示出了化合物6形式A的TGA(上图)/DSC(下图)覆盖图。
图23示出了化合物6形式A的HPLC。
具体实施方式
本公开文本涉及集落刺激因子-1受体抑制剂(“CSF-1R抑制剂”)，所述抑制剂是能够穿透血脑屏障以到达中枢神经系统(CNS)的小分子。本公开文本还涉及包含CSF-1R抑制剂的药物配制品并且涉及CSF-1R抑制剂和包含CSF-1R抑制剂的药物组合物治疗疾病的用途。此类疾病包括免疫介导的疾病(包括多发性硬化症、狼疮性肾炎、类风湿性关节炎)和神经系统疾病(包括肌萎缩侧索硬化症(ALS)和亨廷顿病。
多发性硬化症是引起间歇性复发和进行性神经系统恶化的CNS的慢性、炎性、脱髓鞘疾病。在多发性硬化症中，活化的小神经胶质细胞和巨噬细胞有助于CNS损伤，并且在疾病进展和神经变性中起显著作用。这些活化的先天免疫细胞可以参与抗原呈递，并且产生对神经元和少突胶质细胞具有破坏性的炎性和神经毒性介质。CSF-1R是在巨噬细胞、单核细胞和小神经胶质细胞上表达的受体-酪氨酸激酶，并且代表效应子功能的治疗性调节的潜在靶标。
本文所述的CSF-1R抑制剂在治疗多发性硬化症中特别有用，并且在临床前体外和体内研究中证明了以下内容：炎症细胞因子/趋化因子的减少、巨噬细胞/小神经胶质细胞的扩增和活化的抑制而没有对其吞噬活性产生负面影响、在多个体内疾病模型中CNS浸润的抑制和在小鼠疾病模型中的治疗益处。这些数据表明，通过降低炎症、脱髓鞘和轴突损失，通过CSF-1R拮抗作用抑制CNS巨噬细胞/小神经胶质细胞效应子功能在多发性硬化症中提供神经保护作用。还发现CSF-1R信号传导在ALS中上调，并且它也可能在例如PSP和MSA中上调，并且已经在文献中注意到CSF-1R抑制似乎在ALS、MSA和PSP的临床前模型中是有效的。参见例如，Gowing,G.等人,Macrophage colony stimulating factor(M-CSF)exacerbates ALS disease in a mouse model through altered responses ofmicroglia expressing mutant superoxide dismutase,Exp Neurol.2009年12月；220(2):267-75；Martínez-Muriana,A.等人,CSF1R blockade slows the progression ofamyotrophic lateral sclerosis by reducing microgliosis and invasion ofmacrophages into peripheral nerves,Sci Rep.2016年5月13日；6:25663；Neal,M.L.等人,Pharmacological inhibition of CSF1R by GW2580 reduces microglialproliferation and is protective against neuroinflammation and dopaminergicneurodegeneration.FASEB J.2020年1月；34(1):1679-1694；Oh,S.J.等人,Evaluation ofthe Neuroprotective Effect of Microglial Depletion by CSF-1R Inhibition in aParkinson's Animal Model.Mol Imaging Biol.2020年8月；22(4):1031-1042；Mancuso,R.等人,CSF1R inhibitor JNJ-40346527attenuates microglial proliferation andneurodegeneration in P301S mice.Brain.2019年10月1日；142(10):3243-3264；Lodder,C.等人,CSF1R inhibition rescues tau pathology and neurodegeneration in an A/T/N model with combined AD pathologies,while preserving plaque associatedmicroglia.Acta Neuropathol Commun.2021年6月8日；9(1):108。
在一个实施方案中，本公开文本涉及式(I)的化合物：
和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐，其中：
所述虚线表示任选的双键；
X1是C、N或CR7；
X2、X3、X4、X5、X6、X7各自独立地选自N、NR7或CR7；
X8和X9各自独立地选自N或C
其中每个R7独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C10)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、(C1-C10)烷氧基-、R8-(C2-C9)杂环烷基、R8-(C2-C9)杂芳基、R8-(C2-C10)烷基炔基、R8-(C2-C10)炔基胺、R8-(C1-C10)烷氧基-、R8-(C2-C9)杂环烷基-O-、卤基、氰基、H2N-、(CH3)HN-、(CH3)2N-、R8C(O)-、F3C-、F2HC-、CH3F2C-、FH2C-、CH3FHC-和(CH3)2FC；
其中R8各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C1-C10)烷基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、(C1-C10)烷氧基-、HO-、卤基、(CH3)2N-和H2N-；
其中每个(C1-C10)烷基、(C2-C9)杂芳基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：氘、(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷基胺；
T1、T2和T3各自独立地选自N或CR10，
其中每个R10独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C2-C10)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基-、COOH-(C3-C10)环烷基-、(C1-C10)烷氧基-、R10A-(C1-C10)烷基-、R10A-(C1-C10)烷基胺、R10A-((C1-C10)烷基)2胺、R10A-(C2-C10)炔基胺、R10A-C(O)-、R10A-(C1-C10)烷基-C(O)O-、R10A-(C1-C10)烷氧基-、HO-和卤基、氰基、H2N-、(CH3)HN-、(CH3)2N-、R10AR11N-、R10AR11N(O)C-、R10A(R11C(O))N-、R10AR11NC(O)O-、R10AC(O)-、R10AR11NC(O)R10AN-、(C1-C10)烷基-OC(O)R10AN-、F3C-、F2HC-、CH3F2C-、FH2C-、CH3FHC-、(CH3)2FC-；
其中R10A和R11各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、HO-、卤基、(CH3)2N-和H2N-；
其中每个(C1-C10)烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：D、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、HO-、卤基或H2N-
Y1是O、NR12或CR12R13；
其中R12不存在或者R12和R13各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、HO-、卤基和H2N-；
R1和R2各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、HO-、卤基和H2N；
R5不存在或选自H、D、(C1-C10)烷基、HO-、卤基和H2N-；并且
R6选自D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、R14-(C3-C10)环烷基、R14-(C6-C14)芳基、R14-(C2-C9)杂芳基和R14-(C1-C10)烷基胺；
其中R14各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C10)烷氧基-、HO-、F2HC-O-、卤基、(CH3)2N-、F3C-C(O)-、F3C-和F2HC-；
其中每个(C1-C10)烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C3-C10)环烷基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、HO-、卤基和H2N-；并且
Z1选自H、卤基和(C1-C10)烷基；
Y2是O、NR17或CR17R18；
其中R17不存在或者R17和R18各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、HO-、卤基或H2N-；
其中R7、R1或R2中的至少一个是D。
在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得X1是N。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得X2是N。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得X3是CR7。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得X4是CR7。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得X5是CR7。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得X6是N。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得X7是CR7。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得X8是C。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得X9是C。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得X1是N；x2是N；X3是CR7；X4是CR7；X5是CR7；x6是N；X7是CR7；X8是C；并且X9是C。
在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得T1是CR10。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得T2是CR10。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得T3是CR10。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得T1、T2和T3中的至少两个各自独立地是CR10。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得T1、T2和T3各自独立地是CR10。
在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得每个R10独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷氧基和卤基。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得每个R10独立地选自H、(C1-C10)烷基和卤基。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得每个R10独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基和卤基。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得每个R10独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基和卤基。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得每个R10独立地选自H和卤基。
在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得Y1是O。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得Y2是O。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得Y1和Y2各自是O。
在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得Z1选自H、卤基和(C1-C10)烷基。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得Z1是(C1-C10)烷基。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得Z1是卤基。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得Z1是H。
在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得R1和R2各自独立地选自H和D。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得R1和R2均是H。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得R1和R2均是D。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得R1和R2中的一个是H并且另一个是D。
在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得R6选自(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂芳基、R14-(C6-C14)芳基、R14-(C2-C9)杂芳基和R14-(C1-C10)烷基胺；其中R14各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、(C1-C10)烷氧基-、HO-、F2HC-O-、F3C-C(O)-、F3C-和F2HC-；并且其中每个(C3-C10)环烷基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：(C1-C10)烷基、HO-、卤基或H2N-。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I)的化合物使得R6选自(C3-C10)环烷基和(C2-C9)杂芳基；并且其中每个(C3-C10)环烷基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被选自以下的一至两个基团取代：(C1-C10)烷基、HO-、卤基或H2N-。
在另一方面，本公开文本涉及式(I’)的化合物：
和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐，其中：
所述虚线表示任选的双键；
A选自H和D；
X3’是CR3’，其中R3’选自H和D；
X4’是CR4’，其中R4’选自H、D和R7；并且
X5’是CR5’，其中R5’选自H和D，
其中A、R3’、R4'和R5’中的至少一个是D。
在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I’)的化合物使得R1和R2各自独立地选自H和D。在本公开文本的至少一个实施方案中，根据式(I’)的化合物使得R6选自(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂芳基、R14-(C6-C14)芳基、R14-(C2-C9)杂芳基和R14-(C1-C10)烷基胺；其中R14各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、(C1-C10)烷氧基-、HO-、F2HC-O-、F3C-C(O)-、F3C-和F2HC-；并且其中每个(C1-C10)烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C3-C10)环烷基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：(C1-C10)烷基、HO-、卤基或H2N-。
在另一方面，本公开文本涉及表A的化合物，和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐：
表A
在本公开文本的至少一个实施方案中，所述化合物选自3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在本公开文本的至少一个实施方案中，所述化合物是3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d。
本公开文本的另一方面是一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和式(I)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，所述药物组合物包含式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐。
本公开文本的另一方面是一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和至少一种式(I’)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，所述药物组合物包含式(I’)的化合物和/或其药学上可接受的盐。
本公开文本的另一方面是一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和表A的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，所述药物组合物包含表A的化合物和/或其药学上可接受的盐。在本公开文本的一个方面，所述药物组合物包含3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在本公开文本的一个方面，所述药物组合物包含3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d形式A。
本公开文本的另一方面是一种治疗有需要的受试者的疾病或障碍(诸如神经系统疾病和免疫介导的疾病)的方法，所述方法包括施用治疗有效量的如本文所述的式(I)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，所述方法包括施用治疗有效量的如本文所述的式(I’)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，所述方法包括施用治疗有效量的如本文所述的表A的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在本公开文本的一个方面，所述药物组合物包含3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在本公开文本的一个方面，所述药物组合物包含3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d形式A。
本公开文本的另一方面是一种治疗有需要的受试者的疾病或障碍(诸如神经系统疾病和免疫介导的疾病)的方法，所述方法包括施用一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的如本文所述的式(I)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，所述方法包括施用一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的如本文所述的式(I’)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，所述方法包括施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含如本文所述的表A的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在本公开文本的一个方面，所述方法包括施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含如本文所述的3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐和/或其药学上可接受的盐。在本公开文本的一个方面，所述方法包括施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含如本文所述的3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d形式A和/或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本公开文本提供了如本文所述用作药剂的式(I)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，如本文所述用作药剂的式(I)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐是如本文所述的式(I’)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，如本文所述用作药剂的式(I)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐是如本文所述的表A的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，如本文所述用作药剂的式(I)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐是选自以下的化合物：3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在本公开文本的一个方面，所述化合物包含如本文所述的3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐和/或其药学上可接受的盐。在本公开文本的一个方面，所述化合物包含如本文所述的3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d形式A和/或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本公开文本提供了如本文所述用于治疗有需要的受试者的疾病或障碍(诸如神经系统疾病和免疫介导的疾病)的式(I)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，如本文所述用于治疗有需要的受试者的疾病或障碍(诸如神经系统疾病和免疫介导的疾病)的式(I)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐是如本文所述的式(I’)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，如本文所述用于治疗有需要的受试者的疾病或障碍(诸如神经系统疾病和免疫介导的疾病)的式(I)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐是如本文所述的表A的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在至少一个实施方案中，如本文所述用于治疗有需要的受试者的疾病或障碍(诸如神经系统疾病和免疫介导的疾病)的式(I)的化合物和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐是选自以下的化合物：3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。在本公开文本的一个方面，所述化合物包含如本文所述的3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐和/或其药学上可接受的盐。在本公开文本的一个方面，所述化合物包含如本文所述的3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d形式A和/或其药学上可接受的盐。
在本公开文本的一些方面，所述神经系统疾病和免疫介导的疾病包括多发性硬化症、ALS、MSA、PSP、亨廷顿病、狼疮、狼疮性肾炎和类风湿性关节炎。
实施例中描述了氘代CSF-1R抑制剂的体外和体内作用、其耐受代谢降解的能力、以及制备本公开文本的选择氘代CSF-1R抑制剂的方法。
尽管本公开文本的特定的实施方案现在将参考制备和方案进行描述，但是应当理解，此类实施方案仅通过举例的方式，并且仅对可以表示本公开文本的原理的应用的许多可能的特定的实施方案中的少量进行说明。考虑到本公开文本的益处，多种变化和修饰对于本领域技术人员来说将是显而易见的，并且如在所附权利要求中进一步定义的，所述多种变化和修饰被认为是在本公开文本的精神和范围内。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开文本所属的领域中的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管在实践或测试中可以使用其他化合物或方法，但是现在在以下制备和方案的上下文中描述了某些优选的方法。
如本文所用，术语“氨基”意指具有氮原子和1至2个氢原子的官能团。“氨基”通常可以在本文中用于描述伯胺、仲胺、或叔胺，并且在本公开文本中使用此术语的上下文的情况下本领域技术人员将能够容易地确定所述氨基的身份。术语“胺”或“胺基(aminegroup)”或“氨基(ammonia group)”意指含有来源于氨(NH3)的氮原子的官能团。胺基优选是伯胺，这意味着氮键合至两个氢原子和一个取代基，所述取代基包含经取代或未经取代的烷基或芳基或脂族基团或芳族基团。胺基可以是仲胺，这意味着氮键合至一个氢原子和两个取代基，所述取代基包含经取代或未经取代的烷基或芳基或脂族基团或芳族基团，如下文所定义的。胺基可以是叔胺，这意味着氮键合至三个取代基，所述取代基包含经取代或未经取代的烷基或芳基或脂族基团或芳族基团。胺基也可以是季胺，这意味着指定的胺基键合至第四基团，这导致带正电荷的铵基。
应当理解，本公开文本中的任何或所有的胺可以呈游离胺形式(即，作为伯胺的-NH2)，或呈具有药学上可接受的阴离子的质子化形式(即，作为伯胺的-NH3 +Y-，其中Y-是药学上可接受的阴离子)。
如本文所用，术语“酰胺基”意指包含与氮连接的羰基的官能团。
如本文所用，“羰基”意指包含由(C＝O)表示的双键键合至氧原子的碳原子的官能团。
如本文所用，术语“烷烃”意指通过单键键合的饱和烃。烷烃可以是直链的或支链的。“环烷烃”是通过单键键合的饱和烃环。
如本文所用，术语“(C1-C10)烷基”意指基本上由1至10个碳原子和相应数量的氢原子组成的饱和直链或支链或环状烃。典型地，直链或支链基团具有从一至十个碳或更典型的一至五个碳。示例性(C1-C10)烷基包括甲基(由-CH3表示)、乙基(由-CH2-CH3表示)、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基等。鉴于本公开文本的益处，其他(C1-C-10)烷基对本领域技术人员来说将是显而易见的。
如本文所用，术语“(C2-C9)杂烷基”意指基本上由2至10个原子组成的饱和直链或支链或环状烃，其中2至9个原子是碳并且剩余的一个或多个原子选自氮、硫和氧。鉴于本公开文本的益处，示例性(C2-C9)杂烷基对本领域技术人员来说将是显而易见的。
如本文所用，术语“(C3-C10)环烷基”意指非芳族饱和烃基，形成至少一个基本上由3至10个碳原子和相应数量的氢原子组成的环。(C3-C10)环烷基可以是单环的或多环的。除了共价键取代之外，多环的环烷基的单个环可以具有不同的连接性，例如，稠合、桥接、螺等。示例性(C3-C10)环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、降冰片基、双环-辛基、八氢戊搭烯基、螺-癸基、被环丁基取代的环丙基、被环戊基取代的环丁基、被环丙基取代的环己基等。鉴于本公开文本的益处，其他(C3-C10)环烷基对本领域技术人员来说将是显而易见的。
如本文所用，术语“(C2-C9)杂环烷基”意指具有形成至少一个环的3至10个原子的非芳族基团，其中2至9个环原子是碳并且剩余的一个或多个环原子选自氮、硫和氧。(C2-C9)杂环烷基可以是单环的或多环的。除了共价键取代之外，此类多环的杂环烷基的单个环可以具有不同的连接性，例如，稠合、桥接、螺等。示例性(C2-C9)杂环烷基包括吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢吡喃基、吡喃基、硫代吡喃基、氮丙啶基、氮杂环丁烷基、环氧乙基、亚甲二氧基、色烯基、巴比妥基(barbituryl)、异噁唑烷基、1,3-噁唑烷-3-基、异噻唑烷基、1,3-噻唑烷-3-基、1,2-吡唑烷-2-基、1,3-吡唑烷-1-基、哌啶基、硫代吗啉基、1,2-四氢噻嗪-2-基、1,3-四氢噻嗪-3-基、四氢噻二嗪基、吗啉基、1,2-四氢二嗪-2-基、1,3-四氢二嗪-1-基、四氢吖庚因基、哌嗪基、哌嗪-2-酮基、哌嗪-3-酮基、色满基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、咪唑烷基、2-咪唑烷基、1,4-二噁烷基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、3-氮杂双环[3.2.1]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、2-氮杂螺[4.4]壬基、7-氧杂-1-氮杂-螺[4.4]壬基、7-氮杂双环[2.2.2]庚基、八氢-1H-吲哚基等。所述(C2-C9)杂环烷基典型地经由碳原子或氮原子与主要结构附接。鉴于本公开文本的益处，其他(C2-C9)杂环烷基对本领域技术人员来说将是显而易见的。
术语“脂族基团”或“脂族”意指由碳和氢组成的非芳族基团，并且可以任选地包括一个或多个双键和/或三键。换言之，脂族基团是由含有无芳族官能团的碳和氢组成的任何基团。脂族基团可以是直链的、支链的或环状的，并且典型地含有约1与约24个之间的碳原子。
术语“芳基(aryl group)”可以与“芳基(aryl)”、“芳环(aryl ring)”、“芳族(aromatic)”、“芳族基团(aromatic group)”和“芳族环(aromatic ring)”互换使用。芳基包括碳环芳族基团，典型地具有六至十四个环碳原子。芳基还包括杂芳基，其典型地具有五至十四个环原子，具有一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子。
如本文所用，术语“(C6-C14)芳基”意指具有形成至少一个环的6至14个碳原子的芳族官能团。
如本文所用，术语“(C2-C9)杂芳基”意指具有形成至少一个环的5至10个原子的芳族官能团，其中2至9个环原子是碳并且剩余的一个或多个环原子选自氮、硫和氧。(C2-C9)杂芳基可以是单环的或多环的。除了共价键取代之外，此类多环的杂芳基的单个环可以具有不同的连接性，例如稠合等。示例性(C2-C9)杂芳基包括呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、咪唑基、1,3,5-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,3,5-噻二唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、1,2,4-三嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、吡唑并[3,4-b]吡啶基、噌啉基、喋啶基、嘌呤基、6,7-二氢-5H-[1]吡啶基、苯并[b]苯硫基、5,6,7,8-四氢-喹啉-3-基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、硫茚基、异硫茚基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲哚基、吲哚嗪基、吲唑基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基和苯并噁嗪基等。(C2-C9)杂芳基典型地经由碳原子与主要结构附接，然而，本领域技术人员意识到某些其他原子(例如，杂环原子)可以在何时与主要结构附接。鉴于本公开文本的益处，其他(C2-C9)杂芳基对本领域技术人员来说将是显而易见的。
术语“炔基”意指含有三键合碳的官能团，由(C2-C10)炔基-表示。
如本文所用，术语“烷基胺”意指含有代替一个氢原子的伯胺、仲胺或叔胺基团的(C1-C10)烷基，由(C1-C10)烷基胺和((C1-C10)烷基)2胺表示。
术语“炔基胺”意指含有三键合碳和胺基团的(C2-C10)基团，由(C2-C10)炔基胺表示。
术语“烷氧基”意指与氧键合的(C1-C10)烷基，由(C1-C10)烷基-O-或(C1-C10)烷氧基-表示。术语“烷氧基烷基”意指与另一个(C1-C10)烷基键合的氧键合的(C1-C10)烷基，由(C1-C10)烷基-O-(C1-C10)烷基-或(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-表示。
术语“烷基酯”意指含有代替一个氢原子的酯基团的(C1-C10)烷基，由-O(O)C-(C1-C10)烷基表示。
术语“烷基酸”意指含有代替一个氢原子的羧酸基团的(C1-C10)烷基，由(C1-C10)烷基-COOH表示。
术语“脂族酸”意指非芳族烃的酸，由(C1-C10)烷基-COOH和(C3-C10)环烷基-COOH表示。
如本文所用，“D”和“d”二者均是指氘。
术语“二羰基”是指含有两个或更多个相邻羰基的有机分子。由C＝O表示的羰基可以是例如醛、酮和具有与碳原子双键键合的氧原子的其他基团。例子包括乙二醛、甲基乙二醛、二甲基乙二醛和3-脱氧葡萄糖酮醛。
术语“卤基”或“Hal”意指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)、碘(I)或砹(At)离子。
如本文所用，“i-”是指异。
术语“甲氧基”意指含有替代一个氢原子的氧的(C1)烷基，由-(O)CH3表示。
如本文所用，“n-”是指正。
术语“多元醇”意指含有多个羟基(-OH)基团的醇。
如本文所用，“Sec”或“s-”各自是指仲。
如本文所用，术语“立体异构体”是指对映异构体和非对映异构体二者。
“经取代的”意指烷基、杂环基团或芳基中的碳用一个或多个非碳取代基取代。非碳取代基选自氮、氧和硫。
如本文所用，“Tert”和“t-”各自是指叔。
“未经取代的”意指仅由氢和碳组成的基团。
3至10元环指封闭环；3至10元环可以是无环的、芳族环的或杂环的。
术语“药学上可接受的阴离子”意指适用于药学用途的阴离子。药学上可接受的阴离子包括卤离子、碳酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫酸氢根、氢氧根、硝酸根、过硫酸根、磷酸根、亚硫酸根、乙酸根、抗坏血酸根、苯甲酸根、柠檬酸根、柠檬酸二氢根、柠檬酸氢根、草酸根、琥珀酸根、酒石酸根、牛磺胆酸根、甘氨胆酸根和胆酸根。
“被氘取代”是指用相应数目的氘原子替代一或多个氢原子。
本发明公开的化合物的所有药学上可接受的盐、前药、互变异构体、水合物和溶剂化物也在本公开文本的范围内。
本发明公开了本质上是碱性的化合物，通常能够形成具有各种无机和/或有机酸的各种不同的盐。虽然此类盐对于施用至动物和人通常是药学上可接受的，实践中通常希望首先将化合物从反应混合物中作为药学上不可接受的盐分离，并且然后将后者通过用碱性试剂处理简单转化回游离碱化合物，并且随后将所述游离碱转化为药学上可接受的酸加成盐。碱性化合物的酸加成盐可以使用常规技术容易地制备，例如，通过将碱性化合物在水性溶剂介质中或在合适的有机溶剂(例如像，甲醇或乙醇)中用基本上等量的所选的无机酸或有机酸处理。谨慎蒸发溶剂后，获得所希望的固体盐。
可用于制备碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是可以形成无毒酸加成盐的那些，所述无毒酸加成盐即含有药理学上可接受的阴离子的盐，诸如氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、磷酸盐或酸性磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐或酸性柠檬酸盐、酒石酸盐或酒石氢酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、糖酸盐、苯甲酸盐、甲烷磺酸盐和双羟萘酸盐[即，1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐)]盐。
本发明公开了本质上是酸性(例如，含有COOH或四唑部分)的化合物，通常能够形成具有各种无机碱和/或有机碱的各种不同的盐。虽然此类盐对于施用至动物和人通常是药学上可接受的，实践中通常希望首先将化合物从反应混合物中作为药学上不可接受的盐分离，并且然后将后者通过用酸性试剂处理简单转化回游离酸化合物，并且随后将所述游离酸转化为药学上可接受的碱加成盐。这些碱加成盐可以使用常规技术容易地制备，例如，通过将相应的酸性化合物用含有所希望的药理学上可接受的阳离子的水溶液处理，并且然后将所得溶液蒸发至干(优选在减压下)。可替代地，它们还可以通过以下方式制备：将酸性化合物的低级烷醇溶液和所希望的碱金属醇盐混合在一起，并且然后以与以前相同的方式将所得溶液蒸发至干。在任一种情况下，优选采用化学计量量的试剂以确保反应的完整性和所希望的固体盐的最大产物产率。
可用于制备碱性化合物的药学上可接受的碱加成盐的碱是可以形成无毒碱加成盐的那些，所述无毒碱加成盐即含有药理学上可接受的阳离子的盐，诸如碱金属阳离子(例如，钾和钠)、碱土金属阳离子(例如，钙和镁)、铵或其他水溶性胺加成盐诸如N-甲基葡糖胺(葡甲胺)、低级烷醇铵和其他有机胺的此类碱。
本发明公开的化合物的立体异构体(例如，顺式和反式异构体)和所有光学异构体(例如，R和S对映异构体)，以及外消旋异构体、非对映异构体和此类异构体的其他混合物在本公开文本的范围内。
本发明公开的化合物、盐、前药、水合物和溶剂化物可以以几种互变异构的形式(包括烯醇与亚胺形式和酮与烯胺形式)和几何异构体及其混合物存在。互变异构体以在溶液中互变异构体集的混合物存在。在固体形式中，通常是一种互变异构体占主导地位。即使可以描述一种互变异构体，所有互变异构体也在本公开文本的范围内。
阻转异构体也在本公开文本的范围内。阻转异构体是指可以分离成旋转限制的异构体的化合物。
本公开文本还提供了药物组合物，所述药物组合物包含至少一种本发明公开的化合物和至少一种药学上可接受的载体。药学上可接受的载体可以是本领域已知的任何此类载体，包括描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,(A.R.Gennaro,编辑1985)中的那些。本发明公开的化合物的药物组合物可以通过本领域已知的常规方法(包括例如将至少一种本发明公开的化合物与药学上可接受的载体混合)制备。
本发明公开的药物组合物可以用于动物或人。因此，本发明公开的化合物可以被配制成用于口服、口腔、肠胃外(例如，静脉内、肌内或皮下)、局部、直肠或鼻内施用或呈适于通过吸入或吹入施用的形式的药物组合物。
根据本领域普通技术人员熟知的方法，本发明公开的化合物也可以被配制用于持续递送。此类配制品的例子可以在美国专利3,119,742；3,492,397；3,538,214；4,060,598；和4,173,626中找到。
对于口服施用，所述药物组合物可以采取例如通过常规手段用一种或多种诸如以下的药学上可接受的赋形剂制备的片剂或胶囊的形式：粘合剂(例如，预糊化的玉蜀黍淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；和/或润湿剂(例如，十二烷基硫酸钠)。可以通过本领域熟知的方法将片剂包衣。用于口服施用的液体制剂可以采用例如溶液、糖浆或混悬剂的形式，或者它们可以呈现为干燥产品，用于在使用前用水或其他合适的媒介物重构。此类液体制剂可以通过常规手段用一种或多种诸如以下的药学上可接受的添加剂制备：助悬剂(例如，山梨糖醇糖浆、甲基纤维素或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性媒介物(例如，扁桃仁油、油性酯或乙醇)；和/或防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。
用于口服、肠胃外或经颊施用至一般成年人以治疗或预防CSF-1R相关疾病状态的本发明公开的化合物的建议剂量是约0.1mg至约2000mg。在某些实施方案中，建议剂量是每单位剂量从约0.1mg至约200mg活性成分。无论建议剂量的量如何，所述化合物的施用都可以发生，例如1至4次/天。
药物组合物和包括施用至少一种本发明公开的化合物的前药的治疗或预防方法也在本公开文本的范围内。
根据式(I)和式(I’)的合适的CSF-1R抑制剂的非限制性例子呈现在以下实施例中。应当理解，在根据式(I)和式(I’)的抑制剂中呈现的结构的任何或所有胺在以下实施例中呈现，可以呈具有游离胺的形式或呈具有药学上可接受的阴离子的质子化形式。优选的药学上可接受的阴离子包括卤离子、碳酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫酸氢根、氢氧根、硝酸根、过硫酸根、磷酸根、亚硫酸根、乙酸根、抗坏血酸根、苯甲酸根、柠檬酸根、柠檬酸二氢根、柠檬酸氢根、草酸根、琥珀酸根、酒石酸根、牛磺胆酸根、甘氨胆酸根和胆酸根。最优选的药学上可接受的阴离子包括氯离子、碳酸根和碳酸氢根。还应理解，根据式(I)和式(I’)的任何或所有CSF-1R抑制剂可以是外消旋体或外消旋体的对映异构体。
实施例
实施例1：合成方法
通过参考本文参考和公开的制备、方案和实施例，本领域的合成化学技术人员可以容易地实现式I的化合物的合成。在WO2017/015267的通用方案和合成实施例中公开了与用于制备式I的化合物及其中间体的制备、方案和程序类似的相关制备、方案和程序。参考以下呈现的合成制备和方案描述本公开文本的特定实施方案；应当理解，此类实施方案仅作为举例，并且仅对可以表示本公开文本的原理的应用的许多可能特定实施方案中的少数进行说明。鉴于本公开文本的益处，对制备、方案和实施例的各种变化和修饰对于本领域技术人员来说将是显而易见的。
合成实施例(实施例1-9)
实施例1：(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-d(化合物1)的合成
实施例1-1：(+/-)-(反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-甲酸甲酯的制备
向4-羟基-3-((1-羟基-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-基)氧基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(1.41g，3.88mmol，关于制备参见WO 2017015267)、三苯基膦(1.23g，4.66mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(1.0mL，5.82mmol)在乙腈(30mL)中的搅拌溶液中添加四氯化碳(1.9mL，19.40mmol)。将所得的无色溶液加热至回流，并且在惰性气氛下搅拌。45min后，LC/MS分析显示反应完成。将混合物冷却至室温并且浓缩以提供棕褐色固体。色谱纯化(CombiFlash，80g SiO2 gold柱，10％-30％乙酸乙酯/庚烷洗脱)得到呈白色固体的(+/-)-(反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-甲酸甲酯(0.75g，2.18mmol，56％产率)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.19(d,J＝2.4Hz,1H),7.59(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.34(d,J＝1.9Hz,1H),7.23(d,J＝1.9Hz,1H),6.80(d,J＝8.6Hz,1H),4.70(d,J＝7.8Hz,1H),4.15(dq,J＝7.8,6.4Hz,1H),3.96(s,3H),3.90(s,6H),1.22(d,J＝6.4Hz,3H)ppm；(M+1)＝346。
实施例1-2：(+/-)-((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲醇的制备
向(+/-)-反式-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-甲酸甲酯(0.75g，2.18mmol)在四氢呋喃(30ml)中搅拌的0℃溶液中一次性添加氢化铝锂(0.12g，3.27mmol)(注意到少量气体放出)。将所得的灰色混合物在惰性气氛下在0℃下搅拌。10min后，LC/MS分析显示反应完成。将混合物通过添加水(0.12mL)、1N氢氧化钠溶液(0.12mL)和水(0.38mL)淬灭。将所得的混合物在0℃下搅拌10分钟，并且然后添加硫酸镁(约5g)。将混合物通过硅藻土过滤，并且将滤饼用乙酸乙酯(50mL)洗涤。将滤液浓缩以提供呈粘性白色泡沫的(+/-)-((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲醇(0.69g，2.18mmol，100％产率)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝2.3Hz,1H),7.77(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.89(d,J＝8.5Hz,1H),6.55(d,J＝1.9Hz,1H),6.49(d,J＝1.9Hz,1H),5.09(br s,1H),4.74(d,J＝7.7Hz,1H),4.38(s,2H),4.31(dq,J＝7.7,6.3Hz,1H),3.88(s,3H),3.72(s,3H),1.09(d,J＝6.3Hz,3H)；(M+1)＝318。
实施例1-3：(+/-)-5-溴-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶的制备
向5-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.21g，0.99mmol)和(+/-)-((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲醇(0.35g，1.10mmol)在甲苯(10ml)中的搅拌溶液中添加(三丁基亚正膦基)乙腈(0.43g，1.74mmol)。将所得的混合物在密封容器中加热至75℃并且允许搅拌。18h后，LC/MS分析显示反应完成。将混合物冷却至室温并且浓缩以提供棕色油状物。色谱纯化(CombiFlash，40g SiO2 gold柱，20％-60％3:1乙酸乙酯:乙醇/庚烷洗脱)得到呈棕褐色固体的(+/-)-5-溴-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.33g，0.67mmol，67％产率)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(s,1H),8.23(d,J＝2.3Hz,1H),8.08(d,J＝8.3Hz,1H),7.73(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.49(d,J＝8.3Hz,1H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),6.79(d,J＝1.9Hz,1H),6.46(d,J＝1.9Hz,1H),5.36(s,2H),4.73(d,J＝7.8Hz,1H),4.29(dq,J＝7.8,6.3Hz,1H),3.87(s,3H),3.73(s,3H),1.05(d,J＝6.3Hz,3H)ppm；(M+1)＝497。区域化学的确认：1H-13C HSQC NMR数据分别在8.61和145.8ppm处鉴定了咪唑C-2质子和碳。接下来，1H-13C HMBC NMR数据示出了在8.61ppm处的此质子与134.1和146.4ppm的季环碳之间的多键相关性，其中146.4ppm处的碳与吡啶氮相邻。最后，通过在HMBC NMR数据中证明的在5.36ppm处的相邻的亚甲基质子与145.8ppm和146.4ppm处的季碳之间的1H-13C多键相关性来确认连接。
实施例1-4：(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-d的制备
向(+/-)-5-溴-反式-3-((-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.53mg，1.06mmol)在2-丙醇-d8(5mL)中的搅拌溶液(注意：在20mL烘箱干燥的微波反应容器中进行)中添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.19g，0.21mmol)、2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(0.27g，0.63mmol)和碳酸钾(0.29g，2.12mmol)。将容器密封，并且将内容物在真空/用N2回填下脱气(x 3)。将混合物加热至100℃并且允许搅拌。2h后，LC/MS分析显示反应完成。将混合物冷却至室温并且浓缩以提供棕色油状物。色谱纯化(CombiFlash，40g SiO2 gold柱，20％-70％3:1乙酸乙酯:乙醇/庚烷洗脱)得到呈棕褐色固体的(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-d(0.30g，0.72mmol，68％产率)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60(s,1H),8.22(d,J＝2.3Hz,1H),8.10(d,J＝8.1Hz,1H),7.73(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.30(d,J＝8.1Hz,1H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),6.76(d,J＝1.9Hz,1H),6.49(d,J＝1.9Hz,1H),5.39(s,2H),4.72(d,J＝7.8Hz,1H),4.27(dq,J＝7.8,6.4Hz,1H),3.86(s,3H),3.70(s,3H),1.04(d,J＝6.4Hz,3H)ppm；(M+1)＝420。
实施例2：(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2,5-d2(化合物2)的合成
实施例2-1：2-溴-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-d的制备
向2-溴-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-d(0.25g，0.59mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3ml)的搅拌溶液中添加四溴化碳(0.32g，0.96mmol)和叔丁醇钠(0.23g，2.35mmol)。将所得的深棕色混合物在室温下搅拌。30min后，LC/MS分析显示形成新产物并且仍然存在起始材料。将另外部分的四溴化碳(0.32g，0.96mmol)和叔丁醇钠(0.23g，2.35mmol)添加到混合物中。1h后，LC/MS分析显示反应仍未完成。将混合物淬灭至饱和氯化铵溶液(50mL)中。将混合物用乙酸乙酯(40mL)萃取。将有机相用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并且浓缩以提供棕色油状物。色谱纯化(CombiFlash，40g SiO2gold柱，10％-50％3:1乙酸乙酯:乙醇/庚烷洗脱)得到呈灰白色固体的(+/-)-2-溴-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-d(0.089g，0.18mmol，31％产率)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(d,J＝2.3Hz,1H),8.11(d,J＝8.0Hz,1H),7.73(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),6.69(d,J＝1.9Hz,1H),6.27(d,J＝1.9Hz,1H),5.41(s,2H),4.72(d,J＝7.8Hz,1H),4.28(dq,J＝7.8,6.3Hz,1H),3.87(s,3H),3.69(s,3H),1.02(d,J＝6.3Hz,3H)ppm；(M+1)＝498。
实施例2-2：(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2,5-d2的制备
向(+/-)-2-溴-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-d(0.085mg，0.17mmol)在2-丙醇-d8(3mL)中的搅拌溶液(注意：在20mL烘箱干燥的微波反应容器中进行)中添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.031g，0.034mmol)、2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(0.043g，0.10mmol)和碳酸钾(0.047g，0.34mmol)。将容器密封，并且将内容物在真空/用N2回填下脱气(x3)。将混合物加热至100℃并且搅拌。2h后，LC/MS分析显示反应完成。将混合物冷却至室温并且浓缩以提供棕色油状物。色谱纯化(CombiFlash，24g SiO2 gold柱，20％-70％3:1乙酸乙酯:乙醇/庚烷洗脱)得到呈浅黄色固体的(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2,5-d2(0.047g，0.11mmol，66％产率)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(d,J＝2.3Hz,1H),8.10(d,J＝8.0Hz,1H),7.73(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),7.30(d,J＝8.0Hz,1H),6.88(d,J＝8.7Hz,1H),6.76(d,J＝2.0Hz,1H),6.49(d,J＝2.0Hz,1H),5.39(s,2H),4.72(d,J＝7.8Hz,1H),4.27(dq,J＝7.8,6.3Hz,1H),3.86(s,3H),3.70(s,3H),1.04(d,J＝6.3Hz,3H)ppm；(M+1)＝421。
实施例3：(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(化合物3)的合成
实施例3-1：(+/-)-((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲-d2-醇的制备
向(+/-)-(反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-甲酸甲酯(2.08g，6.02mmol)在四氢呋喃(60mL)中的0℃搅拌溶液中一次性添加氘化铝锂(0.34g，8.13mmol)(注意到少量气体放出)。将所得的灰色混合物在0℃下搅拌。15min后，LC/MS分析显示反应完成。将混合物通过添加水(0.50mL)、1N氢氧化钠溶液(0.50mL)和水(1.5mL)淬灭。将所得的混合物在0℃下搅拌15min，并且然后添加硫酸镁(约10g)。将混合物通过硅藻土过滤，并且将滤饼用乙酸乙酯(100mL)洗涤。将滤液浓缩以提供呈粘性白色泡沫的(+/-)-((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲-d2-醇(1.92g，6.01mmol，100％产率)：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.15(d,J＝2.5Hz,1H),7.59(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H),6.79(d,J＝8.6Hz,1H),6.59(d,J＝1.9Hz,1H),6.57(d,J＝1.9Hz,1H),4.63(d,J＝7.8Hz,1H),4.14(dq,J＝7.8,6.4Hz,1H),3.95(s,3H),3.86(s,3H),1.19(d,J＝6.4Hz,3H)；(M+1)＝320。
实施例3-2：(+/-)-5-((反式)-6-(叠氮基甲基-d2)-8-甲氧基-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-2-基)-2-甲氧基吡啶的制备
向(+/-)-((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲-d2-醇(1.92g，6.01mmol)和二苯基磷酰基叠氮化合物(2.07mL，9.62mmol)在四氢呋喃(50mL)中的搅拌溶液中添加1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(1.4mL，9.62mmol)。将所得的混合物加热至回流，并且在惰性气氛下搅拌。1h后，LC/MS分析显示反应完成。将无色溶液冷却至室温并且浓缩以提供黄色油状物。色谱纯化(CombiFlash，40g SiO2 gold柱，10％-30％乙酸乙酯/庚烷洗脱)得到呈白色固体的(+/-)-5-((反式)-6-(叠氮基甲基-d2)-8-甲氧基-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-2-基)-2-甲氧基吡啶(1.78g，5.17mmol，86％产率)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.19(d,J＝2.4Hz,1H),7.60(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),6.80(d,J＝8.7Hz,1H),6.57(d,J＝2.0Hz,1H),6.47(d,J＝2.0Hz,1H),4.65(d,J＝7.9Hz,1H),4.15(dq,J＝7.9,6.4Hz,1H),3.96(s,3H),3.86(s,3H),1.20(d,J＝6.4Hz,3H)ppm；(M+1)＝345。
实施例3-3：(+/-)-((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲-d2-胺的制备
向(+/-)-5-((反式)-6-(叠氮基甲基-d2)-8-甲氧基-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-2-基)-2-甲氧基吡啶(1.78g，5.17mmol)在四氢呋喃(50mL)和水(5mL)的搅拌溶液中添加聚合物键合的三苯基膦(3.50g，约10.50mmol)。将橙色悬浮液加热至回流并且在惰性气氛下搅拌。2h后，LC/MS分析显示反应完成。将混合物冷却至室温，并且借助乙酸乙酯(50mL)通过硅藻土过滤。将滤液经硫酸镁干燥，过滤并且浓缩以提供呈无色油状物的(+/-)-((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲-d2-胺(1.61g，5.06mmol，98％产率)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(d,J＝2.4Hz,1H),7.59(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,1H),6.54(d,J＝1.9Hz,1H),6.50(d,J＝1.9Hz,1H),4.63(d,J＝7.8Hz,1H),4.13(dq,J＝7.8,6.4Hz,1H),3.95(s,3H),3.85(s,3H),2.04(s,2H),1.19(d,J＝6.4Hz,3H)ppm；(M-16)＝302。
实施例3-4：(+/-)-N-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3-硝基吡啶-2-胺的制备
向(+/-)-((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲-d2-胺(1.61g，5.06mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(1.3mL，7.59mmol)在乙腈(30mL)中的搅拌溶液中添加2-氯-3-硝基吡啶(0.84g，5.31mmol)。将所得的混合物加热至回流，并且在惰性气氛下搅拌。16h后，黄色混合物的LC/MS分析显示反应完成。将混合物冷却至室温并且用水(50mL)稀释。将所得混合物用乙酸乙酯(2x 50mL)萃取。将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并且浓缩以提供呈黄色固体的(+/-)-N-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3-硝基吡啶-2-胺(2.05g，4.65mmol，92％产率)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.51–8.40(m,3H),8.17(d,J＝2.4Hz,1H),7.58(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.79(d,J＝8.6Hz,1H),6.70–6.66(m,1H),6.61(d,J＝1.9Hz,1H),6.55(d,J＝1.9Hz,1H),4.63(d,J＝7.8Hz,1H),4.18–4.09(m,1H),3.95(s,3H),3.84(s,3H),1.19(d,J＝6.4Hz,3H)ppm；(M+1)＝441。
实施例3-5：(+/-)-N2-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)吡啶-2,3-二胺的制备
向(+/-)-N-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3-硝基吡啶-2-胺(2.05g，4.65mmol)和氯化铵(1.99g，37.23mmol)在四氢呋喃(50mL)/甲醇(20mL)/水(10mL)的混合物中的搅拌溶液中添加锌粉(2.43g，37.23mmol)。将所得的混合物在室温下搅拌。45min后，LC/MS分析显示反应完成。将灰色悬浮液通过硅藻土过滤，并且将滤饼用乙酸乙酯(75mL)洗涤。将滤液用5N氢氧化铵溶液(50mL)洗涤。将有机相经硫酸镁干燥，过滤并且浓缩以提供呈深棕色固体的(+/-)-N2-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)吡啶-2,3-二胺(1.72g，4.19mmol，90％产率)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(d,J＝2.4Hz,1H),7.78(dd,J＝5.1,1.5Hz,1H),7.58(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.88(dd,J＝7.4,1.5Hz,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,1H),6.65(d,J＝1.9Hz,1H),6.59(d,J＝1.9Hz,1H),6.56(dd,J＝7.4,5.1Hz,1H),4.63(d,J＝7.7Hz,1H),4.40(br s,1H),4.18–4.09(m,1H),3.95(s,3H),3.83(s,3H),3.22(br s,2H),1.19(d,J＝6.3Hz,3H)ppm；(M+1)＝411。
实施例3-6：(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶的制备
向(+/-)-N2-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)吡啶-2,3-二胺(1.72g，4.19mmol)和原甲酸三乙酯(2.0mL，11.78mmol)在乙醇(75mL)中的搅拌悬浮液中添加对甲苯磺酸一水合物(约0.050g)。将所得的混合物加热至回流，并且在惰性气氛下搅拌。16h后，LC/MS分析显示反应完成。将混合物冷却至室温并且浓缩以提供棕色油状物。色谱纯化(CombiFlash，120g SiO2gold柱，20％-50％3:1乙酸乙酯:乙醇/庚烷洗脱)提供浅棕色固体。将固体悬浮在甲基叔丁基醚(12mL)/乙酸乙酯(0.50mL)的混合物中。将混合物加热至55℃。3h后，将温热的混合物过滤，并且将滤饼用甲基叔丁基醚(10mL)洗涤并且干燥以得到呈棕褐色固体的(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.99g，2.37mmol，57％产率)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(dd,J＝4.8,1.4Hz,1H),8.16(d,J＝2.4Hz,1H),8.10(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),8.06(s,1H),7.56(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.27(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),6.78(d,J＝8.6,1H),6.54(s,2H),4.62(d,J＝7.8Hz,1H),4.12(dq,J＝7.8,6.3Hz,1H),3.94(s,3H),3.79(s,3H),1.17(d,J＝6.3Hz,3H)ppm；(M+1)＝421。
实施例4：(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d(化合物4)的合成
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实施例4-1：(+/-)-2-溴-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶的合成
向(+/-)3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.45g，1.08mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5ml)中的搅拌溶液中添加四溴化碳(0.54g，1.62mmol)和叔丁醇钠(0.41g，4.31mmol)，导致深棕色混合物的形成。将混合物在室温下搅拌。20min后，LC/MS分析显示形成新产物并且仍然存在起始材料(约1:1)。将另外部分的四溴化碳(0.54g，1.62mmol)和叔丁醇钠(0.41g，4.31mmol)添加到混合物中(在t＝40min、t＝60min和t＝80min时重复)。总计100min后，LC/MS分析显示反应接近完成。将混合物淬灭至饱和氯化铵溶液(50mL)中。将混合物用乙酸乙酯(40mL)萃取。将有机相用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并且浓缩以提供棕色油状物。色谱纯化(CombiFlash，40g SiO2gold柱，10％-50％3:1乙酸乙酯:乙醇/庚烷洗脱)得到呈灰白色固体的(+/-)-2-溴-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.39g，0.79mmol，73％产率)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),8.22(d,J＝2.3Hz,1H),8.10(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.73(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.35(dd,J＝8.1,4.9Hz,1H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),6.70(d,J＝1.9Hz,1H),6.28(d,J＝1.9Hz,1H),4.72(d,J＝7.9Hz,1H),4.28(dq,J＝7.9,6.3Hz,1H),3.86(s,3H),3.69(s,3H),1.03(d,J＝6.3Hz,3H)ppm；(M+1)＝499。
实施例4-2：(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d的制备
向(+/-)-2-溴-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.32g，0.65mmol)在丙醇-d8(3mL)中的搅拌溶液(注意：在20mL烘箱干燥的微波反应容器中进行反应)中添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.12g，0.13mmol)、2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(0.16g，039mmol)和碳酸钾(0.18g，1.29mmol)。将容器密封，并且将内容物在真空/用N2回填下脱气(x3)。将混合物在加热块中加热至100℃。2h后，LC/MS分析显示反应完成。将混合物冷却至室温并且浓缩以提供棕色油状物。色谱纯化(CombiFlash，80g SiO2 gold柱，20％-70％3:1乙酸乙酯:乙醇/庚烷洗脱)得到不纯的棕色油状物。制备型HPLC纯化(Interchim柱：F0040-51g-51.0g(20巴))柱，20％乙腈/水/0.1％甲酸至100％乙腈/0.1％甲酸洗脱)提供两个纯级分。将级分合并并且用饱和碳酸氢钠溶液(30mL)稀释。将混合物用乙酸乙酯(30mL)萃取。将有机相经硫酸镁干燥，过滤并且浓缩以提供呈白色固体的(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基-d2)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d(0.16g，0.37mmol，57％产率)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),8.22(d,J＝2.5Hz,1H),8.10(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.73(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H),7.30(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),6.76(d,J＝2.0Hz,1H),6.50(d,J＝2.0Hz,1H),4.72(d,J＝7.8Hz,1H),4.27(dq,J＝7.8,6.3Hz,1H),3.86(s,3H),3.70(s,3H),1.04(d,J＝6.3Hz,3H)ppm；(M+1)＝421。
实施例5：3-(((2R,3R)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d(化合物5)的合成
实施例5-1：3-(((2R,3R)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶和3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶的制备和分离
根据实施例3-2至实施例3-6中所述的程序，从(+/-)-((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲醇(实施例1-2)在五个步骤中完成(+/-)-3-(((反式)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶的制备。使外消旋产物(约95:5反式:顺式)经受手性SFC分离(Whelk-01 21x 250mm柱，流速70mL/min，在CO2/0.1％二乙胺中的50％乙醇洗脱，溶解于60mL甲醇/15mL二氯甲烷中的化合物(2.24g)，每次注射1.8mL溶液)以提供三个级分。第一个级分含有少量的反式对映异构体中的一种。第二个级分含有3-(((2R,3R)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(被少量的反式对映异构体中的一种污染)，并且第三个级分含有3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),8.16(d,J＝2.5Hz,1H),8.09(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),8.04(s,1H),7.56(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H),7.29–7.26(m,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,1H),6.54–6.52(m,2H),5.38(s,2H),4.62(d,J＝7.8Hz,1H),4.11(dq,J＝7.8,6.3Hz,1H),3.94(s,3H),3.79(s,3H),1.17(d,J＝6.3Hz,3H)ppm。
实施例5-2：2-溴-3-(((2R,3R)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶的制备
向3-(((2R,3R)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.44g，1.05mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5ml)中的搅拌溶液中添加四溴化碳(0.38g，1.16mmol)和叔丁醇钠(0.40g，4.21mmol)。将所得的深棕色混合物在室温下搅拌。30min后，LC/MS分析显示形成新产物并且仍然存在起始材料(约1:1)。将混合物淬灭至饱和氯化铵溶液(50mL)中。将混合物用乙酸乙酯(40mL)萃取。将有机相用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并且浓缩以提供棕色油状物。色谱纯化(CombiFlash，24g SiO2 gold柱，10％-50％3:1乙酸乙酯:乙醇/庚烷洗脱)得到呈棕褐色固体的2-溴-3-(((2R,3R)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.18g，0.37mmol，35％产率)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),8.22(d,J＝2.4Hz,1H),8.11(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.73(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.36(dd,J＝8.1,4.9Hz,1H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),6.69(d,J＝1.9Hz,1H),6.27(d,J＝1.9Hz,1H),5.41(s,2H),4.72(d,J＝7.8Hz,1H),4.28(dq,J＝7.8,6.3Hz,1H),3.86(s,3H),3.69(s,3H),1.02(d,J＝6.3Hz,3H)ppm；(M+1)＝497。
实施例5-3：3-(((2R,3R)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d的制备
向2-溴-3-(((2R,3R)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.16g，0.32mmol)在2-丙醇-d8(5mL)中的搅拌溶液(注意：在20mL烘箱干燥的微波反应容器中进行反应)中添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.059g，0.064mol)、2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(0.080g，0.19mmol)和碳酸钾(0.089g，0.64mmol)。将容器密封，并且将内容物在真空/用N2回填下脱气(x 3)。将混合物在加热块中加热至100℃。2h后，LC/MS分析显示反应完成。将混合物冷却至室温并且浓缩以提供棕色油状物。色谱纯化(CombiFlash，40g SiO2 gold柱，20％-70％3:1乙酸乙酯:乙醇/庚烷洗脱)得到呈黄色固体的3-(((2R,3R)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d(0.075g，0.18mmol，56％产率)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(dd,J＝4.7,1.5Hz,1H),8.22(d,J＝2.4Hz,1H),8.10(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.73(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.30(dd,J＝8.0,4.7Hz,1H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),6.76(d,J＝1.9Hz,1H),6.49(d,J＝1.9Hz,1H),5.39(s,2H),4.72(d,J＝7.8Hz,1H),4.28(dq,J＝7.8,6.3Hz,1H),3.86(s,3H),3.70(s,3H),1.04(d,J＝6.3Hz,3H)ppm；(M+1)＝420。
实施例6：3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d(化合物6)的合成
方法A：
实施例6-1：2-溴-3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶的合成
向3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.51g，1.22mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5ml)中的搅拌溶液中添加四溴化碳(0.53g，1.58mmol)和叔丁醇钠(0.50g，5.22mmol)。将所得的深棕色混合物在室温下搅拌。1h后，LC/MS分析显示形成新产物并且仍然存在起始材料(约1:1)。将混合物淬灭至饱和氯化铵溶液(50mL)中。将混合物用乙酸乙酯(40mL)萃取。将有机相用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并且浓缩以提供棕色油状物。色谱纯化(CombiFlash，40g SiO2 gold柱，10％-60％3:1乙酸乙酯:乙醇/庚烷洗脱)得到呈灰白色固体的2-溴-3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.20mg，0.39mmol，32％产率)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),8.22(d,J＝2.4Hz,1H),8.11(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.73(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.36(dd,J＝8.1,4.8Hz,1H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),6.69(d,J＝2.0Hz,1H),6.27(d,J＝2.0Hz,1H),5.41(s,2H),4.72(d,J＝7.9Hz,1H),4.28(dq,J＝7.9,6.3Hz,1H),3.86(s,3H),3.69(s,3H),1.02(d,J＝6.3Hz,3H)ppm；(M+1)＝497。
实施例6-2：3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d的制备
向2-溴-3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(0.15mg，0.30mmol)在2-丙醇-d8(5mL)中的搅拌溶液(注意：在20mL烘箱干燥的微波反应容器中进行反应)中添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.054g，0.059mmol)、2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(0.074g，0.18mmol)和碳酸钾(82.52mg，591.13μmol)。将容器密封，并且将内容物在真空/用N2回填下脱气(x 3)。将混合物在加热块中加热至100℃。1h后，LC/MS分析显示反应完成。将混合物冷却至室温并且浓缩以提供棕色油状物。色谱纯化(CombiFlash，40g SiO2 gold柱，20％-70％3:1乙酸乙酯:乙醇/庚烷洗脱)得到呈黄色固体的3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d(0.088g，0.21mmol，71％产率)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),8.22(d,J＝2.4Hz,1H),8.10(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.73(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.30(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),6.88(d,J＝8.7Hz,1H),6.76(d,J＝1.9Hz,1H),6.49(d,J＝1.9Hz,1H),5.39(s,2H),4.72(d,J＝7.8Hz,1H),4.28(dq,J＝7.8,6.3Hz,1H),3.86(s,3H),3.70(s,3H),1.04(d,J＝6.3Hz,3H)ppm；(M+1)＝420。
实施例7：3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d(化合物6)的合成
方法B：
将3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(8.00g，19.12mmol)在加热下溶解于2-甲基四氢呋喃(220mL)中。将溶液蒸馏以去除20mL的溶剂以使混合物干燥。冷却至室温后，将混合物用叔丁醇钾(3.2g，28.7mmol)和甲醇-d1(24.00ml，646mmol)处理。将溶液加热至58℃-61℃。4h后，将溶液冷却至室温并且用10％w/w氯化铵水溶液(150mL)洗涤。将有机层用盐水洗涤两次，经硫酸镁干燥，过滤并且浓缩以提供7.60g固体。将此材料通过加热至60℃溶解于2-甲基四氢呋喃(76mL)中。将溶液接种并且在45℃下搅拌1h。将混合物在室温下搅拌1h，并且然后在0℃-5℃下搅拌1h。将所得的固体过滤，用少量2-甲基四氢呋喃洗涤并且在真空下干燥以得到呈灰白色结晶固体的3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d(6.3g，79％产率，LCMS：94.5％ D，1H NMR：94％ D)。
实施例8：3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d(化合物6)的大规模合成
将50g的3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶装入500mL的甲苯中。将所得的浆料加热至120℃-130℃并且回流2-3h，用Dean stark去除水。去除大部分溶剂后，将混合物在低于60℃下用庚烷(2×250mL)追加至3.0至4.0体积。将所得的浆料在低于60℃下用2-甲基THF(2×250mL)溶剂交换至3.0至4.0体积。在装入800mL(16体积)的2-甲基THF后，将混合物温热至60℃至65℃并且在60℃-65℃下装入50mL的MeOD和67mL(1.0当量)的在THF中的20％叔丁醇钾溶液。将反应混合物在60℃-65℃下维持3h。将反应冷却至20℃-30℃，并且用1000mL(20体积)的10％氯化铵水溶液淬灭。将有机层用乙酸乙酯稀释，并且用水(3×250mL)和25％盐水溶液(250mL)洗涤。将有机层在真空下在60℃下蒸馏至3.0至4.0体积。将混合物在低于60℃下用甲苯(2×250mL)追加至3.0至4.0体积，在低于60℃下用庚烷(2×250mL)追加至3.0至4.0体积。将所得的浆料在低于60℃下用2-甲基THF(2×250mL)溶剂交换至3.0至4.0体积。向混合物装入1050mL(21体积)的2-甲基THF并且将反应物温热至高达60℃-65℃以获得澄清溶液。通过1H NMR，获得的浅淡黄色澄清溶液含有80％-85％ D化合物6。在60℃-65℃下向溶液装入100mL的MeOD和13.4mL(0.2当量)的在THF中的20％叔丁醇钾溶液。将反应在60℃-65℃下维持3h。将反应冷却至20℃-30℃，并且用500mL(10体积)的10％氯化铵溶液淬灭。将有机层用水(3×250mL)进一步洗涤。将有机层在真空下在60℃下蒸馏至7.5至8.0体积。将所得的浆料在65℃-70℃下回流以得到澄清溶液。将混合物经20min的时间段冷却至60℃-65℃并且接种3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d(0.025g)。将混合物经2-3h的时间段缓慢冷却至25℃至30℃并且经2-3h的时间段进一步冷却至0℃-5℃并且搅拌1-2h。将固体过滤并且用50mL(1.0体积)的预冷的2-甲基THF洗涤。将湿材料(39.5g)在45℃-50℃下在高真空下放置16h以获得3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d(39.2g；78％产率；通过LCMS 95％ D)。
实施例9：另外的对化合物6有利地具有立体选择性的大规模合成
实施例9-1：2-(5-((3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)甲基)-2-(苄基氧基)-3-甲氧基苯氧基)-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-1-酮的制备
将2-溴-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-1-酮(21.2g，87mmol，1当量，CAS 1391089-35-2)、5-((3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)甲基)-2-(苄基氧基)-3-甲氧基苯酚(32.9g，91.3mmol，1.05当量)(WO 2017015267实施例1-193)和碳酸钾(30g，218mmol，2.5当量)在乙腈(330mL)中的混合物在室温下搅拌4h。HPLC分析显示2-溴-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-1-酮的完全消耗。将甲基叔丁基醚(330mL)添加到浆料中并且将混合物过滤并且将固体用甲基叔丁基醚洗涤。将滤液用稀释的氢氧化钠溶液(350mL)和饱和氯化钠溶液(300mL)洗涤。将溶剂用甲醇交换。将甲醇溶液在室温下与种晶(20mg)一起搅拌。在室温下搅拌16h后，将结晶的产物通过过滤分离，用甲醇洗涤并且干燥以得到呈灰白色结晶固体的2-(5-((3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)甲基)-2-(苄基氧基)-3-甲氧基苯氧基)-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-1-酮(35.9g，85％产率)，熔点72℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.83(dd,J＝2.4,0.7Hz,1H),8.39(dd,J＝4.8,1.4Hz,1H),8.13–8.03(m,2H),7.96(s,1H),7.48–7.41(m,2H),7.36–7.21(m,4H),6.69(dd,J＝8.8,0.8Hz,1H),6.55(d,J＝1.9Hz,1H),6.44(d,J＝2.0Hz,1H),5.32(s,2H),5.29(q,J＝6.8,1H),4.99(s,2H),3.98(s,3H),3.74(s,3H),1.60(d,J＝6.8Hz,3H)ppm；(M+1)＝525。
实施例9-2：4-((3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)甲基)-2-(((1S,2S)-1-羟基-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-基)氧基)-6-甲氧基苯酚的制备
将2-(5-((3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)甲基)-2-(苄基氧基)-3-甲氧基苯氧基)-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-1-酮(14g，25.2mmol)、叔丁醇钾(1.35g，12.01mmol，0.48当量)和RuCl2[(S)-(DM-BINAP)][(S)-DAIPEN](CAS 220114-01-2，0.33g，0.27mmol，0.01当量)溶解于异丙醇(230mL)中并且装入氢化反应器中。将反应器用氮气吹扫并且装入氢气至70psi。在22℃下在70psi氢气压力下搅拌5h后，HPLC分析显示起始材料完全消耗。通过将Pd/C(4.8g，34wt％，5％活性炭载Pd，50％湿度)装入反应器中进行氢解。将Parr反应器用氮气吹扫并且装入氢气至70psi。在22℃下在70psi氢气压力下搅拌48h后，HPLC分析显示反应基本完成。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用异丙醇和甲醇洗涤。将滤液浓缩至澄清黄色油状物。将油状物溶解于乙酸乙酯(250mL)中并且用氯化铵水溶液(130mL)洗涤。将水层用乙酸乙酯(30mL)萃取。将合并的有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并且浓缩以获得呈浅黄色硬泡沫的4-((3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)甲基)-2-(((1S,2S)-1-羟基-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-基)氧基)-6-甲氧基苯酚(10.1g，23.1mmol，92％产率)。产物是大约84:16比率的1S,2S与1R,2S非对映异构体(通过1HNMR)；>98％ee(通过手性HPLC)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.43(d,J＝4.6Hz,1H),8.13–8.05(m,2H),8.02(d,J＝1.7Hz,1H),7.68和7.61(2br d,J＝8.7Hz,1H),7.31–7.23(m,2H),6.77–6.67(m,2H),6.66(d,J＝2.7Hz,1H),5.36(s,2H),4.82和4.71(br s和d,J＝8.3Hz,1H),4.13(m,1H),3.94(br s,3H),3.83(br s,3H),1.18–1.07(d,J＝6.4Hz,3H)ppm；(M+1)＝437。
实施例9-3：3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶的制备
将4-((3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)甲基)-2-(((1S,2S)-1-羟基-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-基)氧基)-6-甲氧基苯酚(10.10g；23.14mmol；非对映异构体的84:16混合物；1.00当量)在乙酸乙酯(90mL)中的溶液与二异丙基乙基胺(16.02ml；92.56mmol；4.00当量)和CCl4(5.58ml；57.85mmol；2.50当量)在45℃-50℃下搅拌。经10min逐滴添加三正丁基膦(11.99ml；48.60mmol；2.10当量)，伴有轻微放热。将所得的棕色溶液在45℃-50℃下搅拌1.5h。向反应中添加氢氧化钠溶液(15wt％，40mL，6.5当量)并且将混合物在45℃下搅拌0.5-1h。将反应冷却至室温。将各层分离。将水层用乙酸乙酯(40mL)萃取。将合并的有机层用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩至湿固体。将固体在甲基叔丁基醚(60mL)中搅拌2h，过滤并且在真空下干燥。将灰白色固体在升高的温度下溶解于乙醇(55mL)中。将溶液在室温下与种晶一起搅拌并且冷却至0℃-5℃。将所得的固体过滤并且干燥以得到呈灰白色固体粉末的3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(6.16g，63.6％)99A％(通过HPLC)，98％ee，Pd：1ppm；Ru：225ppm；形式A。熔点164.9℃。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),8.16(d,J＝2.4Hz,1H),8.13–8.03(m,2H),7.56(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H),7.27(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,1H),6.53(br s,2H),5.38(s,2H),4.62(d,J＝7.8Hz,1H),4.13(m,1H)3.94(s,3H),3.79(s,3H),1.17(d,J＝6.4Hz,3H)ppm。(M+1)＝419。
实施例9-4：3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d的制备
在60℃下将3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(20g；47.80mmol)溶解于2-甲基四氢呋喃(400mL)中。添加甲醇-d(20mL；1V，99％ D)，然后添加固体叔丁醇钾(5.36g；47.80mmol；1当量)。将溶液加热2h。LCMS显示87％ D。将反应溶液冷却至22℃。将悬浮液用10％w/w氯化铵水溶液(400mL)洗涤。将有机层分离，用乙酸乙酯(200mL)稀释并且用水(3x100mL)洗涤，然后用1/2饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤。将有机层干燥(硫酸钠)，过滤并且浓缩为固体。将固体通过与甲苯(2x 100mL)共沸干燥。在60℃下将所得的棕褐色固体溶解于2-甲基四氢呋喃(500mL)中并且添加甲醇-d(40mL；2V)，然后添加固体叔丁醇钾(1.1g；9.80mmol；0.2当量)。将溶液在60℃下加热3h。3h后LCMS显示96％-97％ D。将反应溶液冷却至室温，用10％w/w氯化铵水溶液(200mL；10V)洗涤。将有机层分离并且用水洗涤3次(每次200mL)。将有机溶液过滤，浓缩并且与甲苯共沸干燥。在80℃下将固体溶解于2-甲基四氢呋喃(560mL)中。将反应溶液冷却至75℃，用形式A(200mg)接种。将混合物搅拌同时将温度冷却至22℃并且保持1h。将混合物在0℃-5℃下搅拌1h。将所得的固体过滤，用冷2-甲基四氢呋喃洗涤并且在真空烘箱中干燥以获得呈灰白色粉末的3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d形式A(100A％(通过HPLC)，手性纯度：99.5％；96.1％ D(通过LCMS)；Pd 1ppm；Ru20ppm，84％产率)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,剩余未氘代的,0.02H),8.40(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),8.22(d,J＝2.3Hz,1H),8.10(dd,J＝8.0,1.5,1H),7.72(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.36(dd,J＝8.0,4.8,1H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),6.76(d,J＝1.9,1H),6.50(d,J＝1.9,1H),5.40(s,2H),4.72(d,J＝7.8Hz,1H),4.26-4.29(m,1H),3.87(s,3H),3.70(s,3H),1.03(d,J＝6.3Hz,3H)ppm。(M+1)＝420
将3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d形式A通过XRPD、PLM、DSC、TGA和HPLC进一步表征。结果总结于表2-1中，指示起始材料是结晶无水合物。
分析方法：
X射线粉末衍射(XRPD)
仪器：Panalytical Empyrean粉末衍射仪
参数：X射线管Cu(Kα)；管电压45kV；管电流40mA
从2至40度2-θ扫描；0.013度/步；扫描速率6度/min
热重分析(TGA)
仪器：TA Instruments Discovery TGA Q5500
参数：斜升10℃/分钟，环境温度至250℃/300℃，50mL/min N2冲扫
差示扫描量热法(DSC)
仪器：TA Instruments Discovery DSC
参数：斜升10℃/分钟，从环境温度至250℃/300℃，50mL/min N2冲扫
偏振光显微术(PLM)
仪器：Nikon Eclipse Ci Pol
相机：Nikon
软件：NIS-Elements图像软件
将样品以浆料形式分散在显微镜载玻片上，或者如果是干燥的话，将样品用硅油分散，并且在透射的偏振光下检查。
磷酸化cFMS活性
试剂和耗材购自Sigma Aldrich、Gibco LifeTechnologies、BD Biosciences、Perkin Elmer、R&D Systems、Cell Signaling、Thermo Scientific(Pierce)和Santa CruzBiotechnology。将过表达人cFMS的HEK293细胞(HEK293/hFMS)在T225烧瓶中的RPMI培养基中培养，并且每周分割两次。对于实验，将细胞胰蛋白酶化，计数并且用无血清Megacell培养基(Sigma目录号M3817)稀释至600,000个细胞/ml(30,000个细胞/孔)。通过Echo 555(LABCYTE)使用Echo LDV板(目录号LP-0200)制备连续稀释的测试化合物；并且将500nl的每种化合物浓度添加到96孔BD Biocoat聚-d-赖氨酸板(BD目录号356640)中的DMSO中(0.5％最终)。然后添加50μL/孔MegaCell无血清培养基以覆盖化合物，然后以50μL/孔细胞(30,000/孔)添加细胞。将板在1000rpm下减速旋转1分钟，并且然后在台上孵育15-30分钟；将板移至在37℃下的CO2培养箱中过夜孵育。将白色96孔Perkin Elmer OptiPlates(目录号6005509)用50ng/孔(100μL/孔)在PBS中的抗cFMS/CSF-1R(C-20)(Santa Cruz目录号sc-692)预包被，用箔密封物密封，在1000rpm下减速旋转一分钟并且在4℃下孵育过夜。
在第二天，在室温下将预包被的OptiPlates板用200ul/孔的在1x PBST中的1％BSA(具有0.1％ Triton-X的PBS)封闭2-3小时。平行地，将100μL/孔的2x hCSF1(最终150ng/ml)(R&D Systems，目录号216-MC-025/CF)(或培养基，作为阴性对照)添加到与化合物一起孵育过夜的HEK293/hFMS细胞(BD培养板)中。在每个板上，将100％反应(用CSF1处理)和0％反应(没有CSF1)对照柱用于计算测试化合物的抑制百分比和Z`prime值。将板在37℃下孵育10分钟。将培养基/hCSF1吸去，并且将细胞用100ul/孔的预冷的裂解缓冲液裂解，所述裂解缓冲液由裂解缓冲液(Cell Signaling目录号9803)、蛋白酶/磷酸酶抑制剂(Pierce目录号78444)和PMSF(Sigma目录号93482)制成。将板振摇60秒；然后，在4℃下在3200rpm下旋转5分钟，并且保持在冰上。将90ul的裂解物转移至预包被/封闭的OptiPlates中。然后将板在1000rpm下旋转60秒并且在4℃密封下孵育过夜。
第二天，将裂解物从板中取出；并且将板使用Biotek洗涤机用300μL/孔的1xPBS洗涤6次。将板上剩余的PBS拍出。将90μL/孔的在PBST中1％ BSA中的1:10,000抗磷酸化Eu(Tyr 100)(Perkin Elmer目录号AD0159)添加到板中；并且将板在室温密封下孵育一小时。一小时后，去除抗体，并且将板使用Biotek洗涤机用300μL/孔的PBST洗涤6次。接下来添加90μL/孔的增强溶液(Perkin Elmer目录号4001-0010)，并且将板密封并且振摇5分钟。在Perkin Elmer Envision上立即读取信号，以得到在320nm处激发和615nm处发射的时间分辨荧光。
将数据通过Pipeline Pilot分析以计算IC50值；对于选定的CSF-1R抑制剂，磷光体c-FMS的IC50值提供在下表B中。
表B
生物实施例(实施例10-17xx)：体外研究
实施例10
为了比较在CSF-1刺激后，CSF-1R抑制性化合物和本公开文本的氘代CSF-1R抑制性化合物对细胞因子/趋化因子产生的影响，在BV2鼠小神经胶质细胞中进行以下实验。
将两种不同代次的BV2小鼠小神经胶质细胞在不同的96孔板中铺板以提供生物学一式四份。
组号 模拟组 孔/组 处理
1 无刺激 4孔/代 DMSO
2 CSF-1刺激 4孔/代 DMSO，化合物24或化合物6
测试物品：
·DMSO
·化合物24：
·化合物6
·重组小鼠M-CSF(R&D Systems，目录号416-ML/CF，批号ME4518091)-通过将50μg溶解于500μl PBS中来制备100μg/mL储备溶液并且用100ng/mL处理。
化合物24根据WO 2017/015267的实施例1-92中概述的程序制备。
将两种测试化合物在稀释的储备溶液(10mM)中用培养基制备以得到100μM工作溶液，并且在3.125nM、6.25nM、12.5nM、25nM、50nM、100nM、200nM或400nM下处理。
方法
BV2小神经胶质细胞的处理和刺激
将BV2小鼠小神经胶质细胞以5x 105个/mL的浓度悬浮，并且将100μL的此细胞悬浮液添加到96孔板的每个孔中。允许在37℃、5％ CO2下将小神经胶质细胞静置过夜。第二天，去除培养基并且在37℃、5％ CO2下将细胞用二甲基亚砜(DMSO)、化合物24或化合物6处理30分钟。然后将细胞用100ng/mL重组小鼠M-CSF刺激24小时。刺激后，将培养上清液从每个孔中去除，并且等分至两种不同的96孔板用于后续ELISA测定。
小鼠MCP-1 ELISA
将培养上清液用来自R&D Systems的Quantikine小鼠MCP-1 ELISA试剂盒测定。将样品用校准品稀释液1:10稀释。首先将50微升的测定稀释液添加到每个孔中。然后将50μL的标准品、测定对照和稀释的样品添加到孔中。将板通过轻轻敲击框架混合，并且用胶带密封。将板在室温下孵育2小时。孵育后，将板使用喷射瓶用大约400μL的洗涤缓冲液洗涤5次。在最后一次洗涤之后，将板在纸巾上轻轻敲击以去除过量水分。将100μL的小鼠MCP-1缀合物添加到每个孔中，用新的胶带覆盖，并且在室温下孵育2小时。孵育后，如上所述将板洗涤。然后将底物溶液添加到每个孔中，并且在黑暗中在室温下孵育30分钟。孵育后，将酸性终止溶液添加到每个孔中，并且在450nm下在ELISA板读取器上读取板。
结果
将BV2鼠小神经胶质细胞以50,000个细胞/孔铺板并且静置过夜。将细胞用DMSO、化合物24或化合物6预处理30分钟，并且然后经受CSF-1刺激。将来自此实验的细胞培养上清液在MCP1 ELISA中加工，以确定刺激/处理是否影响趋化因子产生。如图1A-图1B和图2A-图2B所示，CSF-1刺激诱导MCP-1(CCL2-趋化因子)的释放显著增加，并且两种小分子CSF-1R抑制剂以浓度依赖性方式显著降低MCP-1产生。基于未刺激的对照和刺激的对照计算抑制百分比并且生成IC50曲线。如图3A-图3B和图4A-图4B所示，对于此测定，两种化合物展现出在28.8nM-36.5nM之间的相似IC50值。
图形柱代表平均值和标准偏差。用具有多重比较的单向方差分析确定统计学显著性，并且p值表示为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001和****p<0.0001。
实施例11
为了比较在CSF-1刺激后，两种CSF-1R抑制性化合物和本公开文本的一种氘代CSF-1R抑制性化合物对小神经胶质细胞细胞因子/趋化因子产生的作用，在原代鼠小神经胶质细胞中进行以下实验。
原代小鼠小神经胶质细胞
测试物品：
·DMSO
·化合物49
·PLX3397(培达替尼)
·化合物6
·重组小鼠CSF-1(R&D Systems，目录号416-ML/CF，批号ME4518091)-通过将50μg溶解于500μL PBS中制备100μg/mL储备溶液，并且将小神经胶质细胞用100ng/mL处理。
化合物49根据WO 2017/015267的实施例1-5中概述的程序制备。
将所有测试化合物在稀释的储备溶液(10mM)中用培养基制备以得到100μM工作溶液，并且在3.125nM、6.25nM、12.5nM、25nM、50nM、100nM、200nM或400nM下处理。
方法
原代小神经胶质细胞的处理和刺激
将原代小鼠小神经胶质细胞以5x 105个细胞/mL的浓度悬浮并且将100μL的此细胞悬浮液添加到三个96孔板的内部60个孔中。允许在37℃、5％ CO2下将小神经胶质细胞静置过夜。第二天，去除培养基，并且在37℃、5％ CO2下将细胞用二甲基亚砜(DMSO)、化合物49、PLX3397或化合物6处理30分钟。然后将细胞用100ng/mL重组小鼠CSF-1刺激24小时。刺激后，将培养上清液从每个孔中去除，并且等分至两种不同的96孔板用于后续ELISA测定。将板用4％ PFA固定用于未来的免疫细胞化学分析。
小鼠MCP-1 ELISA
将培养上清液用Quantikine小鼠MCP-1 ELISA试剂盒(R&D Systems，目录号SMJE00B)测定。将样品用校准品稀释液1:10稀释。首先将50微升的测定稀释液添加到每个孔中。然后将50微升的标准品、测定对照和稀释的样品添加到孔中。将板通过轻轻敲击框架混合，并且用胶带密封。将板在室温下孵育2小时。孵育后，将板使用喷射瓶用大约400μL的洗涤缓冲液洗涤5次。在最后一次洗涤之后，将板在纸巾上轻轻敲击以去除过量水分。将100μL的小鼠MCP-1缀合物添加到每个孔中，用新的胶带覆盖，并且在室温下孵育2小时。孵育后，如上所述将板洗涤。然后将底物溶液添加到每个孔中，并且在黑暗中在室温下孵育30分钟。孵育后，将酸终止溶液添加到每个孔中，并且在450nm下在具有SoftMax Pro软件的FlexStation3多模式微板读取器(Molecular Devices，目录号Flex3)上读取板。
原代小神经胶质细胞的免疫染色
在刺激后，在室温下将细胞用4％ PFA固定20分钟。然后在室温下将细胞在PBS中冲洗，在0.2％ PBT(在PBS中的0.2％ Triton X-100)中洗涤3x 5分钟，并且用10％驴血清/0.2％ PBT封闭1小时。然后在4℃下将细胞在10％驴血清/0.2％ PBT中稀释的一抗(兔抗Iba1，1:500；Wako，目录号019-19741或兔抗Ki67，1:500；Abcam，目录号ab15580)中孵育过夜。第二天，将细胞在0.2％ PBT中洗涤3x 5分钟并且在室温下在1％驴血清/0.2％PBT中稀释的二抗(驴抗兔Alexa Fluoro 488，1:500；Life Technologies，目录号A21206)中孵育1小时。然后将细胞在0.2％ PBT中洗涤3x 5分钟，在室温下在DAPI(在PBS中1:10,000)中孵育5分钟并且在PBS中冲洗。
显微术
染色后，将板在IN细胞分析仪2200上成像，每孔获得9个视野。在IN细胞显影分析软件上进行定量，计算9个视野的IBA1染色的面积总和(以μm2计)或Ki67+细胞的数量。针对每个技术一式三份计算每个孔中每个视野的平均值(由于染色伪影(artifact)而排除某些视野，典型地每个孔6-9个视野)，并且将其相对于DMSO对照孔的平均值进行归一化。使用单向方差分析来确定样品之间差异的统计学显著性。用Prism 6(GraphPad软件)进行统计学分析，并且p值指示为*≤0.05，**≤0.01，***≤0.001和****≤0.0001。
结果
将原代鼠小神经胶质细胞以50,000个细胞/孔铺板并且静置过夜。将细胞用DMSO、化合物49、PLX3397或化合物6预处理30分钟，并且然后经受CSF-1刺激。将来自此实验的细胞培养上清液在MCP1 ELISA中加工，以确定刺激/处理是否影响趋化因子产生。如图5A-图5C所示，CSF-1刺激诱导MCP-1(CCL2-趋化因子)的释放显著增加。CSF-1R抑制剂PLX3397和化合物6以浓度依赖性方式显著降低了MCP-1产生(普通单向方差分析，p<0.0001)。计算PLX3397(IC50＝17.4nM)和化合物6(IC50＝23.2nM)二者的IC50值。CSF-1诱导的MCP-1产生在用化合物49处理的板中不稳健(图5B)，因此不能生成此化合物的IC50值。利用R&D MCP-1Elisa试剂盒，24小时后评估MCP-1分泌。每个数据点代表单个孔，而图形柱代表六个孔的平均值和标准偏差。
在小神经胶质细胞刺激之后，用Iba1、Ki67和DAPI完成免疫细胞化学以确定小神经胶质细胞形态、增殖状态和数量。使用InCell成像显微镜和分析软件来定量培养物内的Iba1+面积和DAPI+细胞核的数量。Ki67无法定量，因为在ICC期间的凝聚将Iba1抗体交叉转移至Ki67孔中。定量结果(图6A-图6C和7A-图7C)分别证明了CSF-1刺激对Iba1+面积和DAPI+细胞数量的显著影响。可以看到CSF-1R抑制以剂量依赖性方式阻断这些CSF-1诱导的细胞变化。计算PLX3397(Iba1的IC50＝50.43nM，并且DAPI的为68.2nM)和化合物6(Iba1的IC50＝84.6nM，并且DAPI的为248nM)的IC50值。
在图6A-图6C中，在小神经胶质细胞刺激测定后定量Iba1+面积。CSF-1刺激显著增加了Iba1+面积并且用CSF-1R抑制剂的处理以浓度依赖性方式显著消除了这种作用。从每种条件的三种不同孔中拍摄的九个图像来定量小神经胶质细胞面积。数据点代表每个孔的平均Iba1+面积，并且误差条代表标准偏差(n＝3)。通过单向方差分析确定统计学显著性，并且p值指示为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001和****p<0.0001。
在图7A-图7C中，用以下小神经胶质细胞刺激测来定量DAPI+标记的细胞核。CSF-1刺激增加了培养物内的细胞数量，并且CSF-1R抑制剂以浓度依赖性方式减少此数量。从每种条件的三种不同孔中拍摄的九个图像来定量DAPI+细胞核。数据点代表每个孔的平均Iba1+面积(来自9个图像)，并且误差条代表标准偏差(n＝3)。通过单向方差分析确定统计学显著性，并且p值指示为*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001和****p<0.0001。
实施例12
在以下实验中检查了在野生型原代小神经胶质细胞与SOD1突变的原代小神经胶质细胞中，在CSF-1或LPS刺激后本公开文本的氘代CSF-1R抑制剂对细胞因子/趋化因子产生的影响。
原代小鼠小神经胶质细胞-在ELN 20200624-062中分离
组号 模拟组 孔/组 处理
1 无刺激 6孔/基因型 DMSO
2 CSF-1刺激 6孔/基因型 DMSO、化合物6
3 LPS刺激 6孔/基因型 DMSO、化合物6
测试物品：
·DMSO
·化合物6-将储备溶液(10mM)用培养基稀释以得到100μM工作溶液并且将小神经胶质细胞在50nM、100nM或200nM下处理。
·重组小鼠M-CSF(R&D Systems，目录号416-ML/CF，批号ME4518091)-通过将50μg溶解于500μl PBS中制备100μg/mL储备溶液并且将小神经胶质细胞用100ng/mL处理。
·脂多糖，来自大肠杆菌(Escherichia coli)O55:B5(Sigma，目录号L6529-1mg，批号059M4103V)-制成0.2mg LPS/mL PBS储液并且将小神经胶质细胞用10ng/mL处理。
方法
原代小神经胶质细胞的处理和刺激
将原代小鼠小神经胶质细胞以5x 105个/mL的浓度悬浮，并且将100μL的此细胞悬浮液添加到96孔板的每个孔中。允许在37℃、5％ CO2下将小神经胶质细胞静置过夜。第二天，去除培养基，并且在37℃、5％ CO2下，将细胞用二甲基亚砜(DMSO)或化合物6处理30分钟或24小时。然后将细胞用100ng/mL重组小鼠M-CSF刺激30分钟或用10ng/mL脂多糖刺激24小时。刺激后，将培养上清液从每个孔中去除，并且等分至两种不同的96孔板用于后续ELISA测定。
CellTiter Glo 2.0活力测定
使用Promega的Cell Titer Glo发光细胞活力测定确定细胞活力。首先允许测定试剂平衡至室温30分钟。去除培养上清液后，将100μL新鲜室温培养基添加到每个孔中。随后，将100μL的测定试剂添加到每个孔中。然后将测定板振摇两分钟，并且然后静置10分钟。将100μL从每个孔转移至白板中，并且立即在FlexStation3板读取器上读取发光。
小鼠MCP-1 ELISA
将培养上清液用来自R&D Systems的Quantikine小鼠MCP-1 ELISA试剂盒(目录号SMJE00B)测定。将样品用校准品稀释液1:10稀释。首先将50微升的测定稀释液添加到每个孔中。然后将50微升的标准品、测定对照和稀释的样品添加到孔中。将板通过轻轻敲击框架混合，然后用胶带密封。将板在室温下孵育2小时。孵育后，将板使用喷射瓶用大约400uL的洗涤缓冲液洗涤5次。在最后一次洗涤之后，将板在纸巾上轻轻敲击以去除过量水分。将100微升的小鼠MCP-1缀合物添加到每个孔中，用新的胶带覆盖，并且在室温下孵育2小时。孵育后，如上所述将板洗涤。然后将底物溶液添加到每个孔中，并且在黑暗中在室温下孵育30分钟。孵育后，将酸性终止溶液添加到每个孔中，并且在450nm下在ELISA板读取器上读取板。
小鼠IL-12p40 ELISA
将细胞培养上清液用来自R&D Systems的Quantikine小鼠IL-12p40 ELISA试剂盒(目录号MP400)测定。将样品用校准品稀释液1:10稀释。首先将50微升的测定稀释液添加到每个孔中。然后将50微升的标准品、测定对照和稀释的样品以单个试样添加到孔中。将板通过轻轻敲击框架混合，然后用胶带密封。将板在室温下孵育2小时。孵育后，将板使用喷射瓶用大约400uL的洗涤缓冲液洗涤5次。在最后一次洗涤之后，将板在纸巾上轻轻敲击以去除过量水分。将100微升的小鼠IL-12p40缀合物添加到每个孔中，用新的胶带覆盖，并且在室温下孵育2小时。孵育后，如上所述将板洗涤。然后将底物溶液添加到每个孔中，并且在黑暗中在室温下孵育30分钟。孵育后，将酸性终止溶液添加到每个孔中，并且在450nm下在ELISA板读取器上读取板。
结果
将原代鼠小神经胶质细胞以50,000个细胞/孔铺板并且静置过夜。将细胞用DMSO或化合物6预处理30分钟或24小时，并且然后分别经受CSF-1或LPS刺激。24小时后，利用Promega的Cell Titer Glo测定试剂盒评估细胞活力。相比于未刺激的细胞，CSF-1刺激和LPS刺激二者均诱导细胞活力读数略微增加(图8A-图8B和图9A-图9B)。
如图8A和图8B所示，CSF-1R抑制剂处理在所评估的浓度下对小神经胶质细胞没有毒性作用。氘代CSF-1R抑制剂，化合物6，略微降低了CSF-1诱导的细胞活力增加。图形柱代表六个孔的平均值和标准偏差。如图9A-图9B所示，CSF-1R抑制对细胞活力没有有害作用。图形柱代表六个孔的平均值和标准偏差。响应于CSF-1或LPS刺激，在野生型小神经胶质细胞与SOD1小神经胶质细胞细胞活力中没有观察到显著差异。
将来自此实验的细胞培养上清液在两个单独的ELISA(MCP-1和IL12p40)中处理，以确定刺激/处理是否影响趋化因子/细胞因子产生。
如图10A-图10B所示，CSF-1刺激诱导MCP-1(CCL2-趋化因子)的释放显著增加，并且化合物6以浓度依赖性方式显著降低MCP-1产生。图形柱代表六个孔的平均值和标准偏差。进行普通单向方差分析以确定各组之间的统计学差异性，并且p值表示为***p<0.001和****p<0.0001。
如图11A-图11B所示，在鼠小神经胶质细胞培养物中，LPS刺激诱导IL12-p40产生的显著增加。化合物6的CSF-1R抑制作用以浓度依赖性方式显著降低了IL12-p40产生。图形柱代表六个孔的平均值和标准偏差。进行普通单向方差分析以确定各组之间的统计学差异性，并且p值表示为**p<0.01，***p<0.001和****p<0.0001。
实施例13Caco-2渗透性和外排测定以比较化合物6与化合物24。
使用Caco-2/TC7细胞在基于细胞的渗透性模型中进行Caco-2渗透性和外排测定。对于渗透性测定，将Caco-2/TC7细胞接种在Millipore Millicell 96上，并且对于外排测定，使用24孔板。具有细胞的板准备在培养21-25天之间使用。使用TECAN自动化液体处理平台进行渗透性测定和外排测定二者。对于渗透性测定，在含有0.5％ BSA的渗透性测定缓冲液(在HBSS缓冲液中的10mM HEPES，pH 6.5)中以20μM测试浓度制备测试化合物。基底侧渗透性缓冲液(pH 7.4)含有5％ BSA。对于外排测定，在含有0.5％ BSA的渗透性测定缓冲液(在HBSS缓冲液中的10mM HEPES，pH 7.4)中以1μM测试浓度制备测试化合物。对于外排测定，基底侧渗透性缓冲液(pH 7.4)含有0.5％ BSA。通过将20μM测试溶液添加到含有Caco-2/TC7细胞的板的顶侧来开始渗透性测定。在外排测定中，将1μM测试化合物添加到顶端区室中用于顶端至基底侧(A至B)渗透性确定。对于基底侧至顶端(B至A)渗透性确定，将测试化合物添加到基底侧。将板在37℃下在恒定振摇下孵育90min。在孵育期结束时，将取得的样品使用高压液相色谱法与串联质谱法进行分析。对于每个测定，从质谱数据计算表观渗透性(Papp)和回收率。对于渗透性测定，将Papp值报告为数字x 10-07cm/s。对于外排测定，除了回收率值之外，使用Papp(基底侧至顶端)与Papp(顶端至基底侧)计算外排率。
渗透性数据：
化合物 Papp(x 10-07cm/s)20μM 回收率(％)20μM
24 377.00 80％
6 377.00 73％
外排数据：
CYP抑制
此测定方法的目的是使用人肝微粒体(HLM)确定测试物品体外对特异性细胞色素P450(CYP)酶的抑制潜力。从纯DMSO储液稀释测试化合物至在0.5％ DMSO溶液中10μM-0.07μM的最终测试浓度范围。在37℃下将化合物与0.22mg/mL人肝微粒体(HLM)、50mM磷酸盐缓冲液、1.33mM NADPH、3.33mM 6-磷酸葡萄糖、3.33mM六水镁、0.4单位/mL 6-磷酸葡萄糖脱氢酶和适当浓度的单个化学探针一起共孵育10-30分钟。孵育后，提取样品，并且蛋白质在含0.1％甲酸的乙腈中沉淀。将样品离心以去除过量的蛋白质，并且通过LDTD/MS/MS分析以确定IC50值。底物的关键浓度如下：CYP2D6底物-10μM的右美沙芬。CYP3A4底物-60μM的睾酮和2μM的咪达唑仑。将右美沙芬和睾酮各自与测试化合物一起孵育30分钟。将咪达唑仑与测试化合物一起孵育10分钟。如以下数据表所示，化合物6和24二者在高达10μM下均未显示出CYP抑制。
数据：
人、大鼠、犬、小鼠和猴肝细胞
一式两份地将1μM浓度的测试化合物与大鼠、人、犬、猴或小鼠肝细胞一起以50万个肝细胞/mL进行孵育，并且在测定时间点从孵育取出样品、然后进行液相色谱与串联质谱分析后，确定测试化合物耗尽的浓度-时间过程。使用有机溶剂终止孵育。
人胞质溶胶和S-9部分
一式两份地以1μM浓度的测试化合物在1mg/mL人肝胞质溶胶(具有高醛氧化酶(AO)/黄嘌呤氧化酶(XO)活性)或2.5mg/mL人肝S-9部分(具有高活性AO/XO)中进行孵育，并且在测定时间点从孵育中取出样品、然后进行液相色谱串联质谱分析后，确定测试化合物耗尽的浓度-时间过程。使用有机溶剂终止孵育。
醛氧化酶底物的校准方法
Zientek M,Jiang Y,Youdim K,Obach RS.In vitro-in vivo correlation forintrinsic clearance for drugs metabolized by human aldehyde oxidase.DrugMetab Dispos.2010；38(8):1322-1327.doi:10.1124/dmd.110.033555描述了用于AO底物的基本校准方法。
此方法提供了一种使用已知被AO代谢的商业药物的固有清除率的体外-体内相关性的基准工具。
已知由于所述酶的人AOX1同种型的差异性表达，临床前物种(小鼠、大鼠和犬)不能准确地预测AO代谢。小鼠和大鼠含有活性的四种同种型(AOX1、AOX2、AOX3和AOX4)，犬缺乏活性AOX1酶，并且只有猴含有活性AOX1同种型。由于缺乏可用于准确预测AO底物的临床前物种，预测人药代动力学的传统类比方法是困难的。因此，使用临床中具有人药代动力学的已知AO底物进行体外-体内校准方法。由于这些药物中的几种的PK特性较差，它们在临床中失败。通过使用具有可接受的人药代动力学特性的扎来普隆(较低清除率AO底物)作为基准化合物，可以开发一种排序校准方法。
使用三种体外系统(合并的人肝胞质溶胶、肝脏S-9部分和分离自用HTK培养基灌注的肝的人肝细胞)，分析了与测试化合物一起的这些可用的已知AO底物。计算测试化合物/新化学实体的放大的未结合固有清除率，并且与已知AO底物的体内未结合固有清除率进行比较。预测AO介导的体外放大的未结合固有清除率小于扎来普隆的化合物具有可接受的AO体内清除率。
原始数据
放大的数据
实施例14：在不存在和存在醛氧化酶抑制剂肼屈嗪的情况下，在人冷冻保存的肝 细胞中化合物24的代谢特征
在不存在和存在醛氧化酶(AO)抑制剂肼屈嗪的情况下，在人冷冻保存的肝细胞中体外研究化合物24的代谢特征。将化合物24在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，通过LC-MS鉴定并且定量总共九种代谢物。
在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，剩余72.2％的未改变的亲本化合物，此数值是基于化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积计算的。H10是检测到的最丰富的代谢物，并且占化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的20.3％。代谢物H4a占化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的4.5％。所鉴定的每种其他代谢物均为化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的<2％。
在存在肼屈嗪的情况下在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，未改变的化合物24占化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的90.9％。羟基化代谢物H10的形成被显著抑制，并且占化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的1.6％。H4a是主要代谢物，并且占化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的5.4％。所鉴定的每种其他代谢物均为化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的<1％。
提出了H10来源于在化合物24的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的2C位置处的羟基化。提出了H4a来源于在化合物24的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分处的水合以及在3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的2C位置处的葡糖苷酸。提出了H11a来源于H10的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的葡糖醛酸化。提出了H7来源于化合物24的2-甲氧基-吡啶部分的O-去甲基化。提出了H6是化合物24的葡糖苷酸缀合物。
所提出的主要代谢途径包括AO介导的羟基化，然后是葡糖醛酸化以及水合与葡糖醛酸化的组合。其他观察到的代谢途径包括非AO介导的羟基化然后葡糖醛酸化、直接葡糖醛酸化、去甲基化然后是葡糖醛酸化、以及氧化脱氨基化然后氧化的组合。
化合物24根据WO 2017/015267的实施例1-92中概述的程序制备。
孵育条件
以下示出了含有肼屈嗪的通用实验设计：
试剂或参数 最终浓度/条件
化合物24 1μM
冷冻保存的猴肝细胞 0.5x 106个细胞/mL
冷冻保存的人肝细胞 1x 106个细胞/mL
孵育时间 0、15、30、60、90和120min
肼屈嗪HCl 10μM
孵育 在CO2培养箱中37℃
孵育培养基 KHB缓冲液
总孵育体积 0.5mL
在研究取样后，将来自一式三份孵育的剩余样品合并并且加工用于代谢物鉴定研究。
样品制备
向每个样品中添加等量的冰冷的乙腈(v/v)，并且然后将样品涡旋混合。在大约13,000rpm下离心10分钟后，将上清液在35℃下在氮气流下浓缩直至剩余大约0.1-0.2mL的提取物。在分析前，将剩余的提取物在大约13,000rpm下离心15分钟。将上清液注入LC/UV/MS用于分析。
仪器条件
代谢物鉴定在与UV(Thermo Vanquish)和质谱(MS)检测(Thermo Orbitrap ID-X)偶联的UPLC(Thermo Vanquish)上进行。
数据评价
由于低样品浓度，将质量峰面积用于代谢物特征分析。假设等效摩尔浓度的代谢物或亲本化合物的质谱反应相等，基于化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积，计算代谢物或未改变的亲本化合物的百分比。下表1中报告了峰面积占总积分MS峰面积的等于或大于0.1％的代谢物。
基于其准确的质量(容差≤5ppm)、质量碎片模式和与其他体外研究的比较表征代谢物。
表1：在不存在或存在肼屈嗪的情况下，化合物24在人冷冻的肝细胞中孵育2小时后的代谢物特征
在不存在和存在AO抑制剂肼屈嗪的情况下，在人冷冻保存的肝细胞中体外研究化合物24的代谢特征。将化合物24在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，通过LC-MS鉴定并且定量总共九种代谢物。(参见图12A-图12B)。
在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，剩余72.2％的未改变的亲本化合物，此数值是基于化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积计算的。H10是检测到的最丰富的代谢物，并且占化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的20.3％。代谢物H4a占化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的4.5％。所鉴定的每种其他代谢物均为化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的<2％。
在存在AO抑制剂肼屈嗪的情况下在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，未改变的化合物24占化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的90.9％。羟基化代谢物H10的形成被显著抑制，并且占化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的1.6％。H4a是主要代谢物，并且占化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的5.4％。所鉴定的每种其他代谢物均为化合物24及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的<1％。
提出了H10来源于在化合物24的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的2C位置处的羟基化。提出了H4a来源于在化合物24的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分处的水合以及在3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的2C位置处的葡糖苷酸。提出了H11a来源于H10的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的葡糖醛酸化。提出了H7来源于化合物24的2-甲氧基-吡啶部分的O-去甲基化。提出了H6是化合物24的葡糖苷酸缀合物。
所提出的主要代谢途径(图13)包括AO介导的羟基化，然后是葡糖醛酸化以及水合与葡糖醛酸化的组合。其他观察到的代谢途径包括非AO介导的羟基化然后葡糖醛酸化、直接葡糖醛酸化、去甲基化然后是葡糖醛酸化、以及氧化脱氨基化然后氧化的组合。
实施例15：在不存在和存在醛氧化酶抑制剂肼屈嗪的情况下，在人冷冻保存的肝 细胞中化合物6的代谢特征
在不存在和存在醛氧化酶(AO)抑制剂肼屈嗪的情况下，在人冷冻保存的肝细胞中体外研究化合物6的代谢特征。将化合物6在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，通过LC-MS鉴定并且定量总共九种代谢物。
在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，剩余87.1％的未改变的亲本化合物，此数值是基于化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积计算的。H10和H4a是检测到的主要代谢物，并且分别占化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的6.6％和4.6％。所鉴定的每种其他代谢物均为化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的<1％。
在存在AO抑制剂肼屈嗪的情况下在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，未改变的化合物6占化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的92.0％。羟基化代谢物H10的形成被显著抑制，并且占化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的0.9％。H4a是主要代谢物，并且占化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的5.7％。所鉴定的每种其他代谢物均为化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的<1％。
提出了H10来源于在化合物6的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的2C位置处的羟基化。提出了H4a来源于在化合物6的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分处的水合以及在3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的2C位置处的葡糖苷酸。提出了H11a来源于H10的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的葡糖醛酸化。提出了H7来源于化合物6的2-甲氧基-吡啶部分的O-去甲基化。提出了H6是化合物6的葡糖苷酸缀合物。
所提出的主要代谢途径包括AO介导的羟基化，然后是葡糖醛酸化以及水合与葡糖醛酸化的组合。其他观察到的代谢途径包括非AO介导的羟基化然后葡糖醛酸化、直接葡糖醛酸化、去甲基化然后是葡糖醛酸化、以及氧化脱氨基化然后氧化的组合。
孵育条件
以下示出了含有肼屈嗪的通用实验设计：
试剂或参数 最终浓度/条件
化合物6 1μM
冷冻保存的人肝细胞 1x 106个细胞/mL
孵育时间 0、15、30、60、90和120min
肼屈嗪HCl 10μM
孵育 在CO2培养箱中37℃
孵育培养基 KHB缓冲液
总孵育体积 0.5mL
在研究取样后，将来自一式三份孵育的剩余样品合并并且加工用于代谢物鉴定研究。
样品制备
向每个样品中添加等量的冰冷的乙腈(v/v)，并且将样品涡旋混合。在大约13,000rpm下离心10分钟后，将上清液在35℃下在氮气流下浓缩直至剩余大约0.1-0.2mL的提取物。在分析前，将剩余的提取物在大约13,000rpm下离心15分钟。将上清液注入LC/UV/MS用于分析。
仪器条件
代谢物鉴定在与UV(Thermo Vanquish)和质谱(MS)检测(Thermo Orbitrap ID-X)偶联的UPLC(Thermo Vanquish)上进行。
数据评价
由于低样品浓度，将质量峰面积用于代谢物特征分析。假设等效摩尔浓度的代谢物或亲本化合物的质谱反应相等，基于化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积，计算代谢物或未改变的亲本化合物的百分比。下表2中报告了峰面积占总积分MS峰面积的等于或大于0.1％的代谢物。
基于其准确的质量(容差≤5ppm)、质量碎片模式和与其他体外研究的比较表征代谢物。
结果
表2：在不存在或存在肼屈嗪的情况下，化合物6在人冷冻的肝细胞中孵育2小时后的代谢物特征
在不存在和存在AO抑制剂肼屈嗪的情况下，在人冷冻保存的肝细胞中体外研究化合物6的代谢特征。将化合物6在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，通过LC-MS鉴定并且定量总共九种代谢物。(参见图14A-14B)。
在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，剩余87.1％的未改变的亲本化合物，此数值是基于化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积计算的。H10和H4a是检测到的主要代谢物，并且分别占化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的6.6％和4.6％。所鉴定的每种其他代谢物均为化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的<1％。
在存在AO抑制剂肼屈嗪的情况下在人冷冻保存的肝细胞中孵育2小时后，未改变的化合物6占化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的92.0％。羟基化代谢物H10的形成被显著抑制，并且占化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的0.9％。H4a是主要代谢物，并且占化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的5.7％。所鉴定的每种其他代谢物均为化合物6及其鉴定的代谢物的总积分MS峰面积的<1％。
提出了H10来源于在化合物6的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的2C位置处的羟基化。提出了H4a来源于在化合物6的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分处的水合以及在3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的2C位置处的葡糖苷酸。提出了H11a来源于H10的3H-咪唑[4,5-b]吡啶部分的葡糖醛酸化。提出了H7来源于化合物6的2-甲氧基-吡啶部分的O-去甲基化。提出了H6是化合物6的葡糖苷酸缀合物。所提出的主要代谢途径(图15)包括AO介导的羟基化，然后是葡糖醛酸化以及水合与葡糖醛酸化的组合。其他观察到的代谢途径包括非AO介导的羟基化然后葡糖醛酸化、直接葡糖醛酸化、去甲基化然后是葡糖醛酸化、以及氧化脱氨基化然后氧化的组合。
实施例16：体外小神经胶质细胞刺激研究
为了确定在CSF1刺激后对人小神经胶质细胞细胞因子/趋化因子产生的影响，进行以下实验。
测试物品：
·DMSO
·化合物6-将储备溶液(10mM)用培养基稀释以得到100μM工作溶液并且将小神经胶质细胞在1.5625nM、3.125nM、6.25nM、12.5nM、25nM、50nM、100nM或200nM下处理。
·化合物24-将储备溶液(10mM)用培养基稀释以得到100μM工作溶液并且将小神经胶质细胞在1.5625nM、3.125nM、6.25nM、12.5nM、25nM、50nM、100nM或200nM下处理。
·重组人CSF1(R&D Systems，目录号216-ML/CF，批号MVN1218101)-通过将50μg溶解于500μl PBS中制备100μg/mL储备溶液并且将小神经胶质细胞用100ng/mL处理。
方法
iCell小神经胶质细胞的处理和刺激
iCell小神经胶质细胞(人iPSC来源的小神经胶质细胞)获自FujiFilm(目录号C1110，批号105458)。根据制造说明书，将这些细胞解冻并且维持在iCell小神经胶质细胞完全培养基中。对于此测定，将iCell小神经胶质细胞以5x 105个细胞/mL的浓度悬浮并且将100μL的此细胞悬浮液添加到96孔板的内部60个孔中。允许在37℃，5％ CO2下，将iCell小神经胶质细胞静置过夜。在第二天晚上，将培养基去除并且用含有B27添加剂(Gibco，目录号17504044)的Neurobasal培养基(Gibco，目录号21103049)替代。再次，允许在37℃，5％CO2下，将小神经胶质细胞静置过夜。第二天晚上，在37℃，5％ CO2下，将细胞用二甲基亚砜(DMSO)、化合物6或化合物24处理30分钟。然后将细胞用100ng/mL重组人CSF1刺激24小时。刺激后，将培养上清液从每个孔中去除，并且等分至两种不同的96孔板用于后续ELISA测定。
CellTiter Glo 2.0活力测定
使用CellTiter Glo 2.0发光细胞活力测定法(Promega，目录号G9242)测定细胞活力。首先允许测定试剂平衡至室温30分钟。去除培养上清液后，将100μL新鲜室温培养基添加到每个孔中。随后，将100μL的测定试剂添加到每个孔中。然后将测定板振摇两分钟，并且然后静置10分钟。将100μL从每个孔转移至白板中，并且在具有SoftMax Pro软件的FlexStation3多模式微板读取器(Molecular Devices，目录号Flex3)上立即读取发光。
小鼠MCP-1 ELISA
将培养上清液用Quantikine人MCP-1 ELISA试剂盒(R&D Systems，目录号SCP00)测定。将样品用校准品稀释液1:10稀释。然后将200微升的标准品和稀释的样品添加到孔中。将板通过轻轻敲击框架混合，并且用胶带密封。将板在室温下孵育2小时。孵育后，将板使用喷射瓶用大约400μL的洗涤缓冲液洗涤5次。在最后一次洗涤之后，将板在纸巾上轻轻敲击以去除过量水分。将200微升的人MCP-1缀合物添加到每个孔中，用新的胶带条覆盖，并且在室温下孵育2小时。孵育后，如上所述将板洗涤。然后将200微升的底物溶液添加到每个孔中，并且在黑暗中在室温下孵育30分钟。孵育后，将50微升的酸终止溶液添加到每个孔中，并且在450nm下在具有SoftMax Pro软件的FlexStation3多模式微板读取器(MolecularDevices，目录号Flex3)上读取板。
结果
将iCell小神经胶质细胞(人iPSC来源的小神经胶质细胞)以50,000个细胞/孔铺板并且静置过夜。去除含有生长因子的培养基，并且然后允许细胞再次静置过夜。接下来，将细胞用DMSO或化合物6或化合物24预处理30分钟，并且然后经受CSF1刺激。利用Promega的Cell Titer Glo测定试剂盒评估细胞活力。将来自此实验的细胞培养上清液在MCP1ELISA中加工，以确定刺激/处理是否影响趋化因子产生。
在此实验中在评估的浓度下，化合物6不影响人小神经胶质细胞的活力(图16)。图16描绘了如上所述的CSF1R抑制剂处理和CSF1刺激后的细胞活力。将iCell人小神经胶质细胞以50,000个细胞/孔铺板，并且在生长因子饥饿后静置过夜。将细胞用DMSO或RA16100017预处理30分钟，并且然后经受CSF1刺激。24小时后，利用Promega的Cell Titer Glo 2.0测定试剂盒评估细胞活力。CSF1刺激诱导细胞活力增加，而CSF1R抑制剂对此作用没有影响。每个数据点代表单个孔，而图形柱代表六个孔的平均值和标准偏差。
如图17所示，CSF1刺激诱导MCP-1(CCL2-趋化因子)的释放显著增加。图17示出了在此实验中化合物6对CSF1诱导的MCP-1产生的阻断作用。将iCell人小神经胶质细胞以50,000个细胞/孔铺板，并且在生长因子饥饿后静置过夜。将细胞用DMSO或RA16100017预处理30分钟，并且然后经受CSF1刺激。利用R&D MCP1 Elisa试剂盒，24小时后评估MCP-1分泌。CSF1R抑制剂处理以浓度依赖性方式显著降低了MCP1产生(普通单向方差分析)。每个数据点代表单个孔，而图形柱代表六个孔的平均值和标准偏差。
化合物6以浓度依赖性方式显著降低了MCP1产生(普通单向方差分析，p<0.0001)。CSF1刺激诱导MCP1产生的显著增加，并且化合物6的CSF1R抑制以浓度依赖性方式消除了这种作用。图18将化合物6与化合物24的MCP1产生进行比较，其显示对MCP1的作用类似。
实施例17：MOG-EAE
实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)主要用作CNS的自身免疫性炎性疾病的非临床模型，并且类似于人多发性硬化症的许多方面。髓鞘质少突胶质细胞糖蛋白(MOG)诱导的EAE模型对于探索神经炎症和脱髓鞘的这种免疫介导的机制是理想的。在以下实验中，在小鼠c57BL/6EAE模型中测试化合物24和化合物6以评价降低疾病得分的可能功效。
物种：8-9周龄雌性C57BL/6J
测试物品：
MOG35-55肽(New England Peptides，批号BU01787)-在4mg/mL完全弗氏佐剂(CFA；Chondrex Inc，目录号7009，批号190446)中的250μg/只小鼠
百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)毒素(PTX，Sigma，目录号P7208-50UG，批号MKCL 1350)-在200μL PBS中的280ng/只小鼠
CSF-1R抑制剂-15mg/kg
媒介物-0.5％甲基纤维素/0.2％ Tween-80
递送：
MOG肽和CFA：皮下注射至后侧腹的2个位点(100μL/个位点)
百日咳鲍特菌毒素：在第0天和第2天静脉注射在200μL PBS中的280ng/只小鼠。
CSF1R抑制剂：每12小时口服灌饲
媒介物：每12小时口服灌饲
时间点：
第0天-将在CFA和PTX中的MOG肽施用至第1-3组
第2天-经由静脉注射将PTX施用至第1-3组
第9天-开始每天对小鼠进行评分
第11-14天-当得分达到1时将小鼠随机分组并且开始处理
约第18-21天-7天的处理后，对小鼠进行灌注并且对动物实施安乐死。
每天对小鼠进行临床评估以了解麻痹疾病的体征，并且间歇性地称重以记录体重减轻。研究结束时，将1/2脑固定用于组织学检查，并且收集脑/肝/血浆用于暴露。收集脊髓和全血用于流式细胞术。保存另外的血浆等分试样用于后续分析。
方法：
EAE诱导和评分
将雌性C57BL/6J小鼠用在完全弗氏佐剂(CFA)中的MOG35-55肽(250μg/小鼠)乳剂免疫。通过两次皮下注射将乳剂以每个注射部位100μL的体积递送至后侧腹。在第0天和第2天以在200μL的PBS中的280ng/只动物的剂量经由尾静脉注射施用百日咳鲍特菌毒素(PTX)。在EAE诱导后，每天监测小鼠的麻痹症状并且使用进展评分系统对它们的临床表现进行评分(得分0：无疾病；得分1：尾巴松垂；得分2：后肢无力；得分3：后肢麻痹；得分4：前肢无力或部分麻痹；得分5：死亡)。
只要动物达到疾病得分为1，就将其纳入研究。每天，将第一次达到得分一的动物平均分布在处理组中，并且当晚开始处理。将媒介物和化合物用颜色编码，使得对研究进行评分的人员对处理组不知情。将动物处理七天。在最后一剂(共14剂，处理7天)后一小时，将动物麻醉，并且经由眶后取血将血液收集到EDTA管中。然后将动物用冰冷的PBS灌注，并且收集适当的组织用于研究终点。
结果
所述方案旨在用更高浓度的MOG35-55和CFA乳剂诱导EAE模型。在得分为1或更高时，将EAE小鼠随机分为三个不同的处理组：媒介物、化合物24(15mg/kg)或化合物6(15mg/kg)。此研究中的平均疾病得分(图19)证明了MOG35-55诱导的多发性硬化症C57BL/6EAE模型的标准疾病过程。数据点和误差条分别代表组平均值和平均值的标准误差。如图19所示，两种CSF1R抑制剂均显著平均疾病得分。然而，与非氘代化合物24相比，氘代CSF1R抑制剂化合物6以令人惊讶的程度改善了麻痹症状。

Claims (22)

1.一种式(I)的化合物：
和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐，其中：
所述虚线表示任选的双键；
X1是C、N或CR7；
X2、X3、X4、X5、X6、X7各自独立地选自N、NR7或CR7；
X8和X9各自独立地选自N或C；
其中每个R7独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C2-C9)杂芳基、(C2-C10)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、(C1-C10)烷氧基-、R8-(C2-C9)杂环烷基、R8-(C2-C9)杂芳基、R8-(C2-C10)烷基炔基、R8-(C2-C10)炔基胺、R8-(C1-C10)烷氧基-、R8-(C2-C9)杂环烷基-O-、卤基、氰基、H2N-、(CH3)HN-、(CH3)2N-、R8C(O)-、F3C-、F2HC-、CH3F2C-、FH2C-、CH3FHC-和(CH3)2FC；
其中R8各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C1-C10)烷基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、(C1-C10)烷氧基-、HO-、卤基、(CH3)2N-和H2N-；
其中每个(C1-C10)烷基、(C2-C9)杂芳基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：氘、(C1-C10)烷基或(C1-C10)烷基胺；
T1、T2和T3各自独立地选自N或CR10；
其中每个R10独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C2-C10)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基-、COOH-(C3-C10)环烷基-、(C1-C10)烷氧基-、R10A-(C1-C10)烷基-、R10A-(C1-C10)烷基胺、R10A-((C1-C10)烷基)2胺、R10A-(C2-C10)炔基胺、R10A-C(O)-、R10A-(C1-C10)烷基-C(O)O-、R10A-(C1-C10)烷氧基-、HO-和卤基、氰基、H2N-、(CH3)HN-、(CH3)2N-、R10AR11N-、R10AR11N(O)C-、R10A(R11C(O))N-、R10AR11NC(O)O-、R10AC(O)-、R10AR11NC(O)R10AN-、(C1-C10)烷基-OC(O)R10AN-、F3C-、F2HC-、CH3F2C-、FH2C-、CH3FHC-、(CH3)2FC-；
其中R10A和R11各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷基-C(O)O-、COOH-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、HO-、卤基、(CH3)2N-和H2N-；
其中每个(C1-C10)烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：D、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、HO-、卤基或H2N-
Y1是O、NR12或CR12R13；
其中R12不存在或者R12和R13各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C3)炔基胺、(C1-C10)烷氧基-、(C1-C10)烷氧基-(C1-C10)烷基-、HO-、卤基和H2N-；
R1和R2各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、HO-、卤基和H2N；
R5不存在或选自H、D、(C1-C10)烷基、HO-、卤基和H2N-；并且
R6选自D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、R14-(C3-C10)环烷基、R14-(C6-C14)芳基、R14-(C2-C9)杂芳基和R14-(C1-C10)烷基胺；
其中R14各自独立地选自H、D、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C1-C10)烷基胺、((C1-C10)烷基)2胺、(C1-C10)烷氧基-、HO-、F2HC-O-、卤基、(CH3)2N-、F3C-C(O)-、F3C-和F2HC-；
其中每个(C1-C10)烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C3-C10)环烷基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂环烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、HO-、卤基或H2N-；并且
Z1选自H、卤基和(C1-C10)烷基；
Y2是O、NR17或CR17R18；
其中R17不存在或者R17和R18各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、HO-、卤基或H2N-；
其中R7、R1或R2中的至少一个是D。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中X1是N；X2是N；X3是CR7；X4是CR7；X5是CR7；X6是N；X7是CR7；X8是C；并且X9是C。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中T1、T2和T3各自独立地是CR10。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中每个R10独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C3-C10)环烷基、(C1-C10)烷氧基和卤基。
5.根据权利要求1或2所述的化合物，其中Y1和Y2各自是O。
6.根据权利要求1或2所述的化合物，其中Z1选自H和(C1-C10)烷基。
7.根据权利要求1或2所述的化合物，其中所述式(I)的化合物选自式(I’)的化合物：
和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐，其中：
所述虚线表示任选的双键；
A选自H和D；
X3’是CR3’，其中R3’选自H和D；
X4’是CR4’，其中R4’选自H、D和R7；并且
X5’是CR5’，其中R5’选自H和D；
其中A、R3’、R4'和R5’中的至少一个是D。
8.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R1和R2各自独立地选自H和D。
9.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R6选自(C3-C10)环烷基、(C2-C9)杂芳基、R14-(C6-C14)芳基、R14-(C2-C9)杂芳基和R14-(C1-C10)烷基胺；其中R14各自独立地选自H、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷基胺、(C1-C10)烷氧基-、HO-、F2HC-O-、F3C-C(O)-、F3C-和F2HC-；并且其中每个(C1-C10)烷基、(C6-C14)芳基、(C2-C9)杂芳基、(C3-C10)环烷基或(C2-C9)杂环烷基进一步任选地被一至四个选自以下的基团取代：(C1-C10)烷基、HO-、卤基或H2N-。
10.一种化合物，所述化合物选自：
和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。
11.一种化合物，所述化合物选自3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d和/或其立体异构体、光学异构体、外消旋和非对映异构体混合物和/或药学上可接受的盐。
12.根据权利要求11所述的化合物，所述化合物是3-(((2S,3S)-8-甲氧基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-d。
13.一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和根据权利要求1所述的化合物和/或其药学上可接受的盐。
14.一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和根据权利要求7所述的化合物和/或其药学上可接受的盐。
15.一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和根据权利要求7所述的化合物和/或其药学上可接受的盐。
16.一种用于治疗有需要的受试者的免疫介导的疾病的方法，所述方法包括以治疗有效量向所述受试者施用根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或根据权利要求13-15中任一项所述的组合物。
17.一种用于治疗有需要的受试者的多发性硬化症的方法，所述方法包括以治疗有效量向所述受试者施用根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或根据权利要求13-15中任一项所述的组合物。
18.一种用于治疗有需要的受试者的狼疮性肾炎的方法，所述方法包括以治疗有效量向所述受试者施用根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或根据权利要求13-15中任一项所述的组合物。
19.一种用于治疗有需要的受试者的神经系统疾病的方法，所述方法包括以治疗有效量向所述受试者施用根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或根据权利要求13-15中任一项所述的组合物。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述神经系统疾病是ALS。
21.根据权利要求19所述的方法，其中所述神经系统疾病是PSP。
22.根据权利要求19所述的方法，其中所述神经系统疾病是MSA。
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