CN116698554A - 一种环保组织固定液 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种环保组织固定液，包括下述重量份数的原料制成：A成分30‑600份、B成分100‑600份、C成分50‑300份、D成分50‑600份，还可以包括X1成分1‑100份、X2成分1‑200份、X3成分1‑100份中的一种或多种。本环保组织固定液处理组织效果好，其在固定过程中能较早开始脱水，快速去除组织中较多的脂质，经环保新型组织固定液处理后的离体样本，在形态学上可保证很高的质量，不会因切片质量而影响诊断。

Description

一种环保组织固定液

技术领域

本发明涉及固定液技术领域，尤其是一种环保组织固定液。

背景技术

凡是需要制作病理检验标本的各种组织，无论是小标本乃至电镜还是大体标本，都必须首先固定。一张优秀的组织学切片是建立在适当而完全的固定基础之上的，良好的固定可迅速阻止组织死后变化，防止自溶和腐败，保持离体组织原有的形态和结构，使组织成分对染色液有不同的亲和力，经过染色处理后，组织微结构在显微镜下可易于识别和观察，便于做出病理诊断。

而以往纯乙醇固定液或乙醇类固定液所存在的明显的组织收缩、细胞空泡以及核固缩等缺陷(主要仰仗其高分子的支撑作用)。

为此，我们提出一种环保组织固定液解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种环保组织固定液，以解决上述背景技术中以往纯乙醇固定液或乙醇类固定液所存在的明显的组织收缩、细胞空泡以及核固缩等缺陷(主要仰仗其高分子的支撑作用)的问题。

FineFIX组织固定液是一种不含甲醛溶液的水溶液，主要成分乙醇、纯聚乙烯、渗透剂和纯水等，并克服了以往纯乙醇固定液或乙醇类固定液所存在的明显的组织收缩、细胞空泡以及核固缩等缺陷，FineFIX组织固定液能够相对有效地保存组织抗原、维护良好的细胞核和胞质形态学结构，同时能保护细胞膜的完整性。FineFIX组织固定液处理组织时间短，因其在固定过程中能较早开始脱水及去脂，所以它非常适用于后固定，快速去除含脂较多组织中的脂肪。经FineFIX组织固定液处理后的组织，在形态学上可保证很高的质量，不会因切片质量而影响诊断。与传统的甲醛固定相比，FineFIX组织固定液固定的组织也几乎不产生收缩、空泡及核固缩。经过实际应用，认为FineFIX组织固定液完全可以适用于病理诊断所需的常规HE染色、免疫组化标记、组织化学染色及特殊染色；采用环保新型组织固定液固定可使DNA及RNA得到极佳的保存，有利于展开分子生物学研究。

(1)与传统的甲醛固定相比，FineFIX组织固定液固定剂是以醇溶结构为基础固定组织在经高分子物质将被固定塌陷的细胞膜支撑起来，这样就彻底纠正了醇类固定剂对组织的收缩作用，从而产生较好的固定效果，它与甲醛的交联固定有本质的区别。

(2)FineFIX处理组织效果好，其在固定过程中能较早开始脱水，快速去除组织中较多的脂质，环保新型组织固定液处理后的组织，在形态学上可保证很高的质量，不会因切片质量而影响诊断。

(3)克服了以往纯乙醇固定液或乙醇类固定液所存在的明显的组织收缩、细胞空泡以及核固缩等缺陷(主要仰仗其高分子的支撑作用)。

(4)FineFIX组织固定液无毒性，其在空气中的弥散值远远低于甲醛，由于其在空气中的弥散率低，故更加突环保新型组织固定液在维护实验室人员身体健康的优越性。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种环保组织固定液，包括下述重量份数的原料制成：A成分30-600份、B成分100-600份、C成分50-300份、D成分50-600份。

在进一步的实施例中，还可以包括X1成分1-100份、X2成分1-200份、X3成分1-100份中的一种或多种。

在进一步的实施例中，通常由下述重量份数的原料制成的固定液：A成分100-400份、B成分100-400份、C成分100-250份、D成分80-200份，所述的固定液经FineFIX固定的标本其颜色与新鲜标本的颜色相近。

在进一步的实施例中，所述A成分为乙醇、B成分为渗透剂、C成分为纯聚乙烯、D成分为纯水。

在进一步的实施例中，该固定液可用于福尔马林固定液的替代品。

在进一步的实施例中，C成分选用纯聚乙烯，D成分的电阻率：10-15M、TOC：10-20ppb。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、处理组织效果好，其在固定过程中能较早开始脱水，快速去除组织中较多的脂质，经环保新型组织固定液处理后的离体样本，在形态学上可保证很高的质量，不会因切片质量而影响诊断。

2、克服了以往纯乙醇固定液或乙醇类固定液所存在的明显的组织收缩、细胞空泡以及核固缩等缺陷。

3、在免疫组化及特殊染色中的应用效果很好。

4、细胞涂片：非常适合细胞学的固定。

5、冻切片：对冰冻切片效果最佳，基本与石蜡切片近似。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明的一种环保组织固定液，可由下述重量份数的原料制成：A成分30-600份、B成分100-600份、C成分50-300份、D成分50-600份。

还可以包括X1成分1-100份、X2成分1-200份、X3成分1-100份中的一种或多种。

优选方式为，通常由下述重量份数的原料制成的固定液：A成分100-400份、B成分100-400份、C成分100-250份、D成分80-200份。

所述的固定液经Fine FIX固定的标本其颜色与新鲜标本的颜色相近。

本发明可做成福尔马林固定液的替代品。

A成分，乙醇(别名)……无水酒精，无色澄清液体，能与水及许多有机溶剂混合；

B成分，渗透剂(别名)……吐温；无色黏稠稳定的有乳化、扩散、增溶、稳定等作用吸水性液体，几乎无味无臭，易燃，无毒。与水、乙醇及多种有机溶剂混溶有机合成溶剂

C成分，纯聚乙烯(别名)……医药级聚乙烯醇，不同于化工级别聚乙烯醇，它是一种极安全的高分子有机物，对人体无毒，无副作用，具有良好的生物相容性，

D成分，水(别名)；------纯水，电阻率：10-15>10MΩ.cm、TOC：10-20ppb

微生物：<1CFU/ml

举例：

1.骨组织(表F4-1)

表F4-1骨组织的Fine FIX固定法

2.口腔、上颌骨、下颌骨(表F4-2)

表F4-2口腔、上颌骨、下颌骨Fine FIX固定法

3.软组织(表F4-3)

表F4-3软组织的Fine FIX固定法

4.皮肤组织FIX固定法(表F4-4)

表F4-4皮肤组织的Fine FIX固定法

5.神经组织(表F4-5)

表F4-5神经组织的Fine FIX固定法

6.淋巴结、胸腺、脾脏(表F4-6)

表F4-6淋巴结、胸腺、脾脏的Fine FIX固定法

7.食管组织(表F4-7)

表F4-7食管组织的Fine FIX固定法

8.心脏、脉管组织(表F4-8)

表F4-8心脏、脉管组织的FineFIX固定法

9.肠道(空肠、回肠、结肠)组织(表F4-9)

表F4-9肠道(空肠、回肠、结肠)组织的Fine FIX固定法

10.肾脏及肾上腺组织(表F4-10)

表F4-10肾脏及肾上腺组织的FineFIX固定法

11.喉组织(表F4-11)

表F4-11喉组织的Fine FIX固定法

12.肝脏、胆囊及胰腺组织(表F4-12)

表F4-12肝脏、胆囊及胰腺组织的Fine FIX固定法

13.肺及胸膜(表F4-13)

表F4-13肺及胸膜的Fine FIX固定法

14.卵巢及输卵管组织(表F4-14)

表F4-14卵巢及输卵管组织的Fine FIX固定法

15.前列腺组织(表F4-15)

表F4-15前列腺组织的Fine FIX固定法

16.涎腺组织(表F4-16)

表F4-16涎腺组织的Fine FIX固定法

17.胃组织(表F4-17)

表F4-17胃组织的Fine FIX固定法

18.睾丸组织(表F4-18)

表F4-18睾丸组织的F IX固定法

19.甲状腺及甲状旁腺组织(表F4-19)

表F4-19甲状腺及甲状旁腺组织的Fine FIX固定法

20.膀胱组织(表F4-20)

表F4-20膀胱组织的Fine FIX固定法

21.子宫及胎盘组织(表F4-21)

表F4-21子宫及胎盘组织的Fine FIX固定法

采用Fine FIX固定液处理组织时间短，因其在固定过程中能较早开始脱水及去脂，所以它非常适用于前后固定，快速去除含脂较多组织中的脂肪。经Fine FIX处理后的组织，在形态学上可保证很高的质量，不会因切片质量而影响诊断。

Fine FIX是一种不含甲醛溶液的水溶性浓缩液，用乙醇稀释后的配方已获专利，并克服了以往纯乙醇固定液或乙醇类固定液所存在的明显的组织收缩、细胞空泡以及核固缩等缺陷，Fine FIX能够相对有效地保存组织抗原、维护良好的细胞核和胞质形态学结构，同时能保护细胞膜的完整性。Fine FIX处理组织时间短，因其在固定过程中能较早开始脱水及去脂，所以它非常适用于后固定，快速去除含脂较多组织中的脂肪。经Fine FIX处理后的组织，在形态学上可保证很高的质量，不会因切片质量而影响诊断。与传统的甲醛固定相比，Fine FIX固定的组织也几乎不产生收缩、空泡及核固缩。经过实际应用，我们认为FineFIX完全可以适用于病理诊断所需的常规HE染色、免疫组化标记、组织化学染色及特殊染色；采用Fine FIX

固定可使DNA及RNA得到极佳的保存，有利于展开分子生物学研究。

1.FineFIX无毒性，其在空气中的弥散值远远大于甲醛，由于其在空气中的弥散率低，故更加突出了FineFIX在维护实验室人员身体健康方面的优越性。

Fine FIX环保处理

不需甲醛中和剂进行废液处理，回收容易。以乙醇成分为主的Fine FIX，可依据乙醇废液处理程序处理废液；并且Fine FIX在贮存及运输中可在极度低温环境下贮存及装运(在-50℃的的极低温条件下仍然不会凝结)。

Fine FIX固定剂在免疫组化中的应用

修复抗原决定簇(Epitope Retrieval，ER)，目前，对经甲醛溶液固定、石蜡包埋的组织进行修复抗原的处理流程极不规范，其主要原因是：甲醛溶液交联反应持续存在，组织在固定液中停留时间较长，因此免疫组化标记的敏感性与染色强度参差不齐。

Fine FIX进行固定属于自然沉淀模式，组织抗原特性不受影响，避免了因固定剂交联作用而产生的抗原数量上的衰减，因此，在进行修复抗原时，不必采取有破坏性的修复方法，从而使抗原修复技术更为标准化。Fine FIX这种无交联反应的优势，提高了抗原对抗体的敏感性，因此在许多情况下，这种节约抗体的作用尤为明显，可以稀释抗体而减少抗体的用量，这样：对使用多克隆抗体的用户，一定份量的试剂在原有基础上增加了检测的例数。

针对FineFIX固定、石蜡包埋组织的抗原修复流程应采用如下规则：

1.抗原修复温度低，一般不超过85℃。

2.抗体稀释度高，一般在1:200左右。

3.很多抗体可不做修复也能达到很好的效果。

4.所使用的抗原修复液没有变化，采用所在工作室现有的、经过实践证明合适的抗原修复液均可。

5.达到抗原修复温度后，修复15～20分钟，时间的长短取决于抗原决定簇的类型。

6.经过实验测评过的抗体，如下表所示(表F4-22)

表F4-23经过实验测评过的抗体

Fine FIX固定剂的优点

1.处理组织时间短，因在固定过程中较早开始脱水及去脂。

2.非常适合微波快速组织处理及常规组织过程中的固定步骤。

3.非常适用于后固定，可去除含脂量较多组织中的脂肪，如带骨髓的骨组织脱钙时。

4.可作为全自动组织脱水机第一缸的甲醛溶液替代品。

Fine FIX固定后组织切片显微镜下的形态表现

无论是传统的方法还是微波的方法，用FineFIX处理后的组织，在形态学上可保证很高的质量，不会因切片质量而使诊断因难，与传统的乙醇固定相比，FineFIX固定的组织几乎不产生收缩和空泡，也不存在核固缩。

Fine FIX在取材室中的优势

1.组织浸泡在Fine FIX中可取得同步固定、脱水、脱脂的效果。

2.经Fine FIX固定的大体标本，取材时触之感觉良好，易于分离并切取较薄的具有代表性的组织块。

3.经Fine FIX固定后，淋巴结显灰自色，易于淋巴结的检出。

4.可去除脂肪组织标本的黏滑感及黏稠性，使清洁工作快速及简单，对脂肪组织可达到快速去脂的效果。

5.与甲醛溶液灰蒙蒙的染色效果相比，组织着色更显真实鲜艳。

FineFIX固定剂值得推荐

在实际应用中已可证明FineFIX完全适合病理诊断所需的常规HE染色、免疫组化标记和组织化学染色，另外，在进行分子生物学研究方面更具优势。

1.HE染色质量及显示细胞细微结构均明显提高。

2.由于减少了为抗原修复决定簇而进行的具有破坏性操作，因此，明显改善了免疫组化染色效果

3.特殊染色可依据己有的资料进行而无需任何变化。

4.非常适合细胞涂片的固定。

5.用组织蜡块进行分子生物学研究DNA是巨大的资源，但是，试图从甲醛溶液固定的组织中抽提DNA以开展分子生物学研究，其成功率很难确定，室温下甲醛溶液固定的组织很难保存高分子量DNA，抽提的DNA分子的大小又与固定的温度直接相关，即使短暂的甲醛溶液固定切片也会明显降低DNA的可溶性，在固定过程中，约有30％的核酸丢失。

随着PCR以及其他核酸分析技术在临床诊断中的应用，了解采用甲醛溶液作为原始固定方法的弊端，以及修复保存的DNA和RNA分子变得越来越重要，因为在将来分子病理技术在病理诊断中会起到至关重要的作用。多项研究显示，与核酸固定剂一样，非交联性的醇类固定试剂FineFIX比醛类固定要好：

(1)从FineFIX固定的组织中成功受体DNA的时间比甲醛溶液固定要快。

(2)与甲醛溶液固定组织相比，FineFIX抽提的DNA没降解而且可大量修复。

(3)从FineFIX固定的组织抽提的DNA用于PCR分析，以给定的靶序列扩增信号为标准，其信号强于甲醛溶液的固定效果。

因此，采用FineFIX可使DNA及RNA得到最佳保存，有利于开展分子生物学研究，同时也适用于-80℃冻存的标本而不会使组织变硬，取材方便。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (6)

1.一种环保组织固定液，其特征在于，包括下述重量份数的原料制成：A成分30-600份、B成分100-600份、C成分50-300份、D成分50-600份。

2.根据权利要求1所述的环保组织固定液，其特征在于：还可以包括X1成分1-100份、X2成分1-200份、X3成分1-100份中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的环保组织固定液，其特征在于：通常由下述重量份数的原料制成的固定液：A成分100-400份、B成分100-400份、C成分100-250份、D成分80-200份。

所述的固定液经Fine FIX固定的标本其颜色与新鲜标本的颜色相近；

4.根据权利要求1或3任意一项所述的环保组织固定液，其特征在于：所述A成分为乙醇、B成分为渗透剂、C成分为纯聚乙烯、D成分为纯水。

5.根据权利要求4所述的环保组织固定液，其特征在于：该固定液可用于福尔马林固定液的替代品。

6.根据权利要求4所述的环保组织固定液，其特征在于：所述C成分选用纯聚乙烯，D成分的电阻率：10-15M、TOC：10-20ppb。