CN116694828A - 检测试剂的应用、cd3+t细胞抗感染能力评估方法及产品 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了检测试剂的应用、CD3+T细胞抗感染能力评估方法及产品，数据生物医学领域，本发明实施例中，建立了体外评估CD3+T细胞抗病毒能力的新体系，具体可以通过在CD3+T细胞和感染AD169的MRC‑5细胞共孵育之后、流式检测得到的MRC‑5细胞凋亡数，以及在CD3+T细胞和感染AD169的MRC‑5细胞共孵育之后定量检测得到的HCMV拷贝数，对CD3+T细胞体外抗感染能力进行评估。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学领域，特别是涉及检测试剂的应用、CD3+T细胞抗感染能力评估方法及产品。
背景技术
T细胞是适应性免疫系统的重要组成部分，并且在抗病毒感染过程中发挥重要的作用。相关技术中，评估T细胞抗病毒的指标主要聚焦于T细胞功能或表型改变的评估，例如：由于T细胞抗病毒功能增强时，高表达活化型受体CD69，CD137，CD25，基于此，可以对这些受体表达量进行检测，以评估T细胞抗病毒的抗病毒能力。又比如，T细胞抗病毒功能增强时，分泌IFN-γ，perforin及Granzyme的能力增强，因此，可以对这些细胞分子的分泌量进行检测，以评估T细胞抗病毒的抗病毒能力。然而，这些评估方法，均没有客观的评价病毒本身状态的改变。
因此，目前亟需一种新的T细胞抗病毒评估方法。
发明内容
为解决上述背景技术中存在的问题，本发明提供了检测试剂的应用、CD3+T细胞抗感染能力评估方法及产品。
第一方面，本发明提供了一种检测试剂的应用，应用于制备CD3+T细胞抗巨细胞病毒作用评估试剂，所述检测试剂包括：MRC-5细胞凋亡数检测试剂和AD169拷贝数检测试剂；
所述检测试剂用于在CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞共孵育之后、流式检测MRC-5细胞凋亡数；
所述检测试剂还用于在CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞共孵育之后定量检测AD169拷贝数；
根据所述MRC-5细胞凋亡数和AD169拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力。
可选地，根据所述MRC-5细胞凋亡数和AD169拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力，包括：
在MRC-5细凋亡率大于33.93%，以及AD169拷贝数大于等于400拷贝数/毫升的情况下，判断CD3+T细胞体外抗感染能力正常。
第二方面，本发明提供了一种CD3+TSCM细胞抗感染能力评估方法，所述方法包括：
获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后、流式检测得到的靶细胞凋亡数；
获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后定量检测得到的病毒拷贝数；
根据所述靶细胞凋亡数和所述病毒拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力。
可选地，所述病毒为AD169，所述靶细胞为MRC-5细胞，根据所述靶细胞凋亡数和所述病毒拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力，包括：
在MRC-5细凋亡率大于33.93%，以及AD169拷贝数大于等于400拷贝数/毫升的情况下，判断CD3+T细胞体外抗感染能力正常。
第三方面，本发明提供了一种多发性骨髓瘤治疗预后预测系统，所述系统包括：
第一获取模块，用于获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后、流式检测得到的靶细胞凋亡数；
第二获取模块，用于获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后定量检测得到的病毒拷贝数；
评估模块，用于根据所述靶细胞凋亡数和所述病毒拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力。
可选地，所述病毒为AD169，所述靶细胞为MRC-5细胞，所述评估模块，具体用于：
在MRC-5细凋亡率大于33.93%，以及AD169拷贝数大于等于400拷贝数/毫升的情况下，判断CD3+T细胞体外抗感染能力正常。
可选地，所述MRC-5细胞的凋亡数是通过以下步骤检测得到的：
对MRC-5细胞进行消化，计数，种入T25培养瓶中，待生长密度至70%-80%的时候，以MOI=2加入AD169病毒液，置于37℃培养箱中培养1小时，去除病毒液，加入10% FBS-DMEM完全培养基，继续培养24小时；
24小时后去培养基，使用37℃预热的0.05%trypsin，加1毫升至T25培养瓶中，轻柔摇晃使其覆盖培养瓶底部，置于37℃培养箱中放置2分钟；
消化完成后，向T25 培养瓶中加入2 毫升10% FBS-DMEM完全培养基终止消化；
设置离心机工作状态为1200rpm，5分钟，进行离心，去除上清，向T25培养瓶中加入1毫升PBS重悬细胞；
加入终浓度为5UM的CFSE置细胞悬液中，37℃孵育15分钟后，加入10%FBS-DMEM完全培养基，置于4度冰箱终止5分钟；
设置离心机工作状态为1200rpm，5分钟，进行离心，去除上清，加入10%FBS-DMEM完全培养基，将细胞重悬为密度1×106细胞/毫升浓度；
取流式分选纯化的CD3+T细胞，与AD169感染的MRC-5细胞共孵育24小时；
共孵育完成后，收集细胞，进行离心，去除上清，保留细胞沉淀；
向流式管中加入7-ADD/annexinV凋亡指标，4度孵育15分钟后，流式检测靶细胞凋亡水平。
可选地，所述AD169的拷贝数是通过以下步骤检测得到的：
对MRC-5细胞进行消化、计数，以1×105细胞/孔种入24孔板中，培养24 小时待其贴壁；
以MOI=0.5加入AD169病毒液，置于37℃培养箱中培养1 小时，去除病毒液，加入10% FBS-DMEM完全培养基，继续培养24 小时；
将感染AD169病毒的MRC-5细胞上清去除，将分选纯化的CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞，以2×105细胞/孔细胞/孔种入24孔板中，置于37℃培养箱中培养6天。
在第6天收集培养上清，使用AD169核酸检测试剂盒和ABI Prism 7300 qPCR 仪器定量检测AD169拷贝数。
第四方面，本发明提供了一种电子设备，包括存储器、处理器及存储在存储器上并可在处理器上运行的计算机程序，所述处理器执行所述计算机程序时实现如本发明第二方面所述的CD3+T细胞抗感染能力评估方法中的步骤。
第五方面，本发明提供了一种计算机可读存储介质，其上存储有计算机程序，该计算机程序被处理器执行时实现如本发明第二方面所述的CD3+T细胞抗感染能力评估方法中的步骤。
本发明实施例中，建立了体外评估CD3+T细胞抗病毒能力的新体系，具体可以通过在CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞共孵育之后、流式检测得到的MRC-5细胞凋亡数，以及在CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞共孵育之后定量检测得到的HCMV拷贝数，对CD3+T细胞体外抗感染能力进行评估。
附图说明
图1示出了本发明实施例中CD3+T细胞对AD169感染的MRC-5靶细胞的杀伤评估对比图；
图2示出了本发明实施例中在有无CD3+T细胞共孵育状态下的AD169感染的MRC-5细胞的上清培养液中巨细胞病毒DNA拷贝数对比图。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂以及其他仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市场购买获得的常规试剂产品。
T细胞是适应性免疫系统的重要组成部分，在抗病毒免疫中发挥重要的作用。既往体外实验仅从T细胞功能状态指标评估抗病毒效应的强弱，但没有考虑到病毒感染的靶细胞变化情况也能反应T细胞抗病毒情况，目前的体外评估体系无法对T细胞的抗病毒情况进行全方位地准确评估。
基于此，本发明实施例建立了一种体外评估CD3+T细胞抗病毒能力的系统。从病毒感染的靶细胞凋亡水平及病毒拷贝数的变化评估TSCM细胞抗病毒能力。
具体的，本发明实施例中，通过研究探索，证实了CD3+T细胞在体外可以促进AD169(人CMV病毒的一种)感染的MRC-5细胞（人胚肺细胞株）的凋亡；还证实了CD3+TSCM细胞在体外可以降低CMV病毒拷贝数。
基于此，本发明实施例提出了一种检测试剂的应用，应用于制备CD3+T细胞抗巨细胞病毒作用评估试剂，所述检测试剂包括：MRC-5细胞凋亡数检测试剂和AD169拷贝数检测试剂；
所述检测试剂用于在CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞共孵育之后、流式检测MRC-5细胞凋亡数；
所述检测试剂还用于在CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞共孵育之后定量检测AD169拷贝数；
根据所述MRC-5细胞凋亡数和AD169拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力。
可选地，根据所述MRC-5细胞凋亡数和AD169拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力，包括：
在MRC-5细凋亡率大于33.93%，以及AD169拷贝数大于等于400拷贝数/毫升的情况下，判断CD3+T细胞体外抗感染能力正常。
本发明实施例中，细胞因子检测试剂包括可以检测出MRC-5细胞凋亡数和AD169拷贝数的检测试剂。
具体的，所述MRC-5细胞凋亡数检测试剂包括：7-ADD/annexinV凋亡指标、流式检测试剂（如CD45，CD3试剂）。
所述AD169拷贝数检测试剂包括：人巨细胞病毒(HCMV)核酸检测试剂盒。
本发明实施例中，提出了一种该检测试剂的新应用，可以将其应用于制备CD3+T细胞抗巨细胞病毒作用评估试剂。具体可以利用MRC-5细胞凋亡数检测试剂在CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞共孵育之后、流式检测MRC-5细胞凋亡数，利用AD169拷贝数检测试剂在CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞共孵育之后定量检测AD169拷贝数，根据所述MRC-5细胞凋亡数和AD169拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力。
基于同一发明构思，第二方面，本发明提供了一种CD3+T细胞抗感染能力评估方法，所述方法包括：
获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后、流式检测得到的靶细胞凋亡数；
获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后定量检测得到的病毒拷贝数；
根据所述靶细胞凋亡数和所述病毒拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力。
可选地，所述病毒为AD169，所述靶细胞为MRC-5细胞，根据所述靶细胞凋亡数和所述病毒拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力，包括：
在MRC-5细凋亡率大于33.93%，以及AD169拷贝数大于等于400拷贝数/毫升的情况下，判断CD3+T细胞体外抗感染能力正常。
基于同一发明构思，第三方面，本发明提供了一种CD3+T细胞抗感染能力评估系统，所述系统包括：
第一获取模块，用于获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后、流式检测得到的靶细胞凋亡数；
第二获取模块，用于获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后定量检测得到的病毒拷贝数；
评估模块，用于根据所述靶细胞凋亡数和所述病毒拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力。
可选地，所述病毒为AD169，所述靶细胞为MRC-5细胞，所述评估模块，具体用于：
在MRC-5细凋亡率大于33.93%，以及AD169拷贝数大于等于400拷贝数/毫升的情况下，判断CD3+T细胞体外抗感染能力正常。
可选地，所述MRC-5细胞的凋亡数是通过以下步骤检测得到的：
S11，对MRC-5细胞进行消化，计数，种入T25培养瓶中，待生长密度至70%-80%的时候，以MOI=2加入AD169病毒液，置于37℃培养箱中培养1小时，去除病毒液，加入10% FBS-DMEM完全培养基，继续培养24小时。
S12，24小时后去培养基，使用37℃预热的0.05%trypsin，加1毫升至T25培养瓶中，轻柔摇晃使其覆盖培养瓶底部，置于37℃培养箱中放置2分钟。
S13，消化完成后，向T25 培养瓶中加入2 毫升10% FBS-DMEM完全培养基终止消化。
本发明实施例中，镜下观察细胞变圆，倾斜培养瓶可见细胞膜状成片脱落，确定消化完成。
S14，设置离心机工作状态为1200rpm，5分钟，进行离心，去除上清，向T25培养瓶中加入1毫升PBS重悬细胞。
S15，加入终浓度为5UM的CFSE置细胞悬液中，37℃孵育15分钟后，加入10%FBS-DMEM完全培养基，置于4度冰箱终止5分钟；
S16，设置离心机工作状态为1200rpm，5分钟，进行离心，去除上清，加入10%FBS-DMEM完全培养基，将细胞重悬为密度1×106细胞/毫升浓度。
S17，取流式分选纯化的CD3+T细胞，与AD169感染的MRC-5细胞共孵育24小时。
S18，共孵育完成后，收集细胞，进行离心，去除上清，保留沉淀物；
S19，向T25 培养瓶中加入7-ADD/annexinV凋亡指标，4度孵育15分钟后，流式检测靶细胞凋亡水平。
本发明实施例中，还可以通过以下步骤在体外纯化人CD+TSCM细胞：
取体外扩增的CMV（巨细胞）特异性T细胞，计数。
加入40 µl/1×107MACS buffer，使用移液器轻柔吹匀细胞。
加入10 µl CD8 Biotin，轻柔吹匀细胞，冰上避光孵育5 分钟。
加入80 µl/1×107MACS buffer，轻柔吹匀细胞。
加入20 µl Anti-Biotin MicroBeads，轻柔吹匀细胞，冰上避光孵育10 分钟。
加入适量MACS重悬细胞，使得总体系不低于500 µl，使用40 μm滤网过滤掉细胞团块。
将LD分选柱置于磁力架上，用15 毫升离心管置于LS柱下方用于收集阴选细胞。
用2 毫升 MACS buffer加入LD柱以润柱。
将细胞悬液沿LD柱侧壁缓慢加入，等待悬液缓慢下流。
待细胞悬液即将流尽时，加入2 毫升 MACS buffer洗涤分选柱残留的阴选细胞。
收集15 毫升离心管中的液体，即为CD8+细胞悬液。
细胞离心1500 rpm/5 分钟，去除上清，适量PBS重悬并计数。取适量细胞悬液表面抗体标记：CD45RA-FITC; CD95-APC;CD8-Percp；CD62L-PECY7；室温避光孵育15 分钟。
加入2 毫升 PBS，涡旋混匀，离心1500 rpm/5 分钟，去除上清。
加入适量PBS，使得细胞浓度不超过2*107/毫升，涡旋混匀，使用流式细胞分选仪分选CD8+CD95+CD45RA+CD62L+的CD3+T细胞。
可选地，所述AD169的拷贝数是通过以下步骤检测得到的：
S21，对MRC-5细胞进行消化、计数，以1×105细胞/孔种入24孔板中，培养24 小时待其贴壁。
S22，以MOI=0.5加入AD169病毒液，置于37℃培养箱中培养1 小时，去除病毒液，加入10% FBS-DMEM完全培养基，继续培养24 小时。
S23，将感染AD169病毒的MRC-5细胞上清去除，将分选纯化的CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞，以2×105细胞/孔细胞/孔种入24孔板中，置于37℃培养箱中培养6天。
S24，在第6天收集培养上清，使用AD169核酸检测试剂盒和ABI Prism 7300 qPCR仪器定量检测AD169拷贝数。
基于同一发明构思，第四方面，本发明提供了一种电子设备，包括存储器、处理器及存储在存储器上并可在处理器上运行的计算机程序，所述处理器执行所述计算机程序时实现如本发明第二方面所述的CD3+T细胞抗感染能力评估方法中的步骤。
基于同一发明构思，第五方面，本发明提供了一种计算机可读存储介质，其上存储有计算机程序，该计算机程序被处理器执行时实现如本发明第二方面所述的CD3+T细胞抗感染能力评估方法中的步骤。
为使本领域技术人员更好地理解本发明，以下通过具体的实施例来说明本发明提供的检测试剂的应用、CD3+T细胞抗感染能力评估方法及产品。
实施例1：体外实验研究：
本发明实施中，收集了三例HLA-A为0201位点的健康供者外周血10毫升，提取各外周血单个核细胞后经过体外培养获得纯度为99%的CD3+T细胞，为CMV病毒特异性的CD3+T细胞。实验前细胞冷冻保存。
人胚肺成纤维细胞（MRC-5）的培养条件为10%FBS+1%双抗+90%的D-MEM培养基。
本发明实施例中，首先，将健康供者来源的扩增后的CD3+T细胞在37℃水浴中快速解冻，然后在预热的生长培养基中休息过夜，同时添加细胞因子IL-15(25ng/毫升，Proteintech)联合IL-7(25ng/毫升，Proteintech)。
第二天，新的生长培养基重悬过夜培养的CD3+T细胞（效应细胞，计数，调整细胞密度为1*106细胞/毫升；与此同时，AD169感染的MRC-5细胞（靶细胞）用CFSE染料标记后，重新计数并用新的生长培养基重悬，调整细胞密度为1*106，设定效应细胞与靶细胞的比例为10:1，细胞充分混匀，放置于96孔u型圆底板中，37℃孵箱孵育24小时后，流式标记7ADD+AnnexinV染料，检测靶细胞CFSE阳性亚群中7ADD+AnnexinV+亚群的占比，表示在效应细胞作用下病毒感染的MRC-5靶细胞凋亡的情况，同时计算CD3+T细胞杀伤AD169感染的MRC-5细胞的凋亡效率，计算公式为MRC-5细胞在于CD3+T细胞共培养下的（7ADD+AnnexinV（%）-对照组7ADD+AnnexinV（%））/ MRC-5细胞在CD3+T细胞共培养下的（7ADD+AnnexinV（%），如图1所示，其示出了AD169人巨细胞病毒感染的MRC-5细胞在有无CD3+T细胞共孵育后的凋亡(7ADD+AnnexiV对比示意图，由图1可知，病毒感染的MRC-5靶细胞与CD3+T细胞共孵育组中，MRC-5靶细胞凋亡率显著高于对照组。可见，病毒感染的MRC-5靶细胞与CD3+T细胞共孵育可以显著提高病毒感染的MRC-5靶细胞的凋亡率，因此，本发明实施例提出，可以基于病毒感染的MRC-5靶细胞与CD3+T细胞共孵育之后病毒感染的MRC-5靶细胞的凋亡率对CD3+T细胞的抗病毒能力进行评估。
为了更进一步评估CD3+T细胞抗病毒的效果，本发明实施例中，利用了人巨细胞病毒检测试剂盒通过检测在有无CD3+T细胞共孵育状态下的AD169感染的MRC-5细胞的上清培养液中巨细胞病毒DNA拷贝数，如图2所示，图2示出了在有无CD3+T细胞共孵育状态下的AD169感染的MRC-5细胞的上清培养液中巨细胞病毒DNA拷贝数对比图，发现CD3+T细胞与AD169感染的MRC-5细胞共孵育5d后，效应细胞与靶细胞比例为10:1，相对空白组，能明显降低巨细胞病毒拷贝数。
因此，本发明实施例提出，可以基于病毒感染的MRC-5靶细胞与CD3+T细胞共孵育之后的巨细胞病毒拷贝数及靶细胞凋亡数对CD3+T细胞的抗病毒能力进行评估。
基于以上研究探索，本发明实施例提出发明构思：获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后、流式检测得到的靶细胞凋亡数；获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后定量检测得到的病毒拷贝数；根据所述靶细胞凋亡数和所述病毒拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力。
以上对本发明所提供的检测试剂的应用、CD3+T细胞抗感染能力评估方法及产品进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (10)
1.一种检测试剂的应用，其特征在于，应用于制备CD3+T细胞抗巨细胞病毒作用评估试剂，所述检测试剂包括：MRC-5细胞凋亡数检测试剂和AD169拷贝数检测试剂；
所述检测试剂用于在CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞共孵育之后、流式检测MRC-5细胞凋亡数；
所述检测试剂还用于在CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞共孵育之后定量检测AD169拷贝数；
根据所述MRC-5细胞凋亡数和AD169拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，根据所述MRC-5细胞凋亡数和AD169拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力，包括：
在MRC-5细凋亡率大于33.93%，以及AD169拷贝数大于等于400拷贝数/毫升的情况下，判断CD3+T细胞体外抗感染能力正常。
3.一种CD3+T细胞抗感染能力评估方法，其特征在于，所述方法包括：
获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后、流式检测得到的靶细胞凋亡数；
获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后定量检测得到的病毒拷贝数；
根据所述靶细胞凋亡数和所述病毒拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力。
4.根据权利要求3所述的CD3+T细胞抗感染能力评估方法，其特征在于，所述病毒为AD169，所述靶细胞为MRC-5细胞，根据所述靶细胞凋亡数和所述病毒拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力，包括：
在MRC-5细凋亡率大于33.93%，以及AD169拷贝数大于等于400拷贝数/毫升的情况下，判断CD3+T细胞体外抗感染能力正常。
5.一种CD3+T细胞抗感染能力评估系统，其特征在于，所述系统包括：
第一获取模块，用于获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后、流式检测得到的靶细胞凋亡数；
第二获取模块，用于获取在CD3+T细胞和感染病毒的靶细胞共孵育之后定量检测得到的病毒拷贝数；
评估模块，用于根据所述靶细胞凋亡数和所述病毒拷贝数评估CD3+T细胞体外抗感染能力。
6.根据权利要求5所述的系统，其特征在于，所述病毒为AD169，所述靶细胞为MRC-5细胞，所述评估模块，具体用于：
在MRC-5细凋亡率大于33.93%，以及AD169拷贝数大于等于400拷贝数/毫升的情况下，判断CD3+T细胞体外抗感染能力正常。
7.根据权利要求6所述的系统，其特征在于，所述MRC-5细胞的凋亡数是通过以下步骤检测得到的：
对MRC-5细胞进行消化，计数，种入T25培养瓶中，待生长密度至70%-80%之后，以MOI=2加入AD169病毒液，置于37℃培养箱中培养1小时，去除病毒液，加入10% FBS-DMEM完全培养基，继续培养24小时；
24小时后，去除培养基，使用37℃预热的0.05%trypsin，加1毫升至T25培养瓶中，轻柔摇晃使其覆盖培养瓶底部，置于37℃培养箱中放置2分钟；
消化完成后，向T25 培养瓶中加入2 毫升10% FBS-DMEM完全培养基终止消化；
设置离心机工作状态为1200rpm，5分钟，进行离心，去除上清，向T25培养瓶中加入1毫升PBS重悬细胞；
加入终浓度为5UM的CFSE置细胞悬液中，37℃孵育15分钟后，加入10%FBS-DMEM完全培养基，置于4度冰箱终止5分钟；
设置离心机工作状态为1200rpm，5分钟，进行离心，去除上清，加入10%FBS-DMEM完全培养基，将细胞重悬为密度1×106细胞/毫升浓度；
取流式分选纯化的CD3+T细胞，与AD169感染的MRC-5细胞共孵育24小时；
共孵育完成后，收集细胞至5毫升流式离心管中，进行离心，去除上清，保留细胞沉淀；
向离心管中加入7-ADD/annexinV凋亡指标，4度孵育15分钟后，流式检测靶细胞凋亡水平。
8.根据权利要求6所述的系统，其特征在于，所述AD169的拷贝数是通过以下步骤检测得到的：
对MRC-5细胞进行消化、计数，以1×105 细胞/孔种入24孔板中，培养24 小时待其贴壁；
以MOI=0.5加入AD169病毒液，置于37℃培养箱中培养1 小时，去除病毒液，加入10%FBS-DMEM完全培养基，继续培养24 小时；
将感染AD169病毒的MRC-5细胞上清去除，将分选纯化的CD3+T细胞和感染AD169的MRC-5细胞，以2×105 细胞/孔细胞/孔种入24孔板中，置于37℃培养箱中培养6天；
在第6天收集培养上清，使用AD169核酸检测试剂盒和ABI Prism 7300 qPCR 仪器定量检测AD169拷贝数。
9.一种电子设备，包括存储器、处理器及存储在存储器上并可在处理器上运行的计算机程序，其特征在于，所述处理器执行所述计算机程序时实现权利要求3-4任一项所述的CD3+T细胞抗感染能力评估方法的步骤。
10.一种计算机可读存储介质，其上存储有计算机程序，其特征在于，该计算机程序被处理器执行时实现权利要求3-4任一项所述的CD3+T细胞抗感染能力评估方法的步骤。
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