CN116615457A - 结合il1rap的抗体及其用途 - Google Patents

结合il1rap的抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN116615457A
CN116615457A CN202180076324.1A CN202180076324A CN116615457A CN 116615457 A CN116615457 A CN 116615457A CN 202180076324 A CN202180076324 A CN 202180076324A CN 116615457 A CN116615457 A CN 116615457A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
1rap
human
val
ser
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180076324.1A
Other languages
English (en)
Inventor
J·马科恩
A·库若赛特
J·罗友
T·蒙尼
L·恩博
M-A·杜西
V·拉班卡
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ikonos Science
Original Assignee
Ikonos Science
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ikonos Science filed Critical Ikonos Science
Priority claimed from PCT/EP2021/075235 external-priority patent/WO2022053715A1/en
Publication of CN116615457A publication Critical patent/CN116615457A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及特异性结合人IL1RAP并且还可以结合食蟹猴和/或小鼠IL1RAP的抗体。本发明还涉及此类抗体诊断和治疗人类疾病的用途。

Description

结合IL1RAP的抗体及其用途
本发明涉及特异性结合人IL1RAP的抗体和衍生物。本发明还涉及此类抗体诊断和治疗人类疾病的用途。
背景技术
白介素-1受体辅助蛋白(IL1RAP或IL1-Rap)是白介素1受体复合物的组分，其启动导致白介素1反应性基因活化的信号传导事件。该基因的选择性剪接导致膜结合同种型和可溶性同种型的C-末端不同。可溶性形式与膜结合形式的比率在急性期诱导或应激期间增加。
细胞因子配体和受体的白介素-1(IL-1)家族与炎症、自身免疫、免疫调节、细胞增殖和宿主防御相关，并且促成炎性、自身免疫、免疫调节、退行性和细胞增殖性(例如，癌症)疾病和病症的病理学，并且其细胞因子和受体充当此类疾病和病症的致病介质。参见例如Garlanda等人，Immunity,39:1003-1018(2013)。
细胞因子的IL-1家族包括白介素-1α、白介素-1β、白介素-33、白介素36α、白介素-36β和白介素-36γ。这些细胞因子中的每一种都充当能够结合在某些细胞表面上表达的特异性IL-1家族细胞膜受体的配体。在IL-1家族细胞因子与其同源受体结合后，共受体被募集以形成包含细胞因子、其同源膜受体及其共受体的三元复合物。所产生的复合物促进细胞内信号转导和一组转录因子(包括NF-κB和AP-1以及促分裂原活化的蛋白激酶)的活化，其触发炎症和免疫反应的级联，包括多种细胞因子、趋化因子、酶和粘附分子的产生。
IL1RAP作为IL-1家族中几种受体的共同细胞膜共受体，包括白介素-1受体1、ST2(也称为白介素-1受体样1和白介素-1受体样2(IL1RL2))。IL1RAP是由上述IL-1家族细胞因子、细胞因子的特异性同源受体和IL1RAP共受体中的一种形成的三元信号复合物的必要组分。因此，IL1RAP在IL-1家族信号转导途径中起重要作用，因为需要它来促进由IL-1家族细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和IL-36γ刺激的特定下游信号传导途径。
WO2012098407A1涉及包含对IL1RAP具有特异性的结合部分(诸如抗体)的药剂，其用于诱导细胞死亡和/或抑制与表达IL1RAP的实体瘤相关的细胞的生长和/或增殖。WO2012098407A1公开了针对人IL1RAP的小鼠IgG2a单克隆抗体“mAb 81.2”，其当在体内施用时导致黑素瘤小鼠模型中肿瘤生长的统计学显著延迟。
WO2015132602A1涉及对人IL1RAP具有特异性的抗体及其用于治疗实体瘤的用途。WO2015132602A1公开了特异性小鼠来源的抗体“CAN04”，其以200pM的KD特异性结合人IL1RAP的结构域2，与食蟹猴IL1RAP交叉反应，能够在一种或多种癌细胞系(诸如CML)中诱导ADCC，并且对IL-lα、IL-1β和IL-33刺激的信号传导具有一些抑制作用。
WO2016020502A1公开了两种特异性小鼠来源的抗体“CAN01”和“CAN03”，它们分别以1.4nM和0.9nM的KD特异性结合人IL1RAP的结构域3，与食蟹猴IL1RAP交叉反应，并且能够在一种或多种癌细胞系(诸如CML)中诱导ADCC。CAN03被确定对IL-1α、IL-1β和IL-33刺激的信号传导具有一些抑制作用，而CAN01被发现对IL-lα、IL-1β和IL-33信号传导缺乏明显的抑制作用。
WO2016207304A1涉及特异性结合人IL-1RAcP并且对由IL-1α、IL-1β、IL-33和/或IL-36β刺激的NFkB活性具有一些抑制作用的兔来源的抗体。
WO2017191325A9涉及特异性结合人IL-1R3并且对由IL-1α、IL-1β、IL-33和/或IL-36β刺激的NFkB活性具有一些抑制作用的人源化IgG1抗体。
WO2020037154A1涉及特异性结合人IL-1Rap并且在有限的体外模型中具有一些抑制作用的人源化抗体。
仍然需要治疗、改善或预防与通过细胞因子配体和受体的IL-1家族的不适当信号传导相关的炎性、自身免疫性、免疫调节性、退行性和细胞增殖性疾病或病症的疗法。
发明内容
本公开提供了以高亲和力特异性结合人IL1RAP的抗体。所述抗体能够减少、抑制和/或完全阻断IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导途径，包括通过结合以下激动剂中的一种或多种而刺激的信号传导：IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和IL-36γ。本公开还提供了治疗对抑制IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导有响应的疾病和病症的方法。
自身免疫性疾病通常具有多种原因，并且可能由几种信号传导途径的不适当相互作用引起。因此，本发明涉及抑制所有三种IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导途径的抗IL1RAP抗体。
根据要求保护的本发明的抗体引起对由例如成纤维细胞和PBMC上IL1RAP介导的所有三种细胞因子信号传导途径的阻断。
通过阻断所有三种途径，这消除了包括IL1R、IL33R和IL36R的IL1促炎细胞因子家族的多种疾病驱动因素，从而将ISB 880与单一细胞因子阻断疗法或不拮抗所有三种信号传导途径的早期抗IL1RAP抗体区分开。
在一些实施方案中，本公开提供了一种抗IL1RAP抗体，该抗IL1RAP抗体包含选自下组的第一重链CDR区(CDR-H1)、第二重链CDR区(CDR-H2)和第三重链CDR区(CDR-H3)；
(a)CDR-H1包含氨基酸序列GFXXXXXXXX(SEQ ID NO:265)，其中位置3处的X能够是氨基酸I、T、P中的任一个；位置4处的X能够是氨基酸L、F、Y中的任一个；位置5处的X能够是氨基酸A、S、P、E、D中的任一个；位置6处的X能够是氨基酸V、G、T、H、Q、E、N、D中的任一个；位置7处的X能够是氨基酸F、A、S、Y中的任一个；位置8处的X能够是氨基酸A、G、S、P中的任一个；位置9处的X能够是氨基酸E、M、A中的任一个；位置10处的X能够是氨基酸G、T、S、N中的任一个；
(b)CDR-H2包含氨基酸序列AISYDGEGTL(SEQ ID NO:266)；
(c)CDR-H3包含氨基酸序列ARFXYXXAFDY(SEQ ID NO:267)，其中位置4处的X能够是氨基酸R、H中的任一个；位置6处的X能够是氨基酸Y、R中的任一个；位置7处的X能够是氨基酸T、S中的任一个；
或
(d)CDR-H1包含氨基酸序列GXXXXXXAIX(SEQ ID NO:262)，其中位置2处的X能够是氨基酸V、G、S、P、E中的任一个；位置3处的X能够是I、E、A、G、T、S、P、H、K、R中的任一个；位置4处的X能够是E、F、A、S、W、H、N、R中的任一个；位置5处的X能够是G、T、S、Y、P、H、E、N、R中的任一个；位置6处的X是氨基酸V、A、S、P、Q、N、D中的任一个；位置7处的X是氨基酸Y、H中的任一个；位置10处的X是氨基酸H、Q中的任一个；
(e)CDR-H2包含氨基酸序列YIIPXXGXXD(SEQ ID NO:263)，其中位置5处的X能够是氨基酸T、S中的任一个；位置6处的X能够是氨基酸V、L中的任一个；位置8处的X能够是氨基酸G、Q中的任一个；位置9处的X能够是氨基酸F、Y中的任一个；
(f)CDR-H3包含氨基酸序列ARGQTEYXXGRQFDI(SEQ ID NO:264)，位置8处的X能够是氨基酸A、E、D中的任一个。位置9处的X能够是氨基酸A、T、S中的任一个；并且
其中所述抗IL1RAP抗体含有包含SEQ ID NO:268的轻链可变区。
在一些实施方案中，本公开提供了一种抗IL1RAP抗体，该抗IL1RAP抗体包含(i)第一重链CDR区(CDR-H1)、第二重链CDR区(CDR-L2)和第三重链CDR区(CDR-L3)，其中：(a)CDR-H1包含选自SEQ ID NO:81-140的氨基酸序列；(b)CDR-H2包含选自SEQ ID NO:141-200的氨基酸序列；(c)CDR-H3包含选自SEQ ID NO:201-260的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体包含与选自SEQ ID NO:8-51、60-70的序列具有至少90％同一性的重链可变结构域(VH)氨基酸序列。
本发明涉及一种包含重链CDR SEQ ID NO:128、188和248的抗IL1RAP抗体。
在本公开提供的抗IL1RAP抗体的各种实施方案中，抗体的特征在于以下性质中的一种或多种：
(a)该抗体以1×10-8M或更小、1×10-9M或更小、1×10-10M或更小或者者1×10-11M或更小的结合亲和力结合人IL1RAP；任选地，其中所述结合亲和力通过对SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6的IL1RAP多肽的平衡解离常数(KD)来测量；
(b)该抗体使IL-1刺激的信号、IL-33刺激的信号和/或IL-36刺激的信号降低至少90％、至少95％、至少99％或100％；任选地，其中信号的降低通过基于细胞的阻断测定法来测量；任选地，其中IL-1、IL-33和/或IL-36刺激的信号由选自IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和IL-36γ的激动剂刺激。
(c)该抗体使由IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和IL-36γ激动剂中一种或多种结合其同源受体引发的细胞内信号降低至少90％、至少95％、至少99％或100％；任选地，其中细胞内信号的降低通过基于细胞的阻断测定法来测量；
(d)该抗体抑制IL-1α、IL-1β和/或IL-36β刺激的IL8从原代HaCaT角质细胞系的释放；
(e)该抗体抑制IL-1β刺激的IL8从原代人单核细胞的释放；
(f)该抗体抑制IL-33刺激的INF-γ从原代人单核细胞的释放；
(g)在用IL-1β和IL-36γ刺激后与HaCaT条件培养基温育后，该抗体抑制嗜中性粒细胞活化；
(h)该抗体结合人IL1RAP的结构域2内的氨基酸残基；
(i)该抗体与SEQ ID NO:7的食蟹猴IL1RAP多肽交叉反应；和/或
(j)该抗体与SEQ ID NO:261的小鼠IL1RAP多肽交叉反应。
本公开还提供了抗IL1RAP抗体的实施方案，其中：(i)该抗体是单克隆抗体；(ii)该抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体；(iii)该抗体是IgG类的全长抗体，任选地，其中该IgG类抗体具有选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的同种型；(iv)该抗体是Fc区变体，任选地改变效应子功能的Fc区变体(例如，导致效应子功能增加或降低的变体)，表现出降低的CDC活性、ADCC活性和/或ADCP活性的Fc区变体，表现出对人单核细胞、嗜中性粒细胞和/或Jurkat细胞降低的细胞毒活性的Fc区变体，或改变抗体半衰期的Fc区变体；(v)该抗体是抗体片段，任选地选自由F(ab')2、Fab'、Fab、Fv、单结构域抗体(VHH)和scFv组成的组；(vi)该抗体是免疫缀合物，任选地，其中该免疫缀合物包含用于治疗IL1RAP介导的疾病或病症的治疗剂；(vii)该抗体是多特异性抗体，任选地双特异性抗体；并且(viii)该抗体是合成抗体，其中CDR被移植到除免疫球蛋白支架或框架之外的支架或框架上；任选地，选自替代蛋白质支架和人造聚合物支架的支架。
在其他实施方案中，本公开提供了编码本文公开的抗IL1RAP抗体的分离的核酸。
在一些实施方案中，本公开还提供了一种包含编码如本文所公开的抗IL1RAP抗体的核酸的宿主细胞。
本公开还提供了一种产生抗IL1RAP抗体的方法，其中该方法包括培养包含编码抗IL1RAP抗体的核酸(或载体)的宿主细胞，从而产生抗体。
在一些实施方案中，本公开提供了一种包含如本文所公开的抗IL1RAP抗体和药学上可接受的载剂的药物组合物。在一些实施方案中，该药物组合物还包含用于治疗IL-1、IL-33、IL-36和/或IL1RAP介导的疾病或病症的治疗剂；任选地，其中该治疗剂是化疗剂。
本公开还提供了一种治疗受试者中IL1RAP介导的疾病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的如本文所公开的抗IL1RAP抗体或治疗有效量的如本文所公开的抗IL1RAP抗体的药物制剂。
本公开还提供了一种治疗受试者中由IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导介导的疾病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的如本文所公开的抗IL1RAP抗体或治疗有效量的如本文所公开的抗IL1RAP抗体的药物组合物。
本公开还提供了一种治疗受试者中由IL-1α、IL-1β、IL-33、IL36α、IL-36β和/或IL-36γ刺激的信号传导介导的疾病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的如本文所公开的抗IL1RAP抗体或治疗有效量的如本文所公开的抗IL1RAP抗体的药物组合物。
在本文公开的治疗方法的各种实施方案中，IL1RAP介导的疾病和病症或由IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导介导的疾病包括炎性疾病、自身免疫性疾病、自身炎性疾病、呼吸疾病、代谢病症、感染和癌症。在一些实施方案中，IL1RAP介导的疾病和病症可以选自：痤疮、胰腺炎、年龄相关性黄斑变性(AMD)、气道高反应性、气道炎症、过敏性结膜炎、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、过敏性鼻炎、变态反应、阿尔茨海默氏病/痴呆、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、嗜中性皮肤病、化脓性汗腺炎、鱼鳞癣、过敏性反应、关节炎、哮喘/特应性/鼻息肉、动脉粥样硬化、特应性皮炎、自身免疫性/自身炎性血管炎(包括但不限于巨细胞动脉炎、多发性大动脉炎、川崎病)、白塞氏病(包括神经白塞氏病)、骨癌、脑癌、乳腺癌、恶病质/厌食症、软骨炎症、脑缺血、慢性疲劳综合征、慢性阻塞性肺病、梭菌相关疾病、结肠癌、充血性心力衰竭、结膜炎、冠状动脉炎症、冠状动脉再狭窄、糖尿病、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜病、干眼病、子宫内膜异位症、嗜酸性粒细胞性相关胃肠道疾病、嗜酸性粒细胞性食管炎、家族性寒冷性自身炎症综合征、家族性地中海热、纤维肌痛、纤维化疾病、食物过敏、全身性脓疱性银屑病、青光眼、肾小球肾炎、痛风性关节炎、移植物抗宿主病、蠕虫感染、失血性休克、化脓性汗腺炎、痛觉过敏、高-IgD综合征、高尿酸血症、特发性肺纤维化(IPF)、癌症相关疼痛、感染、炎性肠病(IBD，包括但不限于溃疡性结肠炎和克罗恩病)、劳损引起的炎性病症、与角膜移植相关的炎性眼病、炎性疼痛、流感相关后遗症、肠癌、局部缺血、幼年型关节炎、川崎病、肾癌、莱伯氏先天性黑蒙、肝癌、肝病、肺癌、巨噬细胞活化综合征(MAS)、黄斑变性、穆-韦二氏综合征、多发性骨髓瘤、多发性硬化症、肌肉骨骼疼痛、骨髓性和其他白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)、心肌功能障碍、肌病、鼻息肉、新生儿发病多系统炎性疾病、神经毒性、嗜中性粒皮肤病(包括掌跖脓疱病、坏疽性脓皮病、银屑病、斯威特综合征、非感染性结膜炎、非感染性葡萄膜炎、非小细胞肺癌、骨科手术、骨关节炎、骨质疏松、疼痛、胰腺癌、帕金森氏病、牙周病、外周血管病、风湿性多肌痛、息肉状脉络膜血管病(PCV)、先兆子痫或子痫、早产、前列腺癌、原虫感染、银屑病、银屑病关节炎、坏疽性脓皮病、系统性硬化症、再灌注损伤、呼吸道合胞病毒(RSV)、特别是在血管成形术和支架术后的再狭窄、视网膜脱离、色素性视网膜炎、早产儿视网膜病变(ROP)、类风湿性关节炎、脓毒性休克、镰状细胞性贫血、放射治疗的副作用、SAPHO(滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨炎)综合征、鼻窦炎、皮肤癌、睡眠障碍、由扭伤引起的炎症、斯蒂尔病、胃癌、系统性红斑狼疮(包括狼疮性肾炎)、颞下颌关节病、TNF受体相关周期性综合征及其他遗传性发热综合征、移植排斥、外伤、外伤性眼部损伤、2型糖尿病和白癜风。
在一些实施方案中，本公开还提供了一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文所公开的抗IL1RAP抗体的抗体，或治疗有效量的如本文所公开的抗IL1RAP抗体的药物制剂。在实施方案中，癌症选自乳腺癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、胰腺癌。
在一些实施方案中，本公开还提供了一种用于检测生物样品中IL1RAP的水平的方法，包括使样品与如本文所公开的抗IL1RAP抗体接触的步骤。本公开的抗IL1RAP抗体可用于任何已知的测定方法，诸如竞争性结合测定法、直接和间接夹心测定法、免疫沉淀测定法和酶联免疫吸附测定法(EEISA)(参见Sola,1987,Monoclonal Antibodies:A Manual ofTechniques，第147-158页，CRC Press,Inc.)，用于IL1RAP的检测和定量。所述抗体以适用于多种测定法的高亲和力结合人IL1RAP多肽(SEQ ID NO:1或6)。
附图说明
图1.通过表面等离子体共振评估的抗IL-1RAP-C8 Fab和抗IL-1RAP-C3Fab与人IL-1RAP结合后人IL-1RAP/IL-1R1/IL-1β共受体/受体/细胞因子复合物形成的阻断。将重组人IL-1RAP Fc融合蛋白固定在与抗人IgG Fc偶联的Series S CM5传感器芯片上。将Fab片段以300nM注射在HBS-EP+缓冲液中以达到固定化人IL-1RAP的饱和，随后第二次注射50nM的IL-1R1、100nM的IL-1β和300nM的Fab片段在HBS-EP+缓冲液中的预混合溶液。使用抗IL-1RAP-E1 Fab作为非阻断剂对照。图中示出了表示为共振单位数(缩写为RU；Y轴)对时间(X轴)的数据。用饱和Fab克隆名称标记曲线。
图2.使用表面等离子体共振将抗IL-1RAP-C8克隆和抗IL-1RAP-C3克隆对人-鸡IL-1RAP嵌合体的结构域作图。将抗IL-1RAP-C8 IgG1 LALA(A)或抗IL-1RAP-C3 IgG1 LALA(B)固定在与抗人IgG Fc偶联的Series S CM5传感器芯片上。将人-鸡IL-1RAP嵌合体以50nM注射到固定化抗IL-1RAP IgG1 LALA的HBS-EP+缓冲液中，然后在HBS-EP+缓冲液中解离，“hs”代表人结构域，“gg”代表鸡结构域。然后通过它们各自的人或鸡结构域以连续顺序描述人-鸡嵌合体，例如hs-gg-gg IL-1RAP代表具有人结构域1、鸡结构域2和鸡结构域3的IL-1RAP。图中示出了表示为共振单位数(缩写为RU；Y轴)对时间(X轴)的数据。
图3.使用Octet Biolayer干涉测量法将抗IL-1RAP-C8克隆和抗IL-1RAP-C3克隆表位分箱为人IL-1RAP。将生物素化人IL-1RAP-avi-his蛋白加载到链霉亲和素SA生物传感器上。将抗IL-1RAP-C8 Fab以200nM注射到固定化人IL-1RAP的动力学缓冲液中以达到表面的饱和。然后，将200nM最终浓度的抗IL-1RAP-C3 Fab和抗IL-1RAP-C8 Fab的预混合溶液分别注射到饱和表面上。使用抗IL-1RAP-El Fab代替抗IL-1RAP-C3 Fab进行相同的实验程序，作为非竞争性对照。图中示出了作为波长偏移(以nm计；Y轴)对时间(X轴)的关系的与传感器尖端的结合。用竞争Fab克隆名称标记曲线。
图4.抗IL-1RAP-C8-RecC-ES IgG1 LALA对人和食蟹猴IL-1RAP的表面等离子体共振测量。将抗IL-1RAP-C8-RecC-ES IgG1 LALA固定在与抗人IgG Fc偶联的Series S CM5传感器芯片上。将人IL-1RAP-avi-his或食蟹猴IL-1RAP-avi-his以系列浓度注射到固定化IgG1 LALA的HBS-EP+缓冲液中。呈现了(A)人IL-1RAP和(B)食蟹猴IL-1RAP的一个代表性重复。图中示出了表示为共振单位数(缩写为RU；Y轴)对时间(s，X轴)的数据。虚线表示测量数据，而实线表示模拟拟合。KD：平衡解离常数；Ka：缔合常数；Kd：解离常数。
图5.抗IL-1RAP-C3-A3小鼠IgG2a LALA对小鼠IL-1RAP的表面等离子体共振测量。将抗IL-1RAP-C3-A3小鼠IgG2a LALA固定在与抗小鼠IgG Fc偶联的Series S CM5传感器芯片上。将小鼠IL-1RAP-his以系列浓度注射到固定化IgG2a LALA的HBS-EP+缓冲液中。呈现了一个代表性重复。图中示出了表示为共振单位数(缩写为RU；Y轴)对时间(s，X轴)的数据。虚线表示测量数据，而实线表示模拟拟合。KD：平衡解离常数；Ka：缔合常数；Kd：解离常数。
图6.抗人IL-1RAP_候选物_1特异性结合人和食蟹猴IL-1RAP。将抗人IL-1RAP_候选物_1(·)或同种型对照_3(■)的剂量反应与各种细胞系和细胞类型一起温育。用单克隆抗人IgG PE-花青7二抗检测结合的抗体。该图示出了每种细胞系的非线性S形回归结合曲线(相对几何平均荧光强度)。每个数据点是给定细胞系的测量值。对几个供体进行多个独立实验(HaCaT和HaCaT IL-1RAP KO：4个和3个独立实验；人真皮成纤维细胞：2个独立实验-总共5个供体；人嗜中性粒细胞：2个实验-总共6个供体；食蟹猴真皮成纤维细胞：2个独立实验-总共4个供体)。
图7.抗人IL-1RAP_候选物_1在HaCaT刺激测定中抑制IL-1和IL-36诱导的细胞因子释放。通过刺激的HaCaT野生型细胞系将抗人IL-1RAP_候选物_1(·)或同种型对照_3(■)的剂量反应与IL-1β或IL-3一起温育。该图示出了每种刺激物(IL-1β或IL-36γ)的非线性S形回归抑制曲线。每个数据点是独立实验的测量值。进行两个独立的实验。
图8.抗人IL-1RAP_候选物_1在人外周血单核细胞(PBMC)刺激测定中抑制IL-33诱导的细胞因子释放。将抗人IL-1RAP_候选物_1(·)或对照同种型_3(■)的剂量反应与IL-1β或IL-12+IL-33刺激的hPBMC一起温育。该图示出了每种刺激物(IL-1β或IL-12+IL-33)的非线性S形回归抑制重叠曲线。每条曲线代表3个供体的重叠。进行两个独立的实验。
图9.抗人IL-1RAP_候选物_1在组合细胞因子刺激后在全血再刺激测定中抑制细胞因子释放。将抗人IL-1RAP_候选物_1(·)或同种型对照_3(■)与IL-1α、IL-1β、IL-12、IL-33、IL-36α、IL-36β和IL-36γ的组合在人全血液中一起温育。该图示出了组合对细胞因子和趋化因子释放的影响以及抗人IL-1RAP_候选物_1对可溶性标志物释放(A、B、C)和归一化抑制数据(D)的每个读出的影响。每个点是一个供体的测量值。进行八个独立的实验。NS表示不显著；*表示0,01<p<0,05；**表示0,001<p<0,01；*表示p<0,001
图10.抗人IL-1RAP_候选物_1在用IL-1β和IL-36γ刺激后与HaCaT条件培养基一起温育后抑制嗜中性粒细胞活化。通过刺激的HaCaT野生型细胞系将抗人IL-1RAP_候选物_1(·)或同种型对照_3(■)与IL-1β和IL-3一起温育。在刺激后24小时收集条件培养基并与新鲜分离的嗜中性粒细胞一起温育。该图示出了抗人IL-1RAP_候选物_1对活化嗜中性粒细胞百分比的影响。每个点是一个供体的测量值。用总共9个供体进行三个独立的实验。NS表示不显著；*表示0,01<p<0,05；**表示0,001<p<0,01；*表示p<0,001
图11.抗小鼠IL-1RAP_候选物_1特异性结合小鼠IL-1RAP。将抗人IL-1RAP_候选物_1(·)或对照同种型_3(■)的剂量反应与各种细胞系和细胞类型一起温育。用单克隆抗人IgG PE-花青7二抗检测结合的抗体。该图示出了每种细胞系的非线性S形回归结合曲线(相对几何平均荧光强度)。每个数据点是给定细胞系的测量值。对几个供体进行多个独立实验(HaCaT和HaCaT IL-1RAP KO：4个和3个独立实验；人真皮成纤维细胞：2个独立实验-总共5个供体；人嗜中性粒细胞：2个实验-总共6个供体；食蟹猴真皮成纤维细胞：2个独立实验-总共4个供体)。
图12.抗小鼠IL-1RAP_候选物_1在NIH-3T3刺激测定中抑制IL-33和IL-36诱导的细胞因子释放。将小鼠IL-1RAP_候选物_1(·)或对照同种型_2(■)的剂量反应与mIL-1β、hIL-33或mIL-36s刺激的NIH-3T3一起温育。该图示出了每种刺激物的非线性S形回归抑制曲线。每个数据点表示一个测量值。
图13.抗小鼠IL-1RAP_候选物_1抑制白介素注射后24小时小鼠血清中的IL-5释放。在第0天对C57BL/6JRj小鼠腹膜内注射不同的治疗。治疗注射后两小时，对小鼠腹膜内注射白介素(小鼠IL-1β、人IL-33和小鼠IL36α、β和γ)的混合物。第一次注射治疗后24小时，将小鼠安乐死。收集小鼠血清用于Luminex分析。IL-5释放的定量。来自Bely_4研究的数据。
图14.抗小鼠IL-1RAP_候选物_1抑制白介素注射后72小时小鼠血清中的IL-5释放。在第0天、第1天和第2天对C57BL/6JRj小鼠进行不同治疗的腹膜内注射。治疗注射后两小时，对小鼠腹膜内注射白介素(小鼠IL-1β、人IL-33和小鼠IL36α、β和γ)的混合物。第一次注射治疗后72小时，将小鼠安乐死。收集小鼠血清用于Luminex分析。IL-5释放的定量。
来自Bely_5研究的数据。
图15.抗小鼠IL-1RAP_候选物_1抑制白介素注射后72小时小鼠血清中的Gro-α释放。在第0天、第1天和第2天对C57BL/6JRj小鼠进行不同治疗的腹膜内注射。治疗注射后两小时，对小鼠腹膜内注射白介素(小鼠IL-1β、人IL-33和小鼠IL36α、β和γ)的混合物。第一次注射治疗后72小时，将小鼠安乐死。收集小鼠血清用于Luminex分析。Gro-α释放的定量。来自Bely_5研究的数据。
图16.抗小鼠IL-1RAP_候选物_1在银屑病样皮肤炎症模型中诱导鳞屑和病变评分的显著降低。剃毛小鼠的背部和双耳每天接受5％IMQ乳膏()的局部施用，连续7-14天给药IMQ。IMQ治疗的皮肤区域用TegadermTM无菌不透明敷料覆盖，作为保护局部施用的手段。除了每天通过腹膜内途径注射的阿那白滞素之外，所有分子通过腹膜内途径每三天一次对小鼠施用治疗。每天对小鼠进行身体检查，并如下应用PASI(银屑病面积和严重性指数)评分：红斑(皮肤刺激/变红)和焦痂(结痂)形成(1-4分)/鳞屑和病变严重性等级(1-4分)。来自IMQ_s2研究的数据。
图17.抗小鼠IL-1RAP_候选物_1抑制银屑病样皮肤炎症小鼠模型中的嗜中性粒细胞浸润。剃毛小鼠的背部和双耳每天接受5％IMQ乳膏()的局部施用，连续十二天给药IMQ。IMQ治疗的皮肤区域用TegadermTM无菌不透明敷料覆盖，作为保护局部施用的手段。除了每天通过腹膜内途径注射的阿那白滞素之外，所有分子通过腹膜内途径每三天一次对小鼠施用治疗。每天对小鼠进行身体检查，并如下应用PASI(银屑病面积和严重性指数)评分：红斑(皮肤刺激/变红)和焦痂(结痂)形成(1-4分)/鳞屑和病变严重性等级(1-4分)。在研究结束时，对背部皮肤进行IHC。对每只小鼠每张载玻片4个皮肤样品/每张载玻片10张照片进行棘皮症定量。来自IMQ_s2研究的数据。
图18.在小鼠背部皮肤上拍摄的组织学照片。用咪喹莫特和PBS(A)、同种型对照3(B)、1mg的抗小鼠IL-1RAP_候选物_1(C)、250ug的抗小鼠IL-1RAP候选物l(D)、阿那白滞素(E)、mIL36Ra(F)治疗小鼠或未治疗小鼠(G)。来自IMQ_s2研究的数据。
图19.(A)将抗人IL-1RAP_候选物_1(π)或最大剂量的同种型对照_4(■)的剂量-反应在人全血中与5ng/ml的IL-1α或5ng/ml的IL-1β一起温育。该图示出了抗人IL-1RAP_候选物_1对每个读出的抑制作用。每个点是示出与基线相比刺激指数优于3倍(SI>3)的供体的抑制百分比+/-置信区间的平均值。用总共15个测试供体进行三个独立的实验。(B)该表示出了所测试的15个供体中每个刺激和每个读数的图中所包括的反应者供体的数量(与基线相比SI>3)。
具体实施方式
本公开提供了以高亲和力特异性结合人IL1RAP的抗体，包括人源化抗体。所公开的抗IL1RAP抗体能够减少、抑制和/或完全阻断通过IL1RAP介导的途径(包括IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导途径)的细胞内信号传导。更具体地，本文公开的抗IL1RAP抗体能够减少、抑制和/或完全阻断通过结合以下激动剂中的一种或多种刺激的信号传导：IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和IL-36Γ。本公开还提供了抗IL1RAP抗体在治疗IL1RAP介导的疾病的方法中的用途，所述IL1RAP介导的疾病包括对抑制IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导有响应的疾病和病症，包括但不限于各种癌症(例如，乳腺癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、胰腺癌)以及炎性疾病、感染性疾病和自身免疫性疾病。
术语和技术的概述
对于本文的描述和所附的权利要求书，除非上下文清楚地另外指出，否则单数形式“一个”和“一种”包括复数指代物。因此，例如，提及“一种蛋白质”包括多于一种蛋白质，并且提及“一种化合物”是指多于一种化合物。“包含”和“包括”的使用是可互换的并且不旨在是限制性的。还应当理解，当对各种实施方案的描述中使用术语“包含”时，本领域技术人员将理解，在一些特定情况下，可以使用语言“基本上由……组成”或“由……组成”来替代地描述实施方案。
在提供数值范围的情况下，除非上下文另外清楚地指出，否则应当理解，该值的每个中间整数和该值的每个中间整数的每十分之一(除非上下文另外清楚地指出)、在该范围的上限与下限之间和在该规定范围中的任何其他规定或中间值都包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在较小范围内，并且也涵盖在本发明内，但须遵守规定范围内的任何明确排除的限制。当规定范围包括这些限值中的一个或两个时，不包括那些所包括的限制中的(i)任一个或(ii)两个的范围也包括在本发明中。例如，“1至50”包括“2至25”、“5至20”、“25至50”、“1至10”等。
通常，本文所用的术语和本文所述的技术和程序包括本领域普通技术人员熟知和常用的那些，诸如以下文献中描述的常用技术和方法：Sambrook等人，Molecular Cloning-A Laboratory Manual(第2版)，第1-3卷，Cold Spring Harbor Laboratory,Cold SpringHarbor,N.Y.,1989(以下简称“Sambrook”)；Current Protocols in Molecular Biology,F.M.Ausubel等人编辑，Current Protocols,a joint venture between GreenePublishing Associates,Inc.和John Wiley&Sons,Inc.(补充至2011年)(以下简称“Ausubel”)；Antibody Engineering，第1和2卷，R.Kontermann和S.Dubel编辑，Springer-Verlag,Berlin and Heidelberg(2010)；Monoclonal Antibodies:Methods andProtocols,V.Ossipow和N.Fischer编辑，第2版，Humana Press(2014)；TherapeuticAntibodies:From Bench to Clinic,Z.An编辑，J.Wiley&Sons,Hoboken,N.J.(2009)；以及Phage Display,Tim Clackson和Henry B.Lowman编辑，Oxford University Press,UnitedKingdom(2004)。
本公开中提及的所有出版物、专利、专利申请和其他文献据此出于所有目的全文以引用方式并入，其程度如同每个单独的出版物、专利、专利申请或其他文献单独指出以出于所有目的以引用方式并入本文。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。应当理解，本文所用的术语仅用于描述特定的实施方案，并不旨在是限制性的。出于解释本公开的目的，将应用术语的以下描述，并且在适当的情况下，以单数形式使用的术语也将包括复数形式，反之亦然。
如本文所用，“IL1RAP”是指白介素-1受体辅助蛋白，它是IL-1家族中几种受体的细胞膜共受体，包括白介素-1受体1(IL1R1)、ST2(也称为白介素-1受体样1或IL1RL1)和白介素-1受体样蛋白2(IL1RL2)。应当指出的是，白介素-1受体辅助蛋白或IL1RAP在本领域中有时称为“IL-1RAP”、“IL-1RAcP”、“IL1RAcP”或“IL-1R3”。术语“IL1RAP”、“IL-1Rap”和“IL1RAP蛋白”在本文中可互换使用。
如本文所用，“IL1RAP介导的病症”或“IL1RAP介导的疾病”涵盖与由IL-1细胞因子家族以及充当共受体的IL1RAP介导的信号传导途径的异常功能相关的任何医学病症，所述信号传导途径包括但不限于由IL-1家族细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和IL-36Γ刺激的下游信号传导途径。例如，IL1RAP介导的疾病可以包括但不限于由IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导途径的拮抗剂或抑制剂介导的和/或对其有反应的疾病，包括癌症、炎性、感染性和自身免疫性疾病。更具体地，IL1RAP介导的疾病可以包括但不限于痤疮、急性重度溃疡性结肠炎、成人发作型斯蒂尔氏病、过敏性鼻炎、痛风性关节炎、幼年型关节炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、系统性硬化症、关节炎疼痛、哮喘、动脉粥样硬化、特应性湿疹、白塞氏病、恶病质、乳腺癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、慢性阻塞性肺病、干眼综合征、家族性感冒自身炎性综合征、家族性地中海热、食物过敏、全身性脓疱性银屑病、化脓性汗腺炎、高-IgD综合征、高尿酸血症、穆-韦二氏综合征、新生儿发病多系统炎性疾病、肌肉骨骼疼痛、掌跖脓疱病、外周血管病、风湿性多肌痛、鼻息肉、银屑病、坏疸性脓皮病、再狭窄、镰状细胞性贫血、鼻窦炎、TNF受体相关周期性综合征、2型糖尿病和溃疡性结肠炎。
如本文所用，“IL-1刺激的信号”是指由IL-1细胞因子(诸如IL-1α或IL-1β)与其同源细胞表面受体IL1R1的结合而引发的细胞内信号。示例性IL-1刺激信号包括可使用基于细胞的阻断测定法测量的那些信号，如本文实施例中所公开的那些。
如本文所用，“IL-33刺激的信号”是指由IL-33细胞因子(诸如IL-33)与其同源细胞表面受体IL1RL1(也称为ST2)的结合而引发的细胞内信号。示例性IL-33刺激信号包括可使用基于细胞的阻断测定法测量的那些信号，如本文实施例中所公开的那些。
如本文所用，“IL-36刺激的信号”是指由IL-36细胞因子(诸如IL-36α、IL-36β或IL-36γ)与其同源细胞表面受体IL1RL2的结合而引发的细胞内信号。示例性IL-36刺激的信号包括通过替代的基于细胞的阻断测定法测量的那些，诸如本文实施例中公开的那些。
“基于细胞的阻断测定法”是指可以测量抗体抑制或降低其结合的抗原的生物活性的能力的测定法。例如，基于细胞的阻断测定法可用于测量抑制特定生物或生物化学功能(诸如经由IL-1、IL-33和IL-36信号传导途径的IL1RAP介导的细胞内信号传导)所需的抗体浓度。在一些实施方案中，使用基于细胞的阻断测定法测量抗体(例如，本公开的抗IL1RAP抗体)的半数最大抑制浓度(IC50)和/或90％抑制浓度(IC90)。在一些实施方案中，基于细胞的阻断测定法用于确定抗体是否阻断激动剂(例如，IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β、IL-36γ)及其同源受体之间的相互作用。可用于本公开的抗体的基于细胞的阻断测定法可以包括原代细胞测定法(例如，HaCaT细胞)以及报告或传感器细胞测定法。IL-1、IL-33和IL-36信号传导途径的示例性基于细胞的阻断测定法，如本文提供的实施例中所述的那些。
如本文所用，“抗体”是指包含一个或多个多肽链的分子，其特异性结合特定抗原或与特定抗原具有免疫反应性。本公开的示例性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、多特异性(或异源缀合)抗体(例如，双特异性抗体)、一价抗体(例如，单臂抗体)、多价抗体、抗原结合片段(例如，Fab'、F(ab')2、Fab、Fv、rIgG和scFv片段)、抗体融合物和合成抗体(或抗体模拟物)。
“抗IL1RAP抗体”或“结合IL1RAP的抗体”是指以足够的亲和力结合IL1RAP的抗体，使得该抗体可用作靶向IL1RAP的诊断和/或治疗剂。在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体与不相关的非IL1RAP抗原的结合程度小于该抗体与IL1RAP的结合的约10％，如例如通过放射免疫测定法(RIA)测量的。在一些实施方案中，结合IL1RAP的抗体具有<1pM、<100nM、<10nM、<1nM、<0.1nM、<0.01nM或<1pM(例如，10-8M或更小，例如，10-8M至10-13M，例如，10-9M至10-13M)的解离常数(KD)。
“全长抗体”、“完整抗体”或“全抗体”在本文中可互换地用于指具有基本上类似于天然抗体结构的结构或具有含有如本文所定义的Fc区的重链的抗体。
“抗体片段”是指全长抗体的一部分，其能够结合与全长抗体相同的抗原。抗体片段的示例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；一价或单臂抗体；单链抗体分子(例如，scFv)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
抗体的“类别”是指其重链所拥有的恒定结构域或恒定区的类型。有五个主要的抗体类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些抗体中的几种进一步分成亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和a。
“可变区”或“可变结构域”是指参与抗体与抗原结合的抗体重链或轻链的结构域。天然抗体的重链和轻链(分别为VH和VL)的可变结构域通常具有类似的结构，每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个高变区(CDR)(参见例如Kindt等人，Ruby Immunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91页)。单个VH或VL结构域可能足以赋予抗原结合的特异性。此外，可以使用结合抗原的抗体的VH或VL结构域分别筛选互补的VL或VH结构域的文库来分离结合特定抗原的抗体(参见例如Portolano等人，J.Immunol.,150:880-887(1993)；Clarkson等人，Nature,352:624-628(1991))。
如本文所用，“高变区”或“CDR”是指抗体可变结构域的序列高变和/或形成结构上限定的环(“高变环”)的每个区域。通常，天然抗体包含四条链，具有六个CDR；三个在重链可变结构域VH(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，而三个在轻链可变结构域VL(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。CDR通常包含来自高变环和/或来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基。除非另有说明，否则可变结构域中的CDR残基和其他残基(例如，FR残基)在本文中根据Rabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)进行编号。
如本文所用，“互补决定区”或“CDR”是指可变结构域的CDR内具有最高序列变异性和/或参与抗原识别的区域。通常，天然抗体包含四条链，具有六个CDR；三个在重链可变结构域VH(H1、H2、H3)，而三个在轻链可变结构域VL(LI、L2、L3)。示例性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)出现在氨基酸残基LI的24-34、L2的50-56、L3的89-97、H1的26-35或31-35、H2的50-65或50-65和H3的93-102或95-102处。(Rabat等人，同上)。已经提出了收集并比对免疫球蛋白超家族的不同成员的序列的Rabat等人(同上)的替代方法，诸如Chothia等人(Chothia-J Mol Biol.1987年8月20日；196(4):901-17和Nature.1989年12月21-28日；342(6252):877-83.)和Lefranc等人(IMGT-Nucleic Acids Res.1999年1月1日；27(1):209-12.)，他们提出了免疫球蛋白可变结构域种系序列的统一编号方案。本发明涵盖所有这样的替代定义，并且本说明书中提供的序列并不旨在排除替代定义的CDR序列，所述替代定义的CDR序列可仅包含序列表中提供的CDR序列的一部分。具体地，根据Chothia等人的CDR序列出现在氨基酸残基H1的26-31、H2的52-65和H3的95-102处；
具体地，根据LeFranc等人的CDR序列出现在氨基酸残基H1的27-38、H2的56-65和H3的105-117处。
“框架”或“FR”是指除高变区(CDR)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，CDR和FR序列通常以以下序列出现在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
“天然抗体”指天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由二硫键连接的两条相同的轻链和两条相同的重链组成。从N-末端到C-末端，每条重链具有可变区(VH)，也称为可变重链结构域或重链可变结构域，随后是三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N-末端到C-末端，每条轻链具有可变区(VL)，也称为可变轻链结构域或轻链可变结构域，随后是恒定轻链(CL)结构域。抗体的轻链可分为两种类型中的一种，称为κ(K)和λ(A)，基于其恒定结构域的氨基酸序列。
如本文所用，“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即，构成该群体的各个抗体是相同的和/或结合相同的表位，除了可能的变体抗体(例如，变体抗体含有天然发生的或在单克隆抗体生产过程中出现的突变，并且通常以少量存在)。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。因此，术语“单克隆”表示从基本上同质的抗体群体获得的抗体的特征，并且不应被解释为需要通过任何特定方法生产抗体。例如，待使用的单克隆抗体可通过多种技术制备，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和利用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，这些方法和用于制备单克隆抗体的其他示例性方法在本文中进行了描述。
“嵌合抗体”是指其中重链和/或轻链的一部分来源于特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分来源于不同来源或物种的抗体。
“人源化抗体”是指包含来自非人CDR的氨基酸序列和来自人FR的氨基酸序列的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体将包含基本上全部的至少一个且通常两个可变结构域，其中全部或基本上全部的CDR(例如，CDR)对应于非人抗体的那些，并且全部或基本上全部的FR对应于人抗体的那些。人源化抗体任选地可以包含来源于人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体(例如，非人抗体)的“人源化形式”是指已经历人源化的抗体。
“人抗体”是指具有与由人或人细胞产生的或来源于利用人抗体库或其他人抗体编码序列的非人来源的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的这种定义特别排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
“人共有框架”是代表在人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常出现的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组是如Rabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，NIH Publication 91-3242,BethesdaMd.(1991)，第1-3卷中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，亚组是如Rabat等人(同上)中的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，亚组是如Rabat等人(同上)中的亚组III。
如本文所用，“受体人框架”是包含来源于人免疫球蛋白框架或人共有框架的轻链可变结构域(VL)框架或重链可变结构域(VH)框架的氨基酸序列的框架。“来源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可以包含其相同的氨基酸序列，或其可以含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数目为10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少或2或更少。在一些实施方案中，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
“Fc区”是指包含免疫球蛋白重链的C-末端多肽序列的二聚体复合物，其中C-末端多肽序列是可通过木瓜蛋白酶消化完整抗体获得的序列。Fc区可以包含天然或变体Fc序列。尽管免疫球蛋白重链的Fc序列的边界可以变化，但人IgG重链Fc序列通常被定义为从约位置Cys226或约位置Pro230处的氨基酸残基延伸至Lys447处的Fc序列的羧基末端。然而，由于在用于重组生产(例如，在CHO细胞中生产)的细胞培养系统中可能发生的酶促切割，Fc序列的C-末端赖氨酸(Lys447)可能存在或不存在于重组抗体的Fc区中。免疫球蛋白的Fc序列通常包含两个恒定结构域，CH2结构域和CH3结构域，并且任选地包含CH4结构域。
“Fc受体”或“FcR”是指结合抗体的Fc区的受体。在一些实施方案中，FcR是天然人FcR。在一些实施方案中，FcR是结合IgG抗体(γ受体)的FcR，并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和选择性剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，不同之处主要在于它们的胞质结构域。活化受体FcγRIIA在其胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见例如Daeron,Annu.Rev.Immunol.,15:203-234(1997))。如本文所用，FcR还包括新生儿受体FcRn，其负责将亲本IgG转移至胎儿(Guyer等人，J.Immunol.,1 17:587(1976)和Kim等人，Eur.J.Immunol.,24:2429-2434(1994))和调节免疫球蛋白的稳态。FcR例如在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol,9:457-92(1991)；Capel等人，Immunomethods4:25-34(1994)和de Haas等人，J.Lab.Clin.Med.,126:330-41(1995)中进行了综述。
如本文所用，“多价抗体”是包含三个或更多个抗原结合位点的抗体。多价抗体优选被工程化以具有三个或更多个抗原结合位点，并且通常不是天然序列IgM或IgA抗体。
“多特异性抗体”是具有至少两个不同结合位点的抗体，每个位点具有不同的结合特异性。多特异性抗体可以是全长抗体或抗体片段，并且不同的结合位点可以各自结合不同的抗原，或者不同的结合位点可以结合相同抗原的两个不同表位。
“Fv片段”是指含有完整的抗原识别和结合位点的抗体片段。该区域由紧密结合的一个重链和一个轻链可变结构域的二聚体组成，其可以是天然共价的，例如在scFv中。正是在这种构型中，每个可变结构域的三个CDR相互作用以限定VH-VL二聚体表面上的抗原结合位点。六个CDR或其亚组共同赋予抗体抗原结合特异性。然而，即使单个可变结构域(或仅包含对抗原特异性的三个CDR的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，尽管通常比整个结合位点的亲和力低。
“Fab片段”是指含有轻链的可变结构域和恒定结构域以及重链的可变结构域和第一恒定结构域(CHI)的抗体片段。“F(ab')2片段”包含一对Fab片段，它们通常在它们的羧基末端附近通过它们之间的铰链半胱氨酸共价连接。抗体片段的其他化学偶联也是本领域已知的。
如本文所用，“抗原结合臂”是指具有特异性结合感兴趣的目标分子的能力的抗体的组分。通常，抗原结合臂是免疫球蛋白多肽序列的复合物，例如，免疫球蛋白轻链和重链的CDR和/或可变结构域序列。
“单链Fv”或“scFv”是指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单个多肽链中。通常，Fv多肽还包含VH结构域与VL结构域之间的多肽接头，其使得scFv能够形成期望的抗原结合结构。
“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段在同一多肽链(VH和VL)中包含与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。通过使用太短而不允许在同一链上的两个结构域之间进行配对的接头，迫使所述结构域与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。
“线性抗体”是指Zapata等人Protein Eng.,8(10):1057-1062(1995)中描述的抗体。简言之，这些抗体包含重链片段的串联重复序列(VH-CH1-VH-CH1)，其与互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性的或单特异性的。
“裸抗体”是指未与异源部分(例如，细胞毒性部分)或放射性标记缀合的抗体。
“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的总非共价相互作用的强度。“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以由平衡解离常数(KD)表示。亲和力可以通过本领域已知的常用方法来测量，包括本文所述的那些。用于测量结合亲和力的具体说明性和示例性实施方案在下文中进行了描述。
“特异性地结合”或“特异性结合”是指抗体与抗原以不超过约1×10-7M的亲和力值结合。
“亲和力成熟”抗体是指与不具有这样的改变的亲本抗体相比，在一个或多个CDR中具有一个或多个改变的抗体，这样的改变导致抗体对抗原的亲和力的改善。
抗体的“功能性抗原结合位点”是能够结合靶抗原的位点。抗原结合位点的抗原结合亲和力不一定与抗原结合位点所来源的亲本抗体一样强，但结合抗原的能力必须是可使用已知用于评估抗体与抗原结合的多种方法中的任一种测量的。
“分离的抗体”是指已与其天然环境的组分分离的抗体。在一些实施方案中，抗体被纯化至大于95％或99％的纯度，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱方法(例如，离子交换或反相HPLC)所测定的。关于评估抗体纯度的方法的综述，参见例如Flatman等人，J.Chromatogr.B Analyt.Technol Biomed Life Sci,848:79-87。
如本文所用，“基本上相似”或“基本上相同”是指两个数值(例如，一个与测试抗体相关联，而另一个与参比抗体相关联)之间足够高程度的相似性，使得本领域技术人员将认为两个值之间的差异在由所述值(例如，KD值)测量的生物学特性的背景下具有很小或没有生物学和/或统计学显著性。
如本文所用，“基本上不同”是指两个数值(通常一个与分子相关联，而另一个与参比分子相关联)之间足够高程度的差异，使得本领域技术人员将认为两个值之间的差异在由所述值(例如，KD值)测量的生物学特性的背景下具有统计学显著性。
“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区的那些生物学活性，其随抗体同种型而变化。抗体效应子功能的示例包括：Clq结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体)的下调；以及B细胞活化。
“免疫缀合物”是指与一种或多种异源分子(包括但不限于细胞毒性剂)缀合的抗体。
“治疗”是指试图改变所治疗的个体中病症的自然过程的临床干预，并且可以进行预防或在临床病理学过程期间进行。期望的治疗结果可包括但不限于预防病症的发生或复发、缓解症状、减轻病症的任何直接或间接病理学后果、预防转移、降低进展速率、改善或减轻疾病状态以及缓解或改善预后。例如，治疗可包括向受试者施用治疗有效量的包含抗IL1RAP抗体的药物制剂，以延迟由IL1RAP介导的疾病或病症的发展或减缓其进展。
“药物制剂”是指允许活性成分的生物活性有效的形式的制剂，并且其不含有对施用该制剂的受试者有毒的另外的组分。
“药学上可接受的载剂”是指药物制剂中除活性成分以外的对其所施用的受试者无毒的成分。药学上可接受的载剂包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
“治疗有效量”是指活性成分或药剂(例如，药物制剂)达到期望的治疗或预防结果(例如，治疗或预防受试者的疾病、障碍或病症)的量。在IL1RAP介导的疾病或病症的情况下，治疗剂的治疗有效量是在某种程度上减少、预防、抑制和/或缓解与疾病、障碍或病症相关的一种或多种症状的量。对于哮喘治疗，体内功效可例如通过评估症状的持续时间、严重性和/或复发、反应率(RR)、反应持续时间和/或生活质量来测量。
如本文所用，“同时”是指施用两种或更多种治疗剂，其中至少部分施用在时间上重叠。因此，同时施用包括在停止施用一种或多种其他药剂后继续施用一种或多种药剂时的给药方案。
“个体”或“受试者”是指哺乳动物，包括但不限于家养动物(例如，牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物诸如猴)、兔和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。
抗IL1RAP抗体的结合亲和力和细胞信号传导抑制
在一些实施方案中，本文提供的抗IL1RAP抗体具有<100nM、<10nM、<1nM、<0.1nM、<0.01nM或<0.001nM(例如，10-8M或更小、10-8M至10-13M，例如，10-9M至10-13M)的结合人IL1RAP的平衡解离常数(KD)。更具体地，在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体以1×10-8M或更小、1×10-9M或更小、1×10-10M或更小或者1×10-11M或更小的结合亲和力结合人IL1RAP。在一些实施方案中，结合亲和力测量为与人IL1RAP多肽(SEQ ID NO:1或6)结合的平衡解离常数(KD)。通常，配体与其受体的结合亲和力可使用多种测定法中的任一种来测定，并以多种定量值来表示。本文实施例中公开了可用于测定抗体亲和力的特异性IL1RAP结合测定法。另外，抗原结合测定法是本领域已知的并且可以在本文中使用，包括但不限于使用以下技术的任何直接或竞争性结合测定法：诸如蛋白质印迹、放射免疫测定法、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、“夹心”免疫测定法、基于表面等离子体共振的测定法(诸如如WO2005/012359中所述的BIAcore测定法)、免疫沉淀测定法、荧光免疫测定法和蛋白A免疫测定法。
因此，在一些实施方案中，结合亲和力表示为KD值并反映内在结合亲和力(例如，具有最小化的亲合力效应)。本公开的抗IL1RAP抗体表现出对人IL1RAP多肽(SEQ ID NO:1或6)的强结合亲和力，例如，表现出介于10nM和1pM之间的KD值。
在一些实施方案中，本文提供的抗IL1RAP抗体减少、抑制和/或完全阻断通过IL1RAP介导的途径(包括IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导途径)的细胞内信号传导，并且更具体地，通过结合以下激动剂中的一种或多种刺激的信号传导途径：IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和IL-36Γ。抗体抑制这些IL1RAP介导的信号传导途径的能力可以使用已知的基于细胞的阻断测定法(包括报告细胞测定法和本公开实施例中描述的基于原代细胞的阻断测定法)在体外测定。在一些实施方案中，抗体减少、抑制和/或完全阻断细胞内信号传导的能力使用基于报告细胞的阻断测定法，用浓度为约EC50的激动剂IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36γ确定为抗体的IC50。激动剂EC50通常仅可在测定前估计，并在测定完成后使用数据的非线性回归分析确定。在这样的测定中，约EC50的值通常将在EC40-45至EC55-60的范围内。
因此，在一些实施方案中，本公开的IL1RAP抗体的特征在于基于减少、抑制和/或完全阻断通过IL1RAP介导的途径的细胞内信号传导的能力的以下功能特性中的一种或多种。
在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体使IL-1刺激的信号、IL-33刺激的信号和/或IL-36刺激的信号降低至少90％、至少95％、至少99％或100％。在一些实施方案中，可以使用基于报告细胞的阻断测定法来测量信号的降低。普通技术人员可以选择已知用于确定IL-1刺激的、IL-33刺激的和/或IL-36刺激的途径中的细胞信号传导的抑制的任何已知报告细胞测定法。通常，本公开的抗IL1RAP抗体降低由浓度为约EC50(例如，EC40至EC60)的激动剂的结合引发的IL1RAP介导的细胞内信号，其中抗体的IC50值为10nM或更小、5nM或更小或者1nM。
在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体使IL-1刺激的信号、IL-33刺激的信号和IL-36刺激的信号降低至少95％或至少99％；任选地，其中IL-1、IL-33和/或IL-36刺激的信号由选自IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和IL-36γ的激动剂刺激；任选地，其中在约EC50的激动剂浓度下，抗体具有10nM或更小、5nM或更小或者1nM或更小的IC50。
在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体使由IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和IL-36γ激动剂中一种或多种结合其同源受体引发的细胞内信号降低至少90％、至少95％、至少99％或100％。在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体抑制IL-1α、IL-1β和/或IL-36β刺激的IL8从原代人肺成纤维细胞(PHLF)的释放；任选地，其中在约EC50的IL-1α、IL-1β和/或IL-36β浓度下，抗体具有10nM或更小、5nM或更小或者1nM或更小的IC50。在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体抑制IL-1β刺激的IL6从原代人单核细胞的释放；任选地，其中在约EC50的IL-1β浓度下，抗体具有10nM或更小、5nM或更小或者1nM或更小的IC50。在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体抑制IL-33刺激的INF-γ从人天然杀伤(NK)细胞的释放；任选地，其中在约EC50的IL-33浓度下，抗体具有10nM或更小、5nM或更小或者1nM或更小的IC50。在一些实施方案中，抗体抑制IL-36β刺激的IL8从人表皮角质形成细胞(HEKn)的释放；任选地，其中在约EC60的IL-36β浓度下，抗体具有10nM或更小、5nM或更小或者2nM或更小的IC50。在一些实施方案中，抗体抑制嗜碱性粒细胞中IL-33刺激的磷酸化；任选地，其中在约EC56的IL-33浓度下，抗体具有75nM或更小、50nM或更小或者45nM或更小的IC50。在一些实施方案中，抗体抑制IL-33刺激的INF-γ从CD4+T细胞的释放；任选地，其中在约EC34的IL-33浓度下，抗体具有75nM或更小、50nM或更小或者45nM或更小的IC50。
抗体片段
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体可以是抗体片段。可与本公开的结合决定簇一起使用的抗体片段包括但不限于Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、一价、一臂(或单臂)抗体、scFv片段和本文所述和本领域已知的其他片段。关于各种抗体片段的综述，参见例如Hudson等人，Nat.Med.,9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述，参见例如Pluckthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编辑，(Springer-Verlag,New York)，第269-315页(1994)；也参见WO93/16185；以及美国专利号5571894和5587458。关于包含补救受体结合表位残基并具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab')2片段的描述，参见美国专利号5869046。其他一价抗体形式在例如WO2007/048037、WO2008/145137、WO2008/145138和WO2007/059782中进行了描述。一价、单臂抗体在例如WO2005/063816中进行了描述。双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价的或双特异性的(参见例如EP0404097；WO93/01161；Hudson等人，Nat.Med.,9:129-134(2003)；以及Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))。
在一些实施方案中，抗体片段是单结构域抗体，其包含抗体的全部或部分重链可变结构域或全部或部分轻链可变结构域。在一些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,Mass.；参见例如美国专利号6,248,516)。
抗体片段可以通过多种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞(例如，大肠杆菌或噬菌体)的生产，如本文所述。
预期可以使用本领域已知和/或本文所述的方法和技术将本公开的任何抗IL1RAP抗体制备为抗体片段。例如，在实施例8中描述了本公开的各种抗IL1RAP抗体的Fab形式的制备和分析。
嵌合抗体和人源化抗体
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体可以是嵌合抗体。(参见例如美国专利号4,816,567和Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984)中描述的嵌合抗体)。在一个实施方案中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，来源于小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类动物诸如猴的可变区)和人恒定区。在一些实施方案中，嵌合抗体是“类别转换”抗体，其中类别或亚类已经从亲本抗体的类别或亚类改变。预期嵌合抗体可包括其抗原结合片段。
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。通常，人源化抗体包含一个或多个可变结构域，其中CDR，例如，CDR(或其部分)来源于非人抗体，并且FR(或其部分)来源于人抗体序列。人源化抗体任选地还将包含人恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，CDR残基所来源的抗体)的相应残基取代，以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人源化抗体及其制备方法在例如Almagro和Fransson,Front.Biosci,13:1619-1633(2008)中进行了综述，并且在例如Riechmann等人，Nature,332:323-327(1988)；Queen等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA,86:10029-10033(1989)；美国专利号5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等人，Methods,36:25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)接枝)；Padlan,Mol.Immunol.,28:489-498(1991)(描述“表面重修”)；Dall'Acqua等人，Methods,36:43-60(2005)(描述“FR改组”)；以及Osbourn等人，Methods,36:61-68(2005)和Klimka等人，Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述FR改组的“向导选择”方法)中进行了进一步描述。
可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳匹配”方法选择的框架区(参见例如Sims等人，J.Immunol.,151:2296(1993))；衍生自轻链或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列的框架区(参见例如Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；以及Presta等人，J.Immunol,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变)框架区或人种系框架区(参见例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；以及来自筛选FR文库的框架区(参见例如Baca等人，J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人，J.Biol.Chem.,271:22611-22618(1996))。
预期可以使用本领域已知和/或本文所述的方法和技术将本公开的任何抗IL1RAP抗体制备为人源化抗体。例如，在实施例中描述了本公开的抗IL1RAP抗体的人源化形式的制备和分析。
人抗体
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体可以是人抗体。人抗体可以使用本领域已知的多种技术来产生。人抗体通常在van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Chem.Biol.,5:368-74(2001)和Lonberg,Curr.Opin.Immunol.,20:450-459(2008)中进行了描述。人抗体可以通过将免疫原施用于转基因动物来制备，该转基因动物已被修饰以响应于抗原攻击而产生完整的人抗体或具有人可变区的完整抗体。这样的动物通常含有全部或部分人免疫球蛋白基因座，其替代内源免疫球蛋白基因座，或其存在于染色体外或随机整合到动物染色体中。在这样的转基因小鼠中，内源免疫球蛋白基因座通常已经失活。关于从转基因动物获得人抗体的方法的综述，参见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。还参见例如美国专利号6,075,181和6,150,584中的XENOMOUSETM技术；美国专利号5,770,429中的技术；美国专利号7,041,870中的技术；以及美国专利申请公开号US 2007/0061900中的技术。来自由这样的动物产生的完整抗体的人可变区可以被进一步修饰，例如，通过与不同的人恒定区组合。
人抗体也可以通过基于杂交瘤的方法制备。已经描述了用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系。参见例如Kozbor,J.Immunol,133:3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；以及Boerner等人，J.Immunol.,147:86(1991)。通过人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体还在Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)中进行了描述。描述从杂交瘤细胞系产生单克隆人IgM抗体的其他方法包括例如美国专利号7,189,826中描述的那些。人杂交瘤技术(即，三瘤技术)在例如Vollmers等人，Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)和Vollmers等人，Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)中进行了描述。
还可以通过分离选自人来源的噬菌体展示文库的Fv克隆可变结构域序列来产生人抗体。然后可以将这样的可变结构域序列与期望的人恒定结构域组合。下文描述了从抗体文库中选择人抗体的技术。
预期可以使用本领域已知和/或本文所述的方法和技术将本公开的任何抗IL1RAP抗体制备为人抗体。
文库衍生抗体
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体可通过筛选组合文库中具有所需活性的抗体来分离。例如，本领域已知多种方法用于产生噬菌体展示文库并筛选此类文库以寻找具有所需结合特性的抗体。本文公开的实施例中描述了噬菌体展示用于制备本公开的抗IL1RAP抗体的人源化形式的亲和力成熟变体的用途。产生此类文库衍生抗体的其他方法可见于例如Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology,178:1-37(O'Brien等人编辑，Antibody Phage Display,Humana Press,Totowa,N.J.,2001)；McCafferty等人，Nature,348:552-554；Clackson等人，Nature,352:624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.,222:581-597(1992)；Marks和Bradbury,Methods in Molecular Biology,248:161-175(Lo编辑，Antibody Engineering,Humana Press,Totowa,N.J.,2003)；Sidhu等人，J.Mol.Biol.,338(2):299-310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol.,340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,101(34):12467-12472(2004)；以及Lee等人，J.Immunol.Methods,284(1-2):119-132(2004)。
预期组合文库筛选可用于使用本领域已知的和/或本文所述的方法和技术产生本公开的抗IL1RAP抗体的变体。例如，在实施例1中描述了使用噬菌体展示文库产生和筛选来制备本公开的人源化抗IL1RAP抗体的多种亲和力成熟变体。
多特异性抗体
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体是多特异性抗体，例如，双特异性抗体。在一些实施方案中，多特异性抗体是具有至少两个不同结合位点的单克隆抗体，每个结合位点对不同抗原具有结合特异性，其中至少一个特异性结合IL1RAP。在一些实施方案中，至少一个结合位点特异性结合细胞毒性剂。在示例性实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体是双特异性抗体，并且可用于将细胞毒性剂定位至表达IL1RAP的细胞。
用于制备多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(参见例如WO2012131555)。
多特异性抗体还可以通过以下技术来制备：工程化有利于Fc-异二聚体抗体分子而不是同二聚体的形成的“静电转向”效应(WO 2009/089004A1)；交联两种或更多种抗体或片段(参见例如美国专利号4,676,980和Brennan等人，Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链产生双特异性抗体(参见例如Kostelny等人，J.Immunol,148(5):1547-1553(1992))；使用用于制备双特异性抗体片段的“双抗体”技术(参见例如Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；使用单链Fv(scFv)二聚体(参见例如Gruber等人，J.Immunol,152:5368(1994))；或三特异性抗体(参见例如Tutt等人，J.Immunol.,147:60(1991))。
预期可以使用本领域已知和/或本文所述的方法和技术将本公开的任何抗IL1RAP抗体制备为多特异性抗体。
抗体变体
在一些实施方案中，还考虑了本公开的抗IL1RAP抗体的变体。例如，可以通过将适当的修饰引入编码抗体的核苷酸序列中或通过肽合成来制备具有提高的结合亲和力和/或抗体的其他生物学特性的抗体。这样的修饰包括例如从抗体的氨基酸序列中缺失和/或插入和/或取代残基。可以进行缺失、插入和取代的任何组合以获得最终构建体，条件是最终构建体具有期望的IL1RAP抗原结合特性。预期可使用本领域已知的和/或本文所述的方法和技术来制备本公开的抗IL1RAP抗体的多种变体，包括但不限于：(i)氨基酸取代、插入和/或缺失变体；(ii)糖基化变体；(iii)Fc区变体；(iv)半胱氨酸工程化变体；以及(v)衍生变体。
取代、插入和缺失变体
在一些实施方案中，提供了除本文所述的那些之外还具有一个或多个氨基酸取代的抗IL1RAP抗体变体。用于诱变的位点可以包括CDR和FR。典型的“保守”氨基酸取代和/或基于共同侧链种类或性质的取代是本领域熟知的，并且可用于本公开的实施方案中。本公开还考虑了基于非保守氨基酸取代的变体，其中氨基酸侧链类别之一的成员被交换为来自另一类别的氨基酸。
氨基酸侧链通常根据以下类别或共同性质进行分组：(1)疏水性：Met、Ala、Vai、Leu、Ile、正亮氨酸；(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gin；(3)酸性：Asp、Glu；(4)碱性：His、Lys、Arg；(5)链取向影响：Gly、Pro；以及(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。
将氨基酸取代到抗体中并随后筛选所需功能(例如，保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC)的技术是本领域熟知的。
氨基酸取代变体可包括取代亲本抗体(例如，人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。通常，选择用于进一步研究的所得变体将具有相对于亲本抗体的某些生物学性质的修饰(例如，增加的亲和力、降低的免疫原性)和/或将基本上保留亲本抗体的某些生物学性质。示例性取代变体是亲和力成熟抗体，其可以方便地产生，例如，使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术，诸如本文实施例中描述的那些。简言之，将一个或多个CDR残基突变并将变体抗体展示在噬菌体上，并筛选特定生物活性(例如，结合亲和力)。
鉴定可靶向诱变的抗体的残基或区域的有用方法是“丙氨酸扫描诱变”(参见例如Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085)。在该方法中，鉴定一个残基或一组靶残基(例如，带电荷的残基诸如Arg、Asp、His、Lys和Glu)，并用中性或带负电荷的氨基酸(例如，Ala或聚丙氨酸)取代，以确定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可以在对初始取代显示功能敏感性的氨基酸位置处引入进一步的取代。另选地，或另外，可以测定抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体与抗原之间的接触点。这样的接触残基和相邻残基可以作为取代的候选物被靶向或消除。可以筛选变体以确定它们是否含有期望的性质。
氨基酸序列插入包括长度范围从一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基末端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的示例包括具有N-末端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其他插入变体包括抗体的N-末端或C-末端与酶或多肽的融合，这增加了抗体的血清半衰期。
可以在CDR中进行取代以提高抗体亲和力。这样的改变可以在“热点”中进行，即，由在体细胞成熟过程中经历高频率突变的密码子编码的残基(参见例如Chowdhury,Methods Mol.,Biol.207:179-196(2008))，其中测试所得变体VH或VL的结合亲和力。在一个实施方案中，亲和力成熟可以通过从二级文库中构建并重新选择来进行(参见例如Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology,178:1-37(O'Brien等人编辑，AntibodyPhage Display,Humana Press,Totowa,N.J.,(2001)))。引入多样性的另一种方法涉及CDR指导的方法，其中将几个CDR残基(例如，一次4-6个残基)随机化。参与抗原结合的CDR残基可以被特异性鉴定，例如，使用丙氨酸扫描诱变或建模。具体地，CDR-H3和CDR-L3经常被靶向。
在一些实施方案中，取代、插入或缺失可以发生在一个或多个CDR内，只要这样的改变基本上不降低抗体结合抗原的能力。例如，可以在CDR中进行基本上不降低结合亲和力的保守改变(例如，如本文提供的保守取代)。这样的改变可以在CDR“热点”之外。在上文提供的变体VH和VE序列的一些实施方案中，每个CDR是未改变的，或含有不超过一个、两个或三个氨基酸取代。
糖基化变体
在一些实施方案中，改变本公开的抗IL1RAP抗体以增加或减少抗体被糖基化的程度。抗体的糖基化位点的添加或缺失可以通过改变氨基酸序列以产生或去除一个或多个糖基化位点来进行。
在抗体包含Fc区的实施方案中，可以改变与Fc区连接的碳水化合物。通常，由哺乳动物细胞产生的天然抗体包含通过N-键与Fc区的CH2结构域的Asn297连接的分支双触角寡糖(参见例如Wright等人，TIBTECH,15:26-32(1997))。寡糖可包括各种碳水化合物，诸如甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GIcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及与双触角寡糖结构的“茎”中的GIcNAc连接的岩藻糖。在一些实施方案中，抗体Fc区的寡糖的修饰可以产生具有某些改进性质的变体。
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体可以是亲本抗体的变体，其中该变体包含缺乏与Fc区(直接或间接)连接的岩藻糖的碳水化合物结构。例如，这种抗体中岩藻糖的量可以为约1％至约80％、约1％至约65％、约5％至约65％或约20％至约40％。岩藻糖的量可以通过计算Asn297处的糖链内岩藻糖的平均量来确定，相对于与Asn 297连接的所有糖结构(例如，复合物、杂合体和高甘露糖结构)的总和，如通过MALDI-TOF质谱法所测量的(参见例如WO 2008/077546)。Asn297是指位于Fc区中约位置297处的天冬酰胺残基(Fc区残基的Eu编号)；然而，由于抗体中的微小序列变化，Asn297也可位于位置297的上游或下游约±3个氨基酸处，即，在位置294与300之间。
在一些实施方案中，岩藻糖基化变体可具有改善的ADCC功能。参见例如美国专利公开号US 2003/0157108或US 2004/0093621。“脱岩藻糖基化”或“岩藻糖缺陷”抗体及其相关制备方法的示例公开于例如US2003/0157108、US2003/0115614、US2002/0164328、US2004/0093621、US2004/0132140、US2004/0110704、US2004/0110282、US2004/0109865、WO2000/61739、WO2001/29246、WO2003/085119、WO2003/084570、WO2005/035586、WO2005/035778、WO2005/053742、WO2002/031140；Okazaki等人，J.Mol.Biol.,336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87:614(2004)中。
可用于产生脱岩藻糖基化抗体的细胞系包括缺乏蛋白岩藻糖基化的Led 3CHO细胞(参见例如Ripka等人，Arch.Biochem.Biophys,249:533-545(1986)；US2003/0157108和WO2004/056312)和敲除细胞系，诸如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因、FUT8、敲除CHO细胞(参见例如Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等人，Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)和WO2003/085107)。
Fc区变体
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体可以在Fc区中包含一个或多个氨基酸修饰(即，Fc区变体)。Fc区变体可包含在一个或多个氨基酸残基位置处包含氨基酸取代的人Fc区序列(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)。下文描述了可用于本公开的抗IL1RAP抗体的本领域已知的多种Fc区变体。
在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体是具有改变的效应子功能的Fc区变体。在一些实施方案中，具有改变的效应子功能的抗体具有亲本抗体的一些(但不是全部)效应子功能、降低的效应子功能或没有效应子功能(例如，无效应子)。对于其中效应子功能(诸如ADCC)是不必要的或有害的和/或抗体的体内半衰期是重要的某些应用，无效应子Fc区变体是更期望的。
具有降低的效应子功能或无效应子的Fc区变体抗体可以在以下Fc区位置中的一个或多个处包括氨基酸取代：238、265、269、270、297、327和329。(参见例如美国专利号6,737,056)。这种Fc区变体可以包括在位置265、269、270、297和327中的两个或更多个处的氨基酸取代。这种Fc区变体还可以包括残基265和297两者被取代为丙氨酸(参见例如美国专利号7,332,581)。如实施例和本文其他地方所公开的，在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体是无效应子Fc区变体。在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体的无效应子Fc区变体包含氨基酸取代N297G。
与FcR的结合改善或减少的Fc区变体公开于例如美国专利号6,737,056、WO 2004/056312和Shields等人，J.Biol.Chem.,276(9):6591-6604(2001)中。具有改善的ADCC的Fc区变体可以在例如Fc区的位置298、333和/或334处包含一个或多个氨基酸取代(基于EU编号)。Fc区变体已改变(即，改善或减少)Clq结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，如例如美国专利号6,194,551、WO99/51642和Idusogie等人，J.Immunol.,164:4178-4184(2000)中描述的。具有增加的半衰期和改善的与新生儿Fc受体(FcRn)的结合的Fc区变体公开于例如US2005/0014934A1(Hinton等人)中。这种Fc区变体在以下位置中的一个或多个处包含氨基酸取代：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424和434。具有增加的半衰期的其他Fc区变体包括在例如美国专利号7,658,921B2(Dall'Acqua等人)中描述的位置252、254和256处的YTE突变组(即，M252Y/S254T/T256E)。如实施例和本文其他地方所公开的，在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体是包含YTE突变组的Fc区变体。Fc区变体的其他示例可见于例如美国专利号5,648,260和5,624,821以及WO94/29351中。
如本文别处所述，天然存在的抗体的Fc区通常包括位置447处的C-末端赖氨酸(Lys447)。然而，在细胞培养中生产重组抗体期间，由于酶促切割(例如，在CHO细胞中生产)，该C-末端赖氨酸通常从Fc区切割。因此，本文所述的包含Fc区和C-末端赖氨酸的任何抗IL1RAP抗体也包括包含Fc区而不含C-末端赖氨酸的相同抗IL1RAP抗体。类似地，本文所述的包含Fc区而不含C-末端赖氨酸的任何抗IL1RAP抗体也包括包含Fc区和C-末端赖氨酸的相同抗IL1RAP抗体。
通常，可进行体外和/或体内细胞毒性测定以确认Fc区变体中CDC和/或ADCC活性的降低/耗尽。例如，可进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺乏FcγR结合(因此可能缺乏ADCC活性)但保留FcRn结合能力。对于介导ADCC的原代细胞，NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。评估感兴趣的分子的ADCC活性的体外测定法的非限制性示例描述于美国专利号5,500,362(参见例如Hellstrom等人，Proc.Nat’lAcad.Sci.USA,83:7059-7063(1986))和Hellstrom等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA,82:1499-1502(1985)；美国专利号5,821,337(参见Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.,166:1351-1361(1987))中。另选地，可以采用非放射性测定方法(参见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定法(CellTechnology,Inc.Mountain View,Calif.)和非放射性细胞毒性测定法(Promega,Madison,Wis.))。可用于此类测定法的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。另选地或附加地，感兴趣的分子的ADCC活性可以在体内例如在动物模型中评估，诸如在Clynes等人，Proc.Nat’lAcad.Sci.USA,95:652-656(1998)中公开的。还可以进行Clq结合测定以确认抗体不能结合Clq并因此缺乏CDC活性。参见例如WO2006/029879和WO2005/100402中的Clq和C3c结合ELISA。为了评估补体激活，可以进行CDC测定(参见例如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods,202:163(1997)；Cragg,M.S.等人，Blood 101,1045-1052(2003)；以及Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood,103:2738-2743(2004))。可以使用本领域已知的方法进行FcRn结合和体内清除/半衰期测定(参见例如Petkova等人，Inti.Immunol.,18(12):1759-1769(2006))。
半胱氨酸工程化变体
在一些实施方案中，预期本文所述的抗IL1RAP抗体可在特定非CDR位置被半胱氨酸残基取代以产生反应性硫醇基团。这种工程化“硫代MAb”可用于将抗体与例如药物部分或接头-药物部分缀合，从而产生免疫缀合物，如本文其他地方所述。半胱氨酸工程化抗体可以如例如美国专利号7,521,541中所述产生。在一些实施方案中，以下抗体残基中的任何一个或多个可以被半胱氨酸取代：轻链的V205(Kabat编号)；重链的A118(EU编号)；以及重链Fc区的S400(EU编号)。
衍生变体
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体可以用非蛋白质部分进一步修饰(即，衍生化)。适用于抗体衍生化的非蛋白质部分包括但不限于水溶性聚合物，诸如：聚乙二醇(PEG)、乙二醇和丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸均聚物或无规共聚物，以及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇以及它们的混合物。在一些实施方案中，抗体的修饰可以使用甲氧基-聚乙二醇丙醛进行。聚合物可以具有任何分子量并且可以是支化的或非支化的。与抗体连接的聚合物的数目可以变化，并且如果连接多于一种聚合物，则它们可以是相同或不同的分子。通常，用于衍生化的聚合物的数目和/或类型可以基于包括但不限于抗体的特定性质或功能(例如，抗体衍生物是否将在限定条件下用于治疗)的考虑因素来确定。
免疫缀合物
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体还可以是免疫缀合物，其中该免疫缀合物包含与一种或多种细胞毒性剂缀合的抗IL1RAP抗体。本公开考虑的合适的细胞毒性剂包括化疗剂、药物、生长抑制剂、毒素(例如，蛋白质毒素、细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素。
在一些实施方案中，免疫缀合物是抗体-药物缀合物(ADC)，其中如本文所述的抗IL1RAP抗体与一种或多种药物缀合。
在一些实施方案中，本公开的免疫缀合物包含与用于治疗IL-1、IL-33、IL-36和/或IL1RAP介导的疾病或病症的药物或治疗剂缀合的如本文所述的抗IL1RAP抗体。
在一些实施方案中，本文所述的抗IL1RAP可以与酶活性毒素或其片段缀合，该酶活性毒素或其片段包括但不限于白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌)、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、莫迪素A链、α-八叠球菌素、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白、苦瓜抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆素、肥皂草抑制剂、白树毒素、丝裂素、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素和单端孢霉烯。
在一些实施方案中，本公开的免疫缀合物包含与放射性同位素缀合的如本文所述的抗IL1RAP抗体(即，放射性缀合物)。多种放射性同位素可用于制备这样的放射性缀合物。示例包括211At、1311、1251、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P、212Pb以及Lu的放射性同位素。在一些实施方案中，免疫缀合物可包含用于闪烁照相检测的放射性同位素，或用于NMR检测或MRI的自旋标记。合适的放射性同位素或自旋标记可包括如1231、1311、11In、130、19F、15N、170以及Gd、Mn和Fe的各种同位素。
抗IL1RAP抗体和细胞毒性剂的免疫缀合物可使用多种熟知的双功能试剂和适于与蛋白质缀合的化学物质来制备。此类试剂包括但不限于：N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)、亚氨基四氢噻吩(IT)、亚氨酸酯的双官能衍生物(例如，己二亚氨酸二甲酯HQ)、活性酯(例如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)、醛(例如，戊二醛)、双叠氮化合物(例如，双-(对-叠氮苯甲酰基)-己二胺)、双重氮衍生物(例如，双-(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(例如，甲苯-2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(例如，1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。
用于制备本公开的免疫缀合物的试剂还可以包括市售的“交联”试剂，诸如：BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC和磺基-SMPB以及SVSB(琥珀酰亚胺基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)(参见例如Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,Ill.,U.S.A)。
合成抗体
在一些实施方案中，本公开的抗IL1RAP抗体可以是包含来自抗IL1RAP免疫球蛋白的一组CDR(例如，CDR-Ll等)的合成抗体，该组CDR移植到除免疫球蛋白支架或框架之外的支架或框架上，诸如替代蛋白质支架或人工聚合物支架。
考虑用于制备本公开的合成抗体的示例性替代蛋白支架可包括但不限于：纤连蛋白、新制癌菌素CBM4-2、脂质运载蛋白、T细胞受体、蛋白-A结构域(蛋白Z)、Im9、TPR蛋白、锌指结构域、pVIII、禽类胰多肽、GCN4、WW结构域Src同源结构域3、PDZ结构域、TEM-1β-内酰胺酶、硫氧还蛋白、葡萄球菌核酸酶、PHD-fmger结构域、CL-2、BPTI、APPI、HPSTI、依克多因、LACI-D1、EDTI、MTI-II、蝎毒素、昆虫防御素-A肽、EETI-II、Min-23、CBD、PBP、细胞色素b-562、Edi受体结构域、γ-晶状体蛋白、泛素、转铁蛋白和/或C-型凝集素样结构域。
可用于合成抗体的示例性人造聚合物(非蛋白质)支架在例如Fiedler等人，(2014)“Non-Antibody Scaffolds as Alternative Therapeutic Agents,”Handbook ofTherapeutic Antibodies(编辑S.DObel和J.M.Reichert),Wiley-VCH Verlag GmbH&Co.；Gebauer等人，Curr.Opin.Chem.Biol.,13:245-255(2009)；Binz等人，Nat.Biotech.,23(10):1257-1268(2005)中进行了描述。
重组方法和组合物
本公开的抗IL1RAP抗体可以使用抗体生产领域中众所周知的重组方法和材料来生产。在一些实施方案中，本公开提供了编码抗IL1RAP抗体的分离的核酸。核酸可以编码包含抗体的VL的氨基酸序列和/或包含抗体的VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在一些实施方案中，提供了包含编码本公开的抗IL1RAP抗体的核酸序列的一种或多种载体(例如，表达载体)。在一些实施方案中，提供了包含编码本公开的抗IL1RAP抗体的核酸序列的宿主细胞。在一个实施方案中，宿主细胞已经用包含编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列的核酸的载体转化。在另一个实施方案中，宿主细胞已经用包含编码包含抗体VL的氨基酸序列的核酸的第一载体和包含编码包含抗体VH的氨基酸序列的核酸的第二载体转化。
在重组方法的一些实施方案中，使用的宿主细胞是真核细胞，诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，YO、NSO、Sp20)。在一个实施方案中，提供了制备抗IL1RAP抗体的方法，其中该方法包括在适于表达抗体的条件下培养包含编码如上提供的抗体的核酸的宿主细胞，并且任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。
简言之，抗IL1RAP抗体的重组生产通过分离编码抗体的核酸(例如，如本文所述)并将该核酸插入一个或多个载体中以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达来进行。使用本领域熟知的常规方法(例如，通过使用能够特异性结合编码期望抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)容易地分离和测序此类核酸。用于克隆或表达抗体编码载体的合适宿主细胞和培养方法是本领域熟知的，并且包括原核或真核细胞。通常，在表达后，抗体可以以可溶性级分的形式从细胞浆中分离并进一步纯化。除原核生物外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母是抗体编码载体的合适克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已被“人源化”的真菌和酵母菌株，导致产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体(参见例如Gerngross,Nat.Biotech.,22:1409-1414(2004)和Li等人，Nat.Biotech.,24:210-215(2006))。
用于表达本公开的糖基化抗IL1RAP抗体的合适宿主细胞还可以来源于多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的示例包括植物细胞和昆虫细胞。已经鉴定了许多杆状病毒毒株，它们可以与昆虫细胞结合使用，特别是用于转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞。植物细胞培养物也可用作宿主(参见例如美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548和7,125,978。
可用于生产本公开的抗IL1RAP抗体的哺乳动物宿主细胞系的示例包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(参见例如Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216(1980))；骨髓瘤细胞系诸如YO、NSO和Sp2/0；由SV40(COS-7)转化的猴肾CVI系；人胚肾系(如例如Graham等人，J.Gen Virol.,36:59(1977)中描述的293或293个细胞)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞尔托利细胞(如例如Mather,Biol.Reprod.,23:243-251(1980)中描述的TM4细胞)；猴肾细胞(CVI)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT060562)；TRI细胞(参见例如Mather等人，Annals N Y.Acad.Sci.,383:44-68(1982))；MRC5细胞；以及FS4细胞。关于适用于抗体生产的有用哺乳动物宿主细胞系的一般综述，参见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo编辑，AntibodyEngineering,Humana Press,Totowa,N.J.)，第255-268页(2003)。
抗IL1RAP抗体的药物组合物和制剂
本公开还提供了包含抗IL1RAP抗体的药物组合物和药物制剂。在一些实施方案中，本公开提供了一种包含如本文所述的抗IL1RAP抗体和药学上可接受的载剂的药物制剂。这种药物制剂可通过将具有所需纯度的抗IL1RAP抗体与一种或多种药学上可接受的载剂混合来制备。通常，这样的抗体制剂可以制备成水溶液(参见例如美国专利号6,171,586和WO2006/044908)或冻干制剂(参见例如美国专利号6,267,958)。
还预期包含如本文所公开的抗IL1RAP抗体的组合物和制剂还可含有除抗IL1RAP之外的其他活性成分(即，治疗剂)，其可用于在施用制剂的受试者中治疗的特定适应症。优选地，任何附加治疗剂具有与抗IL1RAP抗体活性互补的活性，并且所述活性不会彼此不利地影响。因此，在一些实施方案中，本公开提供了一种药物组合物，该药物组合物包含如本文所公开的抗IL1RAP抗体和药学上可接受的载剂，并且还包含可用于治疗IL-1、IL-33、IL-36和/或IL1RAP介导的疾病或病症的治疗剂。在一些实施方案中，例如其中疾病适应症是癌症，治疗剂是适于特定癌症的化疗剂。在一些实施方案中，组合物中的其他治疗剂是IL-1、IL-33、IL-36信号传导途径的拮抗剂。
药学上可接受的载剂在使用的剂量和浓度下通常对接受者无毒。多种这样的药学上可接受的载剂是本领域熟知的(参见例如Remington'sPharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.编辑(1980))。可用于本公开的制剂中的示例性药学上可接受的载剂可包括但不限于：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；形成盐的抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。
可用于本公开的制剂中的药学上可接受的载剂还可包括间质药物分散剂，诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)(参见例如美国专利公开号2005/0260186和2006/0104968)，诸如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白(例如，rHuPH20或Baxter International,Inc.)。
附加治疗剂和活性成分可以被包封在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中，例如分别在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)或粗乳液中的羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。这种技术公开于Remington'sPharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.编辑(1980)中。
在一些实施方案中，制剂可以是抗体和/或其他活性成分的缓释制剂。缓释制剂的合适示例包括含有抗体的固体疏水性聚合物的半渗透性基质，该半渗透性基质为成型制品的形式，例如，膜或微胶囊。
通常，待施用于受试者的本公开的制剂是无菌的。无菌制剂可以使用熟知的技术容易地制备，例如，通过过滤通过无菌过滤膜。
用途和治疗方法
预期包含本公开的抗IL1RAP抗体的任何组合物或制剂可用于利用其特异性结合IL1RAP和/或阻断IL1RAP的活性的能力，特别是阻断IL1RAP通过IL-1家族细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36Γ介导细胞内信号传导的能力的任何方法或用途，诸如在治疗方法中。由IL1RAP介导的细胞内信号传导途径包括IL-1、IL-33和IL-36途径，并且更具体地，至少包括由细胞因子激动剂IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36γ刺激的信号传导途径。IL1RAP介导的信号传导途径的抑制可以使用已知的基于细胞的阻断测定法(包括报告细胞测定法和本公开实施例中描述的基于原代细胞的阻断测定法)在体外测定。
IL1RAP介导的疾病可以包括与IL-1细胞因子家族的体液或组织中水平升高相关的任何疾病或病症，其中IL1RAP作为介导信号传导的共受体：IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36γ。IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36γ的升高水平可以包括例如超过在特定细胞或组织中通常发现的水平，或者可以是在通常不表达这些细胞因子的细胞或组织中的任何可检测的水平。
通常，IL RAP介导的病症或疾病表现出以下特征：(1)可通过施用IL-la、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36Γ和/或通过上调IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36Γ的表达在动物中实验性地诱导与该病症或疾病相关的病理；以及(2)与实验动物模型中产生的可被已知抑制IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36Γ的作用的药剂抑制的病症或疾病相关的病理。
已知IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36Γ是促炎细胞因子，然而，已知由作为共受体的IL RAP介导的这些细胞因子刺激的IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导途径的异常功能与多种疾病和病症相关，所述疾病和病症通常包括但不限于炎性疾病、自身免疫性疾病、呼吸系统疾病、代谢疾病、感染和癌症。
例如，与IL-33信号传导的异常功能相关并因此也由IL1RAP的共受体活性介导的多种病症和疾病包括但不限于：介导的病症可以是炎性病症(例如，哮喘、气道高反应性、气道炎症、脓毒症、脓毒性休克、特应性皮炎、过敏性鼻炎、类风湿性关节炎或慢性阻塞性肺病(COPD))；免疫性疾病(例如，哮喘、类风湿性关节炎、变态反应、特应性变态反应、过敏性反应、过敏性休克、过敏性鼻炎、银屑病、系统性硬化症、炎性肠病(IBD)、克罗恩病、糖尿病或肝病)；纤维化疾病(例如，特发性肺纤维化(IPF))；嗜酸性粒细胞性疾病(例如，嗜酸性粒细胞性相关胃肠道疾病，诸如嗜酸性粒细胞性食管炎)；感染(例如，蠕虫、原生动物，诸如硕大利什曼原虫，或病毒感染，诸如RSV或流感)；疼痛(例如，炎性疼痛)；中枢神经系统疾病(例如，阿尔茨海默氏病)；实体瘤(例如，乳腺肿瘤、结肠肿瘤、前列腺肿瘤、肺肿瘤、肾肿瘤、肝肿瘤、胰腺肿瘤、胃肿瘤、肠肿瘤、脑肿瘤、骨肿瘤或皮肤肿瘤)；或眼科疾病。由IL-33介导的具体的眼科疾病包括但不限于：年龄相关性黄斑变性(AMD)，包括湿性AMD、干性AMD、中度AMD、晚期AMD和地图状萎缩(GA))、视网膜病(例如，糖尿病性视网膜病(DR)、早产儿视网膜病(ROP)和高海拔DR)、息肉状脉络膜血管病(PCV)、糖尿病性黄斑水肿、干眼病、白塞氏病、视网膜脱离、青光眼、葡萄膜炎(例如，感染性和非感染性葡萄膜炎)、色素性视网膜炎、莱伯氏先天性黑蒙、斯塔加特氏病、外伤性眼部损伤和结膜炎(例如，感染性结膜炎、非感染性结膜炎和过敏性结膜炎)。
类似地，与IL-1的异常作用相关并因此也由IL1RAP的共受体活性介导的多种病症和疾病包括但不限于：急性胰腺炎；肌萎缩性侧索硬化症(ALS)；阿尔茨海默氏病；恶病质/厌食症，包括AIDS诱导的恶病质；哮喘和其他肺病；动脉粥样硬化；自身免疫性血管炎；慢性疲劳综合征；梭菌相关疾病，包括梭菌相关腹泻；冠状病症和适应症，包括充血性心力衰竭、冠状再狭窄、心肌梗死、心肌功能障碍(例如，与脓毒症相关)和冠状动脉旁路搭桥术；癌症，诸如多发性骨髓瘤和骨髓性(例如，AML或CML)和其他白血病，以及肿瘤转移；糖尿病(例如，胰岛素依赖性糖尿病)；子宫内膜异位症；发烧、纤维肌痛；肾小球肾炎；移植物抗宿主病/移植排斥；失血性休克；痛觉过敏；炎性肠病；关节的炎性病症，包括骨关节炎、银屑病关节炎和类风湿性关节炎；炎性眼病，如可能与例如角膜移植相关；局部缺血，包括脑缺血(例如，由于创伤、癫痫、出血或中风引起的脑损伤，每一种都可能导致神经变性)；川崎病；学习障碍；肺病(例如，ARDS)；多发性硬化症；肌病(例如，肌肉蛋白代谢，特别是在脓毒症中)；神经毒性(例如，如由HIV诱导的)；骨质疏松；疼痛，包括癌症相关疼痛；帕金森氏病；牙周病；早产；银屑病；再灌注损伤；脓毒性休克；放射治疗的副作用；颞下颌关节病；睡眠障碍；葡萄膜炎；或由劳损、扭伤、软骨损伤、创伤、整形外科手术、感染或其他疾病过程引起的炎性病症。
作为IL-1、IL-3 3和/或IL-3 6信号传导途径的拮抗剂或抑制剂起作用的药剂正在临床开发中，用于治疗一系列疾病和病症，包括但不限于以下：痤疮、急性重度溃疡性结肠炎、成人发作型斯蒂尔氏病、过敏性鼻炎、系统性硬化症、关节炎(包括痛风性关节炎、青少年关节炎、骨关节炎和类风湿性关节炎)、关节炎疼痛、哮喘、动脉粥样硬化、特应性湿疹、白塞氏病、恶病质、癌症(包括乳腺癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌和胰腺癌)、慢性阻塞性肺病、干眼综合征、家族性感冒自身炎性综合征、家族性地中海热、食物过敏、全身性脓疱性银屑病、化脓性汗腺炎、高-IgD综合征、高尿酸血症、穆-韦二氏综合征、新生儿发病多系统炎性疾病、肌肉骨骼疼痛、掌跖脓疱病、外周血管病、风湿性多肌痛、鼻息肉、银屑病、坏疸性脓皮病、再狭窄、镰状细胞性贫血、鼻窦炎、TNF受体相关周期性综合征、2型糖尿病和溃疡性结肠炎。
预期包含本公开的抗IL1RAP抗体的任何组合物或制剂可用于治疗与IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导途径的异常功能相关并因此由IL1RAP的共受体活性介导的任何上列疾病或病症的方法或用途。通常，这些病症和疾病包括但不限于炎性疾病、自身免疫性疾病、呼吸系统疾病、代谢疾病、感染和癌症。
因此，在一些实施方案中，包含本公开的抗IL1RAP抗体的组合物或制剂可用于方法、疗法、药物、诊断或用于治疗选自以下的病症或疾病的用途：痤疮、急性胰腺炎、急性重度溃疡性结肠炎、成人发作型斯蒂尔氏病、年龄相关性黄斑变性(AMD)、气道高反应性、气道炎症、过敏性结膜炎、过敏性鼻炎、变态反应、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、过敏性反应、关节炎疼痛、哮喘、动脉粥样硬化、特应性皮炎、特应性湿疹、自身免疫性血管炎、白塞氏病、骨癌、脑癌、乳腺癌、恶病质/厌食症、软骨损伤、脑缺血、慢性疲劳综合征、慢性阻塞性肺病、梭菌相关疾病、结肠癌、充血性心力衰竭、结膜炎、冠状动脉旁路搭桥术、冠状再狭窄、克罗恩病、糖尿病、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜病、干眼病、子宫内膜异位症、嗜酸性粒细胞性相关胃肠道疾病、嗜酸性粒细胞性食管炎、家族性感冒自身炎性综合征、家族性地中海热、发烧、纤维肌痛、纤维化疾病、食物过敏、全身性脓疱性银屑病、青光眼、肾小球肾炎、痛风性关节炎、移植物抗宿主病、蠕虫感染、失血性休克、化脓性汗腺炎、痛觉过敏、高-IgD综合征、高尿酸血症、特发性肺纤维化(IPF)、癌症相关疼痛、感染、炎性肠病(IBD)、劳损引起的炎性病症、与角膜移植相关的炎性眼病、炎性疼痛、流感、肠癌、局部缺血、幼年型关节炎、川崎病、肾癌、莱伯氏先天性黑蒙、肝癌、肝病、肺癌、穆-韦二氏综合征、多发性骨髓瘤、多发性硬化症、肌肉骨骼疼痛、骨髓性和其他白血病、心肌功能障碍、肌病、鼻息肉、新生儿发病多系统炎性疾病、神经毒性、非感染性结膜炎、非小细胞肺癌、整形外科手术、骨关节炎、骨质疏松、疼痛、掌跖脓疱病、胰腺癌、帕金森氏病、牙周病、外周血管病、风湿性多肌痛、息肉状脉络膜血管病(PCV)、早产、前列腺癌、原虫感染、银屑病、银屑病关节炎、坏疽性脓皮病、再灌注损伤、呼吸道合胞病毒(RSV)、再狭窄、视网膜脱离、色素性视网膜炎、早产儿视网膜病变(ROP)、类风湿性关节炎、脓毒性休克、镰状细胞性贫血、放射治疗的副作用、鼻窦炎、皮肤癌、睡眠障碍、扭伤、斯塔加特氏病、胃癌、颞下颌关节病、TNF受体相关周期性综合征、移植排斥、外伤、外伤性眼部损伤、2型糖尿病、溃疡性结肠炎和葡萄膜炎。
如本文所公开的，包括在以下实施例中，本公开的抗IL1RAP抗体具有减少、抑制和/或阻断由IL1RAP介导的细胞内信号传导(包括IL-1、IL-33和IL-36信号传导途径)的能力。因此，在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗受试者中IL1RAP介导的疾病或病症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本公开的抗IL1RAP抗体或向有需要的受试者施用治疗有效量的包含本公开的抗IL1RAP抗体和药学上可接受的载剂的药物组合物。
如本文其他地方所公开的，本公开的抗IL1RAP抗体具有减少、抑制和/或阻断IL-1、IL-33和IL-36信号传导途径的能力。因此，本公开还提供了治疗响应于IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导途径的减少、抑制和/或阻断的疾病和病症的方法。
另外，本公开的抗IL1RAP抗体具有减少、抑制和/或阻断由激动剂IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36Γ刺激的细胞内信号传导的能力。因此，本公开还提供了治疗响应于由激动剂IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36γ刺激的细胞内信号传导的减少、抑制和/或阻断的疾病和病症的方法。
IL-1信号传导途径(其也是IL1RAP介导的途径)已经与许多形式的癌症相关。因此，在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本公开的抗IL1RAP抗体或向受试者施用治疗有效量的包含本公开的抗IL1RAP抗体和药学上可接受的载剂的药物组合物。
所有三种IL-1、IL-33和/或IL-36信号传导途径(其也是IL1RAP介导的途径)都与哮喘有关。因此，在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗受试者的哮喘的方法，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本公开的抗IL1RAP抗体或向受试者施用治疗有效量的包含本公开的抗IL1RAP抗体和药学上可接受的载剂的药物组合物。
在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗和/或预防IL1RAP介导的疾病、IL-1、IL-33和IL-36信号传导途径介导的疾病和/或由激动剂IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36α、IL-36β和/或IL-36γ刺激的细胞内信号传导介导的疾病的方法。在这样的治疗方法的实施方案中，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的抗IL1RAP抗体或包含如本文所述的抗IL1RAP抗体的组合物或药物制剂。
根据治疗方法施用抗体、组合物或药物制剂提供了保护受试者免于IL1RAP介导的疾病和/或治疗受试者中IL1RAP介导的疾病的进展的抗体诱导的治疗效果。在一些实施方案中，治疗方法还可包括施用本领域技术人员已知的一种或多种附加治疗剂或治疗以预防和/或治疗IL1RAP介导的疾病或病症。包括施用一种或多种附加药剂的这样的方法可以涵盖组合施用(其中两种或更多种治疗剂包含在相同或分开的制剂中)和分开施用，在这种情况下，抗体组合物或制剂的施用可以在施用附加治疗剂之前、同时和/或之后发生。
在本公开的治疗方法的一些实施方案中，抗IL1RAP抗体或包含抗IL1RAP抗体的药物制剂通过全身递送药剂的任何施用模式施用于受试者，或施用于期望的靶组织。全身施用通常是指将抗体在除了直接进入期望的靶位点、组织或器官之外的位点处施用到受试者中的任何模式，使得抗体或其制剂进入受试者的循环系统并因此经历代谢和其他类似过程。
因此，可用于本公开的治疗方法的施用模式可包括但不限于注射、输注、滴注和吸入。注射施用可包括静脉内、肌内、动脉内、鞘内、心室内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、脑内脊髓和胸骨内注射和输注。
在一些实施方案中，配制抗IL1RAP抗体的药物制剂，使得保护该抗体免于在肠道中失活。因此，治疗方法可包括口服施用制剂。
在一些实施方案中，还提供了包含本公开的抗IL1RAP抗体的组合物或制剂作为药物的用途。另外，在一些实施方案中，本公开还提供了包含抗IL1RAP抗体的组合物或制剂在制造或制备药物、特别是用于治疗、预防或抑制IL1RAP介导的疾病的药物中的用途。在另一个实施方案中，该药物用于治疗、预防或抑制IL1RAP介导的疾病的方法中，该方法包括向患有IL1RAP介导的疾病的个体施用有效量的该药物。在某些实施方案中，该药物还包含有效量的至少一种附加治疗剂或治疗。
在另一个实施方案中，该药物用于治疗、抑制或预防受试者的IL1RAP介导的疾病，包括向受试者施用有效量的该药物以治疗、抑制或预防IL1RAP介导的病。
为了预防或治疗IL1RAP介导的疾病或病症，包含在本公开的组合物和制剂中的抗IL1RAP的适当剂量(当单独使用或与一种或多种其他附加治疗剂组合使用时)将取决于所治疗的具体疾病或病症、疾病的严重性和病程、是否出于预防或治疗目的施用抗体、施用于患者的先前疗法、患者的临床病史和对抗体的反应以及主治医师的决定。包含在本文所述的组合物和制剂中的抗IL1RAP抗体可以适当地一次或在一系列治疗中施用于患者。本文考虑了各种给药方案，包括但不限于在各种时间点的单次或多次施用、推注施用和脉冲输注。
根据疾病的类型和严重性，本公开的制剂中约1pg/kg至15mg/kg的抗IL1RAP抗体是施用于人类受试者的初始候选剂量，无论是例如通过一次或多次分开施用还是通过连续输注。通常，抗体的施用剂量在约0.05mg/kg至约10mg/kg的范围内。在一些实施方案中，可以向患者施用约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任何组合)的一个或多个剂量。
剂量施用可以维持几天或更长时间，这取决于受试者的状况，例如，施用可以持续直至IL1RAP介导的疾病被充分治疗，如通过本领域已知的方法所确定的。在一些实施方案中，可以施用初始较高的负荷剂量，随后施用一个或多个较低的剂量。然而，其他剂量方案可能是有用的。可以通过常规技术和测定法来监测剂量施用的治疗效果的进展。
因此，在本公开的方法的一些实施方案中，抗IL1RAP抗体的施用包括约1mg/kg至约100mg/kg的日剂量。在一些实施方案中，抗IL1RAP抗体的剂量包括至少约1mg/kg、至少约5mg/kg、至少约10mg/kg、至少约20mg/kg或至少约30mg/kg的日剂量。
另外，本公开的抗IL1RAP抗体可用于检测IL1RAP的测定方法中。由于它们以高亲和力结合人IL1RAP的能力，本文公开的抗IL1RAP抗体适用于广泛的测定方法和形式。预期抗IL1RAP抗体可用于任何已知的测定方法，诸如竞争性结合测定法、直接和间接夹心测定法、免疫沉淀测定法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)(参见Sola,1987,MonoclonalAntibodies:A Manual of Techniques，第147-158页，CRC Press,Inc.)，用于IL1RAP的检测和定量。因此，在一些实施方案中，本公开提供了一种用于检测生物样品中IL1RAP的水平的方法，该方法包括使样品与如本文所公开的抗IL1RAP抗体接触的步骤。此外，在一些实施方案中，预期检测生物样品中IL1RAP的水平的方法可用于检测和/或诊断生物样品(例如，来自人类受试者)中IE 1RAP介导的病症或疾病。
实施例
实施例1：抗IL-1RAP抗体的产生
方法
重组靶抗原
由Twist Biosciences(San Francisco,USA)合成编码全长人IL-1RAP(UniProt登录号：Q9NPH3；SEQ ID NO:6)和全长食蟹猴IL-1RAP(登录号：P59822，SEQ ID NO:7)的人密码子优化序列。将人IL-1RAP(残基21至359；SEQ ID NO:1)和食蟹猴IL-1RAP(残基21至359；SEQ ID NO:2)的可溶性胞外区克隆到经修饰的pcDNATM3.1质粒(ThermoFisherScientific，目录号V79020)中，以产生这样的蛋白质，其具有C-末端AvitagTM(AvidityEEC)，随后是10-His标签，在两个标签之间具有Gly3接头序列(缩写为人IL-1RAP-ECD-Avi-His和食蟹猴IL-1RAP-ECD-Avi-His)。
表达载体携带驱动产物分泌的鼠VJ2C前导肽以及OriP序列。对于蛋白质表达，使用聚乙烯亚胺(PEI；Polysciences)将编码人IL-1RAP-ECD-Avi-His和食蟹猴IL-1RAP-ECD-Avi-His(残基21至359；分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)的质粒和非编码质粒共转染到悬浮适应的HEK293-EBNA细胞(ATCC-LGL standards,Teddington,UK；目录号：CRL-10852)中。简言之，在补充有0.1％Pluronic F-68(Gibco)的RPMI 1640(Biowest)中以8百万个细胞/ml制备细胞。然后在37℃处用DNA-PEI混合物转染细胞。转染后四小时，将细胞培养物在补充有酚红和4mM L-谷氨酰胺的293(Sigma Aldrich)中以1:1稀释，并在37℃、5％C02和80％湿度处在轨道振荡下温育5天。表达后，通过离心和过滤制备澄清的上清液，使用1M氢氧化钠将pH调节至7.4(4℃)。将Ni-Sepharose Excell珠(GE Healthcare)添加到澄清的上清液中，并在温和搅拌下在4℃处温育过夜。接着，将混合物装载到Econo柱(Bio-Rad Laboratories)上用于重力流动纯化。首先在pH7.4的IX PBS(1×10CV)中洗涤珠，然后在补充有20mM咪唑的IX PBS(2×10CV)中洗涤珠，并按照分步洗脱方案依次使用补充有40mM(10×1CV)、80mM(15×1CV)、250mM(4×2CV)和500mM(2×2CV)咪唑的pH 7.4的IXPBS洗脱蛋白质。在SDS-PAGE上分析级分并基于表观纯度进行选择。然后合并感兴趣的级分，并在4℃处用pH 7.4的IX PBS透析。通过SDS-PAGE、SE-HPLC和内毒素测量评估蛋白质质量。简言之，在室温处使用Tosoh Bioscience TSKgel G3000SWxl柱(目录号08541，TosohBioscience)进行SE-HPLC，使用0.1M磷酸钠缓冲液、0.15M氯化钠(pH6.8)作为洗脱剂，流速为1ml/min，在具有Waters 2998PDA检测器(Waters)的Waters Alliance 2695HPLC系统上，在214nm和280nm处监测。利用基于鲎变形细胞溶解物(LAL)的测定法，使用来自CharlesRiver的Multi-Cartridge System Endosafe-MCS来确认细菌内毒素水平低于0.5EU/mg。如本文所述的人和食蟹猴IL-1RAP-ECD-Avi-His标记的融合蛋白分别具有SEQ ID NO:1和2。
由Eurofins(Ebersberg,Germany)合成编码鸡IL-1RAP(登录号：XP_422719.4；SEQID NO:3)和鸡/人嵌合体(SEQ ID NO:4和5)的胞外结构域的人密码子优化序列。将鸡IL-1RAP(残基139至478；SEQ ID NO:3)和鸡/人IL-1RAP嵌合体(IL-1RAP-ECD(ggD1(S139-P246)-hsD2(V132-V233)-hsD3(V234-E359))-Avi-His和IL-1RAP-ECD(ggD1(S139-H260)-ggD2(S261-V349)-hsD3(V243-E359))-Avi-His；分别为SEQ ID NO:4和5)的可溶性胞外区克隆到经修饰的pcDNATM3.1质粒(ThermoFisher Scientific，目录号V79020)中，以产生这样的蛋白质，其具有C-末端AvitagTM(Avidity LLC)，随后是10-His标签，在两个标签之间具有Gly3接头序列(缩写为ggIL-1RAP-ECD-Avi-His；IL-1RAP-ECD(ggDl(S139-P246)-hsD2(V132-V233)-hsD3(V234-E359))-Avi-His和IL-1RAP-ECD(ggD1(S139-H260)-ggD2(S261-V349)-hsD3(V243-E359))-Avi-His)。表达载体还携带驱动产物分泌的鼠VJ2C前导肽以及OriP序列。对于蛋白质表达，使用聚乙烯亚胺(PEI；Polysciences)将上述质粒和非编码质粒共转染到悬浮适应的HEK293-EBNA细胞(ATCC-LGL standards,Teddington,UK；目录号：CRL-10852)中。简言之，在补充有0.1％Pluronic F-68(Gibco)的RPMI 1640(Biowest)中以8百万个细胞/ml制备细胞。然后在37℃处用DNA-PEI混合物转染细胞。转染后四小时，将细胞培养物在补充有酚红和4mM E-谷氨酰胺的293(Sigma Aldrich)中以1:1稀释，并在37℃、5％C02和80％湿度处在轨道振荡下温育5天。除了在补充有500mM咪唑的IXPBS中进行的洗脱步骤之外，重组蛋白的纯化遵循与上述步骤相同的步骤。通过SDS-PAGE、SE-HPLC和内毒素测量评估蛋白质质量，如上所述。如本文所述的鸡IL-1RAP-ECD-Avi-His、IL-1RAP-ECD(ggDl(S139-P246)-hsD2(V132-V233)-hsD3(V234-E359))-Avi-His和IL-1RAP-ECD(ggD1(S139-H260)-ggD2(S261-V349)-hsD3(V243-E359))-Avi-His分别具有SEQID NO:3、4和5。
重组细胞系
将全长人IL-1RAP(UniProt序列ID Q9NPH3；残基1至570；SEQ ID NO:6)或全长食蟹猴IL-1RAP(UniProt序列ID P59822；残基1-570；SEQ ID NO:7)的人密码子优化序列克隆到经修饰的pcDNATM3.1质粒(ThermoFisher Scientific，目录号V79020)中。该载体还含有增强的绿色荧光蛋白(eGFP)和嘌呤霉素抗性基因(具有插入的核糖体内进入位点(IRES)元件)。对于蛋白质表达，使用聚乙烯亚胺(PEI；Polysciences)将上述质粒转染到悬浮适应的CHO-S细胞(cGMP banked,Invitrogen，目录号A1136401)中。简言之，在CD CHO(Gibco)中以2百万个细胞/ml制备细胞。然后在37℃处用DNA-PEI混合物转染细胞。转染后四小时，将细胞培养物在补充有4mM E-谷氨酰胺的PowerCHO 2(Lonza)中以1:1稀释，并在37℃、5％C02和80％湿度处在轨道振荡下温育。通过用荧光显微镜监测eGFP报告蛋白表达来评估人或食蟹猴IL-1RAP的表达。如本文所述的人和食蟹猴IL-1RAP-ECD-Avi-His标记的融合蛋白分别具有SEQ ID NO:6和7。
文库生成
本文使用的文库来自合成来源，其多样性限于重链(CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)和固定的VK3-15/JK1轻链。该文库含有基于VH1-69、VH3-23、VH3-15和VH3-53抗体种系的4个不同的子文库。已经使用三聚体寡核苷酸将CDR随机化。为每个子文库设计用于使CDR-H1和CDR-H2多样化的引物，并分别编码Rabat残基27-35和50-58处的种系特异性天然存在的多样性。使用编码15个CDR-H3长度(6-20)和Kabat残基95-102处的长度特异性天然存在的多样性的寡核苷酸库将CDR-H3随机化。将多样化的scFv片段合并以模拟天然CDR-H3长度分布并克隆到pNGLEN(内部修饰的pUC119噬菌粒载体)中，并将所得连接反应物电穿孔到大肠杆菌(E.coli)TG1细胞中。每个子文库具有介于1.2×1010和1.7×1010之间的多样性，四个子文库达到5.6×1010的总多样性。
文库选择
将来自每个子文库的纯化的噬菌体颗粒合并(2.5×1011个噬斑形成单位/子文库)，并在室温(RT)处用含有3％(w/v)脱脂乳的磷酸盐缓冲盐水(PBS)(3％MPBS)封闭1小时。将Magnetic蛋白G珠(Invitrogen，目录号10003D)和200nM人IgG1在3％MPBS中混合并在室温处温育1小时。将封闭的噬菌体在室温处针对IgG1包被的珠取消选择1小时。然后将噬菌体与50nM重组人IL-1RAP Fc融合蛋白(Acrobiosystems，目录号ILP-H5256)在室温处温育2小时。将抗原结合噬菌体在室温处捕获在蛋白G珠上30分钟，并用含有0.1％(v/v)Tween的PBS(PBS-Tween 0.1％)洗涤珠五次，并用PBS洗涤两次。将噬菌体在室温处用100mM三乙胺洗脱10分钟，并使用Tris-HCl 1M pH 8中和。使用洗脱的噬菌体来感染10ml指数生长的大肠杆菌TG1细胞。使感染的细胞在2YT培养基中在37℃和100转/分钟(RPM)下生长1小时，然后铺展在2YTAG(补充有100pg/ml氨苄青霉素和2％葡萄糖的2TY培养基)琼脂板上并在30℃处温育过夜(ON)。将菌落从板上刮下到10ml 2YT中并添加15％甘油(v/v)，在-80℃处储存。使来自甘油储备液的TG1细胞在2YTAG培养基中在37℃和240RPM下生长直至600nm处的OD达到0.5。然后在37℃和100RPM下使用10的感染复数(MOI)用M13K07辅助噬菌体超感染细胞1小时。然后将培养基更换为2YTAK(补充有100pg/ml氨苄青霉素和50pg/ml卡那霉素的2YT培养基)，并将细胞在30℃和280RPM下进一步培养过夜。第二天，将10pl含有噬菌体的无细胞上清液用于随后一轮的选择。使用相同的实验设置进行总共三轮的选择。
通过SPR的scFv筛选
使用表面等离子体共振(SPR)分析来确认scFv克隆的特异性结合活性。在室温处使用Biacore 2000控制软件v3.2在Biacore 2000仪器(Biacore,GE Healthcare)上进行测量，并用来自相同制造商的Biacore T200评估软件(v3.1)进行分析。将重组人IL-1RAP Fc融合蛋白(Acrobiosystems，目录号ILP-H5256)和重组小鼠IL-1RAP Fc融合蛋白(SinoBiologicals，目录号52657-M02H)分别在pH 4.5的乙酸盐缓冲液(Biacore,GEHealthcare，目录号BR100350)中稀释至200nM的最终浓度，随后分别固定在Fc2和Fc4上，使用胺偶联试剂盒按照制造商的建议在CM5传感器芯片(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100012)上达到约一千个共振单位(缩写为RU)的水平。使用HBS-EP(Biacore,GEHealthcare，目录号BR100188)作为运行缓冲液。将过滤的周质提取物直接注射到共价偶联的人IL-1RAP Fc和小鼠IL-1RAP Fc CM5传感器芯片上。将样品以30μl/min的流速注射到流动路径1、2、3和4上(流动路径1和3用作参照)3min，随后在运行缓冲液中解离5min。在每次结合事件后，用10mM甘氨酸pH 1.5溶液(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100354)以30μl/min注射1min使表面再生。每次测量包括零浓度样品以及无关的scFv周质提取物，分别用于参考和特异性。
通过流式细胞术的scFv筛选
通过流式细胞术评估scFv克隆与瞬时表达人IL-1RAP蛋白(SEQ ID NO.6)或食蟹猴IL-1RAP蛋白(SEQ ID NO.7)的CHO细胞的结合。挑取来自第三轮筛选的各个大肠杆菌菌落，并在96孔深孔板中在补充有100pg/ml氨苄青霉素和0.1％葡萄糖的2TY培养基中生长。通过添加0.02mM的IPTG并在30℃和250RPM下温育过夜来诱导scFv表达。将细胞离心并通过将细菌沉淀重悬浮于TES缓冲液(50mM Tris-HCl pH 8；1mM EDTA pH 8；20％蔗糖)中，然后在冰上温育30分钟获得周质提取物。通过离心除去细胞碎片，并将含有scFv的上清液用于流式细胞术实验。将表达IL-1RAP和未转染的CHO细胞以105个细胞/孔的密度接种在微量滴定板中。接下来，将板离心以除去细胞上清液，并将预先在含有3％(w/v)牛血清白蛋白(PBS-BSA 3％)的PBS中以1:1稀释的100pl周质提取物添加到每个孔中，并将板在4℃处进一步温育30分钟。然后将细胞用PBS-BSA 3％洗涤，并与在PBS-BSA 3％中以1:200稀释的生物素-鸡抗c-Myc抗体(Gallus Immunotech目录号ACMYC-B)在4℃处温育30分钟。接下来，将细胞用PBS-BSA 3％洗涤，并与在PBS-BSA 3％中以1:100稀释的链霉亲和素APC(eBioscience，目录号17-4317)在4℃处温育30分钟。最后，使用FACSCalibur流式细胞仪(BD biosciences)测量细胞荧光。
通过ELISA的scFv竞争
通过ELISA评估scFv克隆与抗IL-1RAP抗体竞争的能力。将人IL-1RAP Fc融合蛋白(Acrobiosystems，目录号ILP-H5256)在PBS中以1.5μg/ml在4℃处包被到96孔微量滴定板上过夜。然后用PBS-Tween 0.05％洗涤板三次，并用PBS-BSA 3％在室温处封闭1小时。封闭和洗涤后，将50μl 10ug/ml的Fab添加到板中，并在室温处温育30分钟。在不洗涤的情况下，添加50pl周质提取物，并将板在室温处进一步温育30分钟。然后洗涤板，添加50pl在PBS-BSA 3％中以1:5000稀释的生物素-鸡抗c-Myc抗体(Gallus Immunotech目录号ACMYC-B)，在室温处保持1小时。洗涤后，将链霉亲和素HRP以1/8000稀释在PBS-BSA 0.3％中，并在室温处添加到板中保持30分钟。然后洗涤板，并在室温处使用TMB(Sigma)显色测定5分钟。用H2SO4(Sigma)终止反应后，使用分光光度计测量450nm处的吸光度。
Fab和IgG1 LALA表达
编码不同抗体恒定区的cDNA由GENEART AG(Regensburg,Germany)进行基因合成，并使用标准分子生物学技术进行修饰。将PCR产物用合适的DNA限制酶消化，纯化并连接在携带CMV启动子和牛激素多腺苷酰化(多(A))的经修饰的pcDNA3.l质粒(Invitrogen)中。表达载体还携带oriP和鼠VJ2C前导肽，oriP是Epstein-Barr病毒的质粒复制的起点，而鼠VJ2C前导肽用于分泌编码的多肽链。为了将scFv文库克隆重新格式化为人IgG1 Fab片段或人IgG1 LALA(具有L234A和L235A取代的人IgG1，EU编号)，将其噬菌体文库载体中的每个scFv克隆用于通过PCR扩增其单独的VH cDNA，接下来将VH PCR产物克隆到上述经修饰的pcDNA 3.1载体中编码人IgG1重链CHI结构域的cDNA的上游或编码人IgG1重链CHI、铰链、CH2(L234A/L235A)和CH3结构域的cDNA的上游，而将固定的VK3-15/JK1轻链(SEQ IDNO.71)克隆到上述经修饰的pcDNA 3.1载体中编码人κ恒定轻链结构域的cDNA的上游。
对于Fab和IgG1 LALA表达，使用PEL将等量的重链和轻链载体共转染到悬浮适应的HEK293-EBNA细胞(ATCC，目录号CRL-10852)中，通常，在补充有0.1％Pluronic F-68的RPMI中以8百万个细胞/ml制备细胞。然后用DNA-PEI混合物转染细胞。转染后四小时，将细胞培养物在补充有酚红和4mM L-谷氨酰胺的293中以1:1稀释，并在37℃、5％C02和80％湿度处在轨道振荡下温育5天。通过离心然后过滤制备含有重组蛋白的无细胞培养物上清液，并用于进一步纯化。使用Capture SelectTMIgG-CH1亲和基质(ThermoScientific，目录号194320050)纯化Fab蛋白，并使用蛋白A亲和树脂(Repligen，目录号CA-PRI-0100)纯化IgG1LALA蛋白。对于这两种情况，将亲和树脂添加到过滤的培养物上清液中并在温和混合下在4℃处温育过夜。第二天，将树脂珠收集到Poly-Prep柱(Bio-Rad Laboratories)中，用PBS洗涤，并用酸性缓冲液(通常为甘氨酸0.1M pH3)洗脱重组蛋白。在用1/10体积的Tris-HCl pH 8中和后，将制剂缓冲液交换到PBS中。
Fab对IL-RAP的结合亲和力
使用表面等离子体共振(SPR)测量Fab片段对人、食蟹猴和/或小鼠IL-1RAP的结合亲和力。在25℃处在Biacore T200仪器(Biacore,GE Healthcare)上测量亲和力并用Biacore T200评估软件(v3.1)分析。使用商业胺偶联试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100050)在与抗人IgG Fc(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100839)偶联的SeriesS CM5传感器芯片(Biacore T200,Biacore,GE Healthcare，目录号BR100530)上或在Series SBiotinCAPture芯片(Biacore,GE Healthcare，目录号28920234)上进行测量。用商业上可获得的重组人IL-1RAP Fc融合蛋白(Acrobiosystems，目录号ILP-H5256)和重组小鼠IL-1RAP Fc融合蛋白(Sino Biologicals，目录号52657-M02H)或用内部产生的生物素化重组食蟹猴IL-1RAP-avi-his蛋白(SEQ ID NO.2)进行SPR测量。
通过固定IL-1RAP并使用Fab片段作为分析物来评估对人、食蟹猴和小鼠IL-1RAP的亲和力。在与抗人IgG Fc偶联的Series S CM5传感器芯片的fc2上捕获约100RU的人或小鼠IL-1RAP Fc融合蛋白，而在Series SBiotinCAPture芯片的fc2上捕获约150RU的生物素化食蟹猴IL-1RAP蛋白。将Fab片段以7.8nM至500nM的不同浓度在HBS-EP+缓冲液(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100669)中以单循环动力学以30μl/min的流速注射在fc1和fc2(fc1用作参照)上持续3分钟。监测解离5分钟。在每个循环后，分别用60pl提供有抗人IgGFc捕获试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100839)或BiotinCAPture试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号28920234)的再生溶液使表面再生。使用1:1朗缪尔动力学拟合模型处理实验数据。测量包括用于参考的零浓度样品。Chi2值、U值和残值用于评估实验数据与个体结合模型之间拟合的质量。
IL-1R1/IL-1β/IL-1RAP阻断测定
通过SPR评估Fab片段阻断IL-1RAP和IL-1R1/IL-1β受体/细胞因子复合体之间相互作用的能力。使用商业胺偶联试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100050)将约50RU的人IL-1RAP Fc融合蛋白(Acrobiosystems，目录号ILP-H5256)固定在预先用抗人IgGFc(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100839)包被的Series S CM5传感器芯片的fc2上。将Fab片段以300nM在HBS-EP+中注射在fc1和fc2(fc1用作参照)上4分钟，以达到固定化人IL-1RAP的饱和，随后第二次注射50nM的IL-1R1(R&D Systems，目录号296-IR-100)、l00nM的IL-1β(Peprotech，目录号200-0IB)和300nM的Fab片段在HBS-EP+缓冲液中的预混合溶液2分钟。在每个循环后，用60pl提供有抗人IgG Fc捕获试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100839)的再生溶液使表面再生。
结构域作图
通过SPR结合测定法鉴定由IgG1 LALA克隆靶向的IL-1RAP的结构域。使用商业胺偶联试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100050)将约150RU的IgG1 LALA固定在预先用抗人IgG Fc(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100839)包被的Series S CM5传感器芯片的fc2上。将包含与IL-1RAP的人结构域2和3融合的IL-RAP的鸡结构域1的人IL-1RAP-avi-his、鸡IL-1RAP-avi-his嵌合蛋白(gg-hs-hs-IL-1RAP-ECD-avi-his)和包含与IL-1RAP的人结构域3融合的IL-1RAP的鸡结构域1和2的嵌合蛋白(gg-gg-hs-IL-1RAP-avi-his)以50nM在HBS-EP+中单独注射在fc1和fc2(fc1用作参照)上3分钟，随后在HBS-EP+缓冲液中解离5分钟。在每个结合事件后，用60pl提供有抗人IgG Fc捕获试剂盒(Biacore,GEHealthcare，目录号BR100839)的再生溶液使表面再生。1
表位分箱
使用生物层干涉测量法(BLI)评估Fab片段对人IL-1RAP的表位分箱。在OctetRED96e仪器(ForteBio)上进行测量，并使用Data Analyis HT 11.1版软件(Octet,ForteBio)进行分析。将内部产生的生物素化人IL-1RAP-avi-his蛋白(SEQ ID NO.1)以1pg/ml加载到链霉亲和素SA生物传感器(ForteBio，目录号15-5019)上的动力学缓冲液(ForteBio，目录号18-1105)中5分钟。将固定有生物素化人IL-1RAP抗原的链霉亲和素生物感应器浸入200nM Fab1(饱和Fab)的溶液中10分钟，随后连续浸入200nM Fab 1和200nMFab 2(竞争Fab)的混合溶液中5分钟。所有步骤均在25℃和1000RPM振荡下进行。在每个循环前用生物素化人IL-1RAP固定新鲜的链霉亲和素生物传感器。
结果
对通过SPR显示与人IL-1RAP Fc融合蛋白特异性结合以及与人和食蟹猴IL-1RAPCHO细胞特异性结合但通过SPR显示不与小鼠IL-1RAP Fc融合蛋白结合的scFv克隆进行测序，并将独特的序列重新格式化为Fab片段以用于进一步表征。对通过SPR显示与人IL-1RAPFc融合蛋白和小鼠IL-1RAP Fc融合蛋白特异性结合，以及显示与人和食蟹猴IL-1RAP CHO细胞特异性结合并与已知阻断IL-1RAP与受体/细胞因子复合物IL-1R1/IL-P之间的相互作用的抗IL-1RAP抗体竞争的scFv克隆进行测序，并将独特的序列也重新格式化为Fab片段以用于进一步表征。生物化学表征包括结合亲和力的评估，使用IL-1R1/IL-1β/IL-1RAP阻断测定法进行功能评估，并且使用结构域作图和表位分箱测定法确定表位靶向。
Fab对IL-RAP的结合亲和力
二十四个Fab克隆显示出对人IL-1RAP的结合亲和力，如通过SPR确定的平衡解离常数(KD)低于1μM。克隆抗IL-1RAP-UCP02-C8(下文也称为抗IL-1RAP-C8)显示出对人IL-1RAP(2.2nM)和食蟹猴IL-1RAP(2.2nM)的最高亲和力，但不结合小鼠IL-1RAP。与克隆抗IL-1RAP-C8(分别为2.8nM和2.2nM)相比，克隆抗IL-1RAP-UCP02-C3(下文也称为抗IL-1RAP-C3)显示出对小鼠IL-1RAP的高亲和力(0.63nM)和对人IL-1RAP的相似的亲和力。然而，抗IL-1RAP-C3显示出对食蟹猴IL-1RAP(110nM)的亲和力比对人IL-1RAP(2.8nM)的亲和力低约40倍。所提及的克隆的重链序列识别编号和结合亲和力报告于表1中。
表1：开发的Fab克隆及其对人、食蟹猴和小鼠IL-1RAP的相对亲和力的概述
NB＝没有可检测的结合
IL-1RAP/IL-1R1/IL-1β阻断测定法
使用Octet Bio-Layer干涉测量法，在阻断人IL-1RAP/IL-1R1/IL-1β复合物形成时，测试通过SPR测量的对人IL-1RAP Fc融合蛋白的KD低于100nM的Fab片段。确认所有测试的Fab片段阻断人IL-1RAP和IL-1R1/IL-1β受体/细胞因子复合物之间的相互作用。图1中示出了用克隆抗IL-1RAP-C8和抗IL-1RAP-C3阻断人IL-1RAP和IL-1R1/IL-1β受体/细胞因子复合物之间的相互作用。克隆抗IL-1RAP-UCP05-El(下文也称为抗IL-1RAP-El)用作非阻断剂对照。
结构域作图
为了了解抗IL-1RAP-C8作用机制并验证抗IL-1RAP-C3克隆作为关于表位的相关小鼠替代物，研究了两种抗体靶向的IL-1RAP的结构域。如表1所述，抗IL-1RAP-C3 Fab以与抗IL-1RAP-C8 Fab类似的亲和力结合人IL-1RAP。这种结合特性用于比较使用人-鸡IL-1RAP嵌合体的两种抗体的表位。如图2所示，抗IL-1RAP-C8和抗IL-1RAP-C3均靶向IL-1RAP的结构域2，已知其参与IL-1、IL-33和IL-36、它们各自的受体与IL-1RAP之间的相互作用。该实验提供了对抗IL-1RAP-C8和抗IL-1RAP-C3作为其小鼠替代物的阻断效力的洞察。
表位分箱
为了进一步验证抗IL-1RAP-C3作为抗IL-1RAP-C8的相关小鼠替代物，使用人IL-1RAP使两种抗体彼此竞争。该实验示于图3中，并示出两种抗体彼此竞争并识别IL-1RAP上的重叠表位。使用抗IL-1RAP-El作为非竞争对照。
实施例2：抗IL-1RAP-C8克隆的优化
重组靶抗原
重组人IL-1RAP-ECD(S21-E359)-avi-his蛋白(SEQ ID NO.1)(下文也称为重组人IL-1RAP-avi-his蛋白)和重组食蟹猴IL-1RAP-ECD(S21-E359)-avi-his蛋白(SEQ IDNO.2)(下文也称为重组食蟹猴IL-1RAP-avi-his蛋白)如实施例1所述在内部产生。
文库生成和选择
通过在CDR的重链中引入多样性来产生五个亲和力成熟文库。CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3分别使用Rabat残基27-35、50-58、95-101减去2处的简并NNK密码子寡核苷酸(其中N是四种脱氧核糖核苷酸中的任一种，K是G或T)随机化。使用含有5个连续简并密码子的重叠寡核苷酸库产生每个文库。CDR-H1和CDR-H2也分别使用位置Rabat 27-35和50-58处的三聚体寡核苷酸多样化。将所得的五个文库PCR产物克隆到pNGLEN(内部修饰的pUC119噬菌粒载体)中，并将所得的连接反应物电穿孔到大肠杆菌TG1细胞中。将转化的细胞铺展在2YTAG板上，并在30℃处温育过夜。将菌落从板上刮下到10ml 2YT培养基中并添加15％甘油(最终浓度)，在-80℃处储存。通过用三分之v/v的20％PEG-6000、2.5M NaCl的两个沉淀步骤产生和纯化噬菌体，并将其重悬浮于PBS中。
如实施例1所述进行噬菌体展示选择，并进行以下修饰。独立地选择每个亲和力成熟文库。将纯化的噬菌体颗粒(1012个噬斑形成单位)和磁性DynabeadsTMMyOneTM链霉亲和素Cl珠(Invitrogen，目录号65002)在室温处用3％MPBS封闭1小时。将噬菌体在室温处针对预先封闭的珠取消选择1小时。将取消选择的噬菌体与内部产生的5nM、0.5nM和0.1nM生物素化重组人IL-1RAP-avi-his蛋白(SEQ ID NO.1)分别温育第1轮、第2轮和第3轮。温育1小时后，在第2轮和第3轮期间，在室温处添加内部产生的1pM重组人IL-1RAP-avi-his蛋白(非生物素化的，SEQ ID NO.1)3小时。将抗原结合噬菌体在室温处捕获在链霉亲和素珠上30分钟，并用PBS-Tween 0.1％洗涤珠五次，并用PBS洗涤两次。
通过SPR的亲和力筛选
SPR分析用于确认新scFv克隆的特异性结合活性，并根据它们的结合特性对阳性克隆进行分级。在25℃处使用Biacore T200控制软件v2.0在Biacore T200仪器(Biacore,GE Healthcare)上进行测量，并用来自相同制造商的Biacore T200评估软件(v3.1)进行分析。将内部产生的重组人IL-1RAP-avi-his蛋白(SEQ ID NO.1)或内部产生的重组食蟹猴IL-1RAP-avi-his蛋白(SEQ ID NO.2)在pH 4.5的乙酸盐缓冲液(Biacore,GE Healthcare，目录号BR-1003-50)中稀释至200nM的最终浓度，随后分别固定在Fc2或Fc4上，使用胺偶联试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100050)按照制造商的建议在Series S CM5传感器芯片(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100530)上达到约一千个共振单位(缩写为RU)的水平。使用HBS-EP+(Biacore,GE Healthcare，目录号BRI00669)作为运行缓冲液。将过滤的周质提取物直接注射到共价偶联的人IL-1RAP和食蟹猴IL-1RAP CM5传感器芯片上。将样品以30μl/min的流速注射到流动路径1、2、3和4上(流动路径1和3用作参照)3min，随后在运行缓冲液中解离5min。在每次结合事件后，用10mM甘氨酸pH 1.5(Biacore,GEHealthcare，目录号BR100354)以30μl/min注射1min使表面再生。每次测量包括零浓度样品以及无关的scFv周质提取物，分别用于参考和特异性。然后如实施例1所述将显示最佳结合特性的scFv克隆重新格式化为Fab片段。如实施例1所述在经修饰的Fab注射浓度范围(0.08nM至50nM)内测量Fab对人IL-1RAP和食蟹猴IL-1RAP的亲和力。
人IgG1 LALA表达
在CDR重组后对人和食蟹猴IL-1RAP显示最高亲和力的抗IL-1RAP克隆以人IgG1LALA形式表达，如实施例1中所述。为了除去克隆抗IL-1RAP-C8-RecC(SEQ ID NO.54)的CDRH3(Rabat)中已知的潜在异构化位点(DS)，将D100和S100a(Rabat)残基分别用AA、AS、DA、ES或ET替换为5条另外的IgG1 LALA重链(SEQ ID NO.55-59)。使用标准分子技术通过定点诱变构建编码抗IL-1RAP-C8-RecC-AA、抗IL-1RAP-C8-RecC-AS、抗IL-1RAP-C8-RecC-DA、抗IL-1RAP-C8-RecC-ES和抗IL-1RAP-C8-RecC-ET的不同抗体可变重链的cDNA，并将其克隆到编码人IgG1链的CHI、CH2(L234A/L235A)和CH3结构域的cDNA上游的经修饰的pcDNA 3.1载体中，如实施例1所述。如实施例1所述或如下所述表达和纯化人IgG1 LALA分子。为了表达抗IL1-RAP-C8-RecC-ES-IgG1-LALA(SEQ ID NO:71和72)，使用聚乙烯亚胺(PEI；Polysciences)将等量的每种工程化链载体和编码Epstein-Barr病毒(EBV)核抗原-1(EBNA-1)的载体共转染到CHO-S细胞(cGMP banked,Invitrogen，目录号A1136401)中。通常，在CD-CHO培养基(Gibco)中以8百万个细胞/ml制备细胞。然后在37℃处用DNA-PEI混合物转染细胞。转染后四小时，将细胞培养物在补充有4mM L-谷氨酰胺的PowerCHOTM2(Lonza)中以1:1稀释，并在32℃、5％C02和80％湿度处在轨道振荡下温育14天。通过离心然后过滤制备含有重组蛋白的澄清细胞培养物上清液，并用于进一步纯化。在室温处使用KANEKA KanCapATM树脂(Kaneka)通过重力流动模式纯化抗体。将KANEKA KanCapATM珠添加到澄清的上清液中，并在温和搅拌下在4℃处温育过夜。接着，将混合物装载到Poly-Prep柱(Bio-RadLaboratories)上用于重力流动纯化。首先在pH 7.4的IX PBS(1×10CV)中洗涤珠，并如下所述洗脱蛋白质。对于抗IL1-RAP-C8-RecC-ES-IgG1-LALA(SEQ ID NO:71和72)，使用分步洗脱方案依次使用pH 4.3、pH 4.1、pH 3.9和pH 3.5的50mM乙酸钠洗脱蛋白质。在SDS-PAGE上分析收集的级分并基于表观纯度进行选择。然后合并感兴趣的级分，并在4℃处用pH 7.4的IX PBS透析。在0.2pm过滤器上无菌过滤后，将纯化的抗体储存在-80℃。通过SDS-PAGE(NuPAGE Bis-Tris 4-12％丙烯酰胺，Invitrogen AG,Basel,Switzerland)和cGE在ProteomeLab PA 800(Beckman Coulter International S.A.,Nyon,Switzerland)上在还原和非还原条件下进一步分析它们以评估纯度。为了测定单体和聚集体形式的含量，通过SE-HPLC分析蛋白质。简言之，在室温处使用Tosoh Bioscience TSRgel G3000SWxl柱(目录号08541，Tosoh Bioscience)进行SE-HPLC，使用0.1M磷酸钠缓冲液、0.15M氯化钠(pH 6.8)作为洗脱剂，流速为1ml/min，在具有Waters2998PDA检测器(Waters)的Waters Alliance2695HPLC系统上，在214nm和280nm处监测。利用基于鲎变形细胞溶解物(LAL)的测定法，使用来自Charles River的Multi-Cartridge System Endosafe-MCS来确认细菌内毒素水平低于0.5EU/mg。通常，对于纯化的抗体，聚集形式的含量低于5％并且通过SE-HPLC测量的纯度高于95％。
人IgG1 LALA对人和食蟹猴IL-1RAP的结合亲和力
使用表面等离子体共振(SPR)来测量人IgG1 LALA分子对人和食蟹猴IL-1RAP的结合亲和力。在25℃处在Biacore T200仪器(Biacore,GE Healthcare)上测量亲和力并用Biacore T200评估软件(v3.1)分析。使用商业胺偶联试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100050)在与抗人IgG Fc(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100839)偶联的SeriesS CM5传感器芯片(Biacore T200,Biacore,GE Healthcare，目录号BR100530)上进行测量。用内部产生的重组人IL-1RAP-avi-his蛋白(SEQ ID NO.1)或内部产生的重组食蟹猴IL-1RAP-avi-his蛋白(SEQ ID NO.2)进行SPR测量。通过固定抗IL-1RAP IgG1 LALA分子并使用IL-1RAP蛋白作为分析物来评估对人和食蟹猴IL-1RAP的亲和力。在与抗人IgG Fc偶联的Series S CM5传感器芯片的fc2上捕获了约150RU的人IgG1 LALA。将重组人IL-1RAP-avi-his蛋白或重组食蟹猴IL-1RAP-avi-his蛋白以0.14至100nM的不同浓度在HBS-EP+缓冲液(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100669)中以多循环动力学以30μl/min的流速注射在fcl和fc2(fcl用作参考)上持续3分钟。监测解离12分钟。在每个循环后，用60pl提供有抗人IgG Fc捕获试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100839)的再生溶液使表面再生。使用1:1朗缪尔动力学拟合模型处理实验数据。测量包括用于参考的零浓度样品。Chi2值、U值和残值用于评估实验数据与个体结合模型之间拟合的质量。
结果
抗IL-1RAP-C8克隆(重链SEQ ID NO.14)的亲和力成熟涉及五个单独文库中CDR-H1(Rabat位置27-35)、CDR-H2(Rabat位置50-58)和CDR-H3(Rabat位置95-101减去2)的多样化。分离如通过SPR测量的具有比亲本抗IL-1RAP-C8克隆更慢解离速率的scFv克隆。将scFv克隆重新格式化并表达为Fab片段并如实施例1所述测量对人和食蟹猴IL-1RAP的亲和力。根据该评估，将源自CDR-H1和CDR-H2文库的选择的突变组合用于进一步的解离速率改善；一种称为Fab克隆抗IL-1RAP-C8-RecC的克隆对人IL-1RAP具有最高的亲和力。所提及的克隆对人IL-1RAP的重链序列识别编号和结合亲和力报告于表2中。
表2：开发的Fab克隆及其对人IL-1RAP的相对亲和力的概述
在人IgG1 LALA主链中表达克隆抗IL-1RAP-C8-RecC的一系列5种突变形式，以评估CDRH3(Rabat)中潜在异构化位点(DS)的去除。克隆抗IL-1RAP-C8-RecC-ES显示出与亲本克隆抗IL-1RAP-C8-RecC相似的对人IL-1RAP和食蟹猴IL-1RAP的亲和力，并被进一步表征。重链序列标识号以及从至少两个独立实验(当适用时)计算的所述克隆的人IL-1RAP和食蟹猴IL-1RAP的平均结合动力学常数和标准偏差报告于表3a中。表3b中提供了所述克隆的CDR序列。抗IL-1RAP-C8-RecC-ES IgG1 LALA对人和食蟹猴IL-1RAP的SPR结合传感图的代表性示例示于图4中。
表3a：IgG1-LALA对人和食蟹猴IL-1RAP的SPR结合亲和力
表3b.Rabat、Chothia和IMGT形式的CDR序列
实施例3：抗IL-1RAP-C3克隆的优化
重组靶抗原
重组人IL-1RAP-ECD(S21-E359)-avi-his蛋白(SEQ ID NO.1)(下文称为重组人IL-1RAP-avi-his蛋白)如实施例1所述在内部产生。
文库生成和选择
如实施例2所述进行抗IL-1RAP-C3克隆的亲和力成熟，并进行以下修饰。将纯化的噬菌体颗粒(1012个噬斑形成单位)和磁性Protein G珠(Novex,Lifetechnologies)在室温处用3％MPBS封闭1小时。在室温处将200nM人IgG1捕获在封闭的蛋白G珠上30分钟。接下来，将封闭的噬菌体在室温处针对IgG1包被的珠取消选择1小时。然后将取消选择的噬菌体与1nM、0.5nM和0.1nM的小鼠IL-1RAP-Fc(Sino Biological，目录号52657-M02H)分别温育第1轮、第2轮和第3轮。温育1小时后，在第2轮和第3轮期间，在室温处添加内部产生的1pM重组人IL-1RAP-avi-his蛋白(非生物素化的，SEQ ID NO.1)3小时。将抗原结合噬菌体在室温处捕获在蛋白G珠上30分钟，并用PBS-Tween 0.1％洗涤珠五次，并用PBS洗涤两次。
通过SPR的亲和力筛选
SPR分析用于确认新scFv克隆的特异性结合活性，并根据它们的结合特性对阳性克隆进行分级。如实施例2所述进行测量，并进行以下修饰。将重组小鼠IL-1RAP-Fc(SinoBiological，目录号52657-M02H)在pH 4.5的乙酸盐缓冲液(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100350)中稀释至200nM的最终浓度，随后固定在fc2上，使用胺偶联试剂盒按照制造商的建议在Series S CM5传感器芯片(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100530)上达到约1500RU的水平。将过滤的周质提取物直接注射到流动路径1和2上的共价偶联的小鼠IL-1RAP CM5传感器芯片上(流动路径1用作参照)。如实施例1所述，将显示最佳结合特性的scFv克隆重新格式化为Fab片段。
如实施例1所述测量Fab片段对小鼠IL-1RAP的亲和力，并进行以下修饰。使用商业胺偶联试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100050)在与抗人IgG Fc(Biacore,GEHealthcare，目录号BR100839)偶联的Series S CM5传感器芯片(Biacore T200,Biacore,GE Healthcare，目录号BR100530)上进行测量。用商业上可获得的重组小鼠IL-1RAP Fc融合蛋白(Sino Biologicals，目录号52657-M02H)进行SPR测量。通过固定小鼠IL-1RAP-Fc并使用Fab片段作为分析物来评估对小鼠IL-1RAP的亲和力。在与抗人IgG Fc偶联的Series SCM5传感器芯片的fc2上捕获了约60RU的小鼠IL-1RAP Fc融合蛋白。将Fab片段以0.04nM至5nM的不同浓度在HBS-EP+缓冲液(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100669)中以单循环动力学以30μl/min的流速注射在fc1和fc2(fc1用作参照)上持续3分钟。监测解离10分钟。
小鼠IgG2a LALA表达
对于抗IL-1RAP-C3-A3-mmIgG2a-LALA(SEQ ID NO:73和74)的表达，使用聚乙烯亚胺(PEI；Poly sciences)将等量的每种工程化链载体共转染到悬浮适应的HEK293-EBNA细胞(ATCC-LGL standards,Teddington,UK；目录号：CRL-10852)中。通常，在补充有0.1％Pluronic F-68(Gibco)的RPMI 1640(Biowest)中以8百万个细胞/ml制备细胞。然后在37℃处用DNA-PEI混合物转染细胞。转染后四小时，将细胞培养物在补充有酚红或BalanCDHEK293(Irvine Scientific)和4mM L-谷氨酰胺的293中以1:1稀释，并在37℃、5％C02和80％湿度处在轨道振荡下温育5天。通过离心然后过滤制备含有重组蛋白的无细胞培养物上清液，并用于进一步纯化。如实施例2中针对抗ILl-RAP-C8-RecC-ES-IgG1-LALA所述纯化抗体，并进行以下修饰。对于抗IL-1RAP-C3-A3-mmIgG2a-LALA(SEQ ID NO:73和74)，用酸性缓冲液(通常为甘氨酸0.1M pH 3.5)洗脱蛋白质。在SDS-PAGE上分析收集的级分并基于表观纯度进行选择。然后合并感兴趣的级分，并在4℃处用pH 7.4的IX PBS透析。在0.2pm过滤器上无菌过滤后，将纯化的抗体储存在-80℃，并如实施例2中针对抗IL1-RAP-C8-RecC-ES-IgG1-LALA所述进一步分析。
小鼠IgG2a LALA对小鼠IL-1RAP的结合亲和力
使用表面等离子体共振(SPR)来测量小鼠IgG2a LALA分子对小鼠IL-1RAP的结合亲和力。在25℃处在Biacore T200仪器(Biacore,GE Healthcare)上测量亲和力并用Biacore T200评估软件(v3.1)分析。使用商业胺偶联试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100050)在与抗小鼠IgG Fc(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100838)偶联的Series S CM5传感器芯片(Biacore T200,Biacore,GE Healthcare，目录号BR100530)上进行测量。用商业上可获得的重组小鼠IL-1RAP-his(Sino Biologicals，目录号52657-M08H)进行SPR测量。通过固定抗小鼠IL-1RAP小鼠IgG2a LALA分子并使用小鼠IL-1RAP蛋白作为分析物来评估对小鼠IL-1RAP的亲和力。在与抗小鼠IgG Fc偶联的Series S CM5传感器芯片的fc2上捕获了约150RU的小鼠IgG2aLALA。将小鼠IL-1RAP-his以0.14nM至100nM的不同浓度在HBS-EP+缓冲液(Biacore,GE Healthcare，目录号BRI00669)中以多循环动力学以30μl/min的流速注射在fc1和fc2(fc1用作参照)上持续3分钟。监测解离15分钟。在每个循环后，用60pl提供有抗小鼠IgG Fc捕获试剂盒(Biacore,GE Healthcare，目录号BR100838)的再生溶液使表面再生。使用1:1朗缪尔动力学拟合模型处理实验数据。测量包括用于参考的零浓度样品。Chi2值、U值和残值用于评估实验数据与个体结合模型之间拟合的质量。
结果
抗IL-1RAP-C3克隆(SEQ ID NO.12)的亲和力成熟涉及五个单独文库中CDR-H1(Rabat位置27-35)、CDR-H2(Rabat位置50-53和55-58)和CDR-H3(Rabat位置95-101减去2)的多样化。分离如通过SPR测量的具有比亲本抗IL-1RAP-C3克隆更慢解离速率的scFv克隆。将选择的scFv克隆重新格式化并表达为Fab片段并如实施例1所述测量对人和食蟹猴IL-1RAP的亲和力。一种称为Fab克隆抗IL-1RAP-C3-A3的克隆对小鼠IL-1RAP具有最高的亲和力。所提及的克隆的重链序列识别编号和结合亲和力报告于表4中。
表4：开发的Fab克隆及其对小鼠IL-1RAP的相对亲和力的概述
选择抗IL-1RAP-C3-A3克隆作为抗人IL-1RAP候选物的潜在小鼠替代物，并在小鼠IgG2a LALA主链中表达，相当于小鼠中的人IgG1 LALA同种型。序列标识号以及从至少两个独立实验计算的所述克隆的人IL-1RAP或小鼠IL-1RAP的平均结合动力学常数和标准偏差报告于表5中。通过SPR，抗IL-1RAP-C3-A3克隆未显示任何可检测的与食蟹猴IL-1RAP的结合(数据未显示)。序列标识号以及从三个独立实验计算的所述克隆的小鼠IL-1RAP的平均结合动力学常数和标准偏差报告于表5中。图5中示出了抗IL-1RAP-C3-A3mmIgG2a LALA对小鼠IL-1RAP的SPR结合传感图的一个代表性示例。
表5：小鼠IgG2a LALA对小鼠IL-1RAP的SPR结合亲和力
实施例4：抗人IL-1RAP候选物1的体外生物学表征
4.1抗人IL-1RAP候选物1特异性结合人IL-1RAP
抗人IL-1RAP_候选物_1(本文中称为抗IL1RAP-C8-RecC，并且包含重链SEQ IDNo:128、188和248以及轻链序列SEQ ID NO:71)在膜结合的人IL-1RAP上的结合通过流式细胞术使用多种人细胞系和人细胞类型诸如HaCaT角质细胞系(AddexBio,T0020001)以及人原代细胞(人嗜中性粒细胞和成纤维细胞)来评估。
简言之，收获细胞，计数，并以50'000个细胞/孔铺板在96孔圆底板中。将板以350g离心3分钟，并将细胞重悬浮于50μl含有不同浓度(范围为50pg/ml至0.00003pg/ml)的抗人IL-1RAP_候选物_1或同种型对照_5抗体的FACS缓冲液(PBS(IX)+2,5％FCS+2mM EDTA+0.05％NaN3)中。将染色的细胞在4℃处温育30分钟，用350g FACS缓冲液洗涤两次持续3分钟，并重悬浮于100μl在FACS缓冲液中以1/200稀释的单克隆抗人IgG PE-花青7二抗(Biolegend,409316)中。然后将细胞洗涤两次并重悬浮于200μl含有SYTOX Green死细胞染色剂(ThermoFisher Scientific,S34860)的FACS缓冲液中，并在CytoFlex仪器(BeckmanCoulter)上获得样品。基于FSC对比SSC的大小对细胞进行门控，并使用FlowJo软件分析PE-花青7-几何平均值(几何平均)荧光强度。最后，通过减去抗人IL-1RAP_候选物_1的荧光/同种型对照_5的荧光来计算相对几何平均荧光强度。如图6所示，抗人IL-1RAP_候选物_1抗体识别在HaCaT细胞系和所有原代细胞上表达的膜结合的IL-1RAP。使用多个供体进行多个独立实验。相关的KD值总结在表6中。
表6
细胞类型 N KD+/-SD(nM)
HaCaT细胞系 4 0.75+/-0.36
HaCaT IL-1RAP KO 3 N/A
人嗜中性粒细胞 6 1.67+/-0.96
正常食蟹猴成纤维细胞 4 1.55+/-1.45
正常人成纤维细胞 4 3.1+/-2.14
表6示出了从流式细胞术实验测定的KD值，其中抗人IL-1RAP候选物l(·)或同种型对照_3(■)(图6)与各种细胞系和细胞类型一起温育。从非线性S形回归中提取KD值。显示足够拟合优度(R2>0.7)的曲线包括在汇总表中。
为了进一步证明抗人IL-1RAP_候选物_1与IL-1RAP的选择性结合，针对敲除先前产生并内部表征的IL-1RAP基因的HaCaT细胞系进行相同的程序。按照与上述相同的方案进行实验。图6的结果示出抗人IL-1RAP_候选物_1抗体选择性地结合膜结合的IL-1RAP，因为它不结合HaCaT IL-1RAP敲除细胞系。
4.2抗人IL-1RAP候选物1结合原代猴细胞上的食蟹猴IL-1RAP
为了评估抗人IL-1RAP_候选物_1与食蟹猴IL-1RAP的交叉反应性，使用猴成纤维细胞进行上述相同的程序。在该测定中，抗人IL-1RAP候选物l与表达食蟹猴IL-1RAP的成纤维细胞结合(图6)。测试细胞类型的KD值总结在表6中。
4.3抗人IL-1RAP候选物1在HaCaT刺激测定中抑制IL-1和IL-36诱导的细胞因子释 放
为了评估抗人IL-1RAP_候选物_1抑制IL-1、IL-33和IL-36途径的潜力，使用不同的细胞系统开发了几种测定法。角质细胞系HaCaT用于测试IL-1和IL-36途径的抑制，因为该特定细胞系对IL-1和IL-36敏感，但对IL-33细胞因子不敏感，如通过下游介质诸如IL-6和IL-8(CXCL8)的产生所测量的。
简言之，收获HaCaT细胞收获、计数，并以0.05×106个细胞/ml重悬浮于完全DMEM培养基(DMEM+10％FBS+1％谷氨酰胺+1％Pen/Strp+1％NEAA+1％NaPyr)中。将一百pl细胞分布在96孔平底板中，并在37℃、5％CO2下温育16小时。第二天，将细胞与50μl在测定培养基(完全DMEM培养基)中连续稀释的抗人IL-1RAP_候选物_1(范围为50pg/ml至0.000005pg/ml)或同种型对照_5(唯一剂量为50pg/ml)一起温育30分钟。在温育结束时，将50μl人IL-1β或IL-36Γ(均来自Peprotech)供应至适当的孔中。在37℃、5％CO2处温育24小时后，将100pl上清液转移至96孔圆底板中并储存于-80℃冰箱中直至对细胞因子/趋化因子进行定量。使用ProcartaPlex试剂盒(ThermoFisher Scientific，EPX01A-10213-901和EPX01A-10204-901)，按照制造商的说明书，用Luminex测量培养物上清液中IL-6和IL-8的产生。
如图7所示，抗人IL-1RAP_候选物_1抑制HaCaT细胞的IL-1β或IL-36γ刺激后IL-6细胞因子和IL-8趋化因子的释放。这种作用对于两种途径都是剂量依赖性的，并且对IL-36γ甚至更有效，因为导致IL-36/IL-36R/IL-1RAP三聚体复合物形成的相互作用比调节IL-l/IL-1R/IL-1RAP复合物形成的相互作用弱。建立包括标准并应用于所有测定以获得足够的刺激窗口或刺激指数(SI)以确定抑制百分比。刺激指数用下式计算：
-X是所考虑的细胞因子(IL-6或IL-8)
-“仅细胞因子”是细胞仅与刺激物(IL-1β或IL-36γ)一起温育的情况
-“仅细胞”是细胞与培养基一起温育的情况。
进行两个独立的实验，抑制的EC50值总结在表7中。
表7：抗人IL-1RAP_候选物_1在HaCaT刺激测定中抑制IL-1和IL-36诱导的细胞因 子释放。
刺激物 读出 N EC20 EC50 EC80 最大抑制
IL-1b IL-6 1 2.19 8.77 35.05 106.21
IL-1b IL-8 2 0.88+/-0.34 3.53+/-1.38 14.11+/-5.5 94.65+/-3.5
IL-36g IL-6 2 0.04+/-0.03 0.17+/-0.12 0.67+/-0.5 107.6+/-3.87
IL-36g IL-8 2 0.03+/-0.02 0.11+/-0.07 0.45+/-0.29 98.61+/-0.75
该表示出了由刺激测定确定的EC20、EC50、EC80和最大抑制值，其中抗人IL-1RAP_候选物_1(·)或同种型对照_3(■)(图7)与IL-1β或IL-36γ刺激的HaCaT一起温育。从非线性S形回归中提取ECx值。足够刺激条件(刺激指数>1.8)和显示足够拟合优度(R2>0.7)的曲线包括在汇总表中。
4.4抗人IL-1RAP候选物1在人外周血单核细胞(PBMC)刺激测定中抑制IL-33诱导 的细胞因子释放
使用人外周血单核细胞(hPBMC)在IL-12共刺激测定中测试IL-33途径的抑制。文献中已经报道，单独的IL-12或IL-33不引起hPBMC产生最小的IFN-g，而用IL-33和IL-12的组合处理导致IFN-g的协同产生(Smithgall等人，2008；Ochayon等人，2019)。
简言之，使用聚蔗糖密度梯度分离从得自La Chaux-de-Fonds(瑞士)输血中心的血沉棕黄层收获hPMBC。对细胞进行计数并以1×106个细胞/ml重悬浮于完全RPMI培养基(RPMI+10％FBS+1％谷氨酰胺+1％Pen/Strep)中。将一百μl hPBMC分配在96孔圆底板中。将细胞与50μl人IL-12和IL-33(均来自Peprotech)一起温育15分钟。在温育结束时，将在测定培养基(完全RPMI培养基)中连续稀释的50μl抗人IL-1RAP_候选物_1(范围为50μg/ml至0.000005μg/ml)添加到适当的孔中。在50μg/ml的唯一剂量下测试同种型对照_5抗体。在37℃、5％CO2处温育48小时后，将100μl上清液转移至96孔圆底板中并储存于-80℃冰箱中直至对细胞因子水平进行定量。使用ProcartaPlex试剂盒(ThermoFisher Scientific，EPX01A-10228-901)，按照制造商的说明书，用Luminex测量培养物上清液中IFN-g的产生。使用IL-1β刺激代替IL-33+IL-12进行相同的程序，从而导致IL-8释放。
如图8(灰色曲线，下图)所示，抗人IL-1RAP_候选物_1在同时刺激PBMC的IL-12和IL-33后抑制IFN-g细胞因子的释放。这种效果是剂量依赖性的。
另外，已报道IL-1RAP可作为可溶性分子在外周血中检测到，浓度达到约300ng/ml。为了评估在可溶性IL-1RAP的存在下抗人IL-1RAP_候选物_1是否能够抑制IL-1/IL-33途径，在IL-1β或IL-12+IL-33细胞因子混合物中添加可溶性IL-1RAP进行与上述相同的实验程序。结果在图8中示出并证明了抗人IL-1RAP_候选物_1可以与可溶性IL-1RAP竞争，并在用IL-1b和IL-33刺激人PBMC后保留其阻断细胞因子释放的能力。
使用总共6个供体进行两个独立的实验。抑制的EC50值总结在表8中。
表8：抗人IL-1RAP_候选物_1在人外周血单核细胞(PBMC)刺激测定中抑制IL-33诱 导的细胞因子释放。
表8示出了由刺激测定确定的EC20、EC50、EC80和最大抑制值，其中抗人IL-1RAP_候选物_1(·)或同种型对照_3(■)(图8)与IL-1β或IL-12+IL-33刺激的PBMC一起温育。从非线性S形回归中提取ECx值。
足够刺激条件(刺激指数>1.8)和显示足够拟合优度(R2>0.7)的曲线包括在汇总表中。
总之，这些数据突出了使用疾病相关的人细胞测定，抗人IL-1RAP_候选物_1有效地抑制所有个体途径。
4.5抗人IL-1RAP候选物1在组合细胞因子刺激后在全血再刺激测定中抑制细胞因 子释放
尽管先前的测定法能够评估抗人IL-1RAP_候选物_1抑制各个途径的能力，但使用全血测定法来评估抗人IL-1RAP_候选物_1抑制组合的IL-1、IL-33和IL-36刺激的途径的能力。将从健康供体(柠檬酸盐管)新鲜采集的人血分配在15ml管中，并在用IL-1α、IL-1β、IL-12、IL-33、IL-36α、IL-36β和IL-36Γ的组合刺激前与单独的培养基(RPMI)、抗人IL-1RAP_候选物_1或同种型对照_5(饱和剂量)一起预温育30分钟至最终体积为0.6ml。
在37℃、5％CO2下温育24小时后，收获上清液。使用ProcartaPlex试剂盒(ThermoFisher Scientific，21-plex试剂盒)，按照制造商的说明书，用Luminex测量培养物上清液中各种细胞因子和趋化因子的产生。对从8个单独实验中测试的26个供体进行统计分析。在每个供体和每个分析物中计算抗人IL-1RAP_候选物_1或同种型对照_5之间的差异以配对所有数据，然后使用平均值检验(t-检验)进行分析。在这种情况下，H0或零假设是“平均差值等于0”。如果t-检验的p-值低于0,05；H0被拒绝，这意味着与同种型对照5存在统计学显著差异。
图9中描述的结果显示，与同种型对照_5相比，抗人IL-1RAP_候选物_1统计学显著地抑制大多数细胞因子和趋化因子的释放。
4.6抗人IL-1RAP候选物1在用IL-IB和IL-36Γ刺激后与HaCaT条件培养基一起温 育后抑制嗜中性粒细胞活化
IL-1细胞因子家族成员参与与疾病病理生理学相关的关键炎性过程(Migliorini等人，2020)。为了进一步鉴定抗人IL-1RAP候选物l的性质，进行体外测定以评估其抑制嗜中性粒细胞与皮肤细胞之间的细胞串扰的潜在能力。
使用EasySep直接人嗜中性粒细胞分离试剂盒(Stemcell,19666)，按照制造商的说明书，从健康供体(EDTA管)新鲜采集的人血中分离嗜中性粒细胞。
使用CD15作为嗜中性粒细胞的特异性标志物，通过流式细胞术评估分离的嗜中性粒细胞的纯度。
通过将HaCaT细胞与培养基、抗人IL-1RAP_候选物_1或同种型对照_5(饱和剂量)在37℃、5％CO处温育30分钟来制备HaCaT条件培养基2。在温育结束时，将简单培养基或人IL-1β和IL-36γ细胞因子的组合(均来自Peprotech)添加到适当的孔中。在37℃、5％CO2处温育24小时后，将上清液转移至96孔深板中并储存于-80℃冰箱中直至对细胞因子/趋化因子进行定量。使用ProcartaPlex试剂盒(ThermoFisher Scientific，EPX01A-10204-901、EPX01B-10281-901和EPX01A-12122-901)，按照制造商的说明书，通过Luminex测量培养物上清液中IL-8、MCP1、GRO-a的产生。
分离后，直接将人嗜中性粒细胞与该预先制备的条件培养基在37℃、5％CO2处一起温育3小时。温育后，收集细胞并用靶向各种表面标志物CD45、CD15、CD66b、CD62L、CD11b、CD54(ThermoFisher Scientific)的标记抗体染色20分钟。
温育3小时后，活化的嗜中性粒细胞通过以下表型表征：CD45+CD15+CD66b+CD54-CD62L-。通过使用上述相同的方法，计算每种嗜中性粒细胞供体的刺激指数和抑制百分比：
在每个供体中计算抗人IL-1RAP_候选物_1或同种型对照_5之间的差值以配对所有数据，然后使用平均值检验(t-检验)进行分析。在这种情况下，H0或零假设是“平均差值等于0”。如果t-检验的p-值低于0,05；H0被拒绝，这意味着与同种型对照5存在统计学显著差异。
图10中描述的结果显示，与同种型对照5相比，抗人IL-1RAP_候选物_1抑制由刺激的HaCaT细胞释放的趋化因子介导的嗜中性粒细胞的活化。
实施例5：抗小鼠IL-1RAP候选物1的体外生物学表征
5.1.1抗小鼠IL-1RAP候选物1特异性结合小鼠IL-1RAP
使用相关细胞系诸如鼠成纤维细胞NIH-3T3细胞系(ATCC，CRL-1658)通过流式细胞术评估抗小鼠IL-1RAP_候选物_1(包含重链CDR SEQ ID NO:265、266、267和轻链序列SEQID NO:74)在膜结合的小鼠IL-1RAP上的结合。
简言之，收获细胞，计数，并以50'000个细胞/孔铺板在96孔圆底板中。将板以350g离心3分钟，并将细胞重悬浮于50μl含有不同浓度(范围为20pg/ml至0.0001pg/ml)的抗小鼠IL-1RAP_候选物_1或同种型对照_2抗体的FACS缓冲液(PBS(IX)+2,5％FCS+2mM EDTA+0.05％NaN3)中。将染色的细胞在4℃处温育30分钟，用350g FACS缓冲液洗涤两次持续3分钟，并重悬浮于100μl在FACS缓冲液中以1/200稀释的单克隆抗小鼠IgG PE-花青7二抗(Biolegend,407114)中。然后将细胞洗涤两次并重悬浮于200μl含有SYTOX Green死细胞染色剂(ThermoFisher Scientific,S34860)的FACS缓冲液中，并在CytoFlex仪器(BeckmanCoulter)上获得样品。基于FSC对比SSC的大小对细胞进行门控，并使用FlowJo软件分析PE-花青7-几何平均值(几何平均)荧光强度。最后，通过减去抗小鼠IL-1RAP_候选物_1的荧光/同种型对照_2的荧光来计算相对几何平均荧光强度。如图11所示，抗小鼠IL-1RAP_候选物_1抗体识别在NIH-3T3细胞系上表达的膜结合的IL-1RAP。进行多个独立的实验。相关的KD值总结在表9中。
表9：抗小鼠IL-1RAP_候选物_1特异性结合小鼠IL-1RAP
该表示出了从流式细胞术实验测定的KD值，其中抗小鼠IL-1RAP候选l(·)或对照同种型_2(■)(图11)与NIH-3T3细胞系一起温育。从非线性S形回归中提取KD值。显示足够拟合优度(R2>0.7)的曲线包括在汇总表中。
5.1.2抗小鼠IL-1RAP候选物1在NIH-3T3刺激测定中抑制IL-33和IL-36诱导的细 胞因子释放
使用与上述用于HaCaT细胞系相同的方法，用鼠成纤维细胞系NIH-3T3(ATCC，CRL-1658)测试抗小鼠IL-1RAP_候选物_1抑制IL-1、IL-33和IL-36途径的潜力。
简言之，收获细胞、计数，并以0.05×106个细胞/ml重悬浮于完全DMEM培养基(DMEM+10％FBS+1％谷氨酰胺+1％Pen/Strp+1％HEPES+0.1％β-巯基乙醇)中。将一百pl细胞分布在96孔平底板中，并在37℃、5％CO2下温育16小时。第二天，将细胞与50μl在测定培养基(完全DMEM培养基)中连续稀释的抗小鼠IL-1RAP_候选物_1(范围为50pg/ml至0.000005pg/ml)或同种型对照_2(唯一剂量为50pg/ml)一起温育30分钟。在温育结束时，将50μl小鼠IL-1β或人IL-33或小鼠IL-36α、P或y的组合(全部来自Peprotech，除了mIL-36细胞因子，R&D Systems)供应至适当的孔中。在37℃、5％CO2处温育24小时至48小时后，将100pl上清液转移至96孔圆底板中并储存于-80℃冰箱中直至对细胞因子/趋化因子进行定量。使用ProcartaPlex试剂盒(ThermoFisher Scientific，EPX01A-20603-901和EPX01A-26031-901)，按照制造商的说明书，用Luminex测量培养物上清液中IL-6和CXCL-1/GRO-α的产生。
如图12所示，抗小鼠IL-1RAP_候选物_1抑制NIH-3T3细胞的小鼠IL-1β、人IL-33或鼠IL-36s刺激后IL-6细胞因子和CXCL-1/GRO-α趋化因子的释放。抗小鼠IL-1RAP_候选物_1对鼠IL-1β的作用非常弱，因为那些细胞对鼠IL-1β刺激较不敏感，导致刺激窗口非常小。这种作用对于IL-33和IL-36途径是剂量依赖性的。建立包括标准并应用于所有测定以获得足够的刺激窗口或刺激指数(SI)以确定抑制百分比。
用抗小鼠IL-1RAP_候选物_1的Fc部分变体进行多个实验，最终实验与先前的发现一致并且在图12中描绘，并且抑制的EC50值总结于表10中。
表10：抗小鼠IL-1RAP_候选物_1在NIH-3T3刺激测定中抑制IL-33和IL-36诱导的 细胞因子释放
该表示出了由刺激测定确定的EC50和最大抑制值，其中抗小鼠IL-1RAP_候选物_1(·)或同种型对照_2(■)(图12)与mIL-1β、hIL-33或mIL-36s刺激的NIH-3T3一起温育。从非线性S形回归中提取ECx值。足够刺激条件(刺激指数>1.8)和显示足够拟合优度(R2>0.7)的曲线包括在汇总表中。
实施例6：抗小鼠IL-1RAP候选物1在体内急性炎症诱导的小鼠模型中的功效
材料和方法
动物饲养
在来自JANVIER EABS的雌性6-7周龄免疫活性C57BL/6JRj小鼠中进行体内实验。将所有小鼠维持在标准环境条件下的啮齿动物笼中(20±1℃室温，50±10％相对湿度，12小时光暗循环)。小鼠接受照射的食物和垫料以及0.22pm过滤的饮用水。
体内急性炎症诱导的小鼠模型
进行了两个实验，分别命名为Bely_4和Bely_5研究。
Bely_4研究.在第0天对C57BL/6JRj小鼠腹膜内注射不同的治疗。治疗注射后两小时，对小鼠腹膜内注射白介素(小鼠IL-1β、人IL-33和小鼠IL36α、β和γ)的混合物。第一次注射治疗后24小时，将小鼠安乐死。收集小鼠血清、脾细胞和腹膜内灌洗液用于离体分析。对小鼠血清进行Luminex。对脾细胞和腹膜内灌洗液进行FACS分析。
Bely_5研究.在第0天、第1天和第2天对C57BL/6JRj小鼠进行不同治疗的腹膜内注射。治疗注射后两小时，对小鼠腹膜内注射白介素(小鼠IL-1β、人IL-33和小鼠IL36α、β和γ)的混合物。第一次注射治疗后24小时和/或72小时，将小鼠安乐死。收集小鼠血清、脾细胞和腹膜内灌洗液用于离体分析。对小鼠血清进行Luminex。对脾细胞和腹膜内灌洗液进行FACS分析。
用于流式细胞术的小鼠样品制备.
对于脾细胞，收集脾并机械解离。将细胞悬浮液过滤并离心。然后对细胞进行计数并染色用于免疫细胞分析。用完整抗体组染色并在FACS缓冲液中制备相关对照。在Northern光仪器(CYTEK)上分析样品。使用Kaluza和GraphPad Prism 8分析数据。
对于腹膜内灌洗，将PBS注射到腹膜腔中。轻轻按摩腹膜以使细胞脱离，然后通过在腹膜中制造切口来收集液体。将细胞悬浮液过滤并离心。然后对细胞进行计数并染色用于免疫细胞分析。用完整抗体组染色并在FACS缓冲液中制备相关对照。在Northern光仪器(CYTEK)上分析样品。使用Kaluza和GraphPad Prism 8分析数据。
用于Luminex测定的小鼠样品制备.
根据制造商的说明书通过多重Luminex定量评价血清样品。将珠、体内样品和/或上清液以及由试剂盒提供的稀释标准品添加到板中，温育过夜。将检测抗体添加到板中并在室温处温育30分钟。洗涤板，并添加链霉亲和素-PE并在室温处温育30分钟。洗涤板，添加读数缓冲液并在室温处温育，然后用Luminex 200仪器读数。使用ProcartaPlex 1.0分析软件分析Luminex数据。将细胞因子浓度归一化为定量的上限(ULOQ)和下限(LLOQ)。将低于LLOQ的所有数据设定为标准曲线的最低点并认为是不可分析的(对于GraphPad Prism分析，不允许为零)。使用Excel和GraphPad Prism 8分析数据。
统计分析
使用Graphpad Prism 8软件分析数据。进行的统计分析：单因素方差分析(ANOVA)，随后进行Dunnett多重比较。P<0.05被认为具有统计学显著性。显著性水平用星号表示。(****表示<0.0001；***表示0.0001；**表示0.001，并且*表示0.01)。
结果和结论
在两个独立的体内急性炎症诱导的小鼠模型中测试了抗小鼠IL-1RAP_候选物1(包含SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:74)的功效。在第一项研究的第0天和第二项研究的第0天、第1天和第2天对C57BL/6JRj小鼠进行不同治疗的腹膜内注射。每次治疗注射后两小时，对小鼠腹膜内注射白介素(小鼠IL-1β、人IL-33和小鼠IL36α、β和γ)的混合物。第一次研究的第一次治疗注射后24小时和第二次研究的第一次治疗注射后72小时，将小鼠安乐死。收集小鼠血清、脾细胞和腹膜内灌洗液用于离体分析。
第一次注射后24小时，与对照组(p值＝0.0018)相比，抗小鼠IL-1RAP_候选物_1显示出IL-5(图1)的显著下调。由基准阿那白滞素(p值＝0.1611)和mIL36Ra(p值＝0.4719)诱导的IL-5没有显著下调。
表11.图13的统计分析
第一次注射后72小时，与对照组(分别为p值＝0.0356和p值＝0.0009)相比，抗小鼠IL-1RAP_候选物_1显示出IL-5(图14)和Gro-α(图3)的显著下调。由基准阿那白滞素(p值＝0.5413)和mIL36Ra(p值＝0.1337)诱导的IL-5没有显著下调。由阿那白滞素诱导(p值＝0.0162)而不是由mIL36Ra诱导(p值＝0.933)的Gro-α的显著下调。
表12.图14的统计分析
表13.图15的统计分析
抗小鼠IL-1RAP_候选物_1抑制白介素注射后24小时和72小时小鼠血清中的IL-5释放，并抑制白介素注射后72小时小鼠血清中的Gro-α释放。这些数据证实，与基准相比，靶向IL-1RAP允许阻断体内IL-36、IL-33和IL1信号传导途径。
实施例7：抗小鼠IL-1RAP候选物1在体内慢性炎症诱导的小鼠模型中的功效
材料和方法
动物饲养
在由Jackson Laboratories(Bar Harbor,ME)开发的雌性8-9周龄免疫活性C57BL/6J小鼠(JR#00664)近交系中进行体内实验。将所有小鼠维持在标准环境条件下的啮齿动物笼中(20±1℃室温，50±10％相对湿度，12小时光暗循环)。小鼠接受照射的食物和垫料以及0.22pm过滤的饮用水。
银屑病样小鼠模型
活体观察和手术。在研究开始前三天和整个生命期对小鼠进行称重。在IMQ施用前48小时将小鼠剃毛。剃毛小鼠的背部和双耳每天接受5％IMQ乳膏()的局部施用。IMQ治疗的皮肤区域用TegadermTM无菌不透明敷料覆盖，作为保护局部施用的手段。除了每天通过腹膜内途径注射的阿那白滞素之外，所有分子通过腹膜内途径每三天一次对小鼠施用治疗。每天对小鼠进行身体检查，并如下应用PASI(银屑病面积和严重性指数)评分：红斑(皮肤刺激/变红)和焦痂(结痂)形成(1-4分)/鳞屑和病变严重性等级(1-4分)。在研究结束时，收集背部皮肤用于离体分析。对背部皮肤进行组织学分析。
用于离体实验的小鼠样品制备
将背部皮肤的左侧切成1cm宽的条(横截面)，然后在4％福尔马林中固定。
组织学分析
对背部皮肤(每个载玻片4个样品)进行苏木精染色。使用cellSens标准软件分析载玻片。对每只小鼠的每个载玻片4个皮肤样品/每个载玻片10张照片/每组6只小鼠进行栓皮形成定量(称为棘皮症)。进行两次评分。使用Excel和GraphPad Prism 8分析数据。
统计分析
使用Graphpad Prism 8软件分析数据。进行的统计分析：单因素方差分析(ANOVA)，随后进行Dunnett多重比较检验用于多重比较。P<0.05被认为具有统计学显著性。显著性水平用星号表示(****表示<0.0001；***表示0.0001；**表示0.001，并且*表示0.01)。
结果和结论
银屑病是伴有加速的表皮细胞更新的炎性皮肤病。循环嗜中性粒细胞迁移至银屑病病变并诱导呼吸爆发、脱粒和嗜中性粒细胞胞外陷阱的形成，从而促成涉及T细胞失衡、角质形成细胞增殖、血管生成和自身抗原形成的银屑病的免疫发病机制。皮肤中的嗜中性粒细胞积累是银屑病的组织学特征之一。以高水平产生和分泌的IL-36在由咪喹莫特诱导的银屑病型皮肤病中具有关键作用。IL-36可促进嗜中性粒细胞募集。IL-36和IL-1通过相互调节共同驱动银屑病形成皮肤炎症。在体内慢性炎症诱导的小鼠模型中测试抗小鼠IL-1RAP_候选物1的功效：银屑病样皮肤炎症小鼠模型。
剃毛小鼠的背部和双耳每天接受5％IMQ乳膏()的局部施用。IMQ治疗的皮肤区域用TegadermTM无菌不透明敷料覆盖，作为保护局部施用的手段。除了每天通过腹膜内途径注射的阿那白滞素之外，所有分子通过腹膜内途径每三天一次对小鼠施用治疗。每天对小鼠进行身体检查，并如下应用PASI(银屑病面积和严重性指数)评分：红斑(皮肤刺激/变红)和焦痂(结痂)形成(1-4分)/鳞屑和病变严重性等级(1-4分)。
在第10天，与对照组相比，抗小鼠IL-1RAP_候选物_1在银屑病样皮肤炎症模型(图16)中诱导鳞屑和病变评分的显著降低(1mg时p值＝0.0141，而250ug时p值＝0.0025)。
表14.图16的统计分析
组织学数据证明，与对照和同种型组相比，抗小鼠IL-1RAP_候选物_1在银屑病样皮肤炎症模型中可抑制栓皮的形成(p值＝0.0001)，也称为棘皮症(图17和图18)。用mIL36Ra(p值＝0.0006)而不是用阿那白滞素(p值＝0.0702)显著降低棘皮症形成。
在小鼠背部皮肤上进行的组织学照片示出在图18中。简言之，用咪喹莫特和PBS(A)、同种型对照3(B)、1mg的抗小鼠IL-1RAP_候选物_1(C)、250ug的抗小鼠IL-1RAP_候选物_1(D)、阿那白滞素(E)、mIL36Ra(F)治疗小鼠或未治疗小鼠(G)。抗小鼠IL-1RAP候选物1的施用抑制了银屑病样皮肤炎症小鼠模型中的嗜中性粒细胞浸润。
来自IMQ_s2研究的数据。
表15.图17的统计分析
抗小鼠IL-1RAP_候选物_1抑制银屑病样皮肤炎症小鼠模型中的嗜中性粒细胞浸润。这些数据证实，与基准相比，靶向IL-1RAP允许阻断体内IL-36、IL-33和IL1信号传导途径。
实施例8：抗人IL-1RAP_候选物_1的体外生物学表征
抗人IL-1RAP_候选物_1在全血再刺激测定中在IL-1刺激后以剂量依赖性方式抑制细胞因子释放。
尽管先前的测定使得能够在全血测定的背景下评估抗人IL-1RAP_候选物_1抑制由IL1RAP介导的组合途径的能力，但此处使用分离的IL-1α或IL-1β来评估抗人IL-1RAP_候选物_1抑制IL-1刺激途径的能力并确定抑制的半数最大有效浓度(或EC50)。
材料和方法
将从健康供体(柠檬酸盐管)新鲜采集的人血分配在15ml管中，并在用5ng/ml IL-1α或5ng/ml IL-1β刺激前与单独的培养基(RPMI)、范围为25ug/ml至0.00032pg/mL的抗人IL-1RAP_候选物_1的系列稀释液或同种型对照_4(25ug/ml)一起预温育30分钟至最终体积为0.6ml。在37℃、5％CO2下温育24小时后，收获上清液。使用ProcartaPlex试剂盒(ThermoFisher Scientific，9-plex试剂盒)，按照制造商的说明书，用Luminex测量培养物上清液中各种细胞因子和趋化因子的产生。将分析物定量归一化为刺激指数：刺激指数(样品)，[SI]_X＝([细胞因子释放]_X(样品))/([平均细胞因子释放]_X(未刺激的血液))
将低于3(与基线相比为3倍)的刺激指数(刺激/未刺激的血液)排除用于测定抑制百分比。
抑制％(样品)＝(l-([SI]_X(样品)-[SI]_X平均(未刺激的血液))/([平均SI]_X(刺激的)-[平均SI]_X(未刺激的血液)))x 100
其中“X”是所考虑的细胞因子/趋化因子，“刺激的”对应于用同种型对照然后用细胞因子X预温育的全血获得的值，并且“未刺激的血液”对应于没有任何刺激的全血获得的值。每个计算都是供体和细胞因子特异性的。
从非线性S形回归中提取半数最大有效浓度(EC50)值。足够刺激条件(刺激指数>3)和显示足够拟合优度(R2>0.7并且Span>50％)的曲线包括在汇总表中。
用总共15个测试供体进行三个独立的实验。图18中的表B描述了显示充分刺激条件(刺激系数>3)的所包括的供体的数量。
图18和表16中描绘的结果显示，抗人IL-1RAP_候选物_1在人全血再刺激测定中证明在用IL-1α或IL-1β刺激后浓度依赖性抑制IL-6、IL-8、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β释放，其中IL-1α和IL-1β的平均EC50在纳摩尔范围内。
表16
将抗人IL-1RAP_候选物_1或最大剂量的同种型对照_4的剂量-反应在人全血中与5ng/ml的IL-1α或5ng/ml的IL-1β一起温育。
表16示出了对于每个刺激和每个读数，所有包括的供体的抑制的EC50。从非线性S形回归中提取ECx值。足够刺激条件(刺激指数>3)和显示足够拟合优度(R2>0.7并且Span>50％)的曲线包括在汇总表中。用总共15个测试供体进行三个独立的实验。X/Y表示X供体，其中抗人IL-1RAP_候选物_1在对IL-1刺激有反应的Y供体中显示抑制。
在自身免疫性疾病中，抗人IL-1RAP_候选物_1可下调IL-1驱动的炎症反应，其放大致病细胞因子产生并加重疾病病理生理学。
还使用IL-12/IL-33和IL-36α/IL-36β/IL-36γ作为刺激物生成数据，并显示细胞因子和趋化因子释放的剂量依赖性调节(数据未显示)。
序列表
<110> Ichnos Sciences SA
<120> 结合IL1RAP的抗体及其用途
<130> ISB 880 01 EP00
<160> 349
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 373
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 1 - 人(hs)IL-1RAP-ECD(S21-E359)-Avi-His
<400> 1
Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met Arg Gln Ile Gln
1 5 10 15
Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro Leu Phe Glu His
20 25 30
Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala Gly Leu Thr Leu
35 40 45
Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu Glu Pro Ile Asn
50 55 60
Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys Asp Val Leu Trp
65 70 75 80
Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Cys Met Leu
85 90 95
Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro Leu Glu Val Val
100 105 110
Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu Pro Val His Lys
115 120 125
Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys Pro Asn Val Asp
130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr Trp Tyr Met Gly
145 150 155 160
Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro Glu Gly Met Asn
165 170 175
Leu Ser Phe Leu Ile Ala Leu Ile Ser Asn Asn Gly Asn Tyr Thr Cys
180 185 190
Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His Leu Thr Arg Thr
195 200 205
Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val Pro Pro Val
210 215 220
Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu Met Asp Ser
245 250 255
Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp Asp Ile
260 265 270
Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His Ser Arg Thr Glu
275 280 285
Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys Val Thr Ser Glu
290 295 300
Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser Ala Lys Gly Glu
305 310 315 320
Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Val Pro Ala Pro Arg Tyr
325 330 335
Thr Val Glu Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu
340 345 350
Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Gly Gly Gly His His His His His
355 360 365
His His His His His
370
<210> 2
<211> 373
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 2 - 食蟹猴
(cyno)IL-1RAP-ECD(S21-E359)-Avi-His
<400> 2
Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met Arg Gln Ile Gln
1 5 10 15
Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro Leu Phe Glu His
20 25 30
Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala Gly Leu Thr Leu
35 40 45
Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu Glu Pro Ile Asn
50 55 60
Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys Asp Val Leu Trp
65 70 75 80
Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Cys Met Leu
85 90 95
Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro Leu Glu Val Val
100 105 110
Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu Pro Val His Lys
115 120 125
Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys Pro Asn Val Asp
130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr Trp Tyr Met Gly
145 150 155 160
Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro Glu Gly Met Asn
165 170 175
Leu Ser Phe Leu Ile Ala Phe Ile Ser Asn Asn Gly Asn Tyr Thr Cys
180 185 190
Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His Leu Thr Arg Thr
195 200 205
Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val Pro Pro Val
210 215 220
Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu Met Asp Ser
245 250 255
Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp Asp Ile
260 265 270
Pro Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His Ser Arg Thr Glu
275 280 285
Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys Val Thr Ser Glu
290 295 300
Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser Ala Lys Gly Glu
305 310 315 320
Val Ala Lys Ala Ala Thr Val Lys Gln Lys Val Pro Ala Pro Arg Tyr
325 330 335
Thr Val Glu Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu
340 345 350
Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Gly Gly Gly His His His His His
355 360 365
His His His His His
370
<210> 3
<211> 373
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 3 - 鸡(gg)IL-1RAP-ECD(S139-E478)-Avi-His
<400> 3
Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Val Asp Thr Met Lys Gln Ile Gln
1 5 10 15
Ile Tyr Asp Gly Glu Pro Ala Lys Ile Lys Cys Pro Leu Phe Glu Thr
20 25 30
Phe Leu Lys Tyr Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala Gly Leu Thr Leu
35 40 45
Ile Trp Tyr Arg Ile Gly Gln Asp Arg Asp Leu Glu Glu Pro Ile Asn
50 55 60
Phe Arg Leu Pro Asp Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys Asp Thr Leu Trp
65 70 75 80
Phe Trp Pro Ala Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Cys Met Leu
85 90 95
Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro Leu Glu Val Val
100 105 110
Pro Lys Asp Gln Gly Ser Cys Val Ser His Ser Ile Lys Pro Val Glu
115 120 125
Gln Met Phe Tyr Leu Glu Tyr Ala Asn Glu Lys Ile Thr Cys Pro Asp
130 135 140
Ile Asp Gly Phe Tyr Pro Ala Ser Val Thr Pro Thr Val Lys Trp Tyr
145 150 155 160
Gln Ser Cys Arg Leu Val Asp Gly Phe Asn Glu Arg His Pro Gln Gly
165 170 175
Ser Lys Leu Val Ile Gly Val Val Arg Ser Ala Tyr Glu Gly Asn Tyr
180 185 190
Thr Cys Ile Val Thr Phe Lys Asp His Gly Arg Thr Tyr Asn Leu Thr
195 200 205
Arg Thr Val Lys Met Lys Val Val Gly Ser Pro Asn Lys Ala Leu Pro
210 215 220
Pro Gln Phe Thr Ser Pro Asn Glu Lys Val Val Tyr Glu Leu Glu Ala
225 230 235 240
Gly Asp Asp Leu Val Leu Pro Cys Glu Val Phe Phe Thr Phe Leu Lys
245 250 255
Asp Ser Arg Thr Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Asn Thr Asp
260 265 270
Asp Ile Val Asp Ala Lys Val Thr Gln Ser Glu Ile Pro Arg Arg Phe
275 280 285
Glu Asp Lys Thr Ile Ile Arg Thr Leu Thr Val Ala Lys Ala Thr Pro
290 295 300
Glu Asp Leu Lys Arg Asn Tyr Thr Cys Tyr Ala Arg Asn Ala Lys Gly
305 310 315 320
Glu Gly His Ser Gln Ala Ile Val His Met Lys Val Ala Ala Pro Lys
325 330 335
Tyr Thr Val Glu Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe
340 345 350
Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Gly Gly Gly His His His His
355 360 365
His His His His His
370
<210> 4
<211> 373
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 4 - IL-1RAP-ECD(ggD1(S139-P246)-hsD2(V132-V233)-hsD3(
V234-E359))-Avi-His
<400> 4
Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Val Asp Thr Met Lys Gln Ile Gln
1 5 10 15
Ile Tyr Asp Gly Glu Pro Ala Lys Ile Lys Cys Pro Leu Phe Glu Thr
20 25 30
Phe Leu Lys Tyr Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala Gly Leu Thr Leu
35 40 45
Ile Trp Tyr Arg Ile Gly Gln Asp Arg Asp Leu Glu Glu Pro Ile Asn
50 55 60
Phe Arg Leu Pro Asp Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys Asp Thr Leu Trp
65 70 75 80
Phe Trp Pro Ala Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Cys Met Leu
85 90 95
Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro Leu Glu Val Val
100 105 110
Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu Pro Val His Lys
115 120 125
Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys Pro Asn Val Asp
130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr Trp Tyr Met Gly
145 150 155 160
Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro Glu Gly Met Asn
165 170 175
Leu Ser Phe Leu Ile Ala Leu Ile Ser Asn Asn Gly Asn Tyr Thr Cys
180 185 190
Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His Leu Thr Arg Thr
195 200 205
Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val Pro Pro Val
210 215 220
Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu Met Asp Ser
245 250 255
Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp Asp Ile
260 265 270
Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His Ser Arg Thr Glu
275 280 285
Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys Val Thr Ser Glu
290 295 300
Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser Ala Lys Gly Glu
305 310 315 320
Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Val Pro Ala Pro Arg Tyr
325 330 335
Thr Val Glu Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu
340 345 350
Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Gly Gly Gly His His His His His
355 360 365
His His His His His
370
<210> 5
<211> 373
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 5 - IL-1RAP-ECD(ggD1(S139-H260)-ggD2(S261-V349)-hsD3(
V243-E359))-Avi-His
<400> 5
Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Val Asp Thr Met Lys Gln Ile Gln
1 5 10 15
Ile Tyr Asp Gly Glu Pro Ala Lys Ile Lys Cys Pro Leu Phe Glu Thr
20 25 30
Phe Leu Lys Tyr Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala Gly Leu Thr Leu
35 40 45
Ile Trp Tyr Arg Ile Gly Gln Asp Arg Asp Leu Glu Glu Pro Ile Asn
50 55 60
Phe Arg Leu Pro Asp Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys Asp Thr Leu Trp
65 70 75 80
Phe Trp Pro Ala Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Cys Met Leu
85 90 95
Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro Leu Glu Val Val
100 105 110
Pro Lys Asp Gln Gly Ser Cys Val Ser His Ser Ile Lys Pro Val Glu
115 120 125
Gln Met Phe Tyr Leu Glu Tyr Ala Asn Glu Lys Ile Thr Cys Pro Asp
130 135 140
Ile Asp Gly Phe Tyr Pro Ala Ser Val Thr Pro Thr Val Lys Trp Tyr
145 150 155 160
Gln Ser Cys Arg Leu Val Asp Gly Phe Asn Glu Arg His Pro Gln Gly
165 170 175
Ser Lys Leu Val Ile Gly Val Val Arg Ser Ala Tyr Glu Gly Asn Tyr
180 185 190
Thr Cys Ile Val Thr Phe Lys Asp His Gly Arg Thr Tyr Asn Leu Thr
195 200 205
Arg Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val Pro Pro Val
210 215 220
Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu Met Asp Ser
245 250 255
Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp Asp Ile
260 265 270
Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His Ser Arg Thr Glu
275 280 285
Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys Val Thr Ser Glu
290 295 300
Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser Ala Lys Gly Glu
305 310 315 320
Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Val Pro Ala Pro Arg Tyr
325 330 335
Thr Val Glu Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu
340 345 350
Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Gly Gly Gly His His His His His
355 360 365
His His His His His
370
<210> 6
<211> 550
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> >SEQ ID NO: 6 - 人IL-1RAP，全长
<400> 6
Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met Arg Gln Ile Gln
1 5 10 15
Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro Leu Phe Glu His
20 25 30
Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala Gly Leu Thr Leu
35 40 45
Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu Glu Pro Ile Asn
50 55 60
Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys Asp Val Leu Trp
65 70 75 80
Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Cys Met Leu
85 90 95
Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro Leu Glu Val Val
100 105 110
Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu Pro Val His Lys
115 120 125
Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys Pro Asn Val Asp
130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr Trp Tyr Met Gly
145 150 155 160
Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro Glu Gly Met Asn
165 170 175
Leu Ser Phe Leu Ile Ala Leu Ile Ser Asn Asn Gly Asn Tyr Thr Cys
180 185 190
Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His Leu Thr Arg Thr
195 200 205
Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val Pro Pro Val
210 215 220
Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu Met Asp Ser
245 250 255
Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp Asp Ile
260 265 270
Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His Ser Arg Thr Glu
275 280 285
Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys Val Thr Ser Glu
290 295 300
Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser Ala Lys Gly Glu
305 310 315 320
Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Val Pro Ala Pro Arg Tyr
325 330 335
Thr Val Glu Leu Ala Cys Gly Phe Gly Ala Thr Val Leu Leu Val Val
340 345 350
Ile Leu Ile Val Val Tyr His Val Tyr Trp Leu Glu Met Val Leu Phe
355 360 365
Tyr Arg Ala His Phe Gly Thr Asp Glu Thr Ile Leu Asp Gly Lys Glu
370 375 380
Tyr Asp Ile Tyr Val Ser Tyr Ala Arg Asn Ala Glu Glu Glu Glu Phe
385 390 395 400
Val Leu Leu Thr Leu Arg Gly Val Leu Glu Asn Glu Phe Gly Tyr Lys
405 410 415
Leu Cys Ile Phe Asp Arg Asp Ser Leu Pro Gly Gly Ile Val Thr Asp
420 425 430
Glu Thr Leu Ser Phe Ile Gln Lys Ser Arg Arg Leu Leu Val Val Leu
435 440 445
Ser Pro Asn Tyr Val Leu Gln Gly Thr Gln Ala Leu Leu Glu Leu Lys
450 455 460
Ala Gly Leu Glu Asn Met Ala Ser Arg Gly Asn Ile Asn Val Ile Leu
465 470 475 480
Val Gln Tyr Lys Ala Val Lys Glu Thr Lys Val Lys Glu Leu Lys Arg
485 490 495
Ala Lys Thr Val Leu Thr Val Ile Lys Trp Lys Gly Glu Lys Ser Lys
500 505 510
Tyr Pro Gln Gly Arg Phe Trp Lys Gln Leu Gln Val Ala Met Pro Val
515 520 525
Lys Lys Ser Pro Arg Arg Ser Ser Ser Asp Glu Gln Gly Leu Ser Tyr
530 535 540
Ser Ser Leu Lys Asn Val
545 550
<210> 7
<211> 550
<212> PRT
<213> 食蟹猴
<220>
<223> >SEQ ID NO: 7 - 食蟹猴 IL-1RAP，全长
<400> 7
Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met Arg Gln Ile Gln
1 5 10 15
Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro Leu Phe Glu His
20 25 30
Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala Gly Leu Thr Leu
35 40 45
Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu Glu Pro Ile Asn
50 55 60
Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys Asp Val Leu Trp
65 70 75 80
Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Cys Met Leu
85 90 95
Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro Leu Glu Val Val
100 105 110
Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu Pro Val His Lys
115 120 125
Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys Pro Asn Val Asp
130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr Trp Tyr Met Gly
145 150 155 160
Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro Glu Gly Met Asn
165 170 175
Leu Ser Phe Leu Ile Ala Phe Ile Ser Asn Asn Gly Asn Tyr Thr Cys
180 185 190
Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His Leu Thr Arg Thr
195 200 205
Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val Pro Pro Val
210 215 220
Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu
225 230 235 240
Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu Met Asp Ser
245 250 255
Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp Asp Ile
260 265 270
Pro Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His Ser Arg Thr Glu
275 280 285
Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys Val Thr Ser Glu
290 295 300
Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser Ala Lys Gly Glu
305 310 315 320
Val Ala Lys Ala Ala Thr Val Lys Gln Lys Val Pro Ala Pro Arg Tyr
325 330 335
Thr Val Glu Leu Ala Cys Gly Phe Gly Ala Thr Val Leu Leu Val Val
340 345 350
Ile Leu Ile Val Val Tyr His Val Tyr Trp Leu Glu Met Val Leu Phe
355 360 365
Tyr Arg Ala His Phe Gly Thr Asp Glu Thr Ile Leu Asp Gly Lys Glu
370 375 380
Tyr Asp Ile Tyr Val Ser Tyr Ala Arg Asn Ala Glu Glu Glu Glu Phe
385 390 395 400
Val Leu Leu Thr Leu Arg Gly Val Leu Glu Asn Glu Phe Gly Tyr Lys
405 410 415
Leu Cys Ile Phe Asp Arg Asp Ser Leu Pro Gly Gly Ile Val Thr Asp
420 425 430
Glu Thr Leu Ser Phe Ile Gln Lys Ser Arg Arg Leu Leu Val Val Leu
435 440 445
Ser Pro Asn Tyr Val Leu Gln Gly Thr Gln Ala Leu Leu Glu Leu Lys
450 455 460
Ala Gly Leu Glu Asn Met Ala Ser Gln Gly Asn Ile Asn Val Ile Leu
465 470 475 480
Val Gln Tyr Lys Ala Val Lys Glu Thr Lys Val Lys Glu Leu Lys Arg
485 490 495
Ala Lys Thr Val Leu Thr Val Ile Lys Trp Lys Gly Glu Lys Ser Lys
500 505 510
Tyr Pro Gln Gly Arg Phe Trp Lys Gln Leu Gln Val Ala Met Pro Val
515 520 525
Lys Lys Ser Pro Arg Arg Ser Ser Ser Asp Glu Gln Gly Leu Ser Tyr
530 535 540
Ser Ser Leu Lys Asn Val
545 550
<210> 8
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 8 - 抗IL-1Rap-UCP02-A4 FAB重链
<400> 8
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Val Phe Ser Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Ile Pro Asp Phe Gly His Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Ser Pro Tyr Lys Gly Trp Trp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 9
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 9 - 抗IL-1Rap-UCP02-A6 FAB重链
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ala Phe Arg Ile Tyr
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Leu Ala Ser Gly Gly Gly Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Lys Asp Ile Tyr Gly Tyr Gly Tyr Gly Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 10
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 10 - 抗IL-1Rap-UCP02-B11 FAB重链
<400> 10
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly His Phe Ser Gln Phe
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ala Pro Gly Leu Gly Ser Thr Arg Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Ile Tyr Ser Ala Trp Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 11
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 11 - 抗IL-1Rap-UCP02-B5 FAB重链
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Tyr Phe Ser Ala Tyr
20 25 30
Ile Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Ser Thr Thr Tyr Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 12
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 12 - 抗IL-1Rap-UCP02-C3 FAB重链
<400> 12
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 13
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 13 - 抗IL-1Rap-UCP02-C5 FAB重链
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly His Phe Asn Ile Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Ala Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Ser Ile Tyr His Gly Trp Met Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 14
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 14 - 抗IL-1Rap-UCP02-C8 FAB重链
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Gln Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 15
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 15 - 抗IL-1Rap-UCP02-C9 FAB重链
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Val Phe Ser Tyr Tyr
20 25 30
Ala Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Gly Tyr Gly Ala Thr Phe Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Val Ser Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 16
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 16 - 抗IL-1Rap-UCP02-D2 FAB重链
<400> 16
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Arg Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Leu Pro Gln Phe Gly Ala Pro Leu Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Tyr Tyr Gly Val Val Gly Tyr Val Pro Asp Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys
225
<210> 17
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 17 - 抗IL-1Rap-UCP02-G11 FAB重链
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Gln Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ala Tyr Gly Gln Ala Glu Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Pro Tyr Ser Thr Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 18
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 18 - 抗IL-1Rap-UCP02-G3 FAB重链
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Tyr Leu Asn Glu Tyr
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Val Ile Pro Arg Tyr Gly Gln Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Leu Gly Tyr Ser Tyr Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 19
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 19 - 抗IL-1Rap-UCP02-G8 FAB重链
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Phe Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ala Pro Ala Ala Gly Ile Ala Glu Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Ser Pro Gly Arg Val Arg Glu Glu Tyr Trp Tyr Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys
225
<210> 20
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 20 - 抗IL-1Rap-UCP02-H8 FAB重链
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Val Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Glu Phe Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Ser Ser Ala Tyr Ser Pro Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 21
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 21 - 抗IL-1Rap-UCP02-H9 FAB重链
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Pro Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro His His Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Pro Asp Val Tyr Thr Pro Trp Phe Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 22
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 22 - 抗IL-1Rap-UCP03-A2 FAB重链
<400> 22
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Lys Phe Asn Phe Asp
20 25 30
Val Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Asp Phe Ala Ser Thr His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Pro Asp Tyr Tyr Thr Gly Trp Met Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 23
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 23 - 抗IL-1Rap-UCP03-A3 FAB重链
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Leu Phe Asn Glu Asn
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Asp Val Gly Ala Ala Phe Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ile Tyr Thr Ala Trp Phe Ala Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 24
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 24 - 抗IL-1Rap-UCP03-B4 FAB重链
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Pro Phe Ser Gln His
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Phe Glu Gly Val Ala Phe Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ser Ser Tyr Tyr Ser Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 25
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 25 - 抗IL-1Rap-UCP03-B6 FAB重链
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Pro Phe Ser Val Tyr
20 25 30
Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Ala Gln Gln Gly Ser Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Pro Asp Pro Tyr Ser Gly His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 26
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 26 - 抗IL-1Rap-UCP03-C1 FAB重链
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Arg Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro His Phe Gly Ala Val Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Val Tyr Thr Gly Trp Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 27
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 27 - 抗IL-1Rap-UCP03-C2 FAB重链
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Pro Phe Lys Arg Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Thr Thr Gly Glu Ala Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Gly Thr Thr Tyr Ala Ala Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 28
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 28 - 抗IL-1Rap-UCP03-F4 FAB重链
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Gly Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Leu Pro Glu Gln Gly Ala Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gly Leu Tyr Val Pro Tyr Met Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 29
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 29 - 抗IL-1Rap-UCP03-G3 FAB重链
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Pro Leu Ser Gly Tyr
20 25 30
Ala Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Asn Phe Ala Gln Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Ser Ile Tyr Ser Gly Trp Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 30
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 30 - 抗IL-1Rap-UCP03-G4 FAB重链
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Arg Phe Ser His Tyr
20 25 30
Val Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Lys Pro Phe Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Tyr Tyr Tyr Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 31
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 31 - 抗IL-1Rap-UCP04-C1 FAB重链
<400> 31
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Glu Gly Asp Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Tyr Trp Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 32
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 32 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-C4 FAB重链
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Lys Leu Asn Ala Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 33
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 33 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-C8 FAB重链
<400> 33
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Leu Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 34
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 34 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-D8 FAB重链
<400> 34
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly His Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 35
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 35 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-F1 FAB重链
<400> 35
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 36
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 36 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G11 FAB重链
<400> 36
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Arg Phe His Gln Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 37
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 37 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G1 FAB重链
<400> 37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ala Ser Arg Ala Tyr
20 25 30
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 38
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 38 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G3 FAB重链
<400> 38
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Pro Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 39
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 39 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-A8 FAB重链
<400> 39
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Glu Gly Ser Tyr Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 40
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 40 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-B10 FAB重链
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Val Thr His Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 41
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 41 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-B8 FAB重链
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 42
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 42 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-D8 FAB重链
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Pro Ser Asn Pro Val Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 43
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 43 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-E7 FAB重链
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Lys His Gly Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 44
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 44 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-F3 FAB重链
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Pro His Thr Ala His
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 45
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 45 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-G10 FAB重链
<400> 45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Pro Arg Arg Ala Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 46
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 46 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-H10 FAB重链
<400> 46
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Thr Trp Glu Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 47
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 47 - 抗IL-1Rap-C8-H2B-B5 FAB重链
<400> 47
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Gln Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Thr Val Gly Gly Phe Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 48
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 48 - 抗IL-1Rap-C8-H2B-C10 FAB重链
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Gln Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 49
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 49 - 抗IL-1Rap-C8-recA FAB重链
<400> 49
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Thr Trp Glu Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 50
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 50 - 抗IL-1Rap-C8-recB FAB重链
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Pro Arg Arg Ala Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 51
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 51 - 抗IL-1Rap-C8-recC FAB重链
<400> 51
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys
225
<210> 52
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 52 - 抗IL-1Rap-UCP02-C8 IgG1 LALA重链
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Gln Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 53
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 53 - 抗IL-1Rap-UCP02-C3 IgG1 LALA重链
<400> 53
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 54
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 54 - 抗IL-1Rap-C8-RecC IgG1 LALA重链
<400> 54
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 55
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 55 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-AA IgG1 LALA重链
<400> 55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Ala Ala Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 56
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 56 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-DA IgG1 LALA重链
<400> 56
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ala Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 57
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 57 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-AS IgG1 LALA重链
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Ala Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 58
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 58 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-ES IgG1 LALA重链
<400> 58
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Glu Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 59
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 59 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-ET IgG1 LALA重链
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Glu Thr Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 60
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 60 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-A2 FAB重链
<400> 60
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala Glu Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 61
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 61 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-A3 FAB重链
<400> 61
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser His Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 62
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 62 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-B5 FAB重链
<400> 62
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 63
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 63 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-B7 FAB重链
<400> 63
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Gly Phe
20 25 30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 64
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 64 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-D2 FAB重链
<400> 64
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Phe
20 25 30
Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 65
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 65 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-F5 FAB重链
<400> 65
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Pro Leu Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 66
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 66 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-G10 FAB重链
<400> 66
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 67
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 67 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-B8 FAB重链
<400> 67
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu His Ser
20 25 30
Ser Ala Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 68
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 68 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-F6 FAB重链
<400> 68
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Pro Asp Tyr
20 25 30
Pro Leu Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 69
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 69 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-G2 FAB重链
<400> 69
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Tyr Asp Val Ala
20 25 30
Pro Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 70
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 70 - 抗IL-1Rap-C3-UCP01-H4 FAB重链
<400> 70
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe His Tyr Arg Ser Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
<210> 71
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 71 - Vk3-15/Jk1-Ck轻链
<400> 71
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 72
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 72 - 抗IL-1RAP C8-RecC-ES IgG1 LALA重链
<400> 72
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr
20 25 30
Ala Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Glu Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly
450
<210> 73
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 73 - 抗IL-1RAP C3-A3 mmIgG2a LALA重链
<400> 73
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser His Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr
180 185 190
Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Ala Ala Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu
245 250 255
Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro
260 265 270
Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala
275 280 285
Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val
290 295 300
Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu
340 345 350
Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys
355 360 365
Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn
370 375 380
Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys
405 410 415
Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly
420 425 430
Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
435 440 445
<210> 74
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 74 - 抗IL-1RAP C3-A3 mmIgG2a LALA轻链
<400> 74
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 75
<211> 439
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 75 - ABC mmIgG1重链
<400> 75
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Tyr Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp
165 170 175
Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro
180 185 190
Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile
210 215 220
Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val
260 265 270
Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala
305 310 315 320
Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro
325 330 335
Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala
340 345 350
Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu
355 360 365
Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr
370 375 380
Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr
385 390 395 400
Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe
405 410 415
Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys
420 425 430
Ser Leu Ser His Ser Pro Gly
435
<210> 76
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 76 - ABC mmIgG轻链
<400> 76
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 77
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 77 - ABC mmIgG2a LALA重链
<400> 77
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Tyr Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp
165 170 175
Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro
180 185 190
Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro
245 250 255
Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val
260 265 270
Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr
275 280 285
Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala
290 295 300
Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro
340 345 350
Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val
355 360 365
Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly
370 375 380
Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp
405 410 415
Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His
420 425 430
Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
435 440 445
<210> 78
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 78 - 人ABC IgG1 LALA重链
<400> 78
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Tyr Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 79
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 79 - 人ABC IgG轻链
<400> 79
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 80
<211> 154
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 80 - 阿那白滞素
<400> 80
Met Met Arg Pro Ser Gly Arg Lys Ser Ser Lys Met Gln Ala Phe Arg
1 5 10 15
Ile Trp Asp Val Asn Gln Lys Thr Phe Tyr Leu Arg Asn Asn Gln Leu
20 25 30
Val Ala Gly Tyr Leu Gln Gly Pro Asn Val Asn Leu Glu Glu Lys Ile
35 40 45
Asp Val Val Pro Ile Glu Pro His Ala Leu Phe Leu Gly Ile His Gly
50 55 60
Gly Lys Met Cys Leu Ser Cys Val Lys Ser Gly Asp Glu Thr Arg Leu
65 70 75 80
Gln Leu Glu Ala Val Asn Ile Thr Asp Leu Ser Glu Asn Arg Lys Gln
85 90 95
Asp Lys Arg Phe Ala Phe Ile Arg Ser Asp Ser Gly Pro Thr Thr Ser
100 105 110
Phe Glu Ser Ala Ala Cys Pro Gly Trp Phe Leu Cys Thr Ala Met Glu
115 120 125
Ala Asp Gln Pro Val Ser Leu Thr Asn Met Pro Asp Glu Gly Val Met
130 135 140
Val Thr Lys Phe Tyr Phe Gln Glu Asp Glu
145 150
<210> 81
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 81 - 抗IL-1Rap-UCP02-A4 CDRH1
<400> 81
Gly Gly Val Phe Ser Tyr Tyr Ala Ile Ser
1 5 10
<210> 82
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 82 - 抗IL-1Rap-UCP02-A6 CDRH1
<400> 82
Gly Gly Ala Phe Arg Ile Tyr Ala Ile His
1 5 10
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 83 - 抗IL-1Rap-UCP02-B11 CDRH1
<400> 83
Gly Gly His Phe Ser Gln Phe Ala Ile Ser
1 5 10
<210> 84
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 84 - 抗IL-1Rap-UCP02-B5 CDRH1
<400> 84
Gly Gly Tyr Phe Ser Ala Tyr Ile Ile Ser
1 5 10
<210> 85
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 85 - 抗IL-1Rap-UCP02-C3 CDRH1
<400> 85
Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr Ala Met Gly
1 5 10
<210> 86
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 86 - 抗IL-1Rap-UCP02-C5 CDRH1
<400> 86
Gly Gly His Phe Asn Ile Tyr Ala Ile Ser
1 5 10
<210> 87
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 87 - 抗IL-1Rap-UCP02-C8 CDRH1
<400> 87
Gly Gly Gln Phe Ser Glu Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 88
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 88 - 抗IL-1Rap-UCP02-C9 CDRH1
<400> 88
Gly Gly Val Phe Ser Tyr Tyr Ala Phe His
1 5 10
<210> 89
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 89 - 抗IL-1Rap-UCP02-D2 CDRH1
<400> 89
Gly Gly Arg Phe Ser Asp Ser Ala Ile His
1 5 10
<210> 90
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 90 - 抗IL-1Rap-UCP02-G11 CDRH1
<400> 90
Gly Gly Gln Phe Asn Asp Tyr Ala Ile His
1 5 10
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 91 - 抗IL-1Rap-UCP02-G3 CDRH1
<400> 91
Gly Gly Tyr Leu Asn Glu Tyr Ala Ile His
1 5 10
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 92 - 抗IL-1Rap-UCP02-G8 CDRH1
<400> 92
Gly Gly Phe Phe Ser Ile Tyr Ala Ile Ser
1 5 10
<210> 93
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 93 - 抗IL-1Rap-UCP02-H8 CDRH1
<400> 93
Gly Gly Val Phe Ser Gly Tyr Ala Ile Ser
1 5 10
<210> 94
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 94 - 抗IL-1Rap-UCP02-H9 CDRH1
<400> 94
Gly Gly Pro Phe Ser Ser Tyr Ala Leu Ser
1 5 10
<210> 95
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 95 - 抗IL-1Rap-UCP03-A2 CDRH1
<400> 95
Gly Gly Lys Phe Asn Phe Asp Val Ile His
1 5 10
<210> 96
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 96 - 抗IL-1Rap-UCP03-A3 CDRH1
<400> 96
Gly Gly Leu Phe Asn Glu Asn Ala Ile His
1 5 10
<210> 97
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 97 - 抗IL-1Rap-UCP03-B4 CDRH1
<400> 97
Gly Gly Pro Phe Ser Gln His Ala Ile Ser
1 5 10
<210> 98
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 98 - 抗IL-1Rap-UCP03-B6 CDRH1
<400> 98
Gly Asp Pro Phe Ser Val Tyr Ile Ile His
1 5 10
<210> 99
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 99 - 抗IL-1Rap-UCP03-C1 CDRH1
<400> 99
Gly Gly Arg Phe Ser Ser Asn Ala Ile Ser
1 5 10
<210> 100
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 100 - 抗IL-1Rap-UCP03-C2 CDRH1
<400> 100
Gly Asp Pro Phe Lys Arg Tyr Ala Ile Gly
1 5 10
<210> 101
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 101 - 抗IL-1Rap-UCP03-F4 CDRH1
<400> 101
Gly Gly Gly Phe Ser Glu Tyr Ala Ile His
1 5 10
<210> 102
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 102 - 抗IL-1Rap-UCP03-G3 CDRH1
<400> 102
Gly Gly Pro Leu Ser Gly Tyr Ala Phe His
1 5 10
<210> 103
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 103 - 抗IL-1Rap-UCP03-G4 CDRH1
<400> 103
Gly Gly Arg Phe Ser His Tyr Val Phe Ser
1 5 10
<210> 104
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 104 - 抗IL-1Rap-UCP04-C1 CDRH1
<400> 104
Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr Thr Met Ser
1 5 10
<210> 105
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 105 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-C4 CDRH1
<400> 105
Gly Gly Lys Leu Asn Ala Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 106
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 106 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-C8 CDRH1
<400> 106
Gly Gly Leu Phe Ser Asp Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 107
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 107 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-D8 CDRH1
<400> 107
Gly Gly His Phe Asn Asn Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 108
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 108 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-F1 CDRH1
<400> 108
Gly Gly Ile Phe Ser Asn Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 109
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 109 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G11 CDRH1
<400> 109
Gly Gly Arg Phe His Gln Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 110
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 110 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G1 CDRH1
<400> 110
Gly Gly Ala Ser Arg Ala Tyr Ala Ile His
1 5 10
<210> 111
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 111 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G3 CDRH1
<400> 111
Gly Gly Pro Phe Ser Asp Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 112
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 112 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-A8 CDRH1
<400> 112
Gly Glu Gly Ser Tyr Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 113
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 113 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-B10 CDRH1
<400> 113
Gly Val Thr His Thr Ser Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 114
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 114 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-B8 CDRH1
<400> 114
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 115
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 115 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-D8 CDRH1
<400> 115
Gly Pro Ser Asn Pro Val Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 116
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 116 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-E7 CDRH1
<400> 116
Gly Ser Lys His Gly Asn Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 117
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 117 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-F3 CDRH1
<400> 117
Gly Gly Pro His Thr Ala His Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 118
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 118 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-G10 CDRH1
<400> 118
Gly Gly Pro Arg Arg Ala Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 119
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 119 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-H10 CDRH1
<400> 119
Gly Ser Thr Trp Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 120
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 120 - 抗IL-1Rap-C8-H2B-B5 CDRH1
<400> 120
Gly Gly Gln Phe Ser Glu Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 121
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 121 - 抗IL-1Rap-C8-H2B-C10 CDRH1
<400> 121
Gly Gly Gln Phe Ser Glu Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 122
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 122 - 抗IL-1Rap-C8-recA CDRH1
<400> 122
Gly Ser Thr Trp Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 123
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 123 - 抗IL-1Rap-C8-recB CDRH1
<400> 123
Gly Gly Pro Arg Arg Ala Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 124
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 124 - 抗IL-1Rap-C8-recC CDRH1
<400> 124
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 125
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 125 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-AA CDRH1
<400> 125
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 126
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 126 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-DA CDRH1
<400> 126
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 127
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 127 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-AS CDRH1
<400> 127
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 128
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 128 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-ES CDRH1
<400> 128
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 129
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 129 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-ET CDRH1
<400> 129
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5 10
<210> 130
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 130 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-A2 CDRH1
<400> 130
Gly Phe Thr Phe Ala Glu Tyr Ala Met Asn
1 5 10
<210> 131
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 131 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-A3 CDRH1
<400> 131
Gly Phe Ile Phe Ser His Tyr Gly Met Ser
1 5 10
<210> 132
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 132 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-B5 CDRH1
<400> 132
Gly Phe Ile Phe Ser Thr Tyr Gly Met Gly
1 5 10
<210> 133
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 133 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-B7 CDRH1
<400> 133
Gly Phe Thr Leu Ser Gly Phe Ser Met Ser
1 5 10
<210> 134
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 134 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-D2 CDRH1
<400> 134
Gly Phe Thr Phe Ser Gln Phe Gly Met Thr
1 5 10
<210> 135
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 135 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-F5 CDRH1
<400> 135
Gly Phe Pro Leu Ser Asn Tyr Gly Met Ser
1 5 10
<210> 136
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 136 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-G10 CDRH1
<400> 136
Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr Gly Met Ser
1 5 10
<210> 137
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 137 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-B8 CDRH1
<400> 137
Gly Phe Thr Phe Glu His Ser Ser Ala Gly
1 5 10
<210> 138
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 138 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-F6 CDRH1
<400> 138
Gly Phe Thr Phe Pro Asp Tyr Pro Leu Gly
1 5 10
<210> 139
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 139 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-G2 CDRH1
<400> 139
Gly Phe Thr Tyr Asp Val Ala Pro Met Gly
1 5 10
<210> 140
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 140 - 抗IL-1Rap-C3-UCP01-H4 CDRH1
<400> 140
Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr Ala Met Gly
1 5 10
<210> 141
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 141 - 抗IL-1Rap-UCP02-A4 CDRH2
<400> 141
Ala Ile Ile Pro Asp Phe Gly His Thr Ile
1 5 10
<210> 142
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 142 - 抗IL-1Rap-UCP02-A6 CDRH2
<400> 142
Gly Ile Leu Ala Ser Gly Gly Gly Ala Val
1 5 10
<210> 143
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 143 - 抗IL-1Rap-UCP02-B11 CDRH2
<400> 143
Gly Ile Ala Pro Gly Leu Gly Ser Thr Arg
1 5 10
<210> 144
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 144 - 抗IL-1Rap-UCP02-B5 CDRH2
<400> 144
Gly Ile Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Ala Thr
1 5 10
<210> 145
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 145 - 抗IL-1Rap-UCP02-C3 CDRH2
<400> 145
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 146
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 146 - 抗IL-1Rap-UCP02-C5 CDRH2
<400> 146
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Ala Val Asp
1 5 10
<210> 147
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 147 - 抗IL-1Rap-UCP02-C8 CDRH2
<400> 147
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 148
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 148 - 抗IL-1Rap-UCP02-C9 CDRH2
<400> 148
Gly Ile Ile Pro Gly Tyr Gly Ala Thr Phe
1 5 10
<210> 149
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 149 - 抗IL-1Rap-UCP02-D2 CDRH2
<400> 149
Tyr Ile Leu Pro Gln Phe Gly Ala Pro Leu
1 5 10
<210> 150
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 150 - 抗IL-1Rap-UCP02-G11 CDRH2
<400> 150
Tyr Ile Ile Pro Ala Tyr Gly Gln Ala Glu
1 5 10
<210> 151
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 151 - 抗IL-1Rap-UCP02-G3 CDRH2
<400> 151
Ala Val Ile Pro Arg Tyr Gly Gln Thr Tyr
1 5 10
<210> 152
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 152 - 抗IL-1Rap-UCP02-G8 CDRH2
<400> 152
Gly Ile Ala Pro Ala Ala Gly Ile Ala Glu
1 5 10
<210> 153
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 153 - 抗IL-1Rap-UCP02-H8 CDRH2
<400> 153
Gly Ile Ile Pro Glu Phe Gly Ala Thr Asn
1 5 10
<210> 154
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 154 - 抗IL-1Rap-UCP02-H9 CDRH2
<400> 154
Gly Ile Ile Pro His His Gly Ala Thr Tyr
1 5 10
<210> 155
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 155 - 抗IL-1Rap-UCP03-A2 CDRH2
<400> 155
Gly Ile Ile Pro Asp Phe Ala Ser Thr His
1 5 10
<210> 156
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 156 - 抗IL-1Rap-UCP03-A3 CDRH2
<400> 156
Gly Ile Ile Pro Asp Val Gly Ala Ala Phe
1 5 10
<210> 157
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 157 - 抗IL-1Rap-UCP03-B4 CDRH2
<400> 157
Gly Ile Ile Pro Phe Glu Gly Val Ala Phe
1 5 10
<210> 158
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 158 - 抗IL-1Rap-UCP03-B6 CDRH2
<400> 158
Tyr Ile Ile Ala Gln Gln Gly Ser Ala Ser
1 5 10
<210> 159
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 159 - 抗IL-1Rap-UCP03-C1 CDRH2
<400> 159
Gly Ile Ile Pro His Phe Gly Ala Val Tyr
1 5 10
<210> 160
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 160 - 抗IL-1Rap-UCP03-C2 CDRH2
<400> 160
Gly Ile Ile Pro Thr Thr Gly Glu Ala Ile
1 5 10
<210> 161
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 161 - 抗IL-1Rap-UCP03-F4 CDRH2
<400> 161
Ala Ile Leu Pro Glu Gln Gly Ala Ala Tyr
1 5 10
<210> 162
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 162 - 抗IL-1Rap-UCP03-G3 CDRH2
<400> 162
Gly Ile Ile Pro Asn Phe Ala Gln Thr Asp
1 5 10
<210> 163
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 163 - 抗IL-1Rap-UCP03-G4 CDRH2
<400> 163
Gly Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Lys Pro Phe
1 5 10
<210> 164
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 164 - 抗IL-1Rap-UCP04-C1 CDRH2
<400> 164
Ala Ile Ser Tyr Glu Gly Asp Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 165
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 165 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-C4 CDRH2
<400> 165
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 166
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 166 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-C8 CDRH2
<400> 166
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 167
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 167 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-D8 CDRH2
<400> 167
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 168
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 168 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-F1 CDRH2
<400> 168
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 169
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 169 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G11 CDRH2
<400> 169
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 170
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 170 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G1 CDRH2
<400> 170
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 171
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 171 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G3 CDRH2
<400> 171
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 172
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 172 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-A8 CDRH2
<400> 172
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 173
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 173 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-B10 CDRH2
<400> 173
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 174
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 174 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-B8 CDRH2
<400> 174
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 175
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 175 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-D8 CDRH2
<400> 175
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 176
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 176 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-E7 CDRH2
<400> 176
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 177
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 177 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-F3 CDRH2
<400> 177
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 178
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 178 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-G10 CDRH2
<400> 178
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 179
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 179 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-H10 CDRH2
<400> 179
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp
1 5 10
<210> 180
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 180 - 抗IL-1Rap-C8-H2B-B5 CDRH2
<400> 180
Tyr Ile Ile Pro Thr Val Gly Gly Phe Asp
1 5 10
<210> 181
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 181 - 抗IL-1Rap-C8-H2B-C10 CDRH2
<400> 181
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp
1 5 10
<210> 182
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 182 - 抗IL-1Rap-C8-recA CDRH2
<400> 182
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp
1 5 10
<210> 183
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 183 - 抗IL-1Rap-C8-recB CDRH2
<400> 183
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp
1 5 10
<210> 184
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 184 - 抗IL-1Rap-C8-recC CDRH2
<400> 184
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp
1 5 10
<210> 185
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 185 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-AA CDRH2
<400> 185
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp
1 5 10
<210> 186
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 186 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-DA CDRH2
<400> 186
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp
1 5 10
<210> 187
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 187 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-AS CDRH2
<400> 187
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp
1 5 10
<210> 188
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 188 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-ES CDRH2
<400> 188
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp
1 5 10
<210> 189
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 189 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-ET CDRH2
<400> 189
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp
1 5 10
<210> 190
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 190 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-A2 CDRH2
<400> 190
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 191
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 191 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-A3 CDRH2
<400> 191
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 192
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 192 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-B5 CDRH2
<400> 192
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 193
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 193 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-B7 CDRH2
<400> 193
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 194
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 194 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-D2 CDRH2
<400> 194
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 195
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 195 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-F5 CDRH2
<400> 195
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 196
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 196 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-G10 CDRH2
<400> 196
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 197
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 197 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-B8 CDRH2
<400> 197
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 198
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 198 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-F6 CDRH2
<400> 198
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 199
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 199 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-G2 CDRH2
<400> 199
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 200
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 200 - 抗IL-1Rap-C3-UCP01-H4 CDRH2
<400> 200
Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Glu Gly Thr Leu
1 5 10
<210> 201
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 201 - 抗IL-1Rap-UCP02-A4 CDRH3
<400> 201
Ala Arg Ala Ser Pro Tyr Lys Gly Trp Trp Asp Tyr
1 5 10
<210> 202
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 202 - 抗IL-1Rap-UCP02-A6 CDRH3
<400> 202
Ala Arg Ala Lys Asp Ile Tyr Gly Tyr Gly Tyr Gly Asp Ile
1 5 10
<210> 203
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 203 - 抗IL-1Rap-UCP02-B11 CDRH3
<400> 203
Ala Arg Asp Ser Ile Tyr Ser Ala Trp Leu Ala Tyr
1 5 10
<210> 204
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 204 - 抗IL-1Rap-UCP02-B5 CDRH3
<400> 204
Ala Arg Gly Arg Ser Thr Thr Tyr Tyr Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 205
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 205 - 抗IL-1Rap-UCP02-C3 CDRH3
<400> 205
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 206
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 206 - 抗IL-1Rap-UCP02-C5 CDRH3
<400> 206
Ala Arg Ala Ser Ile Tyr His Gly Trp Met Ala Tyr
1 5 10
<210> 207
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 207 - 抗IL-1Rap-UCP02-C8 CDRH3
<400> 207
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 208
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 208 - 抗IL-1Rap-UCP02-C9 CDRH3
<400> 208
Ala Arg Pro Val Ser Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 209
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 209 - 抗IL-1Rap-UCP02-D2 CDRH3
<400> 209
Ala Arg Gly Ser Tyr Tyr Gly Val Val Gly Tyr Val Pro Asp Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 210
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 210 - 抗IL-1Rap-UCP02-G11 CDRH3
<400> 210
Ala Arg Val Pro Tyr Ser Thr Ala Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 211
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 211 - 抗IL-1Rap-UCP02-G3 CDRH3
<400> 211
Ala Arg Pro Leu Gly Tyr Ser Tyr Gly Trp Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 212
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 212 - 抗IL-1Rap-UCP02-G8 CDRH3
<400> 212
Ala Arg Gly Gln Ser Pro Gly Arg Val Arg Glu Glu Tyr Trp Tyr Asp
1 5 10 15
Tyr
<210> 213
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 213 - 抗IL-1Rap-UCP02-H8 CDRH3
<400> 213
Ala Arg His Ser Ser Ala Tyr Ser Pro Trp Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 214
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 214 - 抗IL-1Rap-UCP02-H9 CDRH3
<400> 214
Ala Arg His Pro Asp Val Tyr Thr Pro Trp Phe Asp Val
1 5 10
<210> 215
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 215 - 抗IL-1Rap-UCP03-A2 CDRH3
<400> 215
Ala Arg Val Pro Asp Tyr Tyr Thr Gly Trp Met Ala Tyr
1 5 10
<210> 216
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 216 - 抗IL-1Rap-UCP03-A3 CDRH3
<400> 216
Ala Arg Gly Ser Ile Tyr Thr Ala Trp Phe Ala Val
1 5 10
<210> 217
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 217 - 抗IL-1Rap-UCP03-B4 CDRH3
<400> 217
Ala Arg Ser Ser Ser Tyr Tyr Ser Trp Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 218
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 218 - 抗IL-1Rap-UCP03-B6 CDRH3
<400> 218
Ala Arg Val Pro Asp Pro Tyr Ser Gly His Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 219
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 219 - 抗IL-1Rap-UCP03-C1 CDRH3
<400> 219
Ala Arg Gly Ser Val Tyr Thr Gly Trp Phe Asp Asn
1 5 10
<210> 220
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 220 - 抗IL-1Rap-UCP03-C2 CDRH3
<400> 220
Ala Arg His Gly Thr Thr Tyr Ala Ala Phe Asp His
1 5 10
<210> 221
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 221 - 抗IL-1Rap-UCP03-F4 CDRH3
<400> 221
Ala Arg Val Gly Leu Tyr Val Pro Tyr Met Asp Ile
1 5 10
<210> 222
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 222 - 抗IL-1Rap-UCP03-G3 CDRH3
<400> 222
Ala Arg Phe Ser Ile Tyr Ser Gly Trp Ser Asp Val
1 5 10
<210> 223
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 223 - 抗IL-1Rap-UCP03-G4 CDRH3
<400> 223
Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Tyr Tyr Tyr Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 224
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 224 - 抗IL-1Rap-UCP04-C1 CDRH3
<400> 224
Ala Arg Ser Leu Tyr Trp Ser Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 225
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 225 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-C4 CDRH3
<400> 225
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 226
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 226 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-C8 CDRH3
<400> 226
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 227
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 227 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-D8 CDRH3
<400> 227
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 228
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 228 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-F1 CDRH3
<400> 228
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 229
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 229 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G11 CDRH3
<400> 229
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 230
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 230 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G1 CDRH3
<400> 230
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 231
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 231 - 抗IL-1Rap-C8-H1A-G3 CDRH3
<400> 231
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 232
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 232 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-A8 CDRH3
<400> 232
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 233
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 233 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-B10 CDRH3
<400> 233
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 234
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 234 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-B8 CDRH3
<400> 234
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 235
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 235 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-D8 CDRH3
<400> 235
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 236
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 236 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-E7 CDRH3
<400> 236
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 237
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 237 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-F3 CDRH3
<400> 237
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 238
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 238 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-G10 CDRH3
<400> 238
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 239
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 239 - 抗IL-1Rap-C8-H1B-H10 CDRH3
<400> 239
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 240
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 240 - 抗IL-1Rap-C8-H2B-B5 CDRH3
<400> 240
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 241
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 241 - 抗IL-1Rap-C8-H2B-C10 CDRH3
<400> 241
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 242
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 242 - 抗IL-1Rap-C8-recA CDRH3
<400> 242
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 243
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 243 - 抗IL-1Rap-C8-recB CDRH3
<400> 243
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 244
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 244 - 抗IL-1Rap-C8-recC CDRH3
<400> 244
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 245
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 245 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-AA CDRH3
<400> 245
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Ala Ala Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 246
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 246 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-DA CDRH3
<400> 246
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ala Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 247
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 247 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-AS CDRH3
<400> 247
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Ala Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 248
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 248 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-ES CDRH3
<400> 248
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Glu Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 249
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 249 - 抗IL-1Rap-C8-RecC-ET CDRH3
<400> 249
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Glu Thr Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 250
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 250 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-A2 CDRH3
<400> 250
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 251
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 251 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-A3 CDRH3
<400> 251
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 252
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 252 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-B5 CDRH3
<400> 252
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 253
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 253 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-B7 CDRH3
<400> 253
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 254
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 254 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-D2 CDRH3
<400> 254
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 255
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 255 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-F5 CDRH3
<400> 255
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 256
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 256 - 抗IL-1Rap-C3-MP01-G10 CDRH3
<400> 256
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 257
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 257 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-B8 CDRH3
<400> 257
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 258
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 258 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-F6 CDRH3
<400> 258
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 259
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 259 - 抗IL-1Rap-C3-MP02-G2 CDRH3
<400> 259
Ala Arg Phe Arg Tyr Tyr Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 260
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> >SEQ ID NO: 260 - 抗IL-1Rap-C3-UCP01-H4 CDRH3
<400> 260
Ala Arg Phe His Tyr Arg Ser Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 261
<211> 360
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<223> >SEQ ID NO: 261 - 小家鼠 IL-1RAP
<400> 261
Met Gly Leu Leu Trp Tyr Leu Met Ser Leu Ser Phe Tyr Gly Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ser His Ala Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met
20 25 30
Arg Gln Ile Gln Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro
35 40 45
Leu Phe Glu His Phe Leu Lys Tyr Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ser
50 55 60
Gly Leu Thr Leu Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu
65 70 75 80
Glu Pro Ile Asn Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys
85 90 95
Asp Val Leu Trp Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Met Leu Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro
115 120 125
Leu Glu Val Val Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Ala Met Arg Phe
130 135 140
Pro Val His Lys Met Tyr Ile Glu His Gly Ile His Lys Ile Thr Cys
145 150 155 160
Pro Asn Val Asp Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Ser Val Thr
165 170 175
Trp Tyr Lys Gly Cys Thr Glu Ile Val Asp Phe His Asn Val Leu Pro
180 185 190
Glu Gly Met Asn Leu Ser Phe Phe Ile Pro Leu Val Ser Asn Asn Gly
195 200 205
Asn Tyr Thr Cys Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Leu Phe His
210 215 220
Leu Thr Arg Thr Val Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asp Ala
225 230 235 240
Leu Pro Pro Gln Ile Tyr Ser Pro Asn Asp Arg Val Val Tyr Glu Lys
245 250 255
Glu Pro Gly Glu Glu Leu Val Ile Pro Cys Lys Val Tyr Phe Ser Phe
260 265 270
Ile Met Asp Ser His Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys
275 280 285
Pro Asp Asp Val Thr Val Asp Ile Thr Ile Asn Glu Ser Val Ser Tyr
290 295 300
Ser Ser Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys
305 310 315 320
Val Thr Pro Glu Asp Leu Arg Arg Asn Tyr Val Cys His Ala Arg Asn
325 330 335
Thr Lys Gly Glu Ala Glu Gln Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Gly Asn
340 345 350
Gly Cys Thr Glu Pro Met Thr Leu
355 360
<210> 262
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> > SEQ ID NO: 262 - 抗人IL-1RAP_候选物_1 CDRH1
<220>
<221> VARIANT
<222> 2,3,4,5,6,7,10
<223> 位置2处的X能够是氨基酸V、G、S、P、E中的任一个。
位置3处的X能够是氨基酸I、L、A、G、T、S、P、H、K、R中的任一个。
位置4处的X能够是氨基酸L、F、A、S、W、H、N、R中的任一个。位置5处的X
能够是氨基酸G、T、S、Y、P、H、E、N、R中的任一个。位置6处的X
<220>
<221> VARIANT
<222> 6,7,10
<223> 位置6处的X能够是氨基酸V、A、S、P、Q、N、D中的任一个。
位置7处的X能够是氨基酸Y、H中的任一个。位置10处的X能够是
氨基酸H、Q中的任一个。
<400> 262
Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Ile Xaa
1 5 10
<210> 263
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> > SEQ ID NO: 263 - 抗人IL-1RAP_候选物_1 CDRH2
<220>
<221> VARIANT
<222> 5,6,8,9
<223> 位置5处的X能够是氨基酸T、S中的任一个。位置
6处的X能够是氨基酸V、L中的任一个。位置9处的X能够是
氨基酸F、Y中的任一个。
位置8处的X能够是氨基酸Q、G中的任一个。
<400> 263
Tyr Ile Ile Pro Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Asp
1 5 10
<210> 264
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> > SEQ ID NO: 264 - 抗人IL-1RAP_候选物_1 CDRH3
<220>
<221> VARIANT
<222> 8,9
<220>
<221> VARIANT
<222> 8,9
<223> 位置8处的X能够是氨基酸A、E、D中的任一个。位置
9处的X能够是氨基酸A、T、S中的任一个。
<400> 264
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Xaa Xaa Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 265
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> > SEQ ID NO: 265 - 抗小鼠IL-1RAP_候选物_1 CDRH1
<220>
<221> VARIANT
<222> 3,4,5,6,7,8,9,10
<223> 位置3处的X能够是氨基酸I、T、P中的任一个。位置
4处的X能够是氨基酸L、F、Y中的任一个。位置5处的X能够是
氨基酸A、S、P、E、D中的任一个。位置6处的X能够是
氨基酸V、G、T、H、Q、E、N、D中的任一个。位置7处的X能够是氨基酸
<220>
<221> VARIANT
<222> 7,8,9,10
<223> 位置7处的X能够是氨基酸F、A、S、Y中的任一个。
位置8处的X能够是氨基酸A,G、S、P中的任一个。位置
9处的X能够是氨基酸L、M、A中的任一个。位置10处的X能够是
氨基酸G、T、S、N中的任一个。
<400> 265
Gly Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 266
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> > SEQ ID NO: 266 - 抗小鼠IL-1RAP_候选物_1 CDRH1
<400> 266
Ile Val Leu Phe Cys Met Ala Gly Thr Ser Trp Tyr Pro His Gln Glu
1 5 10 15
Asn Asp Lys Arg
20
<210> 267
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> > SEQ ID NO: 267 - 抗小鼠IL-1RAP_候选物_1 CDRH3
<220>
<221> VARIANT
<222> 4,6,7
<223> 位置4处的X能够是氨基酸R、H中的任一个。位置6处的X
可以是氨基酸Y、R中的任一个。位置7处的X能够是
氨基酸T、S中的任一个。
<400> 267
Ala Arg Phe Xaa Tyr Xaa Xaa Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 268
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> > SEQ ID NO: 268 - 抗IL-1RAP_轻链可变序列
<400> 268
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 269
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8_CDRH1_Kabat (31-35)
<400> 269
Glu Tyr Ala Ile Gln
1 5
<210> 270
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8_CDRH1_Chothia (26-31)
<400> 270
Gly Gly Gln Phe Ser Glu
1 5
<210> 271
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8_CDRH1_IMGT (27-38)
<400> 271
Gly Gly Gln Phe Ser Glu Tyr Ala
1 5
<210> 272
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8_CDRH2_Kabat (50-65)
<400> 272
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 273
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8_CDRH2_Chothia (52-56)
<400> 273
Ile Pro Leu His Gly Gln
1 5
<210> 274
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8_CDRH2_IMGT (56-65)
<400> 274
Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val
1 5
<210> 275
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8_CDRH3_Kabat (95-102)
<400> 275
Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 276
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8_CDRH3_Chothia (95-102)
<400> 276
Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 277
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8_CDRH3_IMGT (105-117)
<400> 277
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 278
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H1B-B8 _CDRH1_Kabat (31-35)
<400> 278
Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5
<210> 279
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H1B-B8 _CDRH1_Chothia (26-31)
<400> 279
Gly Ser Pro Ala Glu Pro
1 5
<210> 280
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H1B-B8 _CDRH1_IMGT (27-38)
<400> 280
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala
1 5
<210> 281
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H1B-B8 _CDRH2_Kabat (50-65)
<400> 281
Tyr Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val Asp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 282
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H1B-B8 _CDRH2_Chothia (52-56)
<400> 282
Ile Pro Leu His Gly Gln
1 5
<210> 283
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H1B-B8 _CDRH2_IMGT (56-65)
<400> 283
Ile Ile Pro Leu His Gly Gln Val
1 5
<210> 284
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H1B-B8 _CDRH3_Kabat (95-102)
<400> 284
Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 285
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H1B-B8 _CDRH3_Chothia (95-102)
<400> 285
Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 286
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H1B-B8 _CDRH3_IMGT (105-117)
<400> 286
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 287
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H2B-C10 _CDRH1_Kabat (31-35)
<400> 287
Glu Tyr Ala Ile Gln
1 5
<210> 288
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H2B-C10 _CDRH1_Chothia (26-31)
<400> 288
Gly Gly Gln Phe Ser Glu
1 5
<210> 289
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H2B-C10 _CDRH1_IMGT (27-38)
<400> 289
Gly Gly Gln Phe Ser Glu Tyr Ala
1 5
<210> 290
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H2B-C10 _CDRH2_Kabat (50-65)
<400> 290
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 291
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H2B-C10 _CDRH2_Chothia (52-56)
<400> 291
Ile Pro Ser Leu Gly Gly
1 5
<210> 292
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H2B-C10 _CDRH2_IMGT (56-65)
<400> 292
Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr
1 5
<210> 293
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H2B-C10 _CDRH3_Kabat (95-102)
<400> 293
Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 294
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H2B-C10 _CDRH3_Chothia (95-102)
<400> 294
Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 295
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-H2B-C10 _CDRH3_IMGT (105-117)
<400> 295
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 296
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC _CDRH1_Kabat (31-35)
<400> 296
Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5
<210> 297
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC _CDRH1_Chothia (26-31)
<400> 297
Gly Ser Pro Ala Glu Pro
1 5
<210> 298
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC _CDRH1_IMGT (27-38)
<400> 298
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala
1 5
<210> 299
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC _CDRH2_Kabat (50-65)
<400> 299
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 300
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC _CDRH2_Chothia (52-56)
<400> 300
Ile Pro Ser Leu Gly Gly
1 5
<210> 301
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC _CDRH2_IMGT (56-65)
<400> 301
Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr
1 5
<210> 302
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC_CDRH3_Kabat (95-102)
<400> 302
Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 303
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC_CDRH3_Chothia (95-102)
<400> 303
Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 304
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC_CDRH3_IMGT (105-117)
<400> 304
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 305
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AA _CDRH1_Kabat (31-35)
<400> 305
Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5
<210> 306
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AA _CDRH1_Chothia (26-31)
<400> 306
Gly Ser Pro Ala Glu Pro
1 5
<210> 307
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AA _CDRH1_IMGT (27-38)
<400> 307
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala
1 5
<210> 308
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AA _CDRH2_Kabat (50-65)
<400> 308
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 309
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AA _CDRH2_Chothia (52-56)
<400> 309
Ile Pro Ser Leu Gly Gly
1 5
<210> 310
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AA _CDRH2_IMGT (56-65)
<400> 310
Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr
1 5
<210> 311
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AA_CDRH3_Kabat (95-102)
<400> 311
Gly Gln Thr Leu Tyr Ala Ala Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 312
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AA_CDRH3_Chothia (95-102)
<400> 312
Gly Gln Thr Leu Tyr Ala Ala Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 313
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AA_CDRH3_IMGT (105-117)
<400> 313
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Ala Ala Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 314
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-DA _CDRH1_Kabat (31-35)
<400> 314
Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5
<210> 315
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-DA _CDRH1_Chothia (26-31)
<400> 315
Gly Ser Pro Ala Glu Pro
1 5
<210> 316
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-DA _CDRH1_IMGT (27-38)
<400> 316
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala
1 5
<210> 317
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-DA _CDRH2_Kabat (50-65)
<400> 317
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 318
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-DA _CDRH2_Chothia (52-56)
<400> 318
Ile Pro Ser Leu Gly Gly
1 5
<210> 319
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-DA _CDRH2_IMGT (56-65)
<400> 319
Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr
1 5
<210> 320
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-DA_CDRH3_Kabat (95-102)
<400> 320
Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ala Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 321
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-DA_CDRH3_Chothia (95-102)
<400> 321
Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ala Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 322
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-DA_CDRH3_IMGT (105-117)
<400> 322
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Asp Ala Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 323
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AS _CDRH1_Kabat (31-35)
<400> 323
Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5
<210> 324
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AS _CDRH1_Chothia (26-31)
<400> 324
Gly Ser Pro Ala Glu Pro
1 5
<210> 325
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AS _CDRH1_IMGT (27-38)
<400> 325
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala
1 5
<210> 326
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AS _CDRH2_Kabat (50-65)
<400> 326
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 327
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AS _CDRH2_Chothia (52-56)
<400> 327
Ile Pro Ser Leu Gly Gly
1 5
<210> 328
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AS _CDRH2_IMGT (56-65)
<400> 328
Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr
1 5
<210> 329
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AS_CDRH3_Kabat (95-102)
<400> 329
Gly Gln Thr Leu Tyr Ala Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 330
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AS_CDRH3_Chothia (95-102)
<400> 330
Gly Gln Thr Leu Tyr Ala Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 331
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-AS_CDRH3_IMGT (105-117)
<400> 331
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Ala Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 332
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ES _CDRH1_Kabat (31-35)
<400> 332
Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5
<210> 333
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ES _CDRH1_Chothia (26-31)
<400> 333
Gly Ser Pro Ala Glu Pro
1 5
<210> 334
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ES _CDRH1_IMGT (27-38)
<400> 334
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala
1 5
<210> 335
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ES _CDRH2_Kabat (50-65)
<400> 335
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 336
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ES _CDRH2_Chothia (52-56)
<400> 336
Ile Pro Ser Leu Gly Gly
1 5
<210> 337
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ES _CDRH2_IMGT (56-65)
<400> 337
Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr
1 5
<210> 338
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ES_CDRH3_Kabat (95-102)
<400> 338
Gly Gln Thr Leu Tyr Glu Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 339
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ES_CDRH3_Chothia (95-102)
<400> 339
Gly Gln Thr Leu Tyr Glu Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 340
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ES_CDRH3_IMGT (105-117)
<400> 340
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Glu Ser Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 341
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ET _CDRH1_Kabat (31-35)
<400> 341
Glu Pro Tyr Ala Ile Gln
1 5
<210> 342
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ET _CDRH1_Chothia (26-31)
<400> 342
Gly Ser Pro Ala Glu Pro
1 5
<210> 343
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ET _CDRH1_IMGT (27-38)
<400> 343
Gly Ser Pro Ala Glu Pro Tyr Ala
1 5
<210> 344
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ET _CDRH2_Kabat (50-65)
<400> 344
Tyr Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 345
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ET _CDRH2_Chothia (52-56)
<400> 345
Ile Pro Ser Leu Gly Gly
1 5
<210> 346
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ET _CDRH2_IMGT (56-65)
<400> 346
Ile Ile Pro Ser Leu Gly Gly Tyr
1 5
<210> 347
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ET_CDRH3_Kabat (95-102)
<400> 347
Gly Gln Thr Leu Tyr Glu Thr Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 348
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ET_CDRH3_Chothia (95-102)
<400> 348
Gly Gln Thr Leu Tyr Glu Thr Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 349
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ISB 880-C8-recC-ET_CDRH3_IMGT (105-117)
<400> 349
Ala Arg Gly Gln Thr Leu Tyr Glu Thr Gly Arg Gln Phe Asp Ile
1 5 10 15

Claims (14)

1.一种抗IL1RAP抗体，所述抗IL1RAP抗体包含选自下组的第一重链CDR区(CDR-H1)、第二重链CDR区(CDR-H2)和第三重链CDR区(CDR-H3)；
(a)CDR-H1包含氨基酸序列GFXXXXXXXX(SEQ ID NO:265)，
其中位置3处的X能够是氨基酸I、T、P中的任一个；位置4处的X能够是氨基酸E、F、Y中的任一个；位置5处的X能够是氨基酸A、S、P、E、D中的任一个；位置6处的X能够是氨基酸V、G、T、H、Q、E、N、D中的任一个；位置7处的X能够是氨基酸F、A、S、Y中的任一个；位置8处的X能够是氨基酸A、G、S、P中的任一个；位置9处的X能够是氨基酸E、M、A中的任一个；位置10处的X能够是氨基酸G、T、S、N中的任一个；
(b)CDR-H2包含氨基酸序列AISYDGEGTL(SEQ ID NO:266)；
(c)CDR-H3包含氨基酸序列ARFXYXXAFDY(SEQ ID NO:267)，
其中位置4处的X能够是氨基酸R、H中的任一个；位置6处的X能够是氨基酸Y、R中的任一个；位置7处的X能够是氨基酸T、S中的任一个；
或
(d)CDR-H1包含氨基酸序列GXXXXXXAIX(SEQ ID NO:262)，
其中位置2处的X能够是氨基酸V、G、S、P、E中的任一个；
位置3处的X能够是I、E、A、G、T、S、P、H、K、R中的任一个；位置4处的X能够是E、F、A、S、W、H、N、R中的任一个；位置5处的X能够是G、T、S、Y、P、H、E、N、R中的任一个；位置6处的X是氨基酸V、A、S、P、Q、N、D中的任一个；位置7处的X是氨基酸Y、H中的任一个；位置10处的X是氨基酸H、Q中的任一个；
(e)CDR-H2包含氨基酸序列YIIPXXGXXD(SEQ ID NO:263)，其中位置5处的X能够是氨基酸T、S中的任一个；位置6处的X能够是氨基酸V、E中的任一个；位置8处的X能够是氨基酸G、Q中的任一个；位置9处的X能够是氨基酸F、Y中的任一个；
(f)CDR-H3包含氨基酸序列ARGQTEYXXGRQFDI(SEQ ID NO:
264)，位置8处的X能够是氨基酸A、E、D中的任一个；位置9处的X能够是氨基酸A、T、S中的任一个；并且其中所述抗IE1 RAP抗体含有包含SEQ ID NO:268的轻链可变区。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中：
(a)CDR-H1包含氨基酸序列SEQ ID NO:128；
(b)CDR-H2包含氨基酸序列SEQ ID NO:188；
(c)CDR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO:248。
3.根据权利要求1或2所述的抗体，其中所述抗体包含
包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的重链可变区。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中所述抗体以1×108M或更小、1×109M或更小、1×1010M或更小或者1×1011M或更小的结合亲和力结合人IL1 RAP；任选地，其中所述结合亲和力通过对SEQ ID NO:1或6的人IL1RAP多肽的平衡解离常数(KD)来测量。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中所述抗体使IL-1刺激的信号、IL-33刺激的信号和/或IL-36刺激的信号降低至少90％、至少95％、至少99％或100％；其中信号的降低通过基于细胞的阻断测定法来测量。
6.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体，其中所述抗体与SEQ ID NO:2的食蟹猴IL1RAP多肽交叉反应。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体，其中所述抗体与SEQ ID NO:261的小鼠IL1RAP多肽交叉反应。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体是IgG类的全长抗体，并且特别是其中所述IgG类抗体具有选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的同种型。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体是多特异性抗体。
10.一种抗IL1RAP抗体，所述抗体特异性结合与根据权利要求1至9中任一项所述的抗体相同的表位。
11.一种抗IL1RAP，其中所述抗体特异性结合IL1RAP的结构域2内的一个或多个氨基酸残基。
12.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至9中任一项所述的抗体以及药学上可接受的载剂。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体，所述抗体用于治疗IL1RAP介导的疾病。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体，所述抗体用于治疗选自包括以下项的组的疾病：痤疮、胰腺炎、年龄相关性黄斑变性(AMD)、气道高反应性、气道炎症、过敏性结膜炎、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、过敏性鼻炎、变态反应、阿尔茨海默氏病/痴呆、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、嗜中性皮肤病、化脓性汗腺炎、鱼鳞癣、过敏性反应、关节炎、哮喘/特应性/鼻息肉、动脉粥样硬化、特应性皮炎、自身免疫性/自身炎性血管炎(包括但不限于巨细胞动脉炎、多发性大动脉炎、川崎病)、白塞氏病(包括神经白塞氏病)、骨癌、脑癌、乳腺癌、恶病质/厌食症、软骨炎症、脑缺血、慢性疲劳综合征、慢性阻塞性肺病、梭菌相关疾病、结肠癌、充血性心力衰竭、结膜炎、冠状动脉炎症、冠状动脉再狭窄、糖尿病、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜病、干眼病、子宫内膜异位症、嗜酸性粒细胞性相关胃肠道疾病、嗜酸性粒细胞性食管炎、家族性寒冷性自身炎症综合征、家族性地中海热、纤维肌痛、纤维化疾病、食物过敏、全身性脓疱性银屑病、青光眼、肾小球肾炎、痛风性关节炎、移植物抗宿主病、蠕虫感染、失血性休克、化脓性汗腺炎、痛觉过敏、高-IgD综合征、高尿酸血症、特发性肺纤维化(IPF)、癌症相关疼痛、感染、炎性肠病(IBD，包括但不限于溃疡性结肠炎和克罗恩病)、劳损引起的炎性病症、与角膜移植相关的炎性眼病、炎性疼痛、流感相关后遗症、肠癌、局部缺血、幼年型关节炎、川崎病、肾癌、莱伯氏先天性黑蒙、肝癌、肝病、肺癌、巨噬细胞活化综合征(MAS)、黄斑变性、穆-韦二氏综合征、多发性骨髓瘤、多发性硬化症、肌肉骨骼疼痛、骨髓性和其他白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)、心肌功能障碍、肌病、鼻息肉、新生儿发病多系统炎性疾病、神经毒性、嗜中性粒皮肤病(包括掌跖脓疱病、坏疽性脓皮病、银屑病、斯威特综合征)、非感染性结膜炎、非感染性葡萄膜炎、非小细胞肺癌、骨科手术、骨关节炎、骨质疏松、疼痛、胰腺癌、帕金森氏病、牙周病、外周血管病、风湿性多肌痛、息肉状脉络膜血管病(PCV)、先兆子痫或子痫、早产、前列腺癌、原虫感染、银屑病、银屑病关节炎、坏疽性脓皮病、再灌注损伤、呼吸道合胞病毒(RSV)、特别是在血管成形术和支架术后的再狭窄、视网膜脱离、色素性视网膜炎、早产儿视网膜病变(ROP)、类风湿性关节炎、系统性硬化症、嗜酸性筋膜炎、脓毒性休克、镰状细胞性贫血、放射治疗的副作用、SAPHO(滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨炎)综合征、鼻窦炎、皮肤癌、睡眠障碍、由扭伤引起的炎症、斯蒂尔病、胃癌、系统性红斑狼疮(包括狼疮性肾炎)、颞下颌关节病、TNF受体相关周期性综合征及其他遗传性发热综合征、移植排斥、外伤、外伤性眼部损伤、2型糖尿病和白癜风。
CN202180076324.1A 2020-09-14 2021-09-14 结合il1rap的抗体及其用途 Pending CN116615457A (zh)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP20195961.6 2020-09-14
EP21151218.1 2021-01-12
EP21159485.8 2021-02-26
EP21179711.3 2021-06-16
EP21179711 2021-06-16
PCT/EP2021/075235 WO2022053715A1 (en) 2020-09-14 2021-09-14 Antibodies that bind to il1rap and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116615457A true CN116615457A (zh) 2023-08-18

Family

ID=76483197

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180076324.1A Pending CN116615457A (zh) 2020-09-14 2021-09-14 结合il1rap的抗体及其用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116615457A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11970539B2 (en) Antibodies that bind to IL1RAP and uses thereof
US11168140B2 (en) Anti-IL1RAP antibodies
CN111057147A (zh) 单价血脑屏障穿梭模块
KR20200037886A (ko) St2l 길항제 및 사용 방법
US11884719B2 (en) Anti-IL-36 antibodies and methods of use thereof
KR20220131894A (ko) Tie-2에 지향성인 항체 및 사용 방법
WO2017204277A1 (ja) 抗ＴＧＦ－ｂｅｔａ３抗体およびその使用
US11396549B2 (en) Anti-colony stimulating factor 1 receptor (CSF1R) antibodies and methods of use thereof for treating cancer
US20240018239A1 (en) Anti-cd200r1 antibodies and methods of use thereof
JP2023534458A (ja) 抗Ｎｏｔｃｈ２抗体及び使用方法
CN116234824A (zh) 抗il-36抗体及其使用方法
CN116670166A (zh) 多特异性抗体和抗体组合
CN116615457A (zh) 结合il1rap的抗体及其用途
WO2024145108A1 (en) Anti-cd8 antibodies and methods of use thereof
WO2024186634A2 (en) Anti-pd-1 antibodies and methods of use thereof
KR20230087552A (ko) Cd45를 다량체화하는 결합 분자
JP2024516305A (ja) 抗体

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40089938

Country of ref document: HK