CN116615187A - 预防或减轻与t细胞接合剂相关的不良反应 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及预防或减轻与T细胞接合剂相关的不良反应，诸如细胞因子释放综合征。具体而言，本发明涉及使用JAK和/或mTOR的抑制剂预防或减轻此类副作用。
Description
技术领域
本发明涉及预防或减轻与T细胞接合剂相关的不良反应，诸如细胞因子释放综合征。具体而言，本发明涉及使用JAK和/或mTOR的抑制剂预防或减轻此类副作用。
背景技术
T细胞接合剂，诸如T细胞双特异性抗体(TCB)或表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(CAR-T细胞)，掌握了作为癌症免疫治疗剂的广阔前景。然而，由于靶上肿瘤上、靶上肿瘤外细胞毒活性和细胞因子释放，用T细胞接合剂治疗有时与安全责任相关联。据报导，T细胞接合剂最常见的不良反应之一为细胞因子释放综合征(CRS)。这种复杂的临床综合征以发烧、低血压和呼吸缺陷为特征，并与促发炎细胞因子诸如IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-10的释放有关(参见例如Shimabukuro-Vornhagen等人,JImmunother Cancer(2018)6,56)。非常需要减轻这些危和生命的毒性的方法。Src抑制剂达沙替尼(dasatinib)被确定为预防或减轻CAR-T细胞不良反应的有效候选药物(Weber等人,Blood Advances(2019)3,711-7；Mestermann等人,Sci Transl Med(2019)11,eaau5907)以及TCB(Leclercq等人,J Immunother Cancer(2020)8(Suppl 3):A690(摘要653))。然而，达沙替尼会完全关闭CAR-T细胞功能以及TCB诱导的T细胞功能，而不会区分这些药剂的所期望活性和非所期望活性。非常需要一种在保持其治疗功效的同时预防或减轻T细胞接合剂的不良反应的方法。提出了阻断诸如IL-6或TNF-α的个别细胞因子作为预防CRS而不影响TCB诱导的T细胞活性的策略(Li等人,SciTransl Med 11,eaax8861(2019))。除了抗IL-6治疗(例如使用托珠单抗)，糖皮质激素类也用于CRS的管理。然而，一些患者对这些方法有难治性，因此需要开发减轻CRS的新颖方法。
发明内容
本发明人已发现JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂可用于通过T细胞接合疗法减轻CRS。发现诸如替西罗莫司(temsirolimus)、西罗莫司(sirolimus)和依维莫司(everolimus)的mTOR抑制剂以及诸如鲁索替尼(ruxolitinib)的JAK抑制剂可有效阻止TCB诱导的细胞因子释放，同时保留TCB介导的靶细胞杀灭。这些结果提供证据表明TCB依赖性细胞因子释放和靶细胞杀灭机制可以去耦合，并表明mTOR和/或JAK的抑制剂是目前使用的策略(诸如类固醇或IL-6/IL-6R阻断)的诱人的潜在优势替代或补充，用于减轻与T细胞接合疗法相关的CRS。
因此，在第一方面，本发明提供了一种用于在治疗个体中的疾病中使用的T细胞接合剂，其中所述治疗包含
(a)向该个体施用该T细胞接合剂，以及
(b)向该个体施用Janus激酶(JAK)和/或哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantarget of rapamycin，mTOR)信号传导的抑制剂。
本发明进一步提供了T细胞接合剂在制造用于治疗个体中的疾病的药物中的用途，其中所述治疗包括(a)向该个体施用该T细胞接合剂，以及(b)向该个体施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。
本发明还提供了治疗个体中的疾病的方法，其中所述方法包含(a)向该个体施用该T细胞接合剂，以及(b)向该个体施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。
根据上述任何方面，施用该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂可用于预防或减轻与施用该T细胞接合剂相关的不良反应。
在另一方面，本发明提供了一种JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂，其用于预防或减轻与向个体施用T细胞接合剂相关的不良反应。
本发明进一步提供了一种JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂在制造用于预防或减轻与向个体施用T细胞接合剂相关不良反应的药物中的用途。
本发明又提供了一种预防或减轻与向个体施用T细胞接合剂相关的不良反应的方法，其包括对该个体施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。
供使用的T细胞接合剂、供使用的JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、上述和本文所述的用途或方法可以单独或组合地并入以下描述的任何特征(除非上下文另有说明)。
除非本文另外定义，否则本文所用的术语为本领域中通常使用的。
在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为mTOR抑制剂。在更具体的方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为mTOR激酶抑制剂，具体为小分子mTOR激酶抑制剂。
“mTOR”代表哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(也称为FK506结合蛋白12-雷帕霉素复合物相关蛋白1(FRAP1))，是一种丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶，其属于磷脂酸肌醇-3激酶(PI3K)相关激酶家族。其为mTOR复合物1(TORC1)与mTOR复合物2(TORC2)两种不同的蛋白质复合物的核心成分，可调节不同的细胞过程。人类mTOR在UniProt条目P42345(版本218)中进行了描述。mTOR抑制剂为抑制mTOR的化合物。该大多数确立的mTOR抑制剂为所谓的雷帕霉素类似物(rapalog)，其为雷帕霉素的衍生物。雷帕霉素类似物包括西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司和地磷莫司(ridaforolimus)。第二代mTOR抑制剂为ATP竞争性mTOR激酶抑制剂，旨在与mTOR的催化位点中的ATP竞争。
表1中提供了可用于本发明的示例性mTOR抑制剂。
表1.mTOR抑制剂
在一些方面，该mTOR抑制剂是雷帕霉素的衍生物(也称为雷帕霉素类似物)。
在一些方面，该mTOR抑制剂选自由西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司和地磷莫司组成的组，具体为由西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司组成的组。
在具体方面，该mTOR抑制剂为西罗莫司。在进一步的具体方面，该mTOR抑制剂为替西罗莫司。在更进一步的具体方面，该mTOR抑制剂为依维莫司。
在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为JAK抑制剂。在更具体方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为JAK激酶抑制剂，具体为小分子JAK激酶抑制剂。
“JAK”代表詹纳斯(Janus)激酶，指的是经由JAK/STAT路径转导细胞因子介导的信号的细胞内非受体酪氨酸激酶家族。JAK拥有两个几乎相同的磷酸转移结构域，一个显示激酶活性而另一个负调节第一个的激酶活性。四个JAK家族成员是JAK1、JAK2、JAK3和TYK2(酪氨酸激酶2)。在本文中的具体方面，JAK为JAK1和/或JAK2(JAK1/2)。人类JAK1和JAK2分别描述于UniProt项目P23458(版本221)和P60674(版本224)中。JAK抑制剂(有时也称为jakinib)是抑制一种或多种JAK酶家族(JAK1、JAK2、JAK3、TYK2)活性的化合物，从而干扰JAK/STAT信号传导路径。
表2中提供了可用于本发明的示例性JAK抑制剂。
表2.JAK抑制剂
在一些方面，该JAK抑制剂为JAK1和/或JAK2(JAK1/2)抑制剂。在一些方面，该JAK抑制剂选自由鲁索替尼、巴瑞替尼、莫罗替尼、乌帕替尼、非戈替尼、阿布替尼、伊他替尼、索西替尼、奥拉替尼、费拉替尼、甘多替尼、来他替尼和帕克替尼组成的组。
在特定方面，该JAK抑制剂为JAK1和JAK2抑制剂。在具体的这些方面，该JAK抑制剂选自由鲁索替尼、巴瑞替尼和莫罗替尼组成的组。
在一些方面，该JAK抑制剂为JAK1抑制剂。在具体的这些方面，该JAK抑制剂选自由乌帕替尼、非戈替尼、阿布替尼、伊他替尼、索西替尼和奥拉替尼组成的组。
在一些方面，该JAK抑制剂为JAK2抑制剂。在具体的这些方面，该JAK抑制剂选自由费拉替尼、甘多替尼、来他替尼和帕克替尼组成的组。在具体的此类方面，该JAK抑制剂为费拉替尼。
在一些方面，该JAK抑制剂为泛JAK抑制剂。在具体的这些方面，该JAK抑制剂为托法替尼(tofacitinib)或培非替尼，具体为托法替尼。
在特定方面，该JAK抑制剂为鲁索替尼。在进一步的特定方面，该JAK抑制剂为巴瑞替尼。在一些方面，该JAK抑制剂为托法替尼。在一些方面，该JAK抑制剂为费拉替尼。
在特定方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂选自由西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司和鲁索替尼组成的组。在进一步的特定方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂选自由西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司、鲁索替尼和巴瑞替尼组成的组。
在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂导致T细胞接合剂活性的抑制。在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂不会引起对T细胞接合剂的另一活性的抑制。在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂导致T细胞接合剂的第一活性的抑制但不导致T细胞接合剂的第二活性的抑制。在其中有些方面，所述抑制为完全抑制。
在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂引起T细胞接合剂的第一活性的抑制和T细胞接合剂的第二活性的抑制，其中该第一活性的所述抑制强于该第二活性的所述抑制。在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂引起T细胞接合剂的第一活性的抑制和T细胞接合剂的第二活性的抑制，其中该第一活性的所述抑制为完全抑制且该第二活性的所述抑制为部分抑制。
T细胞接合剂的“活性”指的是T细胞接合剂在个体体内引起的反应。这种活性可包括T细胞，具体为CD4+和/或CD8+T细胞的(多个)细胞反应，诸如增殖、分化、细胞因子分泌、细胞毒性效应分子释放、细胞毒活性和活化标志物的表达，和/或对靶细胞的效应，具体为表达T细胞接合剂的靶细胞抗原的靶细胞(例如肿瘤细胞)，诸如靶细胞的裂解。
在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂引起免疫细胞，具体为T细胞的细胞因子分泌的抑制(由T细胞接合剂诱导)。在一些方面，所述细胞因子为选自由IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α、GM-CSF、MCP-1和IL-1β组成的组中的一种或多种细胞因子。免疫细胞可包括各种免疫细胞类型，诸如T细胞、巨噬细胞、单核球、NK细胞等。在一些方面，所述T细胞为CD8+T细胞或CD4+细胞。在一些方面，所述抑制为完全抑制。
在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂不引起T细胞活化(由T细胞接合剂诱导)的抑制。在一些方面，所述抑制为完全抑制。在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂引起T细胞活化(由T细胞接合剂诱导)的抑制，其中所述抑制为部分抑制。
如本文中所使用的“T细胞活化”(Activation of T cells或T cellactivation)，指的是T淋巴细胞(具体为CD4+或CD8+T细胞)的一种或多种细胞反应，选自：增殖、分化、细胞毒性效应分子释放、细胞毒活性和活化标记的表达。测定T细胞活化的适宜分析为本技术中已知的并在本文中描述。在特定方面，T细胞活化为活化标志物的表达，具体为CD25和/或CD69的表达(可选地通过流式细胞术测量)。在特定方面，T细胞活化通过测量T细胞上CD25和/或CD69的表达来确定，例如通过流式细胞术。
在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂不引起T细胞的细胞毒活性(由T细胞接合剂诱导)的抑制。在一些方面，所述抑制为完全抑制。在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂引起T细胞的细胞毒活性(由T细胞接合剂诱导)的抑制，其中所述抑制是部分抑制。
T细胞的“细胞毒活性”是指T淋巴细胞，具体为CD4+或CD8+T细胞对靶细胞的裂解(即杀灭)的诱导。细胞毒活性典型地涉及T淋巴细胞的去颗粒，这与T淋巴细胞释放细胞毒效应分子诸如颗粒酶B和/或穿孔素有关。
在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂引起T细胞的细胞因子分泌(由T细胞接合剂诱导)的抑制，但不引起T细胞的活化和/或细胞毒活性(由T细胞接合剂诱导)的抑制。在其中有些方面，所述抑制为完全抑制。
在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂引起T细胞的细胞因子分泌(由T细胞接合剂诱导)的抑制，且引起T细胞的活化和/或细胞毒活性(由T细胞接合剂诱导)的抑制，其中细胞因子分泌的所述抑制强于活化和/或细胞毒活性的所述抑制。在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂引起T细胞的细胞因子分泌(由T细胞接合剂诱导)的抑制，且引起T细胞的活化和/或细胞毒活性(由T细胞接合剂诱导)的抑制，其中细胞因子分泌的所述抑制是完全抑制，且活化和/或细胞毒活性的所述抑制是部分抑制。
本文的抑制可为部分抑制或完全抑制。完全抑制是比部分抑制更强的抑制。在一些方面，部分抑制是不超过30％、不超过40％、不超过50％、不超过60％或不超过70％的抑制。在一些方面，部分抑制是不超过30％的抑制。在一些方面，部分抑制是不超过40％的抑制。在一些方面，部分抑制是不超过50％的抑制。在一些方面，部分抑制是不超过60％的抑制。在一些方面，部分抑制是不超过70％的抑制。在一些方面，完全抑制是至少80％、至少90％或100％的抑制。在一些方面，完全抑制是至少80％的抑制。在一些方面，完全抑制是至少90％的抑制。在一些方面，完全抑制是100％的抑制。在一些方面，部分抑制是不超过50％的抑制，且完全抑制是至少80％的抑制。在一些方面，完全抑制是具有临床意义和/或统计学意义的，且/或部分抑制是没有临床意义的和/或统计学意义的。
在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂在个体中引起一种或多种细胞因子的血清水平的降低。在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂在个体中通过免疫细胞，具体为T细胞引起一种或多种细胞因子的分泌的降低。在一些方面，所述一种或多种细胞因子选自由IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α、GM-CSF、MCP-1和IL-1β组成的组。免疫细胞可包括各种免疫细胞类型，诸如T细胞、巨噬细胞、单核球、NK细胞等。
在一些方面，在该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂在给定的时间内没有被施用(至个体)后，所述降低仍持续。在一些方面，所述时间量为约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、12小时、16小时、20小时、24小时、36小时、48小时、72小时或96小时。在一些方面，在后续施用T细胞接合剂之后，所述降低仍持续。特别地，即使在停止施用该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂/不再施用该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂后，所述降低仍持续。血清水平/细胞因子的分泌的所述降低，具体为与没有施用该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的个体(包括同一个体)中的血清水平/细胞因子的分泌相比(即，在这种情况下，与没有/之前施用该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的血清水平/细胞因子的分泌相比，血清水平/细胞因子的分泌降低)。血清水平/细胞因子的分泌的所述降低，具体为与施用(具体为第一次施用)该T细胞接合剂但未施用该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的个体(包括同一个体)的血清水平/细胞因子的分泌相比(即，在这种情况下，与施用该T细胞接合剂时/之后但未施用/施用该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂之前的血清水平/细胞因子的分泌相比，血清水平/细胞因子的分泌降低)。在没有所述降低的情况下，血清水平和/或细胞因子的分泌特别地可相对于(施用)该T细胞接合剂而升高/增加。在一些方面，所述降低具有临床意义和/或统计学意义。在一些方面，所述降低为至少30％、至少40％、至少50％、至少60％或至少70％。在一些方面，所述降低为至少30％。在一些方面，所述降低为至少40％。在一些方面，所述降低为至少50％。在一些方面，所述降低为至少60％。在一些方面，所述降低为至少70％。
在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂导致对于与施用T细胞接合剂相关的不良反应的抑制。在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂并不会导致对于与施用T细胞接合剂相关的所期望效果的抑制。在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂导致对于与施用T细胞接合剂相关的不良反应的抑制，但不导致对于与施用T细胞接合剂相关的所期望效果的抑制。在其中有些方面，所述抑制为完全抑制。在其中有些方面，所述抑制具有临床意义和/或统计学意义。
在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂导致对于与施用T细胞接合剂相关的不良反应的抑制和对于与施用T细胞接合剂相关的所期望效果的抑制，其中对于不良反应的所述抑制强于对于所期望效果的所述抑制。在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂导致对于与施用T细胞接合剂相关的不良反应的抑制和对于与施用T细胞接合剂相关的所期望效果的抑制，其中对于不良反应的所述抑制是完全抑制，且对于有益作用的所述抑制是部分抑制。在一些方面，(施用)该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂导致对于与施用T细胞接合剂相关的不良反应的抑制和对于与施用T细胞接合剂相关的所期望效果的抑制，其中对于不良反应的所述抑制为具有临床意义和/或统计学意义的抑制，且对于有益作用的所述抑制不是具有临床意义和/或统计学意义的抑制。
“所期望效果(desired effect)”是药物在个体治疗(在本文中具体为使用T细胞接合剂)中导致的有益且所期望效果，即治疗或预防效果，诸如例如杀灭肿瘤细胞、降低或延缓肿瘤生长、降低肿瘤体积、降低或预防肿瘤转移、增加无进展或总生存期、缓解疾病症状等。
有时也称为“副作用”或“不良事件”(具体为在临床研究中)的“不良反应”是药物在个体治疗(在本文中具体为使用T细胞接合剂)中导致的有害和不希望的反应。
根据本发明，该不良反应与T细胞接合剂的施用有关。在一些方面，该不良反应与第一次施用T细胞接合剂有关。在一些方面，该不良反应发生在第一次施用T细胞接合剂时。在一些方面，该不良反应主要或仅在第一次施用T细胞接合剂时发生。在一些方面，该不良反应发生在施用T细胞接合剂，具体为第一次施用的12小时、24小时、36小时、48小时、72小时或96小时内。在一些方面，具体为其中仅进行单次施用T细胞接合剂时(在以T细胞接合剂治疗的过程中)，该不良反应发生在施用T细胞接合剂的3天、4天、5天、6天、7天、10天、14天或21天内。
在一些方面，所述不良反应为细胞因子释放综合征(CRS)。
“细胞因子释放综合征”(简称“CRS”)指的是在施用治疗剂(例如T细胞接合剂)期间或之后不久(例如，在1天内)，在受试者的血液中细胞因子水平升高，诸如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、介白素6(IL-6)、介白素10(IL-10)和其他，而导致不良症状。CRS是对治疗剂的不良反应，且与治疗剂的施用及时相关。它典型地发生在施用治疗剂期间或之后不久，即典型地在施用(典型地是输注)之后24小时内，主要是在第一次施用时。在一些情况下，例如在施用CAR-T细胞后，CRS也可能会在稍后发生，例如在该CAR-T细胞扩增施用之后数天。发生率和严重程度典型地随着后续施用而降低。症状可能从症状性不适到致命事件，并且可能包括发烧、寒颤、头晕、高血压、低血压、缺氧、呼吸困难、烦躁、出汗、潮红、皮疹、心动过速、呼吸急促、头痛、肿瘤痛、恶心、呕吐和/或器官衰竭。CRS可根据Lee等人,Blood(2014)124:188-195或Lee等人,Biol Blood Marrow Transplant(2019)25(4):625-638(各自通过援引以其全文并入本文)所建立的改良型细胞因子释放综合征分级系统进行分级。有关CRS的评论，请参见例如Shimabukuro-Vornhagen等人,Journal forImmunoTherapy of Cancer(2018)6:56(通过援引以其全文并入本文)。
在一些方面，所述不良反应为发烧、低血压和/或缺氧。
在一些方面，所述不良反应为一种或多种细胞因子的血清水平升高。所述升高的血清水平具体为与健康个体的血清水平和/或未施用T细胞接合剂的个体(包括同一个体)中的血清水平相比(即与未施用T细胞接合剂的血清水平相比，在这种情况下血清水平升高)。在一些方面，所述一种或多种细胞因子选自由IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α、GM-CSF、MCP-1和IL-1β组成的组。
在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂在临近(个体中)不良反应的(临床上)显现时施用。所述施用可以是，例如，在不良反应显现(即出现副作用的临床症状，如发烧)后约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、12小时、16小时、20小时或24小时内。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的施用是对于(个体中)不良反应的(临床上)显现的回应。
在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的施用是在T细胞接合剂的施用之前。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的施用与T细胞接合剂的施用同时进行。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的施用是在T细胞接合剂的施用之后。当该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的施用是在T细胞接合剂的施用之前或之后，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的这种施用可例如分别在T细胞接合剂的施用之前或之后的约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、12小时、16小时、20小时或24小时内。该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的施用可为间歇性或连续性的。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的施用是口服的。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的施用是肠胃外的，具体为静脉内的。
在一些方面，以足以引起抑制T细胞接合剂的活性的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在一些方面，以不足以引起抑制T细胞接合剂的另一种活性的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在一些方面，以足以引起抑制T细胞接合剂的第一活性但不足以引起抑制T细胞接合剂的第二活性的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在其中有些方面，所述抑制为完全抑制。
在一些方面，以足以引起抑制免疫细胞(具体为T细胞)分泌细胞因子(经由T细胞接合剂诱导)的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在一些方面，所述细胞因子为选自由IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α、GM-CSF、MCP-1和IL-1β组成的组中的一种或多种细胞因子。免疫细胞可包括各种免疫细胞类型，诸如T细胞、巨噬细胞、单核球、NK细胞等。在一些方面，所述T细胞为CD8+T细胞或CD4+细胞。在一些方面，所述抑制为完全抑制。
在一些方面，以足以引起抑制T细胞活化(经由T细胞接合剂诱导)的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在一些方面，所述抑制为完全抑制。
在一些方面，以足以引起抑制T细胞的细胞毒活性(经由T细胞接合剂诱导)的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在一些方面，所述抑制为完全抑制。
在一些方面，以足以引起抑制T细胞分泌细胞因子(经由T细胞接合剂诱导)但不足以引起抑制T细胞的活化和/或细胞毒活性(由T细胞接合剂诱导)的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在其中有些方面，所述抑制为完全抑制。
在一些方面，以足以引起降低个体中一种或多种细胞因子的血清水平的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在一些方面，以足以引起降低个体中免疫细胞(具体为T细胞)分泌一种或多种细胞因子的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在一些方面，所述一种或多种细胞因子选自由IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α、GM-CSF、MCP-1和IL-1β组成的组。免疫细胞可包括各种免疫细胞类型，诸如T细胞、巨噬细胞、单核球、NK细胞等。
在一些方面，以足以引起抑制与施用T细胞接合剂相关的不良反应的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在一些方面，以不足以引起抑制与施用T细胞接合剂相关的所期望效果的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在一些方面，以足以引起抑制与施用T细胞接合剂相关的不良反应但不足以引起抑制与施用T细胞接合剂相关的所期望效果的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在其中有些方面，所述抑制为完全抑制。在其中有些方面，所述抑制具有临床意义和/或统计学意义。
在一些方面，以有效剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。
例如JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂或T细胞接合剂的药剂的“有效量”或“有效剂量”指的是在必要的剂量和时间段内有效的量，以达到所期望治疗或预防结果。
在一些方面，以等于JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂可用的剂量强度的剂量施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。典型地，对于给定的JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂，可使用多种剂量强度(即，具有特定量的活性成分的剂型，诸如片剂或胶囊)。以这种(商业上)可用的剂量强度给药JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂将是最方便的。例如，若该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂是依维莫司，则可优选地以2.5mg、5mg、7.5mg或10mg的剂量施用(施用优选地为口服施用)。例如，若该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为西罗莫司，则可优选地以0.5mg、1mg或2mg的剂量施用(施用优选地为口服施用)。例如，若该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为鲁索替尼，则可优选地以5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用(施用优选地为口服施用)。若该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为是替西罗莫司，则可以例如12.5mg或25mg的剂量施用(施用优选地为静脉内施用，具体为使用25mg/ml活性成分的溶液)。
在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为每天施用。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为每天施用一次。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂以如上所述的剂量每天施用一次。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂是在不良反应持续期间的时间段内施用(即，是从出现不良反应开始施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂直到不良反应减少或消失)。在一些方面，在防止或减缓不良反应后停止施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。在一些方面，在不良反应减轻或消失后停止施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。所述减轻具体为具有临床意义和/或统计学意义。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂在以T细胞接合剂治疗个体的过程中施用一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次或十次，具体为一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次或十次。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂持续施用1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为每日施用一次持续1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天。该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的施用通常与T细胞接合剂的施用相关。在一些方面，该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的施用与T细胞接合剂的第一次施用相关。所述第一次施用具体为以T细胞接合剂治疗个体的过程中T细胞接合剂的第一次施用。在一些方面，施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂与第一次施用T细胞接合剂同时进行。在一些方面，施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂早于第一次施用T细胞接合剂。在一些方面，施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂是在第一次施用T细胞接合剂之后。在一些方面，施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂是在第一次施用T细胞接合剂之后并且在第二次施用T细胞接合剂之前。当该JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的施用是在(第一次)施用T细胞接合剂之前或之后时，JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的这种施用可例如分别在施用T细胞接合剂之前或之后的约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、12小时、16小时、20小时、24小时、48小时或72小时内。
在一些方面，施用T细胞接合剂比施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂持续更长的时间。在一些方面，在停止施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂后继续施用T细胞接合剂。在一些方面，施用T细胞接合剂是单次施用或重复施用。在用T细胞双特异性抗体治疗个体的过程中，T细胞双特异性抗体可以施用一次或多次。在以T细胞接合剂治疗个体的过程中，T细胞接合剂可施用一次或数次。例如，以T细胞接合剂治疗个体可包含多个治疗周期，每个治疗周期包含一次或多次施用T细胞接合剂。在一些方面，施用T细胞接合剂包含第一次和第二次施用。
为了在本发明中使用，该T细胞接合剂将以符合良好医疗实践的方式予以配制、给药和施用。在此情况中考量的因素包括正在治疗的特定疾病、正在治疗的特定哺乳动物、个别患者的临床状况、疾病原因、递送药剂的部位、施用方法、施用时间表和医疗从业人员已知的其他因素。
在一些方面，以有效剂量施用T细胞接合剂。对于全身施用，最初可以从诸如细胞培养物测定的体外测定估计有效剂量。然后可以在动物模型中制定剂量，以达到包括细胞培养物中确定的IC50在内的循环浓度范围。这样的资讯可用于更准确地确定对人体有用的剂量。也可以使用本领域中熟知的技术，根据体内数据(例如动物模型)估计初始剂量。可个别调整剂量和间隔以提供足以维持治疗效果的T细胞接合剂的血浆水平。通过注射施用的常见患者剂量在约0.1-50mg/kg/天的范围内，典型范围为0.5-1mg/kg/天。可以通过每天施用多种剂量来达到治疗有效的血浆水平。血浆水平可以例如通过HPLC来测量。
可施用有效量的T细胞接合剂来预防或治疗疾病。T细胞接合剂的适当施用途径和剂量可基于待治疗的疾病类型、T细胞接合剂的类型、疾病的严重程度和病程、个体的临床状况、个体的临床病史和对治疗的反应，以及主治医生的判断力来确定。给药可通过任何合适的途径进行，例如通过注射，例如静脉内或皮下注射，部分取决于短暂施用还是长期施用。本文中考虑各种给药时间表，其包括但不限于在多种时间点单次或多次施用、快速注射施用和脉冲输注。
T细胞接合剂和JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂可通过任何合适的途径施用，并且可通过相同的施用途径或通过不同的施用途径来施用。在一些方面，T细胞接合剂的施用是肠胃外的，具体为静脉内的。
在一些方面，施用T细胞接合剂是向个体第一次施用T细胞接合剂，具体为在以T细胞接合剂治疗个体的过程中第一次施用T细胞接合剂。
在一些方面，(施用)T细胞接合剂诱导(即引起或增加)T细胞的活化。在一些方面，(施用)T细胞接合剂诱导T细胞的细胞毒活性。在一些方面，(施用)T细胞接合剂诱导T细胞分泌细胞因子。在一些方面，细胞因子是选自由IL-2、IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α和GM-CSF组成的组中的一种或多种细胞因子。在一些方面，所述T细胞是CD8+T细胞或CD4+细胞。
在一些方面，施用T细胞接合剂导致T细胞活化，具体为细胞毒性T细胞的活化，具体为在癌症部位(例如在实性瘤癌症内)。所述活化可包含T细胞增殖、T细胞分化、T细胞分泌细胞因子、T细胞释放细胞毒性效应分子、T细胞的细胞毒活性和T细胞活化标志物的表达。在一些方面，施用T细胞接合剂导致在癌症部位(例如实性瘤癌症内)的T细胞数量增加，具体为细胞毒性T细胞数量增加。
“T细胞接合剂”指的是通过T细胞的活性，具体为细胞毒性T细胞的活性，而发挥其作用的免疫治疗剂。T细胞的这种活性可包括T细胞的细胞反应，具体为CD4+T细胞和/或CD8+T细胞的细胞反应，诸如增殖、分化、活化标记的表达、细胞因子分泌、细胞毒性效应分子释放和/或细胞毒活性。如本文所考虑的T细胞接合剂通常包含抗原结合部分，该抗原结合部分能使其等能够与靶细胞(诸如肿瘤细胞)上的靶细胞抗原结合。这样的T细胞接合剂通过T细胞的活性对其靶细胞产生影响，诸如靶细胞的裂解。示例性T细胞接合剂包括T细胞双特异性抗体、表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞(CAR-T细胞)和基于T细胞受体(TCR)的方法，诸如ImmTAC(“抗癌免疫驱动单克隆T细胞受体”；工程化TCR和抗体片段的双特异性融合蛋白，能够结合T细胞和靶细胞)或TCR修饰T细胞(TCR-T细胞)，其以具有能够与靶细胞上的特定抗原决定位结合的工程化T细胞受体为特征。
在本发明的特定方面，该T细胞接合剂为T细胞双特异性抗体。
在其他方面，该T细胞接合剂为CAR-T细胞。在一些方面，该CAR-T细胞为通用CAR-T细胞。“通用”CAR-T细胞指的是通过承接分子(adaptor molecule)与靶细胞抗原结合的CAR-T细胞，该承接分子诸如抗体，其与靶细胞抗原结合。通用CAR-T细胞表达包含与承接分子结合的抗原结合部分的CAR，且承接分子与靶细胞抗原结合。通过不同的承接分子(结合不同的靶细胞抗原)，通用的CAR-T细胞可以结合不同的靶细胞抗原，而无需针对每个靶细胞抗原表达不同的CAR。承接分子是这样的分子：(i)可被CAR结合，且(ii)可结合靶细胞抗原，举例而言，例如结合靶细胞抗原并包含可被CAR结合的Fc区的抗体。在一些方面，CAR-T细胞表达包含抗原结合部分的CAR，该抗原结合部分结合抗体Fc区，具体为IgG Fc区，更具体为IgG1Fc区，且具体为人类Fc区。在一些方面，CAR-T表达包含抗原结合部分的CAR，该抗原结合部分结合包含氨基酸取代P329G(Kabat EU索引编号)的IgG Fc区，具体为人类IgG1Fc区。在特定的这些方面，抗原结合部分为scFv。在其他方面，CAR-T表达包含抗原结合部分的CAR，该抗原结合部分结合野生型Fc区，具体为野生型人类IgG1 Fc区。在特定的这些方面，抗原结合部分为CD16或其Fc结合片段(例如，CD16的胞外结构域)。
在一些方面，该T细胞接合剂为ImmTAC。在一些方面，该T细胞接合剂为TCR-T细胞。
下面描述可用于本发明的T细胞双特异性抗体。
“T细胞双特异性抗体”是指能够结合，包括同时结合T细胞(通常经由在T细胞上表达的抗原决定位，诸如CD3)和靶细胞(通常经由在靶细胞上表达的抗原决定位，诸如CEA、CD19、CD20或HLA-A2/MAGE-A4)的抗体。
在根据本发明的优选方面，该T细胞双特异性抗体能够同时结合T细胞上的抗原决定位(即第一抗原，例如CD3)和靶细胞上的抗原决定位(即第二抗原，例如CEA、CD19、CD20或HLA-A2/MAGE-A4)。在一些方面，该T细胞双特异性抗体能够通过同时结合CD3和靶细胞抗原而交联T细胞和靶细胞。在甚至更优选的方面，这样的同时结合导致靶细胞，具体为表达靶细胞抗原(例如CEA、CD19、CD20或HLA-A2/MAGE-A4)的肿瘤细胞的裂解。在一些方面，这样的同时结合导致T细胞活化。在一些方面，这样的同时结合导致T细胞的细胞反应，该细胞反应选自以下项的组：增殖、分化、细胞因子分泌、细胞毒性效应分子释放、细胞毒活性和活化标志物的表达。在一些方面，T细胞双特异性抗体到CD3的结合而不同时到靶细胞抗原的结合，不导致T细胞活化。在一些方面，T细胞双特异性抗体能够将T细胞的细胞毒活性重定向至靶细胞。在优选的方面，所述重定向不依赖于靶细胞的MHC介导的肽抗原呈递和/或T细胞的特异性。
术语“双特异性”指的是抗体能够与至少二个不同的抗原决定位结合。典型地，双特异性抗体包含二个抗原结合位点，各个抗原结合位点对不同抗原决定位具有特异性。在某些方面，双特异性抗体能够同时结合两个抗原决定位，具体为在两种不同细胞上表达的两个抗原决定位。
如本文中所使用的，术语“抗原决定位(antigenic determinant)”与“抗原”和“抗原决定基(epitope)”同义，且指的是抗原结合部分结合的多肽大分子上的形成抗原结合部分-抗原复合体的位点(例如，氨基酸的连续延伸或由非连续氨基酸的不同区域构成的构象构型)。例如，可用的抗原决定位可存在于肿瘤细胞的表面上、受病毒感染的细胞的表面上、其他患病细胞的表面上、免疫细胞的表面上，不存在于血清中，和/或存在于细胞外基质(ECM)中。
如本文所使用的，术语“抗原结合部分”指的是结合，包括特异性结合抗原决定位的多肽分子。在一些方面，抗原结合部分能够将其所附接的实体(例如第二抗原结合部分)导引至靶位点，例如导引至载有抗原决定位的特定类型的肿瘤细胞。在另外的方面，抗原结合部分能够通过其靶抗原(例如T细胞受体复合体抗原)活化信号传导。抗原结合部分包括如本文进一步定义的抗体和其片段。特定抗原结合部分包括抗体的抗原结合域，其包含抗体重链可变区和抗体轻链可变区。在某些方面，该抗原结合部分可包括如本文进一步定义和本领域中已知的抗体恒定区。有用的重链恒定区包括五种同型(isotype)中的任一个：α、δ、ε、γ或μ。有用的轻链恒定区包括二种同型中的任一个：κ和λ。
“特异性结合”指的是结合对抗原具有选择性且可区分出非所欲或非特定的相互作用。本文中的术语“结合”(bind/binding)一般是指“特异性结合”。抗原结合部分结合特异性抗原决定基的能力可通过酶联免疫吸附测定(ELISA)或其他本领域技术人员熟悉的技术，例如表面等离子共振(SPR)技术(例如在BIAcore仪器上分析)(Liljeblad等人，Glyco J17，323-329(2000))和传统的结合检定(Heeley，Endocr Res 28，217-229(2002))来测定。在一些方面，抗原结合部分结合至不相关的蛋白质的程度小于抗原结合部分结合至抗原的程度的约10％，例如通过SPR所测定的。在某些方面，结合至抗原的抗原结合部分或包含该抗原结合部分的抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如，10-9M至10-13M)的解离常数(KD)。
“亲和力”指的是分子(例如受体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如配位体)之间的非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，否则如本文中所使用的“结合亲和力”指的是反映结合对成员(例如，抗原结合部分和抗原，或受体和其配位体)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以解离常数(KD)表示，其为解离速率常数与缔合速率常数(分别为koff和kon)之比。因此，等效亲和力可包括不同速率常数，只要速率常数比保持相同即可。可通过本领域已知的既定方法测量亲和力，该方法包括那些本文所述的方法。用于测定亲和力的特定方法为表面等离子共振(SPR)。
除非另有说明，否则“CD3”指的是源自任何脊椎动物的任何天然CD3，该脊椎动物包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如人)、非人灵长类动物(例如食蟹猕猴)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。术语涵盖“全长”未经加工的CD3以及在细胞中加工所产生的任何形式的CD3。该术语还涵盖天然生成的CD3变异体，例如，剪接变异体或等位基因变异体。在一些方面，CD3为人CD3，具体为人CD3的ε亚基(CD3ε)。人CD3ε的氨基酸序列显示于UniProt(www.uniprot.org)登录号P07766(版本144)或NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/)RefSeq NP_000724.1。也可参见SEQ ID NO:1。食蟹猕猴“Macaca fascicularis”CD3ε的氨基酸序列显示于NCBI GenBank编号BAB71849.1。也可参见SEQ ID NO:2。
如本文中所使用的，“靶细胞抗原”指的是呈现于靶细胞的表面上的抗原决定位，该靶细胞例如肿瘤中的细胞，诸如癌细胞或肿瘤基质的细胞(在此情况下为“肿瘤细胞抗原”)。优选地，该靶细胞抗原不是CD3，且/或在与CD3不同的细胞上表达。在一些方面，该靶细胞抗原为CEA，具体为人CEA。在一些方面，该靶细胞抗原为CD20，具体为人CD20。在其他方面，该靶细胞抗原为HLA-A2/MAGE-A4，具体为人HLA-A2/MAGE-A4。在一些方面，该靶细胞抗原为CD19，具体为人CD19。
如本文所使用的，关于抗原结合部分等的术语“第一”、“第二”或“第三”，用于方便区分每一类型的部分何时存在多于一个。除非明确说明，否则使用这些术语并非旨在赋予双特异性抗体特定的顺序或方向。
如本文中所使用的，术语“化合价(valent)”表示抗体中存在指定数量的抗原结合位点。因此，术语“单价结合抗原(monovalent binding to an antigen)”表示抗体中存在对抗原具有特异性的一个(且不超过一个)抗原结合位点。
本文中的术语“抗体”为在最宽广意义上使用且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要其等展示出所期望抗原结合活性即可。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，指的是具有与天然抗体结构实质上类似的结构的抗体。
“抗体片段”指的是除完整抗体以外的分子，其包含结合完整抗体所结合抗原的完整抗体的一部分。抗体片段的实例包括(但不限于)Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2、双功能抗体、线性抗体、单链抗体分子(例如scFv)和单结构域抗体。关于某些抗体片段的综述，参见Hudson等人，Nat Med 9，129-134(2003)。关于scFv片段的综述，请参见例如Pluckthün，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，New York，第269-315页(1994)；也可参见WO 93/16185；和美国专利第5,571,894号和第5,587,458号。关于包含补救受体(salvage receptor)结合抗原决定基残基且具有增加的活体内半衰期的Fab和F(ab')2片段的论述，参见美国专利号5,869,046。双功能抗体为具有两个抗原结合位点(其可为二价或双特异性的)的抗体片段。参见例如EP404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat Med 9，129-134(2003)；和Hollinger等人，ProcNatl Acad Sci USA 90，6444-6448(1993)。Hudson等人，Nat Med 9，129-134(2003)中也描述了三功能抗体和四功能抗体。单结构域抗体为包含抗体重链可变结构域之的全部或部分或抗体轻链可变结构域的全部或部分的抗体片段。在某些方面，单结构域抗体为人单结构域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见例如美国专利号6,248,516B1)。抗体片段可通过各种技术制造，包括但不限于如本文所述的完整抗体的蛋白水解消化以及重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)的产生。
术语“可变区”或“可变结构域”指的是参与抗体至抗原的结合的抗体重链结构域或轻链结构域。天然抗体的重链和轻链(分别为VH和VL)的可变结构域通常具有类似的结构，且每个域均包含四个保守性骨架区(FR)和三个高度可变区(HVR)。参见例如Kindt等人，Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91页(2007)。单个VH或VL结构域可足以赋予抗原结合特异性。如在本文中结合可变区序列所使用的，“Kabat编号”指的是Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版Public HealthService，National Institutes of Health，Bethesda,MD(1991)描述的编号系统。
如本文中所使用的，重链和轻链的所有恒定区和结构域的氨基酸位置是根据描述于Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，PublicHealth Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991)的Kabat编号系统(在本文中称为“根据Kabat编号”或“Kabat编号”)编号的。具体来说，该Kabat编号系统(参见Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，PublicHealth Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991)的第647-660页)用于卡帕和兰姆达同型的轻链恒定结构域CL，且该Kabat EU索引编号系统(参见第661-723页)用于重链恒定结构域(CH1、铰链、CH2和CH3)，在此情况中，其于本文中通过参考“根据Kabat EU索引编号”进一步阐明。
如本文所使用的，术语“高度可变区”或“HVR”指的是抗体可变结构域中序列高变并决定抗原结合特异性的各个区域，例如“互补决定区”(“CDR”)。一般而言，抗体包含六个CDR；三个在VH中(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，且三个在VL中(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。在本文中，示例性CDR包括：
(a)高度可变环存在于氨基酸残基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)处(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196:901-917(1987))；
(b)CDR存在于氨基酸残基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1)、50-65(H2)、和95-102(H3)处(Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda,MD(1991))；以及
(c)抗原接触存在于氨基酸残基27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)、和93-101(H3)处(MacCallum等人J.Mol.Biol.262:732-745(1996))。
除非另有说明，否则CDR根据Kabat等人在上述文献中所述的方法来确定。本领域技术人员将理解，CDR也可根据在上述文献Chothia和上述文献McCallum中所述的方法或任何其他科学上接受的命名系统来确定。
“框架(framework)”或“FR”指的是除高度可变区(hypervariable region)(HVR)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3、和FR4。因此，HVR和FR序列通常以如下顺序出现在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
抗体或免疫球蛋白的“类别(class)”指的是其重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。有五大类别抗体：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，且其中的几种可进一步分为次类(同型(isotype))，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。
“Fab分子”指的是由重链(“Fab重链”)的VH和CH1结构域和免疫球蛋白的轻链(“Fab轻链”)的VL和CL结构域组成的蛋白质。
“交换型(crossover)”Fab分子(也称为“Crossfab”)意指Fab分子，其中，Fab重链和轻链的可变结构域或恒定结构域被交换(即彼此替换)，即，交换型Fab分子包含由轻链可变结构域VL和重链恒定结构域1CH1组成的肽链(VL-CH1，在N端至C端方向上)、和由重链可变结构域VH和轻链恒定结构域CL组成的肽链(VH-CL，在N端至C端方向上)。为清楚起见，在其中Fab轻链和Fab重链的可变结构域被交换的交换型Fab分子中，包含重链恒定结构域1CH1的肽链在本文中称为(交换型)Fab分子的“重链”。相反地，在其中Fab轻链和Fab重链的恒定结构域被交换的交换型Fab分子中，包含重链可变结构域VH的肽链在本文中称为(交换型)Fab分子的“重链”。
与此相反，“常规”Fab分子意指其自然形式(即包含由重链可变结构域和恒定结构域组成的重链(VH-CH1，在N端至C端方向上)和由轻链可变结构域和恒定结构域组成的轻链(VL-CL，在N端至C端方向上))的Fab分子。
术语“免疫球蛋白分子(immunoglobulin molecule)”指的是具有天然生成的抗体的结构的蛋白质。例如，IgG类的免疫球蛋白为约150,000道耳顿、由二条轻链和二条重链经二硫键键合所构成的异四聚体糖蛋白。从N端至C端，每条重链具有可变结构域(VH)，也称为重链可变结构域或重链可变区，接着是三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)，也称为重链恒定区。类似地，从N端至C端，每条轻链具有可变结构域(VL)，也称为轻链可变结构域或轻链可变区，接着是轻链恒定(CL)结构域，也称为轻链恒定区。免疫球蛋白的重链可被归类为五种类型中的一种，称为α(IgA)、δ(IgD)、ε(IgE)、γ(IgG)或μ(IgM)，其中一些可进一步分为亚型，例如γ1(IgG1)、γ2(IgG2)、γ3(IgG3)、γ4(IgG4)、α1(IgA1)和α2(IgA2)。基于其恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白的轻链可被归类为两种类型中的一种，称为卡帕(κ)和兰姆达(λ)。免疫球蛋白基本上由经由免疫球蛋白铰链区连接的二个Fab分子和一个Fc结构域组成。
本文中的术语“Fc结构域”或“Fc结构域”，用于定义包含至少一部分恒定区的免疫球蛋白重链的C端区。该术语包括天然序列Fc区和变异体Fc区。尽管IgG重链的Fc区的边界可能略有变化，但通常将人IgG重链的Fc区定义为从Cys226或Pro230延伸至该重链的羧基端。但是，由宿主细胞产生的抗体可能经历重链C端的一种或多种，具体为一种或两种氨基酸的转译后切割。因此，由宿主细胞通过表达编码全长重链的特定核酸分子而产生的抗体可包括该全长重链，或者其可包括该全长重链的切割变异体。重链的最后两个C端氨基酸为甘氨酸(G446)和赖氨酸(K447，根据Kabat EU索引编号)。因此，可以存在或不存在Fc区的C端赖氨酸(Lys447)或C端甘氨酸(Gly446)和赖氨酸(K447)。除非本文另有说明，否则Fc区或恒定区中氨基酸残基的编号根据EU编号系统(也称为EU索引)进行，如Kabat等人所述(Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991)(另见上文)。如本文中所使用的Fc结构域的“亚基”指的是形成二聚体Fc结构域的两个多肽之一，即包含能够稳定自缔合的免疫球蛋白重链的C端恒定区的多肽。例如，IgG Fc结构域的亚基包含IgG CH2和IgG CH3恒定结构域。
“促进Fc结构域的第一亚基和第二亚基的缔合的修饰”是对肽主链的操作或对Fc结构域亚基的转译后修饰，其减少或阻止包含Fc结构域亚基的多肽与相同多肽的缔合形成同源二聚体。本文所使用的促进缔合的修饰，具体包括对期望缔合的两个Fc结构域亚基(即Fc结构域的第一亚基和第二亚基)中的每一个所进行的单独修饰，其中，该修饰彼此互补，以便促进两个Fc结构域亚基的缔合。例如，促进缔合的修饰可改变一个或两个Fc结构域亚基的结构或电荷，以分别使其缔合在空间或静电上有利。因此，(杂)二聚化发生在包含第一Fc结构域亚基的多肽与包含第二Fc结构域亚基的多肽之间，其就进一步融合到每个亚基(例如，抗原结合部分)的组分而言可能有所不同。在一些方面，促进缔合的修饰包含Fc结构域中的氨基酸突变，具体为氨基酸取代。在特定方面，促进缔合的修饰包含Fc结构域的两个亚基的每一个中的单独的氨基酸突变，具体为氨基酸取代。
术语“效应子功能”指的是归因于抗体的Fc区的那些生物活性，其随抗体同型而变化。抗体效应子功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)、Fc受体结合、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)、细胞因子分泌、抗原呈递细胞摄取的免疫复合物介导抗原、细胞表面受体(例如，B细胞受体)降调和B细胞活化。
相对于参考多肽序列，“百分比(％)氨基酸序列同一性”被定义为候选序列中氨基酸残基的百分比，其与参考多肽序列中的氨基酸残基的百分比相同，在比对序列并引入差异后(如有必要)，可实现最大百分比序列同一性，并且不考虑将任何保守取代作为序列同一性的一部分。为确定百分比氨基酸序列同一性的目的而进行的比对可通过本领域中技术范围内的各种方式实现，例如，使用公开可用的电脑软件，诸如BLAST、BLAST-2、Clustal W、Megalign(DNASTAR)软件或FASTA程序包。本领域技术人员可确定用于比对序列的合适参数，包括在所比较的序列全长上实现最大比对所期望任何演算法。但是，出于本文的目的，使用FASTA封装36.3.8c版或更高版本的ggsearch程序和BLOSUM50比较矩阵来生成％氨基酸序列同一性值。该FASTA程序包由以下作者开发：W.R.Pearson and D.J.Lipman(1988),“Improved Tools for Biological Sequence Analysis”,PNAS 85:2444-2448；W.R.Pearson(1996)“Effective protein sequence comparison”Meth.Enzymol.266:227-258；和Pearson et.al.(1997)(Genomics 46:24-36)，并可从以下网址公开存取：http://fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_down.shtml。替代性地，在http://fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/index.cgi可存取的公共服务器可被用于通过使用ggsearch(global protein:protein)程序和默认选项(BLOSUM50；open:-10；ext:-2；Ktup＝2)比较序列，以确保执行全局而不是局部比对。输出比对标题中给出百分比氨基酸同一性。
“活化Fc受体”为在抗体的Fc结构域参与之后引起刺激受体携带细胞执行效应子功能信号传导的事件的Fc受体。人活化Fc受体包括FcγRIIIa(CD16a)、FcγRI(CD64)、FcγRIIa(CD32)和FcαRI(CD89)。
“减少结合”，例如减少结合至Fc受体，指的是(例如)通过SPR测得各自相互作用的亲和力降低。为清楚起见，该术语还包括将亲和力降低至零(或低于分析方法的检测限度)，即相互作用完全废除。相反，“增加结合”指的是各自相互作用的结合亲和性增加。
“融合”指的是组分(例如Fab分子和Fc结构域亚基)经肽键直接或经由一或多个肽连接子连接。
在特定方面，T细胞双特异性抗体结合至CD3和靶细胞抗原。因此，在一些方面，T细胞双特异性抗体包含结合至CD3的抗原结合部分和结合至靶细胞抗原的抗原结合部分。
在一些方面，该第一抗原结合部分和/或第二抗原结合部分为Fab分子。在一些方面，该第一抗原结合部分是互换型Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区或恒定区被交换。在这方面，该第二抗原结合部分优选地为常规Fab分子。
在一些方面，其中T细胞双特异性抗体的第一抗原结合部分和第二抗原结合部分两者均为Fab分子，并且其中一个抗原结合部分(具体为第一抗原结合部分)中，Fab轻链和Fab重链的可变结构域VL和VH彼此取代，i)在第一抗原结合部分的恒定结构域CL中，位置124的氨基酸被带正电荷的氨基酸(根据Kabat编号)取代，且其中，在第一抗原结合部分的恒定结构域CH1中，位置147的氨基酸或位置213的氨基酸被带负电荷的氨基酸(根据KabatEU索引编号)取代；或
ii)在第二抗原结合部分的恒定结构域CL中，位置124的氨基酸被带正电荷的氨基酸(根据Kabat编号)取代，且其中，在第二抗原结合部分的恒定结构域CH1中，位置147的氨基酸或位置213的氨基酸被带负电荷的氨基酸(根据Kabat EU索引编号)取代。
T细胞双特异性抗体不包含i)和ii)两者下所提及的修饰。具有VH/VL交换的抗原结合部分的恒定结构域CL和CH1未彼此取代(即保留未交换状态)。
在更具体的方面，
i)在第一抗原结合部分的恒定结构域CL中，位置124的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)独立取代，并且在第一抗原结合部分的恒定结构域CH1中，位置147的氨基酸或位置213的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)独立取代；或ii)在第二抗原结合部分的恒定结构域CL中，位置124的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)独立取代，并且在第二抗原结合部分的恒定结构域CH1中，位置147的氨基酸或位置213的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)独立取代。
在一些方面，在第二抗原结合部分的恒定结构域CL中，位置124的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)独立取代，并且在第二抗原结合部分的恒定结构域CH1中，位置147的氨基酸或位置213的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)独立取代。
在另外的方面，在第二抗原结合部分的恒定结构域CL中，位置124的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)独立取代，并且在第二抗原结合部分的恒定结构域CH1中，位置147的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)独立取代。
在优选方面，在第二抗原结合部分的恒定结构域CL中，位置124的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)独立取代，且位置123的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)独立取代，并且在第二抗原结合部分的恒定结构域CH1中，位置147的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)独立取代，且位置213的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)独立取代。
在一些方面，在第二抗原结合部分的恒定结构域CL中，位置124的氨基酸被赖氨酸(K)(根据Kabat编号)取代，且位置123的氨基酸被赖氨酸(K)(根据Kabat编号)取代，并且在第二抗原结合部分的恒定结构域CH1中，位置147的氨基酸被谷氨酸(E)(根据Kabat EU索引编号)取代，且位置213的氨基酸被谷氨酸(E)(根据Kabat EU索引编号)取代。
在一些方面，在第二抗原结合部分的恒定结构域CL中，位置124的氨基酸被赖氨酸(K)(根据Kabat编号)取代，且位置123的氨基酸被精氨酸(R)(根据Kabat编号)取代，并且在第二抗原结合部分的恒定结构域CH1中，位置147的氨基酸被谷氨酸(E)(根据Kabat EU索引编号)取代，且位置213的氨基酸被谷氨酸(E)(根据Kabat EU索引编号)取代。
在特定的方面，如果根据上述方面的氨基酸取代发生在第二抗原结合部分的恒定结构域CL和恒定结构域CH1中，则第二抗原结合部分的恒定结构域CL为κ同型。
在一些方面，第一抗原结合部分与第二抗原结合部分彼此融合，可选地经由肽连接子彼此融合。
在一些方面，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分各自为Fab分子，且(i)第二抗原结合部分在Fab重链的C端与第一抗原结合部分的Fab重链的N端融合，或(ii)第一抗原结合部分在Fab重链的C端与第二抗原结合部分的Fab重链的N端融合。
在一些方面，T细胞双特异性抗体提供至CD3的单价结合。
在特定方面，T细胞双特异性抗体包含结合至CD3的单一抗原结合部分和结合至靶细胞抗原的两个抗原结合部分。因此，在一些方面，T细胞双特异性抗体包含结合至靶抗原的第三抗原结合部分，具体为Fab分子，更具体为常规Fab分子。第三抗原结合部分可以单独或组合地并入本文描述的与第二抗原结合部分相关的所有特征(例如CDR序列、可变区序列和/或恒定区中的氨基酸取代)。在一些方面，第三抗原部分与第一抗原结合部分相同(例如也是常规Fab分子并包含相同的氨基酸序列)。
在特定的方面，T细胞双特异性抗体进一步包含Fc结构域，该Fc结构域由第一亚基和第二亚基构成。在一些方面，该Fc结构域为IgG Fc结构域。在特定的方面，该Fc结构域为IgG1 Fc结构域。在其他方面，该Fc结构域为IgG4 Fc结构域。在更具体的方面，该Fc结构域为IgG4 Fc结构域，其包含在位置S228(根据Kabat EU索引编号)的氨基酸取代，具体为氨基酸取代S228P。该氨基酸取代减少体内IgG4抗体的Fab臂交换(参见Stubenrauch等人，DrugMetabolism and Disposition 38，84-91(2010))。在进一步特定方面，该Fc结构域为人Fc结构域。在特定优选的方面，该Fc结构域为人IgG1 Fc结构域。人IgG1 Fc区的一个示例性序列在SEQ ID NO:3中给出。
在一些方面，其中该第一抗原结合部分、该第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分各自为Fab分子，(a)该第二抗原结合部分在该Fab重链的C端与该第一抗原结合部分的该Fab重链的N端融合，且该第一抗原结合部分在该Fab重链的C端与该Fc结构域的该第一亚基的N端融合，又或是(ii)该第一抗原结合部分在该Fab重链的C端与该第二抗原结合部分的该Fab重链的N端融合，且该第二抗原结合部分在该Fab重链的C端与该Fc结构域的该第一亚基的N端融合；且(b)该第三抗原结合部分(在存在时的)在该Fab重链的C端与该Fc结构域的该第二亚基的N端融合。
在一些方面，T细胞双特异性抗体基本上由第一、第二和第三抗原结合部分(具体为Fab分子)、由第一和第二亚基组成的Fc结构域以及可选地一个或多个肽连接子组成。
T细胞双特异性抗体的组分可直接彼此融合或优选地，经由一个或多个合适的肽连接子融合。在Fab分子与Fc结构域的亚基之N端融合的情况下，其通常通过免疫球蛋白铰链区融合。
抗原结合部分可与Fc结构域融合，或彼此直接融合或者通过肽连接子彼此融合，该肽连接子包含一个或多个氨基酸，典型地约2-20个氨基酸。肽连接子为本领域中所公知的并且如本文所述。合适的非免疫肽连接子包括例如(G4S)n、(SG4)n、(G4S)n、G4(SG4)n或(G4S)nG5肽连接子。“n”通常为1至10的整数，典型地为2至4。在一些方面，所述肽连接子的长度为至少5个氨基酸；在一些方面，长度为5至100个氨基酸；在另外的方面，长度为10至50个氨基酸。在一些方面，所述肽连接子为(GxS)n或(GxS)nGm，其中G＝甘氨酸，S＝丝氨酸，且(x＝3，n＝3、4、5或6，且m＝0、1、2或3)或(x＝4，n＝1、2、3、4或5，且m＝0、1、2、3、4或5)；在一些方面，x＝4且n＝2或3；在另外的方面，x＝4且n＝2；在又另外的方面，x＝4，n＝1，且m＝5。在一些方面，所述肽连接子为(G4S)2。在其他方面，所述肽连接子为G4SG5。另外，连接子可包含免疫球蛋白铰链区(的一部分)。具体而言，在其中Fab分子与Fc结构域亚基的N端融合的情况下，可通过包含附加的肽连接子或不含附加的肽连接子的免疫球蛋白铰链区或其一部分融合。
在特定的方面，Fc结构域包含促进Fc结构域的第一亚基与第二亚基的缔合的修饰。人IgG Fc结构域的两个亚基之间最广泛的蛋白质-蛋白质相互作用位点在CH3结构域中。因此，在一些方面，所述修饰在Fc结构域的CH3结构域中进行。
在具体的方面，所述促进Fc结构域的第一亚基和第二亚基的缔合的修饰为所谓的“杵和臼(knob-into-hole)”修饰，其包括在Fc结构域的两个亚基中的一个的“杵状物”修饰和Fc结构域的两个亚基中的另一个的“臼状物”修饰。“杵和臼”技术描述于例如：US 5,731,168；US 7,695,936；Ridgway等人，Prot Eng 9，617-621(1996)；和Carter，J ImmunolMeth248，7-15(2001)。通常，该方法包括在第一多肽的界面处引入一个突起(“杵状物”)，并且在第二多肽的界面中引入一个对应的空腔(“臼状物”)，以使该突起可定位于该空腔中，从而促进异源二聚体形成并阻碍同源二聚体形成。通过用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换第一多肽界面上的较小的氨基酸侧链来构建突起。通过将较大氨基酸侧链替换为较小的氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)，在第二多肽的界面中形成与突起具有相同或相近大小的互补空腔。
因此，在一些方面，该Fc结构域的该第一亚基的该CH3结构域中的氨基酸残基被具有较大侧链体积的氨基酸残基取代，从而在该第一亚基的该CH3结构域内产生突起，该突起为可定位于该第二亚基的CH3结构域内的空腔中，并且该Fc结构域的该第二亚基的该CH3结构域中的氨基酸残基被具有较小侧链体积的氨基酸残基取代，从而在该第二亚基的该CH3结构域内产生空腔，该第一亚基的该CH3结构域内的该突起可定位于该空腔内。优选地，所述具有较大侧链体积的氨基酸残基选自精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)。优选地，所述具有较小侧链体积的氨基酸残基选自丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和缬氨酸(V)。可通过改变编码多肽的核酸(例如通过位点专一的诱变或通过肽合成)来制备突起和空腔。
在这样具体的方面，在Fc结构域的第一亚基中，在位置366处的苏氨酸残基被色氨酸残基(T366W)取代，并且在该Fc结构域的第二亚基中，在位置407处的酪氨酸残基被缬氨酸残基(Y407V)取代，并且可选地，在位置366处的苏氨酸残基被丝氨酸残基(T366S)取代，并且在位置368处的白氨酸残基被丙氨酸残基(L368A)取代(根据Kabat EU索引编号)。在另外的方面，在Fc结构域的第一亚基中，在位置354处的丝氨酸残基又被半胱氨酸残基替换(S354C)或在位置356处的谷氨酸残基被半胱氨酸残基替换(E356C)(具体为在位置354处的丝氨酸残基被半胱氨酸残基替换)，并且在Fc结构域的第二亚基中，在位置349处的酪氨酸残基又被半胱氨酸残基替换(Y349C)(根据Kabat EU索引编号)。在优选的方面，Fc结构域的第一亚基包含氨基酸取代S354C和T366W，并且Fc结构域的第二亚基包含氨基酸取代Y349C、T366S、L368A和Y407V(根据Kabat EU索引编号)。
在一些方面，Fc结构域包含降低至Fc受体的结合和/或效应子功能的一种或多种氨基酸取代。
在特定的方面，该Fc受体为Fcγ受体。在一些方面，该Fc受体为人Fc受体。在一些方面，该Fc受体为活化Fc受体。在具体的方面，该Fc受体为活化人Fcγ受体，更具体而言为人FcγRIIIa、FcγRI或FcγRIIa，最具体而言为人FcγRIIIa。在一些方面，该效应子功能为选自补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和细胞因子分泌的组中的一种或多种。在特定的方面，该效应子功能为ADCC。
典型地，在Fc结构域的两个亚基中的每个中都存在相同的一个或多个氨基酸取代。在一些方面，该一个或多个氨基酸取代降低了该Fc结构域与Fc受体的结合亲和力。在一些方面，该一个或多个氨基酸取代降低了该Fc结构域与Fc受体的结合亲和力至少2倍、至少5倍或至少10倍。
在一些方面，该Fc结构域包含在选自E233、L234、L235、N297、P331和P329(根据Kabat EU索引编号)的组的位置处的氨基酸取代。在更具体的方面，该Fc结构域包含在选自L234、L235和P329(根据Kabat EU索引编号)的组的位置处的氨基酸取代。在一些方面，该Fc结构域包含氨基酸取代L234A和L235A(根据Kabat EU索引编号)。在这样的一些方面，该Fc结构域为IgG1 Fc结构域，具体为人IgG1 Fc结构域。在一些方面，该Fc结构域包含在位置P329处的氨基酸取代。在更具体的方面，该氨基酸取代为P329A或P329G，具体为P329G(根据Kabat EU索引编号)。在一些方面，该Fc结构域包含在位置P329处的氨基酸取代，以及在选自E233、L234、L235、N297和P331(根据Kabat EU索引编号)的位置处的另一个氨基酸取代。在更具体的方面，该另一个氨基酸取代为E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S。在特定方面，该Fc结构域包含在位置P329、L234和L235(根据Kabat EU索引编号)处的氨基酸取代。在更特定的方面，该Fc结构域包含氨基酸突变L234A、L235A和P329G(“P329GLALA”、“PGLALA”或“LALAPG”)。具体而言，在优选方面，该Fc结构域的每个亚基包含氨基酸取代L234A、L235A和P329G(根据Kabat Eu索引编号)，即在该Fc结构域的第一亚基和第二亚基中的每个中，位置234处的白氨酸残基被丙氨酸残基取代(L234A)，位置235处的白氨酸残基被丙氨酸残基取代(L235A)，并且位置329处的脯氨酸残基被甘氨酸残基取代(P329G)(根据Kabat EU索引编号)。在这样的一些方面，该Fc结构域为IgG1 Fc结构域，具体为人IgG1 Fc结构域。
在一些方面，T细胞双特异性抗体的靶细胞抗原为癌胚抗原(CEA)。
除非另有说明，否则“癌胚抗原”或“CEA”(也称为癌胚抗原相关细胞粘附分子5(CEACAM5))指的是源自任何脊椎动物的任何天然CEA，该脊椎动物包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如人)、非人灵长类动物(例如食蟹猕猴)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。该术语涵盖“全长”、未处理的CEA以及在细胞处理中得到的任何形式的CEA。该术语还涵盖天然生成的CEA变异体，例如，剪接变异体或等位基因变异体。在一些方面，CEA为人CEA。人CEA的氨基酸序列显示于UniProt(www.uniprot.org)登录号P06731或NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/)RefSeq NP_004354.2。在一些方面，CEA是细胞膜结合的CEA。在一些方面，CEA是在细胞表面表达的CEA，例如癌细胞。
结合至CEA的用于本发明的有用的T细胞双特异性抗体被描述于例如PCT公开号WO2014/131712(通过援引以其全文并入本文)中。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含结合至CD3的第一抗原结合部分和结合至CEA的第二抗原结合部分。
在一些方面，第一抗原结合部分包含：含有SEQ ID NO:4的重链CDR(HCDR)1、SEQID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:6的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，第二抗原结合部分包含：含有SEQ ID NO:12的重链CDR(HCDR)1、SEQID NO:13的HCDR2和SEQ ID NO:14的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:15的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:16的LCDR2和SEQ ID NO:17的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含
(i)第一抗原结合部分，其结合至CD3且包含：含有SEQ ID NO:4的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:6的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3的轻链可变区；和
(ii)第二抗原结合部分，其结合至CEA且包含：含有SEQ ID NO:12的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:13的HCDR2和SEQ ID NO:14的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ IDNO:15的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:16的LCDR2和SEQ ID NO:17的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，第一抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第一抗原结合部分包含SEQ ID NO:10的重链可变区序列和SEQ ID NO:11的轻链可变区序列。
在一些方面，第二抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第二抗原结合部分包含SEQ ID NO:18的重链可变区序列和SEQ ID NO:19的轻链可变区序列。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含结合至CEA的第三抗原结合部分和/或由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域，如本文所述。
在优选的方面，T细胞双特异性抗体包含
(i)结合至CD3的第一抗原结合部分，其包含：含有SEQ ID NO:4的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:6的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3的轻链可变区，其中第一抗原结合部分是互换型Fab分子，其中Fab轻链与Fab重链的可变区或恒定区，具体为恒定区是经交换的；
(ii)结合至CEA的第二抗原结合部分和第三抗原结合部分，其包含：含有SEQ IDNO:12的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:13的HCDR2和SEQ ID NO:14的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:15的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:16的LCDR2和SEQ ID NO:17的LCDR3的轻链可变区，其中第二抗原结合部分和第三抗原结合部分各自为Fab分子，具体为常规Fab分子；
(iii)由第一亚基和第二亚基所构成的Fc结构域，
其中该第二抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该第一抗原结合部分的该Fab重链的N端，且该第一抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该Fc结构域的该第一亚基的N端，且其中该第三抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该Fc结构域的该第二亚基的N端。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CEA和CD3)的第一抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第一抗原结合部分包含SEQ ID NO:10的重链可变区序列和SEQ ID NO:11的轻链可变区序列。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CEA和CD3)的第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含SEQ ID NO:18的重链可变区和SEQ IDNO:19的轻链可变区。
根据上述方面的Fc结构域可以单独或组合地并入上文关于Fc结构域描述的所有特征。
在一些方面，该T细胞双特异性抗体(结合至CEA和CD3)的Fc结构域包含促进Fc结构域的第一和第二亚基缔合的修饰，和/或该Fc结构域包含减少与Fc受体的结合和/或效应子功能的一个或多个氨基酸取代。
在一些方面，抗原结合部分和Fc区通过肽连接子彼此融合，具体为通过SEQ IDNO:21和SEQ ID NO:23中的肽连接子。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CEA和CD3)包含：含有与SEQ ID NO:20的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；含有与SEQ ID NO:21的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；含有与SEQ ID NO:22的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；以及含有与SEQ ID NO:23的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽。在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CEA和CD3)包含：含有SEQ ID NO:20的序列的多肽(具体为两种多肽)；含有SEQ ID NO:21的序列的多肽；含有SEQ ID NO:22的序列的多肽；和含有SEQ ID NO:23的序列的多肽。
在优选的方面，T细胞双特异性抗体是cibisatamab(WHO药物信息(药物物质的国际非专利名称)，推荐的INN：List 80,2018,vol.32,no.3,p.438)。
在一些方面，T细胞双特异性抗体的靶细胞抗原为CD20。
除非另有说明，否则“CD20”，也称为“B淋巴细胞抗原B1”指的是来自任何脊椎动物来源的任何天然CD20，该脊椎动物来源包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如人)、非人灵长类动物(例如食蟹猕猴)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。术语涵盖“全长”未经加工的CD20以及在细胞中加工所产生的任何形式的CD20。该术语还涵盖天然生成的CD20变异体，例如，剪接变异体或等位基因变异体。在一些方面，CD20为人CD20。人CD20描述于UniProt(www.uniprot.org)登录号P11836(输入版本200)中，且人CD20的氨基酸序列也示于SEQ IDNO:36中。
用于本发明结合至CD20的有用的T细胞双特异性抗体被描述于例如PCT公开号WO2016/020309(通过援引以其全文并入本文)中。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含结合至CD3的第一抗原结合部分和结合至CD20的第二抗原结合部分。
在一些方面，第一抗原结合部分包含：含有SEQ ID NO:4的重链CDR(HCDR)1、SEQID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:6的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，第二抗原结合部分包含：含有SEQ ID NO:24的重链CDR(HCDR)1、SEQID NO:25的HCDR2和SEQ ID NO:26的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:27的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:28的LCDR2和SEQ ID NO:29的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含
(i)第一抗原结合部分，其结合至CD3且包含：含有SEQ ID NO:4的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:6的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3的轻链可变区；和
(ii)第二抗原结合部分，其结合至CD20且包含：含有SEQ ID NO:24的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:25的HCDR2和SEQ ID NO:26的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ IDNO:27的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:28的LCDR2和SEQ ID NO:29的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，第一抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第一抗原结合部分包含SEQ ID NO:10的重链可变区序列和SEQ ID NO:11的轻链可变区序列。
在一些方面，第二抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第二抗原结合部分包含SEQ ID NO:30的重链可变区序列和SEQ ID NO:31的轻链可变区序列。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含结合至CD20的第三抗原结合部分和/或由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域，如本文所述。
在优选的方面，T细胞双特异性抗体包含
(i)结合至CD3的第一抗原结合部分，其包含：含有SEQ ID NO:4的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:6的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3的轻链可变区，其中该第一抗原结合部分为互换型Fab分子，其中Fab轻链与Fab重链的可变区或恒定区，具体为可变区是经交换的；
(ii)结合至CD20的第二抗原结合部分和第三抗原结合部分，其包含：含有SEQ IDNO:24的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:25的HCDR2和SEQ ID NO:26的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ ID NO:27的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:28的LCDR2和SEQ ID NO:29的LCDR3的轻链可变区；其中该第二抗原结合部分和该第三抗原结合部分各自为Fab分子，具体为常规Fab分子；
(iii)由第一亚基和第二亚基所构成的Fc结构域，
其中该第二抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该第一抗原结合部分的该Fab重链的N端，且该第一抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该Fc结构域的该第一亚基的N端，且其中该第三抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该Fc结构域的该第二亚基的N端。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD20和CD3)的第一抗原结合部分是互换型Fab分子，其中该Fab轻链和该Fab重链的可变区是经交换的，且其中该T细胞双特异性抗体的该第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分为常规Fab分子，其中在该恒定结构域CL中，位置124处的氨基酸独立地经赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)取代，且位置123处的氨基酸独立地经赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)取代，且在该恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸是独立地经谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)取代，且位置213处的氨基酸独立地经谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)取代。
具体来说，在上述方面中，在(ii)下的第二Fab分子和第三Fab分子的恒定结构域CL中，位置124处的氨基酸可被赖氨酸(K)取代(根据Kabat编号)，且位置123处的氨基酸可被赖氨酸(K)或精氨酸(R)(具体为被精氨酸(R))取代(根据Kabat编号)，并且在(ii)下的第二Fab分子和第三Fab分子的恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸可被谷氨酸(E)取代(根据Kabat EU索引编号)，且位置213处的氨基酸可被谷氨酸(E)取代(根据Kabat EU索引编号)。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD20和CD3)的第一抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第一抗原结合部分包含SEQ ID NO:10的重链可变区序列和SEQ ID NO:11的轻链可变区序列。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD20和CD3)的第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含SEQ ID NO:30的重链可变区和SEQ IDNO:31的轻链可变区。
根据上述方面的Fc结构域可以单独或组合地并入上文关于Fc结构域描述的所有特征。
在一些方面，该T细胞双特异性抗体(结合至CD20和CD3)的Fc结构域包含促进Fc结构域的第一和第二亚基缔合的修饰，和/或该Fc结构域包含减少与Fc受体的结合和/或效应子功能的一个或多个氨基酸取代。
在一些方面，抗原结合部分和Fc区通过肽连接子彼此融合，具体为通过SEQ IDNO:33和SEQ ID NO:35中的肽连接子。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD20和CD3)包含：含有与SEQ ID NO:32的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；含有与SEQ ID NO:33的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；含有与SEQ ID NO:34的序具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；以及含有与SEQ ID NO:35的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽。在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD20和CD3)包含：含有SEQ ID NO:32的序列的多肽(具体为两种多肽)；含有SEQ ID NO:33的序列的多肽；含有SEQ ID NO:34的序列的多肽；和含有SEQ ID NO:35的序列的多肽。
在优选的方面，T细胞双特异性抗体为格菲妥单抗(WHO药物信息(药物物质的国际非专利名称)，推荐的INN：List 83,2020,vol.34,no.1,p.39)。
在一些方面，T细胞双特异性抗体的靶细胞抗原为HLA-A2/MAGE-A4。
“MAGE-A4”代表“与黑色素瘤相关的抗原4”，其是癌症睪丸抗原(CTA)的MAGE家族的成员。MAGE-A蛋白家族涵盖12个高度同源基因，其聚集在Xq26-28处且特征是存在保守结构域(MAGE同源域(MHD))。人MAGE-A4描述于UniProt(www.uniprot.org)登录号P43358(输入版本163)中，且人MAGE-A4的氨基酸序列也示于本文的SEQ ID NO:57中。除非另有说明，否则本文中所用的“MAGE-A4”指的是源自任何脊椎动物的任何天然MAGE-A4，该脊椎动物包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如人)、非人灵长类动物(例如食蟹猕猴)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。术语涵盖“全长”未经加工的MAGE-A4以及在细胞中加工所产生的任何形式的MAGE-A4。该术语还涵盖天然生成的MAGE-A4变异体，例如，剪接变异体或等位基因变异体。在一个方面，MAGE-A4为人MAGE-A4，具体为SEQ ID NO:57的蛋白质。
“MAGE-A4 p230-239”或“p230-239肽”指的是具有氨基酸序列GVYDGREHTV(SEQ IDNO:58；SEQ ID NO:57的MAGE-A4蛋白质的位置230-239)的MAGE-A4衍生肽。
“HLA-A2”、“HLA-A*02”、“HLA-A02”或“HLA-A*2”(可互换使用)指的是HLA-A血清型组中的人白血球抗原血清型。HLA-A2蛋白质(由相应的HLA基因编码)构成相应的I类MHC(主要组织相容性复合物)蛋白质的α链，其进一步包含β2微球蛋白亚基。特异性HLA-A2蛋白质为HLA-A201(也称为HLA-A0201、HLA-A02.01或HLA-A*02:01)。在特定方面，本文所述的HLA-A2蛋白质为HLA-A201。人HLA-A2的示例性序列在SEQ ID NO:59中给出。
“HLA-A2/MAGE-A4”指的是HLA-A2分子与MAGE-A4衍生肽(在本文中也称为“MAGE-A4肽”)，具体为p230-239肽(“HLA-A2/MAGE-A4p230-239”)的复合物。
用于本发明的结合于HLA-A2/MAGE-A4的有用的T细胞双特异性抗体被描述于例如PCT申请号PCT/EP2020/086614(通过援引以其全文并入本文)中。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含结合于CD3的第一抗原结合部分，和结合于HLA-A2/MAGE-A4，具体为HLA-A2/MAGE-A4p230-239的第二抗原结合部分。
在一些方面，第一抗原结合部分包含：含有SEQ ID NO:37的重链CDR(HCDR)1、SEQID NO:38的HCDR2和SEQ ID NO:39的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:40的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:41的LCDR2和SEQ ID NO:42的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，第二抗原结合部分包含：含有SEQ ID NO:45的重链CDR(HCDR)1、SEQID NO:46的HCDR2和SEQ ID NO:47的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:48的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:49的LCDR2和SEQ ID NO:50的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含
(i)第一抗原结合部分，其结合至CD3且包含：含有SEQ ID NO:37的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:38的HCDR2和SEQ ID NO:39的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ ID NO:40的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:41的LCDR2和SEQ ID NO:42的LCDR3的轻链可变区；和
(ii)第二抗原结合部分，其结合至HLA-A2/MAGE-A4且包含：含有SEQ ID NO:45的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:46的HCDR2和SEQ ID NO:47的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ ID NO:48的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:49的LCDR2和SEQ ID NO:50的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，第一抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第一抗原结合部分包含SEQ ID NO:43的重链可变区序列和SEQ ID NO:44的轻链可变区序列。
在一些方面，第二抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第二抗原结合部分包含SEQ ID NO:51的重链可变区序列和SEQ ID NO:52的轻链可变区序列。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含结合至HLA-A2/MAGE-A4的第三抗原结合部分和/或由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域，如本文所述。
在优选的方面，T细胞双特异性抗体包含
(i)结合至CD3的第一抗原结合部分，其包含：含有SEQ ID NO:37的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:38的HCDR2和SEQ ID NO:39的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:40的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:41的LCDR2和SEQ ID NO:42的LCDR3的轻链可变区，其中第一抗原结合部分是互换型Fab分子，其中Fab轻链与Fab重链的可变区或恒定区，具体为可变区是经交换的；
(ii)结合至HLA-A2/MAGE-A4的第二抗原结合部分和第三抗原结合部分，其包含：含有SEQ ID NO:45的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:46的HCDR2和SEQ ID NO:47的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ ID NO:48的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:49的LCDR2和SEQ ID NO:50的LCDR3的轻链可变区，其中该第二抗原结合部分和该第三抗原结合部分各自为Fab分子，具体为常规Fab分子；
(iii)由第一亚基和第二亚基所构成的Fc结构域，
其中该第二抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该第一抗原结合部分的该Fab重链的N端，且该第一抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该Fc结构域的该第一亚基的N端，且其中该第三抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该Fc结构域的该第二亚基的N端。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至HLA-A2/MAGE-A4和CD3)的第一抗原结合部分是互换型Fab分子，其中该Fab轻链和该Fab重链的可变区是经交换的，且其中该T细胞双特异性抗体的该第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分是常规Fab分子，其中在该恒定结构域CL中，位置124处的氨基酸独立地经赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)取代，且位置123处的氨基酸独立地经赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)取代，且在该恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸是独立地经谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)取代，且位置213处的氨基酸独立地经谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)取代。
具体来说，在上述方面中，在(ii)下的第二Fab分子和第三Fab分子的恒定结构域CL中，位置124处的氨基酸可被赖氨酸(K)取代(根据Kabat编号)，且位置123处的氨基酸可被赖氨酸(K)或精氨酸(R)(具体为被精氨酸(R))取代(根据Kabat编号)，并且在(ii)下的第二Fab分子和第三Fab分子的恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸可被谷氨酸(E)取代(根据Kabat EU索引编号)，且位置213处的氨基酸可被谷氨酸(E)取代(根据Kabat EU索引编号)。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至HLA-A2/MAGE-A4和CD3)的第一抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第一抗原结合部分包含SEQ IDNO:43的重链可变区序列和SEQ ID NO:44的轻链可变区序列。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至HLA-A2/MAGE-A4和CD3)的第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含SEQ ID NO:51的重链可变区和SEQ ID NO:52的轻链可变区。
根据上述方面的Fc结构域可以单独或组合地并入上文关于Fc结构域描述的所有特征。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至HLA-A2/MAGE-A4和CD3)的Fc结构域包含促进Fc结构域的第一和第二亚基缔合的修饰，和/或Fc结构域包含减少与Fc受体的结合和/或效应子功能的一个或多个氨基酸取代。
在一些方面，抗原结合部分和Fc区通过肽连接子彼此融合，具体为通过SEQ IDNO:54和SEQ ID NO:56中的肽连接子。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合HLA-A2/MAGE-A4和CD3)包含：含有与SEQID NO:53的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；含有与SEQ ID NO:54的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；含有与SEQ ID NO:55的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；以及含有与SEQ ID NO:56的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽。在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至HLA-A2/MAGE-A4和CD3)包含：含有SEQ ID NO:53的序列的多肽(具体为两种多肽)；含有SEQ ID NO:54的序列的多肽；含有SEQ ID NO:55的序列的多肽；和含有SEQ IDNO:56的序列的多肽。
在一些方面，T细胞双特异性抗体的靶细胞抗原为CD19。
除非另有说明，否则术语“CD19”代表分化簇19(也称为B淋巴细胞抗原CD19或B淋巴细胞表面抗原B4)，且指的是源自任何脊椎动物的任何天然CD19，该脊椎动物包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如人)、非人灵长类动物(例如食蟹猕猴)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。术语涵盖“全长”未经加工的CD19以及在细胞中加工所产生的任何形式的CD19。该术语还涵盖天然生成的CD19变异体，例如，剪接变异体或等位基因变异体。在一些方面，CD19为人CD19。参见人蛋白质UniProt(www.uniprot.org)登录号P15391(版本211)，或NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/)RefSeq NP_001761.3。人CD19的示例性序列在SEQ ID NO:60中给出。
结合至CD19的用于本发明的有用的T细胞双特异性抗体被描述于例如EP申请号20181056.1和20180968.8(通过援引以其全文并入本文)中。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含结合至CD3的第一抗原结合部分和结合至CD19的第二抗原结合部分。
在一些方面，第一抗原结合部分包含：含有SEQ ID NO:61的重链CDR(HCDR)1、SEQID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:62的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3的轻链可变区。
在其他方面，第一抗原结合部分包含：含有SEQ ID NO:64的重链CDR(HCDR)1、SEQID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:65的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，第二抗原结合部分包含：含有SEQ ID NO:67的重链CDR(HCDR)1、SEQID NO:68的HCDR2和SEQ ID NO:69的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:70的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:71的LCDR2和SEQ ID NO:72的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含
(i)第一抗原结合部分，其结合至CD3且包含：含有SEQ ID NO:61的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:62的HCDR3的重链可变区，或含有SEQ ID NO:64的HCDR1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:65的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3的轻链可变区；和
(ii)第二抗原结合部分，其结合至CD19且包含：含有SEQ ID NO:67的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:68的HCDR2和SEQ ID NO:69的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ IDNO:70的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:71的LCDR2和SEQ ID NO:72的LCDR3的轻链可变区。
在一些方面，第一抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:63的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；或重链可变区序列，其与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:35的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第一抗原结合部分包含SEQ ID NO:63的重链可变区序列或SEQID NO:66的重链可变区序列和SEQ ID NO:11的轻链可变区序列。
在一些方面，第二抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:73的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:74的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第二抗原结合部分包含SEQ ID NO:73的重链可变区序列和SEQ ID NO:74的轻链可变区序列。
在一些方面，T细胞双特异性抗体包含结合至CD19的第三抗原结合部分和/或由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域，如本文所述。
在优选的方面，T细胞双特异性抗体包含
(i)结合至CD3的第一抗原结合部分，其包含：含有SEQ ID NO:61的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:62的HCDR3的重链可变区，或含有SEQ ID NO:64的HCDR1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:65的HCDR3的重链可变区；和含有SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3的轻链可变区，其中第一抗原结合部分是互换型Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区或恒定区，具体为可变区是经交换的；
(ii)结合至CD19的第二抗原结合部分和第三抗原结合部分，其包含：含有SEQ IDNO:67的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:68的HCDR2和SEQ ID NO:69的HCDR3的重链可变区；以及含有SEQ ID NO:70的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:71的LCDR2和SEQ ID NO:72的LCDR3的轻链可变区；其中该第二抗原结合部分和该第三抗原结合部分各自为Fab分子，具体为常规Fab分子；
(iii)由第一亚基和第二亚基所构成的Fc结构域，
其中该第二抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该第一抗原结合部分的该Fab重链的N端，且该第一抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该Fc结构域的该第一亚基的N端，且其中该第三抗原结合部分在该Fab重链的C端融合至该Fc结构域的该第二亚基的N端。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD19和CD3)的第一抗原结合部分是互换型Fab分子，其中该Fab轻链和该Fab重链的可变区是经交换的，且其中该T细胞双特异性抗体的该第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分为常规Fab分子，其中在该恒定结构域CL中，位置124处的氨基酸独立地经赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)取代，且位置123处的氨基酸独立地经赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)取代，且在该恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸是独立地经谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)取代，且位置213处的氨基酸独立地经谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据Kabat EU索引编号)取代。
具体来说，在上述方面中，在(ii)下的第二Fab分子和第三Fab分子的恒定结构域CL中，位置124处的氨基酸可被赖氨酸(K)取代(根据Kabat编号)，且位置123处的氨基酸可被赖氨酸(K)或精氨酸(R)(具体为被精氨酸(R))取代(根据Kabat编号)，并且在(ii)下的第二Fab分子和第三Fab分子的恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸可被谷氨酸(E)取代(根据Kabat EU索引编号)，且位置213处的氨基酸可被谷氨酸(E)取代(根据Kabat EU索引编号)。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD19和CD3)的第一抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:63的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；或重链可变区序列，其与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第一抗原结合部分包含SEQ ID NO:63的重链可变区序列或SEQ ID NO:66的重链可变区序列和SEQ ID NO:11的轻链可变区序列。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD19和CD3)的第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含：重链可变区序列，其与SEQ ID NO:73的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和轻链可变区序列，其与SEQ ID NO:74的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。在一些方面，第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含SEQ ID NO:73的重链可变区和SEQ IDNO:74的轻链可变区。
根据上述方面的Fc结构域可以单独或组合地并入上文关于Fc结构域描述的所有特征。
在一些方面，该T细胞双特异性抗体(结合至CD19和CD3)的Fc结构域包含促进Fc结构域的第一和第二亚基缔合的修饰，和/或该Fc结构域包含减少与Fc受体的结合和/或效应子功能的一个或多个氨基酸取代。
在一些方面，抗原结合部分和Fc区通过肽连接子彼此融合，具体为通过SEQ IDNO:75、SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:77中的肽连接子。
在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD19和CD3)包含：含有与SEQ ID NO:78的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；含有与SEQ ID NO:75的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；含有与SEQ ID NO:77的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；以及含有与SEQ ID NO:79的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽。在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD19和CD3)包含：含有SEQ ID NO:78的序列的多肽(具体为两种多肽)；含有SEQ ID NO:75的序列的多肽；含有SEQ ID NO:77的序列的多肽；和含有SEQ ID NO:79的序列的多肽。
在其他方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD19和CD3)包含：含有与SEQ ID NO:78的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；含有与SEQ ID NO:76的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；含有与SEQ ID NO:77的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽；以及含有与SEQ ID NO:80的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的多肽。在一些方面，T细胞双特异性抗体(结合至CD19和CD3)包含：含有SEQ ID NO:78的序列的多肽(具体为两种多肽)；含有SEQ ID NO:76的序列的多肽；含有SEQ ID NO:77的序列的多肽；和含有SEQ ID NO:80的序列的多肽。
在一些方面，疾病(待由T细胞接合剂治疗)为癌症。
如本文中所使用的，“治疗”(及其语法变异体，诸如“治疗过程”或“治疗中”)，指的是试图改变正在治疗的个体的疾病自然病程的临床干预，并且可进行预防或在临床病理过程中执行。期望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、减轻疾病的任何直接或间接病理后果、预防转移、降低疾病进展的速度、改善或减轻疾病状态、缓解或改善预后。
术语“癌症”涉及哺乳动物中典型地以不受调控的细胞增殖为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。癌症的更多非限制性实例包括血癌(诸如白血病)、膀胱癌、脑癌、头颈癌、胰脏癌、胆管癌、甲状腺癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、子宫癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、食管癌、大肠癌、大肠直肠癌、直肠癌、胃癌、前列腺癌、皮肤癌、鳞状细胞癌、肉瘤、骨癌和肾癌。其他细胞增殖性疾病包括但不限于位在以下部位中的肿瘤：腹部、骨骼、乳房、消化系统、肝、胰脏、腹膜、内分泌腺(肾上腺、副甲状腺、垂体、睾丸、卵巢、胸腺、甲状腺)、眼、头和颈、神经系统(中枢和周边)、淋巴系统、骨盆、皮肤、软组织、脾脏、胸部和泌尿生殖系统。还包括癌前状况或病变以及癌症转移。
在一些方面，癌症为表达T细胞接合剂(例如T细胞双特异性抗体)的靶细胞抗原的癌症。
在一些方面，癌症为表达癌胚抗原(CEA)的癌症(具体为其中T细胞接合剂(例如T细胞双特异性抗体)的靶细胞抗原是CEA的方面中)。“CEA阳性癌症”或“表达CEA的癌症”指的是特征在于在癌细胞上表达或过表达CEA的癌症。CEA的表达可以通过例如免疫组织化学(IHC)或流式细胞术测定来确定。在一些方面，癌症表达CEA。在一些方面，癌症在至少20％、优选至少50％或至少80％的肿瘤细胞中表达CEA，如使用CEA特异性抗体通过免疫组织化学(IHC)所确定。
在一些方面，癌症为大肠癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰脏癌、子宫内膜癌、乳癌、肾癌、食道癌、前列腺癌或本文所述的其他癌症。
在特定方面，癌症为选自由大肠直肠癌、肺癌、胰脏癌、乳癌和胃癌组成的组的癌症。在优选的方面，癌症为大肠直肠癌(CRC)。在一些方面，大肠直肠癌为转移性大肠直肠癌(mCRC)。在一些方面，大肠直肠癌为微卫星稳定(MSS)的大肠直肠癌。在一些方面，大肠直肠癌为微卫星稳定的转移性大肠直肠癌(MSS mCRC)。
在一些方面，癌症为表达CD20的癌症(具体为在其中T细胞接合剂(例如T细胞双特异性抗体)的靶细胞抗原为CD20的方面)。“CD20阳性癌症”或“表达CD20的癌症”指的是特征在于在癌细胞中表达或过表达CD20的癌症。CD20的表达可以通过例如定量即时PCR(测量CD20mRNA含量)、流式细胞术、免疫组织化学(IHC)或西方墨点测定法来确定。在一些方面，癌症表达CD20。在一些方面，癌症在至少20％、优选至少50％或至少80％的肿瘤细胞中表达CD20，如使用CD20特异性抗体通过免疫组织化学(IHC)确定。
在一些方面，癌症为B细胞癌，具体为CD20阳性B细胞癌。在一些方面，癌症选自由以下组成的组：非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、急性淋巴球性白血病(ALL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、被套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、多发性骨髓瘤(MM)或霍奇金氏淋巴瘤(HL)。在具体方面，癌症选自由以下组成的组：非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、急性淋巴球性白血病(ALL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、被套细胞淋巴瘤(MCL)和边缘区淋巴瘤(MZL)。在更具体的方面，癌症为NHL，具体为复发/难治性(r/r)NHL。在一些方面，癌症为DLBCL。在一些方面，癌症为FL。在一些方面，癌症为MCL。在一些方面，癌症为MZL。
在一些方面，癌症为表达MAGE-A4的癌症(具体为在其中T细胞接合剂(例如T细胞双特异性抗体)的靶细胞抗原为HLA-A2/MAGE-A4的方面)。“MAGE-A4阳性癌症”或“表达MAGE-A4的癌症”指的是特征在于在癌细胞中表达或过表达MAGE-A4的癌症。
在一些方面，癌症为选自由肺癌、头颈癌、膀胱癌、食道癌、皮肤癌、胃癌和卵巢癌组成的组的癌症。
在一些方面，癌症为表达CD19的癌症(具体为在其中T细胞接合剂(例如T细胞双特异性抗体)的靶细胞抗原为CD19的方面)。“CD19阳性癌症”或“表达CD19的癌症”是指特征在于在癌细胞中表达或过表达CD19的癌症。CD19的表达可以通过例如定量即时PCR(测量CD19mRNA含量)、流式细胞术、免疫组织化学(IHC)或西方墨点测定法来确定。在一些方面，癌症表达CD19。在一些方面，癌症在至少20％、优选至少50％或至少80％的肿瘤细胞中表达CD19，如使用CD19特异性抗体通过免疫组织化学(IHC)确定。
在一些方面，癌症为B细胞癌，具体为CD19阳性B细胞癌。在一些方面，癌症为B细胞淋巴瘤或B细胞白血病。在一些方面，癌症为非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、急性淋巴球性白血病(ALL)或慢性淋巴球性白血病(CLL)。
在一些方面，癌症可通过T细胞接合剂治疗。在一些方面，该T细胞接合剂适用于治疗癌症。
在一些方面，癌症为实性瘤癌症。“实性瘤癌症”指的是形成位于患者体内特定位置的离散肿瘤块(也包括肿瘤转移)的恶性肿瘤，诸如肉瘤或癌(与例如血癌诸如白血病相反，其通常不形成实性瘤)。实性瘤癌症的非限制性实例包括膀胱癌、脑癌、头颈癌、胰脏癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、子宫癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、食管癌、大肠癌、大肠直肠癌、直肠癌、胃癌、前列腺癌、皮肤癌、鳞状细胞癌、骨癌、肝癌和肾癌。在本发明的背景下考虑的其他实性瘤癌症包括但不限于位在以下部位中的肿瘤：腹部、骨骼、乳房、消化系统、肝、胰脏、腹膜、内分泌腺(肾上腺、副甲状腺、垂体、睾丸、卵巢、胸腺、甲状腺)、眼、头和颈、神经系统(中枢和周边)、淋巴系统、骨盆、皮肤、软组织、肌肉、脾脏、胸部和泌尿生殖系统。还包括癌前状况或病变以及癌症转移。
在其中T细胞接合剂(例如T细胞双特异性抗体)的靶细胞抗原是CD19的一些方面，该疾病(待由T细胞双特异性抗体治疗)为自体免疫疾病。在具体的方面，自体免疫疾病为狼疮，具体为全身性红斑狼疮(SLE)或狼疮性肾炎(LN)。
本文“个体”或“受试者”为哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如人和非人类灵长类动物，诸如猴)、兔以及啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。在某些方面，该个体或受试者为人类。在一些方面，该个体患有疾病，具体为可通过T细胞接合剂治疗或待治疗的疾病。在一些方面，该个体患有癌症，具体为可通过T细胞接合剂治疗或待治疗的癌症。特别地，本文中的个体为正在经历或已经经历癌症的一种或多种体征、症状或其他指标的有资格接受治疗的任何单个人类受试者。在一些方面，该个体患有癌症或已被诊断患有癌症，具体为上文所述的任何癌症。在一些方面，该个体患有局部晚期或转移性癌症或已被诊断患有局部晚期或转移性癌症。该个体先前可能已经通过T细胞接合剂(例如T细胞双特异性抗体)或另一种药物治疗，或者没有接受过这种治疗。在特定方面，该患者先前并未通过T细胞接合剂(例如T细胞双特异性抗体)治疗。在开始T细胞接合剂疗法之前，该患者可能已经通过包含T细胞接合剂以外(例如T细胞双特异性抗体以外)的一种或多种药物的疗法治疗。
在一些方面，该个体的一种或多种细胞因子的血清水平升高。在一些方面，该升高的血清水平与向个体施用T细胞接合剂有关。所述升高的血清水平具体为与健康个体的血清水平和/或未施用T细胞接合剂的个体(包括同一个体)中的血清水平相比(即与未施用T细胞接合剂的血清水平相比，在这种情况下血清水平升高)。在一些方面，所述一种或多种细胞因子选自由IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α、GM-CSF、MCP-1和IL-1β组成的组。
根据本发明的任一方面的细胞因子可为选自由介白素(IL)-6、干扰素(IFN)-γ、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、颗粒球-巨噬细胞群落刺激因子(GM-CSF)、单核球趋化蛋白(MCP)-1、IL-1β、IL-8、IL-4和IL-2组成的组的一种或多种细胞因子。在一些方面，细胞因子为选自由IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α、GM-CSF、MCP-1和IL-1β组成的组的一种或多种细胞因子。在一些方面，细胞因子为选自由IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α和GM-CSF组成的组的一种或多种细胞因子。在一些方面，细胞因子为选自由IL-6、IFN-γ、IL-10和TNF-α组成的组的一种或多种细胞因子。在一些方面，细胞因子为选自由IL-6、IFN-γ和IL-10组成的组的一种或多种细胞因子。在一些方面，该细胞因子为IL-6。在一些方面，该细胞因子为IFN-γ。在一些方面，该细胞因子为IL-10。在一些方面，该细胞因子为TNF-α。在一些方面，该细胞因子为GM-CSF。在一些方面，该细胞因子为MCP-1。在一些方面，该细胞因子为IL-1β。在一些方面，该细胞因子为IL-8。在一些方面，该细胞因子为IL-4。在一些方面，该细胞因子为IL-2。
优选地，根据本发明的任何方面的T细胞为细胞毒性T细胞。在一些方面，该T细胞为CD4+T细胞或CD8+T细胞。在一些方面，该T细胞为CD8+T细胞。在一些方面，该T细胞为CD4+T细胞。
在一些方面，以T细胞接合剂治疗或施用T细胞接合剂可导致个体中的反应。在一些方面，该反应可以是完全反应。在一些方面，该反应可以是治疗停止后的持续反应。在一些方面，该反应可以是治疗停止后持续的完全反应。在其他方面，该反应可以是部分反应。在一些方面，该反应可以是治疗停止后持续的部分反应。在一些方面，与单独以T细胞接合剂治疗或施用T细胞接合剂(即没有JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂)相比，以T细胞接合剂与JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的治疗或施用可改善该反应。在一些方面，与单独以T细胞接合剂治疗(即没有JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂)的对应患者群体相比，T细胞接合剂与JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂的治疗或施用可增加患者群体中的反应率。
T细胞接合剂可单独或与其他药剂一起使用于疗法中。例如，T细胞接合剂可与至少一种另外的治疗剂共同施用。在某些方面，额外治疗剂为抗癌剂，例如化疗剂、肿瘤细胞增殖抑制剂或肿瘤细胞凋亡活化剂。
JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂可单独或与一种或多种其他药剂一起使用以预防减轻与施用T细胞接合剂相关的不良反应，具体为CRS。JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂可以例如与IL-6R拮抗剂(例如托珠单抗)、类固醇(例如皮质类固醇，诸如甲基培尼皮质醇或地塞米松)或TNF-α拮抗剂(例如依那西普)一起使用。
氨基酸序列
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附图说明
图1.测定设置。MKN45 NucLightRed(NLR)靶细胞与10nM CEA-TCB、mTOR或JAK抑制剂和周边血液单核细胞(PBMC)共同培养，E:T＝50000PBMC：5000靶细胞。使用系统(每3小时扫描1次，放大10倍，相位和红色400ms采集时间)跟踪靶细胞杀灭动力学。
图2.在图1描述的测定中，在浓度范围为0nM到1,000nM的西罗莫司(A)、依维莫司(B)和替西罗莫司(C)存在下，以10nM CEA-TCB的MKN45 NLR细胞的即时杀灭。使用在t＝0小时和每个时间点的靶细胞+PBMC+mTOR抑制剂对照孔的值通过标准化总红色面积来测量杀灭％。对于1名代表性供体的技术重复平均值+SEM。
图3.在图1描述的测定中，在72小时测量浓度递增的西罗莫司(A)、依维莫司(B)和替西罗莫司(C)对TCB介导的靶细胞杀灭的影响。使用在t＝0小时和每个时间点的靶细胞+PBMC+mTOR抑制剂对照孔的值通过标准化总红色面积来测量72小时的杀灭％。对于1名代表性供体的技术重复平均值+/-SD。
图4.在图1描述的测定中，浓度递增的西罗莫司(A)、依维莫司(B)和替西罗莫司(C)在72小时对PBMC生存力的影响。合并技术重复，并使用Live/DeadTM Fixable Aqua DeadCell Stain，通过流式细胞术测量PBMC的生存力。1名代表性供体。
图5.在图1的测定中，以10nM CEA-TCB处理后72小时，浓度递增的依维莫司对CD4+T细胞(A)和CD8+T细胞(C)上CD69的表达和对CD4+T细胞(B)和CD8+T细胞(D)上CD25的表达的影响。合并技术重复，并在72小时通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD69和CD25的表达。1名代表性供体。
图6.在图1的测定中，以10nM CEA-TCB处理后72小时，浓度递增的西罗莫司对CD4+T细胞(A)和CD8+T细胞(C)上CD69的表达和对CD4+T细胞(B)和CD8+T细胞(D)上CD25的表达的影响。合并技术重复，并在72小时通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD69和CD25的表达。1名代表性供体。
图7.在图1的测定中，以10nM CEA-TCB处理后72小时，浓度递增的替西罗莫司对CD4+T细胞(A)和CD8+T细胞(C)上CD69的表达和对CD4+T细胞(B)和CD8+T细胞(D)上CD25的表达的影响。合并技术重复，并在72小时通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD69和CD25的表达。1名代表性供体。
图8.在图1的测定中，以10nM CEA-TCB处理后72小时所测量的浓度递增的西罗莫司、依维莫司和替西罗莫司对细胞因子(IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、IL-6(D)、GM-CSF(E)、IL-8(F)、IL-4(G)、IL-10(H)、MCP-1(I))释放的影响。合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。1名代表性供体。
图9.(A)在图1的测定中，在0nM至100nM浓度范围的鲁索替尼存在下，通过10nMCEA-TCB的MKN45 NLR细胞的即时杀灭。(B)在图1的测定中，以10nM CEA-TCB处理后69小时所测量的浓度递增的鲁索替尼对靶细胞杀灭的影响。使用在t＝0小时和每个时间点的靶细胞+PBMC+鲁索替尼对照孔的值通过标准化总红色面积来测量杀灭％。对于1名代表性供体(A)的技术重复平均值+SEM。n＝3名供体的平均值+/-SD。
图10.在图1的测定中，浓度递增的鲁索替尼对在69小时PBMC生存力的影响。合并技术重复，并使用Live/DeadTM Fixable Aqua Dead Cell Stain，通过流式细胞术测量PBMC的生存力。1名代表性供体。
图11.在图1的测定中，以10nM CEA-TCB处理后于69小时，浓度递增的鲁索替尼对CD8+T细胞(A)和CD4+T细胞(B)上CD25的表达和对CD8+T细胞(C)和CD4+T细胞(D)上CD69的表达的影响。合并技术重复，并在69小时通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25和CD69的表达。n＝3名供体的平均值+/-SD。
图12.在图1的测定中，浓度递增的鲁索替尼对于在69小时以10nM CEA-TCB诱导的细胞因子释放的影响(IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、IL-6(D)、GM-CSF(E)、IL-8(F)、IL-4(G)、IL-10(H)、MCP-1(I))。在69小时合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。n＝3名供体的平均值+/-SD。
图13.活体外杀灭测定设置。将Cell TraceTMViolet(CTV)标记的WSU DLCL2肿瘤细胞与PBMC[E:T＝200’000:20’000]、CD20-TCB，在范围从0nM到1,000nM的剂量递增的鲁索替尼、替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司存在下共同培养。
图14.在图13对于1nM CD20-TCB测定中，浓度递增的鲁索替尼(A)、替西罗莫司(B)、西罗莫司(C)和依维莫司(D)对CTV WSU DLCL2肿瘤细胞杀灭的影响。在24小时，合并来自技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并以LIVE/DEADTM Near-IR死亡细胞染剂染色，以允许通过流式细胞术排除死亡的CTV标记的WSU DLCL2肿瘤细胞。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图15.在图13对于1nM CD20-TCB测定中，浓度递增的鲁索替尼对于CD4+T细胞(B)和CD8+T细胞(D)上的CD25表达以及CD4+T细胞(A)和CD8+T细胞(C)上的CD69表达的影响。在24小时，合并技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD69和CD25的表达。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图16.在图13对于1nM CD20-TCB测定中，浓度递增的替西罗莫司对于CD4+T细胞(B)和CD8+T细胞(D)上的CD25表达以及CD4+T细胞(A)和CD8+T细胞(C)上的CD69表达的影响。在24小时，合并技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD69和CD25的表达。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图17.在图13对于1nM CD20-TCB测定中，浓度递增的西罗莫司对于CD4+T细胞(B)和CD8+T细胞(D)上的CD25表达以及CD4+T细胞(A)和CD8+T细胞(C)上的CD69表达的影响。在24小时，合并技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD69和CD25的表达。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图18.在图13对于1nM CD20-TCB测定中，浓度递增的依维莫司对于CD4+T细胞(B)和CD8+T细胞(D)上的CD25表达以及CD4+T细胞(A)和CD8+T细胞(C)上的CD69表达的影响。在24小时，合并技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD69和CD25的表达。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图19.在图13对于1nM CD20-TCB测定中，浓度递增的鲁索替尼对于IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、GM-CSF(D)和IL-6(E)释放的影响。在24小时，合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图20.在图13对于1nM CD20-TCB测定中，浓度递增的替西罗莫司对于IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、GM-CSF(D)和IL-6(E)释放的影响。在24小时，合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图21.在图13对于1nM CD20-TCB测定中，浓度递增的西罗莫司对于IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、GM-CSF(D)和IL-6(E)释放的影响。在24小时，合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图22.在图13对于1nM CD20-TCB测定中，浓度递增的依维莫司对于IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、GM-CSF(D)和IL-6(E)释放的影响。在24小时，合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图23.在图1的测定中，在5μg/mL抗TNF-α抗体(aTNF-α；Biolegend#502922(抗体Mab11))、5μg/mL抗IL-6R抗体(aIL-6R；Roche内部)、1μM地塞米松(dexa)、0.1μM地塞米松、50nM达沙替尼(dasa)、50nM鲁索替尼(ruxo)、50nM替西罗莫司(temsi)、40nM西罗莫司(siro)，50nM依维莫司(evero)存在下，通过10nM CEA-TCB的MKN45 NLR细胞的即时杀灭。使用在t＝0小时和每个时间点的靶细胞+PBMC+对应化合物对照孔的值通过标准化总红色面积来测量杀灭％。对于1名代表性供体的技术重复平均值+SD。
图24.在图1的测定中，抗TNF-α抗体(aTNF-α)、抗IL-6R抗体(aIL-6R)、地塞米松(dexa)、达沙替尼(dasa)、鲁索替尼(ruxo)、替西罗莫司(temsi)、西罗莫司(siro)、依维莫司(evero)对于在通过10nM CEA-TCB诱导的CD4+T细胞上CD69(A)和CD25(B)表达的影响。合并技术重复，并在66小时通过流式细胞术测量CD4+T细胞上CD69和CD25的表达。n＝3名供体的平均值+/-SD
图25.在图1的测定中，抗TNF-α抗体(aTNF-α)、抗IL-6R抗体(aIL-6R)、地塞米松(dexa)、达沙替尼(dasa)、鲁索替尼(ruxo)、替西罗莫司(temsi)、西罗莫司(siro)、依维莫司(evero)对于在通过10nM CEA-TCB诱导的CD8+T细胞上CD69(A)和CD25(B)表达的影响。合并技术重复，并在66小时通过流式细胞术测量CD8+T细胞上CD69和CD25的表达。n＝3名供体的平均值+/-SD。
图26.在图1的测定中，抗TNF-α抗体(aTNF-α)、抗IL-6R抗体(aIL-6R)、地塞米松(dexa)、达沙替尼(dasa)、鲁索替尼(ruxo)、替西罗莫司(temsi)、西罗莫司(siro)、依维莫司(evero)对于通过10nM CEA-TCB诱导的细胞因子释放(IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、IL-4(D)、IL-8(E)、IL-10(F)、GM-CSF(G)、MCP-1(H))的影响。在66小时合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。n＝3名供体的平均值+/-SD。
图27.抗TNF-α抗体(aTNF-α)、抗IL-6R抗体(aIL-6R)、地塞米松(dexa)、达沙替尼(dasa)、鲁索替尼(ruxo)、替西罗莫司(temsi)、西罗莫司(siro)、依维莫司(evero)对于CD20-TCB诱导的B细胞杀灭的影响。将WSU靶细胞与PBMC(E:T＝200000:20000)共同培养，同时增加CD20-TCB浓度和对应的化合物。在24小时，合并技术重复，并通过流式细胞术测量CD19+B细胞。使用Live/DeadTM Fixable Aqua Dead Cell Stain，从CD19+B细胞中排除死亡的B细胞。1名代表性供体。
图28.抗TNF-α抗体(aTNF-α)、抗IL-6R抗体(aIL-6R)、地塞米松(dexa)、达沙替尼(dasa)、鲁索替尼(ruxo)、替西罗莫司(temsi)、西罗莫司(siro)、依维莫司(evero)对于CD20-TCB诱导的B细胞杀灭的影响。将WSU靶细胞与PBMC(E:T＝200000:20000)、1nM CD20-TCB和对应的化合物共同培养。在24小时，合并技术重复，并通过流式细胞术测量CD19+B细胞。使用Live/DeadTM Fixable Aqua Dead Cell Stain，从CD19+B细胞中排除死亡的B细胞。n＝3名供体的平均值+/-SD。
图29.抗TNF-α抗体(aTNF-α)、抗IL-6R抗体(aIL-6R)、地塞米松(dexa)、达沙替尼(dasa)、鲁索替尼(ruxo)、替西罗莫司(temsi)、西罗莫司(siro)、依维莫司(evero)对于CD20-TCB诱导的T细胞活化的影响。将WSU靶细胞与PBMC(E:T＝200000:20000)共同培养，同时增加CD20-TCB浓度和对应的化合物。在24小时，合并技术重复，并通过流式细胞术测量CD4+T细胞(A)和CD8+T细胞(C)上CD69以及CD4+T细胞(B)和CD8+T细胞(D)上CD25的表达。1名代表性供体。
图30.抗TNF-α抗体(aTNF-α)、抗IL-6R抗体(aIL-6R)、地塞米松(dexa)、达沙替尼(dasa)、鲁索替尼(ruxo)、替西罗莫司(temsi)、西罗莫司(siro)、依维莫司(evero)对于在CD4+T细胞上CD69(A)和CD25(B)表达的影响。将WSU靶细胞与PBMC(E:T＝200000:20000)、1nM CD20-TCB和对应的化合物共同培养。在24小时，合并技术重复，并通过流式细胞术测量CD4+T细胞上CD69和CD25的表达。n＝3名供体的平均值+/-SD。
图31.抗TNF-α抗体(aTNF-α)、抗IL-6R抗体(aIL-6R)、地塞米松(dexa)、达沙替尼(dasa)、鲁索替尼(ruxo)、替西罗莫司(temsi)、西罗莫司(siro)、依维莫司(evero)对于在CD8+T细胞上CD69(A)和CD25(B)表达的影响。将WSU靶细胞与PBMC(E:T＝200000:20000)、1nM CD20-TCB和对应的化合物共同培养。在24小时，合并技术重复，并通过流式细胞术测量CD8+T细胞上CD69和CD25的表达。n＝3名供体的平均值+/-SD。
图32.抗TNF-α抗体(aTNF-α)、抗IL-6R抗体(aIL-6R)、地塞米松(dexa)、达沙替尼(dasa)、鲁索替尼(ruxo)、替西罗莫司(temsi)、西罗莫司(siro)、依维莫司(evero)对CD20-TCB诱导的细胞因子释放(TNF-α(A)、IFN-γ(B)、IL-2(C)、IL-1β(D)、IL-6(E)、IL-4(F)、IL-10(G)、GM-CSF(H))的影响。将WSU靶细胞与PBMC(E:T＝200000:20000)共同培养，同时增加CD20-TCB浓度和对应的化合物。在24小时合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。1名代表性供体。
图33.抗TNF-α抗体(aTNF-α)、抗IL-6R抗体(aIL-6R)、地塞米松(dexa)、达沙替尼(dasa)、鲁索替尼(ruxo)、替西罗莫司(temsi)、西罗莫司(siro)、依维莫司(evero)对CD20-TCB诱导的细胞因子释放(TNF-α(A)、IFN-γ(B)、IL-2(C)、IL-1β(D)、IL-6(E)、IL-4(F)、IL-10(G)、GM-CSF(H))的影响。将WSU靶细胞与PBMC(E:T＝200000:20000)、1nM CD20-TCB和对应的化合物共同培养。在24小时合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。n＝3名供体的平均值+/-SD。
图34.活体外杀灭测定设置。Cell TraceTM Violet(CTV)标记的WSU DLCL2肿瘤细胞与PBMC[E:T＝200’000:20’000]共同培养，并用CD20-TCB刺激18小时。在18小时，在系统中添加100nM鲁索替尼、100nM替西罗莫司、100nM西罗莫司或100nM依维莫司。
图35.在图34的测定中，对于3个代表性供体(D1-D3)添加鲁索替尼、替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司之前，在18小时的CTV标记WSU DLCL2靶细胞杀灭。在18小时，合并来自技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并以LIVE/DEADTM Near-IR死亡细胞染剂染色，以允许通过流式细胞术排除死亡的CTV标记的WSU DLCL2肿瘤细胞。
图36.在图34的测定中，对于3个代表性供体(D1-D3)添加鲁索替尼、替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司之前，在18小时于CD8+T细胞(A)和CD4+T细胞(B)上的CD25表达。在18小时，合并技术重复，并通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25的表达。
图37.在图34的测定中，在添加鲁索替尼、替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司之后，在44小时CTV标记的WSU DLCL2靶细胞杀灭。在44小时，合并来自技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并以LIVE/DEADTM Near-IR死亡细胞染剂染色，以允许通过流式细胞术排除死亡的CTV标记的WSU DLCL2肿瘤细胞。1名代表性供体。
图38.在图34的测定中，在添加鲁索替尼、替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司之后，于CD4+T细胞(B)和CD8+T细胞(D)上的CD25表达和于CD4+T细胞(A)和CD8+T细胞(C)上的CD69表达。在44小时，合并技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25和CD69的表达。1名代表性供体。
图39.在图34的测定中，在添加鲁索替尼、替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司之前(18小时)和之后(44小时)，IL-2(A)、IFN-γ(B)、TNF-α(C)、IL-6(D)、IL-1β(E)、GM-CSF(F)的水平。在18小时和44小时，合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。1名代表性供体。
图40.对于图34的测定中的1nM CD20-TCB，在添加鲁索替尼、替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司之前(18小时)和之后(44小时)，CTV标记的WSU DLCL2靶细胞杀灭。在18小时和44小时，将技术重复中的肿瘤细胞和PBMC合并，并以LIVE/DEADTM Near-IR死亡细胞染剂染色，以允许通过流式细胞术排除死亡的CTV标记的WSU DLCL2肿瘤细胞。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图41.对于图34的测定中的1nM CD20-TCB，在加入鲁索替尼、替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司之前(18小时)和之后(44小时)，在CD4+T细胞上CD69(A)和CD25(B)的表达。在18小时和44小时，合并技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并通过流式细胞术测量CD4+T细胞上CD25和CD69的表达。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图42.对于图34的测定中的1nM CD20-TCB，在加入鲁索替尼、替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司之前(18小时)和之后(44小时)，在CD8+T细胞上CD69(A)和CD25(B)的表达。在18小时和44小时，合并技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并通过流式细胞术测量CD8+T细胞上CD25和CD69的表达。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图43.对于图34的测定中的1nM CD20-TCB，在加入鲁索替尼、替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司之前(18小时)和之后(44小时)，IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、IL-6(D)和IL-1β(E)的水平。在18小时和44小时，合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图44.在0nM至1000nM范围的浓度递增的鲁索替尼存在下，通过8nM MAGEA4-TCB的A375 NucLightRed(NLR)细胞的即时杀灭。A375NLR靶细胞与MAGEA4-TCB(8nM)、鲁索替尼和PBMC共同培养，E:T＝50000PBMC：5000靶细胞。使用跟踪杀灭(每3小时扫描1次，放大10x，相位和红色400ms采集时间)。使用在t＝0小时和每个时间点的靶细胞+PBMC+鲁索替尼对照孔的值通过标准化总红色面积来测量杀灭％。对于1名代表性供体的技术重复平均值+SD。
图45.浓度(c)递增的鲁索替尼对于通过8nM MAGEA4-TCB诱导的IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、GM-CSF(D)、IL-6(E)、IL-1β(F)、IL-8(G)、MCP-1(H)和IL-10(I)水平的影响。在72小时，收集上清液并通过流式细胞小球微阵列术(cytometric bead array，CBA)分析细胞因子。对于1名代表性供体的技术重复平均值+/-SD。
图46.在0nM至1000nM范围的浓度递增的西罗莫司(A)、替西罗莫司(B)和依维莫司(C)存在下，通过8nM MAGEA4-TCB的A375NucLightRed(NLR)细胞的即时杀灭。A375 NLR靶细胞与8nM MAGEA4-TCB、mTOR抑制剂和PBMC共同培养，E:T＝50000PBMC：5000靶细胞。使用跟踪杀灭(每3小时扫描1次，放大10x，相位和红色400ms采集时间)。使用在t＝0小时和每个时间点的靶细胞+PBMC+mTOR抑制剂对照孔的值通过标准化总红色面积来测量杀灭％。对于1名代表性供体的技术重复平均值+SEM。
图47.浓度(c)递增的西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司对于通过8nM MAGEA4-TCB诱导的IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、GM-CSF(D)、IL-6(E)、IL-1β(F)、IL-8(G)、MCP-1(H)和IL-10(I)水平的影响。在72小时，收集上清液并通过CBA分析细胞因子。对于1名代表性供体的技术重复平均值+/-SD。
图48.浓度递增的巴瑞替尼对通过CD20-TCB诱导的CTV标记的WSU DLCL2靶细胞杀灭的影响。在24小时，合并来自技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并以LIVE/DEADTM Near-IR染料染色，以允许通过流式细胞术排除死亡的CTV标记的WSU DLCL2肿瘤细胞。1名代表性供体。
图49.浓度递增的巴瑞替尼对通过1nM CD20-TCB诱导的CTV标记的WSU DLCL2靶细胞杀灭的影响。在24小时，合并来自技术重复中的肿瘤细胞和PBMC，并以LIVE/DEADTM Near-IR染料染色，以允许通过流式细胞术排除死亡的CTV标记的WSU DLCL2肿瘤细胞。n＝2名供体的平均值。
图50.浓度递增的巴瑞替尼对于在通过CD20-TCB诱导的CD4+T细胞(A)和CD8+T细胞(B)上CD69表达和CD4+T细胞(C)和CD8+T细胞(D)上CD25表达的影响。在24小时，合并技术重复，并通过流式细胞术测量CD4+和CD8+T细胞上CD69和CD25的表达。1名代表性供体。
图51.对于1nM CD20-TCB，浓度递增的巴瑞替尼对CD4+T细胞上CD69(A)和CD25(B)表达的影响。在24小时，合并技术重复，并通过流式细胞术测量CD4+T细胞上CD69和CD25的表达。n＝2名供体的平均值。
图52.对于1nM CD20-TCB，浓度递增的巴瑞替尼对CD8+T细胞上CD69(A)和CD25(B)表达的影响。在24小时，合并技术重复，并通过流式细胞术测量CD8+T细胞上CD69和CD25的表达。n＝2名供体的平均值。
图53.在CD20-TCB剂量反应的杀灭测定中，浓度递增的巴瑞替尼对IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、GM-CSF(D)、IL-6(E)、IL-8(F)水平的影响。在24小时，合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。1名代表性供体。
图54.对于1nM CD20-TCB，浓度递增的巴瑞替尼对于IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、GM-CSF(D)、IL-6(E)、IL-8(F)水平的影响。在24小时，合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。n＝2名供体的平均值。
图55.在浓度范围为0nM至1000nM的巴瑞替尼(A)和鲁索替尼(B)存在下，通过1nMCEA-TCB的MKN45 NLR细胞的即时杀灭。将MKN45 NLR靶细胞与PBMC(E:T＝50000PBMC：5000靶细胞)在补充有1nM CEA-TCB和JAK抑制剂的培养基中共同培养。使用跟踪杀灭(每3小时扫描1次，放大10x，相位和红色400ms采集时间)。使用在t＝0小时和每个时间点的靶细胞+PBMC+鲁索替尼或巴瑞替尼对照孔的值通过标准化总红色面积来测量杀灭％。对于1名代表性供体的技术重复平均值+SEM。
图56.在以10nM CEA-TCB处理后，在72小时，浓度递增的巴瑞替尼与鲁索替尼对于CD4+T细胞(A)和CD8+T细胞(B)上CD25表达的影响。合并技术重复，并在69小时通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25的表达。n＝3名供体的平均值+/-SD。
图57.在以10nM CEA-TCB处理后，浓度递增的巴瑞替尼与鲁索替尼对于IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、GM-CSF(D)、IL-6(E)、IL-8(F)释放的影响。在24小时，合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。通过将每种激酶抑制剂浓度的细胞因子水平标准化为未添加激酶抑制剂的条件来计算抑制％。n＝3名供体的平均值+/-SEM。
图58.在0nM至100nM范围的浓度递增的巴瑞替尼(A)和鲁索替尼(B)存在下，通过25nM MAGEA4-TCB的A375 NucLightRed(NLR)细胞的即时杀灭。A375 NLR靶细胞与PBMC(E:T＝50000PBMC：5000个靶细胞)在补充有25nM MAGEA4-TCB和JAK抑制剂的培养基中共同培养。使用跟踪杀灭(每3小时扫描1次，放大10x，相位和红色400ms采集时间)。使用在t＝0小时和每个时间点的靶细胞+PBMC+JAK抑制剂对照孔的值通过标准化总红色面积来测量杀灭[％]。对于1名代表性供体的技术重复平均值+/-SD。
图59.浓度递增(0-100nM)的巴瑞替尼对于通过25nM MAGEA4-TCB诱导的GM-CSF(A)、IL-2(B)、IFN-γ(C)、TNF-α(D)、IL-1β(E)和IL-6(F)水平的影响。在69小时，收集上清液并通过CBA分析细胞因子。对于1名代表性供体的技术重复平均值+/-SD。
图60.浓度递增(0-100nM)的鲁索替尼对于通过25nM MAGEA4-TCB诱导的GM-CSF(A)、IL-2(B)、IFN-γ(C)、TNF-α(D)、IL-1β(E)和IL-6(F)水平的影响。在69小时，收集上清液并通过CBA分析细胞因子。对于1名代表性供体的技术重复平均值+/-SD。
图61.在100nM鲁索替尼或100nM西罗莫司存在和不存在下，通过PGLALA CAR-T细胞(A)和CD16 CAR-T细胞(B)的CTV标记的WSU肿瘤细胞杀灭。在存在和不存在100nM鲁索替尼(ruxo)或100nM西罗莫司(siro)的情况下，用PGLALA-Fc(对于PGLALA CAR-T细胞)或野生型Fc(对于CD16 CAR-T细胞)将PGLALA CAR-T细胞和CD16 CAR-T细胞与CTV标记的WSU肿瘤细胞(E:T＝10:1)和浓度递增的抗CD20 IgG一起共同培养。在24小时，合并技术重复，并以LIVE/DEADTM Near-IR染料染色，以允许通过流式细胞术排除死亡的CTV标记的WSU DLCL2肿瘤细胞。1名代表性供体。
图62.100nM鲁索替尼和100nM西罗莫司对于通过PGLALA CAR-T细胞诱导的GM-CSF(A)、IFN-γ(B)、IL-2(C)和TNF-α(D)的影响。分别在100nM鲁索替尼(ruxo)或100nM西罗莫司(siro)存在和不存在下，将PGLALA CAR-T细胞与CTV标记的WSU肿瘤细胞(E:T＝10:1)和浓度递增的PGLALA-Fc抗CD20 IgG一起共同培养。在24小时，合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。n＝2名供体的平均值。
图63.100nM鲁索替尼和100nM西罗莫司对于通过CD16 CAR-T细胞诱导的GM-CSF(A)、IFN-γ(B)、IL-2(C)和TNF-α(D)的影响。在100nM鲁索替尼(ruxo)或100nM西罗莫司(siro)存在和不存在下，将CD16CAR-T细胞与CTV标记的WSU肿瘤细胞(E:T＝10:1)和浓度递增的野生型抗CD20 IgG一起共同培养。在24小时，合并来自技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子。n＝2名供体的平均值。
图64.活体外杀灭测定设置。在补充有不同激酶抑制剂(100nM)的培养基中，在浓度递增的CD19-TCB存在下，将PBMC与CellTraceTM Violet(CTV)标记的SUDLH-8肿瘤细胞(E:T＝10:1)共同培养24小时。
图65.在图64的测定中(24小时)，100nM达沙替尼(Src抑制剂)、西罗莫司(mTOR抑制剂)和鲁索替尼(JAK1/2抑制剂)对于CD19-TCB诱导的SUDLH-8杀灭(A)和T细胞活化(B、C、D、E)的影响。使用存活/死亡染色从存活细胞中排除的死亡CTV标记的SUDLH-8细胞(A)、和在CD4+T细胞(B)和CD8+T细胞(C)上的CD69表达以及在CD4+T细胞(D)和CD8+T细胞(E)上的CD25表达的代表性流式细胞术图。3名代表性供体中的1名，10nM CD19-TCB。
图66.在图64的测定中，100nM达沙替尼(dasa)、100nM西罗莫司(siro)、100nM替西罗莫司(temsi)、100nM依维莫司(evero)和100nM鲁索替尼(ruxo)对于CTV标记的SUDLH-8细胞的CD19-TCB依赖性杀灭。使用可排除死亡细胞的存活/死亡染色法，在24小时，通过流式细胞术测量CTV标记的SUDLH-8细胞的杀灭。n＝3名供体的平均值+标准差(SD)。
图67.在图64的测定中，100nM达沙替尼(dasa)、100nM西罗莫司(siro)、100nM替西罗莫司(temsi)、100nM依维莫司(evero)和100nM鲁索替尼(ruxo)对于CD19-TCB依赖性T细胞活化的影响。在24小时，通过流式细胞术测量在CD4+T细胞(A、B)和CD8+T细胞(C、D)上CD69和CD25的表达。n＝3名供体的平均值+SD。
图68.在图64的测定中，100nM达沙替尼(dasa)、100nM西罗莫司(siro)、100nM替西罗莫司(temsi)、100nM依维莫司(evero)和100nM鲁索替尼(ruxo)对于CD19-TCB依赖性细胞因子释放的影响。通过Luminex(24小时)测量上清液中IL-2(A)、IFN-γ(B)、TNF-α(C)、IL-6(D)和GM-CSF(E)的水平。3个代表性供体中的1个。
图69.活体外杀灭测定设置。在补充有不同JAK抑制剂(100nM)的培养基中，在浓度递增的CD19-TCB存在下，将PBMC与(CTV)标记的SUDLH-8细胞(E:T＝10:1)共同培养24小时。
图70.在图69的测定中，100nM鲁索替尼(ruxo)、100nM巴瑞替尼(bari)和100nM托法替尼(tofa)对于CTV标记的SUDLH-8细胞的CD19-TCB依赖性杀灭的影响。使用可排除死亡细胞的存活/死亡染色法，在24小时，通过流式细胞术测量CTV标记的SUDLH-8细胞的杀灭。n＝3名供体的平均值+SD。
图71.在图69的测定中，100nM鲁索替尼(ruxo)、100nM巴瑞替尼(bari)和100nM托法替尼(tofa)对CD19-TCB依赖性T细胞活化的影响。在24小时，通过流式细胞术测量在CD4+T细胞(A、B)和CD8+T细胞(C、D)上CD69和CD25的表达。n＝3名供体的平均值+SD。
图72.在图69的测定中，100nM鲁索替尼(ruxo)、100nM巴瑞替尼(bari)和100nM托法替尼(tofa)对CD19-TCB依赖性细胞因子释放的影响。通过Luminex(24小时)测量上清液中IL-2(A)、IFN-γ(B)、TNF-α(C)、IL-6(D)和GM-CSF(E)的水平。3个代表性供体中的1个。
图73.活体外杀灭测定设置。在补充有不同激酶抑制剂(100nM)、地塞米松(100nM)、5μg/mL抗TNF-α抗体(aTNF-α)或5μg/mL抗IL-6R抗体(aIL-6R)的培养基中，在浓度递增的CD19-TCB存在下，将PBMC与CTV标记的SUDLH-8细胞(E:T＝10:1)共同培养24小时。
图74.在图73的测定中，100nM地塞米松(dexa)、5μg/mL抗TNF-α抗体(aTNF-α)或5μg/mL抗IL-6R抗体(aIL-6R)(A)或100nM达沙替尼(dasa)、100nM西罗莫司(siro)、100nM替西罗莫司(temsi)、100nM依维莫司(evero)或100nM鲁索替尼(ruxo)(B)对于CTV标记的SUDLH-8细胞的CD19-TCB依赖性杀灭的影响。使用可排除死亡细胞的存活/死亡染色法，在24小时，通过流式细胞术测量CTV标记的SUDLH-8细胞的杀灭。通过单因素方差分析(弗理曼(Friedman)测试)，n＝3名供体的平均值+SD，具有*p≤0.0332，**p≤0.0021。
图75.在图73的测定中，100nM地塞米松(dexa)、5μg/mL抗TNF-α抗体(aTNF-α)或5μg/mL抗IL-6R抗体(aIL-6R)(A、B)或100nM达沙替尼(dasa)、100nM西罗莫司(siro)、100nM替西罗莫司(temsi)、100nM依维莫司(evero)或100nM鲁索替尼(ruxo)(C、D)对于CD19-TCB依赖性T细胞活化的影响。在24小时，通过流式细胞术测量在CD4+T细胞上CD25(A、C)和CD69(B、D)的表达。通过单因素方差分析(弗理曼测试)，n＝3名供体的平均值+SD，具有*p≤0.0332，**p≤0.0021。
图76.在图73的测定中，100nM地塞米松(dexa)、5μg/mL抗TNF-α抗体(aTNF-α)或5μg/mL抗IL-6R抗体(aIL-6R)(A、B)或100nM达沙替尼(dasa)、100nM西罗莫司(siro)、100nM替西罗莫司(temsi)、100nM依维莫司(evero)或100nM鲁索替尼(ruxo)(C、D)对于CD19-TCB依赖性T细胞活化的影响。在24小时，通过流式细胞术测量在CD8+T细胞上CD25(A、C)和CD69(B、D)的表达。通过单因素方差分析(弗理曼测试)，n＝3名供体的平均值+SD，具有*p≤0.0332，**p≤0.0021。
图77.在图73的测定中，100nM地塞米松(dexa)、5μg/mL抗TNF-α抗体(aTNF-α)或5μg/mL抗IL-6R抗体(aIL-6R)(A-D)或100nM达沙替尼(dasa)、100nM西罗莫司(siro)、100nM替西罗莫司(temsi)、100nM依维莫司(evero)或100nM鲁索替尼(ruxo)(E-H)对于CD19-TCB依赖性细胞因子释放的影响。通过Luminex(24小时)测量上清液中IFN-γ(A、E)、IL-2(B、F)、TNF-α(C、G)和GM-CSF(D、H)的水平。n＝3名供体的平均值+平均值的标准差(SEM)。
图78.活体外杀灭测定设置。在浓度递增的CD19-TCB存在下，将PBMC与CTV标记的NALM-6细胞(E:T＝10:1)共同培养24小时。在24小时，将培养基补充100nM达沙替尼、100nM西罗莫司或100nM鲁索替尼。
图79.在图78的测定中，于活化24小时后，将100nM达沙替尼(dasa)、100nM西罗莫司(siro)、100nM鲁索替尼(ruxo)加入系统时对CD19-TCB诱导的肿瘤细胞杀灭的影响。使用可排除死亡细胞的存活/死亡染色法，在24小时和48小时通过流式细胞术测量CTV标记的NALM-6细胞的杀灭。2个代表性供体中的1个。
图80.在图78的测定中，于活化24小时后，将100nM达沙替尼(dasa)、100nM西罗莫司(siro)、100nM鲁索替尼(ruxo)加入系统时对CD19-TCB诱导的细胞因子释放的影响。通过Luminex(24小时和48小时)测量血清中IFN-γ(A)、TNF-α(B)、IL-2(C)和IL-6(D)的水平。2个代表性供体中的1个。
图81.活体内实验时间线和给药时间表。人源化NSG小鼠以0.5mg/kg CD19-TCB(iv)和(i)6x 50mg/kg达沙替尼(po)，(ii)6x 30mg/kg鲁索替尼(po)，(iii)4x 5mg/kg西罗莫司(po)，(iv)2x 1mg/kg，1x 0.5mg/kg和1x0.25mg/kg地塞米松(po)，或(v)2x 10mg/kg，1x 5mg/kg、1x 2.5mg/kg甲基培尼皮质醇(po)共同处理，或以30mg/kg奥比妥珠单抗(GpT)(iv)预处理，然后以0.5mg/kg CD19-TCB(iv)处理。
图82.在图81所述实验中，奥比妥珠单抗预处理(GpT)、鲁索替尼(ruxo)、达沙替尼(dasa)、西罗莫司(siro)、地塞米松(dexa)和甲基培尼皮质醇(MP)对于CD19-TCB诱导的B细胞耗竭的影响。在以CD19-TCB处理后48小时(A)和72小时(B)收集的血液中，通过流式细胞术测量CD20+B细胞计数。n＝4只小鼠或n＝3只小鼠(dexa、MP和GpT)的平均值+/-SEM，具有*p≤0.0332，**p≤0.0021，通过单因素方差分析(克拉斯卡－瓦立斯(Kruskal wallis)测试)。
图83.在图81所述实验中，奥比妥珠单抗预处理(GpT)、鲁索替尼(ruxo)、达沙替尼(dasa)、西罗莫司(siro)、地塞米松(dexa)和甲基培尼皮质醇(MP)对于CD19-TCB诱导的B细胞耗竭的影响。在以CD19-TCB处理后72小时，终止时所收集的脾脏中，通过流式细胞术测量CD20+B细胞计数。n＝4只小鼠或n＝3只小鼠(载体、dexa、MP和GpT)的平均值+/-SEM。
图84.在图81所述实验中，奥比妥珠单抗预处理(GpT)、鲁索替尼(ruxo)、达沙替尼(dasa)、西罗莫司(siro)、地塞米松(dexa)和甲基培尼皮质醇(MP)对于CD19-TCB诱导的细胞因子释放的影响。在以CD19-TCB处理后6小时所收集的血清中，通过Luminex测量人类IFN-γ(hIFN-γ)(A)、人类IL-2(hIL-2)(B)、人类TNF-α(hTNF-α)(C)、人类IL-6(hIL-6)(D)的水平。n＝4只小鼠或n＝3只小鼠(dexa、MP和GpT)的平均值+/-SEM。
图85.在0nM至1000nM范围的剂量递增的费拉替尼存在下，通过10nM CEA-TCB的MKN45 NucLightRed(NLR)细胞的即时杀灭。MKN45NLR靶细胞与PBMC(E:T＝50000PBMC：5000个靶细胞)在补充有10nM CEA-TCB和费拉替尼的培养基中共培养。使用跟踪杀灭(每3小时扫描1次，放大10x，相位和红色400ms采集时间)。使用在t＝0小时和每个时间点的靶细胞+PBMC+费拉替尼对照孔的值，通过标准化总红色面积来测量杀灭[％]。1位供体的技术重复平均值+/-SEM。
图86.以10nM CEA-TCB处理后，在72小时，浓度递增的费拉替尼(0-1000nM)对于CD4+T细胞(A、B)和CD8+T细胞(C、D)上CD25(B、D)和CD69(A、C)表达的影响。合并技术重复，并在72小时通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25的表达。1个供体。
图87.浓度递增(0-1000nM)的费拉替尼对于通过10nM CEA-TCB诱导的IFN-γ(A)、IL-2(B)、TNF-α(C)、IL-6(D)和IL-8(E)水平的影响。在72小时，合并技术重复的上清液，并通过Luminex分析细胞因子含量。1个供体。
图88.CD19-TCB活体外杀灭淋巴瘤PDX细胞。淋巴瘤PDX细胞在测定当天解冻，以CTV染剂标记并与PBMC(E:T＝10:1)在CD19-TCB存在下培养24小时。(A)在汇集的技术重复中通过流式细胞术测量CTV标记的PDX细胞的杀灭，n＝3PBMC供体的平均值+/-SD。(B-E)在CD4+T细胞(B、C)和CD8+T细胞(D、E)上CD69(B、D)和CD25(C、E)的表达通过流式细胞术测量作为T细胞活化的读数、合并技术重复、n＝3PBMC供体的平均值+/-SD。
图89.活体内实验时间线和给药时间表。人源化NSG小鼠移植了淋巴瘤PDX(500万个细胞，s.c.)。当肿瘤大小达到200mm3时，根据肿瘤大小将小鼠随机分为8组或7组，并每周以载体(iv)、单独的0.5mg/kg CD19-TCB(iv)、0.5mg/kg CD19-TCB(黑色实心箭头，i.v.)并用20mg/kg达沙替尼(“Srci”，虚线箭头，p.o)、5mg/kg西罗莫司(“mTORi”，虚线箭头，p.o.)、30mg/kg鲁索替尼(“JAKi”，虚线箭头，p.o.)、2次1mg/kg、0.5mg/kg或4次0.25mg/kg地塞米松(“dexa”，虚线箭头，p.o.)、激酶抑制剂和单独的地塞米松，或以30mg/kg奥比妥珠单抗预处理(“GpT”，灰色实线箭头，i.v.)3天后以CD19-TCB第一次处理。在第一次施用CD19-TCB的当天给予激酶抑制剂两次(D16，在CD19-TCB前1小时一次，且之后一次)，然后在接下来的两天(D17和D18)给予一次(西罗莫司)或两次(达沙替尼、鲁索替尼)，以及每次后续施用CD19-TCB前1小时给予一次。
图90.与载体、奥比妥珠单抗预处理(GpT)或CD19-TCB作为单一疗法相比，西罗莫司单独或与CD19-TCB组合的肿瘤生长曲线。每周两次或三次使用卡尺测量肿瘤体积，n＝6-8只小鼠的平均值+SD，具有*p≤0.05，**p≤0.01，p≤0.001，通过单因素方差分析(克拉斯卡－瓦立斯测试)。
图91.与载体、奥比妥珠单抗预处理(GpT)或CD19-TCB作为单一疗法相比，鲁索替尼单独或与CD19-TCB组合的肿瘤生长曲线。每周两次或三次使用卡尺测量肿瘤体积，n＝6-8只小鼠的平均值+SD，具有*p≤0.05，**p≤0.01，p≤0.001，通过单因素方差分析(克拉斯卡－瓦立斯测试)。
图92.与载体、奥比妥珠单抗预处理(GpT)或CD19-TCB作为单一疗法相比，达沙替尼单独或与CD19-TCB组合的肿瘤生长曲线。每周两次或三次使用卡尺测量肿瘤体积，n＝6-8只小鼠的平均值+SD，具有*p≤0.05，**p≤0.01，p≤0.001，通过单因素方差分析(克拉斯卡－瓦立斯测试)。
图93.与载体、奥比妥珠单抗预处理(GpT)或CD19-TCB作为单一疗法相比，地塞米松单独或与CD19-TCB组合的肿瘤生长曲线。每周两次或三次使用卡尺测量肿瘤体积，n＝6-8只小鼠的平均值+SD，具有*p≤0.05，**p≤0.01，p≤0.001，通过单因素方差分析(克拉斯卡－瓦立斯测试)。
图94.西罗莫司(mTOR抑制剂)、鲁索替尼(JAK1/2抑制剂)、达沙替尼(Src抑制剂)和地塞米松对于CD19-TCB介导的(A)IL-2、(B)IFN-γ、(C)TNF-α和(D)IL-6释放的影响。在第一次输注CD19-TCB后6小时所收集的血清中，通过Luminex测量细胞因子水平。n＝6-8只小鼠的平均值+/-SD，其中*p≤0.05，**p≤0.01，p≤0.001，通过单因素方差分析(克拉斯卡－瓦立斯测试)。
图95.活体内实验时间线和给药时间表。以载体或以0.15mg/kg CD20-TCB(i.v.)单独或组合不同剂量的mTOR抑制剂(p.o.)(2、5或10mg/kg西罗莫司，10mg/kg替西罗莫司和10mg/kg依维莫司)、JAK抑制剂(p.o.)(30或60mg/kg鲁索替尼)和Src抑制剂(p.o.)(10或50mg/kg达沙替尼)或以30mg/kg奥比妥珠单抗(GpT)(i.v.)预处理来治疗人源化NSG小鼠。每组n＝4只小鼠。
图96.在图95所描述的实验中，奥比妥珠单抗预处理(GpT)、鲁索替尼、达沙替尼、西罗莫司、依维莫司、替西罗莫司在48小时(A)和72小时(B)对CD20-TCB诱导的B细胞耗竭的影响。在以CD20-TCB处理后48小时和72小时收集的血液中，通过流式细胞术测量CD19+B细胞在人类CD45+(huCD45)细胞中的比例。n＝4只小鼠或n＝3只小鼠(依维莫司组)的平均值+/-SEM。与载体组的统计比较汇总于表(C)中，其中p值通过克拉斯卡－瓦立斯测试计算。
图97.在以单独的CD20-TCB或与mTOR抑制剂(西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司)、JAK抑制剂(鲁索替尼)、Src抑制剂(达沙替尼)或奥比妥珠单抗预处理(GpT)组合治疗后4小时(A)和24小时(B)，来自图95所描述的实验的小鼠血清中IFN-γ的水平。在24小时，n＝4只小鼠的平均值+/-SEM或n＝3只小鼠的平均值+/-SEM(依维莫司组)。
图98.在以单独的CD20-TCB或与mTOR抑制剂(西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司)、JAK抑制剂(鲁索替尼)、Src抑制剂(达沙替尼)或奥比妥珠单抗预处理(GpT)组合治疗后4小时(A)和24小时(B)，来自图95所描述的实验的小鼠血清中IL-2的水平。在24小时，n＝4只小鼠的平均值+/-SEM或n＝3只小鼠的平均值+/-SEM(依维莫司组)。
图99.在以单独的CD20-TCB或与mTOR抑制剂(西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司)、JAK抑制剂(鲁索替尼)、Src抑制剂(达沙替尼)或奥比妥珠单抗预处理(GpT)组合治疗后4小时(A)和24小时(B)，来自图95所描述的实验的小鼠血清中TNF-α的水平。在24小时，n＝4只小鼠的平均值+/-SEM或n＝3只小鼠的平均值+/-SEM(依维莫司组)。
图100.在以单独的CD20-TCB或与mTOR抑制剂(西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司)、JAK抑制剂(鲁索替尼)、Src抑制剂(达沙替尼)或奥比妥珠单抗预处理(GpT)组合治疗后4小时(A)和24小时(B)，来自图95所描述的实验的小鼠血清中IL-6的水平。在24小时，n＝4只小鼠的平均值+/-SEM或n＝3只小鼠的平均值+/-SEM(依维莫司组)。
图101.在以单独的CD20-TCB或与mTOR抑制剂(西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司)、JAK抑制剂(鲁索替尼)、Src抑制剂(达沙替尼)或奥比妥珠单抗预处理(GpT)组合治疗后4小时(A)和24小时(B)，来自图95所描述的实验的小鼠血清中IP-10(CXCL10)水平。在24小时，n＝4只小鼠的平均值+/-SEM或n＝3只小鼠的平均值+/-SEM(依维莫司组)。
图102.在以单独的CD20-TCB或与mTOR抑制剂(西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司)、JAK抑制剂(鲁索替尼)、Src抑制剂(达沙替尼)或奥比妥珠单抗预处理(GpT)组合治疗后4小时(A)和24小时(B)，来自图95所描述的实验的小鼠血清中MCP-1(CCL2)水平。在24小时，n＝4只小鼠的平均值+/-SEM或n＝3只小鼠的平均值+/-SEM(依维莫司组)。/>
图103.在以单独的CD20-TCB或与mTOR抑制剂(西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司)、JAK抑制剂(鲁索替尼)、Src抑制剂(达沙替尼)或奥比妥珠单抗预处理(GpT)组合治疗后4小时(A)和24小时(B)，来自图95所描述的实验的小鼠血清中IL-8的水平。在24小时，n＝4只小鼠的平均值+/-SEM或n＝3只小鼠的平均值+/-SEM(依维莫司组)。
图104.在以单独的CD20-TCB或与mTOR抑制剂(西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司)、JAK抑制剂(鲁索替尼)、Src抑制剂(达沙替尼)或奥比妥珠单抗预处理(GpT)组合治疗后4小时(A)和24小时(B)，来自图95所描述的实验的小鼠血清中GM-CSF的水平。在24小时，n＝4只小鼠的平均值+/-SEM或n＝3只小鼠的平均值+/-SEM(依维莫司组)。
实例
以下为本发明的方法和组合物的实例。应当理解，鉴于上文给出的一般描述，可以实施各种其他方面。
实例1.mTOR抑制剂西罗莫司在对TCB介导的靶细胞杀灭影响最小的情况下防止TCB介导的细胞因子释放。
为了评估西罗莫司对TCB介导的靶细胞杀灭的抑制作用，我们在补充有西罗莫司浓度递增的培养基中使用周边血液单核细胞(PBMC)、MKN45NucLight Red(NLR)靶细胞和10nM CEA-TCB(SEQ ID NO 4-23)来进行杀灭测定(图1)。system(EssenBioscience)用于捕获随时间丢失的红色萤光蛋白信号，作为靶细胞杀灭的读数。范围从1μM(～915ng/mL)至12.5nM(～11.4ng/mL)的剂量的西罗莫司仅部分降低了10nM CEA-TCB对MKN45 NLR靶细胞的杀灭(图2A和图3A)。
在测定终点(72小时)，PBMC以存活/死亡染色剂染色，以验证西罗莫司对PBMC活力的影响。在1μM(～915ng/mL)至12.5nM(～11.4ng/mL)的浓度范围内，西罗莫司对于以10nMCEA-TCB处理的样品中的PBMC生存力并没有直接影响(图4B)。CD25和CD69在活的CD4+T细胞和CD8+T细胞上的表达也通过流式细胞术测量作为T细胞活化的读数。西罗莫司不影响CD8+T细胞上CD69的表达，而在25nM以上的浓度下，其将CD69在CD4+T细胞上的表达从～45％降至～25％。在高于25nM的浓度下，西罗莫司将CD4+T细胞上的CD25表达从～45％降至～15％，并将CD8+T细胞上的CD25表达从～75％降至～40％(图6)。
最后，通过Luminex在测定的上清液中测量细胞因子的水平，以确定西罗莫司对CEA-TCB诱导的细胞因子释放的影响。在任何浓度的西罗莫司存在下，与未接受任何西罗莫司处理的样品相比，发现在以10nM CEA-TCB处理的样品中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、MCP-1、IL-8、IL-10、IL-4和GM-CSF的水平非常低(图8)。12.5nM至1μM全范围内的西罗莫司浓度对CEA-TCB诱导的细胞因子释放产生了相当的影响，表明西罗莫司强烈下调细胞因子释放。
尽管西罗莫司不能完全抑制由TCB触发的靶细胞杀灭和T细胞活化，但即使在测试的最低剂量下，它也能强烈减少细胞因子的释放。
用另一个TCB进行了类似的实验。WSU DLCL2细胞与PBMC在1nM CD20-TCB(SEQ IDNO 4-11，24-35)存在下共同培养，且西罗莫司剂量范围从0nM递增至1000nM(图13)。在24小时测量CTV标记的WSU靶细胞的杀灭(图14C)和CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25和CD69的表达(图17)分别作为西罗莫司对TCB功效和T细胞活化影响的读数。最后，通过Luminex测量IFN-γ、IL-2、TNF-α、GM-CSF和IL-6的水平(图21)，以评估递增的西罗莫司浓度对CD20-TCB诱导的细胞因子释放的影响。与CEA-TCB的研究结果一致，西罗莫司并未完全抑制CD20-TCB介导的靶细胞杀灭和T细胞活化，但在浓度高于12.5nM时，它强烈降低了CD20-TCB诱导的细胞因子释放。
实例2.mTOR抑制剂替西罗莫司在对TCB介导的靶细胞杀灭影响最小的情况下防止TCB介导的细胞因子释放。
为了评估替西罗莫司对TCB介导的靶细胞杀灭的抑制作用，我们使用周边血液单核细胞(PBMC)、NucLight Red(NLR)靶细胞和10nM CEA-TCB，在补充有递增的替西罗莫司浓度的培养基中进行杀灭测定(图1)。system(Essen Bioscience)用于捕获随时间丢失的红色萤光蛋白信号，作为靶细胞杀灭的读数。剂量范围从1μM(～1031ng/mL)至12.5nM(～12.9ng/mL)的替西罗莫司仅部分降低了10nM CEA-TCB对MKN45 NLR靶细胞的杀灭(图2C和图3C)。
在测定终点(72小时)，将PBMC以存活/死亡染色剂染色，以验证替西罗莫司对PBMC生存力的影响。在1μM(～1031ng/mL)至12.5nM(～12.9ng/mL)的浓度范围内，替西罗莫司对于以10nM CEA-TCB处理的样品中的PBMC活力并无直接影响(图4C)。CD25和CD69在活的CD4+T细胞和CD8+T细胞上的表达也通过流式细胞术测量作为T细胞活化的读数。替西罗莫司不影响CD8+T细胞上CD69的表达，而在高于25nM的浓度下，它将CD69在CD4+T细胞上的表达从～45％降至～25％。在高于25nM的浓度下，替西罗莫司将CD25在CD4+T细胞上的表达从～45％降低至～15％，并将在CD8+T细胞上的表达从～75％降低至40％(图7)。
通过Luminex在测定的上清液中测量细胞因子的水平，以确定替西罗莫司对CEA-TCB诱导的细胞因子释放的影响。在任何浓度的替西罗莫司存在下，与未接受任何替西罗莫司处理的样品相比，发现在以10nM CEA-TCB处理的样品中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、MCP-1、IL-8、IL-10、IL-4和GM-CSF的水平非常低(图8)。从12.5nM至1μM的整个范围内的替西罗莫司浓度对CEA-TCB诱导的细胞因子释放产生了相当的影响，显示替西罗莫司强烈地下调细胞因子释放。
尽管替西罗莫司不能完全抑制由TCB触发的靶细胞杀灭和T细胞活化，但即使在测试的最低剂量下，它也能强烈地降低细胞因子的释放。
用CD20-TCB进行了类似的实验。WSU DLCL2细胞在1nM CD20-TCB存在下与PBMC共同培养，并将替西罗莫司剂量范围从0nM递增至1000nM(图13)。在24小时测量CTV标记的WSU靶细胞的杀灭(图14B)和CD4+和CD8+上CD25和CD69的表达(图16)分别作为替西罗莫司对TCB功效和T细胞活化影响的读数。最后，通过Luminex测量IFN-γ、IL-2、TNF-α、GM-CSF和IL-6的水平(图20)，以评估递增的替西罗莫司浓度对CD20-TCB诱导的细胞因子释放的影响。与CEA-TCB的研究结果一致，替西罗莫司并未完全抑制CD20-TCB介导的靶细胞杀灭和T细胞活化，但在浓度高于12.5nM时，它强烈降低了CD20-TCB诱导的细胞因子释放。
实例3.mTOR抑制剂依维莫司在对TCB介导的靶细胞杀灭影响最小的情况下防止TCB介导的细胞因子释放。
为了评估依维莫司对TCB介导的靶细胞杀灭的抑制作用，我们使用周边血液单核细胞(PBMC)、NucLight Red(NLR)靶细胞和10nM CEA-TCB，在补充有递增的依维莫司浓度的培养基中进行杀灭测定(图1)。system(Essen Bioscience)用于捕获随时间丢失的红色萤光蛋白信号，作为靶细胞杀灭的读数。范围从1μM(～959ng/mL)至12.5nM(～12.0ng/mL)的剂量的依维莫司仅部分降低了10nM CEA-TCB对MKN45 NLR靶细胞的杀灭(图2B和图3B)。
在测定终点(72小时)，PBMC以存活/死亡染色剂染色，以验证依维莫司对PBMC生存力的影响。在1μM(～959ng/mL)至12.5nM(～12.0ng/mL)的浓度范围内，依维莫司对于以10nM CEA-TCB处理的样品中的PBMC生存力并没有直接影响(图4A)。CD25和CD69在活的CD4+T细胞和CD8+T细胞上的表达也通过流式细胞术测量作为T细胞活化的读数。依维莫司不影响CD8+T细胞上CD69的表达，而在25nM以上的浓度下，其将CD69在CD4+T细胞上的表达从～45％降低至～25％。在高于25nM的浓度下，依维莫司将CD4+T细胞上的CD25表达从～45％降至～15％，并将CD8+T细胞上的CD25表达从～70％降至～40％(图5)。
通过Luminex在测定的上清液中测量细胞因子的水平，以确定依维莫司对CEA-TCB诱导的细胞因子释放的影响。在任何浓度的依维莫司存在下，与未接受任何依维莫司处理的样品相比，发现在以10nM CEA-TCB处理的样品中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、MCP-1、IL-8、IL-10、IL-4和GM-CSF的水平非常低(图8)。从12.5nM至1μM的整个范围内的依维莫司浓度对CEA-TCB诱导的细胞因子释放产生了相当的影响，显示依维莫司强烈地下调细胞因子释放。
尽管依维莫司不能完全抑制由TCB触发的靶细胞杀灭和T细胞活化，但即使在测试的最低剂量下，它也能强烈地降低细胞因子的释放。
用CD20-TCB进行了类似的实验。WSU DLCL2细胞在1nM CD20-TCB存在下与PBMC共同培养，并将依维莫司剂量范围从0nM递增至1000nM(图13)。在24小时测量CTV标记的WSU靶细胞的杀灭(图14D)和CD4+和CD8+上CD25和CD69的表达(图18)分别作为依维莫司对TCB功效和T细胞活化影响的读数。最后，通过Luminex测量IFN-γ、IL-2、TNF-α、GM-CSF和IL-6的水平(图22)，以评估递增的依维莫司浓度对CD20-TCB诱导的细胞因子释放的影响。与CEA-TCB的研究结果一致，依维莫司并未完全抑制CD20-TCB介导的靶细胞杀灭和T细胞活化，但在浓度高于12.5nM时，它强烈降低了CD20-TCB诱导的细胞因子释放。
实例4.JAK1/2抑制剂鲁索替尼在对TCB介导的靶细胞杀灭影响最小的情况下防止TCB介导的细胞因子释放。
为了评估鲁索替尼对TCB介导的靶细胞杀灭的抑制作用，我们使用周边血液单核细胞(PBMC)、MKN45 NucLight Red(NLR)靶细胞和10nM CEA-TCB，在补充有浓度递增的鲁索替尼的培养基中进行杀灭测定(图1)。system(Essen Bioscience)用于捕获随时间丢失的红色萤光蛋白信号，作为靶细胞杀灭的读数。范围从100nM(～30.7ng/mL)至6.25nM(～1.9ng/mL)的剂量的鲁索替尼仅部分降低了10nM CEA-TCB对MKN45 NLR靶细胞的杀灭(图9A和B)。
在测定终点(69小时)，将PBMC以存活/死亡染色剂染色，以验证鲁索替尼对PBMC生存力的影响。在100nM(～30.7ng/mL)至6.25nM(～1.9ng/mL)的浓度范围内，鲁索替尼对于以10nM CEA-TCB处理的样品中的PBMC生存力并无直接影响(图10)。CD25和CD69在活的CD4+T细胞和CD8+T细胞上的表达也通过流式细胞术测量作为T细胞活化的读数。鲁索替尼剂量依赖性地影响在CD4+T细胞和CD8+T细胞二者上CD25和CD69的表达(图11)。剂量递增的鲁索替尼对CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD69表达的影响不如对CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25表达的影响显著。
通过Luminex在测定的上清液中测量细胞因子的水平，以确定鲁索替尼对CEA-TCB诱导的细胞因子释放的影响。在剂量递增的鲁索替尼存在下，与未接受任何鲁索替尼处理的样品相比，发现在以10nM CEA-TCB处理的样品中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、MCP-1、IL-8、IL-10、IL-4和GM-CSF的水平非常低(图12)。鲁索替尼强烈下调整体CEA-TCB诱导的细胞因子释放。
尽管鲁索替尼不能完全抑制由TCB触发的靶细胞杀灭和T细胞活化，但即使在测试的最低剂量下，它也能强烈地降低细胞因子的释放。
用CD20-TCB进行了类似的实验。WSU DLCL2细胞在1nM CD20-TCB存在下与PBMC共同培养，并将鲁索替尼剂量范围从0nM递增至1000nM(图13)。在24小时测量CTV标记的WSU靶细胞的杀灭(图14A)和CD4+和CD8+上CD25和CD69的表达(图15)分别作为鲁索替尼对TCB功效和T细胞活化影响的读数。最后，通过Luminex测量IFN-γ、IL-2、TNF-α、GM-CSF和IL-6的水平(图19)，以评估递增的西罗莫司浓度对CD20-TCB诱导的细胞因子释放的影响。鲁索替尼并未完全抑制CD20-TCB介导的靶细胞杀灭和T细胞活化，但在浓度高于25nM时，它强烈降低了CD20-TCB诱导的IL-6和IFN-γ释放。与mTOR抑制剂不同，鲁索替尼对TNF-α、IL-2和GM-CSF的释放没有强烈影响。
实例5.mTOR抑制剂(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)和JAK抑制剂(鲁索替尼)与抗TNF-α抗体、抗IL-6R抗体、地塞米松和达沙替尼相比之下，在TCB介导的靶杀灭、T细胞活化和细胞因子释放的影响。
为了评估mTOR抑制剂(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)和JAK抑制剂(鲁索替尼)与抗TNF-α抗体、抗IL-6R抗体、地塞米松和达沙替尼相比之下在TCB介导的靶细胞杀灭的影响，我们使用周边血液单核细胞(PBMC)、MKN45 NucLight Red(NLR)靶细胞和10nMCEA-TCB在补充有不同化合物的培养基中进行杀灭测定(图1)。system(EssenBioscience)用于捕获红色萤光蛋白信号随时间的丢失，作为靶细胞杀灭的读数。与单独的TCB相比，中和抗TNF-α抗体和抗IL-6R抗体(5μg/ml)不会影响靶细胞杀灭动力学，也不会影响最大靶细胞杀灭。50nM JAK抑制剂(鲁索替尼)、50nM mTOR抑制剂(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)对靶细胞杀灭与1μM和0.1μM地塞米松类似，且添加50nM达沙替尼完全关闭了TCB诱导的靶细胞杀灭。(图23)。
在测定终点(66小时)，通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25和CD69的表达，以评估不同化合物对T细胞活化的影响。虽然mTOR抑制剂(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)和JAK抑制剂(鲁索替尼)对CD4+T细胞和CD8+T细胞上的CD25和CD69表达的影响比地塞米松或达沙替尼更温和，但抗TNF-α和抗IL-6R抗体不影响T细胞活化(图24和图25)。
通过Luminex在测定的上清液中测量细胞因子的水平，以确定不同的化合物对CEA-TCB诱导的细胞因子释放的影响。与针对例如TNF-α和IL-6的特定细胞因子的中和抗体相比，使用激酶抑制剂和地塞米松导致TCB诱导的细胞因子释放总体减少(图26)。达沙替尼完全防止CEA-TCB诱导的细胞因子释放以及T细胞活化和靶细胞杀灭，而mTOR抑制剂(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)和JAK抑制剂(鲁索替尼)独立地抑制具有对T细胞活化较温和影响的细胞因子释放和靶细胞杀灭。JAK1/2抑制剂鲁索替尼降低IL-2水平的强度低于mTOR抑制剂(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)(图26B)。
mTOR抑制剂(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)和JAK抑制剂(鲁索替尼)对CEA-TCB诱导的细胞因子释放的影响与地塞米松和达沙替尼相当，并且比抗TNF-α和抗IL-6R抗体强。另一方面，与达沙替尼相比，mTOR和JAK抑制剂对杀灭效力和T细胞活化的影响较小。
用另一个TCB进行了类似的实验。在剂量递增的CD20-TCB、mTOR抑制剂(替西罗莫司、西罗莫司、依维莫司)、JAK抑制剂(鲁索替尼)、达沙替尼、地塞米松、抗TNF-α抗体或抗IL-6R抗体的存在下，WSU细胞与PBMC共同培养。测量B细胞的杀灭作为24小时时各种化合物对TCB功效的影响的读数(图27和28)。CD25和CD69在CD4+T细胞和CD8+T细胞上的表达通过流式细胞术测量作为在24小时时T细胞活化的读数(图29、30和31)。最后，在测定终点通过Luminex分析细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-4、IL-10、GM-CSF和IL-1β)的含量以评估不同处理对TCB诱导细胞因子释放的影响(图32和33)。如CEA-TCB所见，mTOR(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)和JAK(鲁索替尼)抑制剂对CD20-TCB诱导的细胞因子释放的影响与地塞米松和达沙替尼相当，并且在降低整体细胞因子释放方面，影响强于抗TNF-α抗体和抗IL-6R抗体。与达沙替尼不同，mTOR(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)和JAK(鲁索替尼)抑制剂既不能防止B细胞的杀灭，也不能关闭由CD20-TCB诱导的T细胞活化，这表明它们不会强烈影响TCB的功效。
总之，与达沙替尼(一种Src抑制剂)或地塞米松相比，mTOR和JAK抑制剂对杀灭效力和T细胞活化的影响较低。相反，它们对杀灭效力和T细胞活化的影响与抗TNF-α抗体或抗IL-6R抗体的影响相当。另一方面，mTOR和JAK抑制剂，如地塞米松和达沙替尼，比抗TNF-α抗体或抗IL-6R抗体更有效地减少细胞因子释放。mTOR和JAK抑制剂的不同活性显示出TCB诱导的细胞因子释放和细胞毒性的解偶联，表明这些化合物可能是类固醇或IL-6/IL-6R阻断剂的有吸引力的替代品或补充品，用于缓解CRS。
实例6.西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司和鲁索替尼对于自预活化效应细胞的CD20-TCB诱导的细胞因子释放的影响
为了评估mTOR抑制剂(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)和JAK抑制剂(鲁索替尼)是否可以防止由CD20-TCB处理诱导的细胞因子的进一步释放，在活化18小时后，将它们添加至活体外杀灭测定中。在此测定中，在剂量递增的CD20-TCB存在下将CTV标记的WSUDLCL2肿瘤细胞与PBMC共同培养18小时。在18小时，将100nM鲁索替尼、100nM替西罗莫司、100nM西罗莫司或100nM依维莫司添加至系统中(图34)。为了验证在添加100nM鲁索替尼、100nM替西罗莫司、100nM西罗莫司或100nM依维莫司之前T细胞是否被活化，在18小时测量肿瘤细胞杀灭、T细胞活化和细胞因子释放。为了评估添加100nM鲁索替尼、100nM替西罗莫司、100nM西罗莫司或100nM依维莫司对TCB诱导的细胞因子释放的影响，以及关于它们对TCB功效的影响，在44小时测量细胞因子释放、T细胞活化和肿瘤细胞杀灭。
在18小时时，以CD20-TCB处理导致CTV标记的WSU DLCL2肿瘤细胞被杀灭(图35)以及CD4+T细胞和CD8+T细胞二者上CD25的上调(图36)，这表明T细胞在测定系统中加入不同抑制剂之前被活化。添加100nM鲁索替尼、100nM替西罗莫司、100nM西罗莫司或100nM依维莫司并不影响在44小时测量的CTV标记的WSU DLCL2肿瘤细胞杀灭(图37)和T细胞活化(图38)。然而，添加mTOR抑制剂(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)在18小时至44小时之间阻止了IL-2、IFN-γ、IL-6和GM-CSF的释放，且在较低程度上阻止了TNF-α和IL-1β(图39)。添加JAK抑制剂(鲁索替尼)在18小时至44小时之间可防止IFN-γ、IL-6的进一步产生，并在较低程度上防止GM-CSF和TNF-α的产生，但并未防止IL-2的进一步产生(图39)。
此外，在1nM的固定CD20-TCB浓度下，三个供体证实了这些结果。添加100nM鲁索替尼、100nM替西罗莫司、100nM西罗莫司或100nM依维莫司在18小时至44小时之间不会进一步影响CTV标记的WSU DLCL2肿瘤细胞杀灭(图40)和T细胞活化(图41和42)。然而，添加100nM替西罗莫司、100nM西罗莫司或100nM依维莫司在18小时至44小时之间防止了IFN-γ、IL-2、IL-6的进一步释放，并且在较低程度上阻止了TNF-α和IL-1β释放(图43)。添加100nM鲁索替尼防止了IFN-γ和IL-6的进一步释放，并在较低程度上防止了TNF-α和IL-1β释放，但不防止IL-2释放(图43)。
总体而言，这些数据表明mTOR(替西罗莫司、西罗莫司和依维莫司)以及JAK(鲁索替尼)抑制剂可快速关闭CD20-TCB诱导的细胞因子从预活化的效应细胞中释放，同时不会强烈影响CD20-TCB的功效。
实例7.JAK1/2抑制剂鲁索替尼在对TCB介导的靶细胞杀灭影响最小的情况下防止TCB介导的细胞因子释放。
使用额外的TCB，即MAGEA4-TCB(SEQ ID NOs 37-56)评估鲁索替尼对TCB诱导的肿瘤细胞杀灭和细胞因子释放的影响。与实例4类似，使用周边血液单核细胞(PBMC)、A375NucLight Red(NLR)靶细胞和8nM MAGEA4-TCB，在补充有0nM至100nM范围内浓度递增的鲁索替尼的培养基中进行杀灭测定。system(Essen Bioscience)用于捕获随时间丢失的红色萤光蛋白信号，作为杀灭的读数，以允许评估鲁索替尼对MAGEA4-TCB诱导的靶细胞杀灭的影响。最后，在测定终点(72小时)收集上清液，并经由Luminex测量细胞因子，以评估浓度递增的鲁索替尼对MAGEA4-TCB诱导的细胞因子释放的影响。
虽然鲁索替尼不能防止MAGEA4-TCB诱导的肿瘤细胞杀灭(图44)，但IFN-γ(图45A)、TNF-α(图45C)、IL-8(图45G)、IL-6(图45E)、MCP-1(图45H)、IL-10(图45I)和IL-1β(图45F)的水平随着鲁索替尼浓度的增加而减少。GM-CSF(图45D)和IL-2(图45B)的水平不受鲁索替尼的影响，与CEA-TCB和CD20-TCB生成的数据一致。因此，JAK1/2抑制剂鲁索替尼可代表一种有吸引力的方法来减轻MAGEA4-TCB诱导的细胞因子释放，同时不影响其功效，也不影响IL-2和GM-CSF含量。
实例8.mTOR抑制剂西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司防止TCB介导的细胞因子释放，而对TCB介导的靶细胞杀灭影响最小。
使用额外的TCB，即MAGEA4-TCB，评估西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司对TCB诱导的肿瘤细胞杀灭和细胞因子释放的影响。与实例1-3类似，使用周边血液单核细胞(PBMC)、A375 NucLight Red(NLR)靶细胞和8nM MAGEA4-TCB，在补充有0nM至100nM的浓度递增的西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司的培养基中进行杀灭测定。system(EssenBioscience)用于捕获红色萤光蛋白信号随时间的丢失，作为靶细胞杀灭的读数。最后，在测定终点(72小时)收集上清液，并经由Luminex测量细胞因子，以评估浓度递增的西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司对MAGEA4-TCB诱导的细胞因子释放的影响。
虽然西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司不能防止MAGEA4-TCB诱导的肿瘤细胞杀灭(图46A、B、C)，但大多数测试细胞因子的水平，包括IFN-γ(图47A)、IL-2(图47B)、TNF-α(图47C)、IL-8(图47G)、IL-6(图47E)、MCP-1(图47H)和IL-10(图47I)随着西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司递增的浓度而减少。与CEA-TCB和CD20-TCB产生的数据一致，mTOR抑制剂西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司可代表一种有吸引力的方法来减轻MAGEA4-TCB诱导的细胞因子释放，同时不影响其功效。
实例9.JAK抑制剂巴瑞替尼可有效防止TCB诱导的细胞因子释放，同时不影响其疗效。
为了评估JAK1/2抑制剂巴瑞替尼对CD20-TCB介导的靶细胞杀灭和细胞因子释放的抑制作用，将周边血液单核细胞(PBMC)与CTV标记的WSU靶细胞和CD20-TCB共同培养于补充有浓度递增的巴瑞替尼的培养基中。在24小时时，通过流式细胞术经死亡CTV细胞的排除测量肿瘤细胞杀灭。收集上清液并通过Luminex测量细胞因子。此外，通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD69和CD25的表达，以评估巴瑞替尼对T细胞活化的影响。
因此，0nM至100nM范围内的巴瑞替尼浓度不会损害CD20-TCB诱导的肿瘤细胞杀灭(图48和49)和T细胞活化，如CD25和CD69在CD4+T细胞上的表达(图50A、C和51)和在CD8+T细胞上的表达(图50B、D和52)所示。在1μM的较高浓度下，巴瑞替尼略微降低CD20-TCB诱导的肿瘤细胞杀灭，(图48和49)和T细胞活化(图50A-D、51和52)。与其他JAK抑制剂鲁索替尼相似，巴瑞替尼的剂量递增降低了IFN-γ、TNF-α、GM-CSF、IL-6和IL-8的水平(图53A、C、D、E和F、图54A、C、D、E和F)但没有降低IL-2的水平(图53B、图54B)。
虽然巴瑞替尼不能防止CD20-TCB触发的CTV WSU肿瘤细胞杀灭和T细胞活化，但它在12.5nM至100nM的剂量范围内强烈降低了CD20-TCB诱导的细胞因子释放。因此，继鲁索替尼之后，JAK抑制剂巴瑞替尼可用于减轻CD20-TCB诱导的细胞因子释放，同时不影响其功效。
实例10.JAK抑制剂巴瑞替尼对TCB诱导的肿瘤细胞杀灭、T细胞活化和细胞因子释放的影响与JAK抑制剂鲁索替尼相当。
为了验证巴瑞替尼对TCB诱导的细胞因子释放、T细胞活化和肿瘤细胞杀灭的影响是否与鲁索替尼的影响相当，我们使用周边血液单核细胞(PBMC)、MKN45 NucLight Red(NLR)靶细胞和10nM和1nM CEA-TCB，在补充有浓度递增的鲁索替尼和巴瑞替尼的培养基中进行杀灭测定。system(Essen Bioscience)用于捕获随时间丢失的红色萤光蛋白信号，作为靶细胞杀灭的读数。在72小时时，通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25的表达，以评估巴瑞替尼和鲁索替尼对CEA-TCB诱导的T细胞活化的影响。最后，在测定终点(72小时)收集上清液，并经由Luminex测量细胞因子，以评估巴瑞替尼与鲁索替尼对CEA-TCB诱导的细胞因子释放的影响。细胞因子抑制的百分比计算为在不存在激酶抑制剂的情况下所发现的细胞因子百分比，并允许比较巴瑞替尼和鲁索替尼对CEA-TCB诱导的细胞因子释放的影响。
对于0nM和100nM之间的浓度递增，巴瑞替尼和鲁索替尼都不能阻止由1nM CEA-TCB诱导的MKN45 NLR肿瘤细胞的杀灭(图55A和B)。在1μM的较高浓度下，巴瑞替尼和鲁索替尼都部分防止了对MKN45 NLR肿瘤细胞的杀灭(图55A和B)。与鲁索替尼相比，浓度递增的巴瑞替尼降低了CD25在CD4+T细胞(图56A)和CD8+T细胞(图56B)上的表达，表明巴瑞替尼对CEA-TCB的影响诱导的T细胞活化与鲁索替尼相当。对于浓度递增的鲁索替尼和巴瑞替尼，IFN-γ、TNF-α、GM-CSF、IL-6和IL-8水平的抑制程度相似(图57A、C、D、E和F)。与使用鲁索替尼观察到的结果一致，浓度递增的巴瑞替尼并未降低IL-2(图57B)。
巴瑞替尼与鲁索替尼的比较是使用另一种TCB进行的，即MAGEA4-TCB。与CEA-TCB类似，使用周边血液单核细胞(PBMC)、A375 NucLight Red(NLR)靶细胞和25nM MAGEA4-TCB，在补充有0nM至100nM范围内浓度递增的鲁索替尼和巴瑞替尼的培养基中进行杀灭测定。system(Essen Bioscience)用于捕获红色萤光蛋白信号随时间的丢失，作为靶细胞杀灭的读数。通过Luminex测量在测定终点(72小时)收集的上清液中的细胞因子，以评估巴瑞替尼与鲁索替尼对MAGEA4-TCB诱导的细胞因子释放的影响。
与用CEA-TCB生成的数据一致，对于浓度范围从0nM递增至100nM，巴瑞替尼(图58A)对MAGEA4-TCB诱导的肿瘤细胞杀灭的影响与鲁索替尼(图58B)相当。此外，对于浓度范围从0nM递增至100nM，巴瑞替尼(图59A-F)对MAGEA4-TCB诱导的GM-CSF、IL-2、IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-1β和IL-6释放的影响也与鲁索替尼(图60A-F)相当。
总之，巴瑞替尼对CEA-TCB和MAGEA4-TCB诱导的肿瘤细胞杀灭、T细胞活化和细胞因子释放的影响与鲁索替尼的影响相当。因此，除了鲁索替尼，巴瑞替尼代表了一种有吸引力的方法以减轻TCB诱导的细胞因子释放。
实例11.JAK抑制剂鲁索替尼和mTOR抑制剂西罗莫司可防止CAR-T细胞诱导的细胞因子释放。
为了评估JAK抑制剂鲁索替尼和mTOR抑制剂西罗莫司对CAR-T细胞诱导的细胞因子释放的影响，我们进行了一项杀灭测定，其中PGLALA和CD16通用CAR-T细胞(CAR-T细胞具有包含抗P329G-Fc scFv的CAR(与PGLALA Fc结合)或CD16(与野生型Fc结合))与CTV WSU肿瘤细胞在浓度递增的PGLALA Fc和野生型Fc抗CD20 IgG的存在下，在补充有100nM鲁索替尼或100nM西罗莫司的培养基中共同培养。为了验证鲁索替尼和西罗莫司是否干扰CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀灭，我们在24小时时通过流式细胞术测量CTV WSU肿瘤细胞的杀灭情况。为了验证鲁索替尼和西罗莫司是否降低由CAR-T细胞诱导的细胞因子释放，在72小时时通过Luminex在测定的上清液中测量细胞因子。
结果，西罗莫司和鲁索替尼都不能防止PGLALA CAR-T细胞(图61A)和CD16 CAR-T细胞(图61B)的肿瘤细胞杀灭。对于PGLALA CAR-T细胞(图62)和CD16 CAR-T细胞(图63)，鲁索替尼降低了IFN-γ(图62B和63B)、TNF-α(图62D和63D)和GM-CSF(图62A和63A)的释放，但不降低IL-2(图62C和63C)的释放，这与TCB的发现一致。最后，西罗莫司强烈地减少所有测试细胞因子的释放，即IFN-γ(图62B和63B)、TNF-α(图62D和63D)、GM-CSF(图62A和63A)和IL-2(图62C和63C)。
总体而言，这些数据表明JAK1/2抑制剂鲁索替尼和mTOR抑制剂西罗莫司可能是一种有吸引力的方法，来防止CAR-T细胞诱导的细胞因子释放，同时不影响CAR-T细胞的功效。
实例12.mTOR抑制剂西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司以及JAK抑制剂鲁索替尼不防止CD19-TCB依赖性杀灭和T细胞活化，同时强烈地减少细胞因子释放。
使用另一种TCB CD19-TCB(SEQ ID NO 5、7-9、11、64-74、76-78、80)评估mTOR抑制剂西罗莫司、依维莫司和替西罗莫司以及JAK1/2抑制剂鲁索替尼对TCB诱导的T细胞细胞毒性、T细胞活化和细胞因子释放的影响。在存在不同激酶抑制剂，还包括Src抑制剂达沙替尼的情况下，将PBMC与CellTraceTM Violet(CTV)标记的SUDLH-8肿瘤细胞和浓度递增的CD19-TCB共同培养(图64)。在测定终点(24小时)，通过以存活/死亡染色排除死亡的SUDLH-8细胞，以流式细胞术测量CTV标记的SUDLH-8细胞的杀灭。在CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25和CD69的表达也通过流式细胞术测量作为T细胞活化的读数。最后，在测定的上清液中测量细胞因子的水平以评估mTOR、JAK和Src抑制剂对CD19-TCB诱导的细胞因子释放的影响。
结果，与Src抑制剂达沙替尼不同，mTOR和JAK抑制剂不能防止CD19-TCB依赖性SUDLH-8杀灭(图65A、图66)。与杀灭作用一致，与Src抑制剂达沙替尼相反，mTOR和JAK抑制剂不阻断CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25和CD69的表达(图65B-E、图67)。最后，JAK1/2抑制剂鲁索替尼防止了CD19-TCB诱导的IFN-γ、TNF-α、IL-6和GM-CSF的释放，并在较低程度上防止了IL-2的释放，而mTOR抑制剂则强烈降低所有四种细胞因子(图68)。
总体而言，mTOR、JAK和Src抑制剂的不同活性揭示了CD19-TCB诱导的T细胞细胞毒性和细胞因子释放的解偶联。此外，这些数据表明mTOR抑制剂西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司以及JAK1/2抑制剂鲁索替尼可减轻CD19-TCB诱导的细胞因子释放，同时并不防止肿瘤细胞杀灭和T细胞活化。Src抑制剂达沙替尼更可承担作为肿瘤外毒性或高级别CRS的解毒剂，其中需要关闭T细胞功能以阻止细胞因子的释放和杀灭。
实例13.对于CD19-TCB诱导的肿瘤细胞杀灭、T细胞活化和细胞因子释放，JAK抑制剂巴瑞替尼和托法替尼具有与鲁索替尼相当的影响。
为了比较JAK抑制剂巴瑞替尼和托法替尼与鲁索替尼对CD19-TCB诱导的T细胞毒性、T细胞活化和细胞因子释放的影响，在100nM鲁索替尼、100nM巴瑞替尼和100nM托法替尼存在下，将PBMC与CTV标记的SUDLH-8肿瘤细胞和浓度递增的CD19-TCB共同培养(图69)。在测定终点(24小时)，通过以存活/死亡染色排除死亡的SUDLH-8细胞，以流式细胞术测量CTV标记的SUDLH-8细胞的杀灭。在CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25和CD69的表达也通过流式细胞术测量作为T细胞活化的读数。最后，在测定的上清液中测量细胞因子的水平以评估JAK抑制剂对CD19-TCB诱导的细胞因子释放的影响。
与鲁索替尼类似，巴瑞替尼和托法替尼并不能防止CTV标记的SUDLH-8肿瘤细胞的CD19-TCB依赖性杀灭(图70)，也不能防止CD25和CD69在CD4+T细胞(图71A和B)和CD8+T细胞(图71C和D)上的表达。此外，JAK抑制剂巴瑞替尼和托法替尼可防止CD19-TCB诱导的IFN-γ、TNF-α、IL-6和GM-CSF释放，并在较低程度上防止IL-2释放(图72)，这与鲁索替尼相当。巴瑞替尼和托法替尼似乎与鲁索替尼一样有效，可防止CD19-TCB诱导的细胞因子释放，同时不阻断活体外T细胞活化和T细胞毒性。
最后，此实验表明，巴瑞替尼和托法替尼可代表两种另外的JAK抑制剂，用于减轻CD19-TCB诱导的细胞因子释放，作为鲁索替尼的替代品。
实例14.JAK抑制剂鲁索替尼、mTOR抑制剂西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司以及Src抑制剂达沙替尼与当前CRS缓解方法的比较。
为了验证JAK和mTOR抑制剂的使用是否与目前用于减轻TCB诱导的细胞因子释放的方法相当，我们比较了激酶抑制剂对于皮质类固醇地塞米松和对于活体外使用抗TNF-α抗体和抗IL-6R抗体的影响。因此，在mTOR、JAK和Src抑制剂以及地塞米松、抗TNF-α抗体(aTNF-α；Biolegend#502922(抗体Mab11))和抗IL-6R抗体(aIL-6R；Roche内部)存在下，将PBMC与CTV标记的SUDLH-8肿瘤细胞和浓度递增的CD19-TCB共同培养(图73)。在测定终点(24小时)，通过以存活/死亡染色排除死亡的SUDLH-8细胞，以流式细胞术测量CTV标记的SUDLH-8细胞的杀灭，以评估不同减轻方法对CD19-TCB依赖性杀灭的影响。然后，还通过流式细胞术测量CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25和CD69的表达，作为对T细胞活化影响的读数。最后，在测定的上清液中测量细胞因子的水平，以解决JAK抑制剂对CD19-TCB诱导的细胞因子释放的影响。
与地塞米松、抗TNF-α抗体和抗IL-6R抗体相比，mTOR抑制剂西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司，以及JAK1/2抑制剂鲁索替尼，不能阻止CTV SUDLH-8细胞的CD19-TCB依赖性杀灭，这与Src抑制剂达沙替尼并不同(图74)。此外，mTOR和JAK抑制剂以及地塞米松、抗TNF-α和抗IL-6R并不防止CD25(图75A和C、图76A和C)和CD69(图75B和D、图76B和D)在CD4+T细胞和CD8+T细胞上的表达，这与完全阻断T细胞活化的Src抑制剂达沙替尼相反。最后，mTOR抑制剂西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司以及JAK1/2抑制剂鲁索替尼对CD19-TCB诱导的IFN-γ和TNF-α的影响与地塞米松的影响相当(图77)。mTOR抑制剂对CD19-TCB诱导的IL-2和GM-CSF的影响与地塞米松的影响相当，但JAK1/2抑制剂鲁索替尼对这两种细胞因子的影响较弱(图77)。JAK和mTOR抑制剂降低CD19-TCB诱导的IFN-γ、IL-2、TNF-α和GM-CSF的影响强于抗IL-6R抗体的影响，该抗IL-6R抗体仅略微降低IFN-γ、IL-2、TNF-α和GM-CSF水平，或抗TNF-α抗体的影响，该抗体特异性降低TNF-α，并在较低程度上降低IFN-γ、IL-2和GM-CSF。最后，Src抑制剂达沙替尼显示完全抑制CD19-TCB诱导的细胞因子释放(图77)，与杀灭和T细胞活化的抑制相关。
总之，此实验表明，mTOR抑制剂西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司以及JAK1/2抑制剂鲁索替尼的影响与皮质类固醇地塞米松在减少CD19-TCB依赖性细胞因子释放的影响上相当，但并不防止T细胞的细胞毒性和T细胞活化。此外，显示mTOR抑制剂西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司以及JAK1/2抑制剂鲁索替尼对CD19-TCB诱导的细胞因子释放的影响强于阻断IL-6R和TNF-α。总的来说，该数据强调JAK和mTOR抑制剂可以代表对于使用抗IL-6R或抗TNF-α抗体甚至皮质类固醇的替代方法，用以减轻CD19-TCB诱导的细胞因子释放。
实例15.西罗莫司(作为示例性mTOR抑制剂)、鲁索替尼(作为示例性JAK抑制剂)和达沙替尼(作为示例性Src抑制剂)对于从预活化的效应细胞的CD19-TCB诱导的细胞因子释放的影响。
为了评估mTOR抑制剂西罗莫司、JAK1/2抑制剂鲁索替尼和Src抑制剂达沙替尼是否可防止由CD19-TCB处理所诱导的细胞因子的进一步释放，在活化24小时后将它们添加至活体外杀灭测定中(图78)。在此测定中，在剂量递增的CD19-TCB存在下将CTV标记的NALM-6肿瘤细胞与PBMC共同培养24小时。在24小时时，在系统中加入100nM鲁索替尼、100nM西罗莫司或100nM达沙替尼。为了验证在添加不同激酶抑制剂之前T细胞是否被活化，在24小时时测量了肿瘤细胞杀灭和细胞因子释放(图79和80)。最后，在48小时测量细胞因子释放和肿瘤细胞杀灭，以评估添加100nM鲁索替尼、100nM西罗莫司或100nM达沙替尼对CD19-TCB诱导的细胞因子释放的影响，作为与对杀灭的影响的比较。
在24小时时，以CD19-TCB处理导致CTV标记的NALM-6肿瘤细胞杀灭(图79)和IFN-γ(图80A)，TNF-α(图80B)、IL-2(图80C)和IL-6(图80D)的释放，表明T细胞在加入激酶抑制剂之前被活化。在48小时测量时，添加100nM鲁索替尼或100nM西罗莫司并不能防止CTV标记的NALM-6肿瘤细胞杀灭(图79)，而添加100nM达沙替尼适度降低对NALM-6肿瘤细胞的杀灭。然而，添加100nM西罗莫司或100nM达沙替尼防止在24小时和48小时之间IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-6的进一步释放(图80)，而添加100nM鲁索替尼仅防止IFN-γ、TNF-α和IL-6的进一步释放，并在较低程度上防止IL-2释放(图80)。
总体而言，该实验表明mTOR抑制剂西罗莫司和JAK1/2抑制剂鲁索替尼可快速阻止CD19-TCB诱导的细胞因子从预活化的效应细胞中释放，同时不影响CD19-TCB的功效。另一方面，Src抑制剂达沙替尼可快速关闭CD19-TCB诱导的细胞因子从预活化的效应细胞中释放，同时也降低CD19-TCB诱导的T细胞毒性。
实例16.JAK抑制剂鲁索替尼、Src抑制剂达沙替尼和mTOR抑制剂西罗莫司在人源化NSG小鼠中减少CD19-TCB诱导的细胞因子释放的影响与对于皮质类固醇地塞米松和甲基培尼皮质醇(methylprednisolone)的影响以及对于以奥比妥珠单抗(obinutuzumab)预处理的影响相当。
在活体内评估JAK1/2抑制剂鲁索替尼、mTOR抑制剂西罗莫司、Src抑制剂达沙替尼、以奥比妥珠单抗预处理以及皮质类固醇地塞米松和甲基培尼皮质醇对于CD19-TCB诱导的细胞因子释放与B耗竭的影响。因此，人源化NSG小鼠以奥比妥珠单抗预处理，然后以0.5mg/kg CD19-TCB处理，或是以0.5mg/kg CD19-TCB与(i)4x5mg/kg西罗莫司、(ii)6x30mg/kg鲁索替尼、(iii)6x50mg/kg达沙替尼、(iv)2x1mg/kg、1x0.5mg/kg和1x0.25mg/kg地塞米松、或(v)2x10mg/kg、1x5mg/kg和1x2.5mg/kg甲基培尼皮质醇共同处理(图81)。为了在临床中最好地重现鲁索替尼、达沙替尼和西罗莫司的药效学概貌并验证由此产生的暴露是否足以防止CD19-TCB诱导的细胞因子释放，给予达沙替尼和鲁索替尼每天口服两次，并给予西罗莫司第一天每天两次，然后每天一次。
在48小时和72小时，通过尾静脉抽血收集血液，并通过流式细胞术测量CD20+B细胞计数(图82A和B)，以评估不同处理对于CD19-TCB诱导的B细胞耗竭的影响。在48小时和72小时，以阿托珠单抗预处理(GpT)然后以CD19-TCB处理的作用导致B细胞完全耗竭，类似于单独使用CD19-TCB处理。另一方面，鲁索替尼(ruxo)和西罗莫司(siro)，类似于地塞米松(dexa)和甲基培尼皮质醇(MP)，略微防止B细胞耗竭，抑制作用比Src抑制剂达沙替尼(dasa)更轻微，不能完全防止CD19-TCB功效(图82A)。在72小时时，鲁索替尼和西罗莫司的影响与地塞米松的影响相当，但在防止B细胞耗竭方面似乎强于甲基培尼皮质醇(图82B)，这表明对于CD19-TCB活性抑制作用很小。在72小时后，达沙替尼不再完全阻断B细胞耗竭。它的半衰期约为6-7小时，而达沙替尼每天仅给予两次，缺乏暴露可能说明CD19-TCB部分活化，导致B细胞耗竭。在实验结束时(72小时)，收集脾脏并通过流式细胞术测量B细胞计数(图83)。与血液中的观察结果一致，鲁索替尼和西罗莫司仅部分防止CD19-TCB诱导的CD20+B细胞耗竭，与地塞米松相当。然而，它们的抑制作用强于甲基培尼皮质醇(图83)。在72小时时，达沙替尼不能防止脾脏中的CD20+B细胞耗竭，可能是由于缺乏暴露(图83)。正如预期，由于两种消耗抗体的双重活性，以奥比妥珠单抗/>预处理导致CD20+B细胞的完全消耗(图83)。
最后，在以CD19-TCB处理后6小时从血液中收集血清，并通过Luminex测量细胞因子水平以评估不同处理对CD19-TCB诱导的细胞因子释放的影响(图84)。西罗莫司、鲁索替尼、地塞米松和甲基培尼皮质醇对CD19-TCB诱导的IFN-γ(图84A)和IL-6释放(图84D)的影响与以奥比妥珠单抗预处理相当。西罗莫司、地塞米松和甲基培尼皮质醇对CD19-TCB诱导的IL-2(图84B)和TNF-α(图84C)的影响与以Gazyva预处理相当。然而，鲁索替尼在降低IL-2和TNF-α方面的影响似乎稍弱。总体而言，发现mTOR和JAK抑制剂对于减少CD19-TCB诱导的细胞因子释放方面的影响与皮质类固醇地塞米松和甲基培尼皮质醇的影响以及以奥比妥珠单抗/>预处理的影响相当，而鲁索替尼对IL-2和TNF-α释放的影响较温和。
与活体外研究结果一致，鲁索替尼或西罗莫司与CD19-TCB的共同处理允许在NSG人源化小鼠中控制CD19-TCB诱导的细胞因子释放，同时不能完全防止B细胞耗竭，类似于地塞米松和甲基培尼皮质醇。此外，鲁索替尼、西罗莫司、地塞米松和甲基培尼皮质醇在防止CD19-TCB诱导的细胞因子释放方面的作用与以奥比妥珠单抗预处理相当，尽管后者诱导了更强的B细胞耗竭。
实例17.JAK抑制剂费拉替尼防止CEA-TCB介导的细胞因子释放，同时对TCB介导的靶细胞杀灭影响最小。
为了评估另一种JAK抑制剂费拉替尼对TCB介导的靶细胞杀灭、T细胞活化和细胞因子释放的影响，我们在补充有浓度递增的费拉替尼的培养基中使用周边血液单核细胞(PBMC)、NucLight Red(NLR)MKN45肿瘤细胞和10nM CEA-TCB进行杀灭测定。system(Essen Bioscience)用于捕获随时间丢失的红色萤光蛋白信号，作为靶细胞杀灭的读数。范围从12.5nM至1μM剂量的费拉替尼仅部分降低10nM CEA-TCB对MKN45 NLR靶细胞的杀灭，低于1μM的剂量仅有很小的影响(图85)。
在测定终点(72小时)，通过流式细胞术测量活的CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25和CD69的表达，作为T细胞活化的读数。费拉替尼在低于1μM的浓度下不影响CD4+T细胞(图86A、B)和CD8+T细胞(图86C、D)上CD69和CD25的表达。
通过Luminex在测定的上清液中测量细胞因子的水平，以确定费拉替尼对CEA-TCB诱导的细胞因子释放的影响。在存在50nM至1μM浓度的费拉替尼时，IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-6和IL-8的水平降低(图87)。
总体而言，此数据表明，费拉替尼减少了CEA-TCB诱导的细胞因子释放，同时不防止T细胞的细胞毒性和T细胞活化。
实例18.mTOR和JAK抑制剂并不抑制携带淋巴瘤PDX小鼠中的CD19-TCB抗肿瘤活性。
为了评估mTOR和JAK抑制相较于Src抑制、地塞米松或奥比妥珠单抗(GpT)预处理对CD19-TCB抗肿瘤活性的影响，我们在人源化NSG小鼠中使用来源于淋巴瘤患者的异种移植(PDX)模型。首先，我们使用杀灭测定验证了PDX细胞在活体外以CD19-TCB处理时是否被杀灭。在CD19-TCB存在下，将淋巴瘤PDX细胞与PBMC(E:T＝10:1)共同培养。CD19-TCB在活体外(图88A)有效去除淋巴瘤PDX细胞，导致T细胞活化，如CD4+T细胞和CD8+T细胞上CD25和CD69的表达所示(图88B-E)。然后，将携带PDX的小鼠单独以载体、西罗莫司(5mg/kg)、鲁索替尼(30mg/kg)、达沙替尼(20mg/kg)、地塞米松(2次1mg/kg、0.5mg/kg、4次0.25mg/kg)或与CD19-TCB(0.5mg/kg)、CD19-TCB(0.5mg/kg)组合作为单一疗法或与奥比妥珠单抗预处理(GpT)(30mg/kg)组合。在第一次以CD19-TCB处理前一小时给予不同的激酶抑制剂和地塞米松，然后每天一次或两次，持续三天以抑制细胞因子释放，主要发生在第一次输注时(图89)。此外，还在每次随后的处理前一小时施用，以防止残留的细胞因子分泌(图89)。地塞米松和西罗莫司二者作为单一药剂给予，均诱导肿瘤生长降低，但不显著(图90和93)。当与CD19-TCB组合时，产生的抗肿瘤活性与单独的CD19-TCB相当，但西罗莫司和地塞米松在第一次输注时抑制了IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-6的释放(图90、93和94)。类似地，与鲁索替尼共同处理对CD19-TCB抗肿瘤活性的干扰最小，并降低了IL-6，并在较低程度上降低了IFN-γ、TNF-α和IL-2的释放(图91和94)。鲁索替尼、西罗莫司和地塞米松对细胞因子水平的影响似乎强于奥比妥珠单抗预处理的影响，而它们对抗肿瘤效果的影响相似(图90、91、93和94)。此外，达沙替尼在第一次输注时并未显著抑制CD19-TCB抗肿瘤功效，同时强烈降低T细胞衍生的细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-6)。这表明在本实验中短暂使用达沙替尼并没有持续阻断CD19-TCB诱导的T细胞毒性，因为达沙替尼的抑制作用是可逆的(图92和94)。
综上所述，此数据显示，短暂使用JAK抑制剂鲁索替尼和mTOR抑制剂西罗莫司不会损害抗肿瘤功效，同时在第一次输注CD19-TCB时抑制T细胞介导的细胞因子释放，支持将这些化合物用于减少与TCB相关的CRS。
实例19.鲁索替尼(JAK1/2抑制剂)、mTOR抑制剂(西罗莫司、依维莫司、替西罗莫司)和达沙替尼(Src抑制剂)在非肿瘤人源化NSG小鼠中对CD20-TCB诱导的细胞因子释放和B细胞耗竭的影响。
在此实验中，我们验证了活体内小分子激酶抑制剂的短PK/PD特性与CD20-TCB的长PK/PD特性的组合是否有在人源化NSG小鼠中效地关闭细胞因子的释放。此外，我们还通过测量周边血液中的CD19+B细胞，评估JAK和mTOR抑制剂相较于Src抑制剂达沙替尼在CD20-TCB介导的B细胞耗竭上的影响。
将人源化NSG小鼠单独以0.15mg/kg CD20-TCB处理，或与mTOR抑制剂(西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司)、JAK抑制剂(鲁索替尼)、Src抑制剂(达沙替尼)组合处理，或以奥比妥珠单抗预处理，如图95所述。测试不同剂量的mTOR、JAK和Src激酶抑制剂，以确定减少CD20-TCB诱导的细胞因子释放同时最小程度地干扰B细胞耗竭的最佳剂量。测试了西罗莫司2、5和10mg/kg的剂量，其他mTOR抑制剂替西罗莫司和依维莫司仅使用最高剂量10mg/kg。对鲁索替尼测试了30和60mg/kg的剂量，对达沙替尼测试了10和50mg/kg的剂量。为了重现临床施用途径，每天口服(p.o.)给予一次或两次不同的激酶抑制剂，如图95中所示。在以CD20-TCB处理后4小时和24小时，对小鼠进行抽血(图95)，以收集血清用于通过Luminex测量细胞因子水平。此外，在以CD20-TCB处理后48小时和72小时(终止)收集血液，以通过流式细胞术测量CD19+B细胞在人类CD45+细胞中的百分比(图95)。
因此，与2、5、10mg/kg的西罗莫司、10mg/kg的依维莫司或10mg/kg的替西罗莫司(mTOR抑制剂)共同处理不会干扰CD20-TCB诱导的B细胞耗竭，如周边血液中人类CD45+细胞中CD19+B细胞的百分比所示(图96A-C)。然而，mTOR抑制剂可持久降低CD20-TCB诱导的细胞因子释放，如IFN-γ(图97A、B)、IL-2(图98A、B)、TNF-α(图99A、B)、IL-6(图100A、B)、IP-10(图101A、B)、MCP-1(图102A、B)、IL-8(图103A、B)和GM-CSF(图104A、B)的含量所示。此外，在此模型中，通过mTOR抑制剂对细胞因子释放的降低与达沙替尼和奥比妥珠单抗预处理相当(图97-104)。总体而言，mTOR抑制剂强烈降低CD20-TCB介导的细胞因子释放，同时在2至10mg/kg的剂量范围内保持B细胞耗竭，这与关闭TCB活性长达48小时的Src抑制剂达沙替尼不同。
与30和50mg/kg的鲁索替尼(JAK1/2抑制剂)共同处理轻微干扰了CD20-TCB诱导的B细胞耗竭，如周边血液中人类CD45+细胞中CD19+B细胞的百分比所示(图96A-C)。对B细胞耗竭的抑制作用似乎取决于鲁索替尼的剂量。此外，鲁索替尼持久地降低了CD20-TCB介导的细胞因子释放，除了IL-2和GM-CSF释放，如IFN-γ(图97A、B)、IL-2(图98A、B)、TNF-α(图99A、B)、IL-6(图100A、B)、IP-10(图101A、B)、MCP-1(图102A、B)、IL-8(图103A、B)和GM-CSF(图104A、B)的水平所示。总体而言，与JAK1/2抑制剂鲁索替尼共同处理降低了CD20-TCB介导的细胞因子释放，但IL-2和GM-CSF除外，同时在30至60mg/kg的剂量范围内最低限度地防止B细胞耗竭，不像Src抑制剂达沙替尼完全关闭TCB活性长达48小时。
总之，此数据显示mTOR和JAK抑制剂与CD20-TCB的组合降低了人源化NSG中细胞因子的释放，与活体外观察结果一致。与Src抑制剂达沙替尼相比，JAK抑制剂(鲁索替尼)和mTOR抑制剂(西罗莫司、依维莫司和替西罗莫司)对CD20-TCB介导的B细胞耗竭的干扰最小。这表明它们可代表一种可行的方法，可在第一次输注CD20-TCB时防止细胞因子释放，同时保持抗肿瘤功效。
***
尽管为了清楚理解起见，通过图示和实例的方式对上述发明进行了详细描述，但是这些描述和实例不应被解释为限制本发明的范围。本文引用的所有专利和科学文献的公开内容均通过援引以其全文明确并入本文中。
序列表
<110> 豪夫迈·罗氏有限公司
<120> 预防或减轻与 T 细胞接合剂相关的不良反应
<130> P36507
<150> EP20206567.8
<151> 2020-11-10
<150> EP21155823.4
<151> 2021-02-08
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<150> EP21187472.2
<151> 2021-07-23
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 22
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 22
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys
210
<210> 23
<211> 694
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Phe Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu
225 230 235 240
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
245 250 255
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val
260 265 270
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser
275 280 285
Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
290 295 300
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
305 310 315 320
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His
325 330 335
Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
340 345 350
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
355 360 365
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
370 375 380
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
385 390 395 400
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
405 410 415
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
420 425 430
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
435 440 445
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
450 455 460
Gly Glu Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
465 470 475 480
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
485 490 495
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
500 505 510
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
515 520 525
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
530 535 540
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
545 550 555 560
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly
565 570 575
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
580 585 590
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
595 600 605
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
610 615 620
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
625 630 635 640
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
645 650 655
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
660 665 670
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
675 680 685
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
690
<210> 24
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 24
Tyr Ser Trp Ile Asn
1 5
<210> 25
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 25
Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 26
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 26
Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr
1 5 10
<210> 27
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 27
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 28
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 28
Gln Met Ser Asn Leu Val Ser
1 5
<210> 29
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 29
Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 30
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 31
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 31
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 32
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 32
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg
115 120 125
Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 33
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 33
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
<210> 34
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 34
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val
115 120 125
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
130 135 140
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
195 200 205
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
210 215 220
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 35
<211> 672
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 35
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu
225 230 235 240
Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly
245 250 255
Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln
260 265 270
Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys
275 280 285
Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly
290 295 300
Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly
325 330 335
Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
340 345 350
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
355 360 365
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
370 375 380
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
385 390 395 400
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
405 410 415
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
420 425 430
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
435 440 445
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
450 455 460
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
465 470 475 480
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
485 490 495
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
500 505 510
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
515 520 525
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
530 535 540
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu
545 550 555 560
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
565 570 575
Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
580 585 590
Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
595 600 605
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
610 615 620
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
625 630 635 640
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
645 650 655
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
660 665 670
<210> 36
<211> 297
<212> PRT
<213> 智人
<400> 36
Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Val Asn Gly Thr Phe Pro Ala Glu Pro
1 5 10 15
Met Lys Gly Pro Ile Ala Met Gln Ser Gly Pro Lys Pro Leu Phe Arg
20 25 30
Arg Met Ser Ser Leu Val Gly Pro Thr Gln Ser Phe Phe Met Arg Glu
35 40 45
Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile
50 55 60
Ala Leu Gly Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Gly Ile Tyr Ala Pro Ile
65 70 75 80
Cys Val Thr Val Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Tyr Ile Ile
85 90 95
Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Thr Glu Lys Asn Ser Arg Lys Cys Leu
100 105 110
Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile
115 120 125
Ser Gly Met Ile Leu Ser Ile Met Asp Ile Leu Asn Ile Lys Ile Ser
130 135 140
His Phe Leu Lys Met Glu Ser Leu Asn Phe Ile Arg Ala His Thr Pro
145 150 155 160
Tyr Ile Asn Ile Tyr Asn Cys Glu Pro Ala Asn Pro Ser Glu Lys Asn
165 170 175
Ser Pro Ser Thr Gln Tyr Cys Tyr Ser Ile Gln Ser Leu Phe Leu Gly
180 185 190
Ile Leu Ser Val Met Leu Ile Phe Ala Phe Phe Gln Glu Leu Val Ile
195 200 205
Ala Gly Ile Val Glu Asn Glu Trp Lys Arg Thr Cys Ser Arg Pro Lys
210 215 220
Ser Asn Ile Val Leu Leu Ser Ala Glu Glu Lys Lys Glu Gln Thr Ile
225 230 235 240
Glu Ile Lys Glu Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Thr Ser Ser Gln Pro
245 250 255
Lys Asn Glu Glu Asp Ile Glu Ile Ile Pro Ile Gln Glu Glu Glu Glu
260 265 270
Glu Glu Thr Glu Thr Asn Phe Pro Glu Pro Pro Gln Asp Gln Glu Ser
275 280 285
Ser Pro Ile Glu Asn Asp Ser Ser Pro
290 295
<210> 37
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 37
Gly Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 38
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 38
Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 39
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 39
Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 40
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 41
Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 42
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 43
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp
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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 45
Lys Ala Met Ser
1
<210> 46
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 46
Ser Ile Ser Pro Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Asp Asn Val Leu
1 5 10 15
Gly
<210> 47
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 47
Asp Val Gly Phe Phe Asp Glu
1 5
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 48
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
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<211> 7
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 49
Asp Ala Ser Ile Arg Asp Ile
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 50
Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 51
Ala Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ala Tyr Phe Ser Phe Lys Ala Met
20 25 30
Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Ser
35 40 45
Ile Ser Pro Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Asp Asn Val Leu Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85 90 95
Asp Val Gly Phe Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 52
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 52
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ile Arg Asp Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 53
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 53
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ile Arg Asp Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 54
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 54
Ala Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ala Tyr Phe Ser Phe Lys Ala Met
20 25 30
Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Ser
35 40 45
Ile Ser Pro Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Asp Asn Val Leu Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85 90 95
Asp Val Gly Phe Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340 345 350
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440
<210> 55
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 55
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro
115 120 125
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
130 135 140
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
145 150 155 160
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
165 170 175
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
195 200 205
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
210 215 220
Asn Arg Gly Glu Cys
225
<210> 56
<211> 665
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 56
Ala Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ala Tyr Phe Ser Phe Lys Ala Met
20 25 30
Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Ser
35 40 45
Ile Ser Pro Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Asp Asn Val Leu Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85 90 95
Asp Val Gly Phe Phe Asp Glu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
225 230 235 240
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp
245 250 255
Ile Arg Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
260 265 270
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
275 280 285
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser
290 295 300
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn
305 310 315 320
Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser
325 330 335
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
340 345 350
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
355 360 365
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
370 375 380
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
405 410 415
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
420 425 430
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
435 440 445
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
450 455 460
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
465 470 475 480
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
485 490 495
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
500 505 510
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
515 520 525
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
530 535 540
Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
545 550 555 560
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp
565 570 575
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
580 585 590
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
595 600 605
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
610 615 620
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
625 630 635 640
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
645 650 655
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
660 665
<210> 57
<211> 317
<212> PRT
<213> 智人
<400> 57
Met Ser Ser Glu Gln Lys Ser Gln His Cys Lys Pro Glu Glu Gly Val
1 5 10 15
Glu Ala Gln Glu Glu Ala Leu Gly Leu Val Gly Ala Gln Ala Pro Thr
20 25 30
Thr Glu Glu Gln Glu Ala Ala Val Ser Ser Ser Ser Pro Leu Val Pro
35 40 45
Gly Thr Leu Glu Glu Val Pro Ala Ala Glu Ser Ala Gly Pro Pro Gln
50 55 60
Ser Pro Gln Gly Ala Ser Ala Leu Pro Thr Thr Ile Ser Phe Thr Cys
65 70 75 80
Trp Arg Gln Pro Asn Glu Gly Ser Ser Ser Gln Glu Glu Glu Gly Pro
85 90 95
Ser Thr Ser Pro Asp Ala Glu Ser Leu Phe Arg Glu Ala Leu Ser Asn
100 105 110
Lys Val Asp Glu Leu Ala His Phe Leu Leu Arg Lys Tyr Arg Ala Lys
115 120 125
Glu Leu Val Thr Lys Ala Glu Met Leu Glu Arg Val Ile Lys Asn Tyr
130 135 140
Lys Arg Cys Phe Pro Val Ile Phe Gly Lys Ala Ser Glu Ser Leu Lys
145 150 155 160
Met Ile Phe Gly Ile Asp Val Lys Glu Val Asp Pro Ala Ser Asn Thr
165 170 175
Tyr Thr Leu Val Thr Cys Leu Gly Leu Ser Tyr Asp Gly Leu Leu Gly
180 185 190
Asn Asn Gln Ile Phe Pro Lys Thr Gly Leu Leu Ile Ile Val Leu Gly
195 200 205
Thr Ile Ala Met Glu Gly Asp Ser Ala Ser Glu Glu Glu Ile Trp Glu
210 215 220
Glu Leu Gly Val Met Gly Val Tyr Asp Gly Arg Glu His Thr Val Tyr
225 230 235 240
Gly Glu Pro Arg Lys Leu Leu Thr Gln Asp Trp Val Gln Glu Asn Tyr
245 250 255
Leu Glu Tyr Arg Gln Val Pro Gly Ser Asn Pro Ala Arg Tyr Glu Phe
260 265 270
Leu Trp Gly Pro Arg Ala Leu Ala Glu Thr Ser Tyr Val Lys Val Leu
275 280 285
Glu His Val Val Arg Val Asn Ala Arg Val Arg Ile Ala Tyr Pro Ser
290 295 300
Leu Arg Glu Ala Ala Leu Leu Glu Glu Glu Glu Gly Val
305 310 315
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 58
Gly Val Tyr Asp Gly Arg Glu His Thr Val
1 5 10
<210> 59
<211> 275
<212> PRT
<213> 智人
<400> 59
Gly Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Phe Thr Ser Val Ser Arg Pro Gly
1 5 10 15
Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala Val Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln
20 25 30
Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ala Ala Ser Gln Arg Met Glu Pro Arg
35 40 45
Ala Pro Trp Ile Glu Gln Glu Gly Pro Glu Tyr Trp Asp Gly Glu Thr
50 55 60
Arg Lys Val Lys Ala His Ser Gln Thr His Arg Val Asp Leu Gly Thr
65 70 75 80
Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly Ser His Thr Val Gln
85 90 95
Arg Met Tyr Gly Cys Asp Val Gly Ser Asp Trp Arg Phe Leu Arg Gly
100 105 110
Tyr His Gln Tyr Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Ile Ala Leu Lys Glu
115 120 125
Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp Met Ala Ala Gln Thr Thr Lys
130 135 140
His Lys Trp Glu Ala Ala His Val Ala Glu Gln Leu Arg Ala Tyr Leu
145 150 155 160
Glu Gly Thr Cys Val Glu Trp Leu Arg Arg Tyr Leu Glu Asn Gly Lys
165 170 175
Glu Thr Leu Gln Arg Thr Asp Ala Pro Lys Thr His Met Thr His His
180 185 190
Ala Val Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Ser Phe
195 200 205
Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Arg Asp Gly Glu Asp Gln
210 215 220
Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly Thr
225 230 235 240
Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser Gly Gln Glu Gln Arg
245 250 255
Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro Lys Pro Leu Thr Leu
260 265 270
Arg Trp Glu
275
<210> 60
<211> 556
<212> PRT
<213> 智人
<400> 60
Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Leu Thr Pro Met
1 5 10 15
Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp
20 25 30
Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln
35 40 45
Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile
65 70 75 80
Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu
85 90 95
Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr
100 105 110
Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp
115 120 125
Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro
130 135 140
Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala
145 150 155 160
Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro
165 170 175
Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro
180 185 190
Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser
195 200 205
Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser
210 215 220
Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp
225 230 235 240
Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala
245 250 255
Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu
260 265 270
Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly
275 280 285
Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu
290 295 300
Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg
305 310 315 320
Arg Lys Arg Lys Arg Met Thr Asp Pro Thr Arg Arg Phe Phe Lys Val
325 330 335
Thr Pro Pro Pro Gly Ser Gly Pro Gln Asn Gln Tyr Gly Asn Val Leu
340 345 350
Ser Leu Pro Thr Pro Thr Ser Gly Leu Gly Arg Ala Gln Arg Trp Ala
355 360 365
Ala Gly Leu Gly Gly Thr Ala Pro Ser Tyr Gly Asn Pro Ser Ser Asp
370 375 380
Val Gln Ala Asp Gly Ala Leu Gly Ser Arg Ser Pro Pro Gly Val Gly
385 390 395 400
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Glu Gly Tyr Glu Glu Pro Asp Ser Glu Glu
405 410 415
Asp Ser Glu Phe Tyr Glu Asn Asp Ser Asn Leu Gly Gln Asp Gln Leu
420 425 430
Ser Gln Asp Gly Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Glu Pro Leu Gly
435 440 445
Pro Glu Asp Glu Asp Ser Phe Ser Asn Ala Glu Ser Tyr Glu Asn Glu
450 455 460
Asp Glu Glu Leu Thr Gln Pro Val Ala Arg Thr Met Asp Phe Leu Ser
465 470 475 480
Pro His Gly Ser Ala Trp Asp Pro Ser Arg Glu Ala Thr Ser Leu Gly
485 490 495
Ser Gln Ser Tyr Glu Asp Met Arg Gly Ile Leu Tyr Ala Ala Pro Gln
500 505 510
Leu Arg Ser Ile Arg Gly Gln Pro Gly Pro Asn His Glu Glu Asp Ala
515 520 525
Asp Ser Tyr Glu Asn Met Asp Asn Pro Asp Gly Pro Asp Pro Ala Trp
530 535 540
Gly Gly Gly Gly Arg Met Gly Thr Trp Ser Thr Arg
545 550 555
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 61
Ser Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 62
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 62
His Thr Thr Phe Pro Ser Ser Tyr Val Ser Tyr Tyr Gly Tyr
1 5 10
<210> 63
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 63
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Gln Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Thr Thr Phe Pro Ser Ser Tyr Val Ser Tyr Tyr
100 105 110
Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 64
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 64
Ser Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 65
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 65
Ala Ser Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 66
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 66
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 67
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 67
Asp Tyr Ile Met His
1 5
<210> 68
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 68
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 69
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 69
Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 70
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 70
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 71
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 71
Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser
1 5
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 72
Leu Gln Leu Leu Glu Asp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 73
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 73
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 74
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 74
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30
Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95
Leu Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 75
<211> 674
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 75
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr
225 230 235 240
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
245 250 255
Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp
260 265 270
Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
275 280 285
Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
290 295 300
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu
305 310 315 320
Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
325 330 335
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
340 345 350
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
355 360 365
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
370 375 380
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
385 390 395 400
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
405 410 415
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
420 425 430
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
435 440 445
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
450 455 460
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
465 470 475 480
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
485 490 495
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
500 505 510
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
515 520 525
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
530 535 540
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro
545 550 555 560
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
565 570 575
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
580 585 590
Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
595 600 605
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
610 615 620
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
625 630 635 640
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
645 650 655
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
660 665 670
Ser Pro
<210> 76
<211> 674
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 76
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gln Ala Val Val Thr
225 230 235 240
Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
245 250 255
Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp
260 265 270
Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
275 280 285
Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
290 295 300
Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu
305 310 315 320
Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
325 330 335
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
340 345 350
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
355 360 365
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
370 375 380
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
385 390 395 400
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
405 410 415
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
420 425 430
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
435 440 445
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
450 455 460
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
465 470 475 480
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
485 490 495
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
500 505 510
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
515 520 525
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
530 535 540
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro
545 550 555 560
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
565 570 575
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
580 585 590
Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
595 600 605
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
610 615 620
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
625 630 635 640
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
645 650 655
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
660 665 670
Ser Pro
<210> 77
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 77
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro
<210> 78
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 78
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30
Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95
Leu Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg
115 120 125
Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 79
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 79
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Gln Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Thr Thr Phe Pro Ser Ser Tyr Val Ser Tyr Tyr
100 105 110
Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val
115 120 125
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
130 135 140
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
195 200 205
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
210 215 220
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 80
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 80
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg Ala Ser Asn Phe Pro Ala Ser Tyr Val Ser Tyr Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val
115 120 125
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
130 135 140
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
195 200 205
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
210 215 220
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
Claims (56)
1.一种用于在治疗个体中的疾病中使用的T细胞接合剂，其中所述治疗包括
(a)向所述个体施用所述T细胞接合剂，以及
(b)向所述个体施用Janus激酶(JAK)和/或哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号传导的抑制剂。
2.T细胞接合剂在制造用于治疗个体中的疾病的药物中的用途，其中所述治疗包括
(a)向所述个体施用所述T细胞接合剂，以及
(b)向所述个体施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。
3.一种用于治疗个体中的疾病的方法，其中所述方法包括
(a)向所述个体施用T细胞接合剂，以及
(b)向所述个体施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的T细胞接合剂、用途或方法，其中所述施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂是用于预防或减轻与所述施用T细胞接合剂相关的不良反应。
5.一种JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂，其用于预防或减轻与向个体施用T细胞接合剂相关的不良反应。
6.JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂在制造用于预防或减轻与施用T细胞接合剂相关的不良反应的药物中的用途。
7.一种用于预防或减轻与向个体施用T细胞接合剂相关的不良反应的方法，所述方法包括向所述个体施用JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。
8.根据前述权利要求中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为mTOR抑制剂，任选地选自由西罗莫司、替西罗莫司和依维莫司组成的组。
9.根据前述权利要求中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂为JAK抑制剂，任选地为JAK1和/或JAK2抑制剂，任选地为鲁索替尼、巴瑞替尼、托法替尼或菲卓替尼。
10.根据前述权利要求中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中(施用)所述JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂引起抑制与所述施用T细胞接合剂相关的不良反应。
11.根据前述权利要求中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中(施用)所述JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂不引起抑制与所述施用T细胞接合剂相关的期望的反应。
12.根据权利要求10或11所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述抑制为完全抑制，或临床上有意义和/或统计学上显著的抑制。
13.根据权利要求4至12中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述不良反应为
(i)细胞因子释放综合征(CRS)；
(ii)发烧、低血压和/或缺氧；和/或
(iii)一种或多种细胞因子，特别是选自由IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α、GM-CSF、MCP-1和IL-1β组成的组的一种或多种细胞因子的血清水平升高。
14.根据权利要求4至13中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中在(所述个体中)所述不良反应(临床上)显现时施用所述JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂。
15.根据前述权利要求中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中施用所述JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂是
(i)在所述施用T细胞接合剂之前、同时或之后；
(ii)间歇性或连续性地；和/或
(iii)口服或肠胃外施用，特别是静脉内施用。
16.根据前述权利要求中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中施用所述JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂与所述T细胞接合剂的第一次施用相关联，并且任选地是在所述T细胞接合剂的所述第一次施用之前、同时或之后。
17.根据前述权利要求中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述施用T细胞接合剂是
(i)以有效剂量施用；
(ii)肠胃外施用，特别是静脉内施用；和/或
(iii)向所述个体第一次施用所述T细胞接合剂。
18.根据前述权利要求中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞接合剂为T细胞双特异性抗体或CAR-T细胞。
19.根据权利要求18所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体结合至CD3和靶细胞抗原。
20.根据权利要求18或19所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含结合至CD3的抗原结合部分以及结合至靶细胞抗原的抗原结合部分。
21.根据权利要求19或20中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述靶细胞抗原为癌胚抗原(CEA)。
22.根据权利要求21所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含
(i)第一抗原结合部分，其结合至CD3且包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:6的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3；以及
(ii)第二抗原结合部分，其结合至CEA且包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:12的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:13的HCDR2和SEQ ID NO:14的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:15的轻链CDR(LCDR)1、SEQID NO:16的LCDR2和SEQ ID NO:17的LCDR3。
23.根据权利要求21或22所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含结合至CEA的第三抗原结合部分和/或由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域。
24.根据权利要求21至23中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含
(i)结合至CD3的第一抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:6的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3，其中所述第一抗原结合部分为交叉Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区或恒定区发生交换；
(ii)结合至CEA的第二抗原结合部分和第三抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:
12的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:13的HCDR2和SEQID NO:14的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:15的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:16的LCDR2和SEQ ID NO:
17的LCDR3；其中所述第二抗原结合部分和所述第三抗原结合部分各自为Fab分子，特别是常规Fab分子；
(iii)Fc结构域，其由第一亚基和第二亚基构成，
其中所述第二抗原结合部分在Fab重链的C末端处融合至所述第一抗原结合部分的所述Fab重链的N末端，并且所述第一抗原结合部分在所述Fab重链的C末端处融合至所述Fc结构域的所述第一亚基的N末端，并且其中所述第三抗原结合部分在Fab重链的C末端处融合至所述Fc结构域的所述第二亚基的N末端。
25.根据权利要求21至24中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体的所述第一抗原结合部分包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链可变区序列，以及与SEQ ID NO:11的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的轻链可变区序列，并且/或者所述T细胞双特异性抗体的所述第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链可变区序列，以及与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的轻链可变区序列。
26.根据权利要求23至25中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体的所述Fc结构域包含促进所述Fc结构域的所述第一亚基和所述第二亚基的缔合的修饰，并且/或者所述Fc结构域包含减少与Fc受体的结合和/或降低效应子功能的一个或多个氨基酸取代。
27.根据权利要求18至26中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体为赛必妥单抗。
28.根据权利要求19或20所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述靶细胞抗原为CD20。
29.根据权利要求28所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含
(i)第一抗原结合部分，其结合至CD3且包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:6的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3；以及
(ii)第二抗原结合部分，其结合至CD20且包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:24的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:25的HCDR2和SEQ ID NO:26的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:27的轻链CDR(LCDR)1、SEQID NO:28的LCDR2和SEQID NO:29的LCDR3。
30.根据权利要求28或29所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含结合至CD20的第三抗原结合部分和/或由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域。
31.根据权利要求28至30中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含
(i)结合至CD3的第一抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:6的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3，其中所述第一抗原结合部分为交叉Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区或恒定区发生交换；
(ii)结合至CD20的第二抗原结合部分和第三抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:24的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:25的HCDR2和SEQID NO:26的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:27的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:28的LCDR2和SEQ ID NO:29的LCDR3，其中所述第二抗原结合部分和所述第三抗原结合部分各自为Fab分子，特别是常规Fab分子；
(iii)Fc结构域，其由第一亚基和第二亚基构成，
其中所述第二抗原结合部分在Fab重链的C末端处融合至所述第一抗原结合部分的所述Fab重链的N末端，并且所述第一抗原结合部分在所述Fab重链的C末端处融合至所述Fc结构域的所述第一亚基的N末端，并且其中所述第三抗原结合部分在Fab重链的C末端处融合至所述Fc结构域的所述第二亚基的N末端。
32.根据权利要求28至31中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体的所述第一抗原结合部分包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链可变区序列，以及与SEQ ID NO:11的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的轻链可变区序列，并且/或者所述T细胞双特异性抗体的所述第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链可变区序列，以及与SEQ ID NO:31的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的轻链可变区序列。
33.根据权利要求28至32中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体的所述第一抗原结合部分为交叉Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区发生交换，并且其中所述T细胞双特异性抗体的所述第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分为常规Fab分子，其中在恒定结构域CL中，位置124处的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)，且位置123处的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)，并且在恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)，且位置213处的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)。
34.根据权利要求30至33中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体的所述Fc结构域包含促进所述Fc结构域的所述第一亚基和所述第二亚基的缔合的修饰，并且/或者所述Fc结构域包含减少与Fc受体的结合和/或降低效应子功能的一个或多个氨基酸取代。
35.根据权利要求18至20和28至34中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体为格菲妥单抗。
36.根据权利要求19或20所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述靶细胞抗原为HLA-A2/MAGE-A4。
37.根据权利要求36所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含
(i)第一抗原结合部分，其结合至CD3且包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:37的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:38的HCDR2和SEQ ID NO:39的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:40的轻链CDR(LCDR)1、SEQID NO:41的LCDR2和SEQ ID NO:42的LCDR3；以及
(ii)第二抗原结合部分，其结合至HLA-A2/MAGE-A4且包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:45的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:46的HCDR2和SEQ IDNO:47的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:48的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:49的LCDR2和SEQ ID NO:50的LCDR3。
38.根据权利要求36或37所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含结合至HLA-A2/MAGE-A4的第三抗原结合部分和/或由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域。
39.根据权利要求36至38中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含
(i)结合至CD3的第一抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:37的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:38的HCDR2和SEQ ID NO:39的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:40的轻链CDR(LCDR)1、SEQID NO:41的LCDR2和SEQ ID NO:42的LCDR3，其中所述第一抗原结合部分为交叉Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区或恒定区发生交换；
(ii)结合至HLA-A2/MAGE-A4的第二抗原结合部分和第三抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:45的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:46的HCDR2和SEQ ID NO:47的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:48的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:49的LCDR2和SEQ ID NO:50的LCDR3，其中所述第二抗原结合部分和所述第三抗原结合部分各自为Fab分子，特别是常规Fab分子；
(iii)Fc结构域，其由第一亚基和第二亚基构成，
其中所述第二抗原结合部分在Fab重链的C末端处融合至所述第一抗原结合部分的所述Fab重链的N末端，并且所述第一抗原结合部分在所述Fab重链的C末端处融合至所述Fc结构域的所述第一亚基的N末端，并且其中所述第三抗原结合部分在Fab重链的C末端处融合至所述Fc结构域的所述第二亚基的N末端。
40.根据权利要求36至39中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体的所述第一抗原结合部分包含与SEQ ID NO:43的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链可变区序列，以及与SEQ ID NO:44的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的轻链可变区序列，并且/或者所述T细胞双特异性抗体的所述第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链可变区序列，以及与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的轻链可变区序列。
41.根据权利要求36至40中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体的所述第一抗原结合部分为交叉Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区发生交换，并且其中所述T细胞双特异性抗体的所述第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分为常规Fab分子，其中在恒定结构域CL中，位置124处的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)，且位置123处的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)，并且在恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)，且位置213处的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)。
42.根据权利要求38至41中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体的所述Fc结构域包含促进所述Fc结构域的所述第一亚基和所述第二亚基的缔合的修饰，并且/或者所述Fc结构域包含减少与Fc受体的结合和/或降低效应子功能的一个或多个氨基酸取代。
43.根据权利要求19或20所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述靶细胞抗原为CD19。
44.根据权利要求43所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含
(i)第一抗原结合部分，其结合至CD3且包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:61的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:62的HCDR3，或所述重链可变区包含SEQ ID NO:64的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:65的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3；以及
(ii)第二抗原结合部分，其结合至CD19且包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:67的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:68的HCDR2和SEQ ID NO:69的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:70的轻链CDR(LCDR)1、SEQID NO:71的LCDR2和SEQID NO:72的LCDR3。
45.根据权利要求43或44所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含结合至CD19的第三抗原结合部分和/或由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域。
46.根据权利要求43至45中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体包含
(i)结合至CD3的第一抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:61的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:62的HCDR3，或所述重链可变区包含SEQ ID NO:64的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:65的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3，其中所述第一抗原结合部分为交叉Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区或恒定区发生交换；
(ii)结合至CD19的第二抗原结合部分和第三抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:67的重链CDR(HCDR)1、SEQ ID NO:68的HCDR2和SEQID NO:69的HCDR3；所述轻链可变区包含SEQ ID NO:70的轻链CDR(LCDR)1、SEQ ID NO:71的LCDR2和SEQ ID NO:72的LCDR3，其中所述第二抗原结合部分和所述第三抗原结合部分各自为Fab分子，特别是常规Fab分子；
(iii)Fc结构域，其由第一亚基和第二亚基构成，
其中所述第二抗原结合部分在Fab重链的C末端处融合至所述第一抗原结合部分的所述Fab重链的N末端，并且所述第一抗原结合部分在所述Fab重链的C末端处融合至所述Fc结构域的所述第一亚基的N末端，并且其中所述第三抗原结合部分在Fab重链的C末端处融合至所述Fc结构域的所述第二亚基的N末端。
47.根据权利要求43至46中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体的所述第一抗原结合部分包含与SEQ ID NO:63的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链可变区序列或与SEQ ID NO:66的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链可变区序列，以及与SEQ ID NO:11的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的轻链可变区序列；并且/或者所述T细胞双特异性抗体的所述第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分包含与SEQ ID NO:73的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的重链可变区序列，以及与SEQ ID NO:74的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的轻链可变区序列。
48.根据权利要求43至47中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体的所述第一抗原结合部分为交叉Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区发生交换，并且其中所述T细胞双特异性抗体的所述第二抗原结合部分和(在存在时的)第三抗原结合部分为常规Fab分子，其中在恒定结构域CL中，位置124处的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)，且位置123处的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)，并且在恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)，且位置213处的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)。
49.根据权利要求45至48中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述T细胞双特异性抗体的所述Fc结构域包含促进所述Fc结构域的所述第一亚基和所述第二亚基的缔合的修饰，并且/或者所述Fc结构域包含减少与Fc受体的结合和/或降低效应子功能的一个或多个氨基酸取代。
50.根据前述权利要求中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中(待通过所述T细胞接合剂治疗的)所述疾病为癌症，特别是表达所述T细胞接合剂的所述靶细胞抗原的癌症。
51.根据权利要求50所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述癌症
(i)为癌胚抗原(CEA)表达型癌症，和/或
(ii)选自由以下项组成的组：结直肠癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌和胃癌。
52.根据权利要求50所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述癌症
(i)为CD20表达型癌症，
(ii)为B细胞癌症，和/或
(ii)选自由以下项组成的组：非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和边缘区淋巴瘤(MZL)。
53.根据权利要求50所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述癌症为MAGE-A4表达型癌症。
54.根据权利要求50所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中所述癌症
(i)为CD19表达型癌症，
(ii)为B细胞癌症，和/或
(ii)选自由以下项组成的组：非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。
55.根据权利要求43至49中任一项所述的T细胞接合剂、JAK和/或mTOR信号传导的抑制剂、用途或方法，其中(待通过所述T细胞接合剂治疗的)所述疾病为自身免疫性疾病，特别是狼疮，更特别是系统性红斑狼疮(SLE)或狼疮肾炎(LN)。
56.如前所述的本发明。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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