CN116601169A - 针对马尔堡病毒的广泛中和结合分子 - Google Patents

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Abstract

本文公开了一类新的分离的结合分子(包括单克隆抗体)，其靶向马尔堡病毒物种内广泛保守的表位。某些方面为马尔堡病毒引起的出血热提供了有效的治疗选择。

Description

针对马尔堡病毒的广泛中和结合分子
关于联邦资助的研究和开发的声明
本发明是在美国国立卫生研究院授予的NIH拨款R01-AI126587的政府支持下进行的。政府享有本发明的某些权利。
序列表
本申请包含序列表，其已经以ASCII格式电子提交，并在此通过引用以其整体并入。在2021年7月19日创建的所述ASCII副本被命名为57783-210793_SL.txt，并且大小为64,816个字节。
背景
丝状病毒，例如，马尔堡病毒，在人类中引起严重的出血热，死亡率达到88％(Feldmann等人,2003,Nat Rev Immunol,3(8):677-685)以及在非人灵长类动物和可能的其它哺乳动物中引起家畜流行病。由于USSR对马尔堡病毒的武器化，高致死率和潜在的气溶胶传播，丝状病毒已被分类为A类NIAID优先病原体。引起人类中疾病爆发的主要丝状病毒物种是扎伊尔埃博拉病毒(ebolaviruses Zaire，EBOV)和苏丹埃博拉病毒(ebolaviruses Sudan，SUDV)，以及维多利亚湖马尔堡病毒(MARV)。丝状病毒是有包膜的单链负义RNA丝状病毒，并且编码7种蛋白，其中刺突糖蛋白(GP)被认为是主要的保护性抗原。EBOV和MARV GP可以被弗林蛋白酶蛋白水解切割成通过二硫键连接的两个亚基：GP1(～140kDa)和GP2(～38kDa)(Manicassamy等人,2005,JVirol,79(8):4793-4805)。三个GP1-GP2单元在病毒表面上形成三聚体GP包膜刺突(～550kDa)(Feldmann等人,1993,ArchVirol Suppl,7:81-100；Feldmann等人,1991,Virology,182(1):353-356；Geisbert和Jahrling,1995,Virus Res,39(2-3):129-150；Kiley等人,1988a,J Gen Virol,69(Pt8):1957-1967)。GP1介导细胞吸附(Kiley等人,1988b,J Gen Virol,69(Pt 8):1957-1967；Kuhn等人,2006,J Biol Chem,281(23):15951-15958)，并且包含粘蛋白样结构域(MLD)，其是高度糖基化的并且是可变的，并且具有很少或没有预测的二级结构(Sanchez等人,1998,J Virol,72(8):6442-6447)。先前已经鉴定了由～150个氨基酸组成的MARV和EBOV GP1的特定区域(Kuhn等人,2006,J Biol Chem,281(23):15951-15958)，其比GP1更有效地结合丝状病毒受体阳性细胞，但不结合受体阴性细胞，并且与相应病毒的进入竞争(Kuhn等人,2006,J Biol Chem,281(23):15951-15958)。这些特性与SARS冠状病毒和马秋波砂粒病毒(Machupo Arenavirus)定义的区域类似(Li等人,2003,Nature,426(6965):450-454；Radoshitzky等人,2007,Nature,446(7131):92-96；Wong等人,2004,J Biol Chem,279(5):3197-3201)。GP的这个区域在这里被称为受体结合区(RBR)，并且是排除可变的、糖基化的和大的粘蛋白样结构域(MLD)的较大结构域的一部分。RBR显示了丝状病毒糖蛋白之间的最高水平的同源性(Kuhn等人,2006,J Biol Chem,281(23):15951-15958)。
关于抗体在针对丝状病毒出血热的保护中的作用，虽然报道了T和B细胞应答在针对丝状病毒的保护性免疫应答中起作用(Warfield等人,2005,J Immunol,175(2):1184-1191)，但一系列最近的报道表明单独的抗体可以提供保护。Dye等人显示，当在暴露后直到48小时施用时，来自猕猴的纯化的恢复期IgG可以保护非人灵长类动物(NHP)免受MARV和EBOV的攻击(Dye等人,2012,Proc Natl Acad Sci U S A,109(13):5034-9)。Olinger等人报道了在暴露后24小时和48小时，用施用的针对GP的三种单克隆抗体(mAb)的混合物处理的NHP中对EBOV攻击的保护(Olinger等人,2012,Proc Natl Acad Sci U S A,109(44):18030-18035)。在另外两项研究中也报道了类似的结果(Qiu等人,2013,Sci Transl Med,5(207):207ra143；Qiu等人,2013,J Virol,87(13):7754-7757)。总的来说，这些数据表明体液应答可以控制、减轻、减少或预防丝状病毒感染。
概述
本文公开了一类新的分离的结合分子(包括单克隆抗体)，其靶向马尔堡病毒物种内广泛保守的表位。某些方面为马尔堡病毒引起的出血热提供了有效的治疗选择。表3中提供了本公开内容的多种代表性抗体的重链和轻链的可变结构域和CDR区的序列。
某些实施方案提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其包含特异性结合保守的马尔堡病毒或拉夫病毒表位的结合结构域。在某些实施方案中，所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：SEQ ID NO:2、3、4、6、7和8(R45)[克隆谱系CL1.1]；SEQ ID NO:10、11、12、14、15和16(R79)[CL1.2]；SEQID NO:18、19、20、22、23和24(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:26、27、28、30、31和32(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:34、35、36、38、39和40(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:42、43、44、46、47和48(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:50、51、52、53、54和55(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:58、59、60、62、63和64(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:66、67、68、70、71和72(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:74、75、76、78、79和80(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:82、83、84、86、87和88(R224)[CL3.2]；SEQ IDNO:90、91、92、94、95和96(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:98、99、100、102、103和104(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:106、107、108、110、111和112(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:114、115、116、118、119和120(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:122、123、124、126、127和128(R50)[CL6.1]；SEQID NO:130、131、132、134、135和136(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:138、139、140、142、143和144(R55)[CL6.3]。
在本文公开的某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；SEQ IDNO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；SEQID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:137和SEQID NO:141(R55)[CL6.3]。
本文公开的某些实施方案提供了分离的结合分子或其抗原结合片段，其包含特异性结合保守的马尔堡病毒或拉夫病毒表位的结合结构域。在某些这样的实施方案中，所述结合分子或其抗原结合片段是分离的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述结合结构域特异性结合由定位于GP1中的氨基酸位置58、65、87、90和120以及内部融合环(残基514-551)内的GP2氨基酸511、514和IFL远端的氨基酸560组成的表位。在某些实施方案中，所述结合结构域能够结合与所述抗体或其抗原结合片段相同的保守马尔堡病毒或拉夫病毒表位，所述抗体或其抗原结合片段分别包含以下氨基酸序列中任一个的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:9和SEQ IDNO:13(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:25和SEQ IDNO:29(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:41和SEQ IDNO:45(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:57和SEQ IDNO:61(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:73和SEQ IDNO:77(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:89和SEQID NO:93(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。并且，在某些实施方案中，所述结合结构域能够竞争性地抑制抗体或其抗原结合片段的抗原结合，所述抗体或其抗原结合片段分别包含以下氨基酸序列中任一个的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)：SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:5(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:17和SEQ IDNO:21(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:33和SEQ IDNO:37(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:49和SEQ IDNO:53(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:65和SEQ IDNO:69(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:81和SEQID NO:85(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
本文提供了组合物，其包含本文任何地方所述的任一种的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段，以及载体。
本文提供了试剂盒，其包含(a)本文任何地方所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段或者组合物；以及(b)使用所述抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段或者使用所述组合物的说明书，或者用于获得使用所述抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段或者使用所述组合物的说明书的指导。
本文提供了确定对象是否感染丝状病毒的方法，其包括：(a)从怀疑感染丝状病毒的对象获得样品；(b)将所述样品施加到由本文所述的试剂盒提供的缓冲液或固体支持物上；以及(c)确定所述样品是与所述试剂盒中提供的抗体或其抗原结合片段反应还是与结合所述抗体或其抗原结合片段的丝状病毒抗原反应，其中阳性反应指示所述对象感染了丝状病毒。
本文提供了分离的多核苷酸，其包含编码本文任何地方所述的抗体或其抗原结合片段的核酸。在某些实施方案中，所述核酸编码VH，并且其中所述VH包含VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述VH-CDR包含分别与以下相同的或者除了一个或多个VH-CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同的氨基酸序列：SEQ IDNO:2、3和4(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:10、11和12(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:18、19和20(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:26、27和28(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:34、35和36(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:42、43和44(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:50、51和52(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:58、59和60(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:66、67和68(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:74、75和76(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:82、83和84(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:90、91和92(R18)[CL4.1]；SEQID NO:98、99和100(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:106、107和108(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:114、115和116(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:122、123和124(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:130、131和132(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:138、139和140(R55)[CL6.3]。
在某些实施方案中，所述核酸编码VL，并且其中所述VL包含VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述VL-CDR包含分别与以下相同的或者除了一个或多个VH-CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同的氨基酸序列：SEQ IDNO:6、7和8(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:14、15和16(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:22、23和14(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:30、31和32(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:38、39和40(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:46、47和48(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:54、55和56(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:62、63和64(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:70、71和72(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:78、79和80(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:86、87和88(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:94、95和96(R18)[CL4.1]；SEQID NO:102、103和104(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:110、111和112(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:118、119和120(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:126、127和128(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:134、135和136(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:142、143和144(R55)[CL6.3]。在某些实施方案中，所述核酸编码VH，并且其中所述VH包含与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:1(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:9(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:17(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:25(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:33(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:41(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:49(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:57(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:65(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:73(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:81(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:89(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:97(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:105(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:113(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:121(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:129(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:137(R55)[CL6.3]。在某些实施方案中，所述核酸编码VL，并且其中所述VL包含与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者SEQID NO:141(R55)[CL6.3]。
某些实施方案提供了包含本文所述的多核苷酸的载体，或者包含本文所述的多核苷酸或载体的组合物。某些实施方案提供了多核苷酸或多核苷酸的组合，其编码本文所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段。
某些实施方案提供了宿主细胞，其包含本文所述的多核苷酸或多核苷酸的组合或者一种或多种载体。
本文提供了制备本公开内容的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的方法，其包括(a)培养本文所述的宿主细胞；以及(b)分离所述抗体或其抗原结合片段或者分离所述结合分子或其抗原结合片段。
本文提供了包含本文所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的诊断试剂。
本文提供了用于预防、治疗或管理对象中丝状病毒感染的方法，其包括向有需要的对象施用有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段或者组合物。
附图/图的简要说明
图1A-E。选择具有N551A突变的Ravn GPΔmuc-4M突变体作为克隆中和抗体的分选探针：猕猴对MARV病毒家族成员拉夫病毒的血清中和活性被野生型和大多数Ravn GPΔmuc消耗，但不被突变的N551A消耗，表明动物中的抗体应答对携带N551A突变的GP敏感。因此，Ravn GPΔmuc-4M N551A突变体可以作为阴性选择探针来分选编码MARV中和抗体的B细胞。(A)针对所示哺乳动物细胞系(HEK)或昆虫细胞(S2)中产生的Musoke、Angola和RavnΔmuc蛋白通过ELISA测量的不同时间点的血清反应性效价。(B)对于不同时间点针对rVSV-MARVMusoke、Angola和拉夫(Ravn)病毒的血清中和效价。时间点指示初次和加强接种以及峰值效价已经在(A)和(B)中指示。(C)Ravn GP(PDB:6BP2)的结构的动画表示，其突出了在融合环附近的GP上进行的突变以鉴定适当的分选探针。(D)基于血清消耗测定的分选探针的向下选择，其中将各突变蛋白添加到血清中(第62天)并使用rVSV-Ravn中和测定来测量中和效力。(E)由(D)计算的曲线下面积(AUC)显示，与其它突变体不同，用N551A突变体的消耗仍保留血清中和活性，表明突变对有效中和抗体敏感。
图2。N551位点特异性记忆B细胞的单细胞分选：IgG+记忆B细胞被定义为CD3-/CD8-/Aqua Blue-/CD14-/CD20+/IgG+/CD27+/IgM-。然后通过Ravn-WThi N551Alo的表型门控Ravn N551A位点特异性记忆B细胞。亲代群体的门控频率(百分比)以红色表示。裂解分选的细胞，然后进行单细胞逆转录和PCR反应以扩增Ig序列，将其进一步克隆到真核表达载体中以表达单克隆抗体。
图3A，B。对Ravn GPΔmuc-4M的WT或N551A突变体的Marburg GP特异性抗体结合曲线：在OD650下测量的分离的R-mAb对WT-4M和GP-4M N551A的ELISA反应性。x轴是以μg/mL计的浓度的对数(A)，或者是在OD450下测量的与WT-4M、N551A、D511K和H123A的反应性(B)。
图4A，B。Marburg GP特异性抗体中和活性：(a)使用先前所述的rVSV-丝状病毒假型测定通过分离的R-mAb中和rVSV-Musoke(灰色实心圆圈)、Angola(空心正方形)和RAVVGP(空心菱形)。(B)由针对所有Marburg毒株的各曲线计算的以μg/mL计的NT50s列于表中。
图5。活病毒，Ci-67 MARV中和(BSL-4)：随着R-mAb分批产生，在BSL-4中和测定中测试第一组R-mAb的MARV Ci67的中和作用，并与用实心圆圈以实线显示的MR191进行比较。仅病毒对照显示46％的感染。在第二轮中，在类似条件下测试在HEK和CHO中产生的R217(虚线和实心正方形)，并与MR191和仅病毒对照进行比较，所述病毒对照显示70％的非常高的感染率。
图6A-D。Marburg-GP特异性抗体体内保护功效：(A)用1000pfu的具有复制能力的rVSV-MARV Musoke感染5只AG129小鼠的组，并通过IP用两剂mAb处理，暴露前(攻击前6h)和暴露后(感染后+3天(DPI))进行处理。作为对照，用PBS或MR191(以与R-mAb相同的剂量)处理小鼠。监测小鼠10天，并通过Log-rank(Mantel-Cox)检验测定与PBS相比的每个处理组的P值。(B)在研究过程中监测健康评分。(C)类似于图6A，用1000pfu的具有复制能力的rVSV-MARV Musoke感染5只AG129小鼠的组，通过IP用两剂mAb处理(MR191、R217或PBS)进行处理，并监测15天。(D)记录不同组的体重变化百分比。
图7A-C。与RAVV GP-4M复合的R-mAb的表位作图和结构：(A)将在HEK-293细胞中表达的全长MARV GP(RAVV)的鸟枪诱变文库用于测定R-mAb结合的关键GP残基，类似于先前针对EBOV GP和CA45所述的方法(Zhao等人,Cell 2017,169,891–904)。在该文库中，将具有跨越所有残基的单点突变的克隆突变为丙氨酸(以及丙氨酸被突变为丝氨酸)。然后将克隆转染到384孔板中的HEK293T细胞中并使其表达22小时。然后将细胞与R-mAb(或对照抗体，如MR191)孵育，然后与和Alexa Fluor 488缀合的第二抗体孵育。洗涤细胞后，使用Intellicyt高通量流式细胞仪(Intellicyt,Albuquerque,NM)测量荧光。从对照孔中减去背景荧光，并相对于WT GP荧光计算对每个GP突变体的mAb反应性。由这种设置产生的重要残基已经描述在RAVV GP结构的动画表示上，并且对于不同的R-mAb克隆，重要残基显示为球体。(B)低分辨率负染色重建使得R217 Fab同源性模型能够对接至RAVV GP-4M结构(PDB：6BP2；显示为表面表示)。显示为突出MR191的表面表示的对接的R217和公开的MR191 Fabs结合RBS，而R217靶向GP1-2界面上的新的和独特的表位。对相互作用重要的残基已列在表(右边)中。(C)基于表位作图和低分辨率结构模型，在rVSV-RAVV(上图)和MUSOKE(下图)GP背景上进行选择的突变，并测试针对R217(左边)和MR191(右边)的中和作用以证实残基在介导中和作用中的影响。以一式三份运行样品，如误差条所示。
图8A、B。在安哥拉豚鼠模型中的R217抗体保护功效：(A)用1000LD50的GPA-MARVAngola感染Hartley豚鼠，并在3dpi时通过IP注射指定剂量的R217、MR191或PBS(各n＝5)来处理。监测动物28天。通过Log-rank(Mantel-Cox)检验计算的P值如所示。(B)在研究期间记录的动物的平均体重。
图9A、B。图9显示(A)用1000pfu的MARV-Angola感染，随后在感染后第4天和第7天用媒介物缓冲液(对照；n＝1)或50mg/kg的R217(n＝4)处理的NHP的存活。绘制历史对照(n＝20)用于统计分析，以及(B)用媒介物或R217处理的NHP的体温。
详述
定义
术语“一个/一种(a)”或“一个/一种(an)”实体是指该实体中的一个或多个/一种或多种；例如，“多肽亚基”被理解为代表一个或多个多肽亚基。因此，术语“一个/一种(a)”(或“一个/一种(an)”)、“一个或多个/一种或多种”和“至少一个/至少一种”在本文中可以互换使用。
此外，“和/或”在本文中使用时应被视为具有或不具有其它特征或组件的指定特征或组件中每一个的具体公开内容。因此，如本文中诸如“A和/或B”的短语中所用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独的)和“B”(单独的)。同样，如在诸如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下实施方案中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独的)；B(单独的)；和C(单独的)。
除非另有定义，本文使用的技术和科学术语具有与本公开内容相关的本领域普通技术人员通常理解的相同含义。例如，the Concise Dictionary of Biomedicine andMolecular Biology,Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRC Press；The Dictionary of Celland Molecular Biology,第3版,1999,Academic Press；以及the Oxford Dictionary OfBiochemistry And Molecular Biology,Revised,2000,Oxford University Press，为本领域技术人员提供了本公开内容中使用的许多术语的通用词典。
在适用的情况下，单位、前缀和符号以其国际单位制(Système International deUnites，SI)接受的形式表示。数值范围包括定义该范围的数字。除非另有说明，氨基酸序列以氨基到羧基的方向从左到右书写。核酸序列从5’到3’，从左到右书写。
本文提供的标题不是本公开内容的各个方面的限制，其可以通过整体参考说明书来实现。因此，下面定义的术语通过参考说明书以其整体来更充分地定义。
如本文所用，术语“非天然存在的”物质、组合物、实体和/或物质、组合物或实体的任何组合或其任何语法变体是条件术语，其明确排除但仅排除物质、组合物、实体和/或物质、组合物或实体的任何组合的那些形式，所述形式被本领域普通技术人员充分理解为“天然存在的”，或者是或者可能是在任何时间由法官或行政或司法机构确定或解释为“天然存在的”。
如本文所用，术语“多肽”旨在涵盖单数“多肽”以及复数“多肽”，并且是指由通过酰胺键(也称为肽键)线性连接的单体(氨基酸)组成的分子。术语“多肽”是指两个或更多个氨基酸的任何一个或多个链，并且不是指产物的特定长度。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或用于指两个或更多个氨基酸的一个或多个链的任何其它术语包括在“多肽”的定义内，并且术语“多肽”可以代替这些术语中的任一个或与这些术语中的任一个互换使用。术语“多肽”也旨在指多肽表达后修饰的产物，包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团的衍生化、蛋白水解切割或通过非标准氨基酸修饰。多肽可以来源于天然生物来源或通过重组技术产生，但不一定是从指定的核酸序列翻译。它可以以任何方式产生，包括通过化学合成。
本文所用的“蛋白质”可指单一多肽，即如上所定义的单一氨基酸链，但也可指通过例如二硫键、氢键、疏水相互作用等缔合以产生多聚体蛋白质的两个或更多个多肽。
“分离的”多肽或其片段、变体或衍生物是指不在其天然环境中的多肽。不需要特定水平的纯化。例如，可以从其初始或天然环境中除去分离的多肽。在宿主细胞中表达的重组产生的多肽和蛋白质被认为是如本文所公开的分离的，和通过任何合适的技术已经分离、分级分离或者部分或基本上纯化的重组多肽一样。
如本文所用，术语“非天然存在的”多肽或其任何语法变体是条件术语，其明确排除但仅排除多肽的那些形式，所述形式被本领域普通技术人员充分理解为“天然存在的”，或者是或者可能是在任何时间由法官或行政或司法机构确定或解释为“天然存在的”。
本文公开的其它多肽是前述多肽的片段、衍生物、类似物或变体以及以上的任何组合。术语“片段”、“变体”、“衍生物”和“类似物”在指如本文所公开的多肽亚基或多聚体蛋白时，可以包括保留完整多肽或蛋白质的至少一些活性但在结构上不同的任何多肽或蛋白质。多肽片段包括例如蛋白水解片段以及缺失片段。变体包括如上所述的片段，以及由于氨基酸取代、缺失或插入而具有改变的氨基酸序列的多肽。变体可以自发出现或有意构建。有意构建的变体可以使用本领域已知的诱变技术产生。变体多肽可以包含保守的或非保守的氨基酸取代、缺失或添加。衍生物是已经被改变以便表现出天然多肽上未发现的另外特征的多肽。实例包括融合蛋白。变体多肽在本文中也可称为“多肽类似物”。如本文所用，“衍生物”还指具有通过功能性侧基的反应化学衍生的一个或多个氨基酸的主题多肽。“衍生物”还包括含有20种标准氨基酸的一种或多种标准或合成的氨基酸衍生物的那些肽。例如，4-羟脯氨酸可以取代脯氨酸；5-羟赖氨酸可以取代赖氨酸；3-甲基组氨酸可以取代组氨酸；高丝氨酸可以取代丝氨酸；以及鸟氨酸可以取代赖氨酸。
“保守氨基酸取代”是其中一个氨基酸被具有相似侧链的另一个氨基酸替换的氨基酸。具有相似侧链的氨基酸家族已在本领域中定义，包括碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)，不带电荷的极性侧链(例如天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)，非极性侧链(例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)，β-支链侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。例如，用苯丙氨酸取代酪氨酸是保守取代。鉴定不消除蛋白质活性的核苷酸和氨基酸保守取代的方法是本领域熟知的(参见，例如，Brummell等人,Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人,Protein Eng.12(10):879-884(1999)；以及Burks等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:.412-417(1997))。
如本文所用，术语“结合分子”在其最广泛的意义上是指特异性结合抗原决定簇的分子。如本文进一步所述，结合分子可包含一个或多个“结合结构域”。如本文所用，“结合结构域”是能够特异性结合给定抗原决定簇或表位的二维或三维多肽结构。结合分子的非限制性实例是包含特异性结合抗原决定簇或表位的结合结构域的抗体或其片段。结合分子的另一个实例是包含与第一表位结合的第一结合结构域和与第二表位结合的第二结合结构域的双特异性抗体。
本文公开了某些结合分子或其抗原结合片段、变体或衍生物。除非特别提及全尺寸抗体如天然存在的抗体，术语“结合分子”涵盖全尺寸抗体以及这些抗体的抗原结合片段、变体、类似物或衍生物，例如天然存在的抗体或免疫球蛋白分子或工程化抗体分子或以类似于抗体分子的方式结合抗原的片段。
术语“抗体”和“免疫球蛋白”在本文中可以互换使用。本文公开的抗体(或其片段、变体或衍生物)包含重链的至少可变结构域以及重链和轻链的至少可变结构域。脊椎动物系统中的基本免疫球蛋白结构是已经得到了相当好的理解。参见例如Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,第2版,1988)。
如下文将更详细论述的，术语“免疫球蛋白”包括各种广泛种类的可生化区分的多肽。本领域技术人员将理解，重链被分类为伽玛、谬、阿尔法、德尔塔或艾普斯龙(γ、μ、α、δ、ε)以及其中的一些亚类(例如，γ1-γ4)。正是这种链的性质决定了抗体的“类别”分别为IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1等被很好地表征并已知赋予了功能专门化。鉴于本公开内容，这些类别和同种型中的每一种的修饰形式对于本领域技术人员而言是容易辨别的，并且因此在本公开内容的范围内。
轻链被分类为卡帕或兰姆达(κ，λ)。每个重链类别可以与k或λ轻链结合。通常，轻链和重链彼此共价结合，并且当免疫球蛋白由杂交瘤、B细胞或基因工程化宿主细胞产生时，两条重链的“尾部”部分通过共价二硫键或非共价键彼此结合。在重链中，氨基酸序列从Y构型的分叉末端的N-末端延伸到每条链底部的C-末端。
轻链和重链都被分成结构同源性和功能同源性的区域。在功能上使用术语“恒定”和“可变”。在这方面，应理解轻链(VL)和重链(VH)部分的可变结构域决定抗原识别和特异性。相反，轻链(CL)和重链(CH1、CH2或CH3)的恒定结构域赋予生物学特性，如分泌、经胎盘迁移、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区结构域的编号随着它们远离抗体的抗原结合位点或氨基末端而增加。N-末端部分是可变区，在C-末端部分是恒定区；CH3和CL结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基末端。
如上所述，可变区允许结合分子选择性地识别和特异性地结合抗原上的表位。也就是说，结合分子(例如抗体)的VL结构域和VH结构域或互补决定区(CDR)的子集组合以形成限定三维抗原结合位点的可变区。这种四级结合分子结构形成存在于Y的每个臂末端的抗原结合位点。更具体地，抗原结合位点由在VH和VL链的每一个上的三个CDR限定。
在天然存在的抗体中，存在于每个抗原结合结构域中的六个“互补决定区”或“CDR”是短的非连续的氨基酸序列，当抗体在水性环境中呈现其三维构型时，其被特异性定位以形成抗原结合结构域。抗原结合结构域中的其余氨基酸(被称为“构架”区)显示出较小的分子间变异性。框架区主要采用β-折叠构象，并且CDR形成连接β-折叠结构的环，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。因此，框架区起到形成支架的作用，该支架通过链间非共价相互作用为CDR提供以正确方向定位。由定位的CDR形成的抗原结合结构域限定了与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。该互补表面促进抗体与其同源表位的非共价结合。对于任何给定的重链或轻链可变区，本领域普通技术人员可以容易地分别鉴定包含CDR和框架区的氨基酸，因为它们已经被精确定义(参见，"Sequences of Proteins ofImmunological Interest,"Kabat,E.等人,U.S.Department of Health and HumanServices,(1983)；以及Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.,196:901-917(1987)，将其通过引用以其整体并入本文)。
在本领域中使用和/或接受的术语有两种或更多种定义的情况下，本文使用的术语的定义旨在包括所有这样的含义，除非明确地相反说明。具体的实例是使用术语“互补决定区”(“CDR”)来描述在重链和轻链多肽的可变区内发现的非连续抗原结合位点。该特定区已经由Kabat等人,U.S.Dept.of Health and Human Services,"Sequences of ProteinsofImmunological Interest"(1983)以及Chothia等人,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)描述，将其通过引用并入本文，其中定义包括相互比较时氨基酸的重叠或子集。然而，用于指抗体或其变体的CDR的任一定义的应用都旨在本文所定义和使用的术语的范围内。下面的表4中列出了涵盖上述参考文献中每一个所定义的CDR的适当氨基酸作为比较。涵盖特定CDR的确切氨基酸数目将根据CDR的序列和大小而变化。考虑到抗体的可变区氨基酸序列，本领域技术人员可以常规地确定哪些氨基酸包含特定的CDR。
表4：CDR定义1
Kabat Chothia
VH CDR1 31-35 26-32
VH CDR2 50-65 52-58
VH CDR3 95-102 95-102
VL CDR1 24-34 26-32
VL CDR2 50-56 50-52
VL CDR3 89-97 91-96
1表4中所有CDR定义的编号根据Kabat等人列出的编号惯例(参见下文)。
也可使用IMGT信息系统(www://imgt.cines.fr/) 分析免疫球蛋白可变结构域以鉴定可变区区段，包括CDR。参见例如Brochet,X等人,Nucl.AcidsRes.36:W503-508(2008)。
Kabat等人还定义了可应用于任何抗体的可变结构域序列的编号系统。本领域普通技术人员可以毫无疑义地将这种“Kabat编号”系统分配给任何可变结构域序列，而不依赖于序列本身以外的任何实验数据。如本文所用，“Kabat编号”是指由Kabat等人,U.S.Dept.of Health and Human Services,"Sequence of Proteins ofImmunologicalInterest"(1983)列出的编号系统。
抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物包括但不限于多克隆，单克隆，人，人源化或嵌合抗体，单链抗体，表位结合片段，例如Fab，Fab'和F(ab')2，Fd，Fvs，单链Fv(scFv)，单链抗体，二硫化物连接的Fv(sdFv)，包含VL或VH结构域的片段，由Fab表达文库产生的片段。scFv分子是本领域已知的，并且描述在例如美国专利5,892,019中。本公开内容涵盖的免疫球蛋白或抗体分子可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。
“特异性结合”意指结合分子，例如抗体或其片段、变体或衍生物经由其抗原结合结构域与表位结合，并且该结合需要抗原结合结构域与表位之间的一些互补性。根据该定义，当结合分子经由其抗原结合结构域与表位结合时比其与随机的不相关表位结合更容易时，认为该结合分子“特异性结合”该表位。术语“特异性”在本文中用于限定某种结合分子结合某种表位的相对亲和力。例如，可以认为结合分子“A”对给定表位具有比结合分子“B”更高的特异性，或者可以说结合分子“A”与表位“C”结合的特异性高于其对相关表位“D”结合的特异性。
出于本公开内容的目的，抗体或其抗原结合片段可以包括抗体结合结构域的任何部分，例如单个CDR、三个CDR、六个CDR、VH、VL或其衍生自抗体的任何组合，所述抗体例如由NHP，例如，猕猴，例如恒河猴(Macaca mulatta)或食蟹猴(Macaca fascicularis)的B细胞产生的非人灵长类动物(NHP)抗体。
本文公开的结合分子，例如抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物可以被认为以小于或等于5X 10-2sec-1、10-2sec-1、5X 10-3sec-1、10-3sec-1、5X 10-4sec-1、10-4sec-1、5X 10- 5sec-1或10-5sec-1 5X 10-6sec-1、10-6sec-1、5X 10-7sec-1或10-7sec-1的解离速率(k(off))结合靶抗原。
本文公开的结合分子，例如抗体或抗原结合片段、变体或衍生物可以被认为以大于或等于103M-1sec-1、5X 103M-1sec-1、104M-1sec-1、5X 104M-1sec-1、105M-1sec-1、5X 105M-1sec-1、106M-1sec-1或5X 106M-1sec-1或107M-1sec-1的结合速率(k(on))结合靶抗原。
如果结合分子，例如抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物在某种程度上以阻断参考抗体或抗原结合片段与表位的结合的程度优先结合给定表位，则其可以被认为竞争性地抑制参考抗体或抗原结合片段与该表位的结合。竞争性抑制可以通过本领域已知的任何方法，例如竞争ELISA测定，进行测定。可以说结合分子将参考抗体或抗原结合片段与给定表位的结合竞争性抑制至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。
如本文所用，术语“亲和力”是指单个表位与免疫球蛋白分子的CDR结合的强度的量度。参见例如Harlow等人,Antibodies:ALaboratory Manual,(Cold Spring HarborLaboratory Press,第2版,1988)，第27页-第28页。如本文所用，术语“亲合力”是指免疫球蛋白群体与抗原之间的复合物的总稳定性，即免疫球蛋白混合物与抗原的功能性结合强度。参见例如Harlow的第29页-第34页。亲合力既与群体中个体免疫球蛋白分子对特定表位的亲和力有关，也与免疫球蛋白和抗原的效价有关。例如，二价单克隆抗体与具有高度重复表位结构的抗原(如聚合物)之间的相互作用将是高亲合力之一。二价单克隆抗体与细胞表面上高密度存在的受体之间的相互作用也是高亲合力的。
本文所公开的结合分子或其抗原结合片段、变体或衍生物也可以根据它们的交叉反应性来描述或说明。如本文所用，术语“交叉反应性”是指结合分子(例如，对一种抗原具有特异性的抗体或其片段、变体或衍生物)与第二抗原反应的能力；两种不同抗原物质之间关联性的度量。因此，如果结合分子与诱导其形成的表位以外的表位(例如，各种不同的丝状病毒受体结合区)结合，则该结合分子是交叉反应性的。交叉反应性表位含有许多与诱导表位相同的互补结构特征，并且在一些情况下，实际上可能比原始表位更适合。
结合分子，例如抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物也可根据其与抗原的结合亲和力来描述或说明。例如，结合分子可以以不超过5x 10-2M、10-2M、5x 10-3M、10-3M、5x 10-4M、10-4M、5x10-5M、10-5M、5x 10-6M、10-6M、5x 10-7M、10-7M、5x 10-8M、10-8M、5x 10-9M、10-9M、5x 10-10M、10-10M、5x 10-11M、10-11M、5x 10-12M、10-12M、5x 10-13M、10-13M、5x 10-14M、10-14M、5x10-15M或10-15M的解离常数或KD结合抗原。
包括单链抗体的抗体片段可以包含单独的可变区或与以下的全部或部分组合的可变区：铰链区、CH1、CH2和CH3结构域。还包括抗原结合片段，其包含可变区与铰链区、CH1、CH2和CH3结构域的任何组合。本文公开的结合分子，例如抗体或其抗原结合片段可以来自任何动物来源，包括鸟类和哺乳动物。抗体可以是人、鼠、驴、兔、山羊、豚鼠、骆驼、美洲驼、马或鸡抗体。在另一个实施方案中，可变区可以是(例如，来自鲨鱼)起源的condricthoid。如本文所用，“人”抗体包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，并且包括分离自人免疫球蛋白文库或者来自针对一种或多种人免疫球蛋白而转基因的且不表达内源性免疫球蛋白的动物的抗体，如下文和例如Kucherlapati等人的美国专利号5,939,598中所述的。
如本文所用，术语“重链部分”包括衍生自免疫球蛋白重链的氨基酸序列，包含重链部分的结合分子例如抗体包含以下中的至少一个：CH1结构域、铰链(例如，上、中和/或下铰链区)结构域、CH2结构域、CH3结构域或其变体或片段。例如，NHP衍生的结合分子，例如抗体或其片段、变体或衍生物可以包含含有CH1结构域的多肽链；含有CH1结构域、至少一部分铰链结构域和CH2结构域的多肽链；含有CH1结构域和CH3结构域的多肽链；含有CH1结构域、至少一部分铰链结构域和CH3结构域的多肽链或者含有CH1结构域、至少一部分铰链结构域、CH2结构域和CH3结构域的多肽链。在另一个实施方案中，结合分子，例如抗体或其片段、变体或衍生物包含含有CH3结构域的多肽链。此外，用于本公开内容的结合分子可以缺少CH2结构域的至少一部分(例如，CH2结构域的全部或部分)。如上所述，本领域普通技术人员将理解，可以修饰这些结构域(例如重链部分)，使得它们在氨基酸序列上与天然存在的免疫球蛋白分子不同。
结合分子(例如本文公开的抗体)的重链部分可以衍生自不同的免疫球蛋白分子。例如，多肽的重链部分可包含衍生自IgG1分子的CH1结构域和衍生自IgG3分子的铰链区。在另一个实例中，重链部分可包含部分衍生自IgG1分子和部分衍生自IgG3分子的铰链区。在另一个实例中，重链部分可包含部分衍生自IgG1分子和部分衍生自IgG4分子的嵌合铰链。
如本文所用，术语“轻链部分”包含衍生自免疫球蛋白轻链的氨基酸序列。轻链部分包含VL或CL结构域中的至少一个。
本文公开的结合分子，例如抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物可以根据抗原的表位或部分，例如它们识别或特异性结合的靶丝状病毒糖蛋白亚基来描述或说明。与抗体的抗原结合结构域特异性相互作用的靶抗原部分是“表位”或“抗原决定簇”。靶抗原，例如丝状病毒糖蛋白亚基可以包含单个表位，但是通常包含至少两个表位，并且可以包括任何数目的表位，这取决于抗原的大小、构象和类型。如本文所用，“直向同源表位”是指在相关有机体，例如不同的丝状病毒物种或毒株中发现的表位的形式。直向同源表位在结构上可以是类似的，但在一个或多个氨基酸上可以不同。
如本文所用，术语“嵌合抗体”意指其中免疫反应区或位点获自或衍生自第一种物种且恒定区(其可以是完整的、部分的或修饰的)获自第二种物种的任何抗体。在一些实施方案中，靶结合区或位点将来自非人来源(例如小鼠或灵长类动物)并且恒定区是人的。
本文所用的术语“双特异性抗体”是指在单个抗体分子内具有两种不同抗原的结合位点的抗体。应理解除了规范抗体结构之外的其它分子也可以构建为具有两种结合特异性。还应理解，双特异性抗体的抗原结合可以是同时的或顺序的。Triomas和杂交瘤(hybridhybridomas)是可以分泌双特异性抗体的细胞系的两个实例。双特异性抗体也可以通过重组手段构建(和Heiss,Future Oncol.6:1387-94(2010)；Mabry和Snavely,IDrugs.13:543-9(2010))。双特异性抗体也可以是双价抗体。
如本文所用，术语“工程化抗体”是指这样的抗体，其中重链和轻链或两者中的可变结构域通过至少部分替换来自已知特异性的抗体的一个或多个CDR以及通过部分框架区替换和序列改变而改变。尽管CDR可衍生自与衍生框架区的抗体相同类别或甚至亚类的抗体，但设想CDR可衍生自不同类别的抗体，例如来自不同物种的抗体。其中将一个或多个来自已知特异性的非人抗体的“供体”CDR移植到人重链或轻链框架区中的工程化抗体在本文中被称为“人源化抗体”。在一些情况下，不是所有的CDR都被来自供体可变区的完整CDR替代以将一个可变结构域的抗原结合能力转移至另一个可变结构域；相反，转移了维持靶结合位点活性的最小氨基酸。考虑到在例如美国专利第5,585,089号、第5,693,761号、第5,693,762号和第6,180,370号中列出了解释，通过进行常规实验或通过试错测试以获得功能性工程化或人源化抗体，这将完全在本领域技术人员的能力范围内。
术语“多核苷酸”旨在涵盖单一核酸以及多个核酸，并且是指分离的核酸分子或构建体，例如信使RNA(mRNA)或质粒DNA(pDNA)。多核苷酸可以包含常规的磷酸二酯键或非常规的键(例如，酰胺键，如在肽核酸(PNA)中发现的)。术语“核酸”是指存在于多核苷酸中的任何一个或多个核酸区段，例如DNA或RNA片段。“分离的”核酸或多核苷酸是指已经从其天然环境中移出的核酸分子、DNA或RNA。例如，载体中包含的编码多肽亚基的重组多核苷酸被认为是如本文所公开的那样分离的。分离的多核苷酸的其它实例包括维持在异源宿主细胞中的重组多核苷酸或溶液中(部分或基本上)纯化的多核苷酸。分离的RNA分子包括多核苷酸的体内或体外RNA转录物。分离的多核苷酸或核酸还包括合成产生的这种分子。此外，多核苷酸或核酸可以是或可以包括调控元件，如启动子、核糖体结合位点或转录终止子。
如本文所用，“非天然存在的”多核苷酸或其任何语法变体是条件定义，其明确排除但仅排除多核苷酸的那些形式，所述形式被本领域普通技术人员充分理解为“天然存在的”，或者是或者可能是在任何时间由法官或行政或司法机构确定或解释为“天然存在的”。
如本文所用，“编码区”是包含翻译成氨基酸的密码子的核酸的一部分。尽管“终止密码子”(TAG、TGA或TAA)不翻译成氨基酸，但它可以被认为是编码区的一部分，但任何侧翼序列，例如启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子等不是编码区的一部分。两个或更多个编码区可以存在于单个多核苷酸构建体中，例如在单个载体上；或者存在于分开的多核苷酸构建体中，例如在分开的(不同的)载体上。此外，任何载体可以含有单个编码区，或者可以包含两个或更多个编码区，例如，单个载体可以分别编码免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区。此外，载体、多核苷酸或核酸可以编码异源编码区，其融合到或未融合到编码如本文所提供的多肽亚基或融合蛋白的核酸。异源编码区包括但不限于特定元件或基序，如分泌信号肽或异源功能结构域。
在某些实施方案中，多核苷酸或核酸是DNA。在DNA的情况下，包含编码多肽的核酸的多核苷酸通常可以包括与一个或多个编码区可操作地连接的启动子和/或其它转录或翻译控制元件。可操作的关联或连接可以是基因产物(例如多肽)的编码区可以与一个或多个调控序列以诸如将基因产物的表达置于调控序列的影响或控制之下的方式关联时。如果启动子功能的诱导导致编码所需基因产物的mRNA的转录，并且如果两个DNA片段之间的连接性质不干扰表达调控序列指导基因产物表达的能力或干扰DNA模板转录的能力，则两个DNA片段(如多肽编码区和与其相关的启动子)可以是“可操作缔合的”或“可操作连接的”。因此，如果启动子能够实现核酸的转录，则启动子区域将与编码多肽的核酸可操作地缔合。启动子可以是仅在预定细胞中指导DNA大量转录的细胞特异性启动子。除了启动子之外，其它转录控制元件，例如增强子、操纵子、阻遏物和转录终止信号，可以与多核苷酸可操作地缔合以指导细胞特异性转录。本文公开了合适的启动子和其它转录控制区。
各种转录控制区是本领域技术人员已知的。这些包括但不限于在脊椎动物细胞中起作用的转录控制区，如但不限于来自巨细胞病毒(立即早期启动子，与内含子-A结合)、猿猴病毒40(早期启动子)和逆转录病毒(如劳斯肉瘤病毒)的启动子和增强子区段。其它转录控制区包括衍生自脊椎动物基因的那些，如肌动蛋白、热休克蛋白、牛生长激素和兔β-珠蛋白；以及能够控制真核细胞中基因表达的其它序列。另外合适的转录控制区包括组织特异性启动子和增强子以及淋巴因子诱导型启动子(例如，通过干扰素或白细胞介素诱导的启动子)。
类似地，本领域普通技术人员已知多种翻译控制元件。这些包括但不限于核糖体结合位点、翻译起始和终止密码子以及衍生自小核糖核酸病毒的元件(特别是内部核糖体进入位点或IRES，也称为CITE序列)。
在其它实施方案中，多核苷酸可以是例如信使RNA(mRNA)形式的RNA。
多核苷酸和核酸编码区可与编码分泌肽或信号肽的另外编码区相关，所述分泌肽或信号肽指导由如本文所公开的多核苷酸(例如，编码本文提供的多肽亚基的多核苷酸)编码的多肽的分泌。根据信号假说，哺乳动物细胞分泌的蛋白质具有信号肽或分泌前导序列，一旦启动生长蛋白链穿过糙面内质网的输出，该序列就从成熟蛋白上切割下来。本领域普通技术人员知道，脊椎动物细胞分泌的多肽通常具有与多肽的N-末端融合的信号肽，其从完整的或“全长”的多肽上切割下来以产生多肽的分泌的或“成熟的”形式。在某些实施方案中，使用天然信号肽，例如免疫球蛋白重链或轻链信号肽，或该序列的功能衍生物，其保留了指导与其可操作地相关的多肽分泌的能力。可选地，可以使用异源哺乳动物信号肽或其功能衍生物。例如，野生型前导序列可以被人组织纤溶酶原激活物(TPA)或小鼠β-葡糖醛酸糖苷酶的前导序列取代。
“载体”是引入宿主细胞中从而产生转化的宿主细胞的核酸分子。载体可以包括允许其在宿主细胞中复制的核酸序列，如复制起点。载体还可以包括一个或多个选择性标志物基因和本领域已知的其它遗传元件。
“转化的”细胞或“宿主”细胞是通过分子生物学技术将核酸分子引入其中的细胞。如本文所用，术语“转化”涵盖那些技术，通过所述技术可以将核酸分子引入到这样的细胞中，包括用病毒载体转染，用质粒载体转化和通过电穿孔、脂质转染和粒子枪加速引入裸DNA。转化细胞或宿主细胞可以是细菌细胞或真核细胞。
本文所用的术语“表达”是指基因产生生物化学物质(例如多肽)的过程。该过程包括细胞内基因功能性存在的任何表现，包括但不限于基因敲低以及瞬时表达和稳定表达。它包括但不限于将基因转录成信使RNA(mRNA)，以及将这种mRNA翻译成多肽。如果最终的所需产物是生物化学物质，则表达包括该生物化学物质和任何前体的产生。基因的表达产生“基因产物”。如本文所用，基因产物可以是核酸，例如通过基因转录产生的信使RNA，或从转录物翻译的多肽。本文所述的基因产物还包括具有转录后修饰(例如聚腺苷酸化)的核酸或具有翻译后修饰(例如甲基化、糖基化、添加脂质、与其它蛋白亚基结合、蛋白水解切割等)的多肽。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”或“治疗(treatment of)”(例如，在短语“治疗对象”中)是指降低疾病病理学的可能性，降低疾病症状的发生，例如达到对象具有更长的存活率或降低的不适的程度。例如，治疗可以指当施用于对象时，治疗减少疾病症状、体征或病因的能力。治疗还指减轻或减少至少一种临床症状和/或抑制或延迟病况的进展和/或预防或延迟疾病或病症的发作。
“对象”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”意指需要诊断、预后或治疗的任何对象，特别是哺乳动物对象。哺乳动物对象包括人、家畜、农场动物、运动动物和动物园动物，包括例如人、非人灵长类动物、狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、牛、熊等。
术语“药物组合物”是指这样的制剂，其处于允许活性成分的生物活性有效的形式，并且其不包含对将向其施用组合物的对象具有不可接受的毒性的另外组分。这种组合物可以是无菌的。
本文公开的抗体的“有效量”是足以实现具体所述目的的量。“有效量”可以根据经验并以常规方式与所述目的相关地确定。
出于本公开内容的目的，通过比对来自多种抗体的CDR序列，例如克隆谱系6抗体的VL-CDR3氨基酸序列，可以确定CDR区的共有序列：
R50[CL6.1] SSYAGRNALL
R53[CL6.2] SSYAGRRILL
R55[CL6.3]SSYAGRNALL
其中相应的共有序列是SSYAGRX1X2LL，并且其中X1是N或R，并且X2是A或I。
丝状病毒结合分子
本公开内容提供了丝状病毒结合分子，例如抗丝状病毒抗体或其抗原结合片段，其包含抗体的至少一部分，例如至少一个CDR、至少三个CDR、至少六个CDR、至少一个VH、至少一个VL或至少一个VH和VL。在某些实施方案中，所述丝状病毒结合分子是或衍生自非人灵长类动物(NHP)抗体或其抗原结合片段。例如，来自猕猴，例如恒河猴(Macaca mulatta)。这种结合分子可用于治疗例如来自马尔堡病毒属的病毒，如马尔堡病毒或拉夫病毒的丝状病毒感染。本公开内容提供了分离的结合分子或其抗原结合片段，其包含特异性结合保守的马尔堡病毒或拉夫病毒表位的结合结构域。在某些实施方案中，结合分子或其抗原结合片段是分离的抗体或其抗原结合片段。在某些方面，结合分子可以是双特异性抗体，其可以促进结合分子，例如通过第二结合结构域，靶向丝状病毒感染的细胞的内体区。参见，例如，2016年12月23日提交的美国专利申请系列号15/321,833，将其通过引用以其整体并入本文。在某些实施方案中，结合结构域特异性结合由定位于GP1中的氨基酸位置58、65、87、90和120以及内部融合环(残基514-551)内的GP2氨基酸511、514和如本文别处详细描述的IFL远端的氨基酸560组成的表位
在某些实施方案中，结合分子或其抗原结合片段的结合结构域可以结合与抗体或其抗原结合片段相同的保守马尔堡病毒或拉夫病毒表位，所述抗体或其抗原结合片段分别包含以下氨基酸序列中任一个的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)：SEQ ID NO:1和SEQID NO:5(R45)[克隆谱系CL1.1]；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；SEQ IDNO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；SEQ IDNO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；SEQ IDNO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；SEQID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:137和SEQID NO:141(R55)[CL6.3]。此外，在某些实施方案中，结合结构域能够竞争性地抑制抗体或其抗原结合片段的抗原结合，所述抗体或其抗原结合片段分别包含以下氨基酸序列中任一个的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[克隆谱系CL1.1]；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:65和SEQ IDNO:69(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:81和SEQID NO:85(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。在某些实施方案中，示例性结合结构域可衍生自表3中所述的任何抗体的VH和VL抗原结合结构域和/或CDR区。
本公开内容提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其包含特异性结合保守的马尔堡病毒或拉夫病毒表位的结合结构域。在某些实施方案中，所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：SEQ ID NO:2、3、4、6、7和8(R45)[克隆谱系CL1.1]；SEQ ID NO:10、11、12、14、15和16(R79)[CL1.2]；SEQID NO:18、19、20、22、23和24(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:26、27、28、30、31和32(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:34、35、36、38、39和40(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:42、43、44、46、47和48(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:50、51、52、53、54和55(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:58、59、60、62、63和64(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:66、67、68、70、71和72(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:74、75、76、78、79和80(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:82、83、84、86、87和88(R224)[CL3.2]；SEQ IDNO:90、91、92、94、95和96(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:98、99、100、102、103和104(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:106、107、108、110、111和112(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:114、115、116、118、119和120(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:122、123、124、126、127和128(R50)[CL6.1]；SEQID NO:130、131、132、134、135和136(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:138、139、140、142、143和144(R55)[CL6.3]。
在某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系1的抗体相同的或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与本文描述为属于克隆谱系1的抗体相同的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列：SEQ ID NO:2、3、4、6、7和8(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:10、11、12、14、15和16(R79)[CL1.2]；或者SEQ ID NO:18、19、20、22、23和24(R80)[CL1.3]。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，其中至少一个是本文描述为属于克隆谱系1的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所有这些氨基酸序列分别包含本文描述为属于克隆谱系1的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含本文描述为属于克隆谱系1的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，即，其中VH-CDR1氨基酸序列选自2、10和18；其中VH-CDR2氨基酸序列选自3、11和19；其中VH-CDR3氨基酸序列选自4、12和20；其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自6、14和22；其中VL-CDR2氨基酸序列选自7、15和23；并且其中VL-CDR3氨基酸序列选自8、16和24。
在某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系2的抗体相同的或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与本文描述为属于克隆谱系2的抗体相同的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列：SEQ ID NO:26、27、28、30、31和32(R13)[CL2.1]；SEQ IDNO:34、35、36、38、39和40(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:42、43、44、46、47和48(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:50、51、52、53、54和55(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:58、59、60、62、63和64(R29)[CL2.5]；或者SEQ ID NO:66、67、68、70、71和72(R39)[CL2.6]。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，其中至少一个是本文描述为属于克隆谱系2的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所有这些氨基酸序列分别包含本文描述为属于克隆谱系2的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含本文描述为属于克隆谱系2的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，即，其中VH-CDR1氨基酸序列选自26、34、42、50、58和66；其中VH-CDR2氨基酸序列选自27、35、43、51、59和67；其中VH-CDR3氨基酸序列选自28、36、44、52、60和68；其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自30、38、46、54、62和70；其中VL-CDR2氨基酸序列选自31、39、47、55、63和71；并且其中VL-CDR3氨基酸序列选自32、40、48、56、64和72。
在某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系3的抗体相同的或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与本文描述为属于克隆谱系3的抗体相同的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列：SEQ ID NO:74、75、76、78、79和80(R217)[CL3.1]；或者SEQID NO:82、83、84、86、87和88(R224)[CL3.2]。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，其中至少一个是本文描述为属于克隆谱系3的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所有这些氨基酸序列分别包含本文描述为属于克隆谱系3的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含本文描述为属于克隆谱系3的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，即，其中VH-CDR1氨基酸序列选自74和82；其中VH-CDR2氨基酸序列选自75和83；其中VH-CDR3氨基酸序列选自76和84；其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自78和86；其中VL-CDR2氨基酸序列选自79和87；并且其中VL-CDR3氨基酸序列选自80和88。
在某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系4的抗体相同的或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与本文描述为属于克隆谱系4的抗体相同的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列：SEQ ID NO:90、91、92、94、95和96(R18)[CL4.1]；或者SEQID NO:98、99、100、102、103和104(R63)[CL4.2]。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，其中至少一个是本文描述为属于克隆谱系4的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所有这些氨基酸序列分别包含本文描述为属于克隆谱系4的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含本文描述为属于克隆谱系4的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，即，其中VH-CDR1氨基酸序列选自90和98；其中VH-CDR2氨基酸序列选自91和99；其中VH-CDR3氨基酸序列选自92和100；其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自94和102；其中VL-CDR2氨基酸序列选自95和103；并且其中VL-CDR3氨基酸序列选自96和104。
在某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系5的抗体相同的或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与本文描述为属于克隆谱系5的抗体相同的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列：SEQ ID NO:106、107、108、110、111和112(R64)[CL5.1]；或者SEQ ID NO:114、115、116、118、119和120(R83)[CL5.2]。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，其中至少一个是本文描述为属于克隆谱系5的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所有这些氨基酸序列分别包含本文描述为属于克隆谱系5的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含本文描述为属于克隆谱系5的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，即，其中VH-CDR1氨基酸序列选自106和114；其中VH-CDR2氨基酸序列选自107和115；其中VH-CDR3氨基酸序列选自108和116；其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自110和118；其中VL-CDR2氨基酸序列选自111和119；并且其中VL-CDR3氨基酸序列选自112和120。
在某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系6的抗体相同的或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与本文描述为属于克隆谱系6的抗体相同的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列：SEQ ID NO:122、123、124、126、127和128(R50)[CL6.1]；SEQID NO:130、131、132、134、135和136(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:138、139、140、142、143和144(R55)[CL6.3]。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，其中至少一个是本文描述为属于克隆谱系6的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含以上VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所有这些氨基酸序列分别包含本文描述为属于克隆谱系6的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的共有序列。在某些实施方案中，所述结合结构域包含本文描述为属于克隆谱系6的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，即，其中VH-CDR1氨基酸序列选自122、130和138；其中VH-CDR2氨基酸序列选自123、131和139；其中VH-CDR3氨基酸序列选自124、132和140；其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自126、134和142；其中VL-CDR2氨基酸序列选自127、135和143；并且其中VL-CDR3氨基酸序列选自128、126和144。
在某些实施方案中，所述结合结构域包含本文描述为属于克隆谱系3、4、5和6的抗体的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，即，其中VH-CDR1氨基酸序列选自74、82、90、98、106、114、122、130和138；其中VH-CDR2氨基酸序列选自75、83、91、99、107、115、123、131和139；其中VH-CDR3氨基酸序列选自76、84、92、100、108、116、124、132和140；其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自78、86、94、102、110、118、126、134和142；其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自79、87、95、103、111、119、127、135和143；并且其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自80、88、96、104、112、120、128、136和144。
在某些实施方案中，所述结合结构域包含与表3中的抗体，即R45、R79、R80、R13、R15、R24、R25、R29、R39、R217、R224、R18、R63、R64、R83、R50、R53或R55相同的所有VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列。
在本公开内容的抗体或其抗原结合片段的某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:41和SEQ IDNO:45(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:57和SEQ IDNO:61(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:73和SEQ IDNO:77(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:89和SEQID NO:93(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。在本公开内容的抗体或其抗原结合片段的某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系1，即SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；或SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]的抗体的参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列。在本公开内容的抗体或其抗原结合片段的某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系2，即SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R26)[CL2.5]；或者SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]的抗体的参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列。在本公开内容的抗体或其抗原结合片段的某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系3，即SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；或者SEQID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]的抗体的参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列。在本公开内容的抗体或其抗原结合片段的某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系4，即SEQ IDNO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；或者SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]的抗体的参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列。在本公开内容的抗体或其抗原结合片段的某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系5，即SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；或者SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]的抗体的参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列。在本公开内容的抗体或其抗原结合片段的某些实施方案中，所述结合结构域包含分别与本文描述为属于克隆谱系6，即SEQID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]的抗体的参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列。
在本公开内容的抗体或其抗原结合片段的某些实施方案中，所述结合结构域包含与表3中的抗体，即R45、R79、R80、R13、R15、R24、R25、R29、R39、R217、R224、R18、R63、R64、R83、R50、R53和R55相同的VH、VL或VH和VL氨基酸序列。
在任何上述抗体或其抗原结合片段的某些中，所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR相同或者除了一个或多个CDR中三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外与所述CDR相同。在任何上述抗体或其抗原结合片段的某些中，所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外与所述CDR序列相同。在任何上述抗体或其抗原结合片段的某些中，所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外与所述CDR序列相同。在任何上述抗体或其抗原结合片段的某些中，所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单个氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同。在任何上述抗体或其抗原结合片段的某些中，所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中三个、两个或一个单个氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同。在任何上述抗体或其抗原结合片段的某些中，所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中两个或一个单个氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同。在任何上述抗体或其抗原结合片段的某些中，所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中一个单个氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同。
在某些实施方案中，本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可以是例如NHP抗体、人源化抗体、嵌合抗体或其片段。此外，所述抗体或其抗原结合片段可以是单克隆抗体、多克隆抗体混合物的组分、重组抗体、多特异性抗体或以上的任何组合。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。
在某些实施方案中，本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可以是还包含第二结合结构域的双特异性抗体和/或结合分子，或其抗原结合片段。
本文提供的某些双特异性抗体可经工程化以靶向丝状病毒感染细胞的内体区。参见，例如，2016年12月23日提交的美国专利申请系列号15/321,833，将其通过引用以其整体并入本文。例如，双特异性抗体可包含第二结合结构域，所述第二结合结构域特异性结合丝状病毒表位，所述丝状病毒表位在丝状病毒病毒体颗粒上可以是表面暴露的并且能接近所述第二结合结构域。在该实施方案中，双特异性抗体可靶向感染细胞的内体区室，其中组织蛋白酶可切割掩盖天然丝状病毒病毒体颗粒上的受体结合区的粘蛋白样结构域，从而打开受体结合区直至第一结合结构域，该第一结合结构域然后可结合病毒并中和病毒感染性。在某些实施方案中，第二结合结构域可结合病毒体颗粒上的表面暴露表位，例如，第二结合结构域可特异性结合位于粘蛋白样结构域中的表位、位于聚糖帽中的表位、位于GP2融合结构域中的表位或以上的任何组合。在某些实施方案中，丝状病毒属于马尔堡病毒属。在某些实施方案中，丝状病毒是马尔堡病毒或者丝状病毒是拉夫病毒。
在某些实施方案中，本文提供的抗体或其片段可包含重链恒定区或其片段。重链可以是鼠恒定区或其片段、恒河猴恒定区或其片段或者人恒定区或其片段，例如IgM、IgG、IgA、IgE、IgD或IgY恒定区或其片段。也可考虑各种人IgG恒定区亚型或其片段，例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区或其片段。
在某些实施方案中，本文提供的抗体或其片段可包含轻链恒定区或其片段。例如，轻链恒定区或其片段可以是鼠恒定区或其片段、恒河猴恒定区或其片段或者人恒定区或其片段，例如人k或λ恒定区或其片段。
在某些实施方案中，本文提供的抗体或其片段的结合结构域包含含有两条重链和两条轻链的全尺寸抗体。在其它实施方案中，本文提供的抗体或其片段的结合结构域包含Fv片段、Fab片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、dsFv片段、scFv片段、scFab片段、sc(Fv)2片段或以上的任何组合。
在某些方面，本公开内容提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段还包含与异源抗原或表位结合的第二结合结构域。在某些方面，本文提供的抗体或其片段的第二结合结构域包含含有两条重链和两条轻链的全尺寸抗体。在其它方面，本文提供的NHP衍生的泛丝状病毒抗体或其片段的第二结合结构域包含Fv片段、Fab片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、dsFv片段、scFv片段、scFab片段、sc(Fv)2片段或以上的任何组合。
在某些方面，本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段完全或部分中和丝状病毒的感染性。在某些实施方案中，这发生在结合结构域与丝状病毒上的表位结合时。在某些实施方案中，丝状病毒属于马尔堡病毒属。在某些实施方案中，丝状病毒是马尔堡病毒或拉夫病毒。
在某些方面，本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可与抗病毒剂、蛋白质、脂质、可检测标记、聚合物或以上的任何组合缀合。
本公开内容还提供了包含本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段以及载体的组合物。
多核苷酸
本公开内容的某些实施方案提供了分离的多核苷酸，其包含编码抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段或其亚基的核酸。在某些实施方案中，本文提供的多核苷酸可包括编码VH的核酸，其中所述VH包含VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述VH-CDR分别包含分别与以下相同的或者除了一个或多个VH-CDR中四个、三个、两个或一个单个氨基酸取代、缺失或插入之外与以下相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、3和4(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:10、11和12(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:18、19和20(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:26、27和28(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:34、35和36(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:42、43和44(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:50、51和52(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:58、59和60(R29)[CL2.5]；SEQID NO:66、67和68(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:74、75和76(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:82、83和84(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:90、91和92(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:98、99和100(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:106、107和108(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:114、115和116(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:122、123和124(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:130、131和132(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:138、139和140(R55)[CL6.3]。
在某些实施方案中，本文提供的多核苷酸可包括编码VL的核酸，其中所述VL包含VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述VL-CDR分别包含分别与以下相同的或者除了一个或多个VH-CDR中四个、三个、两个或一个单个氨基酸取代、缺失或插入之外与以下相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:6、7和8(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:14、15和16(R79)[CL1.2]；SEQ IDNO:22、23和14(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:30、31和32(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:38、39和40(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:46、47和48(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:54、55和56(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:62、63和64(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:70、71和72(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:78、79和80(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:86、87和88(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:94、95和96(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:102、103和104(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:110、111和112(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:118、119和120(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:126、127和128(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:134、135和136(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:142、143和144(R55)[CL6.3]。
在某些实施方案中，本文提供的多核苷酸包含编码VH的核酸，所述VH包含与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ IDNO:1(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:9(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:17(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:25(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:33(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:41(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:49(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:57(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:65(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:73(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:81(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:89(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:97(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:105(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:113(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:121(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:129(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:137(R55)[CL6.3]。在某些方面，本文提供的多核苷酸包含编码VL的核酸，其中所述VL包含与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
本公开内容还提供了包含本文提供的多核苷酸的载体以及还提供了包含本文提供的多核苷酸或载体的组合物。
在某些实施方案中，本公开内容提供了编码抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的多核苷酸或多核苷酸的组合。在某些实施方案中，所述多核苷酸或多核苷酸的组合可以包含编码VH的核酸和编码VL的核酸，其中所述VH和VL包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：SEQ ID NO:2、3、4、6、7和8(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:10、11、12、14、15和16(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:18、19、20、22、23、24(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:26、27、28、29、30、31和32(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:34、35、36、38、39和40(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:42、43、44、46、47和48(R24)[CL2.3]；SEQID NO:50、51、52、54、55和56(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:58、59、60、62,63和64(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:66、67、68、70、71和72(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:74、75、76、78、79和80(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:82、83、84、86、87和88(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:90、91、92、94、95和96(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:98、99、100、102、103和104(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:106、107、108、110、111和112(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:114、115、116、118、119和120(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:122、123、124、126、127和128(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:130、131、132、134、135和136(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:138、139、140、142、143和144(R55)[CL6.3]。
在某些方面，所述多核苷酸或多核苷酸的组合可以包含编码VH的核酸和编码VL的核酸，其中所述VH和VL包含分别与选自以下的参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；SEQ IDNO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；SEQ IDNO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；SEQ IDNO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；SEQ IDNO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；SEQ IDNO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；SEQID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；以及SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
在本文提供的多核苷酸或多核苷酸组合的某些实施方案中，编码VH的核酸和编码VL的核酸可以在相同的载体中。也提供了这种载体。在某些其它实施方案中，本文提供的包含编码VH的核酸和编码VL的核酸的多核苷酸或多核苷酸的组合可以在不同的载体中。也提供了这种载体。本公开内容还提供了包含本文提供的多核苷酸或多核苷酸的组合或所提供的一种或多种载体的宿主细胞。
此外，本公开内容提供了制备抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的方法。这种方法包括培养所提供的宿主细胞；以及分离所述抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段。
在某些实施方案中，所述多核苷酸包含成熟抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的编码序列，其与允许例如纯化所编码的多肽的标志物序列在同一阅读框中融合。例如，标志物序列可以是由pQE-9载体提供的六聚组氨酸标签，以在细菌宿主的情况下纯化与标志物融合的成熟多肽，或者当可以使用哺乳动物宿主(例如COS-7细胞)时，标志物序列可以是衍生自流感血凝素蛋白的血凝素(HA)标签。
还提供了多核苷酸变体。多核苷酸变体可含有编码区、非编码区或两者的改变。在一些实施方案中，多核苷酸变体含有产生沉默取代、添加或缺失，但不改变所编码多肽的特性或活性的改变。在一些实施方案中，由于遗传密码的简并性，可以通过沉默取代产生多核苷酸变体。多核苷酸变体可以由于多种原因产生，例如，为了优化特定宿主的密码子表达(将人mRNA中的密码子改变为细菌宿主如大肠杆菌优选的那些密码子)。还提供了包含本文所述多核苷酸的载体和细胞。
在一些实施方案中，编码抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的DNA序列可以通过使用寡核苷酸合成仪的化学合成来构建。这种寡核苷酸可根据所需多肽的氨基酸序列设计，并选择在将产生重组目的多肽的宿主细胞中有利的那些密码子。可以应用标准方法来合成编码分离的目的多肽的分离的多核苷酸序列。例如，可以使用完整的氨基酸序列构建反向翻译的基因。此外，可以合成含有编码特定分离多肽的核苷酸序列的DNA寡聚物。例如，可以合成编码所需多肽部分的几个小寡核苷酸，然后连接。对于互补组装，各个寡核苷酸通常含有5’或3’突出端。
一旦组装(通过合成、定点诱变或另一种方法)，可以将编码特定分离的目的多肽的多核苷酸序列插入表达载体中，并可操作地连接到适于蛋白质在所需宿主中表达的表达控制序列。可以例如通过核苷酸测序、限制性图谱和/或在合适的宿主中生物活性多肽的表达来证实正确的组装。为了在宿主中获得转染基因的高表达水平，该基因可以与在选择的表达宿主中有功能的转录和翻译表达控制序列可操作地连接或关联。
在某些实施方案中，重组表达载体可用于扩增和表达编码抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的DNA。重组表达载体是可复制的DNA构建体，其可操作地连接到衍生自哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因的合适的转录或翻译调控元件的具有编码抗丝状病毒抗体或和其抗原结合片段的多肽链的合成的或cDNA衍生的DNA片段。转录单位通常包含以下的组装体：(1)在基因表达中具有调节作用的一个或多个遗传元件，例如转录启动子或增强子，(2)可转录成mRNA并翻译成蛋白质的结构或编码序列，和(3)适当的转录和翻译起始和终止序列，如下文详细描述的。这种调控元件可以包括控制转录的操纵子序列。可以另外掺入由复制起点赋予的在宿主中复制的能力以及促进转化子识别的选择基因。DNA区域在功能上彼此相关时，它们是可操作地连接的。例如，如果信号肽(分泌前导序列)的DNA作为参与多肽分泌的前体表达，则其与多肽的DNA可操作地连接；如果启动子控制序列的转录，则其可操作地连接到编码序列；或者如果将核糖体结合位点定位以允许翻译，则该核糖体结合位点可操作地连接到编码序列上。旨在用于酵母表达系统的结构元件包括使得宿主细胞能够胞外分泌翻译蛋白的前导序列。可选地，当重组蛋白在没有前导序列或转运序列的情况下表达时，该蛋白可以包括N-末端甲硫氨酸。该甲硫氨酸可以任选地随后从表达的重组蛋白上切割下来以提供最终产物。
表达控制序列和表达载体的选择将取决于宿主的选择。可以使用多种表达宿主/载体组合。用于真核宿主的有用表达载体包括，例如，包含来自SV40、牛乳头瘤病毒、腺病毒和巨细胞病毒的表达控制序列的载体。用于细菌宿主的有用表达载体包括已知的细菌质粒，如来自大肠杆菌的质粒，包括pCR1、pBR322、pMB9及其衍生物，更宽宿主范围的质粒，如M13和丝状单链DNA噬菌体。
用于表达抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的合适宿主细胞包括在适当启动子控制下的原核生物、酵母、昆虫或高等真核细胞。原核生物包括革兰氏阴性或革兰氏阳性有机体，例如大肠杆菌或杆菌。高等真核细胞包括如下所述的已建立的哺乳动物来源的细胞系。也可使用无细胞翻译系统。关于蛋白质生产(包括抗体生产)方法的另外信息可见于例如美国专利公开号2008/0187954、美国专利第6,413,746号和第6,660,501号以及国际专利公开号WO 04009823，其各自在此通过引用以其整体并入本文。
各种哺乳动物或昆虫细胞培养系统也可用于表达抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段。可以在哺乳动物细胞中进行重组蛋白的表达，因为这种蛋白通常是正确折叠的、适当修饰的并且具有完全的功能。合适的哺乳动物宿主细胞系的实例包括HEK-293和HEK-293T，由Gluzman(Cell 23:175,1981)所述的猴肾细胞的COS-7系，以及其它细胞系，包括例如L细胞、C127、3T3、中国仓鼠卵巢(CHO)、HeLa和BHK细胞系。哺乳动物表达载体可以包含非转录元件，如复制起点，与待表达基因连接的合适的启动子和增强子，和其它5’或3’侧翼非转录序列及5’或3’非翻译序列，如核糖体结合位点、聚腺苷酸化位点、剪接供体和受体位点，和转录终止序列。Luckow和Summers,BioTechnology 6:47(1988)综述了用于在昆虫细胞中产生异源蛋白的杆状病毒系统。
由转化的宿主产生的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可以根据任何合适的方法纯化。这种标准方法包括色谱法(例如，离子交换、亲和力和定径柱色谱法)，离心，差异溶解度，或通过用于蛋白质纯化的任何其它标准技术。亲和标签如六聚组氨酸、麦芽糖结合结构域、流感病毒外壳序列和谷胱甘肽-S-转移酶可以连接到蛋白质上，以允许通过适当的亲和柱容易地纯化。分离的蛋白质也可以使用诸如蛋白质水解、核磁共振和x-射线晶体学的技术进行物理表征。
例如，来自将重组蛋白分泌到培养基中的系统的上清液可以首先使用可商购获得的蛋白浓缩过滤器，例如，Amicon或Millipore Pellicon超滤装置浓缩。在浓缩步骤之后，可以将浓缩物施加到合适的纯化基质上。可选地，可以使用阴离子交换树脂，例如，具有侧挂(pendant)二乙基氨基乙基(DEAE)基团的基质(matrix)或基底(substrate)。基质可以是丙烯酰胺、琼脂糖、葡聚糖、纤维素或蛋白质纯化中使用的其它类型。可选地，可使用阳离子交换步骤。合适的阳离子交换剂包括含有磺丙基或羧甲基的各种不溶性基质。最后，一个或多个使用疏水性RP-HPLC介质(例如具有侧挂甲基或其它脂族基团的硅胶)的反相高效液相色谱(RP-HPLC)步骤可以用于进一步纯化抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段。也可以使用各种组合的一些或所有前述纯化步骤来提供均质的重组蛋白。
在细菌培养中产生的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可以例如通过从细胞沉淀中初始提取，随后进行一个或多个浓缩、盐析、水性离子交换或尺寸排阻色谱步骤来分离。高效液相色谱(HPLC)可用于最终的纯化步骤。可以通过任何方便的方法破坏用于表达重组蛋白的微生物细胞，包括冻融循环、超声处理、机械破坏或使用细胞裂解剂。
本领域已知的用于纯化抗体和其它蛋白质的方法还包括，例如，美国专利公开号2008/0312425、2008/0177048和2009/0187005中描述的那些，将其各自在此通过引用以其整体并入本文。
预防、治疗和管理的方法
提供了使用本公开内容的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段治疗患有与丝状病毒感染有关的疾病或病况的患者，或者预防、降低或管理感染有丝状病毒的对象的丝状病毒诱导的毒力的方法。在某些实施方案中，所述丝状病毒是马尔堡病毒属。在某些实施方案中，所述丝状病毒是马尔堡病毒、拉夫病毒或其任何组合。在某些实施方案中，所述丝状病毒感染是出血热。在某些实施方案中，所述对象或患者是非人灵长类动物或人。
以下论述涉及诊断方法和用本公开内容的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段治疗各种疾病和病症的方法，所述抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段保留了本文提供的抗丝状病毒抗体的所需特性，例如能够特异性结合并中和丝状病毒感染性和/或毒力。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可以是鼠抗体、人抗体或人源化抗体。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段包含结合结构域，所述结合结构域结合与本文提供的抗体R45、R79、R80、R13、R15、R24、R25、R29、R39、R217、R224、R18、R63、R64、R83、R50、R53和R55中的一种或多种相同的表位，或者竞争性抑制本文提供的抗体R45、R79、R80、R13、R15、R24、R25、R29、R39、R217、R224、R18、R63、R64、R83、R50、R53和R55中的一种或多种的结合。在一些实施方案中，本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的结合结构域可衍生自本文提供的抗体R45、R79、R80、R13、R15、R24、R25、R29、R39、R217、R224、R18、R63、R64、R83、R50、R53和R55中的一种或多种。在某些实施方案中，衍生抗体的结合结构域可以是亲和力成熟的、嵌合的或人源化的抗体。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段还包含第二结合结构域，其可以将所述结合结构域靶向病毒感染细胞的内体。
在一个实施方案中，治疗包括将本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段应用或施用至对象或患者，其中所述对象或患者已经暴露于丝状病毒、感染有丝状病毒、患有丝状病毒疾病、具有丝状病毒疾病的症状或具有感染丝状病毒疾病的倾向。在另一个实施方案中，治疗还可以包括将包含本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的药物组合物应用或施用至对象或患者，以便将所述药物组合物靶向其中抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可以是最有效的环境，例如病毒感染细胞的内体区。
根据本公开内容的方法，至少一种如本文别处所定义的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可用于促进阳性治疗反应。“阳性治疗反应”是指与抗体、结合分子等的活性相关的疾病状况的任何改善和/或与疾病相关的症状的改善。因此，例如，疾病的改善可以表征为完全反应。“完全反应”是指不存在临床上可检测的疾病以及任何先前的测试结果正常化。在一些情况下，在根据本公开内容的方法治疗后这种反应可以持续例如至少一个月。可选地，疾病的改善可以归类为部分反应。
药物组合物和施用方法
制备本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段以及将其施用至有需要的对象的方法是本领域技术人员熟知的或容易确定的。施用途径可以是，例如，口服、肠胃外、通过吸入或局部。本文所用的术语“肠胃外”包括例如静脉内施用、动脉内施用、腹膜内施用、肌内施用、皮下施用、直肠施用或阴道施用。虽然所有这些施用形式都被清楚地考虑为合适的形式，但用于施用的形式的另一个实例是用于注射的溶液，特别是用于静脉内或动脉内注射或滴注。在一些情况下，合适的药物组合物可以包含缓冲液(例如乙酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲液)，表面活性剂(例如聚山梨醇酯)，任选的稳定剂(例如人白蛋白)等。在与本文教导相容的其它方法中，本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可直接递送至其中结合分子可有效中和病毒的部位，例如丝状病毒感染细胞的内体区。
如本文所论述的，本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可以以用于体内治疗与丝状病毒感染相关的疾病或病症的药学有效量施用。在这方面，应理解，可以配制所公开的抗体和结合分子，以便施用并促进活性剂的稳定性。因此，药物组合物可包含药学上可接受的无毒无菌载体，如生理盐水、无毒缓冲液、防腐剂等。抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的药学有效量意指足以实现与靶标的有效结合并实现益处，例如改善疾病或病况的症状或者检测物质或细胞的量。用于本文公开的治疗方法的合适制剂可描述在Remington's Pharmaceutical Sciences(MackPublishing Co.)，第16版，(1980)中。
可与载体材料组合以产生单一剂型的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的量将根据所治疗的对象和特定的施用方式而变化。组合物可以以单剂量、多剂量或在输注中在确定的时间段内施用。还可以调节剂量方案以提供最佳所需的反应(例如，治疗性或预防性反应)。
根据本公开内容的范围，抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可以以足以产生治疗效果的量施用至人或其它动物，如非人灵长类动物。本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可以根据已知技术将本公开内容的抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物与常规药学上可接受的载体或稀释剂组合制备的常规剂型施用至这种人或其它动物。药学上可接受的载体或稀释剂的形式和特征可以由与其组合的活性成分的量、施用途径和其它熟知的变量来决定。
“治疗有效剂量或量”或“有效量”是指抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的量，其在施用时对患有待治疗的疾病或病况的患者的治疗产生积极治疗反应。
用于治疗与丝状病毒感染相关的疾病或病症的本文公开的组合物的治疗有效剂量根据许多不同的因素而变化，包括施用方式、靶位点、患者的生理状态、患者是人还是动物、施用的其它药物以及治疗是预防性的还是治疗性的。通常，患者是人，但也可以治疗包括非人灵长类动物在内的非人哺乳动物。可以使用本领域技术人员已知的常规方法滴定治疗剂量以优化安全性和功效。
影响抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的施用模式和各自量的因素包括但不限于疾病的严重程度，疾病史以及进行治疗的个体的年龄、身高、体重、健康和身体状况。类似地，待施用的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的量将取决于施用模式以及对象将接受该药剂的单剂量还是多剂量。
本公开内容还提供了抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段在制备用于治疗、预防或管理与丝状病毒感染相关的疾病或病症(例如出血热)的药物中的用途。
包含NHP衍生的泛丝状病毒结合分子的试剂盒
本公开内容还提供了试剂盒，其包含本文所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段，并且可用于执行本文所述的方法。在某些实施方案中，试剂盒包含在一个或多个容器中的本文公开的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段、或者组合物、治疗剂或诊断剂。在一些实施方案中，试剂盒包含进行检测测定所必需和/或足够的所有组分，包括对照、进行测定的指导以及用于分析和呈现结果的软件。
免疫测定
抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段可通过本领域已知的任何方法测定免疫特异性结合。可使用的免疫测定包括但不限于使用诸如蛋白质印迹、放射免疫测定、ELISA(酶联免疫吸附测定)、“夹心”免疫测定、免疫沉淀测定、沉淀反应、凝胶扩散沉淀反应、免疫扩散测定、凝集测定、补体固定测定、免疫放射测定、荧光免疫测定、蛋白A免疫测定等的技术的竞争性和非竞争性测定系统。这种测定是常规的和本领域熟知的(参见，例如，Ausubel等人编,(1994)Current Protocols in Molecular Biology(JohnWiley&Sons,Inc.,NY)，第1卷，将其通过引用以其整体并入本文)。
在某些方面，本公开内容提供了诊断试剂盒。在某些方面，这种试剂盒包含便携式免疫测定，其可以由保健提供者在护理点进行以提供患者是否感染丝状病毒(例如EBOV)的快速指示。各种护理点诊断测定是本领域已知的和使用的。参见，例如，Pfeilsticker,JA等人,PLoS One 8:e76224(2013)；Wang,HK等人,Adv Healthc Mater 3:187-96(2014)；Yetisen,AK等人,Lab Chip 13:2210-51(2013)；Loubiere,S.和Moatti,JP,ClinMicrobiol Infect 16:1070-6(2010)；以及Offermann,N.等人,J Immunol Methods 403:1-6(2014)；所有这些通过引用以其整体并入本文。
在某些方面，本公开内容提供的诊断试剂盒包含抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段，或者包含如本文提供的这种抗体或者结合分子或其抗原结合片段的组合物，以及使用所述结合分子或抗体或其片段或者使用所述组合物的说明书或者用于获得使用所述抗体或者结合分子或其抗原结合片段或者使用所述组合物的说明书。在某些方面，试剂盒可以是测试条的形式，例如封装在塑料盒中，其中测试条包含过滤器或其它固体支持物。在某些方面，如本文提供的结合分子或抗体可与固体支持物缔合，或者可在测定中的某一点处在缓冲液或其它溶液中施加到固体支持物。固体支持物可以是，例如，珠粒、过滤器、膜或多孔板。在一些方面，诊断试剂盒是酶联免疫吸附测定(ELISA)的形式。例如，本文提供的抗体或结合分子可以与固体支持物缔合，从对象获得的样品可以施加到固体支持物，并且可以用第二抗体检测对象样品中的任何丝状病毒抗原。在某些方面，可以将样品直接施加到固体支持物上，并且可以通过固体支持物上其它地方的抗体或结合分子进行检测，或者可以将抗体直接施加到样品上。在每种情况下，可以用与酶缀合的第二抗体或其它试剂来检测抗体，所述酶可以通过例如颜色变化来检测。
在某些实施方案中，诊断测试可以由保健提供者在护理点使用如本文提供的试剂盒进行，从而诊断患者是否感染丝状病毒。在某些实施方案中，丝状病毒属于马尔堡病毒属。在某些实施方案中，丝状病毒是马尔堡病毒或拉夫病毒。如本文所用，术语“健康提供者”是指直接与活体对象(例如人类患者)相互作用并向其施用的个体或机构。保健提供者的非限制性实例包括医生，护士，技师，治疗师，药剂师，顾问，替代的医学执业者，医疗机构，医生办公室，医院，急诊室，诊所，紧急护理中心，替代的医学诊所/机构以及提供与患者健康状态的全部或任何部分相关的一般和/或专门治疗、评估、维护、疗法、药物和/或建议的任何其它实体，包括但不限于一般医学、专业医学、手术和/或任何其它类型的治疗、评估、维护、疗法、药物和/或建议。
在某些方面，诊断测试可以通过在临床实验室使用保健提供者提供的样品进行。如本文所用，术语“临床实验室”是指用于检查或处理源自活体对象(例如人类)的材料或图像的设施。处理的非限制性实例包括生物、生物化学、血清学、化学、免疫血液学、血液学、生物物理学、细胞学、病理学、遗传、基于图像的或源自人体或任何或所有人体的材料的其它检查，目的在于提供信息，例如用于任何疾病或损伤的诊断、预防或治疗，或者活体对象(例如人类)的健康的评估。这些检查还可包括收集或以其它方式获得图像，样品，准备，测定，测量或以其它方式描述活体对象(例如人类)体内各种物质是否存在，或从活体对象(例如人类)体内获得样品的程序。
本公开内容还提供了确定对象是否感染丝状病毒的方法，所述丝状病毒例如是马尔堡病毒属、马尔堡病毒或拉夫病毒。在某些方面，所述方法包括从怀疑被丝状病毒感染的对象获得样品。样品可以由保健提供者获得以用于护理点测定或者由临床实验室获得，其中临床实验室可以直接从对象获得样品，或者样品可以由保健提供者提供。所述方法还可以包括将样品施加到诊断试剂盒中提供的试剂或物体上，例如，可以将样品施加到固体支持物上，或者可以将样品混合到缓冲液或其它液体试剂中。在某些方面，怀疑样品含有丝状病毒抗原。在某些方面，怀疑样品含有针对丝状病毒抗原的抗体。
使用利用如本文提供的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的免疫测定，用户，例如，保健提供者或临床实验室可确定样品与试剂盒中提供的抗体或其片段反应还是与结合抗体或其片段的丝状病毒抗原反应(例如，在夹心测定中)，其中阳性反应指示对象感染了丝状病毒。在某些方面，样品可以是血液或其任何部分，例如血清、血浆或细胞、尿液、粪便、唾液、呕吐物或以上的任何组合。在某些方面，可以在向试剂盒的元件施加样品少于24小时、少于12小时、少于6小时、少于5小时、少于4小时、少于3小时、少于1小时或少于30分钟内进行个体是否感染丝病毒的测定。
给定批次的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的结合活性可以根据熟知的方法测定。
适于测定抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段的结合特性的方法和试剂是本领域已知的和/或可商购获得的。针对这种动力学分析设计的设备和软件是可商购获得的(例如，软件，GE Healthcare；软件，Sapidyne仪器)。
除非另有说明，本公开内容使用本领域技术人员已知的细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术。这种技术在文献中充分解释。(参见，例如，Sambrook等人编,(1989)Molecular Cloning A Laboratory Manual(第2版；Cold Spring Harbor Laboratory Press)；Sambrook等人编,(1992)MolecularCloning:A Laboratory Manual,(Cold Springs Harbor Laboratory,NY)；D.N.Glover编,(1985)DNA Cloning,第I卷和第II卷；Gait编,(1984)Oligonucleotide Synthesis；Mullis等人,美国专利第4,683,195号；Hames和Higgins编,(1984)Nucleic Acid Hybridization；Hames和Higgins编,(1984)Transcription And Translation；Freshney(1987)Culture OfAnimal Cells(Alan R.Liss,Inc.)；Immobilized Cells And Enzymes(IRL Press)(1986)；Perbal(1984)A Practical Guide To Molecular Cloning；the treatise,Methods In Enzymology(Academic Press,Inc.,N.Y.)；Miller和Calos编,(1987)GeneTransfer Vectors For Mammalian Cells,(Cold Spring Harbor Laboratory)；Wu等人编,Methods In Enzymology,第154卷和第155卷；Mayer和Walker编,(1987)Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology(Academic Press,London)；Weir和Blackwell编,(1986)Handbook Of Experimental Immunology,第I卷-第IV卷；Manipulating the Mouse Embryo,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,N.Y.,(1986)；以及Ausubel等人,(1989)Current Protocols in MolecularBiology(John Wiley和Sons,Baltimore,Md.)。
抗体工程的一般原理示于Borrebaeck编,(1995)Antibody Engineering(第2版；Oxford Univ.Press)。蛋白质工程的一般原理示于Rickwood等人编,(1995)ProteinEngineering,A Practical Approach(IRL Press at Oxford Univ.Press,Oxford,Eng.)中。抗体和抗体-半抗原结合的一般原理示于：Nisonoff(1984)Molecular Immunology(第2版；Sinauer Associates,Sunderland,Mass.)；以及Steward(1984)Antibodies,TheirStructure and Function(Chapman和Hall,New York,N.Y.)中。另外，本领域中已知的且未具体描述的免疫学中的标准方法可以遵循Current Protocols in Immunology,JohnWiley&Sons,New York；Stites等人编,(1994)Basic and Clinical Immunology(第8版；Appleton&Lange,Norwalk,Conn.)以及Mishell和Shiigi(编)(1980)Selected Methods inCellular Immunology(W.H.Freeman and Co.,NY)。
示出免疫学一般原则的标准参考文献包括Current Protocols in Immunology,John Wiley&Sons,New York；Klein(1982)J.,Immunology:The Science of Self-NonselfDiscrimination(John Wiley&Sons,NY)；Kennett等人编,(1980)Monoclonal Antibodies,Hybridoma:A New Dimension in Biological Analyses(Plenum Press,NY)；Campbell(1984)"Monoclonal Antibody Technology"in Laboratory Techniques inBiochemistry and Molecular Biology,Burden等人编,(Elsevier,Amsterdam)；Goldsby等人编,(2000)Kuby Immunology(第4版；W.H.Freeman&Co.)；Roitt等人,(2001)Immunology(第6版；London:Mosby)；Abbas等人,(2005)Cellular and MolecularImmunology(第5版；Elsevier Health Sciences Division)；Kontermann和Dubel(2001)Antibody Engineering(Springer Verlag)；Sambrook和Russell(2001)MolecularCloning:A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Press)；Lewin(2003)Genes VIII(Prentice Hall,2003)；Harlow and Lane(1988)Antibodies:ALaboratory Manual(ColdSpring Harbor Press)；Dieffenbach和Dveksler(2003)PCR Primer(Cold Spring HarborPress)。
以上引用的所有参考文献以及本文中引用的所有参考文献通过引用以其整体并入本文。
提供以下实施例是为了说明而不是为了限制。
实施例
新型MARV抗体的发现。
由于先前分离有效的交叉中和单克隆抗体(mAb)的努力在很大程度上是困难的和不成功的，本申请的发明人设计了独特的免疫策略，其包括使用基于结构的方法合理地设计免疫和分选抗原。使用来自通过初次-加强策略免疫的恒河猴的B细胞。用缺乏粘蛋白样结构域(MLD)的马尔堡病毒糖蛋白(Musoke毒株)假型化的重组水疱性口炎病毒(VSV)进行初次免疫。初次免疫后是用在S2果蝇细胞中产生和纯化的拉夫病毒的纯化的工程化糖蛋白胞外域进行三次加强免疫。工程化的糖蛋白(GPΔmucΔTM-4M)缺乏MLD以及跨膜结构域(TM)，并且在GP1-2核心内具有四个突变F438L、W439A、F445G和F447N，从而促进稳定GP1-2异三聚体的产生。第三次免疫后28天(时间点第12周)，非人灵长类动物(NHP)显示出针对VSV-Musoke GP、-Angola和-Ravn GP假型病毒的高ELISA和病毒中和效价(图1A和1B)。分离来自该猴的外周血单核细胞(PBMC)和脾细胞，并冷冻保存以鉴定马尔堡病毒特异性B细胞。
先前鉴定抗马尔堡病毒的有效中和抗体的努力在很大程度上是不成功的。因此，本申请的发明人试图开发一种排除可能是非中和的B细胞克隆的新方法，以便在筛选中富集中和克隆。在本公开内容之前，认为仅对位于mAb MR78(Flyak等人,Cell 2015,160,893–903；Hashiguchi等人,Cell 2015,160,904–912)和MR191(Flyak等人,,Cell2015,160,893–903；King等人,Cell Host Microbe 2018,23(1):101-109)代表的GP的受体结合位点内的马尔堡病毒鉴定了一个中和表位。相比之下，已经鉴定了相关埃博拉病毒的几种mAb，其靶向GP三聚体和融合环的碱基内其它中和表位，特别是GP1和GP2两者内的残基组成的表位(Zhao等人,Cell 2017,169,891–904；Wec等人,Cell 2017,169,878–890)。
将Ravn GP与埃博拉病毒(EBOV)的序列重叠以比对序列并鉴定类似于EBOV GP中鉴定的表位的Ravn GP上的潜在中和表位中的几个残基(图1C)，以及受体结合位点中的突变(例如H123A)。将这些残基上的单点突变引入到RAVV GPΔmucΔTM-4M蛋白上，并从S2细胞产生和纯化。有理由认为，在中和测定过程中向血清中加入纯化的糖蛋白突变体将捕获中和抗体，其仍然能够结合该突变体，因此降低血清中和病毒的能力。如图1D所示，突变体N171A、I518A、G547A和A546R能够与WT类似地竞争消除(compete away)中和作用，而N551A突变体仅略微降低了血清中和VSV-RAVN-GP假型病毒的能力，表明N551可能位于中和表位内。中和剂量响应曲线的曲线下面积的分析还显示在前四种突变体或WT存在下中和活性的丧失，而在N551A突变体GPΔmucΔTM-4M存在下活性的保留。
这些数据表明在位置N551处的单点突变消除了蛋白质结合血清中存在的中和抗体的能力。基于这些发现，推测产生针对Ravn的中和抗体的表面IgG+B细胞克隆将结合GPΔmucΔTM-4M，但不结合含有N551A突变的相同蛋白。
实施例1
抗MARV mAb的分离和分选
如先前所述(Zhao等人,Cell 2017,169,891–904；Wang等人,J Immunol 2016,196,3729–3743)，通过用于鉴定记忆B细胞的抗体混合物对来自上述NHP动物的冷冻保存的PBMC进行染色。简而言之，将冷冻的PBMC解冻并用补充有10％胎牛血清(FBS)培养基的RPMI1640中的10,000U/ml DNase I(Roche)处理，然后用Aqua死细胞染色(Life Technologies)处理。将含有CD3(APC-Cy7；SP34-2,BD Pharmingen)、CD8(Pacific blue；RPA-T8,BDPharmingen)、CD14(BV786；M5E2,BD Horizon)、CD20(Alexa Fluor 700；2H7,BDPharmingen)、CD27(PE-Cy7；M-T271,BD Pharmingen)、IgG(FITC；G18-145,BD Pharmingen)和IgM(PE-Cy5；G20-12,BD Pharmingen)的抗体混合物用于对PBMC进行染色。为了分选N551位点特异性记忆B细胞，将与链霉亲和素-藻红蛋白缀合物(SA-PE,Life Technologies)缀合的Ravn GPΔmucΔTM-4M WT和与链霉亲和素-别藻蓝蛋白缀合物(SA-APC,LifeTechnologies)缀合的N551A突变体掺入上述抗体混合物中。染色后，使用四激光FACS AriaIII细胞分选仪，以单细胞密度将细胞分选到具有裂解缓冲液的96孔板中。将Ravn N551位点特异性记忆B细胞定义为CD3-CD8-Aqua Blue-CD14-CD20+IgG+CD27+IgM-Ravn-WThiN551Alo。裂解分选的细胞，然后进行单细胞逆转录和PCR反应以扩增Ig序列，将其进一步克隆到含有人Igγ1H、Igγ2或Igκ1L链Ab表达盒的真核表达载体中，如先前所述(Zhao等人,Cell 2017,169,891–904；Wang等人,J Immunol 2016,196,3729–3743；H.Wardemann等人,Science 2003,301,1374-1377；T.Tiller等人,J Immunol Methods 2008,329,112-124)。该策略用于回收大多数mAb的Igs。
此外，为了探索是否可以捕获对受体结合位点突变H123A敏感的mAb，使用与上述相同的记忆B细胞分选表面标志物抗体组进行FACS分选，不同之处在于使用具有GP变体的结合表型D511Khi H123Alo来富集GP特异性记忆B细胞的子集以用于mAb克隆。从具有CD3-CD8-Aqua Blue-CD14-CD20+IgG+CD27+IgM-D511Khi H123Alo表型的单一B细胞中回收mAb克隆的该子集的两个代表，即R217和R224。分离的mAb的完整克隆谱系和CDR3序列显示在表1中。
表1：R-mAb序列比对和克隆组。
注意：#：相同的重链序列(AA)；和*：相同的轻链序列(AA)。
R45 HCDR3是SEQ ID NO:4；R45 LCDR3是SEQ ID NO:8。
R79 HCDR3是SEQ ID NO:12；R79 LCDR3是SEQ ID NO:16。
R80 HCDR3是SEQ ID NO:20；R80 LCDR3是SEQ ID NO:24。
R13 HCDR3是SEQ ID NO:28；R13 LCDR3是SEQ ID NO:32。
R15 HCDR3是SEQ ID NO:36；R15 LCDR3是SEQ ID NO:40。
R24 HCDR3是SEQ ID NO:44；R24 LCDR3是SEQ ID NO:48。
R25 HCDR3是SEQ ID NO:52；R25 LCDR3是SEQ ID NO:56。
R29 HCDR3是SEQ ID NO:60；R29 LCDR3是SEQ ID NO:64。
R39 HCDR3是SEQ ID NO:68；R39 LCDR3是SEQ ID NO:72。
R217 HCDR3是SEQ ID NO:76；R217 LCDR3是SEQ ID NO:80。
R224 HCDR3是SEQ ID NO:84；R224 LCDR3是SEQ ID NO:88。
R18 HCDR3是SEQ ID NO:92；R18 LCDR3是SEQ ID NO:96。
R63 HCDR3是SEQ ID NO:100；R63 LCDR3是SEQ ID NO:104。
R64 HCDR3是SEQ ID NO:108；R64 LCDR3是SEQ ID NO:112。
R83 HCDR3是SEQ ID NO:116；R83 LCDR3是SEQ ID NO:120。
R50 HCDR3是SEQ ID NO:124；R50 LCDR3是SEQ ID NO:128。
R53 HCDR3是SEQ ID NO:132；R53 LCDR3是SEQ ID NO:136。
R55 HCDR3是SEQ ID NO:140；R55 LCDR3是SEQ ID NO:144。
实施例2
R-mAb的表征
首先使用RavnΔmuc-4M WT的纯化的GP胞外域(GPΔ粘蛋白)和具有N551A的GP胞外域通过ELISA检查分离的mAb(R-mAb)的结合。分离的mAb主要分成两组：对N551A没有显示出反应性或显示出差的反应性的那些，或者对D511K显示出差的反应性，但对H123A没有反应性的那些，而所有抗体如预期那样结合Ravn GPΔMuc-4M(图3)。此外，R-mAb能够以比先前公开的MR191好15-100倍的NT50s(50％的最大中和效价)有效地中和VSV-MARV(Musoke、Angola和RAVN)的所有三种毒株(图4A)。总的来说，与MR191(2-7μg/mL)相比，发现针对MARV的R-mAb的NT50s的范围为20-50ng/mL，表明这些mAb靶向MARV中和的高效表位。最有效的中和剂mAb R217分别对VSV-Musoke、Angola和Ravn具有30、40和20ng/mL的中和效价(图4B)。此外，使用先前描述的PRNT测定(Howell等人,Cell Reports 2016,15(7):1514-1526)测试R-mAb的活病毒Ci67 MARV(BSL-4)中和。R217连同其它R-mAb和MR191在两轮中测试，如图例所示(图5)。对于第一轮，与显示46％感染的仅病毒对照相比，R-mAb显示出比MR191高5至80倍的效力(NT50为37.93nM)。对于第二轮，在HEK和CHO哺乳动物表达系统中产生的R217与MR191(通过IBT在CHO中产生)一起测试，其中与MR191(NT50＝9.6nM)相比，R217(CHO)显示出最佳的中和效力，其中NT50为0.188nM。
在低pH条件或去糖基化作用(ELISA)下，进一步生物化学和生物物理地表征R-mAb的稳定性(差示扫描荧光测定法(DSF))、动力学(Octet)和对GPcl的反应性。使用DSF评估R-mAb的热稳定性分布(Niesen等人,Nat Protoc 2007 2(9):2212-2221)。简而言之，将纯化的R-mAb在1X DPBS,pH7.4中稀释至1mg/mL，并与1％ SYPRO-Orange染料(MolecularProbes,Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)混合。在热循环仪(BioRad CFX Connect)中进行测定，其中温度以0.1℃/6s从30℃升高至99℃。每种mAb的解链温度(Tm)被定义为相对荧光单位(RFU)值的一阶导数(dF/dT)的顶点。对于66-69℃的大多数单克隆IgG1抗体，大多数mAb的Tms落在预期范围内，除了R63(Tm＝55.83±0.29)和R18(62.67±0.29)之外(表2)。MR系列MR78和MR191也记录了与～69℃的R-mAb的解链温度类似的解链温度，表明R-mAb是适度稳定的。
表2：R-mAb的生物物理学和生物化学表征。
使用如(He等人,J Pharm Sci 2010,99(4):1707-1720)中所述的差示扫描荧光技术测定热熔融曲线。简而言之，在SYPRO Orange Protein染料(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)存在下，在具有透明底部的96孔硬壳板(BIO-RAD,Hercules,CA,USA)中，将样品在1XDPBS(pH7.4)中稀释至1mg/mL，然后置于热循环仪中，其中在30-99℃的范围内以0.5℃/min固定温度扫描速率。将荧光强度相对于温度作图以获得S形曲线，并且在使用一阶导数的同时计算解链温度(Tm)。使用BSA(Pierce)作为对照，其记录在1×PBS pH 7.4中61.5±0℃的解链温度。所有测量以一式三份进行。
a使用如(He等人,J Pharm Sci 2010,99(4):1707-1720)中所述的差示扫描荧光技术测定热熔融曲线。简而言之，在SYPRO Orange Protein染料(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)存在下，在具有透明底部的96孔硬壳板(BIO-RAD,Hercules,CA,USA)中，将样品在1X DPBS(pH7.4)中稀释至1mg/mL，然后置于热循环仪中，其中在30-99℃的范围内以0.5℃/min固定温度扫描速率。将荧光强度相对于温度作图以获得S形曲线，并且在使用一阶导数的同时计算解链温度(Tm)。使用BSA(Pierce)作为对照，其记录在1×PBS pH 7.4中61.5±0℃的解链温度。所有测量以一式三份进行。
b在Octet96系统上使用抗人Fc传感器(ForteBio)进行动力学测量。
cEC50比值＝EC50WT/(EC50WT+GPcl混合物)
d倍数减少比＝EC50wt蛋白/EC50去糖基化蛋白
e在夹心型测定中在Octet96系统上使用抗人Fc传感器(ForteBio)进行表位结合测量，其中将饱和浓度的第一IgG上样到传感器上，然后与37nM浓度的抗原结合，然后与竞争浓度的第二IgG结合。在自我-自我减除(self-to-self subtraction)和非特异性Ab对照后计算正的nM位移，以鉴定“结合对”。
Octet的动力学测量也支持我们的ELISA和中和数据，其中对于RAVV GP-4M，最有效的中和抗体R217的KD为6.17E-10M，表明非常紧密的相互作用(表2)。其它R-mAb，如R45、R24、R18、R39、R50、R29、R25、R15和R13也具有nM范围内的KD值。
病毒包膜上的丝状病毒GP介导进入的各个阶段，包括附着、进入和融合(Lee和Saphire,Future Virol.2009,4(6):621-635)。在进入时，GP通过内体的酸性环境运输，其中GP为受体相互作用和细胞融合事件做好准备。为了评估R-mAb在这些条件下是否保持与GP的紧密结合，检查了在酸性(pH4.0和5.5)和中性pH下R-mAb与GP的结合。如表2所示，MR191在pH7.5和5.5下显示与GP紧密结合，EC50约为～0.04ug/mL，而在pH4.0下显示2倍增强的结合(EC50＝0.02ug/mL)。类似地，R217在pH7.4和5.5下以与RAVV GP-4M的GPΔMuc类似的亲和力结合，但在pH4.0下显示出轻微的降低(EC50＝0.09ug/mL)。mAb R18的行为类似于R217。然而，由于这些EC50在ng/mL范围内，预期R217&R18在酸性条件下强烈结合GP。对于mAbR39和R45，随着pH变得越酸，结合亲和力逐渐降低。非中和mAb R22在pH4.0下与RAVV GP非常紧密地结合，显示亲和力增加2倍。最后，R24和R80 mAb在中性和Ph 5.5下显示出中等结合，EC50范围为0.13-02μg/mL，然而，在pH4.0下显著丧失结合能力，EC50降低11-13倍。
内体内GP引发过程的一部分包括去除粘蛋白样结构域(MLD)或“帽”，其暴露受体结合位点并允许与进入的丝状病毒受体NPC-1相互作用(Miller等人,EMBO J 2012,31(8):1947-1960)。有助于该过程的是组织蛋白酶(B&L)，其切割GP1内的β13-14环，释放MLD和聚糖帽结构域，并产生切割的GP(GPcl)(Chandran等人,J Infect Dis2005,212Suppl 2:S258-270)。因此，通过竞争ELISA测试R-mAb与重组切割的RAVV GPcl的结合能力。为此，将MaxiSorpTM板用GPΔMuc-4M包被过夜，并在室温下用GPcl和GPΔMuc-4M的混合物孵育孔1小时，然后以恒定浓度孵育。使用抗人Fc第二抗体和TMBTM进行检测。由单独的GPΔMuc-4M或混合物的滴定曲线确定的所得EC50比值将分别产生小于或大于1的值，表明比GPΔMuc-4M更好或更差的结合(表2)。除了具有13.77的EC50比值的R22之外，所有R-mAb以及MR191更有效地结合GPcl。为了补充该数据，使用octet的对RAVV GPcl的R217亲和力测量也表明与1.72nM的KD值具有非常强的关联(数据未显示)，表明R-mAb与引发的GP保留强的结合。
与埃博拉病毒类似，除了那些高度集中在粘蛋白样结构域上的糖基化位点外，GP1-GP2亚基还含有几个糖基化位点。因此，需要验证这些糖基化位点中的任一个是否是R-mAb结合的中心。为此，在制造推荐的条件下使用PNGaseF(PROZYMETM)将RAVV GPΔMuc-4M蛋白去糖基化，其将N-连接的聚糖从残基上切割下来并通过SDS-PAGE证实MW变化(数据未显示)。使用标准的ELISA将选择的R-mAb和MR191的结合与两种形式的GP(全长和去糖基化的)进行比较。除了R22没有显示出差异，大多数R-mAb显示出去糖基化形式的GP的1.3至1.7倍的适度降低，类似于MR191(～1.8倍降低)(表2)。其中，R217显示出最小的降低，降低了1.3倍。相比之下，R45 mAb与去糖基化形式的结合降低了4倍，表明糖基化位点可能对R45-GP相互作用至关重要，但这需要进一步验证。
实施例3
通过在感染rVSV-MARV的AG129小鼠中测试体内保护来向下选择(downselection)R-mAb
由于大多数R-mAb对所有Marburg毒株具有非常高的中和效价，并显示出类似的生物化学和生物物理学行为，因此基于序列分析初步分析了这些mAb克隆之间的克隆关系。发现这些mAb属于6个克隆谱系(表1)，基于具有相同VH&JH基因区段使用(VH)和>80％CDRH3序列同源性的克隆将被认为是相同克隆谱系的成员的标准，其衍生自相同的初始B细胞前体。选择来自每个克隆谱系的代表用于进一步的向下选择。使用内部功效小鼠模型来向下选择和鉴定对MARV感染显示出最佳保护的R-mAb。为此，在具有复制能力的VSV-MARV Musoke(1000pfu)的暴露前6小时或感染后3天(DPI)，用200μg R-mAb/MR191/PBS通过IP施用处理AG129小鼠的n＝5的组别。监测小鼠的健康评分和体重，持续10天。如图6A所示，与对照小鼠类似，用MR191、R25、80和83处理的组别内的所有动物在第6天都被感染。与PBS对照相比，用R29、45和55处理的组别通过延长保护长达2天而显示出约60％的中度保护。用R15、18、24、63和64处理的组别直到研究结束显示出100％的保护。直到研究结束，这些动物在其体重方面也没有显示出许多变化，并且健康评分为1和2(图6B)。与MR191相比，在具有类似攻击和处理参数的AG129小鼠中还进行的R217的功效研究在研究期间显示出100％的保护(图6C和图6D)。
实施例4
对R-mAb结合至关重要的MARV GP残基的鉴定-R217的表位作图
为了鉴定R217结合所需的关键GP残基，使用丙氨酸扫描方法，其中针对EBOV GP的“鸟枪诱变”突变文库评价R-mAb(R18、R24、R39、R55、R80和R217)的结合，其中GP残基单独突变为丙氨酸(如果原始残基是丙氨酸，则突变为丝氨酸)。鸟枪诱变的方法描述于专利申请61/938,894和(Davidson,E.和Doranz,B.J.,2014,Immunology,143,13-20)中。将人HEK-293T细胞用整个文库以384孔阵列形式转染，并通过高通量流式细胞术评估对R217的反应性。先前表征的人IgG MR191用作对照(Mire等人,Science transl.med.2017,9(384))。表位作图实验将位于GP1的N-末端的MARV RAVV GP残基K58鉴定为对于所有测试的R-mAb至关重要(图7A)。该残基位于GP1的残基延伸段53-62内，其也从R217-RAVV GP复合物生成的低分辨率负染色图像重建模型中鉴定(图7B；表(插图)。该方法还鉴定了GP1(65、87、90和120)内的一些其它残基，其需要用通过低温电子显微镜和3-D图像重建确定的改进的更高分辨率的结构来进一步验证。该残基在VSV-MARV RAVV GP背景上的突变证实了该残基对R217相互作用的重要性，其中K58A突变通过R217而不是MR191消除了RAVV中和作用(图7C-顶部)。该残基在所有已知的Marburg毒株中也是保守的。
Marburg RAVV GP的残基514-551构成内部融合环(IFL)，并且在MR191存在下首次在晶体结构中全面地看到，但不与抗体相互作用(King等人,Cell Host Microbe 2018,23(1):101-109e104)。不同Marburg毒株之间的IFL序列高度保守。本申请的表位作图结果鉴定了GP2内的几个残基，这些残基对于接触是重要的，并且位于IFL内。其中，发现残基A514是R217、R18、R55和83相互作用的中心(图7A)。然而，主要接触位点位于包含残基506-517的IFL附近(图7B)。其中，我们在VSV-MARV RAVV GP背景中的G506A、N508A、D511A/K处进行了突变，并且发现仅残基D511对R217中和作用有主要影响(图7C-顶部)。该残基还影响R217中和VSV-MARV Musoke GP的能力，但仅当带负电荷的谷氨酸残基突变成带正电荷的赖氨酸时才会发生(图7C-底部)。Musoke GP-R217相互作用和随后的中和能力通过残基511处D至A的突变得以保留。如预期的，MR191不受这些IFL突变的影响(图7C)。远离IFL，R560的另外残基也对R18&R39结合有影响，而它在介导R217和R24相互作用中起次要作用。总的来说，R-mAb靶向Marburg GP上的类似且高度保守的表位，但它们的接近角度可能略有不同，这需要结构研究进一步支持。
实施例5
豚鼠中针对MARV-Angola的体内保护
在豚鼠适应的马尔堡病毒(Angola)的严格模型中测试R217在4-6周龄的雌性Hartley豚鼠中的体内功效(Cross等人,J Infect Dis2015,212Suppl 2:S258-270)。用1000pfu豚鼠适应的Marburg Angola病毒感染5只豚鼠的组别，并用10mg或5mg的R217或5mg的MR191IP 3dpi处理，历时28天。用PBS处理一组2只动物作为阴性对照。所有PBS处理的动物在9dpi内死亡(中位生存期：8)，并且在感染之前体重平均下降21％，而R217-10mg剂量处理的动物在整个研究中显示100％存活(图8A)，健康评分为1，并且在研究结束时记录13-31％的体重增加(图8B)。类似地，用5mg较低剂量的R217处理的组别也显示100％的存活，5只动物中有4只在第28天存活，没有疾病或体重减轻的迹象，其中在第7天死亡的动物在出血过程中未能从麻醉中恢复，并且没有显示通过噬菌斑测定证实的病毒血症的迹象。总的来说，与对照组不同，这些动物的体温是稳定的。相比之下，用MR191处理的5只动物中仅有2只在感染中存活(中位生存期：12)(图8A)。与PBS组相比，用任一剂量的R217的单一疗法提供的保护是统计学显著的(分别为p＝0.0018和P＝0.0035)。
实施例6
NHP模型是用于评价丝状病毒对策的金标准，其中动物显示人类中马尔堡出血热(Marburg hemorrhagic fever)典型的所有主要病理学发现，包括肝脏中中度至严重急性多灶性肝细胞坏死。重要的是，与使用豚鼠适应变体的豚鼠模型相比，NHP模型使用真实病毒。用1000pfu的MARV-Angola分离物200501379攻击5只食蟹猴。随后在感染后第4天和第7天用50mg/kg R217处理4只动物，并将单个猕猴保持未处理作为对照。
用R217处理的NHP完全免于致死攻击(图9A)，而对照动物在感染后第8天死亡。得克萨斯大学医学分校(University of Texas Medical Branch)对这些种类进行了20项研究，并且在所有情况下，对照都在第7天至第9天死亡(也绘制在图9A上)。如通过Mantel-Cox方法所测定的，R217的功效是高度显著的，p<0.0001。本研究中各动物的体温显示在图9B中。接受R217治疗的动物保持稳定的温度，而对照迅速丧失体温。这些数据证明了该抗体治疗马尔堡病毒出血热的功效。因此，在某些实施方案中，结合分子是R217抗体或其抗原结合片段。
表3：重链和轻链可变结构域的序列。互补决定区(CDR)是粗体和加下划线的，通过IgBlast(在万维网上www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/处)由Kabat编号系统描绘。
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本公开内容的广度和范围不应受到上述示例性实施方案或以下编号的实施方案中任一个的限制，而应仅根据所附权利要求及其等同物进行限定。
编号的实施方案
1.分离的抗体或其抗原结合片段，其包含特异性结合保守的马尔堡病毒或拉夫病毒表位的所述结合结构域，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:2、3、4、6、7和8(R45)[克隆谱系CL1.1]；
SEQ ID NO:10、11、12、14、15和16(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:18、19、20、22、23和24(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:26、27、28、30、31和32(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:34、35、36、38、39和40(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:42、43、44、46、47和48(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:50、51、52、53、54和55(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:58、59、60、62、63和64(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:66、67、68、70、71和72(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:74、75、76、78、79和80(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:82、83、84、86、87和88(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:90、91、92、94、95和96(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:98、99、100、102、103和104(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:106、107、108、110、111和112(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:114、115、116、118、119和120(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:122、123、124、126、127和128(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:130、131、132、134、135和136(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:138、139、140、142、143和144(R55)[CL6.3]。
2.如实施方案1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:2、3、4、6、7和8(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:10、11、12、14、15和16(R79)[CL1.2]；或者
SEQ ID NO:18、19、20、22、23和24(R80)[CL1.3]。
3.如实施方案1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:26、27、28、30、31和32(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:34、35、36、38、39和40(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:42、43、44、46、47和48(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:50、51、52、53、54和55(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:58、59、60、62、63和64(R29)[CL2.5]；或者
SEQ ID NO:66、67、68、70、71和72(R39)[CL2.6]。
4.如实施方案1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:74、75、76、78、79和80(R217)[CL3.1]；或者
SEQ ID NO:82、83、84、86、87和88(R224)[CL3.2]。
5.如实施方案1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:90、91、92、94、95和96(R18)[CL4.1]；或者
SEQ ID NO:98、99、100、102、103和104(R63)[CL4.2]。
6.如实施方案1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:106、107、108、110、111和112(R64)[CL5.1]；或者
SEQ ID NO:114、115、116、118、119和120(R83)[CL5.2]。
7.如实施方案1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:122、123、124、126、127和128(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:130、131、132、134、135和136(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:138、139、140、142、143和144(R55)[CL6.3]。
8.如实施方案1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR相同或者除了一个或多个CDR中三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外与所述CDR相同；
任选地，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外与所述CDR序列相同；或者
任选地，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外与所述CDR序列相同。
9.如实施方案1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同；
任选地，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中三个、两个或一个单一氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同；
任选地，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中两个或一个单一氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同；或者
任选地，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中一个单一氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同。
10.如实施方案1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系1]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自2、10和18；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自3、11和19；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自4、12和20；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自6、14和22；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自7、15和23；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自8、16和24。
11.如实施方案1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系2]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自26、34、42、50、58和66；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自27、35、43、51、59和67；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自28、36、44、52、60和68；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自30、38、46、54、62和70；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自31、39、47、55、63和71；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自32、40、48、56、64和72。
12.如实施方案1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系3、4、5和6]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自74、82、90、98、106、114、122、130和138；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自75、83、91、99、107、115、123、131和139；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自76、84、92、100、108、116、124、132和140；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自78、86、94、102、110、118、126、134和142；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自79、87、95、103、111、119、127、135和143；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自80、88、96、104、112、120、128、136和144；
任选地[克隆谱系3]，
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自74和82；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自75和83；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自76和84；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自78和86；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自79和87；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自80和88。
13.如实施方案1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系4]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自90和98；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自91和99；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自92和100；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自94和102；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自95和103；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自96和104。
14.如实施方案1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系5]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自106和114；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自107和115；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自108和116；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自110和118；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自111和119；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自112和120。
15.如实施方案1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系6]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自122、130和138；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自123、131和139；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自124、132和140；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自126、134和142；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自127、135和143；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自128、126和144。
16.如实施方案1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
17.如实施方案1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系1]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；或者
SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]。
18.如实施方案1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系2]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R26)[CL2.5]；或者
SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]。
19.如实施方案1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系3]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；或者
SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]。
20.如实施方案1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系4]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；或者
SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]。
21.如实施方案1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系5]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；或者
SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]。
22.如实施方案1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系6]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
23.分离的结合分子或其抗原结合片段，其包含特异性结合保守的马尔堡病毒或拉夫病毒表位的所述结合结构域，
任选地，其中所述结合分子或其抗原结合片段是分离的抗体或其抗原结合片段。
24.如实施方案23所述的结合分子或其抗原结合片段，其中所述结合结构域特异性结合由定位于GP1中的氨基酸位置58、65、87、90和120以及内部融合环(残基514-551)内的GP2氨基酸511、514和IFL远端的氨基酸560组成的表位。
25.如实施方案23或24所述的结合分子或其抗原结合片段，其中所述结合结构域能够结合与所述抗体或其抗原结合片段相同的保守马尔堡病毒或拉夫病毒表位，所述抗体或其抗原结合片段分别包含以下氨基酸序列中任一个的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL):
SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
26.如实施方案25所述的结合分子或其抗原结合片段，其中所述结合结构域能够竞争性地抑制抗体或其抗原结合片段的抗原结合，所述抗体或其抗原结合片段分别包含以下氨基酸序列中任一个的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)：
SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
27.如实施方案1至26中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段，其是NHP抗体、人源化抗体、嵌合抗体或其抗原结合片段。
28.如实施方案1至27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段，其是单克隆抗体、多克隆抗体混合物的组分、重组抗体、多特异性抗体或以上的任何组合。
29.如实施方案1至28中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段，其是单克隆抗体。
30.如实施方案1至29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段，其是双特异性抗体或其抗原结合片段和/或其是双特异性结合分子或其抗原结合片段，还包含第二结合结构域。
31.如实施方案30所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段，其中所述第二结合结构域能够特异性结合丝状病毒表位，所述丝状病毒表位在丝状病毒病毒体颗粒上是表面暴露的并且能接近所述第二结合结构域，
任选地，其中所述丝状病毒属于马尔堡病毒属；
任选地，其中所述丝状病毒是马尔堡病毒。
32.如实施方案30或31所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原所述结合结构域，其中所述第二结合结构域能够特异性结合粘蛋白样结构域、位于聚糖帽中的表位、位于GP2融合结构域中的表位或以上的任何组合。
33.如实施方案1至32中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链恒定区或其片段。
34.如实施方案33所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链恒定区或其片段是恒河猴恒定区或其片段，或者所述重链恒定区或其片段是人恒定区或其片段。
35.如实施方案34所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述人重链恒定区或其片段是IgM、IgG、IgA、IgE、IgD或IgY恒定区或其片段。
36.如实施方案35所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述人IgG恒定区或其片段是人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区或其片段。
37.如实施方案1至36中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链恒定区或其片段。
38.如实施方案37所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链恒定区或其片段是恒河猴恒定区或其片段，或者所述轻链恒定区或其片段是人恒定区或其片段。
39.如实施方案38所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链恒定区或其片段是人k或λ恒定区或其片段。
40.如实施方案1至39中任一项所述的抗体，其包含含有两条重链和两条轻链的全长抗体。
41.如实施方案1至39中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含Fv片段、Fab片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、dsFv片段、scFv片段、scFab片段、sc(Fv)2片段或以上的任何组合。
42.如实施方案1至41中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其还包含结合异源抗原或表位的第二结合结构域。
43.如实施方案42所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二结合结构域包含含有两条重链和两条轻链的全长抗体，或者包含Fv片段、Fab片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、dsFv片段、scFv片段、scFab片段、sc(Fv)2片段或以上的任何组合。
44.如实施方案1至43中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段，其中所述结合结构域与丝状病毒上的保守马尔堡病毒表位的结合完全或部分中和所述丝状病毒的感染性，
任选地，其中所述丝状病毒属于马尔堡病毒属；
任选地，其中所述丝状病毒是马尔堡病毒。
45.如实施方案1至44中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段，其与抗病毒剂、蛋白质、脂质、可检测标记、聚合物或以上的任何组合缀合。
46.组合物，其包含实施方案1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段，以及载体。
47.试剂盒，其包含：
(a)实施方案1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段或者实施方案46所述的组合物；以及
(b)使用所述抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段或者使用所述组合物的说明书，或者用于获得使用所述抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段或者使用所述组合物的说明书的指导。
48.如实施方案47所述的试剂盒，其还包含缓冲液、固体支持物或两者。
49.如实施方案48所述的试剂盒，其中所述固体支持物是珠粒、过滤器、膜或多孔板。
50.如实施方案49所述的试剂盒，其中所述缓冲液适于酶联免疫吸附测定(ELISA)。
51.如实施方案47至50中任一项所述的试剂盒，其包含可以由保健提供者在护理点执行的诊断测试，从而诊断所述患者是否感染丝状病毒，
任选地，其中所述丝状病毒属于马尔堡病毒属；
任选地，其中所述丝状病毒是马尔堡病毒。
52.确定对象是否感染丝状病毒的方法，其包括：
(a)从怀疑感染丝状病毒的对象获得样品；
(b)将所述样品施加到由实施方案48至51中任一项所述的试剂盒提供的缓冲液或固体支持物上；以及
(c)确定所述样品是与所述试剂盒中提供的抗体或其抗原结合片段反应还是与结合所述抗体或其抗原结合片段的丝状病毒抗原反应，
其中阳性反应指示所述对象感染了丝状病毒；
任选地，其中所述丝状病毒属于马尔堡病毒属；
任选地，其中所述丝状病毒是马尔堡病毒。
53.如实施方案52所述的方法，其中所述样品是血液或其任何部分、尿液、粪便、唾液、呕吐物或以上的任何组合，并且任选地其中所述测定可以在施用所述样品少于24小时、少于12小时、少于6小时、少于5小时、少于4小时、少于3小时、少于1小时或少于30分钟内进行。
54.分离的多核苷酸，其包含编码实施方案1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者其亚基的核酸。
55.如实施方案54所述的多核苷酸，其中所述核酸编码VH，并且其中所述VH包含VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述VH-CDR包含分别与以下相同的或者除了一个或多个VH-CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同的氨基酸序列：
SEQ ID NO:2、3和4(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:10、11和12(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:18、19和20(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:26、27和28(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:34、35和36(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:42、43和44(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:50、51和52(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:58、59和60(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:66、67和68(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:74、75和76(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:82、83和84(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:90、91和92(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:98、99和100(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:106、107和108(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:114、115和116(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:122、123和124(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:130、131和132(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:138、139和140(R55)[CL6.3]。
56.如实施方案54所述的多核苷酸，其中所述核酸编码VL，并且其中所述VL包含VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述VL-CDR包含分别与以下相同的或者除了一个或多个VH-CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同的氨基酸序列：
SEQ ID NO:6、7和8(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:14、15和16(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:22、23和14(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:30、31和32(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:38、39和40(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:46、47和48(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:54、55和56(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:62、63和64(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:70、71和72(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:78、79和80(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:86、87和88(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:94、95和96(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:102、103和104(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:110、111和112(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:118、119和120(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:126、127和128(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:134、135和136(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:142、143和144(R55)[CL6.3]。
57.如实施方案54或55所述的多核苷酸，其中所述核酸编码VH，并且其中所述VH包含与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:1(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:9(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:17(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:25(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:33(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:41(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:49(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:57(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:65(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:73(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:81(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:89(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:97(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:105(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:113(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:121(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:129(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:137(R55)[CL6.3]。
58.如实施方案54或56所述的多核苷酸，其中所述核酸编码VL，并且其中所述VL包含与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
59.载体，其包含实施方案54至58中任一项所述的多核苷酸。
60.组合物，其包含实施方案54至58中任一项所述的多核苷酸或实施方案59所述的载体。
61.多核苷酸或多核苷酸的组合，其编码实施方案1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段。
62.如实施方案61所述的多核苷酸或多核苷酸的组合，其包含编码VH的核酸和编码VL的核酸，其中所述VH和VL包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:2、3、4、6、7和8(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:10、11、12、14、15和16(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:18、19、20、22、23、24(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:26、27、28、29、30、31和32(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:34、35、36、38、39和40(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:42、43、44、46、47和48(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:50、51、52、54、55和56(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:58、59、60、62、63和64(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:66、67、68、70、71和72(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:74、75、76、78、79和80(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:82、83、84、86、87和88(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:90、91、92、94、95和96(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:98、99、100、102、103和104(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:106、107、108、110、111和112(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:114、115、116、118、119和120(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:122、123、124、126、127和128(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:130、131、132、134、135和136(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:138、139、140、142、143和144(R55)[CL6.3]。
63.如实施方案61或62所述的多核苷酸或多核苷酸的组合，其包含编码VH的核酸和编码VL的核酸，其中所述VH和VL包含分别与选自以下的参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：
SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；和
SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
64.如实施方案61至63中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸的组合，其中所述编码VH的核酸和所述编码VL的核酸在相同的载体中。
65.载体，其包含实施方案64所述的多核苷酸或多核苷酸的组合。
66.如实施方案61至65中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸的组合，其中所述编码VH的核酸和所述编码VL的核酸在不同的载体中。
67.载体，其包含实施方案66所述的多核苷酸或多核苷酸的组合。
68.宿主细胞，其包含实施方案54至58或61至64或66中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸的组合或者实施方案59、65或67中任一项所述的一种或多种载体。
69.制备实施方案1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段的方法，其包括
(a)培养实施方案68所述的宿主细胞；以及
(b)分离所述抗体或其抗原结合片段或者分离所述结合分子或其抗原结合片段。
70.诊断试剂，其包含实施方案1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段。
71.用于预防、治疗或管理对象中丝状病毒感染的方法，其包括向有需要的对象施用有效量的实施方案1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段、或者实施方案46所述的组合物。
72.如实施方案71所述的方法，其中所述丝状病毒是马尔堡病毒、拉夫病毒或以上的任何组合。
73.如实施方案71或72所述的方法，其中所述丝状病毒感染是出血热。
74.如实施方案71至73中任一项所述的方法，其中所述对象是NHP或人。
序列表
<110> 生物综合治疗公司(INTEGRATED BIOTHERAPEUTICS, INC.)
马里兰大学生物科学和生物技术研究所(INSTITUTE FOR BIOSCIENCE ANDBIOTECHNOLOGY RESEARCH, UNIVERSITY OF MARYLAND)
马里兰大学巴尔的摩分校(UNIVERSITY OF MARYLAND, BALTIMORE)
拉霍亚免疫研究所(LA JOLLA INSTITUTE FOR IMMUNOLOGY)
<120> 针对马尔堡病毒的广泛中和结合分子
<130> 57783-210793
<140>
<141>
<150> 63/053,987
<151> 2020-07-20
<160> 144
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ala Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp His
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Leu Gln Trp Ile
35 40 45
Ser Ala Ile Asp Arg Ala Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Gly Arg Thr Val Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Val Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 2
Gly Phe Thr Phe Gly Asp His Trp
1 5
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 3
Ile Asp Arg Ala Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 4
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 4
Ala Arg Asp Gln Gly Arg Thr Val Gly Tyr Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 5
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 5
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Thr Tyr Val Ser Trp Tyr Arg Gln His Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Ile Tyr Asp Val Asp Glu Arg Pro Ser Gly Val Ser Tyr Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Arg
85 90 95
Asn Thr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 6
Ser Ser Asp Ile Gly Ser Tyr Thr Tyr
1 5
<210> 7
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 7
Asp Val Asp
1
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 8
Ser Ser Tyr Ala Gly Arg Asn Thr Trp Val
1 5 10
<210> 9
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ala Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Trp Leu Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Arg Pro Gly Ser Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Asn Asn Ala Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Gly Arg Thr Val Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Val Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 10
Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr Trp
1 5
<210> 11
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 11
Ile Asn Arg Pro Gly Ser Ser Thr
1 5
<210> 12
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 12
Ala Arg Asp Gln Gly Arg Thr Val Gly Tyr Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 13
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 13
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Ser Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Ile Tyr Asp Asp Ser Glu Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Asn Thr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 14
Ser Ser Asp Ile Gly Ser Tyr Ser Tyr
1 5
<210> 15
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 15
Asp Asp Ser
1
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 16
Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Asn Thr Trp Val
1 5 10
<210> 17
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ala Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Trp Leu Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Arg Pro Gly Ser Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Asn Asn Ala Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Gly Arg Thr Val Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Val Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 18
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 18
Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr Trp
1 5
<210> 19
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 19
Ile Asn Arg Pro Gly Ser Ser Thr
1 5
<210> 20
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 20
Ala Arg Asp Gln Gly Arg Thr Val Gly Tyr Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 21
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 21
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Ser Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Ile Tyr Asp Asp Ser Glu Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Asn Thr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 22
Ser Ser Asp Ile Gly Ser Tyr Ser Tyr
1 5
<210> 23
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 23
Asp Asp Ser
1
<210> 24
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 24
Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Asn Thr Trp Val
1 5 10
<210> 25
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Arg Ile Lys Arg Lys Ala Asp Gly Glu Thr Ala Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Tyr Asn Trp Asn Phe Asn Phe Asp Phe Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Val Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 26
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser Trp
1 5
<210> 27
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 27
Ile Lys Arg Lys Ala Asp Gly Glu Thr Ala
1 5 10
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 28
Thr Thr Tyr Asn Trp Asn Phe Asn Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 29
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 29
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Pro Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Leu Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Arg Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Thr Lys
100 105
<210> 30
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 30
Gln Asp Ile Ser Pro Tyr
1 5
<210> 31
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 31
Tyr Gly Asn
1
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 32
Gln Gln Tyr Tyr Arg Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 33
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Gly Leu Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Thr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Arg Ile Lys Arg Lys Ala Asp Gly Glu Thr Ala Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys His Thr
65 70 75 80
Leu Phe Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Tyr Asn Trp Asn Phe Asn Phe Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Val Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 34
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Thr Trp
1 5
<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 35
Ile Lys Arg Lys Ala Asp Gly Glu Thr Ala
1 5 10
<210> 36
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 36
Thr Thr Tyr Asn Trp Asn Phe Asn Phe Asp Asn
1 5 10
<210> 37
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 37
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Asn Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Glu Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Arg Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 38
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 38
Gln Ala Phe Ser Ser Tyr
1 5
<210> 39
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 39
Tyr Ala Asn
1
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 40
Gln Gln Tyr Tyr Arg Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 41
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Thr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Lys Arg Lys Ala Asp Gly Glu Thr Ala Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Tyr Asn Trp Asn Phe Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Val Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 42
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 42
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Thr Trp
1 5
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 43
Ile Lys Arg Lys Ala Asp Gly Glu Thr Ala
1 5 10
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 44
Thr Thr Tyr Asn Trp Asn Phe Asn Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 45
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 45
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Pro Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Leu Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Arg Leu Pro Leu
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ser Lys
100 105
<210> 46
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 46
Gln Asp Ile Ser Pro Tyr
1 5
<210> 47
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 47
Tyr Gly Asn
1
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 48
Gln Gln Tyr Tyr Arg Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 49
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Arg Lys Ala Asp Gly Glu Thr Ala Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Tyr Asn Trp Asn Phe Asn Phe Asp His Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Val Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 50
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 50
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser Trp
1 5
<210> 51
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 51
Ile Lys Arg Lys Ala Asp Gly Glu Thr Ala
1 5 10
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 52
Thr Thr Tyr Asn Trp Asn Phe Asn Phe Asp His
1 5 10
<210> 53
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 53
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Pro Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Leu Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Arg Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 54
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 54
Gln Asp Ile Ser Pro Tyr
1 5
<210> 55
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 55
Tyr Gly Asn
1
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 56
Gln Gln Tyr Tyr Arg Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 57
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 57
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ile Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Arg Ile Lys Arg Lys Ala Asp Gly Glu Thr Ala Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Tyr Asn Trp Asn Phe Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Val Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 58
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 58
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser Trp
1 5
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 59
Ile Lys Arg Lys Ala Asp Gly Glu Thr Ala
1 5 10
<210> 60
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 60
Thr Thr Tyr Asn Trp Asn Phe Asn Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 61
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 61
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Pro Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Leu Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Arg Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<400> 64
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<220>
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<400> 65
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Thr
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65 70 75 80
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<220>
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<400> 73
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<400> 84
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<220>
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<400> 97
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Ala Ser Glu
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<400> 100
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 101
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
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<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 105
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<220>
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<400> 106
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<220>
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<400> 107
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<220>
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<400> 108
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 109
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 110
Gly Ser Asp Ile Gly Gly Tyr Asp Tyr
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 111
Gly Val Asn
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 112
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<210> 113
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 113
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
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100 105 110
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<210> 114
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 114
Gly Ala Ser Ile Ser Asp Tyr Trp Trp
1 5
<210> 115
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 115
Tyr Gly Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 116
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 116
Ala Arg Asp Pro Leu Asn Gln Asp Ala Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 117
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 117
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
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<210> 118
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 118
Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr Thr Tyr
1 5
<210> 119
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 119
Asp Val Ser
1
<210> 120
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 120
Ser Ser Tyr Gly Gly Arg Lys Thr Leu Leu
1 5 10
<210> 121
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 121
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asp Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Gly Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ala Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Ala Ser Lys Lys Gln Leu Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Leu Asn Gln Asp Ala Phe Asp Phe Trp Gly Leu Gly
100 105 110
Leu Arg Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 122
Gly Asp Ser Ile Ser Ser Tyr Trp Trp
1 5
<210> 123
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 123
Tyr Gly Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 124
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 124
Ala Arg Asp Pro Leu Asn Gln Asp Ala Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 125
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 125
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Thr Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Arg Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Arg
85 90 95
Asn Ala Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 126
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 126
Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr Thr Tyr
1 5
<210> 127
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 127
Asp Val Ser
1
<210> 128
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 128
Ser Ser Tyr Ala Gly Arg Asn Ala Leu Leu
1 5 10
<210> 129
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 129
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Ala Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Gly Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Ala Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Ala Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Pro Leu Asn Gln Asp Ala Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Leu Arg Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 130
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 130
Gly Ala Ser Ile Ser Ser Tyr Trp Trp
1 5
<210> 131
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 131
Tyr Gly Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 132
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 132
Val Arg Asp Pro Leu Asn Gln Asp Ala Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 133
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 133
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Met Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Phe Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Asp Asp Glu Ala Ala Tyr Phe Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Arg
85 90 95
Arg Ile Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 134
Ser Ser Asp Ile Gly Ser Tyr Asp Tyr
1 5
<210> 135
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 135
Asp Val Ser
1
<210> 136
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 136
Ser Ser Tyr Ala Gly Arg Arg Ile Leu Leu
1 5 10
<210> 137
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 137
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asp Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Gly Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Ala Ser Lys Lys Gln Leu Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Leu Asn Gln Asp Ala Phe Asp Phe Trp Gly Leu Gly
100 105 110
Leu Arg Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 138
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 138
Gly Asp Ser Ile Ser Ser Tyr Trp Trp
1 5
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 139
Tyr Gly Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 140
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 140
Ala Arg Asp Pro Leu Asn Gln Asp Ala Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 141
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的多肽
<400> 141
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Thr Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Arg Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Arg
85 90 95
Asn Ala Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 142
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 142
Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr Thr Tyr
1 5
<210> 143
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 143
Asp Val Ser
1
<210> 144
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成的肽
<400> 144
Ser Ser Tyr Ala Gly Arg Asn Ala Leu Leu
1 5 10

Claims (74)

1.分离的抗体或其抗原结合片段，其包含特异性结合保守的马尔堡病毒或拉夫病毒表位的结合结构域，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:2、3、4、6、7和8(R45)[克隆谱系CL1.1]；
SEQ ID NO:10、11、12、14、15和16(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:18、19、20、22、23和24(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:26、27、28、30、31和32(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:34、35、36、38、39和40(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:42、43、44、46、47和48(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:50、51、52、53、54和55(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:58、59、60、62、63和64(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:66、67、68、70、71和72(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:74、75、76、78、79和80(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:82、83、84、86、87和88(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:90、91、92、94、95和96(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:98、99、100、102、103和104(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:106、107、108、110、111和112(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:114、115、116、118、119和120(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:122、123、124、126、127和128(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:130、131、132、134、135和136(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:138、139、140、142、143和144(R55)[CL6.3]。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:2、3、4、6、7和8(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:10、11、12、14、15和16(R79)[CL1.2]；或者
SEQ ID NO:18、19、20、22、23和24(R80)[CL1.3]。
3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:26、27、28、30、31和32(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:34、35、36、38、39和40(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:42、43、44、46、47和48(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:50、51、52、53、54和55(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:58、59、60、62、63和64(R29)[CL2.5]；或者
SEQ ID NO:66、67、68、70、71和72(R39)[CL2.6]。
4.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:74、75、76、78、79和80(R217)[CL3.1]；或者
SEQ ID NO:82、83、84、86、87和88(R224)[CL3.2]。
5.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:90、91、92、94、95和96(R18)[CL4.1]；或者
SEQ ID NO:98、99、100、102、103和104(R63)[CL4.2]。
6.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:106、107、108、110、111和112(R64)[CL5.1]；或者
SEQ ID NO:114、115、116、118、119和120(R83)[CL5.2]。
7.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:122、123、124、126、127和128(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:130、131、132、134、135和136(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:138、139、140、142、143和144(R55)[CL6.3]。
8.如权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR相同或者除了一个或多个CDR中三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外与所述CDR相同；
任选地，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外与所述CDR序列相同；或者
任选地，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外与所述CDR序列相同。
9.如权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同；
任选地，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中三个、两个或一个单一氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同；
任选地，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中两个或一个单一氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同；或者
任选地，其中所述结合结构域包含的VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列与所述CDR序列相同或者除了一个或多个CDR中一个单一氨基酸取代，而非缺失或插入之外与所述CDR序列相同。
10.如权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系1]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自2、10和18；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自3、11和19；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自4、12和20；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自6、14和22；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自7、15和23；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自8、16和24。
11.如权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系2]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自26、34、42、50、58和66；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自27、35、43、51、59和67；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自28、36、44、52、60和68；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自30、38、46、54、62和70；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自31、39、47、55、63和71；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自32、40、48、56、64和72。
12.如权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系3、4、5和6]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自74、82、90、98、106、114、122、130和138；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自75、83、91、99、107、115、123、131和139；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自76、84、92、100、108、116、124、132和140；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自78、86、94、102、110、118、126、134和142；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自79、87、95、103、111、119、127、135和143；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自80、88、96、104、112、120、128、136和144；
任选地[克隆谱系3]，
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自74和82；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自75和83；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自76和84；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自78和86；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自79和87；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自80和88。
13.如权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系4]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自90和98；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自91和99；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自92和100；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自94和102；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自95和103；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自96和104。
14.如权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系5]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自106和114；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自107和115；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自108和116；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自110和118；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自111和119；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自112和120。
15.如权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列[克隆谱系6]：
其中所述VH-CDR1氨基酸序列选自122、130和138；
其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自123、131和139；
其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自124、132和140；
其中所述VL-CDR1氨基酸序列选自126、134和142；
其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自127、135和143；以及
其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自128、126和144。
16.如权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
17.如权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系1]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；或者
SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]。
18.如权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系2]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R26)[CL2.5]；或者
SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]。
19.如权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系3]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；或者
SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]。
20.如权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系4]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；或者
SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]。
21.如权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系5]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；或者
SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]。
22.如权利要求1至15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合结构域包含分别与以下参考氨基酸序列[克隆谱系6]至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的VH和VL氨基酸序列：
SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
23.分离的结合分子或其抗原结合片段，其包含特异性结合保守的马尔堡病毒或拉夫病毒表位的结合结构域，
任选地，其中所述结合分子或其抗原结合片段是分离的抗体或其抗原结合片段。
24.如权利要求23所述的结合分子或其抗原结合片段，其中所述结合结构域特异性结合由定位于GP1中的氨基酸位置58、65、87、90和120以及内部融合环(残基514-551)内的GP2氨基酸511、514和IFL远端的氨基酸560组成的表位。
25.如权利要求23或24所述的结合分子或其抗原结合片段，其中所述结合结构域能够结合与所述抗体或其抗原结合片段相同的保守马尔堡病毒或拉夫病毒表位，所述抗体或其抗原结合片段分别包含以下氨基酸序列中任一个的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL):
SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
26.如权利要求25所述的结合分子或其抗原结合片段，其中所述结合结构域能够竞争性地抑制抗体或其抗原结合片段的抗原结合，所述抗体或其抗原结合片段分别包含以下氨基酸序列中任一个的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)：
SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
27.如权利要求1至26中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段，其是NHP抗体、人源化抗体、嵌合抗体或其抗原结合片段。
28.如权利要求1至27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段，其是单克隆抗体、多克隆抗体混合物的组分、重组抗体、多特异性抗体或以上的任何组合。
29.如权利要求1至28中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段，其是单克隆抗体。
30.如权利要求1至29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段，其是双特异性抗体或其抗原结合片段和/或其是双特异性结合分子或其抗原结合片段，还包含第二结合结构域。
31.如权利要求30所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段，其中所述第二结合结构域能够特异性结合丝状病毒表位，所述丝状病毒表位在丝状病毒病毒体颗粒上是表面暴露的并且能接近所述第二结合结构域，
任选地，其中所述丝状病毒属于马尔堡病毒属；
任选地，其中所述丝状病毒是马尔堡病毒。
32.如权利要求30或权利要求31所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合结构域，其中所述第二结合结构域能够特异性结合粘蛋白样结构域、位于聚糖帽中的表位、位于GP2融合结构域中的表位或以上的任何组合。
33.如权利要求1至32中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链恒定区或其片段。
34.如权利要求33所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链恒定区或其片段是恒河猴恒定区或其片段，或者所述重链恒定区或其片段是人恒定区或其片段。
35.如权利要求34所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述人重链恒定区或其片段是IgM、IgG、IgA、IgE、IgD或IgY恒定区或其片段。
36.如权利要求35所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述人IgG恒定区或其片段是人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区或其片段。
37.如权利要求1至36中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链恒定区或其片段。
38.如权利要求37所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链恒定区或其片段是恒河猴恒定区或其片段，或者所述轻链恒定区或其片段是人恒定区或其片段。
39.如权利要求38所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链恒定区或其片段是人k或λ恒定区或其片段。
40.如权利要求1至39中任一项所述的抗体，其包含含有两条重链和两条轻链的全长抗体。
41.如权利要求1至39中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含Fv片段、Fab片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、dsFv片段、scFv片段、scFab片段、sc(Fv)2片段或以上的任何组合。
42.如权利要求1至41中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其还包含结合异源抗原或表位的第二结合结构域。
43.如权利要求42所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二结合结构域包含含有两条重链和两条轻链的全长抗体，或者包含Fv片段、Fab片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、dsFv片段、scFv片段、scFab片段、sc(Fv)2片段或以上的任何组合。
44.如权利要求1至43中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段，其中所述结合结构域与丝状病毒上的保守马尔堡病毒表位的结合完全或部分中和所述丝状病毒的感染性，
任选地，其中所述丝状病毒属于马尔堡病毒属；
任选地，其中所述丝状病毒是马尔堡病毒。
45.如权利要求1至44中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段，其与抗病毒剂、蛋白质、脂质、可检测标记、聚合物或以上的任何组合缀合。
46.组合物，其包含权利要求1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段，以及载体。
47.试剂盒，其包含：
(a)权利要求1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段、或者权利要求46所述的组合物；以及
(b)使用所述抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段、或者使用所述组合物的说明书，或者用于获得使用所述抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段、或者使用所述组合物的说明书的指导。
48.如权利要求47所述的试剂盒，其还包含缓冲液、固体支持物或两者。
49.如权利要求48所述的试剂盒，其中所述固体支持物是珠粒、过滤器、膜或多孔板。
50.如权利要求49所述的试剂盒，其中所述缓冲液适于酶联免疫吸附测定(ELISA)。
51.如权利要求47至50中任一项所述的试剂盒，其包含可以由保健提供者在护理点执行的诊断测试，从而诊断所述患者是否感染丝状病毒，
任选地，其中所述丝状病毒属于马尔堡病毒属；
任选地，其中所述丝状病毒是马尔堡病毒。
52.确定对象是否感染丝状病毒的方法，其包括：
(a)从怀疑感染丝状病毒的对象获得样品；
(b)将所述样品施加到由权利要求48至51中任一项所述的试剂盒提供的缓冲液或固体支持物上；以及
(c)确定所述样品是与所述试剂盒中提供的抗体或其抗原结合片段反应还是与结合所述抗体或其抗原结合片段的丝状病毒抗原反应，
其中阳性反应指示所述对象感染了丝状病毒；
任选地，其中所述丝状病毒属于马尔堡病毒属；
任选地，其中所述丝状病毒是马尔堡病毒。
53.如权利要求52所述的方法，其中所述样品是血液或其任何部分、尿液、粪便、唾液、呕吐物或以上的任何组合，并且任选地其中所述测定可以在施用所述样品少于24小时、少于12小时、少于6小时、少于5小时、少于4小时、少于3小时、少于1小时或少于30分钟内进行。
54.分离的多核苷酸，其包含编码权利要求1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者其亚基的核酸。
55.如权利要求54所述的多核苷酸，其中所述核酸编码VH，并且其中所述VH包含VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述VH-CDR包含分别与以下相同的或者除了一个或多个VH-CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同的氨基酸序列：
SEQ ID NO:2、3和4(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:10、11和12(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:18、19和20(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:26、27和28(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:34、35和36(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:42、43和44(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:50、51和52(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:58、59和60(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:66、67和68(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:74、75和76(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:82、83和84(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:90、91和92(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:98、99和100(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:106、107和108(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:114、115和116(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:122、123和124(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:130、131和132(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:138、139和140(R55)[CL6.3]。
56.如权利要求54所述的多核苷酸，其中所述核酸编码VL，并且其中所述VL包含VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述VL-CDR包含分别与以下相同的或者除了一个或多个VH-CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同的氨基酸序列：
SEQ ID NO:6、7和8(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:14、15和16(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:22、23和14(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:30、31和32(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:38、39和40(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:46、47和48(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:54、55和56(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:62、63和64(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:70、71和72(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:78、79和80(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:86、87和88(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:94、95和96(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:102、103和104(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:110、111和112(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:118、119和120(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:126、127和128(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:134、135和136(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:142、143和144(R55)[CL6.3]。
57.如权利要求54或55所述的多核苷酸，其中所述核酸编码VH，并且其中所述VH包含与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:1(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:9(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:17(R80)[CL1.3]；SEQIDNO:25(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:33(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:41(R24)[CL2.3]；SEQ IDNO:49(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:57(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:65(R39)[CL2.6]；SEQ IDNO:73(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:81(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:89(R18)[CL4.1]；SEQIDNO:97(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:105(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:113(R83)[CL5.2]；SEQID NO:121(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:129(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:137(R55)[CL6.3]。
58.如权利要求54或56所述的多核苷酸，其中所述核酸编码VL，并且其中所述VL包含与以下参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；SEQIDNO:29(R13)[CL2.1]；SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；SEQ IDNO:53(R25)[CL2.4]；SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；SEQ IDNO:77(R217)[CL3.1]；SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；SEQIDNO:101(R63)[CL4.2]；SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；SEQID NO:125(R50)[CL6.1]；SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；或者SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
59.载体，其包含权利要求54至58中任一项所述的多核苷酸。
60.组合物，其包含权利要求54至58中任一项所述的多核苷酸或权利要求59所述的载体。
61.多核苷酸或多核苷酸的组合，其编码权利要求1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段。
62.如权利要求61所述的多核苷酸或多核苷酸的组合，其包含编码VH的核酸和编码VL的核酸，其中所述VH和VL包含VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列，所述VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别与以下相同或者除了一个或多个CDR中四个、三个、两个或一个单一氨基酸取代、缺失或插入之外分别与以下相同：
SEQ ID NO:2、3、4、6、7和8(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:10、11、12、14、15和16(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:18、19、20、22、23、24(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:26、27、28、29、30、31和32(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:34、35、36、38、39和40(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:42、43、44、46、47和48(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:50、51、52、54、55和56(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:58、59、60、62、63和64(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:66、67、68、70、71和72(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:74、75、76、78、79和80(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:82、83、84、86、87和88(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:90、91、92、94、95和96(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:98、99、100、102、103和104(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:106、107、108、110、111和112(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:114、115、116、118、119和120(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:122、123、124、126、127和128(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:130、131、132、134、135和136(R53)[CL6.2]；或者
SEQ ID NO:138、139、140、142、143和144(R55)[CL6.3]。
63.如权利要求61或权利要求62所述的多核苷酸或多核苷酸的组合，其包含编码VH的核酸和编码VL的核酸，其中所述VH和VL包含分别与选自以下的参考氨基酸序列至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列：
SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5(R45)[CL1.1]；
SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:13(R79)[CL1.2]；
SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:21(R80)[CL1.3]；
SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:29(R13)[CL2.1]；
SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:37(R15)[CL2.2]；
SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:45(R24)[CL2.3]；
SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:53(R25)[CL2.4]；
SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:61(R29)[CL2.5]；
SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:69(R39)[CL2.6]；
SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:77(R217)[CL3.1]；
SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:85(R224)[CL3.2]；
SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:93(R18)[CL4.1]；
SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:101(R63)[CL4.2]；
SEQ ID NO:105和SEQ ID NO:109(R64)[CL5.1]；
SEQ ID NO:113和SEQ ID NO:117(R83)[CL5.2]；
SEQ ID NO:121和SEQ ID NO:125(R50)[CL6.1]；
SEQ ID NO:129和SEQ ID NO:133(R53)[CL6.2]；和
SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:141(R55)[CL6.3]。
64.如权利要求61至63中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸的组合，其中所述编码VH的核酸和所述编码VL的核酸在相同的载体中。
65.载体，其包含权利要求64所述的多核苷酸或多核苷酸的组合。
66.如权利要求61至65中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸的组合，其中所述编码VH的核酸和所述编码VL的核酸在不同的载体中。
67.载体，其包含权利要求66所述的多核苷酸或多核苷酸的组合。
68.宿主细胞，其包含权利要求54至58或61至64或66中任一项所述的多核苷酸或多核苷酸的组合或者权利要求59、65或67中任一项所述的一种或多种载体。
69.制备权利要求1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段的方法，其包括
(a)培养权利要求68所述的细胞；以及
(b)分离所述抗体或其抗原结合片段、或者分离所述结合分子或其抗原结合片段。
70.诊断试剂，其包含权利要求1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或者结合分子或其抗原结合片段。
71.用于预防、治疗或管理对象中丝状病毒感染的方法，其包括向有需要的对象施用有效量的权利要求1至45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者结合分子或其抗原结合片段、或者权利要求46所述的组合物。
72.如权利要求71所述的方法，其中所述丝状病毒是马尔堡病毒、拉夫病毒或以上的任何组合。
73.如权利要求71或72所述的方法，其中所述丝状病毒感染是出血热。
74.如权利要求71至73中任一项所述的方法，其中所述对象是NHP或人。
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