CN116594168A - 一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统及其方法,采用电控变焦透镜作为一种快速的轴向扫描装置,通过4f系统所具有的远心光路结构保证轴向扫描采集图像的垂轴放大率恒定,将采集到的一系列部分离焦图像通过图像融合算法合成一张全聚焦图像。本发明可避免传统方法中采集部分离焦图像时引入的机械移动,大大提高了系统的采集速度和准确度。此外,本发明有望将传统的大景深显微成像系统的应用范围由静止缓变物体扩展到高速动态物体,在生物医学等领域具有及广的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于光学显微成像技术,特别是一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统及方法。
背景技术
景深拓展是光学显微技术领域的重要课题,特别是在生物医学显微观测领域,实际的样本切片一般都具有一定厚度,在观察过程若存在景深受限问题,将导致成像系统所获得的图像局部区域不清晰,从而影响到最终的观察结果。目前针对光学显微系统景深扩展的方法研究已十分深入,具体包括光学切趾术、波前编码技术和无衍射光技术等。然而它们目前仍存在成像分辨率受抑制、景深拓展范围有限或操作复杂度较高的问题。
不同于直接改变光路结构或成像原理拓展景深的方法,全聚焦景深融合技术从图像处理算法上提供了新的思路。早期全聚焦图像融合方法主要有差分法、加权平均法和高通滤波法等。这些方法仅在单一层面上对图像进行融合,可能导致最终图片对比度的下降或噪声水平增加等结果。随着计算机视觉领域的不断进步和各类光学系统的广泛应用,更多的全聚焦图像融合方法被提出。目前常应用于生物医学成像领域的全聚焦图像融合技术通常采用清晰度测度或聚焦测度来评价每帧中各区域的信息量,并在融合时赋予高信息量区域以高权重,以使得全聚焦图像中包含更多的信息量。Said Pertuz等人基于此提出的具有自适应性的景深融合方法([1]Pertuz S,Puig D,Garcia M A,et al.Generation ofAll-in-Focus Images by Noise-Robust Selective Fusion of Limited Depth-of-Field Images[J].IEEE Transactions on Image Processing,2013,22(3):1242-1251.),该方法通过构造各图像的焦点度量矩阵以评估聚焦度,通过拟合理想焦点函数以计算各像素点的附加噪声,从而自适应地计算各像素点在不同帧下的权重并实现加权融合。
多焦距图像融合算法大大提高了景深的可拓展范围,然而该方法需采集多个与光轴垂直的平面上不同深度的像,需要将样本相对于物镜的固定焦平面进行移动。这种机械运动具有移动精度难以控制、操作时间过长和造成样本震动等缺陷。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统,以解决大数值孔径下显微成像景深受限问题,实现快速得到轴向堆栈。
实现本发明目的的技术解决方案为:一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统,包括显微成像系统以及包含可变焦透镜的4f系统,所述显微系统包括集光镜、聚光镜孔径光阑、聚光镜、显微物镜、反射镜与镜筒透镜,照明光通过集光镜汇聚到聚光镜孔径光阑,通过聚光镜孔径光阑发散后聚集到聚光镜后照射到待测样品上,透过待测样品的光被显微物镜接收,经过反射镜反射经过镜筒透镜放大成像在4f系统的像面,所述包含可变焦透镜的4f系统包括同光轴设置的第一透镜L1、第二透镜L2、电控变焦透镜组以及CCD相机,所述电控变焦透镜组位于第一透镜L1和第二透镜L2的中间位置,距离第一透镜L1为f1,距离第二透镜L2为f2,显微图像平面距离第一透镜L1大小为f1,第二透镜L2距离CCD相机成像面端口的距离为f2。
优选地,所述电控变焦透镜组包括电控变焦透镜与补偿镜,二者紧贴在一起,间距为d,利用可编程电流源电流控制电流驱动电控变焦透镜,并产生触发脉冲使电控变焦透镜与CCD相机同步。
优选地,电控变焦透镜组的焦距为:
式中,fETL为变焦透镜的焦距,fOL为补偿镜的焦距,d为两透镜的间距。
本发明还提出了一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像方法,其特征在于,具体步骤为:
第一步:采用可编程电流源编程控制成像系统的焦距连续变化,CCD相机同步采集多张不同离焦量下的部分离焦图像;
第二步:根据捕获的图像计算焦点度量张量;
第三步:计算各图像的聚焦评价函数,舍弃聚焦评价函数值小于阈值的对焦模糊图像实现自动对焦;
第四步:选取位置(x,y)在不同帧下像素点的焦点度量函数F(k),计算其在不同帧下的附加噪声信号N(k),并以峰值信噪比PSNR作为像素点的选择性测度;
第五步:构建高通滤波器计算(x,y)处各帧像素值对应的权重ω(k);
第六步:依据权重对各像素进行加权融合,得到融合后(x,y)位置的像素值I(x,y);
第七步:遍历各个位置,执行第四步至第六步的操作,直至计算出与所采图像大小相等的融合图像。
优选地,焦点度量张量F(x,y,k)的表达式为
式中,Ω(x,y)为(x,y)的r×r邻域,k为采集图像的序号,μ是Ω(x,y)内像素的平均灰度,Ik(x,y)为采集第k张的离焦图像。
优选地,聚焦评价函数E(k)具体为:
式中,F(x,y,k)为焦点度量张量,r×r为邻域大小。
优选地,第四步的具体步骤为:
构建理想焦点函数G(k),即
G(k)=Aexp(-(k-μ)2/(2σ2))
其中,A为高斯函数的最大值,μ为k的均值,σ为k的标准差;
由于焦点度量函数F(k)可看作理想焦点函数G(k)与附加噪声信号N(k)的叠加,即
F(k)=G(k)+N(k)
计算得到N(k),从而得到(x,y)处的选择性测度,即
S=20log(max(F(k))/RMS(N(k)))
式中,RMS表示取方均根。
优选地,权重ω(k)具体为
式中,α为常数,Sth为可选择的阈值,F(k)为焦点度量函数。
优选地,融合后(x,y)位置的像素值I(x,y)为:
式中,C为归一化常数,ω(k)为权重,K为参与图像融合的部分离焦图的总数,Ik(x,y)为采集第k张的离焦图像。
优选地,在CCD相机同步采集之前对基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统进行标定,具体方法为:采用单点源物体置于高精度电控平移台的z轴上,通过平移台使单点源物体离焦Δz的距离,通过可编程电流源输出调谐电流x,改变电控变焦透镜的焦距,直到单点源物体重新聚焦,建立一组系统离焦量Δz与调谐电流x的关联,并测量出整套成像系统任意离焦量Δz与调谐电流x的关系,建立对应的查找表,该查找表的条目即为可编程电流源输出电流x与整套成像系统离焦量Δz。
本发明与现有技术相比,其显著优点:(1)避免了传统方法中引入的机械移动,只需要改变变焦透镜的电流可直接控制系统的离焦量,大大提高了系统的采集速度,从而大大提高了系统的速度和准确度。相机与成像系统无缝贴合,赋予显微系统实时大景深成像能力,可对活体细胞进行观测;(2)本发明使用具有远心光路结构的4f系统,保证变焦拍摄时图像放大率恒定且平移量为0,为后续图像融合提供便利,大大简化了操作;(3)本发明已经成功应用于液基细胞检测,在科学研究、病灶筛查以及形态检测等领域中有着广泛用途。
附图说明
图1是基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统中所使用的4f系统的原理图。
图2是无限远校正光学显微镜原理图与内部参数之间的关系图。
图3是基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统原理图。
图4是基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统中包含电控变焦透镜的4f系统局部原理图。
图5中的(a)-(h)是系统在不同焦距下对液基细胞拍摄的一系列部分离焦图。
图5中的(i)是使用景深融合算法对多张液基细胞部分离焦图融合的全聚焦图像。
具体实施方式
一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统,采用4f成像系统实现恒定的放大率,用电控变焦透镜作为一种快速轴向扫描装置,将采集到的一系列光强分布图片通过景深融合算法,得到一张大景深的图片。
如图3所示,一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统,包括显微成像系统1以及一个包含可变焦透镜的4f系统2,所述显微系统1包括集光镜3、聚光镜孔径光阑4、聚光镜5、显微物镜7、反射镜8与镜筒透镜9,其中照明光通过集光镜3汇聚到聚光镜孔径光阑4,聚光镜孔径光阑4可调节孔径大小,控制照明的通光孔径。通过聚光镜孔径光阑4发散后聚集到聚光镜5后照射到待测样品6上,透过样品的光被显微物镜7接收,经过反射镜8反转经过镜筒透镜9放大成像在4f系统的像面10。
所述包含可变焦透镜的4f系统2包括同光轴设置的第一透镜L111、第二透镜L213、电控变焦透镜组12以及CCD相机14。第一透镜L111与第二透镜L213的焦距f=f1=f2,所述电控变焦透镜组12包含电控变焦透镜16与补偿镜15,二者紧贴在一起,间距为d。第一透镜L111与第二透镜L213构成一个标准的4f成像系统,即显微图像平面10距离第一透镜L111大小为f1,第二透镜L213距离CCD相机14成像面端口的距离为f2,电控变焦透镜组12在第一透镜L111和第二透镜L213的中间位置,距离第一透镜L111为f1,距离第二透镜L213为f2。可编程电流源电流17控制电流以驱动电控变焦透镜16,并产生触发脉冲使之精确与CCD相机实现同步,从而实现快速变焦,同步采集的功能。
在标准的4f系统中加入了一个液体变焦透镜,其可以通过控制变焦透镜的电流改变其内部液体的曲率,从而达到快速变焦的目的。电控变焦透镜组12由电控变焦透镜16与补偿镜15组成,电控变焦透镜组12的焦距
式中fETL为变焦透镜16的焦距,fOL为补偿镜15的焦距,d为两透镜的间距。变焦透镜组的透过率函数
因此在标准4f系统中的频谱面上加入一个透镜后,CCD接收到像的复振幅分布为
又因为4f系统有以及/>代入得
而在菲涅尔衍射中,离焦可表示为
式中H(ξ,η)为菲涅尔衍射的传递函数,且
由此可见,变焦透镜实际上实现了的变焦,因此不需要进行机械z轴扫描,仅改变电控透镜组的fc即可实现快速变焦。
一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像方法,具体步骤如下:
第一步:采用可编程电流源17编程控制成像系统的焦距连续变化,CCD相机14同步采集不同离焦量下的多张部分离焦图像I1(x,y)、I2(x,y)、...、Ik(x,y)。
在CCD相机14同步采集之前对基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统进行标定,具体方法为:采用单点源物体置于高精度电控平移台的z轴上,通过平移台使单点源物体离焦△z的距离,通过可编程电流源17输出调谐电流x,改变电控变焦透镜16的焦距,直到单点源物体重新聚焦,建立一组系统离焦量△z与调谐电流x的关联,并测量出整套成像系统任意离焦量△z与调谐电流x的关系,建立对应的查找表,该查找表的条目即为可编程电流源17输出电流x,与整套成像系统离焦量△z:实际成像时,所需要的离焦量可通过该查找表获得可编程电流源(17输出电流,从而实现对成像系统的聚焦平面所在位置的精准控制。
第二步:根据捕获的图像计算焦点度量张量F(x,y,k),其表达式为
式中Ω(x,y)为(x,y)的r×r邻域,μ是Ω(x,y)内像素的平均灰度;
第三步:计算各图像的聚焦评价函数E(k),舍弃E(k)较小的几张对焦模糊图像以实现自动对焦,可选用E(k)的表达式为
第四步:选取像素点位置(x,y)在不同帧下的焦点度量函数F(k)计算其在不同帧下的附加噪声信号N(k),并以峰值信噪比PSNR作为该像素点的选择性测度。其具体步骤为构建理想焦点函数G(k),通常认为G(k)为高斯函数,即
G(k)=Aexp(-(k-μ)2/(2σ2))
其中A为高斯函数的最大值,μ为k的均值,σ为k的标准差,这些值可选取F(k)中最大的三点进行高斯拟合获取。由于焦点度量函数F(k)可看作理想焦点函数G(k)与附加噪声信号N(k)的叠加,即
F(k)=G(k)+N(k)
可计算得到N(k),从而得到(x,y)处的选择性测度,即
S=20log(max(F(k))/RMS(N(k)))。
第五步:构建高通滤波器计算(x,y)处各帧像素值对应的权重ω(k),选取的滤波器表达式为
式中α为可选择的常数,Sth为可选择的阈值。
第六步:依据权重对各像素进行加权融合,得到融合后(x,y)位置的像素值I(x,y),即
式中C为归一化常数。
第七步:遍历各个像素位置,执行第四步至第六步的操作,直至计算出与所采图像大小相等的融合图像。
为了验证本发明基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统的景深扩展能力,我们对对液基细胞进行观测。图5(a)-(h)显示了系统在不同焦距下对液基细胞拍摄的一系列部分离焦图。采用这三幅图像,通过本发明所使用的景深融合算法可得到全聚焦图像如图5(i)所示。从结果中可以清晰观测到位于不同深度的亚细胞结构,如位于细胞中央的细胞核、细胞膜上的褶皱和细胞周围的伪足等等。除此之外,本发明方法不需要对样本进行机械移动实现对焦,使用软件控制变焦透镜即可实现快速精准变焦,因此本发明有望将传统的大景深显微成像系统的应用范围由静止缓变物体扩展到高速动态物体,在生物医学等领域具有及广的应用前景。
Claims (10)
1.一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统,其特征在于,包括显微成像系统(1)以及包含可变焦透镜的4f系统(2),所述显微系统(1)包括集光镜(3)、聚光镜孔径光阑(4)、聚光镜(5)、显微物镜(7)、反射镜(8)与镜筒透镜(9),照明光通过集光镜(3)汇聚到聚光镜孔径光阑(4),通过聚光镜孔径光阑(4)发散后聚集到聚光镜(5)后照射到待测样品(6)上,透过待测样品(6)的光被显微物镜(7)接收,经过反射镜(8)反射经过镜筒透镜(9)放大成像在4f系统的像面(10),所述包含可变焦透镜的4f系统(2)包括同光轴设置的第一透镜L1(11)、第二透镜L2(13)、电控变焦透镜组(12)以及CCD相机(14),所述电控变焦透镜组(12)位于第一透镜L1(11)和第二透镜L2(13)的中间位置,距离第一透镜L1(11)为f1,距离第二透镜L2(13)为f2,显微图像平面(10)距离第一透镜L1(11)大小为f1,第二透镜L2(13)距离CCD相机(14)成像面端口的距离为f2。
2.根据权利要求1所述的基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统,其特征在于,所述电控变焦透镜组(12)包括电控变焦透镜(16)与补偿镜(15),二者紧贴在一起,间距为d,利用可编程电流源电流(17)控制电流驱动电控变焦透镜(16),并产生触发脉冲使电控变焦透镜(16)与CCD相机同步。
3.根据权利要求1所述的基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统,其特征在于,电控变焦透镜组(12)的焦距为:
式中,fETL为变焦透镜(16)的焦距,fOL为补偿镜(15)的焦距,d为两透镜的间距。
4.一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像方法,其特征在于,具体步骤为:
第一步:采用可编程电流源(17)编程控制成像系统的焦距连续变化,CCD相机(14)同步采集多张不同离焦量下的部分离焦图像;
第二步:根据捕获的图像计算焦点度量张量;
第三步:计算各图像的聚焦评价函数,舍弃聚焦评价函数值小于阈值的对焦模糊图像实现自动对焦;
第四步:选取位置(x,y)在不同帧下像素点的焦点度量函数F(k),计算其在不同帧下的附加噪声信号N(k),并以峰值信噪比PSNR作为像素点的选择性测度;
第五步:构建高通滤波器计算(x,y)处各帧像素值对应的权重ω(k);
第六步:依据权重对各像素进行加权融合,得到融合后(x,y)位置的像素值I(x,y);
第七步:遍历各个位置,执行第四步至第六步的操作,直至计算出与所采图像大小相等的融合图像。
5.根据权利要求4所述的基于可变焦透镜的快速大景深显微成像方法,其特征在于,焦点度量张量F(x,y,k)的表达式为
式中,Ω(x,y)为(x,y)的r×r邻域,k为采集图像的序号,μ是Ω(x,y)内像素的平均灰度,Ik(x,y)为采集第k张的离焦图像。
6.根据权利要求4所述的基于可变焦透镜的快速大景深显微成像方法,其特征在于,聚焦评价函数E(k)具体为:
式中,F(x,y,k)为焦点度量张量,r×r为邻域大小。
7.根据权利要求4所述的基于可变焦透镜的快速大景深显微成像方法,其特征在于,第四步的具体步骤为:
构建理想焦点函数G(k),即
G(k)=Aexp(-(k-μ)2/(2σ2))
其中,A为高斯函数的最大值,μ为k的均值,σ为k的标准差;
由于焦点度量函数F(k)可看作理想焦点函数G(k)与附加噪声信号N(k)的叠加,即
F(k)=G(k)+N(k)
计算得到N(k),从而得到(x,y)处的选择性测度,即
S=20log(max(F(k))/RMS(N(k)))
式中,RMS表示取方均根。
8.根据权利要求4所述的基于可变焦透镜的快速大景深显微成像方法,其特征在于,权重ω(k)具体为
式中,α为常数,Sth为可选择的阈值,F(k)为焦点度量函数。
9.根据权利要求4所述的基于可变焦透镜的快速大景深显微成像方法,其特征在于,融合后(x,y)位置的像素值I(x,y)为:
式中,C为归一化常数,ω(k)为权重,K为参与图像融合的部分离焦图的总数,Ik(x,y)为采集第k张的离焦图像。
10.根据权利要求4所述的基于可变焦透镜的快速大景深显微成像方法,其特征在于,在CCD相机(14)同步采集之前对基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统进行标定,具体方法为:采用单点源物体置于高精度电控平移台的z轴上,通过平移台使单点源物体离焦Δz的距离,通过可编程电流源(17)输出调谐电流x,改变电控变焦透镜(16)的焦距,直到单点源物体重新聚焦,建立一组系统离焦量Δz与调谐电流x的关联,并测量出整套成像系统任意离焦量Δz与调谐电流x的关系,建立对应的查找表,该查找表的条目即为可编程电流源(17)输出电流x与整套成像系统离焦量Δz。
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---|---|---|---|
CN202310321871.2A CN116594168A (zh) | 2023-03-29 | 2023-03-29 | 一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统及方法 |
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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CN202310321871.2A CN116594168A (zh) | 2023-03-29 | 2023-03-29 | 一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统及方法 |
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CN116594168A true CN116594168A (zh) | 2023-08-15 |
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Family Applications (1)
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CN202310321871.2A Pending CN116594168A (zh) | 2023-03-29 | 2023-03-29 | 一种基于可变焦透镜的快速大景深显微成像系统及方法 |
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CN (1) | CN116594168A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113655610A (zh) * | 2021-07-14 | 2021-11-16 | 中国电子科技集团公司第十三研究所 | 用于光热反射显微热成像的自动对焦方法及控制装置 |
CN117111283A (zh) * | 2023-08-25 | 2023-11-24 | 南京理工大学 | 基于电控变焦透镜的高速多模态景深延拓显微成像系统与方法 |
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2023
- 2023-03-29 CN CN202310321871.2A patent/CN116594168A/zh active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN113655610A (zh) * | 2021-07-14 | 2021-11-16 | 中国电子科技集团公司第十三研究所 | 用于光热反射显微热成像的自动对焦方法及控制装置 |
CN113655610B (zh) * | 2021-07-14 | 2024-04-26 | 中国电子科技集团公司第十三研究所 | 用于光热反射显微热成像的自动对焦方法及控制装置 |
CN117111283A (zh) * | 2023-08-25 | 2023-11-24 | 南京理工大学 | 基于电控变焦透镜的高速多模态景深延拓显微成像系统与方法 |
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