CN116585321B - 更昔洛韦在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及更昔洛韦在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用，应用方法为以更昔洛韦为唯一活性组分或与其他改善过敏性鼻炎的药物联用。本发明提供了更昔洛韦在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用，经研究表明：更昔洛韦能有效改善临床中抗过敏药物治疗无效的AR患者的症状，提高其生活质量；也从转录组学发现GCV调节鼻粘膜纤毛细胞、杯状细胞、白细胞功能；体外PBMCs药物试验发现GCV可能通过增加调节T细胞改变机体免疫平衡从而减轻过敏症状。

Description

更昔洛韦在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用
技术领域
本发明属于含嘌呤环系的杂环化合物，具体涉及更昔洛韦在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用。
背景技术
过敏性鼻炎(allergic rhinit is；AR)是最常见的过敏性疾病之一，全球发病率为10～25％，严重影响患病人群的生活质量，增加社会经济负担。AR的特点是鼻部高反应性症状，如鼻塞、鼻痒、喷嚏和流涕等，病史从数月至数年不等。AR的治疗方案包括患者教育、避免过敏原、抗过敏药物和特异性免疫治疗(AIT)。常见的抗过敏药物包括鼻喷糖皮质激素、白三烯受体拮抗剂、鼻喷/口服抗组胺药等。大多数AR患者经过抗过敏药物治疗，其鼻炎症状会逐步缓解。特异性免疫治疗主要用于中-重度AR患者，但是这些患者也可通过常规抗过敏药物缓解其鼻部症状。然而，临床上有部分患者在接受了最佳且最大限度的抗过敏药物治疗后，AR症状仍未得到控制，被称之为难治性AR。AR症状控制不佳可能与不恰当的治疗方案、患者依从性差、社会心理因素及治疗耐药等有关。除了前三个原因外，一些患者虽然交替使用不同品牌的常规抗过敏药物，但其鼻部症状仍未得到控制。这些患者对常规抗过敏药物治疗反应差的原因尚不清楚。
更昔洛韦(Ganciclovir；GCV)是一种治疗DNA病毒的有效抗病毒药物，如巨细胞病毒和疱疹病毒感染等。其主要机制是GCV被病毒胸苷激酶磷酸化并进入细胞，抑制DNA聚合酶从而抑制病毒复制。从目前已知的药物机制上看，其对过敏性炎症并不产生作用。
本申请人在临床中偶然发现一些患者在使用GCV治疗其他疾病时，其鼻过敏症状(没有与病毒感染相关的体征)得到了明显的缓解。而且在用GCV治疗一段时间后，原本疗效差的抗过敏药物可重新发挥作用——有效且持久地改善难治性AR患者的鼻部症状。经过长期谨慎地观察，发现超过一半的难治性AR患者使用GCV后，其AR症状得到明显缓解。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的上述不足，提供一种采用更昔洛韦在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用，其对治疗过敏性鼻炎具有良好的临床效果，尤其是采用现有治疗方法无效的难治性过敏性鼻炎，能够显著改善患者临床症状。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：
更昔洛韦在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用。
按上述方案，所述过敏性鼻炎临床症状为鼻塞，鼻痒，喷嚏，清涕中的一种或几种。
按上述方案，应用方法为以更昔洛韦为唯一活性组分或与其他改善过敏性鼻炎的药物联用。
按上述方案，更昔洛韦与其他改善过敏性鼻炎的药物联用方式为：先使用更昔洛韦，根据需要再使用其他改善过敏性鼻炎的药物，或同时使用更昔洛韦与其他改善过敏性鼻炎的药物。
按上述方案，所述其他改善过敏性鼻炎的药物包括鼻喷激素和/或口服抗组胺药。
按上述方案，所述鼻喷激素包括糠酸莫米松，布地奈德，曲安奈德，氟替卡松中的一种；所述口服抗组胺药包括氯雷他定，西替利嗪，依巴斯汀中的一种。
优选的是，具体应用方法为：先使用更昔洛韦7～14天，根据需要继续使用抗过敏药物7～14天。
按上述方案，使用更昔洛韦的形式为：以更昔洛韦为唯一活性组分或与其他改善过敏性鼻炎的口服药物联用，并与药物学上可接受的辅料混合制成各种形式的胶囊剂、颗粒剂、片剂、散剂、膏剂、粉剂或水剂。
按上述方案，所述更昔洛韦的使用剂量为14岁及以上，250～500mg/次，每天两次；14岁以下，125～250mg/次，每天两次，以口服方式给药。
临床中的一类过敏性鼻炎患者，抗过敏治疗完全无效，且无病毒感染的病史，而更昔洛韦治疗能有效改善这类患者鼻部症状。实验过程中，体外使用GCV刺激外周血单个核细胞(PBMCs)，以流式细胞仪检测T调节细胞(CD4+FOXP3+T细胞)比例，发现GCV治疗有效组T调节细胞在刺激后可显著升高，其作用机制可能是GCV通过增加调节T细胞改变机体免疫平衡从而减轻过敏症状。
本发明的有益效果在于：本发明提供了更昔洛韦在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用。经研究表明：更昔洛韦能有效改善临床中抗过敏药物治疗无效的AR患者的症状，提高其生活质量；也从转录组学发现GCV调节鼻粘膜纤毛细胞、杯状细胞、白细胞功能；体外PBMCs药物试验发现GCV可能通过增加调节T细胞改变机体免疫平衡从而减轻过敏症状。
附图说明
图1为本发明实施例1诊治流程图；
图2实施例1中GCV有效组患者(n＝26)在诊治过程中的阶段性ARCT、VAS、TNSS得分对比图；
图3为实施例1中GCV治疗有效组的患者接受GCV治疗前后鼻部症状评分对比图；
图4为实施例1普通AR组和GCV有效组在治疗前鼻刮细胞EB病毒、人巨细胞病毒、人疱疹病毒(HSV)1、2、3、6、7、8基因丰度对比图及GCV有效组在治疗前和治疗后的EB病毒、人巨细胞病毒、人疱疹病毒(HSV)1、2、3、6、7、8基因丰度对比图；
图5为实施例1中GCV有效组(n＝6)和普通AR组(n＝5)治疗前的鼻刮细胞RNA-seq差异基因绘制的火山图；
图6为实施例1中GCV有效组相对于普通AR组上调的差异基因富集的通路；
图7为实施例1中GCV有效组相对于普通AR组下调的差异基因富集的通路；
图8为实施例1GCV有效组(n＝6)和GCV无效组(n＝3)治疗前的鼻刮细胞RNA-seq差异基因绘制的火山图；
图9为实施例1中GCV有效组相对于GCV无效组上调的差异基因富集的通路；
图10为实施例1中GCV有效组相对于GCV无效组下调的差异基因富集的通路；
图11为实施例1中GCV有效组(n＝6)治疗前后的差异基因鼻刮细胞RNA-seq的聚类热图；
图12为实施例1中GCV有效组治疗后相对于治疗前上调的差异基因富集的通路；
图13为实施例1中GCV有效组治疗后相对于治疗前下调的差异基因富集的通路；
图14为实施例1中GCV有效组和GCV无效组GCV体外刺激PBMCs测试CD4+FOXP3+细胞的流式检测图；
图15为实施例1中GCV有效组和GCV无效组GCV体外刺激PBMCs测试CD4+FOXP3+细胞/CD4+细胞百分比对比图；
图16为实施例1中GCV有效组和GCV无效组GCV体外刺激PBMCs测试CD4+IFNγ+细胞的流式检测图；
图17为实施例1中GCV有效组和GCV无效组GCV体外刺激PBMCs测试CD4+IFNγ+细胞/CD4+细胞百分比对比图；
图18为实施例1中GCV有效组和GCV无效组GCV体外刺激PBMCs测试CD4+IL4+细胞的流式检测图；
图19为实施例1中GCV有效组和GCV无效组GCV体外刺激PBMCs测试CD4+IL4+细胞/CD4+细胞百分比对比图；
图20为实施例1中GCV有效组和GCV无效组GCV体外刺激PBMCs测试CD4+IL17A+细胞的流式检测图；
图21为实施例1中GCV有效组和GCV无效组GCV体外刺激PBMCs测试CD4+IL17A+细胞/CD4+细胞百分比对比图；
图22为实施例1中GCV有效组和GCV无效组GCV体外刺激PBMCs测试CD8+IFNγ+细胞的流式检测图；
图23为实施例1中GCV有效组和GCV无效组GCV体外刺激PBMCs测试CD8+IFNγ+细胞/CD4+细胞百分比对比图；
图24为实施例1中以GCV治疗前后TNSS和VAS改变程度与GCV刺激Foxp3+Treg细胞比例变化程度所作的散点图；
图25为实施例1通过GCV有效组和GCV无效组中Foxp3+Treg细胞比例的变化得到的受试者工作曲线(ROC)曲线。
具体实施方式
为使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合附图对本发明作进一步详细描述。
实施例1
更昔洛韦治疗难治性过敏性鼻炎研究
1.1研究对象
所有患者均来自耳鼻喉科门诊患者，在临床上招募自诉使用常规抗过敏药物(鼻喷糖皮质激素、口服抗组胺药物、鼻喷抗组胺药物和口服白三烯受体拮抗剂)效果不佳的AR患者。纳入和排除的标准如下：
纳入标准：(1)具有典型鼻腔高反应性症状两种或两种以上(鼻塞，鼻痒，打喷嚏和鼻涕)，至少有一种过敏原皮肤点刺试验或血清学特异性IgE试验的阳性过敏原；(2)病程至少持续6个月；(3)鼻腔症状的严重程度为中度/重度；(4)鼻分泌物细胞学涂片显示嗜酸性粒细胞占总炎性细胞比例＞10％；(5)患者自诉常规抗过敏药物无效。
排除标准：(1)过去2周内有病毒/细菌感染症状、发热和/或其他系统性表现；(2)其他鼻部疾病，如鼻息肉或鼻部肿瘤；(3)过去6个月内有鼻部手术史；(4)对GCV过敏；(5)妊娠期妇女、准备怀孕的患者；(6)严重的中性粒细胞减少症(中性粒细胞绝对计数低于0.5×109/L)或严重的血小板减少症(血小板计数低于2.5×1010/L)。
采取干预性的非随机队列研究。入选的患者先用常规抗过敏药物治疗2周，以排除因用药不规范而导致疗效不佳的假象(同时使用鼻喷激素类和口服抗组胺药进行排除治疗，如果患者既往曾使用过上述药物但没有效果，则换成另一种品牌的同类药物)。
根据患者对常规抗过敏药物的反应，对其进行分组。如果常规抗过敏药物治疗有效，患者归为普通AR组；如果无效，患者被定义为难治性AR。对难治性AR患者，给予GCV治疗2周(口服，≥14岁的患者500mg/次，每天两次；＜14岁的患者250mg/次，每天两次)。如果GCV治疗无效，患者被归为GCV无效组；如果有效，患者归为GCV有效组。GCV治疗2周后，对GCV有效组的患者，如治疗后TNSS≥4或VAS≥3cm，则在GCV治疗后继续使用常规抗过敏药物2周；反之治疗结束。在每次随访时，对鼻部症状进行评估。同时收集鼻分泌物涂片、鼻分泌物、鼻刮上皮细胞和外周血。
详细的诊治流程见图1流程图。
注：图1中#治疗有效的标准是ARCT(过敏性鼻炎控制测试)≥20分，治疗无效的标准是ARCT＜20分。
1.2临床症状评分
视觉模拟量表(vi sual analogue scale，VAS评分)：所有综合症状的严重程度用VAS评估，范围从0(无症状)到10厘米(可想象的最严重症状)。ARIA 2008指南分类:“轻度”AR＝0-3厘米，“中度”AR＝3.1-7厘米，“重度”AR＝7.1-10厘米。
过敏性鼻炎控制测试(ARCT)是由Demoly等人验证的关于AR控制的自我填写问卷，它由5个问题组成，每个问题得分1-5分，总分5-25分。难治性AR定义为接受治疗2周后ARCT得分＜20的患者。
鼻部症状评分：对鼻塞、鼻痒、打喷嚏和鼻涕分别进行评分。无症状＝0；轻度(症状轻微，容易忍受)＝1；中度(症状明显，令人讨厌，但可以忍受)＝2；严重(症状不能忍受，影响日常生活或睡眠)＝3。鼻部症状总分(TNSS)是所有鼻部症状得分的总和，范围从0到12。
1.3鼻分泌物涂片
患者擤鼻涕(双侧)，或者用玻璃棒置于患者鼻前庭前端处轻轻转动以获取鼻分泌物，转动时尽可能避免摩擦黏膜表面。将取到的鼻分泌物均匀轻薄地涂布在玻片上，鼻分泌物涂片覆盖面积需超过载玻片的2/3，自然风干后进行用瑞氏-吉姆萨染液(Baso珠海；中国)进行染色，染色完成后在光学显微镜下进行计数。观察10×100倍镜下的嗜酸性粒细胞占炎性细胞的百分比，取5个视野平均值作为结果。
1.4鼻腔分泌物的收集和检测
将两块1.0cm×1.5cm的无菌医用海绵轻轻放入患者的双侧鼻腔内1-5min，待海绵吸附足够的分泌物后，轻轻取出海绵并放入2mL注射器中，将鼻腔分泌物挤出并收集于1.5mL离心管中，3000转离心5min，取上清液放入-80℃冰箱中待检。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测鼻腔分泌物中的嗜酸细胞阳离子蛋白(Eosinophil cationic protein；ECP)水平，ECP-ELISA试剂盒来自中敏泰克生物科技有限公司。鼻腔分泌物中IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-13、IL-17A、IL-28A、IL-33、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IFN-λ、Eotaxin的细胞因子水平使用Luminex(R&D；LXSAHM-13)进行检测。
1.5鼻刮细胞转录组测序
清洁鼻腔后，采用医用无菌刮匙轻轻刮取双侧下鼻甲粘膜上皮，约绿豆大小。将刮取的粘膜上皮细胞被置于TRIzol试剂(Invitrogen)中，并保存在液氮中待处理。文库制备和高通量测序、数据分析、RNA序列和DNA病毒序列富集分析由康测科技有限公司(中国；武汉)进行。样本质量分析采用NanodropTM OneC分光光度计检测A260/A280处表达情况。合格的样本最后通过Qubit3.0和QubitTM RNA广谱检测试剂盒进行定量。原始数据首先是由Trimomatic(Version 0.36)过滤。通过FeatureCounts计数，然后计算RPKM。用edgeR包(Version 3.12.1)鉴定组间差异表达的基因。该次分析以P值＜0.05以及倍数变化(Foldchange,FC)高于2认为组与组之间的基因表达差异具有显著性。
1.7PBMCs体外GCV药物试验
收集难治性AR患者外周血。用淋巴细胞分离液(MP；Biomedicals)在8小时内分离出外周血单个核细胞(PBMCs)，并以1x106/mL的密度悬浮在含10％热灭活的胎牛血清(Gibco,Grand Island)和1％青霉素和链霉素(Gibco)的RPMI1640培养基(Gibco)中。每个样品设置三个孔：未处理孔(NT孔)；加1μL二甲基亚砜(DMSO；Solar bio)(DMSO孔)；加入400μM GCV(经DMSO稀释，Selleck)(GCV孔)。PBMCs细胞在不同刺激下于24孔细胞培养板(Corning,Corning,NY)中在5％CO2，37℃细胞培养箱中进行培养。在染色前4-6小时，根据Leuko Act Cktl with Golgi Plug(BD Bioscience)说明书将其加入细胞培养基中，以提高细胞内细胞因子的染色效果。细胞培养48小时后收集细胞液，用抗人FVS-BV510、CD4-BV605、CD8-FITC染色，然后在用固定破核剂(eBioscience)破细胞核后用IL-4-BV421、IL-17A-PE、IFNr-PEcy7、FOXP3-BB700(均来自BD Bioscience)染色。使用BD LSRFortessaTMX-20(BD Biosciences,USA)及FlowJo软件(FlowJo,Ashland,OR USA)进行分析。
1.8统计学分析
使用Graphpad Prism9.0软件进行统计学分析，细胞亚群的数据使用FlowJo软件(10.8.1版，FlowJo.LLC，Ashland，OR USA)进行分析，基本信息以平均值±标准差表示。如果数据符合正态分布，则进行配对/非配对t检验和普通单因素方差分析；如果不符合正态分布，则采用非参数检验。P＜0.05被视为有统计学意义的差异，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01，***表示P＜0.001，****表示p＜0.0001。
1.9医学伦理
该研究获得华中科技大学同济医学院附属协和医院伦理委员会的批准([2022]0221-01)。
2试验结果
2.1根据纳入和排除标准，经过相应的治疗观察，所有入选的患者可以分为以下3组，基本信息见表1。
表1患者的基本信息
表1中SAA表示血清淀粉样蛋白A，§CRP表示C反应蛋白
2.2GCV显著改善难治性AR患者的鼻部症状
在常规抗过敏药物治疗2周后，根据ARCT评分，63.5％(40/63)难治性AR患者在常规抗过敏药物治疗失败后接受GCV治疗。这些难治性AR患者中有35％(14/40)经GCV治疗无效，有65％(26/40)的患者VAS和TNSS、ARCT评分在GCV治疗后有明显改善，统计GCV有效组患者初诊、常规抗过敏药物治疗2周后、GCV治疗后和再次常规抗过敏药物治疗后的临床症状评分，结果如图2所示，图2为GCV有效组患者(n＝26)在诊治过程中的阶段性ARCT、VAS、TNSS得分对比图，NS表示p＞0.05,*表示p＜0.05，**表示p＜0.01，***表示p＜0.001，可以看出GCV显著改善常规抗过敏药物无效的AR患者的鼻部症状，GCV治疗2周后，部分患者(n＝15)的TNSS≥4分或VAS≥3cm，再次接受之前无效的抗过敏药物治疗2周，结果发现，原来无效的抗过敏药物可以进一步减轻这些患者的鼻部症状。图3为GCV治疗有效组的患者接受GCV治疗前后鼻部症状(鼻塞、鼻痒、打喷嚏、流鼻涕)评分对比图，可以看出，GCV治疗有效组的患者接受GCV治疗后鼻部症状(鼻塞、鼻痒、打喷嚏、流鼻涕)评分明显改善。这些结果表明，GCV不仅可以改善临床症状，还可以让原本无效的常规抗过敏药物重新发挥其治疗作用。
2.3GCV对鼻分泌物中的嗜酸细胞和ECP没有明显影响
在普通AR组中，经过鼻喷激素和口服抗组胺药物治疗后，鼻分泌物中嗜酸性粒细胞百分比和ECP浓度明显下降。然而，在GCV治疗后，GCV有效组和GCV无效组的嗜酸性粒细胞百分比和ECP没有明显变化，三组患者治疗前后鼻分泌物细胞因子及嗜酸性粒细胞测定结果见表2。
表2三组患者治疗前后鼻分泌物细胞因子及嗜酸性粒细胞测定结果(χ±SD)
表2中p＝0.01；/>p＝0.04；§p＝0.04；/>p＝0.02；*p＝0.02；**p＝0.01，p＜0.05表明该细胞因子检测有差异且差异具有统计学意义。
2.4GCV对鼻腔分泌物中的细胞因子无明显影响
常规抗过敏药物治疗后，普通AR组鼻腔分泌物中IL-4、IL-5、IL-28A的浓度明显下降，IFN-β的浓度上升(P＜0.05)，这也符合Th2相关炎症治疗的机制。GCV治疗后，GCV有效组和GCV无效组鼻腔分泌物中的所有细胞因子和炎症因子都没有变化(表2)，嗜酸性粒细胞和ECP没有减少，IL-4，IL-5，ECP和嗜酸粒细胞都是Th2炎症的代表因子和细胞，鼻腔分泌物中Th1、Th2和Th17相关的细胞因子没有明显变化。这表明GCV在难治性AR中的作用机制与常规抗过敏药物不同。同时，也暗示难治性AR患者除了存在Th2相关炎症外，应该还有其他一些未知的机制。我们推测这种不清楚的炎症机制可能与经典的Th2-嗜酸性粒细胞机制有关联，并能大大抑制常规抗过敏药物的治疗效果。GCV可以有效地针对这种未知的炎症机制，当该炎症机制被GCV破除后，Th2-嗜酸性粒细胞机制重新回到轨道，常规抗过敏药物被重新激活。
2.5GCV可能通过调节纤毛细胞或白细胞的功能来调节难治性AR患者的鼻粘膜功能
我们比较了普通AR组和GCV有效组鼻刮细胞在治疗前的人类DNA病毒序列，以及GCV有效组鼻刮细胞在治疗前和治疗后的人类DNA病毒序列，没有发现人类DNA病毒丰度的明显差异。测序结果如图4-13所示，其中图4(A)为普通AR组和GCV有效组在治疗前EB病毒、人巨细胞病毒、人疱疹病毒(HSV)1、2、3、6、7、8基因丰度对比图，EB病毒、人巨细胞病毒、人疱疹病毒(HSV)1、2、3、6、7、8基因在GCV有效组和普通AR组的富集未见统计学差异。(B)为GCV有效组在治疗前和治疗后的EB病毒、人巨细胞病毒、人疱疹病毒(HSV)1、2、3、6、7、8基因丰度对比图，EB病毒、人巨细胞病毒、人疱疹病毒(HSV)1、2、3、6、7、8基因在GCV治疗前后富集未见统计学差异。
将治疗前普通AR组、GCV有效组和GCV无效组的鼻刮细胞的RNA-seq进行比较，图5左为GCV有效组(n＝6)和普通AR组(n＝5)治疗前的差异基因绘制的火山图，红色表示基因在GCV有效组中高表达，蓝色表示基因在GCV有效组中低表达，图5右展示了前15个差异基因。图6表示与普通AR组相比，GCV有效组中上调的差异基因富集的通路。图7表示与普通AR组相比下调的差异基因富集的通路。我们发现GCV有效组与普通AR组的差异基因为DCT、TYRP1、RP11-561O23.5、FAM107A等，差异基因主要集中在纤毛相关的生物功能过程。
图8左是GCV有效组(n＝6)和GCV无效组(n＝3)治疗前的鼻刮细胞的RNA-seq差异基因绘制的火山图，红色表示基因在GCV有效组中高表达，蓝色表示基因在GCV有效组中低表达。图8右展示了前15个差异基因。图9表示与GCV无效组相比，GCV有效组中上调的差异基因富集的通路。图10表示与GCV无效组相比，GCV有效组中下调的差异基因富集的通路。可以看出，GCV有效组与GCV无效组的差异基因为MSR1、CD163、RNU2-6P、RPL41P5等，差异基因主要集中在与蛋白质调节有关的生物过程中。CD163的表达在GCV有效组被上调，CD163是一种单核细胞/巨噬细胞的特异性标志物，主要表达在参与炎症反应的细胞上，这意味着单核细胞/巨噬细胞可能参与难治性AR的机制，并亦可能与GCV治疗有效相关。
图11左表示GCV有效组(n＝6)治疗前后的差异基因鼻刮细胞的RNA-seq的聚类热图，红色表示基因高表达，蓝色表示基因低表达。图11右展示了GCV有效组治疗前后排名前15的差异基因。图12表示与GCV治疗前相比，GCV治疗后上调的差异基因富集的通路。图13表示与GCV治疗前相比，GCV治疗后下调的差异基因富集的通路。可以看出，在GCV治疗后，有160个基因被下调，25个基因被上调。下调的差异基因主要是纤毛相关的细胞学功能；上调的差异基因主要富集在IL-5和IL-13产生的负调控、对臭氧的反应、趋化因子结合的分子功能等生物学功能上。差异基因在吞噬体、Toll样受体和白细胞经内皮迁移途径中明显富集。我们列出了前15个差异性基因如下：RP11-532E4.2,MUC5B,MCHR1,MIR609,GABRA2,RP11-150O12.5,RPL29P2,CXCL10,CXCL9,TREM1,CTD-2531D15.4,ADAMTS6,GJA1,SCGB1A1,SLC26A9。从结果中可见，与杯状细胞有关的MUC5B在GCV治疗后下调。然而，CXCL9和CXCL10在治疗后上调(图11)。因此推测，上述途径/趋化因子的改变可能与GCV治疗的机制有关。
2.6GCV可通过增加外周血中的Treg细胞来调节难治性AR患者的免疫状态
在PBMCs体外药物试验中，NT孔和DMSO孔之间没有差异。图14-23为GCV有效组和GCV无效组GCV体外刺激PBMCs结果对比图，可以看出，GCV有效组PBMCs(n＝26)中，GCV刺激孔的CD4+FOXP3+细胞/CD4+细胞百分比明显高于DMSO组(p＜0.001)。而GCV无效组PBMCs(n＝14)中，GCV刺激孔的CD4+FOXP3+细胞/CD4+细胞百分比明显低于DMSO组(p＜0.05)。分析Foxp3+Treg细胞比例的变化与患者临床症状改善的相关性，发现Foxp3+Treg细胞百分比的增加与△TNSS和△VAS有中-高相关性(△TNSS的r＝0.6085，△VAS的r＝0.7050，P＜0.001)。以上结果表明，Treg细胞可能参与了这种难治性AR的炎症机制，GCV可能通过增强Treg细胞的激活而发挥其治疗作用。
图14-23显示临床GCV有效组和无效组的体外药物试验中CD4+IFNγ+细胞、CD4+IL4+细胞、CD4+IL17A+细胞、CD8+IFNγ+细胞/CD4+百分比无明显变化。
以GCV治疗前后TNSS和VAS改变程度，与GCV刺激Foxp3+Treg细胞比例变化程度所作的散点图见图24。图中可见，GCV刺激Foxp3+Treg细胞比例变化程度与患者的临床症状改善明显相关(△TNSS的r＝0.6085，△VAS的r＝0.7050，P＜0.001)。
通过GCV有效组和GCV无效组中Foxp3+Treg细胞比例的变化绘制受试者工作曲线(ROC)曲线，以评价Foxp3+Treg细胞比例变化对GCV治疗疗效预测的价值，如图25所示，GCV疗效的曲线下面积为0.9071(P＜0.0001)，95％置信区间为0.8077至1.000，发现GCV体外刺激PBMCs的Foxp3+Treg细胞增加比例值为0.045是区分GCV治疗有效与无效的最佳阈值，它的敏感性为84.2％，特异性为95.2％。在体外GCV刺激PBMCs后，CD4+FOXP3+Treg细胞的改变趋势可能是GCV治疗难治性AR临床有效性一个良好的客观预测指标。
GCV为临床上难治性AR的治疗带来了极大的便利。它价格低廉，而且在长期的临床使用中，用药的安全性已经得到了充分证实。根据临床观察，约65％的难治性AR患者对GCV治疗反应良好。此外，通过体外PBMCs的GCV药物试验，可以更准确地筛选出潜在的有效人群。此外还发现，大多数患者在接受GCV治疗后能保持长期的治疗效果。总之，本发明表明了GCV对难治性AR的治疗效果，证实了GCV确实可以作为难治性AR的一种治疗药物。
具体病例如下：
病例1
曾**，男，13岁，因鼻炎症状发作1.5年到耳鼻咽喉科就诊。患者每日多次鼻塞、鼻痒、打喷嚏、流鼻涕，每次持续数小时。患者自诉在发病初期使用鼻喷激素和口服抗组胺药可有效控制鼻部症状，之后用药维持时间逐渐缩短。后来改用其他类型的鼻喷激素及口服抗组胺药，还加用白三烯受体拮抗剂，甚至使用中草药和舌下免疫疗法(SLIT)，均不能有效改善其鼻部症状。患者父母和患者都为此感到非常痛苦，长时间求医都未能找到好的治疗方案。门诊就诊时进行了皮肤点刺试验(d f.+++；d p.+++)，血清总IgE检测255kU/l，鼻分泌物涂片显示嗜酸性粒细胞/炎症细胞>90％，视觉模拟量表(VAS)为8cm，变应性鼻炎控制测试(ARCT)为5分，鼻症状总评分(TNSS)为8分(鼻塞3分，鼻瘙痒1分，打喷嚏1分，鼻分泌物3分)。自2021年10月7日开始接受GCV治疗14天(250mg/次，每天2次)，患者的鼻部症状明显改善。TNSS降至3分(鼻塞1分、鼻痒1分、打喷嚏0分、流鼻涕1分)；VAS降至4.5cm,ARCT为21分。患者自觉鼻部症状明显好转。之后，继续使用常规抗过敏药物治疗14天。患者感觉鼻部症状进一步改善，TNSS降至2分(鼻塞1分，鼻痒0分，打喷嚏0分，流鼻涕1分)，VAS降至2.5cm,ARCT为24分。停药一段时间后，症状未见加重。在2023年1月25日的随访中，患者父亲告诉我们，患儿现在偶发AR，且发作时间短暂，用抗过敏药物能迅速控制症状，用药效果恢复到AR初发时。
病例2
魏**，女，37岁，因鼻痒、鼻塞、阵发性喷嚏5年于耳鼻喉科就诊。患者自诉既往曾使用鼻喷激素和口服抗组胺药物，每次持续使用上述药物3-5天，鼻部症状会略有减轻。但后来药物效果逐渐下降，连续用药2周症状亦几乎无改善。她也尝试替换成其他品牌的鼻喷激素，口服抗组胺药，加用白三烯受体拮抗剂，但鼻部症状也没有明显改善。患者对冷空气极为敏感，在空调房里很容易激发鼻部过敏症状。门诊就诊时给予皮肤点刺试验(d.p+++；蟑螂+),血清总IgE检测111.96ku/l,鼻分泌物涂片显示嗜酸性粒细胞/炎症细胞>95％,VAS＝7厘米,ARCT为7分,TNSS为8分(鼻塞,鼻痒,打喷嚏,鼻涕各2分)。自2022年5月31日开始接受GCV治疗14天(500mg/次，每天2次)，患者的鼻部症状明显改善。TNSS降为4分(鼻塞2分,鼻痒2分,打喷嚏0分,和鼻涕0分),同时,VAS降至4cm,ARCT为20分。2022年6月14日继续使用抗过敏药物(鼻喷激素加口服抗组胺药)治疗14天后患者鼻部症状继续改善，TNSS降至1分(鼻塞1分，鼻痒0分，打喷嚏0分，流鼻涕0分)，VAS降至2cm,ARCT为25分。停药一段时间后，症状未再发。2023年1月30日回访，患者自诉偶有过敏症状，发病时使用抗过敏药物很容易控制。自觉鼻部症状有了极大的改善。对冷空气不那么敏感了，可以在冷空调房里休息了。
病例3
邓**，8岁，男性患儿，因鼻塞、鼻痒、打喷嚏、流鼻涕5年余来耳鼻喉科就诊。其母亲诉患儿自2-3岁起，由于鼻塞和鼻痒，晚上无法安稳入睡，睡觉后经常因鼻塞频繁翻身，上述症状严重影响了患儿的生活质量。曾经使用过各种类型鼻喷激素、口服抗组胺药和抗白三烯药，但治疗后症状均没有改善。期间患儿还接受了腺样体和扁桃体切除术，但术后症状并未改善。门诊皮肤点刺试验显示粉尘螨.+++；屋尘螨+++，食物不耐受检测示鸡蛋(++)，牛奶(+)，小麦(+)，大豆(+)，鳕鱼(+)。鼻分泌物涂片显示嗜酸性粒细胞/炎症细胞>90％，TNSS为12分(鼻塞3分，鼻痒3分，喷嚏3分，鼻涕3分)，VAS为10cm，ARCT为5分。从2022年7月26日开始，经过14天的GCV治疗(250mg/次，一天两次)，患儿鼻部症状有所改善，TNSS下降到9分(鼻塞2分，鼻痒1分，打喷嚏3分，流鼻涕3分)，VAS下降到5cm，ARCT为22分。患者自诉夜间鼻塞和鼻痒的情况减少，睡眠质量也有很大的改善。但是，打喷嚏和流涕没有明显变化。继续给予常规的抗过敏药物治疗14天。患儿鼻部症状明显改善，TNSS降至3分(鼻塞1分，鼻痒0分，打喷嚏1分，鼻涕1分)，同时，VAS降至2.5cm，ARCT为25分。患者感到鼻部症状明显改善，夜间睡眠质量明显提高。2023年2月1日的电话随访时，患儿母亲告知，孩子未再出现明显的鼻过敏症状，晚上睡觉也很安稳。
病例4
钱**，女，36岁，因持续双侧鼻塞和清水样鼻分泌物2年到耳鼻喉科就诊。患者诉接触冷空气时有鼻痒和阵发性喷嚏，离开冷空气环境后症状仍可持续2小时左右。持续的双侧鼻塞和清水样症状严重干扰了日常生活。患病以来，一直定期使用鼻喷激素和口服抗组胺药，但症状没有改善。她改用了其他品牌的鼻喷激素和抗组胺药，甚至注射了奥马珠单抗，鼻部症状仍无改善。鼻塞和鼻涕已经严重影响了她的工作和生活。其门诊检测结果示血清总IgE检测为92.61IU/l，鼻分泌物涂片显示嗜酸性粒细胞/炎症细胞>90％。TNSS为7分(鼻塞3分，鼻痒1分，打喷嚏1分，鼻涕2分)，VAS为9cm。从2022年8月12日开始，经过14天的GCV治疗(500mg/次，一天两次)，患者鼻部症状明显改善，TNSS降至2分(鼻塞1分，鼻痒0分，打喷嚏0分，鼻涕1分)，VAS降至1.5cm，ARCT为24分。患者自诉早晚交替性鼻塞，偶尔有鼻涕，接触冷空气时会打喷嚏，没有鼻痒，离开冷空气环境后症状立即消失。继续给予抗过敏药物治疗，患者使用鼻喷激素7天后，鼻部症状完全消失，遂自行停药。在2023年1月31日的随访中，患者自诉停药后很长一段时间内没有明显的鼻部不适，偶尔有鼻塞现象，但通过服用抗过敏药物即可缓解。
病例5
刘**，男，39岁，有10年的鼻痒和鼻涕史，鼻塞和鼻涕加重3年。患者诉每年秋季鼻塞和鼻涕特别严重。其他季节鼻部症状轻微。在鼻炎发作期间，即使定期使用鼻喷激素和口服抗组胺药，鼻部症状也不能得到改善。患者曾尝试更换和使用各种治疗药物，但都没有效果。曾接受奥马珠单抗治疗，鼻部症状也无任何改善。血清学过敏原检测显示葎草花粉4级，螃蟹2级，血清总IgE 161.66IU/mL，鼻分泌物涂片显示嗜酸性细胞/炎症细胞>90％。TNSS为7分(鼻塞3分，鼻痒0分，喷嚏3分，鼻涕1分)，VAS为10cm，ARCT为5分。从2022年9月9日开始，经过14天的GCV治疗(500mg/次，一天两次)后，患者感到鼻部症状明显改善，TNSS下降到2分(鼻塞1分，鼻痒0分，打喷嚏0分，鼻涕1分)，同时，VAS下降到2.2cm，ARCT为24分。患者诉既往秋季鼻炎发作时症状可持续到10月下旬，且各种药物治疗均无效，因此对本治疗方案满意。在2023年1月31日的随访中，患者告知现在只有晨起时有轻微鼻塞、少量清鼻涕，持续时间很短，无需用药，症状便可自行消失。因患者目前不在高发季节内，将持续进行追踪观察。

Claims (2)

1.更昔洛韦在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用，其特征在于，药物以更昔洛韦为唯一活性组分。
2.根据权利要求1所述的更昔洛韦在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用，其特征在于，以更昔洛韦为唯一活性组分与药物学上可接受的辅料混合制成各种形式的胶囊剂、颗粒剂、片剂、散剂、膏剂或水剂。
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