CN116324369A - 直接从微孔板的全血或其他生物样本中对免疫细胞自动取样的方法 - Google Patents

直接从微孔板的全血或其他生物样本中对免疫细胞自动取样的方法 Download PDF

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多米尼克·佩雷斯
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Abstract

一种从沉积在微孔板的孔中的生物液体样本(例如全血)自动对免疫细胞取样的方法。样本包含红细胞(RBC)和磁珠，所述磁珠被设计用于与RBC结合。所述微孔板放置在具有包括至少一个磁体的磁性适配器的振荡器上。所述磁体使得与磁珠结合的RBC被吸引并迁移到孔壁(例如，底部或侧壁)，并保持在壁上。然后，操作振荡器以一种方式摇动微孔板一段时间，以便于孔区域内的生物液体样本中的免疫细胞基本均匀或均匀地悬浮，而RBC仍保持在孔壁上，从而使免疫细胞基本上与孔区域的RBC分离。在摇动期间或摇动后，样品探针随后下降到孔的区域，以回收一部分含有免疫细胞的样本。

Description

直接从微孔板的全血或其他生物样本中对免疫细胞自动取样 的方法
交叉引用
本申请请求于2020年9月1日提交的申请号为17/009,225的美国非临时专利的优先权，该申请通过引用并入本文。
背景技术
本申请涉及一种直接对细胞取样的方法，如来自加载到微孔板孔中的生物液体样本的免疫细胞(淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞或通常为无粒白细胞或白细胞(WBC))。本方法的一个具体应用是从全血样本中直接对免疫细胞取样。所述方法也适用于从可能含有红细胞(RBC)的其他生物液体样本(例如囊液样本、羊水、骨髓样本或脑脊液样本)中直接对免疫细胞取样。
术语“微孔板”用来指以平板的形式形成由许多小的单个样品保持孔组成的阵列的测试设备版式，通常为每个板6、12、24、48、96、384或更多个孔，或指测试管阵列形式的测试设备版式，通常一个阵列中有40个测试管。所述术语有时在本领域中被称为“微量滴定板”或“微板”。
这种微孔板通常与样本处理装置结合使用，所述装置自动从其中一个孔中提取一部分样本，并将样本引入分析仪器，例如流式细胞仪、血液分析仪、细胞分选仪、质谱仪等，这些仪器对提取的样本进行一次或多次测量。
因为全血容易阻塞小的流动通道，使用细胞仪对全血进行取样从而进行白细胞(WBC)分析是困难的。此外，众所周知，传统细胞仪难以区分WBC和RBC群体。因此，本领域已经开发了从全血样本中去除RBC的方法。一种方法，使用缓冲溶液，如氯化铵裂解红细胞(RBC)，氯化铵裂解RBC对白细胞的影响最小。使用传统RBC裂解方法在微板版式中进行全血样本处理需要大量人力，它产生RBC碎片，所述RBC碎片可以堵塞细胞仪流动细胞，使细胞仪污染严重，并显著增加从一个样本到另一个样本的携带量。此外，RBC裂解法可能导致数据完整性损失，因为裂解中使用的低渗缓冲液不是生理性的，这可能影响正常免疫细胞活性。
另一种方法，传统梯度离心法，可用于WBC的纯化，所述方法用于测试管版式的样本，但不适用于微板版式。
本领域需要一种从微孔板版式的含有RBC的样本或其他生物液体样本中自动对免疫细胞取样的方法。
发明内容
在本申请的一个方面，提供了一种用于从沉积在微孔板的孔中的生物液体样本中对细胞，如免疫细胞自动取样的方法，所述孔具有壁(即底壁或侧壁)。例如，所述样本包含(1)RBC和(2)磁珠，所述磁珠与抗体结合或被设计用于与样本中的RBC结合。所述方法包括以下步骤：a)将微孔板放置在具有包含磁体的磁性适配器的振荡器上，其中所述磁体使得结合在磁珠上的RBC被吸引并迁移到孔壁，并保持在壁上；(b)用振荡器以一种方式摇动微孔板一段时间，以便于基本均匀或均匀地悬浮孔区域内的生物液体样本中的免疫细胞，而RBC仍保持在孔壁上，从而免疫细胞与孔区域的RBC分离；(c)将样本探针下调到孔的孔区域中，并从该区域回收一部分含有免疫细胞的样本。
在另一方面，振荡器系统为具有顶面的振荡器，所述顶面被配置为以受控和可编程的方式摇动微孔板。所述振荡器包括一个与振荡器上的结构配合的磁性适配器，以便其可拆卸地安装到振荡器的顶面。所述磁性适配器为保持单个磁体阵列的基本平坦结构，其中所述磁性适配器被配置为安装在振荡器的顶面上，并夹在振荡器顶面和微孔板之间。
在一种配置中，所述磁体阵列布置在磁性适配器中，因此当微孔板放置在磁性适配器顶部时，磁体阵列与微孔板的孔的底部对齐。
在另一种配置中，所述装置包括振荡器的控制系统。所述控制系统操控振荡器，使振荡器以一种方式摇动微孔板一段时间，所述方式便于基本均匀或均匀地悬浮在孔区域内的生物液体样本中的免疫细胞，而RBC仍保持在孔壁上，从而免疫细胞与孔区域的RBC分离。
在另一个方面，提供了流式细胞仪，所述流式细胞仪包括机械取样探针、具有顶面的振荡器和被设计用于与振荡器上的结构配合的磁性适配器，以便其可拆卸地安装在振荡器的顶面。此外，所述磁性适配器具有一个或多个用于保持放置在其上的微孔板的特征。所述磁性适配器可以采取保持单个磁体阵列的基本平坦结构的形式，并且被配置为夹在振荡器和微孔板之间。所述流式细胞仪包括振荡器的控制系统，所述系统被配置为以一种方式摇动微孔板一段时间，所述方式便于基本上均匀或均匀地悬浮在微孔板的孔中的生物液体样本中细胞，如免疫细胞。所述免疫细胞悬浮在孔的区域内，由于一个或多个磁体，免疫细胞基本上与孔区域的RBC分离，但仍然保持着使RBC与孔壁的结合磁性。所述流式细胞仪还包括对从微孔板的孔取出的免疫细胞进行计数、分类或其他测量的分析仪器，其中探针从孔中取出免疫细胞并将免疫细胞引入仪器。
附图说明
图1A-1E是从含有红细胞的生物液体样本(例如，微孔板版式的全血样本)对细胞(如免疫细胞)自动取样的工作流程或方法的说明，包括图1A和1B示出的初始步骤，及之后在图1C、1D和1E示出的步骤。
图2是定位于图1所示振荡器上的微孔板的图示，并示出了固定在振荡器上并定位在振荡器和微孔板之间的磁性适配器。
图3是图2组件的分解图。
图4是图2和图3所述磁性适配器的俯视图。
图5是图4所述磁性适配器的侧视图。
图6是根据图1E的步骤E，将取样探针插入图2的微孔板的一个孔并从孔中取出样本的示意图。
图7是图4的磁性适配器的分解图，示出了放置在磁性适配器下表面下方并紧邻磁性适配器下表面的任选地铁磁屏蔽体。
图8是图7的组件的局部横截面视图。
图9是适用于以微孔板版式处理样本(包括全血样本)的流式细胞仪的图示，其包括图2的振荡器和磁性组件；图9还示出了用于显示流式细胞仪分析结果的相关工作站。
图10是图9的流式细胞仪的透视图，其中振荡器移动到流式细胞仪内部的位置，所述位置用于在微孔板上进行各种处理步骤；图10还示出了连接到三轴机械运动系统的取样探针，所述系统允许对所有孔进行取样。
图11是图9的流式细胞仪的另一个透视图，其中样本探针处于根据图1E的步骤E，从孔中取出样本的位置。
具体实施方式
综述
在本公开的一个方面，提供了一种方法，用于从沉积在微孔板的孔中的含有红细胞(RBC)的生物液体样本中对细胞自动取样，如免疫细胞。在以下描述中，所述液体样本被描述为全血，但如上所述，所述样本可以是其他含有混合颗粒群的生物液体，如红细胞、其他细胞类型或非目标颗粒等。这些液体可以是羊水、脑脊液等。
所述方法如图1A-1E所示，由图1A和1B所示的初始步骤，及之后的步骤1C、1D和1E组成。所述过程将通过结合图2和图3进一步解释。从以下描述中可以看出，微孔板100(图2)的单孔10所显示的过程在加载了样本12(例如，全血)的所有孔中进行。
在步骤A(图1A)中，将用户指定的处理和/或染色混合物(试剂)添加到样本12中。此类试剂可包括标记珠(用于含有少量白细胞(WBC)的样本的孔识别)、用于促进WBC计数的孔计数珠、染色剂或可能的其他试剂。
在步骤B(图1B)，将与抗体结合或以被设计为与样本中的RBC 15结合的磁珠14添加到样本12中。这种珠的一个实例是抗人CD235抗体包被磁珠。所述包被在磁珠上的抗体不限于针对CD235分子的抗体，也可以是针对RBC上特异性表达但不在WBC上特异性表达的分子的其他抗体。此外，包被在珠上的部分分子不限于抗体，也可以是其他分子，如抗体片段、结合物和抗原，所述抗原与仅在RBC上表达但不在WBC上表达的分子特异性结合。
在将微孔板100(图2)插入分析仪器之前，可在实验室工作台上进行步骤A和B。在步骤B之后，所述微孔板100可以孵育一段时间，例如在一分钟到两小时之间，以允许所述磁珠14与RBC 15结合；所述孵育的时间是灵活的，用户可以优化。
在步骤C(图1C)，对样本12中的RBC 15与WBC 17进行磁性分离。特别地，所述微孔板100被放置在微量滴定板振荡器104的顶部，例如Bioshake 3000，所述Bioshake 3000是具有磁性适配器102的振荡器104，所述磁性适配器102包括安装或放置在振荡器104顶部的磁体120。所述磁体120吸引磁珠14，并导致连接有磁珠14的RBC 15被吸引并迁移到孔10的底壁16或侧壁19，并被固定在壁16上(或19，取决于磁体的位置)。该操作将WBC 17分到RBC15上方的层，所述层与孔10的底壁16相连。所述磁性适配器102被放置在微量滴定板振荡器的顶部，并被设计为在用户不使用专用工具的情况下从振荡器104的顶部移除或插入到振荡器104顶面。因此，所述适配器102夹在振荡器104的顶部和微孔板100之间。在步骤C中不进行摇动，或者任选地，只能在步骤C进行非常温和的摇动，这允许磁珠14与RBC 15结合，并且根据磁体的位置将RBC 15拉到孔10的侧壁19和/或底壁16上。如图1C所示，在磁体位于微孔板下方的实施方案中，RBC被拉至底壁16。
在步骤D(图1D)中，如图1D所示，RBC 15在孔底16处沉降后，振荡器104打开并在一定范围内以指定速度(每分钟转数，rpm)摇动，以便仅在顶部液体层(主要是血清和血浆)基本上均匀或均匀地悬浮WBC 17，而RBC 15将通过共轭磁珠14对磁体的吸引力保持牢固地附着在孔底16。换言之，在这一步中，振荡器104以一种方式摇动微孔板100一段时间，以便于在孔区域(如18所示)内的生物液体样本中基本均匀或均匀地悬浮和分布免疫细胞17(WBC)，而仍将RBC保持在孔10的底壁16和/或侧壁19(图1C)，从而免疫细胞17(WBC)与区域18中的RBC基本上分离。下文详细描述了进行摇动的方式(即速度)，具体根据珠14与RBC 15结合的强度、振荡器104本身的设计、微孔板100的设计及每个孔中的液体体积而不同，并可通过实验确定特定磁珠和给定振荡器。在某个预定时间段(例如10秒)之后，所述振荡器104关闭。
在步骤E(图1E)中，在摇动结束后立即或任选地在摇动仍在进行时，具有特定取样方法的软件自动引导取样探针200将尖端插入顶部液体层(区域18)，并获取一定体积的WBC17，而不污染仍磁性地保持在孔16底部的RBC 15。该采集通过控制样本探针200的取样高度位置来进行。因此，在该步骤中，样本探针200被下降到孔10的区域18中，其中WBC 17基本均匀或均匀地悬浮。然后从区域18取出部分含有免疫细胞的样本。如图6所示。
取出WBC样本17后，所述样本可在探针200所属的分析仪器，如流式细胞仪中进行处理。所述样本被引入分析仪器，例如样本引入端口，将样本传输至对样本进行检测的其他分析仪器。
振荡器和磁性适配器设计
现在参考图2-5，振荡器104可以采用任何商业上可用的被设计用于摇动或摇晃微孔板的设备的形式，如前面提到的振荡器、来自Qinstruments、ThermoFisher、SigmaAldrich、Southwest Science等公司的振荡器。振荡器104通常设计有偏心或轨道旋转，以诱导孔内涡旋作用，并可编程控制为以预设或用户指定的速度旋转。例如，偏心偏移可能为2mm，并且确定了最佳旋转速度和持续时间，例如250rpm持续10秒，使得在孔的上部区域18中实现了WBC 17的目标均匀分布，但不从孔的底部释放RBC 15。
参考图3，磁性适配器102可以采用基本平坦结构的形式，如保持单个磁体120所示，一个单个磁体用于微孔板100的一个孔10。作为替代方案，适配器板102上的磁体120可以被配置为每孔两个或更多磁体，或者甚至两个或更多孔一个磁体或一组磁体。不需要具有精确的每孔一个磁体的配置，只需要磁体产生基本均匀的磁场。如图2所示，磁性适配器102被配置为安装在振荡器104的顶面106上，并夹在顶面106和微孔板100之间，其中磁体120使得RBC 15保持在孔的底壁上。适配器板102包括角部特征114，所述角部特征114被设计为稳定微孔板100的角部116，并防止板在摇动期间从振荡器104脱位。此外，角部特征114可被设计为当用户将微孔板100放置在适配器102上时将微孔板100引导到正确的位置。适配器102被设计为在不使用工具的情况下手动连接到振荡器104并从振荡器104中移除。例如，这可以通过弹性夹持防护边缘110来实现，该弹性夹持防护边缘110从适配器102下降，适配器102固定在振荡器104的前侧和后侧提供的凹槽112上。如图2所示，在振荡器104的顶面定位销子108用于匹配适配器板102中提供的相应凹槽，并紧紧夹持适配器板。根据实施方案，定位销子108可以夹持并将适配器板102或微孔板100或两者固定到位。
所述定位销子108可以由计算机控制以移入和移出夹持位置以夹持适配器板102。当振荡器104用于自动化模式时，此特征很重要。在这种模式下，当机械臂从振荡器104中移除微孔板100和/或在振荡器上放置新的微孔板时，所述软件可以自动松开或拉紧定位销子108。当磁性适配器设计包括磁性屏蔽体302(参见图7和图8的讨论)时，一些振荡器(如Bioshake 3000)上的现有夹持器/定位销子108不足以到达微孔板并将其固定到位。一种解决方案是向磁性适配器添加更多兼容的夹持特征(未示出)。这些兼容的夹持特征与Bioshake 3000上现有的夹持器/定位销子108相互作用，因此当Bioshake 3000的定位销子108关闭时，所述兼容的夹持特征推动对微孔板的夹持。然后，当Bioshake 3000定位销子108松弛时，磁性适配器上的兼容夹持特征也松弛，微孔板被释放。当然，这些解决方案可以应用于其他振荡器设计；事实上，图3的磁性适配器102的特定形状因子和设计可以改变，以便与所讨论的任何振荡器的表面几何形状、定位销子和夹持器以及微孔板100的特定配置兼容。
适配器板102和磁体120的一种可能配置如图7的分解图所示。适配器板102具有一组凹进袋300，每个凹进袋容纳并固定一个磁体120。口袋阵列300(以及磁体120)的布局使得每个磁体被设计成以标准微孔板版式直接定位在样本孔下方。虽然图7为96孔板，相同的设计考虑还适用于具有不同孔数的微孔板，如384孔板。作为替代方案，适配器板102上的磁体120可以被配置为每孔两个或更多磁体，或者甚至两个或更多孔每个磁体或一组磁体。不需要精确地每孔一个磁体的配置，只需要磁体产生基本均匀的磁场。
振荡器104通常被配置有原位传感器，其可以采取霍尔效应传感器的形式。振荡器104正上方适配器板102上磁体的存在产生磁场，该磁场可能干扰振荡器中原位传感器的运行。为了改善这一点，在一个任选地实施方案中，如图7和图8所示，在适配器板102下方放置一个铁磁材料(如不锈钢或钼金属)的薄的、扁平板形式的铁磁屏蔽体302(图7、8)，使得当适配器板102和屏蔽体302放置在振荡器104上时，原位传感器运行不会受到不利影响。屏蔽体302可以以任何合适的方式安装或固定到磁性适配器板102的底面。屏蔽体302改变磁场线的方向并减小了原位传感器位置处的磁场强度。屏蔽层的厚度和材料不是特别关键，只要它是由铁磁性材料制成的。然而，增加振荡器104和磁体120之间的间隔，并在磁体120下方添加屏蔽体302，使振荡器能够正确运行。
实施例
从微孔板的全血样本中直接对免疫细胞取样的流式细胞仪(图1、9-11)
图9-11示出了可以进行当前方法的系统的示例。图9是适用于处理微孔板版式100中的样本(包括全血样本)的流式细胞仪400的图示，所述微孔板版式100，包括图2的组件振荡器104和磁性适配器102。所述仪器是本发明受让人的流式细胞仪
Figure BDA0004163118190000071
3，然而，本实施例中讨论的原理将适用于其他分析设备或流式细胞仪。图9还示出了用于显示流式细胞仪分析结果的相关工作站410。所述工作站410可以包括界面，以允许用户指定对给定微孔板的某些工作流程和处理步骤，并将相关样本加载到微孔板100中，例如启动下面描述的“全血样本模块”。流式细胞仪还可以包括试剂、缓冲液、清洁溶液等的供应。流式细胞仪400包括装载台404，其中微孔板100放置在振荡器104上，安装在铰链上的透明塑料隔板412，所述透明塑料隔板412打开以允许进入流式细胞仪内部，以及冲洗台406(图10)。
图10是图9的流式细胞仪400的透视图，示出了移动到打开位置的透明隔板412，示出了移动到冲洗台406附近的流式细胞仪400内部的振荡器104，其中可以在微孔板100上进行各种处理步骤。图10还示出了连接到三轴机械运动系统414的取样探针200。运动系统414在程序控制下在X、Y和Z方向上移动，从而取样探针200能够由对微孔板100上的所有孔取样。
流式细胞仪400还包括分析仪器，用于在从图10所示的流式细胞仪面板后面的微孔板100的孔中取出的免疫细胞上进行流式细胞术，这是常规的，因此为了简洁的目的，在本文件中未详细描述。所述探针200从孔中取出免疫细胞，并将免疫细胞引入分析仪器。
图11是图9所示流式细胞仪的另一个透视图，其中样本探针200处于与图1E的步骤E和图6一致的位置，用于从微孔板100中的一个孔取出样本。
流式细胞仪400包括装载台404(图9)，所述装载台404是用户将微孔板100放置在振荡器104上的位置(如图2所示，磁性适配器102位于振荡器104的顶面)。振荡器104连接到电机驱动的机电系统，然后通过透明隔板412中的开口将振荡器104从装载台404(图9)移动到流式细胞仪的内部，见图10。
根据图1所述的方法，图1A和1B的步骤A和B，通常分别离线进行，例如在实验室工作台上。在步骤B之后，将微孔板100放置在装载台404的振荡器104上，见图9。通过夹在振荡器104和微孔板100之间的磁性适配器102的优点，根据图1C的步骤C，当微孔板放置在磁性适配器上时，RBC被拉到微孔板的孔底部。在步骤C进行期间或之后，步骤C进行持续时间可以是例如30、60或90秒，振荡器从图9的装载台404移动到图10和11中所示位置的流式细胞仪内部。
在图1D的步骤D中，振荡器104运行一段时间，所述时间使得RBC保持在底部和/或侧壁上，区域18中孔顶部样本中的免疫细胞基本上均匀或均匀地悬浮(图1D)。该摇动步骤可以通过图9的装载台404中的振荡器104完成或在图10所示的样本采集位置中完成。
在图1E的步骤E中，如图11所示，关闭振荡器104，并立即将样本探针200下降到微孔板的第一个孔中，以便根据图6取出基本上仅包含免疫细胞的样本。样本探针由机械运动系统在X、Y和Z方向上运行，以相同方式对持有样本的微孔板100的任何和/或所有孔取样。在探针200使用蠕动泵或真空泵的力(未示出)获取样本后，将所述样本输送至流式细胞仪400内的分析仪器(未示出)，流式细胞仪以常规方式进行流式细胞分析。例如，图9的流式细胞仪400被配置为美国专利10,048,191、9,897,531、9,797,917和6,890,487所述的方式。
软件操作
图9-11的流式细胞仪中图1D和1E的摇动和取样模式的运行由软件操作和流式细胞仪400内的处理器控制，其控制振荡器104、样本探针200和相关的3轴机械运动系统414的运行。这些操作在流式细胞仪的模式或模块下进行，所述流式细胞仪被设计用于处理全血样本，在以下描述中被称为“全血样本模块”或“全血样本模式”。该模式的参数可以由图9的工作站410访问并由用户配置，或者可以是当用户选择用于处理给定微孔板的全血样本模块时自动进行的预设指令。
模块检测和RBC下拉
在图10中，在取样之前，从取样头411(图10)延伸的探针(图10中200)被下降至与磁性适配器102接触。一旦探针200感测到底板高度差(因为振荡器顶部存在磁性适配器102)，流式细胞仪中的软件就会被触发以提醒用户系统在全血样本模块或模式下运行。RBC下拉的预定义等待期自动包含在该模式中(图1C的步骤C)。如果用户选择全血样本模块，并且探针未检测到磁性适配器102，则运行将停止，并向用户发出警告，通知错误状况。
自动最佳摇动
流式细胞仪软件自动采用具有特定样本采集模板的特定全血样本模块(操作模式)。然后，该软件设置了一个特定的摇动速度以仅悬浮WBC，而不悬浮RBC，所述RBC仍与孔底或侧壁相连。
对于摇动速度范围，为了在保持WBC均匀分布在样本孔内的顶部透明液体中的同时保持磁珠对完整RBC层的下拉，Bioshake 3000的摇动速度范围在100rpm至1500rpm之间。在1500rpm以上，吸附于磁珠的RBC开始上升到含有WBC的顶部透明液体中。可以通过实验确定该最大速度，如观察顶部液体颜色，以及随着速度的增加颜色从黄色变为淡红色。例如，一旦转速超过1500rpm，顶部液体颜色开始从黄色变为淡红色或全红色。
此外，摇动速度范围与生物液体样本中的磁珠或顺磁珠材料以及磁场强度有关。本申请中用于概念验证的含磁珠的试剂是EasySep RBC去除试剂(Stemcell Tech，货号18170)，所述RBC去除试剂具有估计尺寸在20-500nm(直径)之间的纳米磁珠(氧化铁，Fe3O4)。磁珠与抗人CD235抗体结合，以结合仅在人RBC细胞表面表达的CD235分子。一旦磁场出现在孔下(因为适配器板的磁体)，连接有磁珠的RBC将被下拉至孔底。
一般来说，最佳摇动速度也可由振荡器本身的偏心率或振幅决定，因此振荡器的最佳旋转速度也可取决于此因素。
自动采集
在全血样本模式下运行的流式细胞仪软件将引导取样探针下降，从而探针尖端进入孔的顶部液体层，顶部液体层中WBC基本上均匀或均匀地悬浮，而不会接触或干扰孔底的RBC。参见图6和图1E。取样时间和速度限制在一定范围内，以避免RBC污染探针。取样在摇动停止后或摇动期间立即进行，取样时间范围在每孔0.5秒至5分钟。
自动分析
在样本探针200对微孔板的孔进行取样后，将样本引入流式细胞仪仪器内，所述流式细胞仪是图9的仪器400的一部分。在WBC样本进入流式细胞仪仪器后，仪器的分析软件将进行自动数据分析。在一种可能的配置中，该分析包括基于珠的自动样本孔识别和免疫细胞计数标准化。数据分析的细节与本公开并不特别相关，可以使用本领域已知并在专利和技术文献中描述的算法。
图9-11的流式细胞仪和取样安排的更多细节在美国专利10,048,191、9,897,531、9,797,917和6,890,487中给阐述，其内容通过引用并入本文。
其他任选的特征
全血样本模块软件确保磁性适配器102正确地安装在振荡器104上，验证后，将摇动和取样方法锁定为适当的值。可以在软件取样方法中自动进行额外的清洁。如果存在标记或计数珠，模块还可以启用特定和自动分析。此外，所述模块还可以检测样本中的RBC污染，表明测定存在潜在问题。
在一种配置中，可以提供覆盖微孔板孔的可穿孔封口或膜(例如ExcelScientific X-Pierce封板膜)，通过防止意外污染和溢出来提高生物安全性。这对于可能携带未知病原体的血样尤为重要。在试剂(如染料)和磁珠添加到样本中后，将板放置在振荡器和磁性适配器之前，将封口应用于微孔板。
在另一种配置中，可以提供孔标记珠。由于特定条件，这些珠子可用于具有少量WBC的样本的样本孔识别(孔ID)。也可以提供孔计数珠。这样的珠子允许基于孔内计数珠的计数精确计算WBC浓度。可以在初始步骤A中添加珠子，桌面离线；或者，它们可以是存在于图10的冲洗台406中试剂的一部分，并在摇动运行之前立即引入(步骤D，图1D)。
特定测定微孔板被考虑用于全血样本，尤其是体积较小的样本，典型的为96孔板。例如，可以使用来自Greiner，货号为675101的96孔版式的板，其孔面积约为正常孔面积的一半。样本体积相同时，这种孔的几何结构增加了顶层高度，便于探针接近，最大限度地减少了样本/试剂的使用，并减小了样本中RBC污染的风险。
替代实施方案
1.如结合图1所解释的，分离免疫细胞的主要方法是通过将结合有磁珠的RBC磁性拉至孔底来进行RBC的阴性选择，并且磁体位于检测板孔底附近。磁体的替代位置是相邻孔之间的间隙，因此磁场可以将磁珠连接的细胞拉至检测孔的侧壁(图1C中的19)。在这种配置中，磁适配器102的形状因素和设计使得包括凸出到微孔板100底部形成的空间中的特征，使得结合其中的磁体接近孔的侧壁，而不是孔的底部。
2.分离细胞的第二种替代方法是使用与目标分子结合的空心或悬浮颗粒物，如抗体或Affimer，所述抗体或Affimer可以与任何特定细胞群结合，并漂浮到测定孔中液体样本的顶面。例如，可以使RBC漂浮至孔的顶部，并从孔的下部或中部区域取样，以将WBC拉至探针中。根据该设计，在含有红细胞和免疫细胞混合物的液体样本中对免疫细胞取样的方法可以包括以下步骤：(A)将液体样本引入设计用于结合RBC的样本空心或悬浮颗粒物；(B)在步骤(A)之前或之后，将液体样本引入微孔板的检测孔；(C)通过将RBC结合到空心或悬浮颗粒物的优点，在检测中RBC漂浮到液体样本的顶面上，所述顶面位于含有WBC的检测孔的下部和中部区域上方；和(D)用取样探针从检测孔的下部或中部区域取出WBC。
3.在微孔板中分离细胞的第三种替代方法是使用梯度离心，迫使在微孔样本中形成多个液体层，每层包含不同的细胞群。
4.对于上述所有不同的细胞分离方法，在细胞分离后，取样探针下降到包含目标细胞/颗粒群的特定层并获取样本。取样探针可以下降到孔的特定位置，仅从一层取样，也可以下降到同一孔的多个位置，以对不同层取样。
5.样本探针只能是一个单探针，它下降到一个或多个位置以从一层或更多层获取样本。替代方法是使用多个探针，这些探针下降到一个或多个位置，以从一个或更多层获取样本。
6.本申请所述的方法可应用于任何检测系统，如血液分析仪、细胞分选仪、质谱仪、DNA/RNA分析仪等。图1A-1E的方法不限于流式细胞仪。图9-11所示的仪器是通过示例以非限制的方式提供的。
进一步考虑
本申请所述方法的应用之一是小型化的“皿中临床试验”应用，并扩展了流式细胞仪以小型化版式直接获取/分析全血样本的能力，用于免疫学、免疫肿瘤学、免疫毒性、药物分析研究和类似研究工作。本公开的方法可应用于任何含有RBC或其他非目标颗粒的液体混合样本中一个或多个目标颗粒的取样，如液态切片、脑脊液(CSF)、绒毛膜样本(CVS)、羊水(AF)、囊液样本、骨髓样本等。混合样品可以用抗体和其他染料预染，并与不同的功能珠预混，如Sartorius/Intellicyt QBeads，用于同时测量细胞因子、生长因子、趋化因子、激素和其他生物因子或颗粒。

Claims (34)

1.一种从沉积在有壁的微孔板孔中的生物液体样本中对免疫细胞自动取样的方法，所述生物液体样本包含(1)红细胞(RBC)和(2)磁珠，所述磁珠被设计用于与样本中RBC结合，包括以下步骤：
(a)将微孔板放置在具有磁性适配器的振荡器上，所述磁性适配器至少包括一个磁体，其中所述磁体使得结合有磁珠的RBC被固定在孔壁上；
(b)用振荡器以一种方式摇动微孔板一段时间，以便于基本上均匀或均匀地悬浮在微孔板的孔中区域的生物液体样本中的免疫细胞，从而使所述免疫细胞基本上与固定在孔壁的RBC分离；和
(c)将样本探针下降到孔的孔区域中，并从所述区域回收一部分含有免疫细胞的样本。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述磁性适配器包括一个固定单个磁体的结构，微孔板的每个孔一个磁体，其中所述磁性适配器被配置为安装在振荡器的顶面上，并夹在顶面和微孔板之间，并且所述磁体使得RBC被固定在孔的底壁或侧壁上。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述生物液体包括全血。
4.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述生物液体包括囊液样本、羊水、骨髓样本、脑脊液样本、液态切片或绒毛膜样本。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述样本探针是流式细胞仪的一部分，并且所述方法包括步骤d)，将部分含有免疫细胞的样本引入流式细胞仪。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述振荡器还包括主位置传感器，并且其中所述方法还包括从磁体产生的磁场屏蔽原位传感器的步骤。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述摇动步骤包括以100rpm至1500rpm的速度运行所述振荡器进行偏心旋转。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述磁珠包括估计尺寸在1nm-50um之间的磁珠或顺磁珠，所述磁珠配置有特定分子，所述特定分子与在RBC而不是免疫细胞上表达的分子结合。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中步骤a)和c)中振荡器处于非摇动状态。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中至少包括一个磁体的磁性适配器集成到振荡器中。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，还包括在进行步骤A)之前在微孔板上放置可穿孔封口的步骤。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述样本还包括孔标记珠或孔计数珠。
13.一种振荡器系统，包括下述部件的组合：
振荡器，所述振荡器被配置为以包含多个孔的受控和可编程方式摇动，所述振荡器具有顶面；和
与振荡器上的结构配合的磁性适配器，以便所述磁性适配器可拆卸地安装到振荡器的顶面，所述磁性适配器包括固定一个或多个磁体阵列的结构，其中所述磁性适配器被配置为安装在振荡器的顶面上，并夹在振荡器的顶面和微孔板之间。
14.根据权利要求13所述的系统，其中所述磁体布置在磁性适配器中，因此当微孔板放置在所述磁性适配器的顶面上时，所述磁体与孔的底部对齐。
15.根据权利要求13所述的系统，还包括振荡器的控制系统，其中控制系统运行振荡器，使振荡器以一种方式摇动板一段时间，以在孔的区域内基本均匀地悬浮生物液体样本中的免疫细胞。
16.根据权利要求15所述的系统，其中所述控制系统被配置为以100rpm至1500rpm的速度运行振荡器进行偏心旋转。
17.根据权利要求13-16中任一项所述的系统，还包括机械控制的取样探针，其在相对于微孔板X、Y和Z的方向上移动，所述取样探针从孔中回收包含免疫细胞的样本，并将所述免疫细胞引入分析仪器。
18.根据权利要求17所述的系统，其中所述分析仪器包括流式细胞仪。
19.根据权利要求13-18中任一项所述的系统，还包括位于振荡器顶面和磁性适配器之间的铁磁屏蔽体。
20.根据权利要求13-19中任一项所述的系统，其中所述磁性适配器包括单独的磁体的阵列，每个微孔板的孔一个磁体。
21.根据权利要求13-19中任一项所述的系统，其中所述磁性适配器被配置为将磁体放置在靠近微孔板孔侧壁的空间中。
22.一种流式细胞仪，包括：
机械取样探针；
具有顶面的振荡器；
磁性适配器，所述磁性适配器被配置为放置在振荡器的顶面上，所述磁性适配器具有一个或多个用于固定微孔板的特征，所述微孔板具有多个含有生物液体样本的孔，其中所述磁性适配器与振荡器上的结构配合，以以便可拆卸地安装到振荡器顶部，其中所述磁性适配器包括固定一个或者多个磁体的结构，并且其中所述磁性适配器被配置为夹在振荡器和微孔板之间；
控制系统，所述控制系统被配置为以一种方式摇动含有微孔板的振荡器一段时间，以便于在微孔板的孔的区域基本上均匀地悬浮免疫细胞，其中孔区域中的所述免疫细胞基本上与磁性结合到孔壁的红血细胞分离；和
分析仪器，所述分析仪器用于对从所述微孔板的孔取出的免疫细胞进行一次或多次测量，其中所述探针从孔回收免疫细胞并将免疫细胞引入仪器。
23.根据权利要求22所述的流式细胞仪，其中所述生物液体样本包括全血。
24.根据权利要求22或23所述的流式细胞仪，其中所述生物液体样本包括囊液样本、羊水、骨髓样本、脑脊液样本、液态切片或绒毛膜样本。
25.根据权利要求22-24中任一项所述的流式细胞仪，其中所述振荡器还包括原位传感器，并且所述振荡器还包括位于所述振荡器和所述磁适配器之间的屏蔽体，所述屏蔽体通过磁体产生的磁场屏蔽所述原位传感器。
26.根据权利要求22-25中任一项所述的流式细胞仪，其中所述控制系统以100rpm至1500rpm的速度运行所述振荡器进行偏心旋转。
27.根据权利要求26所述的流式细胞仪，其中红细胞与估计尺寸在1nm-50μm之间的磁珠结合，所述与特定分子结合，所述特定分子与红细胞细胞表面表达的分子结合，而不与免疫细胞的细胞表面表达的分子结合。
28.根据权利要求22-27中任一项所述的流式细胞仪，其中取样探针在微孔板摇动后免疫细胞基本均匀地悬浮在孔的区域时，从所述微孔板的孔中提取样本。
29.根据权利要求28所述的流式细胞仪，其中从孔中提取样本的取样时间为每孔0.5秒至5分钟。
30.根据权利要求22-26中任一项所述的流式细胞仪，还包括用于生物液体样本的一种或多种试剂，其中所述一种或更多试剂包括磁珠，所述磁珠与被设计为选择性结合到RBC表面的抗体结合。
31.一种在含有红细胞和免疫细胞混合物的液体样本中取样免疫细胞的方法，包括以下步骤：
(A)引入被设计用于结合红细胞的液体样本空心颗粒，
(b)在步骤(A)之前或之后，将所述液体样本引入微孔板的检测孔；
(c)在检测中，允许所述红细胞漂浮液体样本的顶面上，所述顶面位于检测孔的下部和中部区域的上方，所述检测孔的下部和中部区域含有免疫细胞；和
(D)用取样探针从检测孔的下部和/或中部区域取出免疫细胞。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述取样探针从检测孔的中层和下层提取免疫细胞。
33.根据权利要求31所述的方法，其中步骤(D)包括用第一个取样探针从检测孔的下部区域取出免疫细胞，并用第二取样探针从检测孔的中部区域取出免疫细胞。
34.根据权利要求31-31所述的方法，其中所述液体样本包括全血。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115282837B (zh) * 2022-09-19 2024-01-12 北京宋诚医疗科技有限公司 用于实验室的震荡融合装置

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4702610A (en) * 1985-04-18 1987-10-27 Reynolds Jr Albert B Undulating mixing device
NO162946C (no) * 1987-08-21 1990-03-14 Otto Soerensen Anordning for magnetisk separasjon av celler.
CA1311404C (en) * 1987-03-13 1992-12-15 Kenneth H. Kortright Automated analyzer and method for screening cells or formed bodies for enumeration of populations expressing selected characteristics
WO1992005443A1 (en) * 1990-09-15 1992-04-02 Medical Research Council Reagent separation
US6890487B1 (en) 1999-09-30 2005-05-10 Science & Technology Corporation ©UNM Flow cytometry for high throughput screening
US6689615B1 (en) * 2000-10-04 2004-02-10 James Murto Methods and devices for processing blood samples
FR2963108B1 (fr) * 2010-07-21 2017-06-23 Diagast Procede magnetique d'immunodiagnostic et kit pour la mise en evidence de complexe anticorps/antigene de groupe/phenotype sanguin
EP2732878B1 (en) * 2012-11-20 2018-09-12 QIAGEN GmbH Magnetic rack system and method for using a magnetic rack system
US9063044B2 (en) * 2013-02-27 2015-06-23 Plexbio Co. Ltd. Magnetic aggregating and washing device for in vitro assays and methods of use thereof
US9897531B2 (en) 2014-06-03 2018-02-20 Intellicyt Flow cytometry sample separation methods and apparatus
US9797917B2 (en) * 2014-07-11 2017-10-24 Intellicyt Contact sensing probe and methods of use for microplate liquid sampling
US9551644B2 (en) 2014-07-11 2017-01-24 Intellicyt Methods and apparatus for real-time detection and clearing of a clog
EP3470141B1 (en) * 2017-10-11 2024-04-24 F. Hoffmann-La Roche AG Apparatus and method for processing a biological sample with magnetic particles

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