CN116046949A - 群体感应小分子代谢组定量检测方法 - Google Patents

群体感应小分子代谢组定量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体涉及群体感应小分子代谢组定量检测方法。本发明提供了群体感应小分子代谢组定量检测方法。已有的AHLs物质检测均对已知的几个分子进行检测，其覆盖范围低，采用这些策略对菌群发酵过程中AHLs类物质的含量进行检测具有不全面、滞后等问题，不利于及时、精确的调控。通过本策略，能够采用常规的检测技术，实现对AHLs类物质的全面的监测，为菌群发酵提供有害群体感应分子的及时预警。本发明中针对已有的AHLs类物质进行结构、质谱碎片分析，开发了AHLs类小分子预测判定和检测方法，为全面测定AHLs类物质在发酵过程中的积累情况、指导及时调控提供支持。

Description

群体感应小分子代谢组定量检测方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及群体感应小分子代谢组定量检测方法。
背景技术
微生物复合菌群在多种废弃物资源化利用，如转化木质纤维素废弃物产液体燃料和产氢，降解有毒有害化合物、修复土壤、促进植物生长和抵御病害，以及采油和原油污染修复等领域，具有重要的应用价值。微生物复合菌群通过菌群间的协作，完成复杂的生物学过程，实现相应的功能或目标产品的生产。在这一过程中，菌群中不同的微生物起到的功能存在显著的差异，通过不同微生物间功能的协同和互补，达到远高于单菌的效果。
但是研究发现，随着发酵时间的延长，菌群的发酵性能会逐步降低，菌群多样性也会受到影响，形成菌膜等严重影响功能的情况。已有的研究显示，微生物菌群在共生过程中通过群体响应来实现菌群功能的调控。微生物在发酵过程中会合成一系列小分子，微生物通过感知小分子的浓度，来调整自己的生长状态，是群体响应的关键信号分子。微生物菌群高效发酵向功能衰退、形成菌膜等情况的变化，就直接受到这类小分子的调控。因此，如何有效监测关键群体感应小分子的水平，为后续调控，保持菌群高效性能具有重要的生产应用价值。
酰基高丝氨酸内酯类(AHLs)群体感应小分子是一类重要的群体感应信号分子，该类物质的积累会严重影响多种菌群的活性。但是由于微生物菌群代谢通路复杂，存在多种多样的AHLs类物质合成与修饰酶，存在的AHLs类小分子种类多样，近年来不断有报道发现新的AHLs类小分子。微生物对AHLs类小分子的感知主要是通过AHLs受体与AHLs小分子的互作，这种互作与AHLs类物质的总量密切相关。已有的检测方法主要针对其中已知的几种物质进行含量的测定，包含的AHLs类小分子数量有限，对未知的、无标准品的AHLs类物质尚没有可靠的鉴定和定量检测手段，因而AHLs类物质的含量难以有效的进行测定。在发酵过程中，AHLs类物质的积累会造成发酵系统的崩溃，无法对AHLs类物质的积累进行全面的监测，会导致对菌群稳定性判断的相对滞后，延误最佳的调控时间，造成菌群功能不可逆退化，严重影响发酵生产。
现有的对AHLs类物质的检测方法通常仅针对其中几种已知的AHLs小分子进行检测，对于没有标准品、或者在不同发酵体系内尚未鉴定出的AHLs类物质无法进行可靠的定性和定量测定。然而，细菌中的AHLs受体与小分子的互作，主要是通过酶的特异性结合位点来识别小分子，在不影响识别位点的情况下，对远离识别位点的基团进行修饰或者更换(如进行羟基化、酮基化修饰，脂肪酸链的链长、双键数量和双键位置变化等)，小分子与酶仍能互作并发挥作用。在微生物菌群中，基于上述体内反应策略，能够成为AHLs类物质修饰基团、或者能够催化AHLs类物质合成的代谢通路多种多样，其中多数尚未被报道。因此，仅对已知的3～5种AHLs进行定量检测，无法全面可靠的对菌群体系中AHLs小分子的总量变化进行检测。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了群体感应小分子代谢组定量检测方法。
本发明提供了群体感应小分子代谢组定量检测方法。已有的AHLs物质检测均对已知的几个分子进行检测，其覆盖范围低，采用这些策略对菌群发酵过程中AHLs类物质的含量进行检测具有不全面、滞后等问题，不利于及时、精确的调控。通过本策略，能够采用常规的检测技术，实现对AHLs类物质的全面的监测，为菌群发酵提供有害群体感应分子的及时预警。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了菌群AHLs类物质的检测方法，包括：
步骤1：建立AHLs类物质的预测数据集，筛选获得目标AHLs；
步骤2：根据鉴定标准，对所述目标AHLs进行定性分析；
所述预测数据集包括：
(Ⅰ)、3位无取代基的AHLs类物质：m/z＝C8H12NO3+CaHb+1.0078250321＝170.0811698+12×a+1.0078250321×(b+1)；和/或
(Ⅱ)、3位羟基取代的AHLs类物质：m/z＝C8H12NO4+CaHb+1.0078250321＝186.0760844+12×a+1.0078250321×(b+1)；和/或
(Ⅲ)、3位酮基取代的AHLs类物质：m/z＝C8H10NO4+CaHb+1.0078250321＝184.0604343+12×a+1.0078250321×(b+1)；
所述CaHb包括烷烃、烯烃和/或炔烃；
所述a和b的对应关系包括b＝2a+2或b＝2a+2-2i(i＝[0,a-1])；
所述a表示碳原子个数；所述b表示氢原子个数；所述i包括双键的数量；
所述鉴定标准包括：
(Ⅰ)、m/z包括102.055±0.002，84.044±0.002和/或(m/z-101.048)±0.002，不包括83.048±0.002，85.028±0.002，71.050±0.002和/或74.060±0.002时，为3位无取代基的AHLs类物质；和/或
(Ⅱ)、m/z包括102.055±0.002，83.048±0.002，71.050±0.002和/或(m/z-119.058)±0.002时，为3位羟基取代的AHLs类物质；和/或
(Ⅲ)、m/z包括102.055±0.002，84.044±0.002，85.028±0.002，74.060±0.002和/或(m/z-101.048)±0.002时，为3位酮基取代的AHLs类物质。
在本发明的一些具体实施方案中，所述预测数据集的检测模式包括[M+H]+。
在本发明的一些具体实施方案中，所述a的取值范围包括2～26。
在本发明的一些具体实施方案中，获得所述预测数据集的方法包括取样、提取、液相分离和/或采集样品数据；
所述提取采用的溶液包括0.1％甲酸乙腈和0.1％甲酸水溶液；所述液相分离采用的色谱柱包括C18或类似填料的色谱柱；所述液相的洗脱梯度有机相从10％逐步递增至100％；
所述采集样品数据采用的仪器包括飞行时间质谱或静电场轨道阱串联质谱仪；所述数据为正离子数据。
在本发明的一些具体实施方案中，所述鉴定标准基于标准品的AHLs类物质二级质谱碎片获得；
所述标准品包括N-(β-酮己酰)-L-高丝氨酸内酯、N-十二烷酰-L-高丝氨酸内酯，N-己酰基-L-高丝氨酸内酯，N-辛酰-L-高丝氨酸内酯，N-癸酰-DL-高丝氨酸内酯，正十四酰基-DL-高丝氨酸内酯，正丁酰基-DL-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代辛酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代十二烷酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代十四烷酰)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代癸酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-羟基癸酰基)-L-高丝氨酸内酯或N-(3-羟基十四烷酰基)-DL-高丝氨酸内酯中的一种或多种。
在本发明的一些具体实施方案中，所述N-(β-酮己酰)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.028、74.060和/或113.059；
所述N-十二烷酰-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括84.044、102.055、256.227、266.211和/或183.174；
所述N-己酰基-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括84.044、182.117、102.055、123.117和/或99.080；
所述N-辛酰-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括57.070、102.055、109.101、84.044和/或127.112；
所述N-癸酰-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、81.069、95.085和/或155.143；
所述正十四酰基-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、71.085、84.044、67.054和/或211.205；
所述正丁酰基-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括154.086、102.055、84.044、57.032和/或71.143；
所述N-(3-氧代辛酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.029、74.060和/或141.091；
所述N-(3-氧代十二烷酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.028、74.060和/或197.153；
所述N-(3-氧代十四烷酰)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、85.028、84.044、74.060和/或225.184；
所述N-(3-氧代癸酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括85.028、102.055、74.060、84.044和/或169.122；
所述N-(3-羟基癸酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括83.048、93.070、71.050、102.055和/或81.070；
所述N-(3-羟基十四烷酰基)-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、191.179、83.048、71.050和/或209.190。
在本发明的一些具体实施方案中，还包括对所述目标AHLs的定量检测；
所述定量检测包括：
步骤1：取已知含量的标准品AHLs，获得其质谱检测信号强度数值，制备标准曲线；
步骤2：根据所述目标AHLs的质谱检测信号强度数值，通过所述标准曲线获得所述目标AHLs的含量。
在本发明的一些具体实施方案中，所述菌群包括细菌和/或真菌。
在本发明的一些具体实施方案中，所述细菌的脂肪酸的碳数包括4～22个和/或双键数量包括1～2个；所述真菌的碳数包括26个和/或双键数量包括1～3。
在本发明的一些具体实施方案中，所述检测方法检测菌群发酵第二天的AHLs类物质含量为68μg/L、第三天的AHLs类物质含量为155μg/L、第四天的AHLs类物质含量为114μg/L；
所述菌群中的未知AHLs类物质包括C6-(3OH)-HSL、C(16:1)-(3OH)-HSL、C14-(3OH)-HSL、C(16:1)-(3OXO)-HSL和/或C(14:1)-(3OXO)-HSL；所述菌群为细菌。
在本发明的一些具体实施方案中，所述检测方法检测可转化污水产有机酸醇的菌群发酵第七天的AHLs类物质含量为68.4μg/L、第十天的AHLs类物质含量为126μg/L、第十五天的AHLs类物质含量为62μg/L；
所述可转化污水产有机酸醇的菌群中的未知AHLs类物质包括C8-(3OH)-HSL、C14-(3OH)-HSL、C16-HSL、C(14:1)-HSL、C(16:1)-(3OH)-HSL和/或C(16:1)-(3OXO)-HSL。
在本发明的一些具体实施方案中，所述可转化污水产有机酸醇菌群的筛选方法包括发酵培养基中添加发酵底物，接种菌群、培养；
所述发酵底物包括粪污；所述粪污的添加量为25g/L；所述菌群的接种量为10％(体积比)；所述培养的温度为55℃、转速为30rpm。
本发明还提供了如下任意项在菌群AHLs类物质定性检测和/或定量检测中的应用：
(Ⅰ)、AHLs类物质的预测数据集；和/或
(Ⅱ)、AHLs类物质的鉴定标准；
所述预测数据集包括：
(Ⅰ)、3位无取代基的AHLs类物质：m/z＝C8H12NO3+CaHb+
1.0078250321＝170.0811698+12×a+1.0078250321×(b+1)；和/或
(Ⅱ)、3位羟基取代的AHLs类物质：m/z＝C8H12NO4+CaHb+
1.0078250321＝186.0760844+12×a+1.0078250321×(b+1)；和/或
(Ⅲ)、3位酮基取代的AHLs类物质：m/z＝C8H10NO4+CaHb+
1.0078250321＝184.0604343+12×a+1.0078250321×(b+1)；
所述CaHb包括烷烃、烯烃和/或炔烃；
所述a和b的对应关系包括b＝2a+2或b＝2a+2-2i(i＝[0,a-1])；
所述a表示碳原子个数；所述b表示氢原子个数；所述i包括双键的数量；
所述鉴定标准包括：
(Ⅰ)、m/z包括102.055±0.002，84.044±0.002和/或(m/z-101.048)±0.002，不包括83.048±0.002，85.028±0.002，71.050±0.002和/或74.060±0.002时，为3位无取代基的AHLs类物质；和/或
(Ⅱ)、m/z包括102.055±0.002，83.048±0.002，71.050±0.002和/或(m/z-119.058)±0.002时，为3位羟基取代的AHLs类物质；和/或
(Ⅲ)、m/z包括102.055±0.002，84.044±0.002，85.028±0.002，74.060±0.002和/或(m/z-101.048)±0.002时，为3位酮基取代的AHLs类物质。
在本发明的一些具体实施方案中，所述预测数据集的检测模式包括[M+H]+。
在本发明的一些具体实施方案中，所述a的取值范围包括2～26。
在本发明的一些具体实施方案中，获得所述预测数据集的方法包括取样、提取、液相分离和/或采集样品数据；
所述提取采用的溶液包括0.1％甲酸乙腈和0.1％甲酸水溶液；所述液相分离采用的色谱柱包括C18或类似填料的色谱柱；所述液相的洗脱梯度有机相从10％逐步递增至100％；
所述采集样品数据采用的仪器包括飞行时间质谱或静电场轨道阱串联质谱仪；所述数据为正离子数据。
在本发明的一些具体实施方案中，所述鉴定标准包括基于标准品的AHLs类物质二级质谱碎片获得；
所述标准品包括N-(β-酮己酰)-L-高丝氨酸内酯、N-十二烷酰-L-高丝氨酸内酯，N-己酰基-L-高丝氨酸内酯，N-辛酰-L-高丝氨酸内酯，N-癸酰-DL-高丝氨酸内酯，正十四酰基-DL-高丝氨酸内酯，正丁酰基-DL-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代辛酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代十二烷酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代十四烷酰)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代癸酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-羟基癸酰基)-L-高丝氨酸内酯或N-(3-羟基十四烷酰基)-DL-高丝氨酸内酯中的一种或多种。
在本发明的一些具体实施方案中，所述N-(β-酮己酰)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.028、74.060和/或113.059；
所述N-十二烷酰-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括84.044、102.055、256.227、266.211和/或183.174；
所述N-己酰基-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括84.044、182.117、102.055、123.117和/或99.080；
所述N-辛酰-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括57.070、102.055、109.101、84.044和/或127.112；
所述N-癸酰-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、81.069、95.085和/或155.143；
所述正十四酰基-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、71.085、84.044、67.054和/或211.205；
所述正丁酰基-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括154.086、102.055、84.044、57.032和/或71.143；
所述N-(3-氧代辛酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.029、74.060和/或141.091；
所述N-(3-氧代十二烷酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.028、74.060和/或197.153；
所述N-(3-氧代十四烷酰)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、85.028、84.044、74.060和/或225.184；
所述N-(3-氧代癸酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括85.028、102.055、74.060、84.044和/或169.122；
所述N-(3-羟基癸酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括83.048、93.070、71.050、102.055和/或81.070；
所述N-(3-羟基十四烷酰基)-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、191.179、83.048、71.050和/或209.190。
在本发明的一些具体实施方案中，所述定性检测包括对所述目标AHLs进行鉴定和/或分类；和/或
所述定量检测包括：
步骤1：取已知含量的标准品AHLs，获得其质谱检测信号强度数值，制备标准曲线；
步骤2：根据所述目标AHLs的质谱检测信号强度数值，通过所述标准曲线获得所述目标AHLs的含量。
在本发明的一些具体实施方案中，所述菌群包括细菌和/或真菌。
在本发明的一些具体实施方案中，所述细菌的脂肪酸的碳数包括4～22个和/或双键数量包括1～2个；所述真菌的碳数包括26个和/或双键数量包括1～3。
本发明提供了群体感应小分子代谢组定量检测方法。本发明中针对已有的AHLs类物质进行结构、质谱碎片分析，开发了AHLs类小分子预测判定和检测方法，为全面测定AHLs类物质在发酵过程中的积累情况、指导及时调控提供支持。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示实施例1中常见AHL类化合物；
图2示实施例2中各标准品的高分辨二级质谱谱图；
图3示实施例3中6种标准品标曲图；其中，A为C4-HSL标准品的标曲图；B为C6-HSL标准品的标曲图；C为C12-HSL标准品的标曲图；D为C14-HSL标准品的标曲图；E为C6-(3OXO)-HSL标准品的标曲图；F为C14-(3OH)-HSL标准品的标曲图；
图4示实施例4中粪污发酵菌群产酸发酵总有机酸醇的含量。
具体实施方式
本发明公开了群体感应小分子代谢组定量检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
建立AHLs类群体感应小分子的预测小分子库和监测方法：
本发明的创新点：
通过对AHLs类物质生物合成特征进行分析，建立不同类型AHLs类物质的分子式计算方程；
通过对AHLs类物质碎裂特征进行分析，建立质谱中基于一级质谱信息和二级质谱碎片对AHLs类物质进行定性和分类的方法，建立AHLs类物质的小分子预测监测表，通过一级质谱信息和二级碎片中的特征性母核碎片，实现已知和未知AHLs类物质的鉴定，并基于已知AHLs类物质，进行含量计算。
本专利中针对已有的AHLs类物质进行结构、质谱碎片分析，开发了AHLs类小分子预测判定和检测方法，为全面测定AHLs类物质在发酵过程中的积累情况、指导及时调控提供支持。
基于AHLs类物质的生物合成路径，建立不同取代基类型AHLs类物质的分子式和分子量预测。
通过对AHLs类物质的质谱二级碎片特征进行比较和分析，挖掘其内在碎裂规律，通过二级碎片中的特征性母核碎片实现AHLs类物质的鉴定和准确分类，建立AHLs类物质的小分子预测监测表，筛选监测AHLs类物质的变化水平。
本发明提供的群体感应小分子代谢组定量检测方法中所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：建立AHLs小分子的质谱检查中[M+H]+模式的预测数据集
AHLs类化合物为如图1所示的一类化合物，在高丝氨酸内酯母核的基础上，在N上进一步衍生化获得不同的化合物。目前已报道的AHLs主要有3-氧代十二烷酰基、3-氧代己酰等衍生化形式，但是微生物种类数以亿计，其能够参与AHLs类分子合成的酶种类众多，目前已知的AHLs类小分子极为有限，已报导的检测方法更是仅针对几种常见AHLs类物质。用于工业发酵的菌群的组成微生物种类众多，可能产生的AHLs类物质的种类也极为多样，AHLs类物质的积累会对发酵过程造成不可逆的影响，导致菌群结构失衡，发酵提前终止或者失败。因此，急需开发方法，尽可能全面的实现AHLs类物质的监测。鉴于AHLs类物质的监测主要采用质谱方法，质谱中对一个物质可能的种类判定首先是基于一级质谱的质荷比，即一级质谱m/z，AHLs类物质依据物质特性在正离子模式下可以检出。因此，在本发明中我们通过研究AHLs类物质的结构特点，基于取代基团的差异，对可能的AHLs类小分子分成三类进行预测，开发了对应的AHLs类物质小分子正离子模式下[M+H]+的预测和计算公式。
(1)3位无取代基的高丝氨酸内酯类物质(A)。m/z＝C8H12NO3+CaHb+1.0078250321＝170.0811698+12×a+1.0078250321×(b+1)(b＝2a+2或b＝2a+2-2i(i＝[0,a-1])
(2)3位羟基取代的高丝氨酸内酯类物质(B)。m/z＝C8H12NO4+CaHb+1.0078250321＝186.0760844+12×a+1.0078250321×(b+1)(b＝2a+2或b＝2a+2-2i(i＝[0,a-1])
(3)3位酮基取代的高丝氨酸内酯类物质(C)。m/z＝C8H10NO4+CaHb+1.0078250321＝184.0604343+12×a+1.0078250321×(b+1)(b＝2a+2或b＝2a+2-2i(i＝[0,a-1])
公式中，C8H12NO3，C8H12NO4，C8H10NO4为对应的不同的三类AHLs类物质的母核；CaHb根据a和b的对应关系(括号中所示)，对应烷烃衍生物、烯烃衍生物(含多双键烯烃)。其中，i是指的双键的数量，a取值为0时，为没有侧链的小分子。。
通过公式，可以生成侧链为不同取代基团的小分子对应质谱检查中[M+H]+模式的预测数据集。
根据检测的体系来圈定一定的范围，因为虚拟库结合质谱，会存在假阳性的概率。通常本发明认为细菌组成的菌群，一般脂肪酸侧链的长度在4～22比较常见且双键数量一般是1～2个；真菌可能脂肪酸的碳数需要提高到26，双键数量也可能1～3个比较好一些。通过这些限定，一方面是提高检测的可靠性、降低假阳性的情况，另一方面是从检测角度可以缩短检测的复杂度降低成本。
实施例2：建立候选AHLs类物质二级图谱鉴定法则
一级质谱通过m/z能够初步给出目标物质的分子量，二级质谱的图谱能够获得目标化合物的一系列特征性碎片，可以实现准确的定性分析。在实施例1生成一级质谱数据的基础上，本专利中进一步通过对已有标准品的AHLs类物质的二级质谱碎片特征进行分析，建立基于二级碎片的AHLs类物质的定性鉴定法则。
为了研究AHLs类物质的碎片，本发明首先从西格玛公司采购了目前已有AHLs物质的标准品(表1)：
N-(β-酮己酰)-L-高丝氨酸内酯(C6-3OXO-homoserine lactone，143537-62-6)，N-十二烷酰-L-高丝氨酸内酯(C12-homoserine lactone，137173-46-7)，N-己酰基-L-高丝氨酸内酯(C6-homoserine lactone，106983-28-2)，N-辛酰-L-高丝氨酸内酯(C8-homoserine lactone，147852-84-4)，N-癸酰-DL-高丝氨酸内酯(C10-homoserinelactone，106983-36-2)，正十四酰基-DL-高丝氨酸内酯(C14-homoserine lactone，98206-80-5)，正丁酰基-DL-高丝氨酸内酯(C4-homoserine lactone，98426-48-3)，N-(3-氧代辛酰基)-L-高丝氨酸内酯(C8-3OXO-homoserine lactone，147795-39-9)，N-(3-氧代十二烷酰基)-L-高丝氨酸内酯(C12-3OXO-homoserine lactone，168982-69-2)，N-(3-氧代十四烷酰)-L-高丝氨酸内酯(C14-3OXO-homoserine lactone，503610-29-5)，N-(3-氧代癸酰基)-L-高丝氨酸内酯(C10-3OXO-homoserine lactone，147795-40-2)，N-(3-羟基癸酰基)-L-高丝氨酸内酯(C10-3OH-homoserine lactone，106983-28-2)和N-(3-羟基十四烷酰基)-DL-高丝氨酸内酯(C14-2OH-homoserine lactone，172670-99-4)。
表1AHLs物质的标准品
Figure BDA0004060873190000121
Figure BDA0004060873190000131
Figure BDA0004060873190000141
通过高分辨质谱(二级分辨率不低于20000)，获得标准品的高分辨二级质谱谱图(图2)，保证能够基于碎片准确计算出对应碎片的分子式。通过对这些标准品二级谱图获得的碎片进行分析，一方面结合AHLs类物质的结构特性，通过对质谱中正离子模式碎裂获得的高分辨碎片信息进行推算，选出目标物质的特征性碎片及其规律，实现物质的准确定性；另一方面，基于母核的结构和基于经验推测的碎片m/z对应的碎片结构信息，筛选三类不同AHLs类物质的特征性母核碎片，从而实现三种类型AHLs物质的准确分类。
基于串级质谱一级和二级图谱信息的AHLs类物质定性鉴定方法如下：
(1)首先基于实施例1的公式，获取AHLs类物质的m/z表，并提取对应的三类化合物，分别标记为Ai，Bj，Ck。
(2)基于二级碎片进一步判定物质是否为对应的AHLs类物质：
a.3位无取代基的高丝氨酸内酯类物质：
物质Ai，对应质荷比为m/zi(计算公式如实施例1所述)，若信号强度前10位的二级碎片数据满足，在102.055±0.002，84.044±0.002，
(m/zi-101.048)±0.002三个数值范围(因高分辨质谱仪器本身、环境等差异，仪器测定值存在一定的正常波动范围，故设置为±0.002的数值范围)内同时存在碎片，且在83.048±0.002，85.028±0.002，71.050±0.002和74.060±0.002四个数值范围内无碎片，则物质Ai判定为3位无取代基的高丝氨酸内酯类物质。不满足上述条件，则剔除。
b.3位羟基取代的高丝氨酸内酯类物质：
物质Bj，对应质荷比为m/zj(计算公式如实施例1所述)，若强度前10位的二级碎片中，在102.055±0.002，83.048±0.002，71.050±0.002，
(m/zj-119.058)±0.002四个数值范围内同时存在碎片，则物质Bj判定为3位羟基取代的高丝氨酸内酯类物质。不满足上述条件，则剔除。
c.3位酮基取代的高丝氨酸内酯类物质：
物质Ck，对应质荷比为m/zk(计算公式如实施例1所述)，若信号强度前10位的二级碎片数据满足，若强度前10位的二级碎片中，在102.055±0.002，84.044±0.002，85.028±0.002，74.060±0.002，(m/zk-101.048)±0.002五个数值范围内同时存在碎片，则物质Ck判定为3位酮基取代的高丝氨酸内酯类物质。不满足上述条件，则剔除。
实施例3：建立基于法则的AHLs类物质的含量监督检测方法
本实施例所采用的菌群为在“Characterization and evaluation ofa naturalderivedbacterial consortium for efficient lignocellulosic biomassvalorization”
(Bioresource Technology,2021,329:124909)报道的筛选到的菌群HPP。前期我们的研究显示，该菌群在高效发酵第三天后发酵效果进入平台，第四天开始下降。
本实施例中检测的是细菌菌群，通常情况下细菌合成的脂肪酸，碳链长度一般不超过26个，故本实施例中根据实施例1的公式，生成2个碳到26个碳烷烃、烯烃和炔烃的小分子库，即a的取值范围在2～26(包含2和26)，建立AHLs类物质的检测母离子(m/z)数据集。
在发酵过程中取样，采用0.1％甲酸乙腈和0.1％甲酸水溶液进行AHLs物质提取，之后采用装有C18或者类似填料的色谱柱进行液相分离，采用飞行时间质谱或者静电场轨道阱串联质谱仪采集样品的正离子数据。液相洗脱梯度有机相从10％逐步递增至100％。从获取的数据中，依据建立的AHLs类物质的检测母离子(m/z)数据集，检索数据并把符合要求的物质峰作为候选的目标物质；进一步对候选的目标物质的二级谱图进行分析，基于定性鉴定方法确定其中AHLs类物质并确定其具体分类。选择鉴定出的AHLs类物质中已知的、能获取标准品的物质，AHLs混合标准液进样制备标准曲线(图3)，对该物质进行定量，并依据其定量结果对鉴定出的无标准品的物质进行相对定量，获得菌群中已知与未知AHLs类物质的含量信息。标准曲线为：不同浓度的AHLs标准品与对应质谱信号强度建立的方程，通过测得的信号强度，就可以通过方程反推对应的物质的浓度，进而基于提取过程中用于提取检测的样本的重量/体积，最终检测时样品浓缩后的体积，计算出对应样品中目标物质的含量/浓度。从表2检测结果可以看出，基于标准品检测获得的菌群发酵第二天AHLs类物质含量109μg/L，基于预测库新检出的AHLs类物质含量为68μg/L。
第三天基于标准品检测获得的AHLs物质含量为187μg/L，基于预测库新检出的AHLs类物质含量为155μg/L，相较于采用标准品的传统检测方法，采用本发明所述方法检出的AHLs类物质浓度总量为342μg/L达到传统方法的1.8倍；
第四天基于标准品检测获得的AHLs物质含量为285μg/L，基于预测库新检出的AHLs类物质含量为114μg/L，相较于采用标准品的传统检测方法，采用本发明所述方法检出的AHLs类物质浓度总量为399μg/L达到传统方法的1.4倍；
从增长趋势上，采用传统基于标准品检测，AHLs类物质在发酵第二-第三天并未出现显著的提升，认为无需干预，但菌群第四天进入发酵平台期后快速崩溃；但是采用我们的监测手段，发现第二天-第三天总的AHLs类群体感应小分子浓度快速升高，这种快速积累会严重影响到菌群菌间共生稳定性，导致在第三天开始菌群发酵性减退，产物积累速度减弱，在第四天后快速崩溃。通过对AHLs物质进行更全面的监控，找到了菌群发酵快速崩溃的原因，为采用干扰手段进行菌群的调节提供了重要的依据。
表2菌群中AHLs类物质含量测定
Figure BDA0004060873190000161
Figure BDA0004060873190000171
实施例4：对比AHLs类物质不同检测方法
采用“一种菌群和产油微生物联用生产微生物油脂的方法”
(201510725288.3)专利所述的方法，筛选可转化污水产有机酸醇的菌群。以专利所述菌群发酵培养基，添加25g/L的粪污作为发酵底物，按接种量10％(体积比)接种菌群，以30rpm转速在55℃下搅拌培养发酵(表3，图4)。
表3粪污发酵菌群产酸发酵总有机酸醇的含量
Figure BDA0004060873190000172
本实施例中检测的是细菌菌群，通常情况下细菌合成的脂肪酸，碳链长度一般不超过26个，故本实施例中根据实施例1的公式，生成2个碳到26个碳烷烃、烯烃和炔烃的小分子库，即a的取值范围在2～26(包含2和26)，建立AHLs类物质的检测母离子(m/z)数据集。
首先，采用与实施例3一致的检测方法进行发酵样品的检测，从获取的数据中，依据建立的AHLs类物质的检测母离子(m/z)数据集，检索数据并把符合要求的物质峰作为候选的目标物质；进一步对候选的目标物质的二级谱图进行分析，基于定性鉴定方法确定其中AHLs类物质并确定其具体分类。选择鉴定出的AHLs类物质中已知的、能获取标准品的物质，AHLs混合标准液进样制备标准曲线(图3)，对该物质进行定量，并依据其定量结果对鉴定出的无标准品的物质进行相对定量，获得菌群中已知与未知AHLs类物质的含量信息。
进一步采购13种AHLs类化合物标准品，对粪污菌群产酸发酵过程总有机酸醇的含量测定。
本发明检测方法和对照方法结果汇总如表4。
从结果可以发现，在13种有标准品物质外，通过本发明的筛选鉴定方法，发现可检出的新型AHLs类化合物6种。通过对发酵关键时间点中AHLs物质的连续检测发现，若仅采用标准品进行检测，菌群在第十五天达到AHLs类化合物含量的最大值，在第十五天仍有一定的增长，菌群发酵性能在第十五天出现了明显的衰减难以科学的解释。但是若采用本专利方法，AHLs类化合物在第十天相较于第七天有显著的增加，第十天到第十五天仅存在略微的增长，说明菌群在第十天就受到了AHLs化合物的抑制，可以很好的解释第十五天菌群发酵性能崩溃的原因，为调控菌群延长发酵时间，提供了真正可靠的介入时间点(根据不同的调控需求，选择第第七天或者第十天进行调控)。
表4菌群中AHLs类物质含量测定
Figure BDA0004060873190000181
Figure BDA0004060873190000191
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.菌群AHLs类物质的检测方法，其特征在于，包括：
步骤1：建立AHLs类物质的预测数据集，筛选获得目标AHLs；
步骤2：根据鉴定标准，对所述目标AHLs进行定性分析；
所述预测数据集包括：
(Ⅰ)、3位无取代基的AHLs类物质：m/z＝C8H12NO3+CaHb+
1.0078250321＝170.0811698+12×a+1.0078250321×(b+1)；和/或
(Ⅱ)、3位羟基取代的AHLs类物质：m/z＝C8H12NO4+CaHb+
1.0078250321＝186.0760844+12×a+1.0078250321×(b+1)；和/或
(Ⅲ)、3位酮基取代的AHLs类物质：m/z＝C8H10NO4+CaHb+
1.0078250321＝184.0604343+12×a+1.0078250321×(b+1)；
所述CaHb包括烷烃、烯烃和/或炔烃；
所述a和b的对应关系包括b＝2a+2或b＝2a+2-2i(i＝[0,a-1])；
所述a表示碳原子个数；所述b表示氢原子个数；所述i包括双键的数量；
所述鉴定标准包括：
(Ⅰ)、m/z包括102.055±0.002，84.044±0.002和/或(m/z-101.048)±0.002，不包括83.048±0.002，85.028±0.002，71.050±0.002和/或74.060±0.002时，为3位无取代基的AHLs类物质；和/或
(Ⅱ)、m/z包括102.055±0.002，83.048±0.002，71.050±0.002和/或(m/z-119.058)±0.002时，为3位羟基取代的AHLs类物质；和/或
(Ⅲ)、m/z包括102.055±0.002，84.044±0.002，85.028±0.002，74.060±0.002和/或(m/z-101.048)±0.002时，为3位酮基取代的AHLs类物质。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述鉴定标准基于标准品的AHLs类物质二级质谱碎片获得；
所述标准品包括N-(β-酮己酰)-L-高丝氨酸内酯、N-十二烷酰-L-高丝氨酸内酯，N-己酰基-L-高丝氨酸内酯，N-辛酰-L-高丝氨酸内酯，N-癸酰-DL-高丝氨酸内酯，正十四酰基-DL-高丝氨酸内酯，正丁酰基-DL-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代辛酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代十二烷酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代十四烷酰)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代癸酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-羟基癸酰基)-L-高丝氨酸内酯或N-(3-羟基十四烷酰基)-DL-高丝氨酸内酯中的一种或多种。
3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述N-(β-酮己酰)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.028、74.060和/或113.059；
所述N-十二烷酰-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括84.044、102.055、256.227、266.211和/或183.174；
所述N-己酰基-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括84.044、182.117、102.055、123.117和/或99.080；
所述N-辛酰-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括57.070、102.055、109.101、84.044和/或127.112；
所述N-癸酰-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、81.069、95.085和/或155.143；
所述正十四酰基-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、71.085、84.044、67.054和/或211.205；
所述正丁酰基-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括154.086、102.055、84.044、57.032和/或71.143；
所述N-(3-氧代辛酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.029、74.060和/或141.091；
所述N-(3-氧代十二烷酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.028、74.060和/或197.153；
所述N-(3-氧代十四烷酰)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、85.028、84.044、74.060和/或225.184；
所述N-(3-氧代癸酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括85.028、102.055、74.060、84.044和/或169.122；
所述N-(3-羟基癸酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括83.048、93.070、71.050、102.055和/或81.070；
所述N-(3-羟基十四烷酰基)-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、191.179、83.048、71.050和/或209.190。
4.如权利要求1至3任一项所述的检测方法，其特征在于，还包括对所述目标AHLs的定量检测；
所述定量检测包括：
步骤1：取已知含量的标准品AHLs，获得其质谱检测信号强度数值，制备标准曲线；
步骤2：根据所述目标AHLs的质谱检测信号强度数值，通过所述标准曲线获得所述目标AHLs的含量。
5.如权利要求1至4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述菌群包括细菌和/或真菌。
6.如下任意项在菌群AHLs类物质定性检测和/或定量检测中的应用：
(Ⅰ)、AHLs类物质的预测数据集；和/或
(Ⅱ)、AHLs类物质的鉴定标准；
所述预测数据集包括：
(Ⅰ)、3位无取代基的AHLs类物质：m/z＝C8H12NO3+CaHb+
1.0078250321＝170.0811698+12×a+1.0078250321×(b+1)；和/或
(Ⅱ)、3位羟基取代的AHLs类物质：m/z＝C8H12NO4+CaHb+
1.0078250321＝186.0760844+12×a+1.0078250321×(b+1)；和/或
(Ⅲ)、3位酮基取代的AHLs类物质：m/z＝C8H10NO4+CaHb+
1.0078250321＝184.0604343+12×a+1.0078250321×(b+1)；
所述CaHb包括烷烃、烯烃和/或炔烃；
所述a和b的对应关系包括b＝2a+2或b＝2a+2-2i(i＝[0,a-1])；
所述a表示碳原子个数；所述b表示氢原子个数；所述i包括双键的数量；
所述鉴定标准包括：
(Ⅰ)、m/z包括102.055±0.002，84.044±0.002和/或(m/z-101.048)±0.002，不包括83.048±0.002，85.028±0.002，71.050±0.002和/或74.060±0.002时，为3位无取代基的AHLs类物质；和/或
(Ⅱ)、m/z包括102.055±0.002，83.048±0.002，71.050±0.002和/或(m/z-119.058)±0.002时，为3位羟基取代的AHLs类物质；和/或
(Ⅲ)、m/z包括102.055±0.002，84.044±0.002，85.028±0.002，74.060±0.002和/或(m/z-101.048)±0.002时，为3位酮基取代的AHLs类物质。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述鉴定标准包括基于标准品的AHLs类物质二级质谱碎片获得；
所述标准品包括N-(β-酮己酰)-L-高丝氨酸内酯、N-十二烷酰-L-高丝氨酸内酯，N-己酰基-L-高丝氨酸内酯，N-辛酰-L-高丝氨酸内酯，N-癸酰-DL-高丝氨酸内酯，正十四酰基-DL-高丝氨酸内酯，正丁酰基-DL-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代辛酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代十二烷酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代十四烷酰)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-氧代癸酰基)-L-高丝氨酸内酯，N-(3-羟基癸酰基)-L-高丝氨酸内酯或N-(3-羟基十四烷酰基)-DL-高丝氨酸内酯中的一种或多种。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述N-(β-酮己酰)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.028、74.060和/或113.059；
所述N-十二烷酰-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括84.044、102.055、256.227、266.211和/或183.174；
所述N-己酰基-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括84.044、182.117、102.055、123.117和/或99.080；
所述N-辛酰-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括57.070、102.055、109.101、84.044和/或127.112；
所述N-癸酰-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、81.069、95.085和/或155.143；
所述正十四酰基-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、71.085、84.044、67.054和/或211.205；
所述正丁酰基-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括154.086、102.055、84.044、57.032和/或71.143；
所述N-(3-氧代辛酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.029、74.060和/或141.091；
所述N-(3-氧代十二烷酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、84.044、85.028、74.060和/或197.153；
所述N-(3-氧代十四烷酰)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、85.028、84.044、74.060和/或225.184；
所述N-(3-氧代癸酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括85.028、102.055、74.060、84.044和/或169.122；
所述N-(3-羟基癸酰基)-L-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括83.048、93.070、71.050、102.055和/或81.070；
所述N-(3-羟基十四烷酰基)-DL-高丝氨酸内酯的二级质谱碎片的m/z包括102.055、191.179、83.048、71.050和/或209.190。
9.如权利要求6至8任一项所述的应用，其特征在于，所述定性检测包括对所述目标AHLs进行鉴定和/或分类；和/或
所述定量检测包括：
步骤1：取已知含量的标准品AHLs，获得其质谱检测信号强度数值，制备标准曲线；
步骤2：根据所述目标AHLs的质谱检测信号强度数值，通过所述标准曲线获得所述目标AHLs的含量。
10.如权利要求6至9任一项所述的应用，其特征在于，所述菌群包括细菌和/或真菌。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117877622A (zh) * 2024-03-11 2024-04-12 中国科学院生态环境研究中心 基于化合物质谱信息预测化合物结构的装置、方法和计算机可读存储介质

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120164672A1 (en) * 2007-07-27 2012-06-28 University Of South Carolina High-throughput in vitro translation (cell-lysate based) assay for detecting quorum sensing signals
CN103063774A (zh) * 2012-12-26 2013-04-24 上海海洋大学 高效液相色谱-串联质谱法同时测定细菌群感效应AHLs类分子的方法
CN110907575A (zh) * 2018-09-14 2020-03-24 中国科学院大连化学物理研究所 一种植物中羟基肉桂酸酰胺的深度注释方法
CN114773254A (zh) * 2022-05-10 2022-07-22 中国科学院上海药物研究所 季铵盐类化合物或其盐及其用途，区分2位羟基取代脂肪酸和3位羟基取代脂肪酸的方法
CN115389639A (zh) * 2021-05-24 2022-11-25 赣江中药创新中心 西红花苷化合物靶向鉴定方法及西红花苷新化合物

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120164672A1 (en) * 2007-07-27 2012-06-28 University Of South Carolina High-throughput in vitro translation (cell-lysate based) assay for detecting quorum sensing signals
CN103063774A (zh) * 2012-12-26 2013-04-24 上海海洋大学 高效液相色谱-串联质谱法同时测定细菌群感效应AHLs类分子的方法
CN110907575A (zh) * 2018-09-14 2020-03-24 中国科学院大连化学物理研究所 一种植物中羟基肉桂酸酰胺的深度注释方法
CN115389639A (zh) * 2021-05-24 2022-11-25 赣江中药创新中心 西红花苷化合物靶向鉴定方法及西红花苷新化合物
CN114773254A (zh) * 2022-05-10 2022-07-22 中国科学院上海药物研究所 季铵盐类化合物或其盐及其用途，区分2位羟基取代脂肪酸和3位羟基取代脂肪酸的方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CATHARINE A. ORTORI 等: "Comprehensive profiling of N-acylhomoserine lactones produced by Yersinia pseudotuberculosis using liquid chromatography coupled to hybrid quadrupole-linear ion trap mass spectrometry", ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 399, no. 2, 12 September 2006 (2006-09-12), pages 839 - 850 *
DANIE`LE MORIN 等: "On-line high-performance liquid chromatography-mass spectrometric detection and quantification of N-acylhomoserine lactones, quorum sensing signal molecules, in the presence of biological matrices", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A, vol. 1002, no. 1, 20 June 2003 (2003-06-20), pages 79 - 92, XP004431290, DOI: 10.1016/S0021-9673(03)00730-1 *
李玖龄 等: "超高效液相色谱-串联质谱法检测微氧生物脱氮菌群酰基高丝氨酸内酯信号分子", 分析化学, vol. 44, no. 8, 15 August 2016 (2016-08-15), pages 1165 - 1170 *
生弘杰 等: "信号分子N-酰基高丝氨酸内酯分析方法研究进展", 土壤学报, vol. 53, no. 4, 28 January 2016 (2016-01-28), pages 832 - 844 *
綦国红 等: "HPLC-MS法检测N-酰基-高丝氨酸内酯类信号分子", 分析测试学报, vol. 26, no. 3, 25 May 2007 (2007-05-25), pages 417 - 419 *
马晨晨 等: "高效液相色谱-串联质谱法同时测定细菌群体感应效应的11种AHLs类信号分子", 分析化学, vol. 38, no. 10, 15 October 2010 (2010-10-15), pages 1428 - 1432 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117877622A (zh) * 2024-03-11 2024-04-12 中国科学院生态环境研究中心 基于化合物质谱信息预测化合物结构的装置、方法和计算机可读存储介质
CN117877622B (zh) * 2024-03-11 2024-06-04 中国科学院生态环境研究中心 基于化合物质谱信息预测化合物结构的装置、方法和计算机可读存储介质

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