CN115960826B - 一种细胞水平离心分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及细胞水平离心分离技术，具体涉及富血小板血浆制备方法，属于细胞分离技术领域。通过采用水平转子离心，并在离心管中加入透明质酸钠或海藻酸钠的凝胶，实现了低采血量下较短离心时间内分隔红细胞与血小板，获得满足临床需要的富血小板血浆。与现有PRP分离技术相比，本发明的细胞分离方法可以在使用较少全血量情况下，在更短离心时间内获得满足临床需要的PRP。
Description
技术领域
本发明涉及全血细胞分离技术，具体涉及通过水平离心制备富血小板血浆的方法，属于细胞分离技术领域。
背景技术
伤口愈合通常由凝血、炎症和再生三个连续阶段组成。凝血块中纤维蛋白和血小板不但可有效密封创面隔离致病微生物，还可释放生长因子，对后续组织修复/再生过程起着决定作用(Alan T Nurden.Molecular basis of clot retraction and its role inwound healing.Thromb Res.2022；S0049-3848(22)00350-4.)(Manuel K Rausch等.Synthetic hydrogels as blood clot mimicking wound healing materials.ProgBiomed Eng(Bristol).2021；3(4):042006.)。然而，伤口周围通常为促炎生化环境，致使蛋白酶活性偏高而有效生长因子浓度偏低(Rubina Alves,Ramon Grimalt.AReview ofPlatelet-Rich Plasma:History,Biology,Mechanism of Action,andClassification.Skin Appendage Disord.2018；4(1):18-24.)，不利组织修复快速启动。因此，从自体全血中提取浓缩的血小板和纤维蛋白(即“富血小板血浆(Platelet-richplasma，PRP)”)用以加速创面组织修复和再生,得到了广泛关注。
富血小板血浆的治疗概念,最早出现在20世纪70年代用作治疗血小板减少症患者,后来在颌面外科、肌肉骨骼运动损伤、心脏外科、小儿外科、妇科、泌尿科、整形外科、眼科等诸多领域得到应用(Rubina Alves,Ramon Grimalt.AReview of Platelet-RichPlasma:History,Biology,Mechanism of Action,and Classification.Skin AppendageDisord.2018；4(1):18-24.)。
富血小板血浆的制备,主要依据血液中各细胞组分的密度差异(红细胞为1.100g/mL、中性粒细胞为1.082g/mL、淋巴细胞1.070g/mL、白细胞1.062g/mL、血小板1.058g/mL、血浆1.026g/mL),采用离心方法获得(David M Dohan Ehrenfest,Lars Rasmusson,TomasAlbrektsson.Classification of platelet concentrates:from pure platelet-richplasma(P-PRP)to leucocyte-and platelet-rich fibrin(L-PRF).TrendsBiotechnol.2009；27(3):158-67.)。目前商业化的“富血小板血浆”常采用固定角度离心技术,如图1所示，通过控制离心速度和时间制得(Nicola Maffulli.Platelet Rich Plasmain Musculoskeletal Practice.UK:Springer-Verlag London 2016.ISBN978-1-4471-7270-3.Page 14-15)。中国专利CN210340837U(自体血清干细胞提取装置)，公开了一种浮桶式转子离心以实现细胞分离，其将离心管于重力作用下垂直，离心分离细胞。
现有PRP制备技术大多存在以下缺点(表1):(1)需要采血量较大,常超过50mL；(2)处理时间较长,常仅离心处理时间就需要等待近20分钟甚至半小时以上,患者等待时间太长,不利治疗；(3)制备程序/设备复杂,常需要两次离心处理；(4)离心速度快，导致细胞失活。这些缺点给患者治疗带来诸多不便,更重要的是,血小板经历长时间、多次离心处理后,容易失去活性,从而失去最佳治疗效果。
表1商业化PRP制备系统参数比较
因此有必要研发一种采血量少、处理时间短的PRP制备技术。
发明内容
为了克服现有技术采血量大、处理时间长、血小板浓度不高等问题，本发明提出了一种细胞水平离心分离方法，通过采用水平转子离心，并在离心管中加入透明质酸钠或海藻酸钠的凝胶，实现了低采血量下较短离心时间内分隔红细胞与血小板，获得满足临床需要的富血小板血浆。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种细胞水平离心分离方法，所述方法包括如下步骤：
取质量百分比为1～6％的透明质酸钠凝胶或海藻酸钠凝胶置于离心管内，加入已抗凝处理的全血于凝胶之上，全血用量与离心管尺寸匹配，以不溢出离心管为宜；将离心管口盖住后置于水平转子进行离心；透明质酸钠凝胶或海藻酸钠凝胶可作为过滤和隔离屏障，实现全血细胞分离。
进一步地，所述透明质酸钠凝胶或海藻酸钠凝胶采用如下方法制备：将透明质酸钠或海藻酸钠与柠檬酸钠溶液混合,配置成质量百分比为1～6％透明质酸钠凝胶或海藻酸钠凝胶。优选地，所述柠檬酸钠溶液质量百分比为3～5％，采用如下方法制备：将柠檬酸钠溶于生理盐水，配置质量百分比为3～5％的柠檬酸钠溶液。
进一步地，所述透明质酸钠凝胶或海藻酸钠凝胶的加入量以能在离心管中形成隔离屏障为宜。以7mL离心管为例，其直径约13.5mm，使用凝胶2-3mL即可完全封闭离心管直径，并在离心管中形成一道隔离屏障。若需要分离的全血量多，可选择更大尺寸的离心管，加入可以在离心管内形成封闭隔层量的凝胶即可。可选的，加入的凝胶量与已抗凝处理的全血的体积比为1～3：2～5。
进一步地，所述水平转子离心的速度为500～3000转每分钟，离心时间2～5min。
本发明所述水平离心转子指可以将离心管保持在水平状态进行离心的转子，并且离心力的方向与离心管轴线平行。
可选地，所述水平离心转子包括水平离心转子平台和离心管夹，所述水平离心转子平台具有垂直于水平面的离心轴线x，所述水平离心转子平台上设有离心管夹；所述离心管夹用于放置和限位离心管，并使得离心管具有水平的轴线y，所述离心管夹与水平离心转子平台保持同步旋转，并带动离心管在水平面旋转离心；所述离心管轴线y与离心轴线x垂直且相交，离心管轴线与离心力的方向平行。
水平离心转子平台具有中心装夹孔，通过中心装夹孔与离心电机转轴连接，从而由离心电机带动水平离心转子平台旋转实现离心。
本发明通过在离心管中加入特定浓度的透明质酸钠凝胶或海藻酸钠凝胶，再加入抗凝处理的全血后，将离心管水平放置于水平离心转子上，在离心时透明质酸钠凝胶或海藻酸钠凝胶可作为过滤和隔离屏障，实现在较低的转速下、较短时间内一步离心实现细胞分离，并获得高血小板浓度的PRP。
附图说明
图1为现有的固定角度转子离心示意图；
图2为本发明一种实施方式的水平离心转子俯视图；
图3为本发明一种实施方式的水平离心转子和离心电机连接结构剖示图；
图4为本申请实施例3使用4wt％海藻酸钠凝胶、水平离心转子1000RPM分离全血结果；
图5为本申请实施例5使用4wt％透明质酸钠凝胶、水平离心转子1000RPM分离全血结果；
图6为本申请实施例9使用4wt％透明质酸钠凝胶、水平离心转子800RPM分离全血结果；
图7为本申请实施例11使用1wt％海藻酸钠凝胶、水平离心转子800RPM分离全血结果；
图8为本申请实施例13使用6wt％透明质酸钠(或海藻酸钠)凝胶、水平离心转子2000RPM分离全血结果；
图9为对比例1使用80wt％聚乙二醇凝胶、水平离心转子800RPM分离全血结果；
图10为对比例1加入80wt％聚乙二醇凝胶和全血后，离心前的示图；
图11为对比例2使用4wt％聚乙二醇凝胶、水平离心转子1000RPM分离全血结果；
图12为对比例3无凝胶、水平离心转子3000RPM分离全血结果；
图13为对比例4使用3wt％透明质酸钠凝胶,采用固定角度转子在2500RPM条件下离心2～5min的结果；
图14为对比例5使用8wt％透明质酸钠凝胶、水平离心转子1000RPM分离全血的结果。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本发明中化学试剂来源：透明质酸钠(批号:BSF220526,合肥巴斯夫生物科技有限公司)、海藻酸钠(批号：20201110，国药集团化学试剂有限公司)、聚乙二醇(批号:20220415,西安天茂化工有限公司)、柠檬酸钠(批号:20211231,国药集团化学试剂有限公司)。
柠檬酸钠溶液：将柠檬酸钠溶于生理盐水，配置质量百分比为3～5％的柠檬酸钠溶液。
全血的抗凝处理方法为：采用临床常用抗凝方法，将全血与0.25g规格的枸橼酸钠溶液均匀混合(血与枸橼酸钠溶液的体积比为10～15:1)；或直接用管壁经肝素处理的真空采血管(本发明实验采用BD Vacutainer)储存全血。
血小板计数方法：采用临床常用“血常规”检测样品中细胞部分数量，包括血小板(单位109/L)、红细胞(单位1012/L)和白细胞(单位109/L)等。本发明采用日本Sysmex(希森美康)XN350自动血液分析仪检测。
本发明中使用的离心机是将水平离心转子替代现有固定角转子离心机上固定角转子(如群安实验仪器有限公司JOANLAB,LC-6S)；所述水平离心转子1如图2、图3所示，包括水平离心转子平台2和离心管夹3，所述水平离心转子平台2具有中心装夹孔，所述中心装夹孔直径约为13mm，与LC-6S电机转轴直径匹配，螺钉4通过中心装夹孔将本发明中的水平离心转子1固定安装在LC-6S电机转轴5上。如果使用其他型号的电机转轴，中心装夹孔尺寸与电机转轴尺寸相匹配。
所述水平离心转子平台2具有垂直于水平面的离心轴线x，所述水平离心转子平台上设有离心管夹3；所述离心管夹用于放置和限位离心管，所述离心管夹与水平离心转子平台保持同步旋转；待离心处理的离心管放置于离心管夹后，具有水平的离心管轴线y；所述离心管轴线y与离心轴线x垂直且相交，在离心时，离心力的方向与离心管轴线平行或重叠。
离心管夹的作用是将离心管限位在水平离心转子平台上，以使得离心管可以保持其轴线y在水平状态、围绕离心轴线x进行旋转离心。可选的一个实施例中，离心管夹的形状可以是传统固定角转子离心机中的一端开口的筒状结构，具有与离心管相适应的形状，与传统固定角转子离心机中的离心管夹轴线与离心轴线成小于90度(通常为45度)夹角不同的是，本发明中的离心管夹开口端朝向离心轴线x，离心管夹具有与离心轴线垂直且相交的轴线，水平固定在水平离心转子平台上，离心管封口后插入离心管夹可具有水平轴线y。离心管夹的长度可以小于离心管的长度，以将离心管带管塞的管口部位裸露在离心管夹外，使得离心管更易于保持水平。
离心管夹可以是粘接、焊接或螺纹连接方式固定在水平离心转子平台上，也可以是离心管与水平离心转子平台为一体式结构。
以下实施例和对比例中，涉及水平离心时，均采用图2和图3所示水平离心转子。
实施例1
将透明质酸钠与3wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置，下同)混合,配置成3wt％透明质酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部(使用7mL离心管，直径约13.5mm；下同),再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有透明质酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,2500转每分钟(RPM)水平离心5min，在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板,所制得PRP中血小板浓度为原全血的14.6倍(离心前全血血小板为40×109/L，离心后为587×109/L)。
实施例2
将透明质酸钠与5wt％的柠檬酸钠溶液混合,配置成3wt％透明质酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有透明质酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,3000转每分钟(RPM)水平离心2min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板，所制得PRP中血小板浓度为原全血的15.3倍(离心前全血血小板为40×109/L，离心后为613×109/L)。
实施例3
将海藻酸钠与3wt％的柠檬酸钠溶液混合,配置成4％海藻酸钠凝胶；取1～2mL凝胶置于离心管底部,再加入3～4mL已抗凝处理的全血；将装有海藻酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,1000转每分钟(RPM)水平离心5min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板(图4),所制得PRP中血小板浓度为原全血的1.8倍(离心前全血血小板为57×109/L，离心后为101×109/L)。
实施例4
将海藻酸钠与5wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成4％海藻酸钠凝胶；取1～2mL凝胶置于离心管底部,再加入4～5mL已抗凝处理的全血；将装有海藻酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,1500转每分钟(RPM)水平离心2min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板,所制得PRP中血小板浓度为原全血的1.9倍(离心前全血血小板为57×109/L，离心后为113×109/L)。
实施例5
将透明质酸钠与3wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成4％透明质酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入4～5mL已抗凝处理的全血；将装有透明质酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,1000转每分钟(RPM)下水平离心5min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板(图5),所制得PRP中血小板浓度为原全血的1.7倍(离心前全血血小板为115×109/L，离心后为203×109/L)。
实施例6
将透明质酸钠与3wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成4％透明质酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入4～5mL已抗凝处理的全血；将装有透明质酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,1500转每分钟(RPM)水平离心4min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板,所制得PRP中血小板浓度为原全血的1.8倍(离心前全血血小板为115×109/L，离心后为217×109/L)。
实施例7
将透明质酸钠与3wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成1wt％透明质酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有透明质酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,500转每分钟(RPM)水平离心5min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板,所制得PRP中血小板浓度为原全血的10.2倍(离心前全血血小板为35×109/L，离心后为357×109/L)。
实施例8
将透明质酸钠与5wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成1wt％透明质酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有透明质酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,1000转每分钟(RPM)水平离心4min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，可有效分隔红细胞与血小板,所制得PRP中血小板浓度为原全血的12.3倍(离心前全血血小板为35×109/L，离心后为431×109/L)。
实施例9
将透明质酸钠与3wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成4wt％透明质酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有透明质酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,800转每分钟(RPM)水平离心5min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板(图6),所制得PRP中血小板浓度为原全血的2.0倍(离心前样品血小板为35×109/L，离心后样品中血小板为72×109/L)。
实施例10
将透明质酸钠与5wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成4wt％透明质酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有透明质酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,1000转每分钟(RPM)水平离心2min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板,所制得PRP中血小板浓度为原全血的2.3倍(离心前样品血小板为35×109/L，离心后样品中血小板为79×109/L)。
实施例11
将海藻酸钠与3wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成1wt％海藻酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有海藻酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,800转每分钟(RPM)水平离心5min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板(图7),所制得PRP中血小板浓度为原全血的2.5倍(离心前样品血小板为43×109/L，离心后样品中血小板为109×109/L)。
实施例12
将海藻酸钠与5wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成1wt％海藻酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有海藻酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,1000转每分钟(RPM)水平离心2min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板,所制得PRP中血小板浓度为原全血的2.7倍(离心前样品血小板为43×109/L，离心后样品中血小板为117×109/L)。
实施例13
将透明质酸钠与3wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成6wt％透明质酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有透明质酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,2000转每分钟(RPM)水平离心5min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板(图8,PRP中红细胞计数接近零,可用于细胞回收),血小板浓度约为1.7倍(离心前样品血小板为53×109/L，离心后样品中血小板为89×109/L)。
实施例14
将海藻酸钠与5wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成6wt％海藻酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有海藻酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,3000转每分钟(RPM)水平离心2min；在离心管口与凝胶之间获得高血小板浓度PRP。
离心前，凝胶位于管底，全血位于凝胶与管口之间；离心后，凝胶充当了过滤和隔离屏障，有效分隔红细胞与血小板(PRP中红细胞计数接近零，可用于细胞回收)，血小板浓度约为1.7倍(离心前样品血小板为53×109/L，离心后样品中血小板为92×109/L)。
对比例1(PEG凝胶80wt％)
将聚乙二醇(PEG)与3wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成80wt％聚乙二醇凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有聚乙二醇凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,800转每分钟(RPM)水平离心5min后,可使全血分层(红细胞在离心管底部,血浆在离心管上部,图9),但是血浆中血小板浓度极低,仅为原全血的13％(离心前样品血小板为71×109/L，离心后样品中血小板为9×109/L),不能实现浓缩血浆中血小板浓度、制备合格PRP的目的。
本对比例中，使用的是80wt％的PEG凝胶，因为60-80wt％PEG才具有足够粘度，将全血“支撑起来”，如图10所示。
对比例2(PEG凝胶4wt％)
将聚乙二醇(PEG)与5wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成4wt％聚乙二醇凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入4～5mL已抗凝处理的全血；将装有聚乙二醇凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,1000转每分钟(RPM)水平离心2min后,可使全血分层(红细胞在离心管底部,血浆在离心管上部,图11),但是血浆中血小板浓度极低,仅为原全血的12％(离心前样品血小板为42×109/L，离心后样品中血小板为5×109/L),不能实现浓缩血浆中血小板浓度、制备合格PRP的目的。
对比例3(无凝胶)
将2～3mL已抗凝处理的全血置于离心管底部，封口,放置于离心管夹,3000转每分钟(RPM)水平离心5min后,可使全血分层(红细胞在离心管底部,血浆在离心管上部,图12),但是血浆中血小板浓度较低,仅为原全血的47％(离心前样品血小板为89×109/L，离心后样品中血小板为42×109/L),不能实现浓缩血浆中血小板浓度、制备合格PRP的目的。
对比例4(固定角度转子离心)
将透明质酸钠与3wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成3wt％透明质酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有透明质酸钠凝胶和全血的离心管封口,采用如图1所示的固定角度转子(JOANLAB公司LC-6S，转子角度约为45度),在2500转每分钟(RPM)下离心5min；发现凝胶由底部移动到离心管上部，全血全部位于凝胶与管底之间(如图13所示),不能将红细胞与血小板分隔、不能实现细胞分离。
对比例5(高浓度透明质酸钠凝胶)
将透明质酸钠与3wt％的柠檬酸钠溶液(用生理盐水配置)混合,配置成8wt％透明质酸钠凝胶；取2～3mL凝胶置于离心管底部,再加入2～3mL已抗凝处理的全血；将装有透明质酸钠凝胶和全血的离心管封口,放置于离心管夹,1000转每分钟(RPM)水平离心5min，凝胶不可有效分隔红细胞与血小板(图14)；在3500RPM的转速下离心4min，可分离红细胞，但血小板的浓度效果不佳(离心前样品血小板为53×109/L，离心后样品中血小板为16×109/L)。
Claims (6)
1.一种细胞水平离心分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
取质量百分比为1~6%的透明质酸钠凝胶或海藻酸钠凝胶置于离心管内，加入已抗凝处理的全血后，置于水平离心转子离心；
所述透明质酸钠或海藻酸钠凝胶采用如下方法制备：将透明质酸钠或海藻酸钠与柠檬酸钠溶液混合, 配置成质量百分比为1~6%透明质酸钠或海藻酸钠凝胶；
所述柠檬酸钠溶液的质量百分比为3~5%；
所述水平离心转子将离心管保持在水平状态离心，并且离心力的方向与离心管轴线平行。
2.如权利要求1所述的细胞水平离心分离方法，其特征在于：所述透明质酸钠凝胶或海藻酸钠凝胶的加入量为能在离心管中形成隔离屏障。
3.如权利要求1所述的细胞水平离心分离方法，其特征在于：所述透明质酸钠凝胶或海藻酸钠凝胶与已抗凝处理的全血的体积比为1~3：2~5。
4.如权利要求1所述的细胞水平离心分离方法，其特征在于：所述水平转子离心的速度为500~3000转每分钟。
5.如权利要求1所述的细胞水平离心分离方法，其特征在于：所述离心时间为2~5min。
6.如权利要求1所述的细胞水平离心分离方法，其特征在于：所述水平离心转子包括水平离心转子平台和离心管夹；所述水平离心转子平台具有垂直于水平面的离心轴线，所述水平离心转子平台上设有离心管夹；所述离心管夹用于放置和限位离心管，所述离心管夹与水平离心转子平台保持同步旋转；所述离心管放置于离心管夹后，具有水平的离心管轴线；所述离心管轴线与所述离心轴线垂直且相交。
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