CN115901721A - 用于检测恩诺沙星的sers-光电化学双模传感器及其制备方法和应用 - Google Patents

用于检测恩诺沙星的sers-光电化学双模传感器及其制备方法和应用 Download PDF

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蒋鼎
魏萌
杜晓娇
单学凌
椎木弘
陈智栋
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Abstract

本发明属于传感器构建技术领域,提供一种用于检测恩诺沙星的SERS‑光电化学双模传感器及其制备方法和应用,传感器包括电极基体,表面修饰有Bi3S2QDs/T‑Ag NPs/Ti3C2复合材料和恩诺沙星适配体。本发明所提供的SERS‑光电化学双模传感器以Ti3C2为基底材料,结合具有高SERS活性的银纳米颗粒与量子点,提高了基底的性能,扩大了双模电极的选用范围。本发明构建的SERS‑光电化学双模传感器结合SERS与光电化学两种模式的检测结果相互验证,避免了单一模式的误诊结果,使数据更精准可靠,具有较宽的检测范围,较高的灵敏度和较低的检出限,对恩诺沙星的检测具有重要意义。

Description

用于检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于检测领域,具体涉及一种用于检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器及其制备方法和应用。
背景技术
恩诺沙星(Enrofloxacin,简称ENR),又名乙基环丙沙星、诺氟沙星,属于氟喹诺酮类化学合成抑菌剂。恩诺沙星被国家指定为动物专用药,其抗菌性强,特别容易在动物体内扩散,在动物和水产养殖业中被广泛应用。目前恩诺沙星己经列为兽药残留监控的重点,欧盟规定动物源性食品中ENR的最大残留检测限为0.3μg/g。由于过量使用这种兽药,使其在动物体内大量的积累和残留,通过动物体的排泄形式排出,对周围环境造成影响,其中水资源就遭受了严重的污染,人类的健康和公共卫生安全都将受到威胁,因此需要一种高效准确的方法来监测水源的安全。
各种高传感性能的纳米材料及信号放大策略被陆续引入光电生物传感器来满足对恩诺沙星的高灵敏检测要求,但单一的检测模式往往带来结果偏差,因此,为了应对检测灵敏度要求,发展多模联合方式通过多组数据的相互验证输出多路信号,消除避免了单一模式的异常诊断结果,确保检测的准确性,是生物组织研究和基因检测不可避免的趋势。
SERS与光电化学作为备受关注的两种新型检测技术,都表现出了快速灵敏检测的特性。SERS可适用于固、液界面的检测,但SERS由于液态环境激光聚焦的困难,检测耗时较长:SERS提供了丰富的指纹峰,但对于同类物质如DNA杂交的反应过程,SPRS无法进行识别。光电化学适用于液态检测,检测耗时较短,但由于氧化还原反应的进行,无法保证物质的性质不发生改变:通过界面的阻抗变化可以判断反应的是否进行,但无法获得界面的整体信息。
发明内容
本发明旨在提出一种用于高准确性检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器的制备方法及其应用,SERS与光电化学双模联合实现了两种模式的优势互补和相互协同,避免了单一模式的诊断异常,获取更多更丰富的检测信息,输出更精确完整和可靠的检测结果,极大改善了现有的多数检测方法可靠性和灵敏度不足的问题。
用于高准确性检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器,包括电极基体,表面修饰有Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料和恩诺沙星适配体;
Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料由Bi3S2 QDs、T-Ag NPs(三角形银纳米粒子)、Ti3C2按照质量比为1-5:1-5:1-5,在该范围内的光电流性能为0.74-2.53μA,在特征峰1575cm-1处的拉曼信号响应范围为254-2985,质量比变化会使传感器的光电流性能以及拉曼信号改变,当质量比为3:2:4时,所得到的光电信号与拉曼信号响应最大,因此最优选质量比为3:2:4。
上述用于高准确性检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器的制备方法,包括如下步骤:
(1)Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料的制备:
将Bi3S2 QDs、T-Ag NPs、Ti3C2按照质量比在溶剂中混合,充分扰动(扰动条件优选超声30min后,常温震荡12h)后,即可得到Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料,将Bi3S2QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料贮存在冰箱中冷藏待用;
(2)SERS-光电化学双模传感器的制备:
将上述Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料的分散液滴涂于电极基材上(本领域常用电极基材,例如ITO、玻碳电极或FTO导电玻璃),置于真空干燥箱中干燥,再滴涂一定浓度的恩诺沙星适配体溶液,室温自然干燥,得到SERS-光电化学双模传感器。
银纳米粒子形貌是影响SPR光谱的主要因素,不同形貌的银纳米粒子展现出不同的SPR光谱。与其他形貌相比,三角形银纳米粒子具有特殊的SPR光谱,即具有弱的面外四极、面内四极和强的面内双极共振三个SPR峰。此外,三角形银纳米粒子的SPR光谱还具有结构依赖性和人为可控的特点,可通过改变三角形银纳米粒子的尺寸、厚度、排列方式来调控SPR吸收峰的位置。同时,由于量子点的也为圆形形状,虽两者尺寸大小不同,但三角形银纳米颗粒可以更好的与量子点区分。
进一步的,步骤(1)Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料中Bi3S2 QDs的浓度为3mg/mL;T-Ag NPs的浓度为1mg/mL;Ti3C2悬浮液的浓度为2mg/mL;适配体的浓度为3.0μmol/L;Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2分散液、适配体溶液的体积比为2:1。
进一步的,Bi3S2 QDs的制备:
首先,将0.5g的BSA和16.0mL的水混合在100mL的烧杯中,快速搅拌,直到BSA完全溶解在水中。然后,在剧烈搅拌下,缓慢加入2.0mL 2.0M含有50mM Bi(NO3)3·5H2O的硝酸溶液,继续搅拌0.5h,加入6.0M氢氧化钠去质子化半胱氨酸硫醇基,调节溶液pH值为12,从而稳定Bi2S3量子点的生成。将混合物在室温下剧烈搅拌半天;
进一步的,T-Ag NPs的制备包括:在纯水中,在搅拌下加入硝酸银,然后加入柠檬酸三钠和过氧化氢,在溶液中快速注射硼氢化钠进行还原。
本发明还提供了上述基于SERS-光电化学的双模传感器在检测恩诺沙星中的应用,所述恩诺沙星适配体核苷酸序列如下所示:
适配体:3′-CCC ATC AGG GGG CTA GGC TAA CAC GGT TCG GCT CTC TGA GCC CGGGTT ATT TCAGGG GGA-5′。
进一步的,具体检测方法如下:
步骤1,配制恩诺沙星标准溶液,称取一定质量的恩诺沙星,用甲醇来配制1.0×10-5mol/L的标准溶液,将标准溶液用含有过硫酸钾的pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液进行逐级稀释,即得到一系列浓度范围为1.0×10-13~1.0×10-5mol/L的恩诺沙星标准溶液。
步骤2,将SERS-光电化学双模传感器作为阳极,铂电极作为阴极,以PBS缓冲溶液作为电解质,控制氙灯光源电流为24A,光源出口至ITO导电面水平距离为8cm,在0V的测试电位下测得其光电流的响应值,得到一系列的浓度-光电流对应关系,进而得到恩诺沙星的标准曲线,建立加入恩诺沙星后的光电流强度与恩诺沙星浓度对数值的线性关系,得到相应的线性回归方程;
将SERS-光电化学双模传感器作为基底材料,使用型号为LabRAM HR Evlution拉曼光谱仪器对样品进行分析。激发波长λ=633nm,累计次数2,曝光时间2s,能量25%,功率=0.625mW。在该条件下测得其拉曼信号的响应值,得到一系列的浓度-拉曼强度对应关系,进而得到恩诺沙星的标准曲线,建立加入恩诺沙星后的拉曼强度与恩诺沙星浓度对数值的线性关系,得到相应的线性回归方程;
步骤3,样品检测,按照上述步骤2分别进行光电以及拉曼测试并分别获得光电流与拉曼信号响应值,所得光电流值与拉曼强度用步骤2中所得的线性回归方程进行计算,得出样品中恩诺沙星的浓度。
作为优选,所述基于SERS-光电化学双模传感器适配体的孵育时间为30min。
本发明的显著优点是开发了一种检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器及其制备方法,与普通的单一模式传感器相比,具有以下两方面的显著优点:
(1)本发明所制备的SERS-光电化学双模传感器以Ti3C2为基底材料,结合具有高SERS活性的银纳米颗粒与量子点,提高了基底的性能,扩大了双模电极的选用范围,在同一激发光源下,耦合光电化学和SERS装置,能够同时获得光电化学信号和光谱信息,实现两种检测信号相互校验和相互补充,从而降低分析检测中出现假阳性或假阴性的概率,达到准确分析目标污染物的能力,避免了单一模式的误诊结果,使数据更精准可靠;
(2)本发明制备的SERS-光电化学双模传感器用于恩诺沙星的检测,该传感器稳定性高,重现性好,灵敏度高,线性范围宽,可以实现简单、快速、高灵敏和特异性检测。
附图说明
图1是该发明中的传感器的制备以及对恩诺沙星的检测的简要流程图。
图2是不同浓度恩诺沙星的光电流响应图。
其中恩诺沙星的浓度按曲线峰值由低到高依次为:1.0×10-13mol/L(a)、1.0×10-12mol/L(b)、1.0×10-11mol/L(c)、和1.0×10-10mol/L(d)、1.0×10-9mol/L(e)、1.0×10- 8mol/L(f)、1.0×10-7mol/L(g)、1.0×10-6mol/L(h)、1.0×10-5mol/L(i)。
图3是加入恩诺沙星后的发光强度与恩诺沙星浓度对数的标准曲线。
图4是不同浓度恩诺沙星的拉曼信号响应图。
其中恩诺沙星的浓度按曲线峰值由低到高依次为:1.0×10-13mol/L(a)、1.0×10-12mol/L(b)、1.0×10-11mol/L(c)、和1.0×10-10mol/L(d)、1.0×10-9mol/L(e)、1.0×10- 8mol/L(f)、1.0×10-7mol/L(g)、1.0×10-6mol/L(h)、1.0×10-5mol/L(i)。
图5是加入恩诺沙星后的拉曼强度与恩诺沙星浓度对数的标准曲线。
具体实施方式
本发明下面结合实施例作进一步详述:
实施例1:
(1)Bi3S2 QDs的制备:
首先,将0.5g的BSA和16.0mL的水混合在100mL的烧杯中,继续搅拌,直到BSA完全溶解在水中。然后,在剧烈搅拌下,缓慢加入2.0mL 2.0M含有50mM Bi(NO3)3·5H2O的硝酸溶液,继续搅拌0.5h,加入6.0M氢氧化钠去质子化半胱氨酸硫醇基,调节溶液pH值为12,从而稳定Bi2S3量子点的生成。将混合物在室温下剧烈搅拌半天;
(2)T-Ag NPs的制备:
在96mL的纯水中,在磁性搅拌下加入200μL的50mM硝酸银。然后,加入2mL的柠檬酸三钠(75mM)和100μL的过氧化氢(30%)。然后,在溶液中快速注射1mL硼氢化钠(100mM)进行还原,立即使溶液变成浅黄色。当溶液的颜色变成深紫色时,就会形成T-Ag NPs;
(3)Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料的制备:
将Bi3S2 QDs、T-Ag NPs、Ti3C2按照体积比为1:1:2的比例混合,超声30min后,常温震荡12h后,即可得到Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料,并将Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料贮存在冰箱中冷藏待用;
(4)SERS-光电化学双模传感器的制备:
将步骤(3)制得的所述Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料分散液滴涂于ITO导电玻璃上,置于真空干燥箱中干燥,所制得的修饰电极记作Bi3S2QDs/T-Ag NPs/Ti3C2/ITO;然后,再取一定浓度的恩诺沙星适配体滴涂于所制的Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2/ITO上,室温自然干燥,得到SERS-光电化学双模适配体传感器Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2/apt/ITO。
上述传感器中,适配体序列如下所示:(订购于生工生物工程(上海)股份有限公司)
适配体:3′-CCC ATC AGG GGG CTA GGC TAA CAC GGT TCG GCT CTC TGA GCC CGGGTT ATT TCAGGG GGA-5′。
(4)标准曲线的绘制
配制恩诺沙星标准溶液,称取一定质量的恩诺沙星,用甲醇来配制1.0×10-5mol/L的标准溶液,将标准溶液用含有过硫酸钾的pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液进行逐级稀释,即得到一系列浓度范围为1.0×10-13~1.0×10-5mol/L的恩诺沙星标准溶液;
将基于SERS-光电化学双模传感器Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2/apt/ITO作为双模基底,分别进行光电流以及拉曼测试,实现对恩诺沙星的检测。所述基于SERS-光电化学双模传感器适配体孵育时间为30min,以PBS缓冲溶液作为电解质检测光电流响应值。
将双模基底置于一系列恩诺沙星浓度(1.0×10-13mol/L、1.0×10-12mol/L、1.0×10-11mol/L、1.0×10-10mol/L、1.0×10-9mol/L、1.0×10-8mol/L、1.0×10-7mol/L、1.0×10- 6mol/L、1.0×10-5mol/L)含有0.1mol/L的K2S2O8的pH 7.4的0.1mol/L PBS的缓冲溶液中,以PBS缓冲溶液作为电解质,控制氙灯光源电流为24A,光源出口至ITO导电面水平距离为8cm,在0V的测试电位下测得其光电流的响应值。建立加入恩诺沙星后的发光强度与恩诺沙星浓度对数值的线性关系,得到相应的线性回归方程为:I=3.3437+0.1969LogC(mol/L),相关系数(R)为0.9968。线性回归方程的检测范围为1.0×10-13~1.0×10-5mol/L,最低检测限为6.13×10-14mol/L。
将修饰电极Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2/apt/ITO作为基底材料,使用型号为LabRAM HR Evlution拉曼光谱仪器对样品进行分析。激发波长λ=633nm,累计次数2,曝光时间2s,能量25%,功率=0.625mW。在该条件下测得其拉曼信号的响应值,得到一系列的浓度-拉曼强度对应关系,进而得到恩诺沙星的标准曲线,建立加入恩诺沙星后的拉曼强度与恩诺沙星浓度对数值的线性关系,得到相应的线性回归方程:I=4255.1897+307.9064LogC(mol/L),相关系数(R)为0.9979。线性回归方程的检测范围为1.0×10-13~1.0×10-5mol/L,最低检测限为2.14×10-14mol/L。
(6)样品的检测
取一定量过滤除杂后的废水加入到含有0.1mol/L的K2S2O8的pH 7.4的0.1mol/LPBS的缓冲溶液中,用于光电化学以及拉曼检测,按上述步骤(5)所对应的线性回归方程计算出待检测样品中恩诺沙星浓度,其结果列于表1中。
比较例1
(1)Ti3C2/ITO修饰电极的制备
将ITO导电玻璃分别在去离子水、乙醇中依次超声清洗半小时后,用去离子水多次冲洗。然后将导电比例放入0.1mol/L NaOH水溶液中,将其煮沸,并保持30min,用去离子水清洗并放于烘箱烘干待用。用移液枪移取40μL Ti3C2的悬浮液滴涂于ITO导电玻璃上,室温干燥,得到Ti3C2/ITO修饰电极,作为双模测试的基底材料。
(2)标准曲线的绘制
以Ti3C2/ITO为基底材料,构建双模体系进行恩诺沙星检测,检测方法同实施例1。
比较例2:
(1)Bi3S2 QDs/Ti3C2/ITO修饰电极的制备
将ITO导电玻璃分别在去离子水、乙醇中依次超声清洗半小时后,用去离子水多次冲洗。然后将导电比例放入0.1mol/L NaOH水溶液中,将其煮沸,并保持30min,用去离子水清洗并放于烘箱烘干待用。将Bi3S2 QDs、Ti3C2按照体积比为1:2的比例混合,超声30min后,常温震荡12h后,即可得到Bi3S2 QDs/Ti3C2复合材料,取40μL Bi3S2 QDs/Ti3C2滴涂于ITO导电玻璃上,室温干燥,得到Bi3S2 QDs/Ti3C2/ITO修饰电极,作为双模测试的基底材料。
(2)标准曲线的绘制
以Bi3S2 QDs/Ti3C2/ITO为基底材料,构建双模体系进行恩诺沙星检测,检测方法同实施例1。
比较例3:
(1)T-Ag NPs/Ti3C2/ITO修饰电极的制备
将ITO导电玻璃分别在去离子水、乙醇中依次超声清洗半小时后,用去离子水多次冲洗。然后将导电比例放入0.1mol/L NaOH水溶液中,将其煮沸,并保持30min,用去离子水清洗并放于烘箱烘干待用。将T-Ag NPs、Ti3C2按照体积比为1:2的比例混合,超声30min后,常温震荡12h后,即可得到T-Ag NPs/Ti3C2复合材料,取40μL T-Ag NPs/Ti3C2滴涂于ITO导电玻璃上,室温干燥,得到T-Ag NPs/Ti3C2/ITO修饰电极,作为双模测试的基底材料。
(2)标准曲线的绘制
以T-Ag NPs/Ti3C2/ITO为基底材料,构建双模体系进行恩诺沙星检测,检测方法同实施例1。
表1水样中恩诺沙星的测定结果
如表1所示,样品平行检测3次,相对标准偏差小于5%,加标回收率范围为95.9%~101.7%。以上结果表明,不用Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2/apt/ITO修饰而单独用Bi3S2QDs/Ti3C2或是T-Ag NPs/Ti3C2修饰的基底材料无法实现双模检测恩诺沙星,本发明用于检测废水中的恩诺沙星是可行的,其中光电模式最低检测限为6.13×10-14mol/L,拉曼模式最低检测限为2.14×10-14mol/L。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种用于高准确性检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器,其特征在于:包括电极基体,表面修饰有Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料和恩诺沙星适配体;
Bi3S2QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料由Bi3S2 QDs、T-Ag NPs、Ti3C2按照质量比1-5:1-5:1-5复合而成。
2.根据权利要求1所述的用于高准确性检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器,其特征在于:恩诺沙星适配体的核苷酸序列为:3′-CCC ATC AGG GGG CTAGGC TAACAC GGTTCG GCT CTC TGA GCC CGG GTT ATT TCA GGG GGA-5′。
3.根据权利要求1所述的用于高准确性检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器,其特征在于:Bi3S2 QDs、T-Ag NPs、Ti3C2质量比为3:2:4。
4.如权利要求1至3中任一项所述的用于高准确性检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)Bi3S2QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料的制备:
将Bi3S2QDs、T-Ag NPs、Ti3C2按照质量比在溶剂中混合,充分扰动后,即可得到Bi3S2QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料的分散液,冷藏待用;
(2)SERS-光电化学双模传感器的制备:
将上述Bi3S2QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料的分散液滴涂于电极基材上,置于真空干燥箱中干燥,再滴涂一定浓度的恩诺沙星适配体溶液,室温自然干燥,得到SERS-光电化学双模传感器。
5.根据权利要求4所述的用于高准确性检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器的制备方法,其特征在于:步骤(1)中包括分别配置3mg/mL的Bi3S2 QDs悬浮液,1mg/mL的T-AgNPs悬浮液,2mg/mL的Ti3C2悬浮液,3.0μmol/L的适配体溶液;Bi3S2 QDs/T-Ag NPs/Ti3C2复合材料的分散液、适配体溶液的体积比为2:1。
6.根据权利要求4所述的用于高准确性检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器的制备方法,其特征在于:步骤(1)扰动条件为:超声30min后,常温震荡12h。
7.根据权利要求4所述的用于高准确性检测恩诺沙星的SERS-光电化学双模传感器的制备方法,其特征在于:T-Ag NPs的制备包括:在纯水中,在搅拌下加入硝酸银,然后加入柠檬酸三钠和过氧化氢,在溶液中快速注射硼氢化钠进行还原。
8.如权利要求1至3中任一项所述的基于SERS-光电化学双模传感器检测恩诺沙星的方法,其特征在于:包括步骤如下:
1)配制含K2S2O8的PBS缓冲溶液;
2)含不同浓度恩诺沙星标准溶液的配制;
配制恩诺沙星标准溶液,称取一定质量的恩诺沙星,用甲醇来配制1.0×10-5mol/L的标准溶液,将标准溶液用含有过硫酸钾的pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液进行逐级稀释,即得到一系列浓度范围为1.0×10-13~1.0×10-5mol/L的恩诺沙星标准溶液;
3)标准曲线的绘制
取步骤2)的一系列已知浓度的恩诺沙星标准溶液滴涂于SERS-光电化学双模传感器上,室温自然干燥,得修饰电极;
将修饰电极作为阳极,铂电极作为阴极,以步骤1)缓冲溶液作为电解质,控制氙灯光源电流为24A,光源出口至电极基体导电面水平距离为8cm,在0V的测试电位下测得其光电流的响应值,得到一系列的浓度-光电流对应关系,进而得到恩诺沙星的标准曲线,建立加入恩诺沙星后的光电流强度与恩诺沙星浓度对数值的线性关系,得到相应的线性回归方程;
将修饰电极作为基底材料,使用型号为LabRAM HR Evlution拉曼光谱仪器对样品进行分析,激发波长λ=633nm,累计次数2,曝光时间2s,能量25%,功率=0.625mW,在该条件下测得其拉曼信号的响应值,得到一系列的浓度-拉曼强度对应关系,进而得到恩诺沙星的标准曲线,建立加入恩诺沙星后的拉曼强度与恩诺沙星浓度对数值的线性关系,得到相应的线性回归方程;
4)样品检测
样品检测先作前处理再调节pH,按照上述步骤3)中的线性回归方程进行计算,得出样品中恩诺沙星的浓度。
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