CN115868477A - 一种卵巢组织冷冻存放装置及其方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种卵巢组织冷冻存放装置及其方法。一种卵巢组织冷冻存放装置包括：独立冷冻盒、支架和多支冷冻管，所述冷冻管由外套管和与所述外套管可拆卸连接的冷冻载体组成。一种卵巢组织冷冻存放方法包括：制备卵巢组织片；将卵巢组织片进行玻璃化冷冻；冷冻管预先在盛有液氮的独立冷冻盒中预冷；独立冷冻盒也在液氮中预冷；将卵巢组织片皮质面朝上放在冷冻载体上；放入预冷的冷冻管内，盖上独立冷冻盒，最后将独立冷冻盒放入液氮罐保存备用。本发明的有益效果是：通过冷冻载体进行承托组织片，能够将组织片实现开放式冷冻效果，达到快速降温的要求，同时将不同患者的卵巢组织片分别收纳在不同的独立冷冻盒，能够实现封闭式存放。

Description

一种卵巢组织冷冻存放装置及其方法

技术领域

本发明涉及组织冷冻技术领域，特别涉及一种卵巢组织冷冻存放装置及其方法。

背景技术

全球每年新发恶性肿瘤发病人数逐年增长且日趋年轻化，其中70%肿瘤患者有生育需求。诊疗技术的进步和治疗方案的改进使肿瘤患者的生存率得到明显的提高，但肿瘤患者的化放疗及手术治疗对生育力带来不可逆转的损伤，造成卵巢早衰、闭经乃至生育力丧失，严重影响了患者的生殖功能和生活质量。因此，生育力保存成为亟待解决的热点问题，特别是育龄期和青春期前有生育需求的肿瘤患者的生育力保存刻不容缓。

目前，与辅助生殖技术相关的生育力保存方法主要有以下几种，即卵子/胚胎冷冻、卵巢组织冷冻。卵子/胚胎冷冻保存技术是一项非常成熟的技术，但需控制促排卵过程，可能会延迟疾病的治疗，对青春期女性、儿童和激素依赖的肿瘤患者进行超促排卵亦为禁忌。卵巢组织冷冻不需要进行促排卵治疗，采用腹腔镜切除部分/整个卵巢，配合未成熟卵培养技术，可保存患者的卵巢组织和卵子，在疾病痊愈后将卵巢组织移植回体内，通过自然妊娠或辅助生殖技术获得活产。卵巢组织冷冻技术可一次性将数百甚至上千个窦前卵泡保存起来，不仅保存了生育能力，还能恢复生殖内分泌功能。卵巢组织冷冻还是青春期前HPO轴未成熟女性进行生育力保存的唯一选择。

卵巢组织玻璃化冷冻，能在极快的降温过程和极短的时间内使卵巢组织处于玻璃化状态，避免细胞内冰晶的形成，具有快速、高效、简便和经济的特点而得到广泛应用。冷冻载体是卵巢组织玻璃化冷冻成功的关键因素之一。目前卵巢组织冷冻使用的玻璃化冷冻载体主要包括：冷冻麦管、冷冻环、细胞筛网、针刺式冷冻载体以及KITAZATO公司商品化冷冻载体等，其中冷冻麦管和冷冻环仅能装载较小体积的卵巢组织； KITAZATO公司针刺式冷冻载体，与卵巢组织接触面积小，易脱落，最关键的是对复苏液量要求非常大，一次复苏即需要20ml的复苏液，造成医疗资源的浪费，也给患者造成很大的经济负担。

另外，开放式冷冻载体降温速度快，但存放过程中直接接触液氮，容易和其他患者造成交叉感染，而普通的封闭式冷冻载体降温速度慢，冷冻效果不佳，本装置针对此问题，采用开放式冷冻和封闭式存放技术，既可以满足快速降温，又有效的避免了交叉感染，既保证了冷冻效果又保证了患者组织冷冻的安全性，具有很大的临床应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种卵巢组织冷冻存放装置，其设有独立冷冻盒、冷冻管和冷冻载体，便于将组织片进行开放式冷冻和封闭式存放，既能够快速降温，还能够避免交叉感染。

本发明的目的在于提供一种卵巢组织冷冻存放装置，其冷冻载体上的承载片与连接块能够相对转动，在对组织片进行复苏时，将承载片与连接块的夹角调整至60～90°，不但便于组织片自冷冻载体上滑落至复苏液中，还能大量节约复苏液用量，节约成本经费。

本发明的另一个目的在于提供一种卵巢组织冷冻存放方法，其将组织片先开放式冷冻，再封闭式存放，既能够快速降温，还能够避免交叉感染。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案，包括：

独立冷冻盒；

支架，其设置在所述独立冷冻盒内部，用于固定冷冻管；

多支冷冻管，其分别设置在所述支架上，所述冷冻管由外套管和与所述外套管可拆卸连接的冷冻载体组成；

其中，所述冷冻载体包括；

承载片，其下部设有梳齿状结构，用于承托卵巢组织；

连接块，其下端通过角度弯折机构与所述承载片连接；

端帽，其设置在所述连接块的上端，在所述端帽的外周设有用于与所述外套管连接的外螺纹。

优选的是，所述角度弯折机构包括：

转轴，其设置在所述承载片的上端；

转轴座，其设置在所述连接块的下端；

其中，在所述转轴的外周设有多个卡槽，在所述转轴座的内周壁上设有与卡头，所述卡头与多个卡槽可旋转配合，用于将所述承载片与连接块的角度固定。

优选的是，所述独立冷冻盒包括：

筒体，其上端设有筒口；

压旋盖，其设置在所述筒口处，用于防止所述筒口误打开。

优选的是，还包括：

凸柱，其设置在所述筒体内，并与所述筒体同轴设置；所述凸柱为中空结构，在所述凸柱的上端设有端面，所述凸柱的下端与所述筒体外部连通。

优选的是，所述支架包括：

上环形板；

下环形板，其设置在所述上环形板的正下方，并通过连接柱与所述上环形板固定连接；

多个冷冻管安装孔，其沿圆周均匀贯通设置在所述上环形片上，所述冷冻管安装孔的内周与所述冷冻管的外周相配合；

其中，所述上环形片和下环形片的外周与所述筒体内壁相配合，所述上环形片和下环形片的内周与所述凸柱的外周相配合，在所述下环形片的下端面设有向下延伸的周缘，所述周缘的外周与所述筒体内壁相配合，所述周缘的下端面与所述筒体的底壁相抵接。

优选的是，还包括：

插块，其设置在所述外套管的下端；

多个插孔，其沿圆周均匀贯通设置在所述下环形片上并与所述冷冻管安装孔一一对应，所述插孔与所述插块相配合，用于将所述冷冻管固定在所述支架上。

优选的是，在所述上环形片和下环形片的外周和内周上均布设有多个豁口。

优选的是，还包括：

标识芯片，其设置在所述凸柱的端面上，用于识别信息；

防护罩体，其罩设在所述标识芯片的外部，用于保护所述标识芯片。

优选的是，所述压旋盖包括：

内盖，其内周设有内螺纹，所述内螺纹与设置在筒口处的外螺纹相配合；

多个齿槽，其设置在所述内盖的上端面上；

外盖，其套设在所述内盖外，在所述外盖的内端面上设有多个卡齿，所述卡齿与所述齿槽相配合。

一种卵巢组织冷冻存放方法，包括以下步骤：

a、将卵巢髓质去除后，制备成1mm厚度的卵巢皮质片；

b、再将所述卵巢皮质片制备成多片边长为1～1.5cm*1cm的组织片；

c、卵巢组织玻璃化冷冻液提前置于室温中30min，进行复温；

d、将制备完成的卵巢组织片进行玻璃化冷冻，在冷冻cryo1、cryo2、cryo3液中的平衡时间分别为5分钟、5分钟和15分钟；

e、将冷冻外套管做好标记后分别放在冷冻支架上，倒入经过过滤的液氮，使液氮没过冷冻外套管，将玻璃化冷冻完成后卵巢组织片放置于冷冻载体的梳齿状结构处，皮质面朝上，赶走皮质底部气泡，一只手持握所述手柄，迅速将所述冷冻载体置于预先预冷的冷冻管中，将外套管套设在所述冷冻载体外部，拧紧；

f、重复步骤e，直至将步骤b中制备的多片组织片全部封装进多个冷冻管内；

g、向独立冷冻盒内注入液氮预冷，将冷冻管和冷冻支架一起迅速放入，拧紧独立冷冻盒的压旋盖，将独立冷冻盒放入液氮罐内冷藏，录入患者的芯片信息；

h、解冻时，将复苏液1、复苏液2和复苏液3分别倒入不同的培养皿中，将盛有复苏液1的培养皿置于37°C的培养箱中30min；将盛有复苏液2和复苏液3的培养皿置于室温中30min；

i、取出盛有待解冻的组织片的独立冷冻盒，打开独立冷冻盒取出冷冻管，在液氮中拧开冷冻管，转动轴承将承载片与连接块的夹角调整至60～90°，以便于组织片滑落于复苏液1中保持1min，复苏液1始终在37°C的热台，然后转入复苏液2中保持3min；再转入复苏液3中保持5min，完成复苏后将组织片置于培养箱中备用。

本发明的有益效果是：通过冷冻载体进行承托组织片，能够将组织片进行开放式冷冻，能够满足快速降温的需要。将不同患者的组织片分别收纳在不同的独立冷冻盒，能够实现封闭式保持，避免交叉感染。其冷冻载体上的承载片与连接块能够相对转动，在复苏过程中，不但组织片自冷冻载体上滑落至复苏液中，还能减少复苏液用量，节约成本经费。

附图说明

图1是本发明一种卵巢组织冷冻存放装置的爆炸视图。

图2是本发明中独立冷冻盒的剖视图。

图3是本发明中支架的立体图。

图4是本发明中外套管的立体图。

图5是本发明中冷冻载体的立体图一。

图6是本发明中冷冻载体的立体图二。

图7是本发明中轴和转轴座处的剖视图。

具体实施方式

下面结合附图对发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或其它元件或其组合的存在或添加。

本发明的一种实现形式，为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

如图1-7所示，本发明的一种实现形式，为实现上述目的，本发明采用如下技术方案，包括：

独立冷冻盒100；所述独立冷冻盒100包括：筒体110，其上端设有筒口；压旋盖120，其设置在所述筒口处，用于防止所述筒口误打开。作为一种优选，还包括：凸柱130，其设置在所述筒体110内，并与所述筒体110同轴设置；所述凸柱130为中空结构，在所述凸柱的上端设有端面131，所述凸柱130的下端与与所述筒体110外部连通。作为进一步优选，所述压旋盖120包括：内盖121，其内周设有内螺纹，所述内螺纹与设置在筒口处的外螺纹相配合；多个齿槽122，其设置在所述内盖121的上端面上；外盖123，其套设在所述内盖121外，在所述外盖123的内端面上设有多个卡齿124，所述卡齿124与所述齿槽122相配合。

支架200，其设置在所述独立冷冻盒100内部，用于固定冷冻管。作为一种优选，所述支架200包括：上环形板210；下环形板220，其设置在所述上环形板的正下方，并通过连接柱230与所述上环形板固定连接；多个冷冻管安装孔211，其沿圆周均匀贯通设置在所述上环形片上，所述冷冻管安装孔的内周与所述冷冻管的外周相配合；其中，所述上环形片210和下环形片220的外周与所述筒体110内壁相配合，所述上环形片210和下环形片220的内周与所述凸柱130的外周相配合，在所述下环形片220的下端面设有向下延伸的周缘221，所述周缘的外周与所述筒体110内壁相配合，所述周缘221的下端面与所述筒体的底壁相抵接。作为进一步优选，还包括：插块310，其设置在所述外套管300的下端；多个插孔222，其沿圆周均匀贯通设置在所述下环形片220上并与所述冷冻管安装孔211一一对应，所述插孔222与所述插块310相配合，用于将所述冷冻管固定在所述支架200上。

多支冷冻管300，其分别设置在所述支架200上，所述冷冻管由外套管300和与所述外套管300可拆卸连接的冷冻载体400组成；其中，所述冷冻载体400包括；承载片410，其下部设有梳齿状结构411，用于承托卵巢组织；连接块420的下端通过角度弯折机构与所述承载片连接；端帽430设置在所述连接块420的上端，在所述端帽430的外周设有用于与所述外套管300连接的外螺纹。作为一种优选，所述角度弯折机构包括：转轴412设置在所述承载片410的上端；转轴座421其设置在所述连接块420的下端；其中，在所述转轴412的外周设有多个卡槽412a，在所述转轴座421的内周壁上设有与卡头421a，所述卡头421a与多个卡槽412a可旋转配合，用于将所述承载片410与连接块420的角度固定。

在另一个实施例中，在所述端帽430的上端设有手柄440。

在另一个实施例中，所述独立冷冻盒100包括：筒体110，其上端设有筒口；压旋盖120，其设置在所述筒口处，用于防止所述筒口误打开。

在另一个实施例中，还包括：凸柱130，其设置在所述筒体110内，并与所述筒体110同轴设置；所述凸柱130为中空结构，在所述凸柱130的上端设有端面131，所述凸柱130的下端与与所述筒体110外部连通。

在另一个实施例中，所述支架200包括：上环形板210；下环形板220，其设置在所述上环形板的正下方，并通过连接柱230与所述上环形板固定连接；多个冷冻管安装孔211，其沿圆周均匀贯通设置在所述上环形片上，所述冷冻管安装孔的内周与所述冷冻管的外周相配合；其中，所述上环形片210和下环形片220的外周与所述筒体110内壁相配合，所述上环形片210和下环形片220的内周与所述凸柱130的外周相配合，在所述下环形片220的下端面设有向下延伸的周缘221，所述周缘的外周与所述筒体110内壁相配合，所述周缘221的下端面与所述筒体的底壁相抵接。

在另一个实施例中，还包括：还包括：插块310，其设置在所述外套管300的下端；多个插孔222，其沿圆周均匀贯通设置在所述下环形片220上并与所述冷冻管安装孔211一一对应，所述插孔222与所述插块310相配合，用于将所述冷冻管固定在所述支架200上。

在另一个实施例中，在所述上环形片210和下环形片220的外周和内周上均布设有多个豁口240。

在另一个实施例中，还包括：标识芯片500，其设置在所述凸柱130的端面上，用于识别信息；防护罩体510，其罩设在所述标识芯片500的外部，用于保护所述标识芯片500。

在另一个实施例中，所述压旋盖120包括：内盖121，其内周设有内螺纹，所述内螺纹与设置在筒口处的外螺纹相配合；多个齿槽122，其设置在所述内盖121的上端面上；外盖123，其套设在所述内盖121外，在所述外盖123的内端面上设有多个卡齿124，所述卡齿124与所述齿槽122相配合。

实施例1

a、将卵巢髓质去除后，制备成1mm厚度的卵巢皮质片；

b、再将所述卵巢皮质片制备成多片边长为1*1cm的组织片；

c、卵巢组织玻璃化冷冻液提前置于室温中30min，进行复温；

d、将制备完成的卵巢组织片进行玻璃化冷冻，在冷冻cryo1、cryo2、cryo3液中的平衡时间分别为5分钟、5分钟和15分钟；

e、将冷冻外套管做好标记后分别放在冷冻支架上，倒入经过过滤的液氮，使液氮没过冷冻外套管，将玻璃化冷冻完成后卵巢组织片放置于冷冻载体的梳齿状结构处，皮质面朝上，赶走皮质底部气泡，一只手持握所述手柄，迅速将所述冷冻载体置于预先预冷的冷冻管中，将外套管套设在所述冷冻载体外部，拧紧；

f、重复步骤e，直至将步骤b中制备的多片组织片全部封装进多个冷冻管内；

g、向独立冷冻盒内注入液氮预冷，将冷冻管和冷冻支架一起迅速放入，拧紧独立冷冻盒的压旋盖，将独立冷冻盒放入液氮罐内冷藏，录入患者的芯片信息；

h、解冻时，将复苏液1、复苏液2和复苏液3分别倒入不同的培养皿中，将盛有复苏液1的培养皿置于37°C的培养箱中30min；将盛有复苏液2和复苏液3的培养皿置于室温中30min；

i、取出盛有待解冻的组织片的独立冷冻盒，打开独立冷冻盒取出冷冻管，在液氮中拧开冷冻管，转动轴承将承载片与连接块的夹角调整至90°，以便于组织片滑落于复苏液1中保持1min，复苏液1始终在37°C的热台，然后转入复苏液2中保持3min；再转入复苏液3中保持5min，完成复苏后将组织片置于培养箱中备用。

实施例2

a、将卵巢髓质去除后，制备成1mm厚度的卵巢皮质片；

b、再将所述卵巢皮质片制备成多片边长为1.5cm*1cm的组织片；

c、卵巢组织玻璃化冷冻液提前置于室温中30min，进行复温；

d、将制备完成的卵巢组织片进行玻璃化冷冻，在冷冻cryo1、cryo2、cryo3液中的平衡时间分别为5分钟、5分钟和15分钟；

e、将冷冻外套管做好标记后分别放在冷冻支架上，倒入经过过滤的液氮，使液氮没过冷冻外套管，将玻璃化冷冻完成后卵巢组织片放置于冷冻载体的梳齿状结构处，皮质面朝上，赶走皮质底部气泡，一只手持握所述手柄，迅速将所述冷冻载体置于预先预冷的冷冻管中，将外套管套设在所述冷冻载体外部，拧紧；

f、重复步骤e，直至将步骤b中制备的多片组织片全部封装进多个冷冻管内；

g、向独立冷冻盒内注入液氮预冷，将冷冻管和冷冻支架一起迅速放入，拧紧独立冷冻盒的压旋盖，将独立冷冻盒放入液氮罐内冷藏，录入患者的芯片信息；

h、解冻时，将复苏液1、复苏液2和复苏液3分别倒入不同的培养皿中，将盛有复苏液1的培养皿置于37°C的培养箱中30min；将盛有复苏液2和复苏液3的培养皿置于室温中30min；

i、取出盛有待解冻的组织片的独立冷冻盒，打开独立冷冻盒取出冷冻管，在液氮中拧开冷冻管，转动轴承将承载片与连接块的夹角调整至60°，以便于组织片滑落于复苏液1中保持1min，复苏液1始终在37°C的热台，然后转入复苏液2中保持3min；再转入复苏液3中保持5min，完成复苏后将组织片置于培养箱中备用。

实施例3

a、将卵巢髓质去除后，制备成1mm厚度的卵巢皮质片；

b、再将所述卵巢皮质片制备成多片边长为1.2cm*1cm的组织片；

c、卵巢组织玻璃化冷冻液提前置于室温中30min，进行复温；

d、将制备完成的卵巢组织片进行玻璃化冷冻，在冷冻cryo1、cryo2、cryo3液中的平衡时间分别为5分钟、5分钟和15分钟；

e、将冷冻外套管做好标记后分别放在冷冻支架上，倒入经过过滤的液氮，使液氮没过冷冻外套管，将玻璃化冷冻完成后卵巢组织片放置于冷冻载体的梳齿状结构处，皮质面朝上，赶走皮质底部气泡，一只手持握所述手柄，迅速将所述冷冻载体置于预先预冷的冷冻管中，将外套管套设在所述冷冻载体外部，拧紧；

f、重复步骤e，直至将步骤b中制备的多片组织片全部封装进多个冷冻管内；

g、向独立冷冻盒内注入液氮预冷，将冷冻管和冷冻支架一起迅速放入，拧紧独立冷冻盒的压旋盖，将独立冷冻盒放入液氮罐内冷藏，录入患者的芯片信息；

h、解冻时，将复苏液1、复苏液2和复苏液3分别倒入不同的培养皿中，将盛有复苏液1的培养皿置于37°C的培养箱中30min；将盛有复苏液2和复苏液3的培养皿置于室温中30min；

i、取出盛有待解冻的组织片的独立冷冻盒，打开独立冷冻盒取出冷冻管，在液氮中拧开冷冻管，转动轴承将承载片与连接块的夹角调整至80°，以便于组织片滑落于复苏液1中保持1min，复苏液1始终在37°C的热台，然后转入复苏液2中保持3min；再转入复苏液3中保持5min，完成复苏后将组织片置于培养箱中备用。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (10)

1.一种卵巢组织冷冻存放装置，其特征在于，包括：

独立冷冻盒；

支架，其设置在所述独立冷冻盒内部，用于固定冷冻管；

多支冷冻管，其分别设置在所述支架上，所述冷冻管由外套管和与所述外套管可拆卸连接的冷冻载体组成；

其中，所述冷冻载体包括；

承载片，其下部设有梳齿状结构，用于承托卵巢组织；

连接块，其下端通过角度弯折机构与所述承载片连接；

端帽，其设置在所述连接块的上端，在所述端帽的外周设有用于与所述外套管连接的外螺纹。

2.根据权利要求1所述的卵巢组织冷冻存放装置，其特征在于，所述角度弯折机构包括：

转轴，其设置在所述承载片的上端；

转轴座，其设置在所述连接块的下端；

其中，在所述转轴的外周设有多个卡槽，在所述转轴座的内周壁上设有与卡头，所述卡头与多个卡槽可旋转配合，用于将所述承载片与连接块的角度固定。

3.根据权利要求1或2所述的卵巢组织冷冻存放装置，其特征在于，所述独立冷冻盒包括：

筒体，其上端设有筒口；

压旋盖，其设置在所述筒口处，用于防止所述筒口误打开。

4.根据权利要求3所述的卵巢组织冷冻存放装置，其特征在于，还包括：

凸柱，其设置在所述筒体内，并与所述筒体同轴设置；所述凸柱为中空结构，在所述凸柱的上端设有端面，所述凸柱的下端与所述筒体外部连通。

5.根据权利要求4所述的卵巢组织冷冻存放装置，其特征在于，所述支架包括：

上环形板；

下环形板，其设置在所述上环形板的正下方，并通过连接柱与所述上环形板固定连接；

多个冷冻管安装孔，其沿圆周均匀贯通设置在所述上环形片上，所述冷冻管安装孔的内周与所述冷冻管的外周相配合；

其中，所述上环形片和下环形片的外周与所述筒体内壁相配合，所述上环形片和下环形片的内周与所述凸柱的外周相配合，在所述下环形片的下端面设有向下延伸的周缘，所述周缘的外周与所述筒体内壁相配合，所述周缘的下端面与所述筒体的底壁相抵接。

6.根据权利要求5所述的卵巢组织冷冻存放装置，其特征在于，还包括：

插块，其设置在所述外套管的下端；

多个插孔，其沿圆周均匀贯通设置在所述下环形片上并与所述冷冻管安装孔一一对应，所述插孔与所述插块相配合，用于将所述冷冻管固定在所述支架上。

7.根据权利要求5所述的卵巢组织冷冻存放装置，其特征在于：在所述上环形片和下环形片的外周和内周上均布设有多个豁口。

8.根据权利要求4所述的卵巢组织冷冻存放装置，其特征在于，还包括：

标识芯片，其设置在所述凸柱的端面上，用于识别信息；

防护罩体，其罩设在所述标识芯片的外部，用于保护所述标识芯片。

9.根据权利要求3所述的卵巢组织冷冻存放装置，其特征在于，所述压旋盖包括：

内盖，其内周设有内螺纹，所述内螺纹与设置在筒口处的外螺纹相配合；

多个齿槽，其设置在所述内盖的上端面上；

外盖，其套设在所述内盖外，在所述外盖的内端面上设有多个卡齿，所述卡齿与所述齿槽相配合。

10.一种卵巢组织冷冻存放方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、将卵巢髓质去除后，制备成1mm厚度的卵巢皮质片；

b、再将所述卵巢皮质片制备成多片边长为1～1.5cm*1cm的组织片；

c、卵巢组织玻璃化冷冻液提前置于室温中30min，进行复温；

d、将制备完成的卵巢组织片进行玻璃化冷冻，在冷冻cryo1、cryo2、cryo3液中的平衡时间分别为5分钟、5分钟和15分钟；

e、将冷冻外套管做好标记后分别放在冷冻支架上，倒入经过过滤的液氮，使液氮没过冷冻外套管，将玻璃化冷冻完成后卵巢组织片放置于冷冻载体的梳齿状结构处，皮质面朝上，赶走皮质底部气泡，一只手持握所述手柄，迅速将所述冷冻载体置于预先预冷的冷冻管中，将外套管套设在所述冷冻载体外部，拧紧；

f、重复步骤e，直至将步骤b中制备的多片组织片全部封装进多个冷冻管内；

g、向独立冷冻盒内注入液氮预冷，将冷冻管和冷冻支架一起迅速放入，拧紧独立冷冻盒的压旋盖，将独立冷冻盒放入液氮罐内冷藏，录入患者的芯片信息；

h、解冻时，将复苏液1、复苏液2和复苏液3分别倒入不同的培养皿中，将盛有复苏液1的培养皿置于37°C的培养箱中30min；将盛有复苏液2和复苏液3的培养皿置于室温中30min；

i、取出盛有待解冻的组织片的独立冷冻盒，打开独立冷冻盒取出冷冻管，在液氮中拧开冷冻管，转动轴承将承载片与连接块的夹角调整至60～90°，以便于组织片滑落于复苏液1中保持1min，复苏液1始终在37°C的热台，然后转入复苏液2中保持3min；再转入复苏液3中保持5min，完成复苏后将组织片置于培养箱中备用。

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