CN115814082A - 抑制hspa4在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提出抑制HSPA4在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的应用，涉及医学技术领域。与现有技术相比，本申请中，选择三种细胞系进行探究，对比发现，BC细胞的细胞活力、迁移率和侵袭率均较高。并且经过HSPA4过表达发现其可促进BC细胞的内质网应激和Syntenin/SOX4/Wnt/β‑catenin通路上的蛋白表达。由此证明，HSPA4在内质网应激上调影响三阴性乳腺癌的机制中具有重要作用，因此，针对HSPA4的表达提出一种抑制剂不仅可有效逆转内质网应激，还可抑制SDC‑1/SDCBP‑1/SOX4的表达，从而达到治疗和/或预防三阴性乳腺癌的效果。
Description
技术领域
本发明涉及医学技术领域，具体而言，涉及抑制HSPA4在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的应用。
背景技术
乳腺癌是乳腺上皮细胞在多种致癌因子的作用下，发生增殖失控的现象。疾病早期常表现为乳房肿块、乳头溢液、腋窝淋巴结肿大等症状，晚期可因癌细胞发生远处转移，出现多器官病变，直接威胁患者的生命。
三阴性乳腺癌(TNBC)是一种以缺乏雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和HER2表达为特征的乳腺癌(BC)类型。TNBC通常比其他BC更具侵略性，具有更强的生存能力、迁移和侵袭能力、转移活性，以及较低的药物敏感性。由于TNBC的高度异质性和缺乏ER、PR和HER2表达，很难进行标准化的TNBC治疗方案和发现新的靶向治疗。
基于以上，提出一种治疗和/或预防乳腺癌的抑制剂药物具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供抑制HSPA4在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的应用，其可有效抑制哺乳动物包括人乳腺癌细胞的增殖、迁移以及侵袭率。
本发明的另一目的在于提供一种含有有治疗有效量的HSPA4的抑制剂的组合物在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的用途。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
一方面，本发明提出抑制HSPA4在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的应用。
另一方面，本发明提供一种含有有治疗有效量的HSPA4的抑制剂的组合物在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的用途，其中HSPA4为HSPA4蛋白或其核苷酸编码序列。
本发明实施例的HSPA4的抑制剂在制备治疗和/或预防哺乳动物包括人的乳腺癌的药物中的用途及其制备方法至少具有以下有益效果：
与现有技术相比，本申请中，选择三种细胞系(具体为TNBC细胞系HCC1937、非TNBC细胞系HCC1954和非肿瘤性乳腺上皮细胞系MCF-10A)进行探究，对比发现，BC细胞的细胞活力、迁移率和侵袭率均较高。并且经过HSPA4过表达发现其可促进BC细胞的内质网应激和Syntenin/SOX4/Wnt/β-catenin通路。由此证明，HSPA4在内质网应激上调影响三阴性乳腺癌的机制中具有重要作用，因此，针对HSPA4的表达提出一种抑制剂不仅可有效逆转内质网应激，还可抑制SDC-1/SDCBP-1/SOX4的表达，从而达到治疗和/或预防三阴性乳腺癌的效果。另外，HSPA4过表达除在三阴性乳腺癌细胞中具有明显的促进作用之外，还可促进非TNBC细胞系HCC1954和非肿瘤性乳腺上皮细胞系MCF-10A，可见，提出一种抑制HSPA4表达的抑制剂还可作为治疗和/或预防乳腺癌的有效药物。
而且，本申请中，以4-PBA作为内质网应激水平抑制剂，用其处理三阴性乳腺癌肿瘤后，以上调HSPA4的处理方式对上述肿瘤进行处理，结果发现，HSPA4上调可促进经4-PBA处理后的三阴性乳腺癌肿瘤在体内的生长。可见，本申请第一次发现HSPA4在乳腺癌病理过程中发挥着重要作用，并且以特异性HSPA4抑制剂进行治疗和/或预防可达到治疗乳腺癌的预期效果。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本申请提供的正常乳腺细胞和BC细胞HCC1937和HCC1954的细胞活力、迁移和侵袭的比较结果；
图2为本申请提供的正常乳腺细胞和BC细胞HCC1937和HCC1954中ER压力、SDC-1/SDCBP-1/SOX4轴和Wnt/β-catenin通路的表达比较结果；
图3为本申请提供的通过抑制ER应激可抑制HCC1937和HCC1954细胞的细胞活力、迁移和侵袭的结果；
图4为本申请提供的通过抑制ER应激可抑制BC细胞HCC1937和HCC1954的ER应激和Syntenin/SOX4/Wnt/β-catenin通路的结果；
图5为本申请提供的HSPA4过表达诱导TNBC细胞的ER压力和Syntenin/SOX4/Wnt/β-catenin通路的结果。
图6为本申请提供的HSPA4的过表达促进TNBC细胞的活力、迁移和侵袭结果；
图7为本申请提供的HSPA4过表达加剧TNBC肿瘤在体内的生长结果；
图8为本申请提供的MMP2和MMP9的免疫组化染色评估结果；
图9为本申请提供的小鼠组织中HSPA4、HSPA5、CHOP、SDC-1、SDCBP-1、SOX4、FZD4和β-catenin的蛋白表达结果；
图10为本申请提供的载体质粒的图谱。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考具体实施例来详细说明本发明。
一方面，本申请提出一种HSPA4的抑制剂在制备治疗和/或预防哺乳动物包括人的乳腺癌的药物中的用途。所述HSPA4为HSPA4蛋白或其核苷酸编码序列。
本申请中，所述哺乳动物包括人乳腺癌为三阴性乳腺癌。
本申请中，所述药物用于抑制内质网应激水平。
本申请中，所述药物用于阻断Sydenin/SOX4/Wnt/β-catenin通路。
本申请中，所述药物用于抑制SDC-1/SDCBP-1/SOX4的表达。
目前，患有三阴性乳腺癌的患者，往往因缺乏治疗目标，采用标准化治疗，如以紫杉类药物或蒽环类药物进行治疗，可见，以此方式对三阴性乳腺癌的治疗效果未达到预期。本申请中，选择三种细胞系(具体为TNBC细胞系HCC1937、非TNBC细胞系HCC1954和非肿瘤性乳腺上皮细胞系MCF-10A)进行探究，对比发现，BC细胞的细胞活力、迁移率和侵袭率均较高。并且经过HSPA4过表达发现其可促进BC细胞的内质网应激和Syntenin/SOX4/Wnt/β-catenin通路。由此证明，HSPA4在内质网应激上调影响三阴性乳腺癌的机制中具有重要作用，因此，针对HSPA4的表达提出一种抑制剂不仅可有效逆转内质网应激，还可抑制SDC-1/SDCBP-1/SOX4的表达，从而达到治疗和/或预防三阴性乳腺癌的效果。另外，HSPA4过表达除在三阴性乳腺癌细胞中具有明显的促进作用之外，还可促进非TNBC细胞系HCC1954和非肿瘤性乳腺上皮细胞系MCF-10A，可见，提出一种抑制HSPA4表达的抑制剂还可作为治疗和/或预防乳腺癌的有效药物。
而且，本申请中，以4-PBA作为内质网应激水平抑制剂，用其处理三阴性乳腺癌肿瘤后，以上调HSPA4的处理方式对上述肿瘤进行处理，结果发现，HSPA4上调可促进经4-PBA处理后的三阴性乳腺癌肿瘤在体内的生长。可见，本申请第一次发现HSPA4在乳腺癌病理过程中发挥着重要作用，并且以特异性HSPA4抑制剂进行治疗和/或预防可达到治疗乳腺癌的预期效果。
第二方面，本申请提供一种HSPA4的抑制剂，所述HSPA4抑制剂用做治疗和/或预防哺乳动物包括人乳腺癌中的药物，且所述HSPA4为HSPA4蛋白或其核苷酸编码序列。
第三方面，本申请提出一种含有有治疗有效量的HSPA4的抑制剂的组合物在制备治疗和/或预防哺乳动物包括人乳腺癌的药物中的用途，所述HSPA4为HSPA4蛋白或其核苷酸编码序列。
第四方面，本申请提出一种治疗和/或预防哺乳动物包括人乳腺癌的方法，其包括给予哺乳动物包括人治疗有效量的HSPA4的抑制剂，所述HSPA4为HSPA4蛋白或其核苷酸编码序列。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例
本实施例的目的在于提供实验方法和结果，具体如下：
1.材料与方法：
(1)细胞培养和处理人非肿瘤性乳腺上皮细胞系MCF-10A、三阴性乳腺导管癌HCC1937和非三阴性乳腺导管癌HCC1954均来源于美国类型培养基，在Dulbecco改良Eagle培养基中培养，该培养基包括10％FBS、100μg/mL链霉素和100U/mL青霉素，并将该培养基放置在37℃、5％CO2和相对湿度为95％的气氛中培养。
(2)将溶解在PBS中的内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(简称为4-PBA)加入细胞中以达到抑制内质网应激的效果，4-PBA对细胞的抑制时间为2h，且4-PBA的浓度为2mM或5mM。
(3)细胞转染：HSPA4特异性pcDNA过表达载体(Ov-HSPA4)和相应的对照包括空pcDNA(Ov-NC)由Gene Pharma(中国上海)完成。根据制造商的说明，使用Lipofectamine2000试剂(Invitrogen，美国)将这些载体转染到HCC1937细胞。转染48小时后，收集细胞用于后续实验。
其中载体为pCDNA3.1，载体图谱见图10，酶切位点为EcoRI和AgeI；细胞转染条件如下：
1)细胞密度：以6孔板为例，一般细胞数2×10^5-3×10^5Cells/Well，第二天待细胞密度达到70％-80％时转染；
2)转染前，先吸弃原培养液，细胞用1×PBS液清洗1-2遍，换上800uL无血清的新鲜培养液；
3)质粒按说明书要求加入无菌DEPC水溶解，1ug质粒加入适量DEPC水溶解；
4)选择合适的混合比例(脂质体体积＝1:0.5-2；质粒DNA(ug)：脂质体(uL)＝1:2-3)来转染细胞，0.8ug质粒加入50uL OPTI-MEM培养液)，再分别在两个离心管中加入脂质体和质粒序列，静置5分钟；
5)将质粒与脂质体混合，静置20分钟后，沿细胞培养皿壁缓缓加入细胞内，然后将其放回培养箱中；
6)4-6小时后，弃去原培养液，加入新鲜的全细胞培养液(不加双抗)，继续培养(一般验证效率，48小时RNA效率最好，蛋白72小时效率最好)。
(4)细胞计数试剂盒-8(简称为CCK-8)检测：在用5mM 4-PBA处理2小时前，用HSPA4过表达的载体或阴性对照转染HCC1937细胞48小时。并培养24小时、48小时和72小时后，在37℃下向每个孔中加入10μL CCK-8溶液2小时，然后用微孔板阅读器(Bio-Rad,La Jolla,CA,USA)在450nm处检测吸光度。每组设置六个平行孔，每个实验都是一式三份。
(5)伤口愈合试验：用HSPA4过表达的载体或阴性对照转染细胞48小时，然后用5mM4-PBA处理2小时，然后将细胞接种到六孔板中，培养至汇合度为90％。再用20μL的尖端做一个直的划痕，用无血清培养基洗三次。培养48小时后，评估划痕中迁移的细胞所占的面积。
迁移率的计算方式如下：迁移率＝(0h的伤口面积-48h的伤口面积)/0h的伤口面积。
(6)转孔试验：将转孔室(Corning Costar,Cambridge,MA)在37℃下先涂上0.1mL的基底胶(Becton Dickinson,MA)1小时，用HSPA4过表达的载体或阴性对照转染细胞48小时，并进行5mM4-PBA处理2小时，收集处理后的细胞并以5×105细胞/mL的终浓度悬浮在无血清细胞冻存培养基中。然后将细胞悬液装入上层孔中，在下层孔中装入10％FBS的培养基。孵化24小时后，擦去上表面的细胞。下面的细胞用100％甲醇固定，用苏木精和伊红染色，在显微镜下计数。每组随机选择五个区域进行计数。
(7)定量定时聚合酶链反应(qRT-PCR)：用Trizol试剂(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)从转染的HCC1937细胞中提取总RNA。使用NanoDrop2000(Quawell，San Jose，CA，USA)在260nm和280nm处检测RNA的质量和浓度。然后使用iScript cDNA合成试剂盒(Bio-RadLaboratories,Milan,Italy)将RNA转录成cDNA。使用SYBR Premix Ex TaqTM II试剂盒(Takara，Shiga，日本)通过实时定量PCR对cDNA进行扩增。
PCR的引物序列如下：HSPA4见序列表SEQIDNO.1，GAPDH见序列表SEQ ID NO.2。采用2-ΔΔCT方法将HSPA4 mRNA基因与人GAPDH进行标准化。
(8)酶联免疫吸附试验：各组MMP2和MMP9的含量根据相关试剂盒用ELISA试剂盒测定。用微孔板阅读器(Winooski,VT,USA)测量450nm处的吸光度。每组设置六个平行孔，每个实验都是一式三份。
(9)异种移植试验：本试验研究经南京医科大学附属肿瘤医院动物护理和使用委员会批准(批准号：202018527)，并按照该委员会制定的指南进行。雌性Balb/c裸鼠(4周龄)由中国医学科学院实验动物科学研究所(中国北京)提供。动物被安置在受控条件下，包括22±1℃的室温和12小时的光照和黑暗周期交替。动物被喂以标准的食物颗粒和自由饮用的水。小鼠被随机分为5组(n＝5)。冷基底胶基质与细胞悬液在冷PBS中以1:1的比例混合。小鼠皮下注射100μL混合物(50μL基底胶+50μL细胞悬液，1×106个细胞/100μL)于侧腹。经注射之后，小鼠在没有或在饮用水中补充1g/kg/day的4-PBA的情况下被喂养。每周两次检查肿瘤体积，计算肿瘤体积为(长×宽2)/2。3-5周后，用颈椎脱位法对小鼠进行安乐死，然后对肿瘤组织进行称重并收集用于组织病理学检查、免疫组化和Western blot检测。
(10)H&E染色：采集肿瘤组织和淋巴结，用10％的缓冲福尔马林固定并嵌入石蜡中。然后将嵌入的组织切成4μm厚，用苏木精-伊红染色。用光镜观察病理变化和肿瘤转移情况。
(11)免疫组化染色：TNBC组织在4％多聚甲醛中固定，脱水后嵌入石蜡中，然后切成5μm的切片。在柠檬酸盐缓冲溶液(pH为6.0)中通过微波加热3min进行抗原检索。用10％山羊血清阻断30min后，将切片与Ki-67抗体(Ab15580；Abcam)以1:300的比例在4℃下孵育过夜。再用HRP标记的山羊抗兔二抗(1:1000，Abcam)维持30分钟，用3,3-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)染色，并用苏木精反染。使用光学显微镜(Olympus公司，日本东京)观察图像。
(12)蛋白印迹分析：使用RIPA缓冲液(Auragene，中国长沙)提取组织或细胞的总蛋白。裂解液在95℃下加热5min，在10％SDS-PAGE(Bio-Rad，Hercules，CA)上分离，并转移到PVDF膜(Millipore，USA)上。然后，将膜在5％的脱脂牛奶中阻断1.5小时，并在4℃下用针对HSPA4、HSPA5、CHOP、Syndecan-1(SDC-1)、Syntenin-1(SDCBP-1)、SOX4、FZD4、β-catenin和GAPDH(Abcam)的一级抗体孵育过夜。洗涤膜并与辣根过氧化物酶标记的第二抗体(CellSignaling Technology)孵育1小时，甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为加载对照。使用ECL检测系统(中国生物技术研究所)检测信号，并通过密度测量法(QuantityOne 4.5.0软件；Bio-Rad公司，美国)进行定量检测。
(13)统计分析：上述试验数据均以三个独立试验的平均值±标准差进行分析，且上述数据通过SPSS 17.0软件进行统计分析。多组数据之间的差异通过单因素方差分析和Bonferroni事后检验分析，以P＜0.05视为具有统计学意义。
在此需要注意的是，HSPA4的核苷酸编码序列(位于载体中的部分)见序列表SEQID NO.3，全部核苷酸编码序列编号为NM_002154.4。HSPA4的蛋白质编码序列编号为NP_002145.3。
2.结果
(1)BC细胞和正常乳腺细胞的比较结果
由图1A的细胞活力结果可知，与非肿瘤性乳腺上皮细胞MCF-10A相比，TNBC细胞系HCC1937和非TNBC细胞系HCC1954的细胞活力明显增加。伤口愈合试验和转孔试验亦可进一步证明上述结果。如图1B的细胞迁移率结果和C中的侵袭率结果可知，与对照组细胞相比，BC细胞系有更高的迁移和侵袭率。随后，根据Western blot检测的结果，与对照组细胞相比，HCC1937和HCC1954的ER应激相关蛋白包括HSPA4、HSPA5和CHOP的水平都有所提高。此外，由图2可知，BC细胞显示出更高的SDC-1/SDCBP-1/SOX4轴的含量，以及Wnt/β-catenin途径中更高的FZD4和β-catenin水平。
(2)BC细胞的内质网应激抑制结果
由图3A中的细胞活力的结果可知，与未处理的相应细胞系比较，以5mM4-PBA处理后的HCC1937和HCC1954细胞的细胞活力明显下降。并且通过图3B-E可知(其中B图和D图是细胞迁移率，C图和E图为细胞侵袭率的结果)，以2mM或5mM4-PBA处理后的BC细胞的迁移率和侵袭率下降。由图3F中的MMP2和MMP9的水平检测结果可知，BC细胞经4-PBA处理后，其中的MMP2和MMP9的水平下降，与前述结果一致，进一步证明了前述结果。
在此值得一提的是，通过图4可知，HCC1937和HCC1954细胞中HSPA4、HSPA5、CHOP、SDC-1、SDCBP-1、SOX4、FZD4和β-catenin的产生因加入4-PBA(2mM或5mM)而产生抑制作用，以此表明4-PBA处理抑制了ER应激，阻断了Sydenin/SOX4/Wnt/β-catenin通路。此外，图4还显示4-PBA对HCC1937的信号通路有更好的抑制作用，因此可进一步选择TNBC细胞系HCC1937进行后续实验。
(3)HSPA4在TNBC细胞的内质网应激中的作用结果
本申请中，图5A为HSPA4的mRNA在HCC1937细胞的表达结果，图5B为HSPA4的蛋白水平在HCC1937细胞的表达结果，图5C为HCC1937中HSPA4、HSPA5、CHOP、SDC-1、SDCBP-1、SOX4、FZD4和β-catenin的蛋白表达。
由图5A和B的结果可知，进行了HSPA4过表达的载体并转染到HCC1937细胞，通过qRT-PCR和Western blot检测转染效率。由图5C可知，HSPA4的过表达大大诱导了内质网应激的压力，并增加了SDC-1/SDCBP-1/SOX4途径和Wnt/β-catenin途径的蛋白表达。然而，在HCC1937细胞中过量表达HSPA4和4-PBA(5mM)共同处理，与没有4-PBA处理的HSPA4过量表达的HCC1937细胞相比，上述蛋白的水平下降。
本申请中，图6A为TNBC的细胞活力结果，图6B和D为细胞迁移率的结果，图6C和E为细胞侵袭率的结果。
CCK-8检测结果显示(图6A)，与用4-PBA(5mM)处理的细胞相比，HSPA4过表达明显提高了HCC1937细胞的活力。此外，由图6B-E可知，伤口愈合和转孔实验显示，上调的HSPA4提高了未经处理的HCC1937细胞或4-PBA处理的细胞的迁移和侵袭率。
(4)HSPA4对4-PBA处理后的TNBC肿瘤的影响结果
本申请中，图7A为存在或不存在4-PBA条件下转染了Ov-HSPA4的小鼠图片，图7B为存在或不存在4-PBA条件下转染了Ov-HSPA4的肿瘤组织图片，图7C为小鼠体重变化结果，图7D为肿瘤重量变化结果，图7E为肿瘤体积变化，图7F和G为肿瘤组织和淋巴结H&E染色结果。
由图7A-C可知，通过注射转染的HCC1937细胞建立TNBC异种移植小鼠模型，同时由图7D-E可知小鼠肿瘤重量和体积的变化结果，即为，与对照组相比，HSPA4过表达可大大增加肿瘤的重量和体积。并且HSPA4过表达后，经4-PBA处理后的小鼠肿瘤重量和体积增加。
由图7F-G可知，HSPA4过表达的小鼠表现出明显的病理变化，其中包括肿瘤组织和淋巴结的炎症细胞浸润和上皮-间质转化，而经4-PBA处理后可减少转染Oe-HSPA4小鼠的病理变化。
(5)免疫组织化学染色结果
本申请中，图8A和B分别为MMP2和MMP9的免疫组化染色评估结果，图9为小鼠组织中HSPA4、HSPA5、CHOP、SDC-1、SDCBP-1、SOX4、FZD4和β-catenin的蛋白表达结果。
由图8可知，HSPA4过表达后，HCC1937细胞中的MMP2和MMP9水平增加，而HSPA4和4-PBA共同处理可抵消HSPA4过表达诱发的MMP2和MMP9的过度产生，可见，HSPA4过表达增加了肿瘤组织中HSPA4、HSPA5、CHOP、SDC-1、SDCBP-1、SOX4、FZD4和β-catenin的水平，但4-PBA抑制了这些蛋白的生成。
由图9可知，与4-PBA处理的小鼠相较，HSPA4过表达和4-PBA的共同处理后，HSPA4、HSPA5、CHOP、SDC-1、SDCBP-1、SOX4、FZD4和β-catenin的水平较高，而与转染了Oe-HSPA4的小鼠相比，上述蛋白的水平较低。
由上述结果可知，HSPA4的过表达逆转了4-PBA对TNBC细胞的活力、迁移、侵袭、SDC-1/SDCBP-1/SOX4途径和Wnt途径的抑制作用。同时，小鼠试验能够进一步证明HSPA4的过表达明显促进了TNBC小鼠的肿瘤生长，并干扰了4-PBA对SDC-1/SDCBP-1/SOX4途径和Wnt途径的抑制作用。可见，HSPA4的过表达不仅可以进一步改善ER应激，而且可以促进SDC-1/SDCBP-1/SOX4的表达，并激活Wnt途径。此外，当4-PBA抑制内质网应激时，过表达HSPA4对内质网应激的逆转作用有限，但可以促进SDC-1/SDCBP-1/SOX4的表达，而对Wnt途径的影响主要原因在于过表达HSPA4引起的SOX4表达上调，而非4-PBA对内质网应激的抑制作用。
综上，本申请中，选择三种细胞系(具体为TNBC细胞系HCC1937、非TNBC细胞系HCC1954和非肿瘤性乳腺上皮细胞系MCF-10A)进行探究，对比发现，BC细胞的细胞活力、迁移率和侵袭率均较高。并且经过HSPA4过表达发现其可促进BC细胞的内质网应激和Syntenin/SOX4/Wnt/β-catenin通路上的蛋白表达。由此证明，HSPA4在内质网应激上调影响三阴性乳腺癌的机制中具有重要作用，因此，针对HSPA4的表达提出一种抑制剂不仅可有效逆转内质网应激，还可抑制SDC-1/SDCBP-1/SOX4的表达，从而达到治疗和/或预防三阴性乳腺癌的效果。另外，HSPA4过表达除在三阴性乳腺癌细胞中具有明显的促进作用之外，还可促进非TNBC细胞系HCC1954和非肿瘤性乳腺上皮细胞系MCF-10A，可见，提出一种抑制HSPA4表达的抑制剂还可作为治疗和/或预防乳腺癌的有效药物。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
序列表
<110> 南昌医学院
<120> 抑制HSPA4在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 34
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gcagacacca gcgaaaaagg cgaggcagcc acag 34
<210> 2
<211> 30
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gaccaacagc gaacccaccc ggcgagccaa 30
<210> 3
<211> 1176
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gagaccccgc ccccgcaccg gcgcccccgc ggccacgagc cggagccggc cgagcagcgc 60
ccgggcagac ccacggaagg acaggcgccg cgggacaccg caagccccca gagcccggcc 120
caagaggccg cccaccgcag ccccgccggg ggccggccgc cggggccgga cccgggcccg 180
agcccgagca gagccggcgc cagcgggggg gcaagaccgg gcccagagcg cacgcgcggg 240
cccgcgccgg cggcacgaga cacgcaagag aagcgaccgc gcacgccggc gcacggccaa 300
gaacgcaagg agcagcagca aaagccagga acaagcaaag aacacagcca aggaaaaaga 360
ccaggccgag caccgaccag ggaggcagaa aaacaaccgc aagaaggcag gccacaggaa 420
acaggaaaag ggacaaagga ggaagagcga aaaccacgag caaggacgcc agcgccaaac 480
gaaggagaca gccgaaaggc aagaagccga ggacgggcgg ccgcaacgag cagaaagacg 540
acaggaggag caacacagag cggcaagcgc gaaagaagaa accacgcagg ccgcaaggaa 600
caaagcagga cccgccagaa gagaaaccaa gaaagaggag acagggccac cgcacaagcg 660
aggcaaaaga ggaaaacgaa agcggccacg cagacacgac agggaggaga aaagagaagg 720
agaaacaccg gaagaaggga agaaaacaag cagacaaagc caaaaccggc aaacgacccc 780
aggagggaga aaccaagaaa gagaggcaaa gccagacccc gagcagaaga gaagaggaga 840
cggaacagaa agaggcaaac ggagaggcaa gaccagcaga gggagccacc accgagggga 900
acaaaccaag aaagaaagaa gaaagcaggg agaagggggg cacacgaacc cgcggaaaag 960
agaagacagc aaacggaaag aacagacaac aaaagcgaga agcgcaccga ggcggcagca 1020
gggccacacg ccgccaaagc agagaacaca cgagagacca accaaaccga gaggaaccca 1080
gcgaagaagg gcaaggacgg aagcccaaaa acagcgcccc caaagcacaa agaaaggaac 1140
ccaccgaggc cacacagccc ccaggagccc accaga 1176
Claims (7)
1.抑制HSPA4在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述HSPA4为HSPA4蛋白或其核苷酸编码序列。
2.根据权利要求1所述的抑制HSPA4在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述人乳腺癌为三阴性乳腺癌。
3.根据权利要求1或2所述的抑制HSPA4在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的应用，其特征在于，抑制HSPA4降低内质网应激水平。
4.根据权利要求1或2所述的抑制HSPA4在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的应用，其特征在于，抑制HSPA4阻断Sydenin/SOX4/Wnt/β-catenin通路。
5.根据权利要求1或2所述的抑制HSPA4在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的应用，其特征在于，抑制HSPA4后SDC-1/SDCBP-1/SOX4的表达量降低。
6.一种含有有治疗有效量的HSPA4的抑制剂的组合物在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的用途，其特征在于，所述HSPA4为HSPA4蛋白或其核苷酸编码序列。
7.根据权利要求6所述的含有有治疗有效量的HSPA4的抑制剂的组合物在制备治疗和/或预防人乳腺癌的药物中的用途，其特征在于，所述人乳腺癌为三阴性乳腺癌。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109633165A (zh) * | 2018-12-18 | 2019-04-16 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 抗hspa4自身抗体作为乳腺癌诊断或预后评估标志物的应用 |
| CN109709335A (zh) * | 2018-12-18 | 2019-05-03 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 热休克蛋白hspa4在肿瘤转移预测、预后评估和治疗中的应用 |
-
2022
- 2022-06-07 CN CN202210635346.3A patent/CN115814082A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109633165A (zh) * | 2018-12-18 | 2019-04-16 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 抗hspa4自身抗体作为乳腺癌诊断或预后评估标志物的应用 |
| CN109709335A (zh) * | 2018-12-18 | 2019-05-03 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 热休克蛋白hspa4在肿瘤转移预测、预后评估和治疗中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| NAN JINNIANG等: "Inhibition of endoplasmic reticulum stress alleviates triple-negative breast cancer cell viability, migration, and invasion by Syntenin/SOX4/Wnt/β-catenin pathway via regulation of heat shock protein A4", BIOENGINEERED, vol. 13, no. 4, 1 April 2022 (2022-04-01), pages 1 * |
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