CN115708880A - 一种四氧化三锰/gsdme复合物的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及四氧化三锰/GSDME复合物的制备方法及其应用,可有效解决放疗后肿瘤细胞再增殖及正常组织受损的问题,其解决的技术方案是,首先在Mn3O4纳米粒表面修饰GSDME蛋白,通过单宁酸与GSDME蛋白的交联作用制备四氧化三锰/GSDME复合物,本发明制备方法稳定可靠,操作方便,所制得的Mn3O4/GSDME复合物具有生物相容性好、毒副作用小等优点,可实现GSDME蛋白的高效胞内递送,激活Caspase‑3/GSDME信号通路,将放疗诱导的肿瘤细胞凋亡转变为焦亡抑制肿瘤再增殖;并利用肿瘤细胞与正常细胞胞内GSH含量的差异,在肿瘤细胞中Mn3O4通过下调GSH增敏放疗,而在正常细胞中Mn3O4发挥其纳米酶活性清除放疗产生的ROS,实现对正常组织的辐射防护,是肿瘤放射治疗药物上的创新。
Description
技术领域
本发明涉及药物制备技术领域,特别是一种四氧化三锰/GSDME复合物的制备方法及其应用。
背景技术
癌症是导致死亡的主要原因。自2000年以来,中国癌症发病率和死亡率逐年上升,严重威胁人类健康,给社会造成了巨大的经济负担。放射治疗 (RT) 作为治疗恶性肿瘤的一种主要方式,临床上50%以上的癌症患者都会接受放射治疗,从分子角度来看,放疗对DNA造成直接或者活性氧 (ROS) 依赖的损伤,最终导致细胞死亡。为减少放疗期间对正常组织的损伤,常采用低剂量分割疗法使正常组织从亚致死辐射损伤中恢复,允许存活细胞在正常组织中重新繁殖。然而,存活的肿瘤细胞也会在治疗间隔期间增殖,肿瘤细胞再增殖被认为是放疗后肿瘤复发和治疗失败的主要原因。选择性地抑制肿瘤细胞再增殖有助于改善放疗治疗效果。
据报道,濒死的肿瘤细胞能够产生强大的生长刺激信号,促进附近存活肿瘤细胞的增殖。天冬氨酸半胱氨酸特异性蛋白酶-3 (Caspase-3) 作为细胞凋亡死亡过程中的刽子手,与肿瘤再增殖密切相关。Caspase-3通过Caspase-3/iPLA2/AA/PGE2、Caspase-3/PKCd/Akt/VEGF-A 信号通路释放促生长信号因子PGE2和VEGF-A,强烈刺激肿瘤细胞的增殖。抑制Caspase 3可以提高肿瘤放疗效率。凋亡和焦亡都是Caspase-3依赖的程序性细胞死亡途径,当肿瘤抑癌基因Gasdermin E (GSDME) 高表达时,活性Caspase-3将其切割,释放N端结构域在细胞膜上穿孔,导致细胞焦亡。当GSDME表达水平较低时,会导致肿瘤细胞的经典死亡途径,即凋亡。因此,提高肿瘤细胞内GSDME含量有望激活Caspase-3/GSDME信号通路,将放疗介导的细胞凋亡转变为焦亡,抑制肿瘤再增殖。
在确保放疗对肿瘤治疗有效的前提下,预防辐射性正常组织损伤是迫切需要的。四氧化三锰纳米粒 (Mn3O4) 具有多种生物酶的活性,如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等,可有效清除超氧阴离子、过氧化氢和羟基自由基等多种活性氧 (ROS)。而且,Mn3O4可与肿瘤细胞中高表达的谷胱甘肽 (GSH) 反应,降低GSH水平,增加ROS含量。因此,Mn3O4可作为放疗保护剂清除正常组织中高剂量X射线辐射诱导的ROS保护正常组织,而在肿瘤细胞中通过下调GSH水平增加ROS含量提高放疗效率。
为实现高效的GSDME胞质递送,利用GSDME和多酚 (单宁酸) 在Mn3O4上的自组装,制备了一种Mn3O4/GSDME复合物,Mn3O4/GSDME复合物能够响应溶酶体酸性环境降解并逃逸溶酶体释放GSDME和Mn3O4到胞质中。在GSH含量低的正常细胞中,Mn3O4发挥其纳米酶活性,清除正常细胞内放疗产生的ROS,减少DNA损伤,保护正常组织;在GSH含量高的肿瘤细胞中,Mn3O4被高水平的GSH降解,其纳米酶活性丧失,GSH含量下调,胞内ROS含量升高,肿瘤放疗效果增强,更重要的是,胞内GSDME 蛋白可诱导放疗介导的细胞凋亡转变为焦亡,抑制Caspase-3介导的肿瘤细胞再增殖,目前尚未见有相关报道。
发明内容
针对上述情况,为解决现有技术之缺陷,本发明之目的就是提供一种四氧化三锰/GSDME复合物的制备方法及其应用,可有效解决放疗后肿瘤细胞再增殖及正常组织受损的问题。
本发明解决的技术方案是,该复合物的制备方法是,首先在Mn3O4纳米粒表面修饰GSDME蛋白,通过单宁酸与GSDME蛋白的交联作用制备四氧化三锰/GSDME复合物,具体包括以下步骤:
1)制备Mn3O4纳米粒:将1.25-5 g四水合乙酸锰溶解于35-140 mL N, N-二甲基甲酰胺中,然后转移到反应釜中,160 ℃加热6-10 h,自然冷却至室温后5000-12000 rpm离心5-10 min收集产物,用无水乙醇洗涤三次,40-60 ℃干燥10-15 h,得Mn3O4纳米粒;
2)制备GSDME修饰的Mn3O4:将2.5-7.5 mg Mn3O4溶解于1-3 mL超纯水中,然后将15-45 mg GSDME溶解于250-750 μL超纯水中,将Mn3O4与GSDME超声混合2 min后转移到10-20 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应8-12 h。反应完成后,8000-12000 rpm离心10-20 min收集产物,超纯水洗涤三次去除未反应的GSDME蛋白,得GSDME修饰的Mn3O4;
3)制备Mn3O4/GSDME复合物:将步骤2)制备的GSDME修饰的Mn3O4重悬于1-3 mL超纯水中,并将4-12 mg单宁酸溶解于25-75 μL超纯水中,将两者超声混合2 min后转移到10-20mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应3-6 h,反应完成后,8000-12000 rpm离心10-20 min收集产物,并用超纯水洗涤三次去除未反应的单宁酸,得Mn3O4/GSDME复合物。
更进一步地,所述的步骤1)中Mn3O4纳米粒的粒径为5~15 nm,步骤3)中Mn3O4/GSDME复合物的粒径为100~200 nm。
本发明方法制备的Mn3O4/GSDME复合物在制备抗肿瘤药物注射剂中的应用。
本发明方法制备的Mn3O4/GSDME复合物在制备放疗保护剂中的应用。
本发明方法制备的Mn3O4/GSDME复合物在制备通过下调肿瘤细胞胞内GSH含量增敏肿瘤放疗药物中的应用。
本发明方法制备的Mn3O4/GSDME复合物在制备抑制肿瘤细胞再增殖药物中的应用。
本发明方法制备的Mn3O4/GSDME复合物在制备诱导肿瘤细胞焦亡联合免疫治疗药物中的应用。
本发明制备方法稳定可靠,操作方便,所制得的Mn3O4/GSDME复合物具有生物相容性好、毒副作用小等优点,可实现GSDME蛋白的高效胞内递送,激活Caspase-3/GSDME信号通路,将放疗诱导的肿瘤细胞凋亡转变为焦亡抑制肿瘤再增殖;并利用肿瘤细胞与正常细胞胞内GSH含量的差异,在肿瘤细胞中Mn3O4通过下调GSH增敏放疗,而在正常细胞中Mn3O4发挥其纳米酶活性清除放疗产生的ROS,实现对正常组织的辐射防护,是肿瘤放射治疗药物上的创新,社会经济效益巨大。
附图说明
图1为本发明 Mn3O4、Mn3O4/GSDME复合物的透射电镜图。
图2为本发明Mn3O4、Mn3O4/GSDME复合物的电位图。
图3为本发明Mn3O4经不同浓度GSH处理后的透射电镜图。
图4为本发明不同浓度Mn3O4处理后GSH向GSSG转化的图。
图5为本发明不同处理后4T1细胞胞内ROS的荧光成像图,比例尺: 50 μm。
图6为本发明不同处理后Hs578Bst细胞胞内ROS的荧光成像图,比例尺: 50 μm。
图7为本发明4T1细胞经不同处理后的代表性照片,箭头指示焦亡细胞,比例尺:10μm。
图8为本发明4T1细胞经不同处理后上清中分泌的PGE2和VEGF-A含量图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1
本发明在具体实施中,具体包括以下步骤:
1)制备Mn3O4纳米粒:将1.25 g四水合乙酸锰溶解于35 mL N, N-二甲基甲酰胺中,然后转移到反应釜中,160 ℃加热8 h,自然冷却至室温后5000 rpm离心10 min收集产物,用无水乙醇洗涤三次,40 ℃干燥15 h,得Mn3O4纳米粒;
2)制备GSDME修饰的Mn3O4:将2.5 mg Mn3O4溶解于1 mL超纯水中,然后将15 mgGSDME溶解于250 μL超纯水中,将Mn3O4与GSDME超声混合2 min后转移到10 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应8 h,反应完成后,8000 rpm离心20 min收集产物,超纯水洗涤三次去除未反应的GSDME蛋白,得GSDME修饰的Mn3O4;
3)制备Mn3O4/GSDME复合物:将步骤2)制备的GSDME修饰的Mn3O4重悬于1 mL超纯水中,并将4 mg单宁酸溶解于25 μL超纯水中,将两者超声混合2 min后转移到10 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应4 h,反应完成后,8000 rpm离心20 min收集产物,并用超纯水洗涤三次去除未反应的单宁酸,得Mn3O4/GSDME复合物。
实施例2
本发明在具体实施中,具体包括以下步骤:
1)制备Mn3O4纳米粒:将2.5 g四水合乙酸锰溶解于70 mL N, N-二甲基甲酰胺中,然后转移到反应釜中,160 ℃加热8 h,自然冷却至室温后12000 rpm离心5 min收集产物,用无水乙醇洗涤三次,50 ℃干燥12 h,得Mn3O4纳米粒;
2)制备GSDME修饰的Mn3O4:将5 mg Mn3O4溶解于2 mL超纯水中,然后将30 mgGSDME溶解于500 μL超纯水中,将Mn3O4与GSDME超声混合2 min后转移到10 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应10 h,反应完成后,10000 rpm离心15 min收集产物,超纯水洗涤三次去除未反应的GSDME蛋白,得GSDME修饰的Mn3O4;
3)制备Mn3O4/GSDME复合物:将步骤2)制备的GSDME修饰的Mn3O4重悬于2 mL超纯水中,并将8 mg单宁酸溶解于50 μL超纯水中,将两者超声混合2 min后转移到10 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应3 h,反应完成后,10000 rpm离心15 min收集产物,并用超纯水洗涤三次去除未反应的单宁酸,得Mn3O4/GSDME复合物。
实施例3
本发明在具体实施中,具体包括以下步骤:
1)制备Mn3O4纳米粒:将5 g四水合乙酸锰溶解于140 mL N, N-二甲基甲酰胺中,然后转移到反应釜中,160 ℃加热8 h,自然冷却至室温后12000 rpm离心10 min收集产物,用无水乙醇洗涤三次,60 ℃干燥10 h,得Mn3O4纳米粒;
2)制备GSDME修饰的Mn3O4:将7.5 mg Mn3O4溶解于3 mL超纯水中,然后将45 mgGSDME溶解于750 μL超纯水中,将Mn3O4与GSDME超声混合2 min后转移到20 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应12 h,反应完成后,12000 rpm离心10 min收集产物,超纯水洗涤三次去除未反应的GSDME蛋白,得GSDME修饰的Mn3O4;
3)制备Mn3O4/GSDME复合物:将步骤2)制备的GSDME修饰的Mn3O4重悬于3 mL超纯水中,并将12 mg单宁酸溶解于75 μL超纯水中,将两者超声混合2 min后转移到20 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应6 h,反应完成后,12000 rpm离心10 min收集产物,并用超纯水洗涤三次去除未反应的单宁酸,得Mn3O4/GSDME复合物。
本发明制备方法简单,利用Mn3O4的纳米酶活性在放疗过程中清除正常细胞中的ROS保护正常细胞,同时通过下调肿瘤细胞的GSH增加ROS含量增强肿瘤细胞杀伤效率;并可通过提高胞内GSDME含量实现肿瘤细胞由凋亡向焦亡的转变,抑制放疗后肿瘤细胞再增殖。经多次反复试验,均取得了一致的结果,以实施例1为例,有关试验资料如下:
一.Mn3O4、Mn3O4/GSDME复合物透射电子显微镜的表征:
将Mn3O4、Mn3O4/GSDME复合物溶于超纯水,分别配制制备成0.1 mg/mL的溶液,然后取10 μL滴加在铜网上,待液体蒸发后,重复此操作3次,用透射电子显微镜观察形貌,结果如图1所示。
从透射电镜图像可以观察到Mn3O4纳米粒尺寸比较均一,为类球形结构,其粒径约为10 nm;Mn3O4/GSDME复合物的粒径明显增加,其粒径约为180 nm,证明Mn3O4/GSDME复合物的成功制备。
二.Mn3O4、Mn3O4/GSDME复合物电位的测定:
取适量Mn3O4、Mn3O4/GSDME复合物分散于水中,用激光纳米粒度分析仪测得其电位结果如图2所示。
Mn3O4纳米粒的电位约为-5 mV,修饰GSDME后,Mn3O4/GSDME复合物的电位减少到-14 mV,证明了Mn3O4/GSDME复合物的成功制备。
三.GSH浓度依赖性的Mn3O4体外降解实验:
称量1 mg Mn3O4,溶于1mL超纯水中,然后向溶液加入不同量的GSH,GSH的最终浓度分别为0 mM、1 mM、10 mM。反应6 h后用透射电镜观察Mn3O4颗粒的形貌变化。结果如图3所示。
由透射电镜图像观察到,在1 mM GSH作用下,Mn3O4颗粒发生部分分解,粒径有所减小;在10 mM GSH作用下视野中无可见颗粒,Mn3O4颗粒完全降解,以上结果说明Mn3O4可被GSH降解。
四.Mn3O4浓度依赖性的GSH含量下调实验:
向10 mM GSH溶液中分别加入不同量的Mn3O4颗粒,Mn3O4的最终浓度分别为0 μg/mL、20 μg/mL、40 μg/mL、60 μg/mL和80 μg/mL,反应6 h后12000 rpm离心10 min,收集上清通过GSH和GSSG检测试剂盒测定样品中GSSG与GSH含量。结果如图4所示。
发现随着Mn3O4浓度的增加,GSSG含量逐渐增高,表明Mn3O4可将GSH氧化成GSSG,降低GSH水平。
五. 考察Mn3O4对放疗的正常细胞及肿瘤细胞胞内ROS含量的影响:
4T1细胞和Hs578Bst细胞分别传代至六孔板中,细胞过夜培养后加入Mn3O4含药培养基与细胞共孵育6 h,其中Mn3O4浓度为10 μg/mL。药物孵育结束后用PBS洗涤细胞3次,加入新鲜培养基后X射线照射 (6 Gy)。细胞继续培养24 h后加入1 mL DCFH-DA (10 μM) 探针与细胞共孵育20 min,用培养基洗涤三次后加入1 mL新鲜培养基,置于激光共聚焦显微镜下观察。
如图5所示,与单独放疗组的4T1细胞相比,经Mn3O4预处理6 h后,接受放疗的4T1细胞胞内荧光信号明显增强,说明ROS含量增加。而在Hs578Bst正常细胞中,如图6所示,Hs578Bst细胞放疗后,胞内ROS含量明显升高;Mn3O4+放疗组细胞胞内的荧光信号明显减弱,说明Mn3O4可以有效清除放疗产生的ROS,从而保护正常细胞。
六. 激光共聚焦显微镜观察细胞形态实验:
4T1细胞传代至培养皿中,过夜培养后加入各种制剂与细胞共孵育6 h,其中Mn3O4浓度为10 μg/mL。药物孵育结束后用PBS洗涤细胞3次,加入新鲜培养基后X射线照射 (6Gy)。放疗结束后将细胞放入培养箱继续培养48 h,随后置于激光共聚焦显微镜下观察。
如图7所示,4T1细胞经Mn3O4/GSDME和放疗处理后,细胞在显微镜下表现为细胞膜膨胀的焦亡特征;而Mn3O4与放疗处理后的4T1细胞仅表现为细胞膜萎缩和凋亡小体产生的凋亡特征,说明GSDME可以将放疗诱导的细胞凋亡转变为焦亡。
七. 通过ELISA测定促生长信号因子PGE2和VEGF-A含量实验:
4T1细胞传代至六孔板中,过夜培养后加入各种制剂与细胞共孵育6 h,其中Mn3O4浓度为10 μg/mL。药物孵育结束后用PBS洗涤细胞3次,加入新鲜培养基后X射线照射 (6Gy)。放疗结束后将细胞放入培养箱继续培养48 h,然后收集细胞上清液,2000 rpm离心20min仔细收集上清。通过小鼠前列腺素E2 (PGE2) 酶联免疫分析 (ELISA) 试剂盒和小鼠血管内皮生长因子A (VEGF-A) 酶联免疫分析 (ELISA) 试剂盒检测各样品PGE2和VEGF-A含量。
如图8所示,与未处理细胞相比,4T1细胞经放疗后,促生长信号因子PGE2和VEGF-A的含量明显增加,说明放疗可诱导肿瘤细胞释放促生长信号因子;而GSDME处理后,4T1细胞分泌的PGE2和VEGF-A明显下降,这有利于抑制放疗后肿瘤细胞的再增殖。
从上述实验可以看出,本发明与现有技术相比,具有以下的有益效果:
(1)本发明提供的Mn3O4/GSDME复合物具有良好的生物相容性和稳定性,能够高效负载GSDME蛋白,并可以实现胞质的定位释放;
(2)本发明提供的Mn3O4/GSDME复合物在GSH含量低的正常细胞中Mn3O4能够发挥多种纳米酶活性,清除放疗产生的ROS;同时通过消耗肿瘤细胞胞内GSH增加ROS产生,在保护正常细胞的同时增强肿瘤细胞杀伤效果,减少放疗产生的毒副作用;
(3)本发明提供的Mn3O4/GSDME复合物可向胞内高效递送GSDME,将Caspase3介导的细胞凋亡转变为细胞焦亡,抑制放疗后肿瘤细胞再增殖,有效预防放疗后肿瘤复发。
本发明操作方便,方法稳定可靠,所制得的Mn3O4/GSDME复合物可通过EPR效应靶向到肿瘤组织,在正常细胞中,Mn3O4纳米粒发挥纳米酶活性,清除放疗后正常细胞产生的ROS,保护正常细胞;在肿瘤细胞中,Mn3O4通过下调胞内GSH水平增加ROS含量,增强放疗效果。更重要的是,胞内递送GSDME蛋白通过逆转细胞凋亡途径抑制Caspase-3介导的肿瘤再增殖,提高了肿瘤的治疗效率,是放射治疗药物上的创新,经济和社会效益巨大。
要指出的是,上述仅是本发明的较佳实施例,并非对本发明作任何形式上的限制,任何熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案范围内,当可利用上述揭示的技术内容作出更动或者修饰为等同变化的等效实施例,均落在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种四氧化三锰/GSDME复合物的制备方法,其特征在于,该复合物的制备方法是,首先在Mn3O4纳米粒表面修饰GSDME蛋白,通过单宁酸与GSDME蛋白的交联作用制备四氧化三锰/GSDME复合物,具体包括以下步骤:
1)制备Mn3O4纳米粒:将1.25-5 g四水合乙酸锰溶解于35-140 mL N, N-二甲基甲酰胺中,然后转移到反应釜中,160 ℃加热6-10 h,自然冷却至室温后5000-12000 rpm离心5-10min收集产物,用无水乙醇洗涤三次,40-60 ℃干燥10-15 h,得Mn3O4纳米粒;
2)制备GSDME修饰的Mn3O4:将2.5-7.5 mg Mn3O4溶解于1-3 mL超纯水中,然后将15-45mg GSDME溶解于250-750 μL超纯水中,将Mn3O4与GSDME超声混合2 min后转移到10-20 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应8-12 h。反应完成后,8000-12000 rpm离心10-20 min收集产物,超纯水洗涤三次去除未反应的GSDME蛋白,得GSDME修饰的Mn3O4;
3)制备Mn3O4/GSDME复合物:将步骤2)制备的GSDME修饰的Mn3O4重悬于1-3 mL超纯水中,并将4-12 mg单宁酸溶解于25-75 μL超纯水中,将两者超声混合2 min后转移到10-20 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应3-6 h,反应完成后,8000-12000 rpm离心10-20 min收集产物,并用超纯水洗涤三次去除未反应的单宁酸,得Mn3O4/GSDME复合物。
2.根据权利要求1所述的四氧化三锰/GSDME复合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)制备Mn3O4纳米粒:将1.25 g四水合乙酸锰溶解于35 mL N, N-二甲基甲酰胺中,然后转移到反应釜中,160 ℃加热8 h,自然冷却至室温后5000 rpm离心10 min收集产物,用无水乙醇洗涤三次,40 ℃干燥15 h,得Mn3O4纳米粒;
2)制备GSDME修饰的Mn3O4:将2.5 mg Mn3O4溶解于1 mL超纯水中,然后将15 mg GSDME溶解于250 μL超纯水中,将Mn3O4与GSDME超声混合2 min后转移到10 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应8 h,反应完成后,8000 rpm离心20 min收集产物,超纯水洗涤三次去除未反应的GSDME蛋白,得GSDME修饰的Mn3O4;
3)制备Mn3O4/GSDME复合物:将步骤2)制备的GSDME修饰的Mn3O4重悬于1 mL超纯水中,并将4 mg单宁酸溶解于25 μL超纯水中,将两者超声混合2 min后转移到10 mL圆底烧瓶中,37℃油浴反应4 h,反应完成后,8000 rpm离心20 min收集产物,并用超纯水洗涤三次去除未反应的单宁酸,得Mn3O4/GSDME复合物。
3.根据权利要求1所述的四氧化三锰/GSDME复合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)制备Mn3O4纳米粒:将2.5 g四水合乙酸锰溶解于70 mL N, N-二甲基甲酰胺中,然后转移到反应釜中,160 ℃加热8 h,自然冷却至室温后12000 rpm离心5 min收集产物,用无水乙醇洗涤三次,50 ℃干燥12 h,得Mn3O4纳米粒;
2)制备GSDME修饰的Mn3O4:将5 mg Mn3O4溶解于2 mL超纯水中,然后将30 mg GSDME溶解于500 μL超纯水中,将Mn3O4与GSDME超声混合2 min后转移到10 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应10 h,反应完成后,10000 rpm离心15 min收集产物,超纯水洗涤三次去除未反应的GSDME蛋白,得GSDME修饰的Mn3O4;
3)制备Mn3O4/GSDME复合物:将步骤2)制备的GSDME修饰的Mn3O4重悬于2 mL超纯水中,并将8 mg单宁酸溶解于50 μL超纯水中,将两者超声混合2 min后转移到10 mL圆底烧瓶中,37℃油浴反应3 h,反应完成后,10000 rpm离心15 min收集产物,并用超纯水洗涤三次去除未反应的单宁酸,得Mn3O4/GSDME复合物。
4.根据权利要求1所述的四氧化三锰/GSDME复合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)制备Mn3O4纳米粒:将5 g四水合乙酸锰溶解于140 mL N, N-二甲基甲酰胺中,然后转移到反应釜中,160 ℃加热8 h,自然冷却至室温后12000 rpm离心10 min收集产物,用无水乙醇洗涤三次,60 ℃干燥10 h,得Mn3O4纳米粒;
2)制备GSDME修饰的Mn3O4:将7.5 mg Mn3O4溶解于3 mL超纯水中,然后将45 mg GSDME溶解于750 μL超纯水中,将Mn3O4与GSDME超声混合2 min后转移到20 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应12 h,反应完成后,12000 rpm离心10 min收集产物,超纯水洗涤三次去除未反应的GSDME蛋白,得GSDME修饰的Mn3O4;
3)制备Mn3O4/GSDME复合物:将步骤2)制备的GSDME修饰的Mn3O4重悬于3 mL超纯水中,并将12 mg单宁酸溶解于75 μL超纯水中,将两者超声混合2 min后转移到20 mL圆底烧瓶中,37 ℃油浴反应6 h,反应完成后,12000 rpm离心10 min收集产物,并用超纯水洗涤三次去除未反应的单宁酸,得Mn3O4/GSDME复合物。
5.根据权利要求1-4任一项所述的四氧化三锰/GSDME复合物的制备方法,其特征在于,所述的步骤1)中Mn3O4纳米粒的粒径为5~15 nm,步骤3)中Mn3O4/GSDME复合物的粒径为100~200 nm。
6.权利要求1-4任一项所述方法制备的Mn3O4/GSDME复合物在制备抗肿瘤药物注射剂中的应用。
7.权利要求1-4任一项所述方法制备的Mn3O4/GSDME复合物在制备放疗保护剂中的应用。
8.权利要求1-4任一项所述方法制备的Mn3O4/GSDME复合物在制备通过下调肿瘤细胞胞内GSH含量增敏肿瘤放疗药物中的应用。
9.权利要求1-4任一项所述方法制备的Mn3O4/GSDME复合物在制备抑制肿瘤细胞再增殖药物中的应用。
10.权利要求1-4任一项所述方法制备的Mn3O4/GSDME复合物在制备诱导肿瘤细胞焦亡联合免疫治疗药物中的应用。
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Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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CN202211521116.0A Pending CN115708880A (zh) | 2022-11-30 | 2022-11-30 | 一种四氧化三锰/gsdme复合物的制备方法及其应用 |
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CN (1) | CN115708880A (zh) |
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2022
- 2022-11-30 CN CN202211521116.0A patent/CN115708880A/zh active Pending
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