CN115448978A - Tgr5-dpp4双重活性化合物及其制备方法、药物组合物和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及TGR5‑DPP4双重活性化合物及其制备方法、药物组合物和用途。所述化合物结构式如式I所示。本发明提出一类肠道局部作用的TGR5‑DPP4双重活性化合物，体外实验证实其具有良好的TGR5激动活性和/或DPP4抑制活性，体内实验表明其具有良好的肠道局部作用并具有良好的胆囊安全性。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类具有TGR5-DPP4双重活性的化合物及其制备方法、药物组合物和用途。
背景技术
TGR5，Takeda G蛋白受体5，又称为G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1)，广泛分布于胃肠道、胆囊、棕色脂肪组织和肌肉组织等。TGR5介导体内多种生理功能，如血糖稳态、胃肠道稳态和炎症反应等。胃肠道中TGR5激活促进GLP-1、GLP-2和PYY等胃肠激素的释放，其中GLP-1可以血糖依赖的促进胰岛素释放和抑制胰高血糖素释放，进而参与血糖稳态调节；PYY与饮食调控相关；GLP-2可以通过促进肠绒毛和隐窝生长等发挥肠道修复功能。同时，研究表明胆汁酸可以通过TGR5通路激活肠干细胞和促进肠上皮细胞，进而促进肠道损伤后的再修复。此外，TGR5通过调节免疫细胞的活化参与炎症反应。因此，TGR5被视为慢性代谢性疾病如二型糖尿病、肥胖、非酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝炎和胃肠道紊乱相关疾病如炎症性肠病的潜在靶点。然而，由于TGR5在胆囊中高表达，激活后会引起胆囊充盈副作用，开发肠道局部作用的TGR5激动剂可以改善胆囊充盈副作用。
肠道L细胞中TGR5激活促进GLP-1和GLP-2等胃肠激素分泌，但GLP-1和GLP-2很快被二肽基肽酶4(DPP4)水解，半衰期仅有几分钟；其中肠道中分布着大量的DPP4酶，可水解超一半的GLP-1和GLP-2。因此，抑制肠道DPP4酶活有利于TGR5激动剂更好的发挥药理学效应。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提出一种化合物，该化合物具有TGR5-DPP4双重活性。
本发明的第二目的在于提出该化合物的制备方法。
本发明的第三目的在于提出含有该化合物的药物组合物。
本发明的第四目的在于提出该化合物的用途。
为了实现本发明的目的，采用的技术方案为：
本发明提出如式I所示的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐，
其中，
A表示噻吩环或吡啶环；
R1、R2、R3、R4各自独立地为氢、C1-6烷基、卤素、C1-6烷氧基、羟基、氨基、硝基或氰基；优选各自独立地为氢、C1-4烷基、卤素或C1-4烷氧基；更优选各自独立地为氢或C1-2烷基；最优选均为氢原子；
R5为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基取代的C1-6烷基、C3-6杂环基、C1-6烷基羰基或C1-6烷氧基羰基；优选为氢、C1-4烷基、C3-6环烷基或C3-6杂环基；最优选为氢或环丙基；
R6、R7、R8、R9各自独立地为氢、C1-6烷基、卤素、C1-6烷氧基、羟基、氨基、硝基或氰基；优选各自独立地为氢、C1-4烷基、卤素、C1-4烷氧基、羟基或氨基；更优选地，R6和R8为卤素，R7和R9为氢；或者R7和R9为卤素，R6和R8为氢；
W1和W2各自独立地为IIa或IIb所示的基团：
m、n各自独立地为1～7的整数，优选为1～3的整数；
R21、R22各自独立地为氢、C1-6烷基、或被羧基取代的C1-6烷基，优选各自独立地为氢、C1-4烷基或被羧基、C1-C4烷氧基羰基取代的C1-4烷基，更优选各自独立地为氢、C1-2烷基或被羧基、C1-C4烷氧基羰基取代的C1-2烷基，最优选各自独立地为氢、甲基或羧甲基；
L为IIIa或IIIb所示的基团：
其中，q为1～20的整数，优选为1～10的整数；r为1～10的整数，优选为1～5的整数；
X为IV所示的基团：
R为H、C1-C4烷基、苯基取代的C1-C4烷基、羟基取代的C1-C4烷基、C1-C6烷氧基取代的C1-C4烷基，优选为甲基、苄基、羟基取代的甲基和叔丁氧基取代的甲基；s为1-3的整数。
制备上述的化合物的方法，所述方法为选自以下方式1～方式4中的至少一种：
方式1、制备通式IA所示的化合物，至少包括以下步骤：
S1、化合物Ia通过与连接片段前体化合物NH2-L-N3进行酰胺缩合得到化合物Ib；
S2、化合物Ib在通过氢化还原反应得到化合物Ic；
S3、化合物Id通过亲核取代反应与溴乙酸苄酯反应得到Ie；
S4、化合物Ie通过氢化还原反应脱苄得到If；
S5、化合物If与化合物Ic通过酰胺缩合反应得到化合物Ig；
S6、化合物Ig脱去保护基反应得到化合物IA；
方式2、制备通式IB所示的化合物，至少包括以下步骤：
S1、化合物Ib与溴乙酸叔丁酯通过亲核取代反应得到化合物IIa；
S2、化合物IIa通过氢化还原反应得到化合物IIb；
S3、化合物IIb与化合物If通过酰胺缩合反应得到化合物IIc；
S4、化合物IIc与溴乙酸叔丁酯通过亲核取代反应得到化合物IId；
S5、化合物IId脱去保护基并水解得到IB；
方式3、制备通式IC所示的化合物，包括以下步骤：
S1、化合物If在硼烷的还原下反应得到化合物IIIa；
S2、化合物IIIa通过Dess-Martin试剂经氧化反应得到化合物IIIb；
S3、化合物IIIb与化合物Ic通过还原胺化反应得到化合物IIIc；
S4、化合物IIIc脱去保护基得到化合物IC；
方式4、制备通式ID所示的化合物，包括以下步骤：
S1、化合物Ia在硼烷的还原下得到化合物IVb；
S2、化合物IVb通过Dess-Martin试剂氧化得到化合物IVc；
S3、化合物IVc与连接片段前体化合物NH2-L-N3通过还原胺化反应后再与Boc酸酐反应得到化合物IVd；
S4、化合物IVd在氢气-钯碳条件下还原叠氮基团得到化合物IVe；
S5、化合物IVe与化合物If通过酰胺缩合得到化合物IVf；
S6、化合物IVf脱去保护基Boc得到化合物ID。
本发明还涉及该化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐在制备用于治疗由TGR5和/或DPP4介导的疾病的药物中的应用。
本发明还涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的选自上述化合物、立体异构体或药学上可接受的盐中的一种或多种以及任选地，药学上可接受的辅料。
本发明还涉及该化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐在制备作为TGR5激动剂和/或DPP4抑制剂的药物的应用。
技术效果
本发明提出一类肠道局部作用的TGR5-DPP4双重活性化合物，体外实验证实具有良好的TGR5激动活性和DPP4酶抑制活性，体内实验表明具有良好的肠道局部作用和在DSS诱导的小鼠结肠炎模型中具有良好的治疗效果。本发明的优势还在于该类化合物具有良好的胆囊安全性，可用于TGR5介导的相关疾病，如二型糖尿病、肥胖、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎和炎症性肠病等的治疗。
附图说明
图1-3为DSS诱导小鼠结肠炎试验的实验结果图；
图4为血浆、胆囊、胆汁药物浓度测试实验的结果图。
具体实施方式
除非特别注明，本发明中所用的术语具有如下定义：
本发明中所述的“取代”表示基团上的氢被一个或多个基团所替代。当多个基团从同一系列候选取代基中选择时，它们可以相同，也可以不同。本发明中所述的“任选地”表示所定义基团可从一系列候选基团中进行选择，也可以不选。
本发明中所述的“烷基”表示特定原子个数下的饱和的直链和支链烷基，具体地可列举如但不仅限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基等。所述“C1-6烷基”表示碳原子数为1～6个的饱和直链或支链烷基，具体地可列举如但不仅限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。
本发明所述的“杂环”代表具有4～7个成环原子、含有1～4个选自N、O、S的杂原子的饱和单环体系。代表性的例子有但不仅限于：四氢呋喃、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、氧杂环丁烷等。C3-6杂环基表示碳原子数为3～6个的上述杂环。
本发明所述的“C2-6烯基”表示碳原子数为2～6个的具有一个双键的直链或支链烯基，具体地可列举如乙烯基、丙烯基、丁烯基、异丁烯基、戊烯基、己烯基等。
本发明中所述的“C3-6环烷基”代表具有3～6个成环原子、非芳香性、饱和、环状的脂肪烃基团。代表性的例子有但不仅限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
本发明所述的“C1-6烷氧基”表示碳原子数为3～6个的所有直链或支链的烷氧基，具体地可列举如但不仅限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基等。
本发明所述的“C1-6烷基羰基”表示碳原子数为1～6个的所有直链或支链的烷基羰基，即烷基与
连接形成的基团，具体地可列举如但不仅限于甲羰基、乙羰基、正丙羰基、异丙羰基、正丁羰基等。
本发明所述的“C1-6烷氧基羰基”表示碳原子数为1～6个的所有直链或支链的烷氧基羰基，即烷氧基与
连接形成的基团，具体地可列举如但不仅限于
等。
本发明所述“卤素”表示氟、氯、溴、碘。
“药学上可接受的盐”指为了增加化合物溶解性或稳定性而制备成的且适合药学上使用的盐。该药学上可接受的盐可以直接在化合物的制备和纯化过程中得到，也可以间接的通过该化合物的游离酸或游离碱与另外一种合适的碱或酸反应得到。
本发明中所述炎症性肠病包括但不限于克罗恩病和溃疡性结肠炎。
使用方法:在用于治疗时，本发明内的化合物通常以一种标准药物组合物的形式给药，其中包含一种或多种有效治疗剂量的通式(I)所示的化合物，以及药学上可以接受的辅料。所述药学上可以接受的辅料为药学上可接受的载体、赋形剂或缓释剂等。
本发明所提供的药物组合物可以是多种形式，如片剂、胶囊剂、散剂、糖浆剂、溶液剂、混悬剂和气雾剂等，并可以存在于适宜的固体或液体载体或稀释液中。本发明的药物组合物也可以储存在适宜的注射或滴注的消毒器具中。该药物组合物中还可包含气味剂、香味剂等。
在本发明中，药物组合物含有安全有效量(如0.1～99.9重量份，优选1-90重量份)的式I所示的化合物或其药学上可接受的盐；以及余量的药学上可接受的辅料，其中组合物的总重量为100重量份。或者，本发明药物组合物含有占总重量0.1～99.9重量％，优选占总重量1～90重量％的式I所示的化合物或其药学上可接受的盐；以及余量的药学上可接受的辅料，其中组合物的总重量为100重量％。
式I所示的化合物与药学上可接受的载体、赋形剂或缓释剂的优选比例是，式I所示的化合物作为活性成分占总重量60％以上，其余部分占总重量0～40％，其余部分的量优选为1～20％，最优选为1～10％。
式I所示的化合物或包含式I所示的化合物的药物组合物可对哺乳动物临床使用，包括人和动物，给药途径可以包括口服、鼻腔吸入、透皮吸收、肺部给药或胃肠道等。优选的给药途径为口服。优选为单位剂型，且每剂包含有效成分0.01mg～200mg，优选0.5mg～100mg，一次或分次服用。不管用何种服用方法，个人的最佳剂量应根据具体治疗而定。通常情况下是从小剂量开始，逐渐增加剂量一直到找到最合适的剂量。
本发明的药物组合物可通过口服以及静脉内、肌内或皮下等途径给药。从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和固体填充或液体填充的胶囊。药物组合物的口服给药是优选的。
固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土等，而液态载体包括：无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)等，只要适合活性成分的特性和所需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。
可注射的制剂包括，但不局限于，无菌的、可注射的、含水的、含油的溶液、悬浊液、乳液等。这些制剂还可以被配置胃肠外合适的稀释剂、分散剂、润湿剂、悬浮剂等。这样可注射的制剂可以通过在截留细菌的过滤器中过滤灭菌。这些制剂还可以用杀菌剂配置，所述的杀菌剂溶解或分散在可注射的介质中或用本领域已知的其他方法。
本发明第一方面提出一种如式I所示的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐，
其中，
A表示噻吩环或吡啶环；
R1、R2、R3、R4各自独立地为氢、C1-6烷基、卤素、C1-6烷氧基、羟基、氨基、硝基或氰基；优选各自独立地为氢、C1-4烷基、卤素或C1-4烷氧基；更优选各自独立地为氢或C1-2烷基；最优选均为氢原子；
R5为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基取代的C1-6烷基、C3-6杂环基、C1-6烷基羰基或C1-6烷氧基羰基；优选为氢、C1-4烷基、C3-6环烷基或C3-6杂环基；最优选为氢或环丙基；
R6、R7、R8、R9各自独立地为氢、C1-6烷基、卤素、C1-6烷氧基、羟基、氨基、硝基或氰基；优选各自独立地为氢、C1-4烷基、卤素、C1-4烷氧基、羟基或氨基；更优选地，R6和R8为卤素，R7和R9为氢；或者R7和R9为卤素，R6和R8为氢；
W1和W2各自独立地为IIa或IIb所示的基团：
m、n各自独立地为1～7的整数，例如1、2、3、4、5、6等，优选为1～3的整数；
R21、R22各自独立地为氢、C1-6烷基、或被羧基取代的C1-6烷基，优选各自独立地为氢、C1-4烷基或被羧基、C1-C4烷氧基羰基取代的C1-4烷基，更优选各自独立地为氢、C1-2烷基或被羧基、C1-C4烷氧基羰基取代的C1-2烷基，最优选各自独立地为氢、甲基或羧甲基；
L为IIIa或IIIb所示的基团：
其中，q为1～20的整数，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19等，优选为1～10的整数；r为1～10的整数，例如2、3、4、5、6、7、8、9等，优选为1～5；
X为IV所示的基团：
R为H、C1-C4烷基、苯基取代的C1-C4烷基、羟基取代的C1-C4烷基、C1-C6烷氧基取代的C1-C4烷基，优选为甲基、苄基、羟基取代的甲基和叔丁氧基取代的甲基；s为1-3的整数，优选为2或3。
本发明中将具有TGR5激活作用的化合物与具有DPP4抑制作用的化合物通过连接链连接得到本发明式I的化合物，在式I中，W1和W2表示连接基团，L表示连接链，X表示DPP4抑制剂非拟肽类结构中填充S2口袋部分。本发明在研究中发现，W1、W2、L的具体选择对化合物的活性带来显著影响，本发明通过基团的筛选，同时保证了两部分分子的活性，获得了双重活性化合物，从而完成了本发明。
在一些实施方式中，式I所示的化合物选自如式IA、IB、IC和ID所示的化合物：
其中，A、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、L和X的定义如式I中所述。
特别地，在一些实施方式中，在上述式I和式IA、IB、IC和ID中，
R1、R2、R3、R4各自独立地为氢、卤素、羟基、氨基、硝基或氰基，优选均为氢；
R5为氢、C1-3烷基、C3-6环烷基或C3-6杂环基，优选为氢或环丙基；
R6、R7、R8、R9各自独立地为氢、卤素、C1-3烷氧基、羟基、氨基、硝基或氰基；优选为氢或卤素。
在一些实施方式中，式I化合物选自以下结构式所示的化合物：
在一些实施方式中，本发明的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐可以以结晶水合物或溶剂合物的形式存在。这些结晶水合物或溶剂合物也包括在本发明的范围内。
在获知本发明化合物的结构的基础上，本领域技术人员可以采用本领域中已知的反应设计并合成本发明的化合物，或者采用与本发明中公开的制备方法类似的方法合成本发明的化合物。因此，对于合成本发明化合物的具体制备方法不做特别限制，只要能够得到本发明的化合物即可。
本发明第二方面提供制备部分上述根据本发明的化合物的方法，其为选自以下方式1～方式4中的至少一种。
方式1、制备通式IA所示的化合物，包括以下步骤：
S1、化合物Ia通过与连接片段前体化合物NH2-L-N3进行酰胺缩合得到化合物Ib；
S2、化合物Ib在通过氢化还原反应得到化合物Ic；
S3、化合物Id通过亲核取代反应与溴乙酸苄酯反应得到Ie；
S4、化合物Ie通过氢化还原反应脱苄得到If；
S5、化合物If与化合物Ic通过酰胺缩合反应得到化合物Ig；
S6、化合物Ig脱去保护基反应得到化合物IA；
反应式如下：
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、L、A、R、S和X的定义如前所述。
下面就反应条件展开说明：
(1)Ia与不同的连接片段前体化合物NH2-L-N3进行酰胺缩合反应得到Ib。酰胺缩合反应用本领域中常规方法进行。例如，化合物Ia溶于有机溶剂中，加入缩合剂、碱性试剂；再加入连接片段前体化合物NH2-L-N3，在室温到100℃反应1-24小时。所述有机溶剂为可以对反应无不良影响的任何溶剂，优选N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)等。所述缩合剂为本领域中常用缩合剂，非限制性的包括2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、1,3-二环己基碳二亚胺(DCC)、偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)/三苯基膦、N,N'-羰基二咪唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)/1-羟基苯并三唑(HOBt)等，优选HATU。碱性条件非限制性地包括三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)、二甲氨基吡啶(DMAP)等有机碱以及碳酸钾、碳酸铯、碳酸氢钠等无机碱；优选的为三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)、二甲氨基吡啶(DMAP)。
(2)化合物Ib经过氢化反应得到化合物Ic。氢化反应可以为本领域中常规方法。例如，将化合物Ib溶于有机溶剂中，加入金属催化剂，在氢气氛围下或加入甲酸铵加热直接产生氢气，在室温到溶剂回流条件下反应0.5-24小时。溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选甲醇、乙醇、四氢呋喃等。金属催化剂非限制性地包括钯碳、铑碳等，优选钯碳。
(3)化合物Id与溴乙酸苄酯通过亲核取代反应得到Ie。亲核取代反应可以为本领域中常规方法。例如将化合物Id溶于有机溶剂中，加入碱性试剂、溴乙酸苄酯，在0-60℃下反应1-24小时。溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选四氢呋喃(THF)、DMF等。碱性试剂非限制性的包括氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾等，优选氢化钠。
(4)化合物Ie通过氢化还原脱苄得到If。氢化还原脱苄反应可以为本领域中常规方法。例如，将化合物Ie溶于有机溶剂中，加入金属催化剂，在氢气氛围下或加入甲酸铵加热直接产生氢气，在室温到溶剂回流条件下反应1-24小时。溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选甲醇、乙醇、四氢呋喃等。金属催化剂非限制性地包括钯碳、铑碳等，优选钯碳。
(5)If与Ic通过酰胺缩合得到Ig。酰胺缩合反应可以用本领域中常规方法进行。例如，化合物Ic溶于有机溶剂中，加入缩合剂、碱性试剂；再加入If，在室温到100℃反应1-24小时。有机溶剂为对反应无不良影响的任何溶剂，优选N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)等。缩合剂为本领域中常用缩合剂，非限制性的包括2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、1,3-二环己基碳二亚胺(DCC)、偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)/三苯基膦、N,N'-羰基二咪唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)/1-羟基苯并三唑(HOBt)等，优选HATU。碱性条件非限制性地包括三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)、二甲氨基吡啶(DMAP)等有机碱以及碳酸钾、碳酸铯、碳酸氢钠等无机碱；优选的为三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)、二甲氨基吡啶(DMAP)。
(6)Ig脱Boc得到IA。脱Boc保护基反应可以用本领域中常规方法进行。例如，化合物Ig溶于有机溶剂中，加入盐酸/二氧六环或盐酸/乙醇或盐酸/二氯甲烷溶液或三氟乙酸等，在室温下反应1-24小时。有机溶剂为对反应无不良影响的任何溶剂，优选DCM、二氧六环、甲醇等。
方式2、制备通式IB所示的化合物，至少包括以下步骤：
S1、化合物Ib与溴乙酸叔丁酯通过亲核取代反应得到化合物IIa；
S2、化合物IIa通过氢化还原反应得到化合物IIb；
S3、化合物IIb与化合物If通过酰胺缩合反应得到化合物IIc；
S4、化合物IIc与溴乙酸叔丁酯通过亲核取代反应得到化合物IId；
S5、化合物IId脱去保护基并水解得到IB；反应式如下：
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、L、A、X的定义如前所述。
下面就反应条件展开说明：
(1)Ib与溴乙酸叔丁酯通过亲核取代反应得到IIa。亲核取代反应可以为本领域中常规方法。例如，将化合物Ib溶于有机溶剂中，加入碱性试剂、溴乙酸叔丁酯，在0-60℃下反应1-24小时。溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选四氢呋喃(THF)、DMF等。碱性试剂非限制性的包括氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾等，优选氢化钠。
(2)IIa通过氢化还原得到IIb。氢化反应可以为本领域中常规方法。例如，将化合物IIa溶于有机溶剂中，加入金属催化剂，在氢气氛围下或加入甲酸铵加热直接产生氢气，在室温到溶剂回流条件下反应1-24小时。溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选甲醇、乙醇、四氢呋喃等。金属催化剂非限制性地包括钯碳、铑碳等，优选钯碳。
(3)IIb与If通过酰胺缩合得到IIc。酰胺缩合反应可以用本领域中常规方法进行。例如，化合物If溶于有机溶剂中，加入缩合剂、碱性试剂；再加入IIb，在室温到100℃反应1-24小时。所述有机溶剂为对反应无不良影响的任何溶剂，优选N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)等。缩合剂为本领域中常用缩合剂，非限制性的包括2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、1,3-二环己基碳二亚胺(DCC)、偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)/三苯基膦、N,N'-羰基二咪唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)/1-羟基苯并三唑(HOBt)等，优选HATU。碱性条件非限制性地包括三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)、二甲氨基吡啶(DMAP)等有机碱以及碳酸钾、碳酸铯、碳酸氢钠等无机碱；优选的为三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)、二甲氨基吡啶(DMAP)。
(4)IIc与溴乙酸叔丁酯通过亲核取代反应得到IId。亲核取代反应可以为本领域中常规方法。例如，将化合物IIc溶于有机溶剂中，加入碱性试剂、溴乙酸叔丁酯，在0-60℃下反应1-24小时。溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选四氢呋喃(THF)、DMF等。碱性试剂非限制性的包括氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾等，优选氢化钠。
(5)IId脱保护基Boc和水解得到IB。脱保护基Boc和水解反应可以用本领域中常规方法进行。例如，化合物IId溶于有机溶剂中，加入盐酸/二氧六环或盐酸/乙醇或盐酸/二氯甲烷溶液或三氟乙酸等，在室温下反应1-24小时。所述有机溶剂为对反应无不良影响的任何溶剂，优选DCM、二氧六环、甲醇等。
方式3、制备通式IC所示的化合物，包括以下步骤：
S1、化合物If在硼烷的还原下反应得到化合物IIIa；
S2、化合物IIIa通过Dess-Martin试剂经氧化反应得到化合物IIIb；
S3、化合物IIIb与化合物Ic通过还原胺化反应得到化合物IIIc；
S4、化合物IIIc脱去保护基得到化合物IC；
反应式如下：
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、L、A、X的定义如前所述。
下面就反应条件展开说明：
(1)If在硼烷的还原下得到IIIa。还原方法可以为本领域中常规方法。例如，将化合物If溶于有机溶剂中，加入硼烷/四氢呋喃溶液，在0-50℃下反应1-24小时。所述溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选四氢呋喃(THF)等。
(2)IIIa通过Dess-martin氧化得到IIIb。Dess-martin氧化方法为本领域中常规方法。例如，将化合物IIIa溶于有机溶剂中，加入Dess-Martin氧化剂，在0-50℃下反应1-24小时。溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选二氯甲烷(DCM)等。
(3)IIIb与Ic通过还原胺化得到IIIc。还原胺化方法可以为本领域中常规方法。例如，将化合物IIIb、Ic溶于有机溶剂中，加入活化好的分子筛，在室温到溶剂沸点范围内搅拌1-24小时后加入硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠，室温到50℃继续反应1-24小时。所述溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选甲醇、二氯乙烷、二氯甲烷(DCM)等。
(4)IIIc脱保护基Boc得到IIId。脱保护基Boc反应可以用本领域中常规方法进行。例如，化合物IIIc溶于有机溶剂中，加入盐酸/二氧六环或盐酸/乙醇或盐酸/二氯甲烷溶液或三氟乙酸等，在室温下反应1-24小时。有机溶剂为对反应无不良影响的任何溶剂，优选DCM、二氧六环、甲醇等。
方式4、制备通式ID所示的化合物，包括以下步骤：
S1、化合物Ia在硼烷的还原下得到化合物IVb；
S2、化合物IVb通过Dess-Martin试剂氧化得到化合物IVc；
S3、化合物IVc与连接片段前体化合物NH2-L-N3通过还原胺化反应后再与Boc酸酐反应得到化合物IVd；
S4、化合物IVd在氢气-钯碳条件下还原叠氮基团得到化合物IVe；
S5、化合物IVe与化合物If通过酰胺缩合得到化合物IVf；
S6、化合物IVf脱去保护基Boc得到化合物ID；
反应式如下：
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、L、A、X的定义如前所述。
下面就反应条件展开说明：
(1)Ia在硼烷的还原下得到IVb。还原方法可以为本领域中常规方法。例如，将化合物Ia溶于有机溶剂中，加入硼烷/四氢呋喃溶液，在0-50℃下反应1-24小时。所述溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选四氢呋喃(THF)等。
(2)IVb通过Dess-Martin试剂氧化得到IVc。氧化方法为本领域中常规方法。例如，将化合物IVb溶于有机溶剂中，加入Dess-Martin氧化剂，在0-50℃下反应1-24小时。所述溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选二氯甲烷(DCM)等。
(3)IVc与连接片段前体化合物NH2-L-N3通过还原胺化反应后再与Boc酸酐反应得到IVd。还原胺化方法可以为本领域中常规方法。例如，将化合物IVc、连接片段前体化合物NH2-L-N3溶于有机溶剂中，加入活化好的分子筛，在室温到溶剂沸点范围内搅拌1-24小时后加入硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠，室温到50℃继续反应1-24小时。所述溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选甲醇、二氯乙烷、二氯甲烷(DCM)等。最后还原胺化产物再与Boc酸酐反应得到IVd。
(4)IVd在氢气-钯碳条件下还原叠氮基团得到IVe。氢化反应可以为本领域中常规方法。例如，将化合物IVd溶于有机溶剂中，加入金属催化剂，在氢气氛围下或加入甲酸铵加热直接产生氢气，在室温到溶剂回流条件下反应1-24小时。溶剂可使用对反应无不良影响的任何溶剂，优选甲醇、乙醇、四氢呋喃等。所述金属催化剂非限制性地包括钯碳、铑碳等，优选钯碳。
(5)IVe与If通过酰胺缩合得到IVf。酰胺缩合反应可以用本领域中常规方法进行。例如，化合物If溶于有机溶剂中，加入缩合剂、碱性试剂；再加入IVe，在室温到100℃反应1-24小时。有机溶剂为对反应无不良影响的任何溶剂，优选N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)等。缩合剂为本领域中常用缩合剂，非限制性的包括2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、1,3-二环己基碳二亚胺(DCC)、偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)/三苯基膦、N,N'-羰基二咪唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)/1-羟基苯并三唑(HOBt)等，优选HATU。碱性条件非限制性地包括三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)、二甲氨基吡啶(DMAP)等有机碱以及碳酸钾、碳酸铯、碳酸氢钠等无机碱；优选的为三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)、二甲氨基吡啶(DMAP)。
(6)IVf脱保护基Boc得到ID。脱保护基Boc反应可以用本领域中常规方法进行。例如，化合物IVf溶于有机溶剂中，加入盐酸/二氧六环或盐酸/乙醇或盐酸/二氯甲烷溶液或三氟乙酸等，在室温下反应1-24小时。有机溶剂为对反应无不良影响的任何溶剂，优选DCM、二氧六环、甲醇等。
本发明第三方面提出一种药物组合物，其包含治疗有效量选自上述根据本发明的化合物、其立体异构体和药学上可接受的盐中的一种或多种。药物组合物还可以包含药学上可接受的辅料。此外，药物组合物还可以包含一种或多种治疗由TGR5和/或DPP4介导的疾病的其他药物。优选的，其他药物选自降糖药物、减肥药物、非酒精性脂肪性肝病药物、非酒精性脂肪性肝炎药物和炎症性肠病药物中的一种或多种。降糖药物包括但不限于磺酰脲类、双胍类、胰岛素增敏剂、α-糖苷酶抑制剂、DPP4抑制剂；减肥药物包括但不限于GLP-1类似物；非酒精性脂肪肝/非酒精性脂肪性肝炎药物包括但不限于GLP-1类似物、胆汁酸类似物；所述炎症性肠病药物包括但不限于GLP-2类似物。
本发明实施例第四方面提出选自上述根据本发明的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐中的一种或多种在制备作为TGR5激动剂和/或DPP4抑制剂的药物的应用。
本发明实施例第五方面提出选自上述根据本发明的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐中的一种或多种在制备用于治疗由TGR5和/或DPP4介导的疾病的药物中的应用。所述由TGR5和/或DPP4介导的疾病包括但不限于糖尿病、肥胖症、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、炎症性肠病等。
以下将以实施例进一步说明本发明。需要特别指出的是，这些实施例只用于举例说明本发明，而不以任何方式限制本发明。实例中的所有参数及其余说明，除另加说明外，都是以质量为依据的。柱层析分离所用填料若未说明均为硅胶。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1
中间体A1-1；
除七元环的制备采用消旋体原料代替手性原料，其余制备方法参照文献Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 17(2007)1903–1907，得到A1-1.MS(ESI)：m/z444.2[M+H]+,344.2[M-Boc+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.07(m,1H),6.90(m,1H),6.64–6.33(m,1H),5.75–5.42(m,1H),4.25–3.93(m,1H),3.82–3.60(m,1H),3.45–3.24(m,2H),3.24–3.10(m,1H),2.97(q,J＝7.0,5.1Hz,3H),2.83–2.66(m,1H),2.62(t,J＝5.9Hz,1H),2.05(m,1H),1.83(m,1H),1.51–1.39(3H),1.37(d,J＝4.7Hz,9H).
中间体A1-2；
冰水浴下将中间体A1-1(2.2g,5mmol)溶于四氢呋喃(THF)中，加入氢化钠(分散于石蜡中，含量60％，400mg,10mmol)，于氮气氛围下冰浴下反应0.5小时，加入溴乙酸苄酯(2.3g，10mmol)；移除冰浴，室温下反应8小时，薄层色谱确认反应完全。加饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取2次，干燥，经柱色谱纯化(洗脱液为二氯甲烷：甲醇＝20:1)得2.0g无色油状物A1-2，收率68％。MS(ESI)：m/z 592.3[M+H]+,492.3[M-Boc+H]+.
中间体A1-3；
将中间体A1-2(2g，3.38mmol)溶于甲醇、四氢呋喃(体积比1:1)中，加入200mg钯碳(钯含量：10％)，氢气置换3次后，于室温下反应3小时，薄层色谱确认反应完全。直接过滤除去钯碳，蒸干得A1-3，为白色固体(1.37g,收率81％)；无须纯化，可直接投下一步。MS(ESI)：m/z 502.3[M+H]+,402.3[M-Boc+H]+.
中间体A1-4；
中间体A1-4的制备参照文献Sci Rep.2016Jun 24；6:28676.MS(ESI)：m/z 517.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.28(s,1H),7.78(d,J＝5.4Hz,1H),7.46(s,1H),6.84(td,J＝7.7,7.1,1.5Hz,1H),6.78–6.72(m,1H),6.67(dd,J＝10.1,6.3Hz,2H),6.43(td,J＝7.6,1.4Hz,1H),6.00(s,1H),3.81(t,J＝5.2Hz,2H),3.37(t,J＝5.4Hz,2H),2.83(t,J＝7.6Hz,2H),2.52(t,J＝5.4Hz,2H),2.23(m,1H),0.70(m,2H),0.35–0.25(m,2H).
中间体A1-5；
将3-(2,5-二氯-4-((2-(4-环丙基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-1-羰基)噻吩-3-基)氧基)苯基)丙酸(A1-4，103.4mg，0.2mmol)、HATU(2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯，91.2mg，0.24mmol)溶于DMF(N,N-二甲基甲酰胺，10mL)中，加入DIPEA(二异丙基乙胺，53μL，0.3mmol)，室温反应15分钟后加入(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(35mg,0.2mmol)；室温继续反应2小时，薄层色谱确认反应完全后，向反应液中加饱和氯化钠溶液，乙酸乙酯萃取2次，水洗3次，无水硫酸镁干燥，蒸干。经柱色谱纯化后(二氯甲烷：甲醇＝50:1)，分离得95mg黄色油状物A1-5，固化后为黄色固体，收率71％。MS(ESI)：m/z673.2[M+H]+,573.2[M-Boc+H]+.
中间体A1-6；
将中间体A1-5(90mg)溶于二氯甲烷中，加入2mL盐酸/二氧六环溶液(摩尔浓度：4N)，室温反应2小时，薄层色谱确认反应完全，直接蒸干得75mg黄色固体A1-6，无须纯化，可直接投下一步。MS(ESI)：m/z 573.2[M+H]+.
中间体A1-7；
将中间体A1-3(50mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)、中间体A1-6(60mg,0,1mmol)溶于DMF(10mL)中，加入DIPEA(35μL，0.2mmol)，室温反应2小时，薄层色谱确认反应完全后，向反应液中加饱和氯化钠溶液，乙酸乙酯萃取2次，水洗3次，无水硫酸镁干燥，蒸干。经柱色谱纯化后(二氯甲烷：甲醇＝20:1)，分离得67mg黄色油状物A1-7，收率64％。MS(ESI):529[M/2+H]+,479[(M﹣Boc)/2+H]+.
化合物1
将中间体A1-7(60mg,0.057mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入1mL盐酸/二氧六环(摩尔浓度：4N)，室温下反应5小时，薄层色谱确认反应完全后，蒸干；半制备液相纯化得32mg(0.034mmol,收率59％)淡黄色油状终产物(实施例1)。MS(ESI):479[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝5.4Hz,1H),7.32-7.24(m,2H),7.18–6.98(m,2H),6.97–6.83(m,2H),6.80(d,J＝7.9Hz,1H),6.51(t,J＝7.5Hz,1H),6.46(d,J＝5.4Hz,1H),6.17(s,1H),4.52–4.26(m,1H),4.17(d,J＝16.4Hz,1H),3.96(s,2H),3.79–3.56(m,3H),3.48(t,J＝5.4Hz,2H),3.43(s,2H),3.21(d,J＝15.9Hz,1H),3.02(s,3H),2.95(d,J＝9.7Hz,2H),2.88–2.66(m,2H),2.58(t,J＝7.9Hz,2H),2.42(m,1H),2.32(m,1H),2.19-1.65(m,7H),1.56(dd,J＝13.3,6.9Hz,1H),1.44(t,J＝6.5Hz,2H),0.73(d,J＝6.3Hz,2H),0.44(d,J＝3.6Hz,2H).
实施例2
中间体A2-1:
将中间体A1-4(104mg，0.2mmol)、HATU(92mg，0.24mmol)、1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7，44mg,0.2mmol)溶于DMF(10mL)中，加入DIPEA(53μL，0.3mmol)，室温反应3小时，薄层色谱确认反应完全后，向反应液中加饱和氯化钠溶液，乙酸乙酯萃取2次，水洗3次，无水硫酸镁干燥，蒸干。经柱色谱纯化后(二氯甲烷：甲醇＝20:1)，分离得107mg黄色油状物A2-1，收率75％。MS(ESI):m/z 717[M+H]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.5Hz,1H),7.22(s,1H),6.88(ddd,J＝8.5,7.1,1.5Hz,1H),6.83(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),6.77(d,J＝7.9Hz,1H),6.52–6.45(m,1H),6.43(d,J＝5.4Hz,1H),6.14(dd,J＝11.0,5.3Hz,2H),3.93(t,J＝5.4Hz,2H),3.71–3.63(m,8H),3.64–3.59(m,2H),3.55(dd,J＝5.6,4.5Hz,2H),3.46(td,J＝5.4,1.4Hz,4H),3.38(t,J＝5.0Hz,2H),2.96(dd,J＝8.7,6.7Hz,2H),2.44(dd,J＝8.7,6.8Hz,2H),2.29(tt,J＝6.8,3.7Hz,1H),0.71(dd,J＝6.6,1.9Hz,2H),0.40(dd,J＝4.0,2.3Hz,2H).
中间体A2-2；
将中间体A2-1(100mg,0.14mmol)溶于甲醇/四氢呋喃(V/V＝1:1)溶液中，氮气置换后加入15mg钯碳(钯含量10％)，氢气置换3次后室温反应45分钟，过滤除去钯碳，直接蒸干得75mg淡黄色油状物A2-2；收率78％。MS(ESI):m/z 691.2[M+H]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)8.27(s,3H),7.42(d,J＝5.4Hz,1H),7.35(s,1H),7.28(s,1H),7.14–7.05(m,1H),6.96(dd,J＝8.1,1.4Hz,1H),6.89–6.82(m,1H),6.43(d,J＝5.4Hz,1H),6.18(s,1H),4.11(t,J＝5.9Hz,2H),3.86(t,J＝4.8Hz,2H),3.73–3.69(m,2H),3.69–3.60(m,8H),3.59(t,J＝5.8Hz,2H),3.51(t,J＝5.0Hz,2H),3.16(s,2H),3.05(t,J＝7.6Hz,2H),2.80(t,J＝7.6Hz,2H),2.63(tt,J＝7.0,3.7Hz,1H),0.95(d,J＝4.1Hz,2H),0.80–0.73(m,2H).
中间体A2-3:
将A2-2(68mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)、A1-3(50mg，0.1mmol)(44mg,0.2mmol)溶于DMF(10mL)中，加入DIPEA(35μL，0.2mmol)，室温反应3小时，薄层色谱确认反应完全后，向反应液中加饱和氯化钠溶液，乙酸乙酯萃取2次，水洗3次，无水硫酸镁干燥，蒸干。经柱色谱纯化后(二氯甲烷：甲醇＝20:1)，分离得80mg黄色油状物A2-3，收率68％。MS(ESI):m/z 688[M/2+H]+,638[(M﹣Boc)/2+H]+.
化合物2：
将中间体A2-3(70mg,0.06mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入1mL盐酸/二氧六环(摩尔浓度：4N)，室温下反应5小时，薄层色谱确认反应完全后，蒸干；半制备液相纯化得43mg(0.034mmol,收率67％)淡黄色油状物化合物2。MS(ESI):m/z 638[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.22(s,1H),7.07(q,J＝9.4,9.0Hz,1H),6.98–6.81(m,3H),6.77(d,J＝7.3Hz,2H),6.56(s,1H),6.52–6.41(m,2H),6.14(s,1H),5.19(s,1H),4.14(dd,J＝15.5,5.7Hz,1H),3.94(t,J＝5.4Hz,2H),3.86(dd,J＝15.5,9.4Hz,1H),3.82–3.64(m,0H),3.62(d,J＝4.2Hz,9H),3.55(q,J＝4.9Hz,5H),3.44(dt,J＝10.1,5.3Hz,6H),3.28(t,J＝24.6Hz,2H),2.96(t,J＝7.8Hz,2H),2.83–2.73(m,1H),2.65(t,J＝10.9Hz,1H),2.55(dd,J＝16.2,3.4Hz,1H),2.44(t,J＝7.7Hz,3H),2.29(dt,J＝6.4,2.7Hz,1H),2.22(t,J＝7.6Hz,0H),2.16–1.96(m,1H),1.52(dd,J＝12.9,7.0Hz,1H),1.38(t,J＝6.4Hz,2H),0.70(t,J＝6.0Hz,2H),0.45–0.36(m,2H).
实施例3
除用17-叠氮基3,6,9,12,15-五氧杂庚基-1-胺(CAS:516493-93-9)替代1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7)；其余制备方法同实施例2；MS(ESI):m/z582[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.23(s,1H),7.15–7.01(m,2H),6.98–6.81(m,3H),6.81–6.65(m,2H),6.49(t,J＝7.3Hz,1H),6.44(d,J＝5.4Hz,1H),6.13(s,1H),4.30–4.01(m,1H),3.94(t,J＝5.4Hz,2H),3.72–3.57(m,20H),3.54(d,J＝5.6Hz,4H),3.45(dd,J＝11.4,6.0Hz,8H),3.22(d,J＝15.1Hz,1H),3.01–2.92(m,2H),2.79(s,1H),2.74–2.62(m,1H),2.46(t,J＝7.8Hz,2H),2.33–2.25(m,1H),2.22(t,J＝7.7Hz,1H),2.15–1.95(m,1H),1.70–1.57(m,1H),1.57–1.47(m,1H),1.38(t,J＝6.3Hz,2H),0.71(q,J＝5.9Hz,2H),0.45–0.35(m,2H).
实施例4
除用20-叠氮基3,6,9,12,15,18-六氧杂二十烷-1-胺(CAS:957486-82-7)替代1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7)；其余制备方法同实施例2；MS(ESI):m/z 604[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.5Hz,1H),7.25(s,2H),7.01–6.81(m,3H),6.77(d,J＝7.9Hz,1H),6.49(t,J＝7.6Hz,1H),6.44(d,J＝5.4Hz,1H),6.13(s,1H),3.94(t,J＝5.4Hz,2H),3.81–3.52(m,28H),3.52–3.38(m,6H),3.37–3.04(m,4H),2.96(t,J＝7.9Hz,2H),2.50(t,J＝8.0Hz,2H),2.36–2.25(m,1H),2.22(t,J＝7.6Hz,1H),2.13–1.94(m,2H),1.69–1.56(m,1H),1.52–1.37(m,3H),0.72(d,J＝6.2Hz,2H),0.40(d,J＝3.8Hz,2H).
实施例5
除用氨基-七聚乙二醇-叠氮(CAS:1333154-77-0)替代1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7)；其余制备方法同实施例2；MS(ESI):m/z 626[M/2+H]+.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.3Hz,1H),7.34–7.28(m,1H),7.22(s,1H),6.92–6.80(m,3H),6.77(d,J＝7.9Hz,1H),6.52–6.45(m,1H),6.43(d,J＝5.4Hz,1H),6.32(t,J＝5.5Hz,1H),6.13(s,1H),4.06(s,1H),3.93(t,J＝5.4Hz,2H),3.88–3.72(m,1H),3.68–3.56(m,26H),3.54(t,J＝5.1Hz,4H),3.45(q,J＝5.5Hz,4H),3.38(s,2H),3.15(d,J＝78.6Hz,3H),2.96(d,J＝8.8Hz,2H),2.72(d,J＝48.5Hz,1H),2.44(d,J＝8.7Hz,2H),2.29(tt,J＝6.8,3.7Hz,1H),2.08–1.87(m,2H),1.67–1.58(m,1H),1.43–1.29(m,3H),0.75–0.66(m,2H)。
实施例6
除用O-(2-氨基乙基)-O′-(2-叠氮乙基)七聚乙二醇(CAS:857891-82-8)替代1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7)；其余制备方法同实施例2；MS(ESI):m/z 648[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(d,J＝45.3Hz,2H),7.37(d,J＝5.2Hz,1H),6.99–6.81(m,3H),6.78(d,J＝7.8Hz,1H),6.49(t,J＝7.4Hz,1H),6.44(d,J＝5.2Hz,1H),6.12(s,1H),3.94(s,4H),3.65(s,36H),3.46(t,J＝5.5Hz,6H),3.33(s,4H),2.97(s,2H),2.71(s,1H),2.50(s,2H),2.35–2.27(m,1H),2.23(t,J＝7.6Hz,1H),2.10–1.95(m,1H),1.69–1.56(m,1H),1.54–1.38(m,3H),0.72(d,J＝6.3Hz,2H),0.47–0.37(m,2H).
实施例7
中间体B1-1：
中间体B1-1的合成中除7元环的合成采用消旋体原料代替手性原料，其余制备方法参见文献Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 17(2007)1903–1907.MS(ESI):m/z420.2[M+H]+.
中间体B1-2：
冰水浴下将中间体B1-1(2.6g,5mmol)溶于四氢呋喃中，加入氢化钠(分散于石蜡中，含量60％，400mg,10mmol)，于氮气氛围下冰浴下反应0.5小时，加入溴乙酸苄酯(2.3g，10mmol)；移除冰浴，室温下反应8小时，薄层色谱确认反应完全。加饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取2次，干燥，经柱色谱纯化得2.3g无色油状物B1-2，收率70％。MS(ESI):m/z668[M+H]+,568[M–Boc+H]+.
中间体B1-3：
将中间体B1-2(2.2g，3.3mmol)溶于甲醇、四氢呋喃(体积比1:1)中，加入220mg钯碳(钯含量：10％)，氢气置换3次后，于室温下反应3小时，薄层色谱确认反应完全。直接过滤除去钯碳，蒸干得白色固体B1-3(1.5g,收率80％)；无须纯化，可直接投下一步。MS(ESI):m/z 578,[M+H]+,478[M–Boc+H]+.
中间体B1-4：
将中间体B1-3(60mg，0.1mmol)、HATU(46mg，0.12mmol)、中间体A2-2(70mg，0.1mmol)溶于DMF(10mL)中，加入DIPEA(35μL，0.2mmol)，室温反应3小时，薄层色谱确认反应完全后，向反应液中加饱和氯化钠溶液，乙酸乙酯萃取2次，水洗3次，无水硫酸镁干燥，蒸干。经柱色谱纯化后(二氯甲烷：甲醇＝20:1)，分离得94mg黄色油状物B1-4，收率75％。MS(ESI):m/z 626[M/2+H]+,601[M/2-Boc+H]+.
化合物7
将中间体B1-4(75mg,0.06mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入1mL盐酸/二氧六环(摩尔浓度：4N)，室温下反应5小时，薄层色谱确认反应完全后，蒸干；半制备液相纯化得40mg(0.035mmol,收率58％)淡黄色油状化合物7。MS(ESI):m/z 576[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(dd,J＝5.5,2.2Hz,1H),7.26–7.20(m,5H),7.20–7.09(m,2H),7.09–6.97(m,1H),6.97–6.80(m,3H),6.80–6.63(m,2H),6.48(t,J＝7.6Hz,1H),6.42(dd,J＝5.6,2.2Hz,1H),6.12(s,1H),4.17–4.04(m,1H),3.93(t,J＝5.4Hz,2H),3.86(dd,J＝15.5,8.1Hz,1H),3.63(d,J＝2.4Hz,8H),3.55(t,J＝4.9Hz,4H),3.44(dt,J＝11.5,5.1Hz,8H),3.36–3.15(m,3H),3.01–2.91(m,2H),2.72(dd,J＝13.7,5.6Hz,1H),2.65–2.55(m,1H),2.54–2.39(m,3H),2.33–2.25(m,1H),2.25–2.16(m,1H),2.08–1.93(m,2H),1.78(s,2H),1.31(s,2H),0.75–0.65(m,2H),0.44–0.36(m,2H).
实施例8
除用中间体B1-3替代中间体A1-3；其余制备方法同实施例3；MS(ESI):m/z 620[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.24(q,J＝6.6Hz,5H),7.16(td,J＝7.5,6.5,1.7Hz,1H),7.10–7.00(m,1H),7.00–6.80(m,4H),6.77(d,J＝7.9Hz,1H),6.61(s,1H),6.48(t,J＝7.3Hz,1H),6.42(d,J＝5.4Hz,1H),6.12(s,1H),4.26–4.04(m,1H),3.94(t,J＝5.4Hz,2H),3.87(dd,J＝15.7,7.9Hz,1H),3.72–3.57(m,16H),3.54(t,J＝4.9Hz,4H),3.46(d,J＝9.9Hz,10H),3.37–3.28(m,1H),3.22(d,J＝14.3Hz,2H),2.96(t,J＝7.8Hz,2H),2.73(dd,J＝13.8,5.7Hz,1H),2.61(dd,J＝13.7,7.8Hz,1H),2.55–2.40(m,3H),2.34–2.19(m,2H),2.04–1.94(m,2H),1.37–1.23(m,1H),0.71(dd,J＝6.6,1.8Hz,2H),0.46–0.32(m,2H).
实施例9
除用中间体B1-3替代中间体A1-3；其余制备方法同实施例4；MS(ESI):m/z 642[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.27–7.21(m,4H),7.19–7.11(m,1H),7.10–6.99(m,1H),6.98–6.72(m,5H),6.52–6.46(m,2H),6.43(d,J＝5.4Hz,1H),6.12(s,1H),4.25–4.01(m,1H),3.94(t,J＝5.4Hz,2H),3.86(dd,J＝15.6,5.9Hz,1H),3.72–3.58(m,20H),3.54(t,J＝5.1Hz,4H),3.45(dt,J＝9.9,5.2Hz,7H),3.33(dd,J＝13.8,6.7Hz,1H),3.30–3.15(m,2H),2.98(q,J＝9.7,7.9Hz,3H),2.72(dd,J＝13.7,5.6Hz,1H),2.60(dd,J＝13.7,7.8Hz,1H),2.54–2.40(m,3H),2.29(dq,J＝6.6,3.3Hz,1H),2.27–2.17(m,1H),1.79(s,1H),1.37–1.23(m,2H),0.71(dd,J＝6.6,1.9Hz,2H),0.40(p,J＝4.6Hz,2H).
实施例10
除用中间体B1-3替代中间体A1-3；其余制备方法同实施例5；MS(ESI):m/z 664[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.27–7.19(m,5H),7.19–7.13(m,1H),7.10–6.98(m,1H),6.98–6.80(m,3H),6.77(d,J＝7.7Hz,2H),6.52–6.46(m,1H),6.44(d,J＝5.4Hz,1H),6.11(s,1H),4.22–4.02(m,1H),3.93(q,J＝9.4,7.4Hz,2H),3.87–3.70(m,1H),3.63(q,J＝4.9,3.8Hz,24H),3.55(t,J＝5.1Hz,4H),3.45(tt,J＝7.7,4.1Hz,7H),3.33(dd,J＝13.9,6.6Hz,1H),3.23(d,J＝14.3Hz,2H),3.15–3.01(m,1H),2.96(t,J＝7.8Hz,2H),2.74(dd,J＝13.9,5.8Hz,1H),2.63(dd,J＝13.8,7.6Hz,1H),2.56–2.40(m,3H),2.28(td,J＝6.7,3.3Hz,2H),1.98(s,2H),1.85–1.56(m,1H),1.26(d,J＝5.0Hz,2H),0.71(dd,J＝6.6,1.9Hz,2H),0.44–0.34(m,2H).
实施例11
除用中间体B1-3替代中间体A1-3；其余制备方法同实施例6；MS(ESI):m/z 686[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝5.4Hz,1H),7.28–7.20(m,4H),7.17(t,J＝6.7Hz,1H),7.11–7.00(m,1H),6.98–6.81(m,3H),6.81–6.69(m,2H),6.53–6.47(m,1H),6.45(d,J＝5.4Hz,1H),6.39(d,J＝5.4Hz,1H),6.12(s,1H),4.24–4.02(m,1H),3.95(t,J＝5.4Hz,2H),3.87(dd,J＝15.6,4.8Hz,1H),3.71–3.60(m,28H),3.55(d,J＝5.2Hz,4H),3.46(qd,J＝8.0,6.7,3.1Hz,7H),3.35(dd,J＝13.8,6.7Hz,1H),3.31–3.17(m,2H),3.14–3.00(m,1H),2.97(dd,J＝8.9,6.8Hz,2H),2.74(dd,J＝13.7,5.7Hz,1H),2.61(dd,J＝13.6,7.8Hz,1H),2.45(dd,J＝8.8,6.7Hz,3H),2.30(tt,J＝7.7,4.2Hz,1H),2.27–2.19(m,1H),2.00(s,2H),1.72(d,J＝62.9Hz,1H),1.27(d,J＝5.1Hz,1H),0.72(dd,J＝6.6,1.9Hz,2H),0.46–0.36(m,2H).
实施例12
中间体B3-1：N-(26-叠氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧六己基)-3-(2,5-二氯-4-((2-(4-环丙基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-1-羰基)噻吩-3-基)氧基)苯基丙酰胺
除用O-(2-氨基乙基)-O′-(2-叠氮乙基)七聚乙二醇(CAS:857891-82-8)替代1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7)；其余制备过程同A2-1。MS(ESI):m/z937.3[M+H]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.22(s,1H),6.88(ddd,J＝8.5,7.1,1.5Hz,1H),6.83(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),6.77(d,J＝8.1Hz,1H),6.49(ddd,J＝8.3,7.2,1.5Hz,1H),6.44(d,J＝5.4Hz,1H),6.27(t,J＝5.6Hz,1H),6.13(s,1H),3.94(t,J＝5.4Hz,2H),3.70–3.58(m,24H),3.55(dd,J＝5.6,4.5Hz,2H),3.46(td,J＝5.4,1.7Hz,4H),3.39(t,J＝5.1Hz,2H),2.96(d,J＝4.0Hz,4H),2.88(s,2H),2.80(s,2H),2.44(dd,J＝8.7,6.8Hz,2H),2.29(dt,J＝6.6,3.1Hz,1H),0.75–0.68(m,2H),0.41(dd,J＝4.0,2.3Hz,2H).
中间体B3-2：叔丁基29-叠氮基-3-(3-(2,5-二氯-4-((2-(4-环丙基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-1-羰基)噻吩-3-基)氧)苯基)丙酰基)-6,9,12,15,18,21,24,27-八氧杂-3-氮杂萘甲酸
冰水浴下将中间体B3-1(280mg,0.3mmol)溶于四氢呋喃中，加入氢化钠(分散于石蜡中，含量60％，24mg,0.6mmol)，于氮气氛围下冰浴下反应0.5小时，加入溴乙酸叔丁酯(117mg，0.6mmol)；移除冰浴，室温下反应8小时，薄层色谱确认反应完全。加饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取2次，干燥，经柱色谱纯化得205mg黄色油状物B3-2，收率65％。MS(ESI):m/z 526.5[M/2+H]+.
中间体B3-3：叔丁基29-氨基-3-(3-(2,5-二氯-4-((2-(4-环丙基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-1-羰基)噻吩-3-基)氧)苯基)丙酰基)-6,9,12,15,18,21,24,27-八氧杂-3-氮杂萘甲酸
除用中间体B3-2代替中间体A2-1，其余制备过程同A2-2；MS(ESI):m/z 513.3[M/2+H]+.
中间体B3-4：二叔丁基3-(3-(2,5-二氯-4-((2-(4-环丙基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-1-羰基)噻吩-3-基)氧基)苯基)丙酰基)-6,9,12,15,18,21,24,27-八恶唑-3,30-二氮杂癸酸
将中间体B3-3(300mg,0.29mmol)、碳酸氢钾(30mg,0.3mmol)和溴乙酸叔丁酯(48μL,0.3mmol)溶于乙腈中，室温下反应2-3小时，薄层色谱检测目标产物较多时终止反应。将反应液过滤除去固体，滤液浓缩后通过制备TLC纯化得125mg中间体B3-4，收率约为38％。MS(ESI):m/z 526.5[M/2+H]+.
中间体B3-5：二叔丁基3-(2-(3-苄基-4-((R)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-2-氧-1,4-二氮杂-1-基)乙酰基)-30-(3-(2,5-二氯-4-((2-(4-环丙基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-1-羰基)噻吩-3-基)氧基)苯基)丙酰基)-6,9,12,15,18,21,24,27-八氧杂-3,30-二氮杂癸酸
除用中间体B3-4代替中间体A2-2；其余制备过程同中间体A2-3。
化合物12
除用中间体B3-5代替中间体A2-3；其余制备过程同终产物实施例2。MS(ESI):m/z744[M/2+H]+.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.76(dd,J＝8.0,5.4Hz,1H),7.48(dd,J＝13.0,2.0Hz,3H),7.31–7.14(m,4H),7.12(dd,J＝7.1,2.1Hz,1H),6.90–6.81(m,1H),6.77(t,J＝8.5Hz,1H),6.72–6.61(m,2H),6.43(q,J＝7.5Hz,1H),6.03(d,J＝18.2Hz,1H),4.33(d,J＝24.1Hz,1H),4.18–4.00(m,1H),4.01–3.73(m,8H),3.67–3.39(m,34H),3.36(d,J＝5.1Hz,4H),3.33–2.98(m,5H),2.80(q,J＝8.3Hz,4H),2.70–2.62(m,1H),2.47(d,J＝7.7Hz,2H),2.24(dh,J＝10.1,3.5Hz,1H),1.78(d,J＝21.0Hz,2H),0.69(d,J＝6.5Hz,2H),0.30(dq,J＝10.8,4.8,3.8Hz,2H).
实施例13
中间体C1-1：
C1-1合成参照文献Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 21(2011)3809–3812。MS(ESI):m/z 502.2[M+H]+,402.2[M-Boc+H]+.
中间体C1-2：
除用中间体C1-1代替中间体A1-1，其余制备过程同A1-2；MS(ESI):m/z 650.2[M+H]+,550.2[M-Boc+H]+.
中间体C1-3：
除用中间体C1-2代替中间体A1-2，其余制备过程同A1-3；MS(ESI):m/z 560.3[M+H]+,460.3[M-Boc+H]+.
中间体C1-4：
除用中间体C1-3代替中间体A1-3，其余制备过程同A2-3；MS(ESI):m/z 617[M/2+H]+,567[(M–Boc)/2+H]+.
化合物13
除用中间体C2-1代替中间体A2-3，其余制备过程同实施例2；MS(ESI):m/z 567[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.22(s,1H),7.14–7.04(m,1H),6.98–6.81(m,3H),6.81–6.70(m,1H),6.67–6.60(m,1H),6.53–6.46(m,1H),6.44(d,J＝5.4Hz,1H),6.40–6.31(m,1H),6.15(d,J＝7.1Hz,1H),4.95(s,1H),4.71(dd,J＝13.0,4.1Hz,1H),4.46(d,J＝6.8Hz,1H),4.21(s,1H),4.01(dd,J＝9.5,2.7Hz,1H),3.94(t,J＝5.4Hz,2H),3.87–3.78(m,1H),3.78–3.70(m,2H),3.69–3.59(m,10H),3.55(q,J＝5.2Hz,5H),3.45(t,J＝5.4Hz,5H),3.40–3.25(m,1H),2.96(t,J＝8.8Hz,2H),2.83–2.61(m,2H),2.54–2.41(m,3H),2.34–2.25(m,1H),1.15(s,4H),1.11(d,J＝2.2Hz,5H),0.70(t,J＝6.1Hz,2H),0.46–0.37(m,2H).
实施例14
将中间体C1-4(90mg)溶于二氯甲烷/甲醇(V/V＝5:1,3mL)中，加入3mL盐酸/二氧六环(摩尔浓度：4N)，室温反应10小时。直接蒸干，半制备液相纯化得40mg黄色油状化合物14。MS(ESI):m/z 540[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(s,1H),7.38–7.33(m,1H),7.23(s,1H),7.11–7.01(m,1H),6.98–6.82(m,3H),6.78(d,J＝7.9Hz,1H),6.65(s,1H),6.53–6.44(m,2H),6.18(s,1H),4.90(d,J＝10.9Hz,1H),4.63(d,J＝15.8Hz,1H),4.28–4.19(m,1H),4.05–3.89(m,4H),3.78–3.68(m,1H),3.68–3.30(m,23H),2.96(t,J＝7.7Hz,2H),2.79(dd,J＝13.7,6.2Hz,1H),2.72–2.62(m,1H),2.45(td,J＝13.8,6.6Hz,3H),2.30(dd,J＝7.1,3.7Hz,1H),0.71(t,J＝6.1Hz,2H),0.42(d,J＝3.7Hz,2H).
实施例15
除用17-叠氮基3,6,9,12,15-五氧杂庚基-1-胺(CAS:516493-93-9)替代1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7)；其余制备方法同实施例13；MS(ESI):m/z 611[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.23(s,1H),7.15–7.03(m,1H),6.98–6.81(m,4H),6.78(d,J＝7.9Hz,1H),6.59–6.45(m,2H),6.44(d,J＝5.4Hz,1H),6.15(d,J＝5.7Hz,1H),4.95(d,J＝2.8Hz,1H),4.75–4.65(m,1H),4.52–4.43(m,1H),4.25(dd,J＝15.7,3.5Hz,1H),4.01(h,J＝5.9Hz,1H),3.93(q,J＝7.9,6.5Hz,2H),3.87–3.70(m,2H),3.69–3.38(m,29H),3.36–3.24(m,1H),2.97(dd,J＝8.9,6.7Hz,2H),2.79(dd,J＝14.0,5.9Hz,1H),2.69(td,J＝14.1,13.0,6.6Hz,1H),2.54–2.41(m,3H),2.29(dq,J＝6.8,3.4Hz,1H),1.13(d,J＝13.5Hz,9H),0.71(dt,J＝6.6,3.3Hz,2H),0.46–0.36(m,2H).
实施例16
除用17-叠氮基3,6,9,12,15-五氧杂庚基-1-胺(CAS:516493-93-9)替代1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7)；其余制备方法同实施例14。MS(ESI):m/z 583[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.51(d,J＝12.5Hz,1H),7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.23(s,1H),7.10(d,J＝13.9Hz,1H),6.98–6.81(m,3H),6.78(d,J＝7.9Hz,1H),6.57–6.46(m,1H),6.44(d,J＝5.4Hz,1H),6.16(s,1H),4.93(s,1H),4.85(d,J＝16.4Hz,1H),4.69–4.59(m,1H),4.46(s,0H),4.26–4.16(m,1H),4.06–3.88(m,4H),3.79–3.69(m,1H),3.68–3.36(m,29H),2.96(dd,J＝8.8,6.8Hz,2H),2.79(dt,J＝13.9,7.0Hz,1H),2.69(dd,J＝13.7,7.6Hz,1H),2.57–2.34(m,4H),2.29(td,J＝6.6,3.4Hz,1H),0.75–0.67(m,2H),0.45–0.34(m,2H).
实施例17
除用O-(2-氨基乙基)-O′-(2-叠氮乙基)七聚乙二醇(CAS:857891-82-8)替代1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7)；其余制备方法同实施例13。MS(ESI):m/z 677[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.23(s,1H),7.09(td,J＝9.5,8.9,7.0Hz,1H),6.99–6.80(m,3H),6.77(d,J＝7.8Hz,2H),6.53–6.46(m,1H),6.44(d,J＝5.4Hz,1H),6.38(d,J＝6.0Hz,1H),6.13(s,1H),4.96(d,J＝2.7Hz,1H),4.70(dd,J＝13.1,4.3Hz,1H),4.26(t,J＝15.7Hz,1H),4.02(dp,J＝11.0,3.7Hz,1H),3.94(t,J＝5.4Hz,2H),3.87–3.70(m,2H),3.69–3.38(m,41H),3.30(qd,J＝8.5,6.7,4.5Hz,1H),2.96(dd,J＝8.8,6.7Hz,2H),2.80(dd,J＝13.8,5.6Hz,1H),2.69(td,J＝13.6,12.1,6.7Hz,1H),2.57–2.34(m,4H),2.29(tt,J＝6.8,3.7Hz,1H),1.19–1.05(m,9H),0.70(dt,J＝6.6,3.3Hz,2H),0.45–0.34(m,2H).
实施例18
除用O-(2-氨基乙基)-O′-(2-叠氮乙基)七聚乙二醇(CAS:857891-82-8)替代1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7)；其余制备方法同实施例14。MS(ESI):m/z 649[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55(d,J＝6.0Hz,1H),7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.23(s,1H),7.10(tt,J＝9.9,5.2Hz,1H),6.98–6.81(m,3H),6.77(d,J＝7.9Hz,1H),6.61(d,J＝5.3Hz,1H),6.53–6.46(m,1H),6.44(d,J＝5.4Hz,1H),6.13(s,1H),4.95–4.82(m,1H),4.62(dd,J＝14.7,11.2Hz,1H),4.21(dt,J＝11.0,3.8Hz,1H),4.07–3.89(m,4H),3.78–3.36(m,43H),2.96(dd,J＝8.9,6.7Hz,2H),2.80(td,J＝12.5,11.6,6.1Hz,1H),2.70(dd,J＝13.7,7.5Hz,1H),2.56(dd,J＝16.2,3.5Hz,1H),2.50–2.35(m,3H),2.29(tt,J＝6.8,3.7Hz,1H),0.75–0.68(m,2H),0.44–0.37(m,2H).
实施例19
中间体D1-1：
中间体D1-1的合成参考文献J.Med.Chem.2015,58,3315-3328。
化合物19
除用中间体D1-1代替中间体A1-3，其余制备方法同实施例13；MS(ESI):m/z 664[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.80(s,1H),8.41(d,J＝5.8Hz,1H),7.34(s,1H),7.16–6.99(m,2H),7.00–6.86(m,1H),6.80(s,1H),6.71(s,1H),6.49(d,J＝8.7Hz,2H),6.38(d,J＝7.3Hz,1H),6.30(d,J＝5.7Hz,1H),5.77(s,1H),4.95(d,J＝2.6Hz,1H),4.71(dd,J＝12.9,4.2Hz,0H),4.47(dd,J＝7.5,2.9Hz,0H),4.22(dd,J＝15.6,10.0Hz,1H),4.09–3.95(m,1H),3.97–3.69(m,3H),3.69–3.27(m,22H),3.02(t,J＝7.7Hz,2H),2.74(dtd,J＝32.1,13.6,6.5Hz,2H),2.59–2.34(m,4H),2.25(d,J＝14.0Hz,1H),1.13(d,J＝15.6Hz,9H),0.66(s,3H),-0.22(s,1H).
实施例20
除用中间体D1-1代替中间体A1-4，其余制备方法同实施例14；MS(ESI):m/z 536[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(s,1H),8.41(d,J＝5.7Hz,1H),7.44(s,1H),7.34(s,1H),7.06(dt,J＝17.7,8.5Hz,2H),6.98–6.86(m,1H),6.71(s,1H),6.49(d,J＝7.7Hz,1H),6.45–6.28(m,2H),5.79(s,1H),4.96–4.78(m,1H),4.65(t,J＝13.6Hz,1H),4.26(d,J＝9.8Hz,1H),3.99(t,J＝9.6Hz,2H),3.74(d,J＝13.2Hz,0H),3.70–3.29(m,26H),3.02(t,J＝7.6Hz,2H),2.79(dd,J＝13.9,6.5Hz,1H),2.67(dd,J＝13.7,7.7Hz,1H),2.51(d,J＝8.1Hz,3H),2.32–2.24(m,1H),0.76–0.53(m,3H),-0.11–-0.31(m,1H).
实施例21
2-((R)-4-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(叔丁氧基甲基)-2-氧哌嗪-1-基)-N-(15-(2,5-二氯-4-((2-(4-环丙基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-1-羰基)噻吩-3-基)氧基)苯基)-3,6,9-三氧杂-12-氮杂十五烷基)乙酰胺
中间体E1-1：
冰水浴下，将A1-4(517mg,1mmol)加入到四氢呋喃溶液中，加入4mL硼烷-四氢呋喃溶液(摩尔浓度：1N)，半小时后移除冰水浴，室温继续反应4小时，薄层色谱确认反应完全，缓慢滴加甲醇淬灭，蒸干，柱色谱分离得420mg淡黄色固体E1-1，收率84％。MS(ESI):m/z503[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(d,J＝5.4Hz,1H),7.18(s,1H),6.88(ddd,J＝8.6,7.1,1.5Hz,1H),6.81(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),6.76(d,J＝7.9Hz,1H),6.49(ddd,J＝8.4,7.2,1.5Hz,1H),6.43(d,J＝5.4Hz,1H),6.08(s,1H),3.94(t,J＝5.4Hz,2H),3.69(t,J＝6.3Hz,2H),3.47(t,J＝5.4Hz,2H),2.79–2.66(m,2H),2.28(tt,J＝6.8,3.7Hz,1H),1.91–1.78(m,2H),0.69(dt,J＝6.6,3.3Hz,2H),0.44–0.34(m,2H).
中间体E1-2：
将中间体E1-1(400mg，0.8mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，加入Dess-Martin氧化剂(424mg，1mmol)，室温反应2小时，蒸干，柱色谱分离得330mg淡黄色固体E1-2，收率83％。MS(ESI):m/z 501[M+H]+.
中间体E1-3：
将中间体E1-2(300mg,0.6mmol)、1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(130mg,0.6mmol)溶于无水甲醇中，室温搅拌10小时后加入硼氢化钠(38mg,1mmol)，继续室温反应2小时，薄层色谱确认反应完全。加饱和氯化铵水溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取两次，水洗一次，无水硫酸镁干燥，蒸干后将粗品复溶于四氢呋喃/水溶液(V/V＝1:1)中，加入碳酸氢钠(84mg，1mmol)、Boc酸酐(220mg,1mmol)，室温下反应10小时，薄层色谱确认反应完全。乙酸乙酯萃取两次，无水硫酸镁干燥，蒸干，柱色谱分离得216mg淡黄色油状物E1-3，收率45％。MS(ESI):m/z 803[M+H]+,703[M-Boc+H]+.
中间体E1-4：
除用E1-3替代A2-1，其余制备过程同制备A2-2；MS(ESI):m/z 777[M+H]+.
中间体E1-5：
除用中间体E1-4替代中间体A2-2，中间体C1-3替代中间体A1-3，其余制备过程同制备A2-3；MS(ESI):m/z 560[(M-2Boc)/2+H]+.
化合物21
除用中间体E1-5替代中间体A1-3，其余制备过程同制备化合物1。MS(ESI):m/z560[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.18(d,J＝2.7Hz,1H),7.10(dt,J＝10.4,7.7Hz,1H),6.98–6.80(m,3H),6.77(d,J＝7.9Hz,1H),6.53–6.46(m,1H),6.43(dd,J＝5.4,1.1Hz,1H),6.11(s,1H),5.34(td,J＝5.6,3.3Hz,1H),4.95(d,J＝2.8Hz,1H),4.70(dd,J＝13.2,4.3Hz,1H),4.18(dd,J＝21.2,15.7Hz,1H),4.07–3.97(m,1H),3.93(q,J＝7.1,6.2Hz,2H),3.88–3.70(m,2H),3.64(d,J＝10.6Hz,10H),3.55(dt,J＝8.2,5.1Hz,2H),3.45(dt,J＝7.5,4.6Hz,4H),3.30(td,J＝8.1,4.2Hz,1H),2.89(q,J＝5.2Hz,2H),2.84–2.62(m,6H),2.29(tt,J＝6.8,3.7Hz,1H),1.85(p,J＝7.6Hz,2H),1.63(q,J＝7.3Hz,2H),1.13(d,J＝14.0Hz,9H),0.70(td,J＝6.7,4.8Hz,2H),0.47–0.35(m,2H).
实施例22
除用中间体E1-5替代中间体C1-4，其余制备过程同制备实施例14。MS(ESI):m/z534[M/2+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(s,1H),7.36(d,J＝5.4Hz,1H),7.19(s,1H),7.09(ddd,J＝10.4,8.6,6.7Hz,1H),6.98–6.81(m,3H),6.78(d,J＝7.9Hz,1H),6.53–6.46(m,1H),6.45(d,J＝5.4Hz,1H),6.13(s,1H),4.92(s,1H),4.26–4.13(m,1H),4.09–3.88(m,4H),3.72–3.37(m,22H),2.90(q,J＝5.4,5.0Hz,2H),2.77(dq,J＝14.0,7.3,6.8Hz,3H),2.68(q,J＝7.6Hz,3H),2.59–2.36(m,2H),2.34–2.26(m,1H),0.76–0.66(m,2H),0.45–0.35(m,2H).
实施例23
中间体F1-1
除用中间体C1-3代替A1-4，其余制备过程同制备E1-1；MS(ESI):m/z 546[M+H]+,446[M–Boc+H]+.
中间体F1-2
除用F1-1代替E1-1，其余制备过程同制备E1-2；MS(ESI):m/z 544[M+H]+,444[M–Boc+H]+.
中间体F1-3：
将中间体F1-2(110mg,0.2mmol)、中间体A2-2(140mg,0.2mmol)溶于无水甲醇中，室温搅拌10小时后加入硼氢化钠(16mg,0.4mmol)，继续室温反应2小时，薄层色谱确认反应完全。加饱和氯化铵水溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取两次，水洗一次，无水硫酸镁干燥，蒸干，经柱色谱分离得97mg淡黄色油状物F1-3，收率40％。MS(ESI):m/z610[M/2+H]+,560[(M–Boc)/2+H]+.
化合物23
除用F1-3替代A2-3，其余制备过程同制备A2-4；MS(ESI):m/z 560[M/2+H]+.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),8.07(t,J＝5.7Hz,3H),8.03(t,J＝5.7Hz,1H),7.79(d,J＝5.4Hz,1H),7.63–7.46(m,2H),7.41(s,1H),6.85(ddd,J＝8.6,7.2,1.6Hz,1H),6.75(d,J＝8.2Hz,1H),6.66(t,J＝6.3Hz,2H),6.44(td,J＝7.6,1.4Hz,1H),4.62(dt,J＝19.1,3.0Hz,1H),4.43(td,J＝11.5,9.6,6.3Hz,1H),3.91–3.63(m,7H),3.63–3.42(m,11H),3.42–3.33(m,5H),3.25–3.04(m,7H),2.96(ddq,J＝20.8,14.4,6.2Hz,2H),2.81(dd,J＝8.7,6.7Hz,2H),2.74(dd,J＝9.2,5.8Hz,2H),2.36(dd,J＝8.7,6.8Hz,2H),2.25(tt,J＝6.8,3.7Hz,1H),1.10(s,3H),1.07(s,2H),1.04(s,2H),0.96(s,2H),0.70(dd,J＝6.6,2.0Hz,2H),0.35–0.25(m,2H).
实施例24
除用O-(2-氨基乙基)-O′-(2-叠氮乙基)七聚乙二醇(CAS:857891-82-8)替代1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7)，其余制备过程同制备实施例23；MS(ESI):m/z 670[M/2+H]+.1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ7.64(d,J＝5.3Hz,1H),7.42(s,1H),7.35(s,1H),7.28–7.19(m,1H),6.95–6.89(m,1H),6.87(d,J＝8.1Hz,1H),6.75–6.70(m,1H),6.50(t,J＝7.0Hz,2H),6.05(s,1H),4.86(d,J＝23.7Hz,1H),4.64(d,J＝13.1Hz,0H),4.54(s,0H),3.94(dt,J＝26.1,6.3Hz,6H),3.84–3.73(m,4H),3.72–3.57(m,30H),3.51(dt,J＝11.1,5.3Hz,4H),3.41–3.33(m,4H),3.09(s,2H),2.96(t,J＝7.5Hz,2H),2.92–2.80(m,1H),2.52(t,J＝7.5Hz,2H),2.33(dp,J＝6.7,3.5Hz,1H),1.18(s,4H),1.11(s,5H),0.79–0.66(m,2H),0.43–0.31(m,2H).
实施例25
除用O-(2-氨基乙基)-O′-(2-叠氮乙基)七聚乙二醇(CAS:857891-82-8)替代1-氨基-11-叠氮-3,6,9-三氧杂十一烷(CAS：134179-38-7)，其余制备过程同实施例22。MS(ESI):m/z 642[M/2+H]+.1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ7.62(d,J＝5.4Hz,1H),7.33(s,1H),7.31–7.24(m,1H),7.15(dtd,J＝14.7,8.2,7.5,3.9Hz,1H),6.91(ddd,J＝8.6,7.2,1.5Hz,1H),6.84(dd,J＝8.3,1.4Hz,1H),6.70(d,J＝7.8Hz,1H),6.49(d,J＝5.4Hz,1H),6.46(td,J＝7.6,1.4Hz,1H),6.02(s,1H),5.34(ddd,J＝5.6,4.4,1.1Hz,1H),4.76(dt,J＝6.4,3.4Hz,1H),4.61(d,J＝14.4Hz,1H),4.43(dd,J＝7.4,3.5Hz,1H),4.08(ddd,J＝11.3,3.6,1.6Hz,1H),4.04–3.79(m,4H),3.71–3.53(m,34H),3.53–3.43(m,6H),2.94(dd,J＝8.3,6.9Hz,2H),2.91–2.76(m,4H),2.66–2.55(m,1H),2.48(dd,J＝8.3,6.9Hz,2H),2.29(tt,J＝6.8,3.7Hz,1H),2.08–1.96(m,2H),1.60(t,J＝7.3Hz,1H),0.74–0.68(m,2H),0.38–0.31(m,2H).
实验例1、TGR5激动活性及DPP4抑制活性体外测试
1.1TGR5激动活性测试方法
hTGR5/CRE/HEK293或者mTGR5/CRE/HEK293稳定表达的细胞系是通过HEK293细胞转染带有人或小鼠TGR5基因的表达质粒(分别是hTGR5-pcDNA3.1和mTGR5-pcDNA3.1)，以及CRE驱动的荧光报告基因质粒(pGL4.29,Promega,Madison,WI,USA)获得的稳转细胞株。这些细胞被用于测试化合物的体外TGR5激动活性。
测试前，以含有10％FBS的DMEM为培养基，将细胞接种于96孔板中，37℃，5％CO2条件下培养过夜。次日，以含有各种浓度化合物的新鲜培养液孵育细胞5.5h。阳性对照采用20μM INT-777。孵育完成后，按照规程以稳态荧光素酶测定系统(Promega)(Steady-GloLuciferase Assay System(Promega))测定萤火虫荧光素酶的活性，从而反映化合物对TGR5的激动效应。EC50值通过GraphPad Prism软件计算得到。
1.2DPP4抑制活性测试方法：
采用小鼠血清及荧光底物(Gly-Pro-7-amido-4-methylcoumarin hydrobromide，Gly-Pro-7-AMC)通过体外孵育的方法检测酶活性。
96孔板中分别加入血清酶活反应缓冲液(25mM HEPES，140mM NaCl，调节pH至7.8，加入MgCl2至终浓度80mM)35μL/孔以及C57小鼠血清5μL/孔。样品孔加入以血清酶活反应缓冲液稀释至指定浓度的化合物10uL，阴性对照孔加入含有与化合物组同等浓度DMSO(0.5％)。空白对照孔不加血清，仅加入等体积的血清酶活反应缓冲液及溶剂对照(0.5％DMSO)。将底物Gly-Pro-7-AMC以血清酶活反应缓冲液稀释至10μM，加入96孔板，50μL/孔。用多功能酶标仪检测380nM激发光下460nM的发射光强度，动态检测18分钟，每3分钟检测1次，共检测7次，记录反应速率。
根据公式计算：抑制率(％)＝[1-(S-B)/(N-B)]×100％
其中，S：样品；B：空白对照；N：阴性对照。
IC50值用GraphPad Prism软件计算得到。
1.3部分化合物的体外活性测试结果
活性范围表示方法：A:0-10nM；B:10-100nM；C:100-500nM；D:>500nM。
试验结果如表1所示：
表1
| 化合物 | hTGR5(EC<sub>50</sub>) | mTGR5(EC<sub>50</sub>) | mDPP4(IC<sub>50</sub>) |
| 1 | B | A | C |
| 2 | A | A | C |
| 3 | A | A | B |
| 4 | A | A | B |
| 5 | A | A | B |
| 6 | A | A | B |
| 7 | A | A | C |
| 8 | A | A | C |
| 9 | A | A | C |
| 10 | A | A | C |
| 11 | A | A | C |
| 12 | B | A | B |
| 13 | A | A | C |
| 14 | A | A | C |
| 15 | A | A | C |
| 16 | A | A | B |
| 17 | A | A | C |
| 18 | A | A | B |
| 19 | C | C | B |
| 20 | C | C | C |
| 21 | C | C | C |
| 22 | C | C | B |
| 23 | A | A | C |
| 24 | A | A | B |
| 25 | A | A | C |
| OL3 | 86nM | 17nM | 69.98μM |
OL3结构式如下，制备方法参考文献OL3,a novel low-absorbed TGR5 agonistwith reduced side effects,lowered blood glucose via dual actions on TGR5activation and DPP-4inhibition(Acta Pharmacologica Sinica(2016)37:1359-1369)。
以上数据表明本专利中的化合物具有良好的TGR5激动活性和DPP4抑制活性。
实验例2:Caco-2细胞渗透性实验
实验方法：Caco-2细胞来源于ATCC(Cat#HTB-37)，采用含10％FBS的DMEM培养基。培养环境温度37℃，5％CO2，90％湿度。每隔七天进行传代，比例1:10。采用第30到40代的细胞进行试验。经过21天的培养，细胞单层的完整性通过测定跨膜电阻来确认。
单层细胞有两端，即顶端(apical side)和基底端(basolateral side)。从顶端到基底端的化合物运输简称A-B，而从基底端到顶端的的化合物运输简称B-A，两者采用类似的测定方法。普萘洛尔和阿替洛尔分别作为高渗透性和低渗透性的对照。地高辛作为Pgp外排底物的阳性对照。试验过程大致如下：单层细胞膜采用HBSS洗涤三次，化合物稀释并被加入相应的室(顶端的pH是6.8，而基底端的pH是7.4)。37℃孵育95min。在加入化合物的一侧分别在5和95min收集样品，而在接受化合物的一侧分别在35和95分钟收集样品。样品中化合物的浓度通过LC-MS/MS测定。
Papp的计算公式如下：
Papp＝(VA/(SA×T))×([drug]acceptor/[drug]initial donor)
其中，VA是接受侧的室体积，SA是膜的表面积，T是总的运输时间，[drug]acceptor是指接受侧的化合物浓度，[drug]initial donor是0min时在加入化合物一侧的浓度。
部分化合物Caco-2细胞渗透性实验结果如表2所示。
表2
| 化合物 | Papp A-B(1×10<sup>-6</sup>cm/s) | Papp B-A(1×10<sup>-6</sup>cm/s) |
| 5 | <0.01 | 14.4 |
| 12 | 0.01 | 0.01 |
A-B：肠腔侧(apical)到基底侧(basal)，B-A：基底侧(basal)到肠腔侧(apical)
以上数据表明本发明专利中化合物具有极低的细胞渗透性，有利于实现肠道局部作用。
实验例3：肠道酶活及血浆酶活实验
实验方法：ICR小鼠按体重随机分组。单次口服一定剂量的化合物或溶剂对照。给药后8h采血获得血清，收集约1cm回肠组织，去除内容物称重。以冰生理盐水冲洗样品，滤纸吸干水分后放入2mL研磨管。血清样品及组织样品均保存于超低温冰箱备用。
检测当日，血清样品取5μL，加入45μL血清酶活反应缓冲液(25mM HEPES，140mMNaCl，调节pH至7.8，加入MgCl2至终浓度80mM)加入到96孔微孔反应板中，空白对照孔仅加入50μL血清酶活反应缓冲液。底物Gly-Pro-7-AMC以血清酶活反应缓冲液稀释至10μM，加入微孔反应板，50μL/孔。用多功能酶标仪动态检测380nm激发光下460nm处的发射光强度，每间隔3分钟测定一次，直至第18分钟，共测定7次，记录反应速率。以给药前小鼠血清酶活为100％计算各给药组小鼠血清相对酶活性百分比。
回肠样品按照50mg/ml加入适量组织酶活反应缓冲液(50mM Tris缓冲液，调节pH至7.5)，50Hz，120s震荡破碎组织。破碎后的回肠组织样品在4℃、10000rpm下离心5min，取上清用于酶活测定。96孔微孔反应板，每孔加入组织酶活反应缓冲液30μL，加入上述组织样品20μL/孔，混匀。底物Gly-Pro-7-AMC以组织酶活反应缓冲液稀释至10μM，加入微孔反应板，50μL/孔。用多功能酶标仪动态检测380nm激发光下460nm处的发射光强度，每间隔1分钟测定一次，直至第10分钟，共测定11次，记录反应速率。以空白对照组酶活为100％计算各给药组小鼠回肠相对的酶活性百分比。
回肠DPP4酶活实验结果如表3所示，血浆DPP4酶活实验结果如表4所示。
表3
表4
以上实验表明本专利中的化合物可以显著抑制肠道DPP4酶活，而对系统DPP4酶活仅有微弱抑制效应，具有良好的肠道局部作用。
实验例4：DSS诱导小鼠结肠炎试验
实验方法：BALB/c小鼠按照体重随机分组。正常对照组小鼠给予常规饮水。造模小鼠则给予3％DSS水溶液自由饮用后诱导溃疡性结肠炎。自诱导之日起，造模小鼠各组分别灌胃给予溶剂对照或相应剂量的化合物12。实验期间，每日记录小鼠体重，测定小鼠粪便性状和便血情况，根据各项积分，统计疾病指数(DAI)，实验结果如图1～图3所示。
图1显示体重变化曲线，结果显示，给药化合物12与溶剂对照造模组相比显著减缓了体重下降。
图2显示症状评分曲线。症状评分标准为：粪便性状(0分:正常；2分:稀便；4分:水样性腹泻)及粪便潜血(0分:无便血；2分:少量便血；4:严重便血)。由图2结果表明，给药化合物12与溶剂对照造模组相比显著改善小鼠肠炎疾病症状。
图3显示疾病指数(disease activity index,DAI)评分曲线，DAI是综合体重和症状评分得到，评分标准涵盖体重下降(0分:正常；1分:体重下降0％-5％；2分:体重下降5％-10％；3分:体重下降10％-15％；4分:体重下降>15％)、粪便性状(0分:正常；2分:稀便；4分:水样性腹泻)及粪便潜血(0分:无便血；2分:少量便血；4:严重便血)。
由图3结果表明，给药化合物12与溶剂对照造模组相比显著减缓DSS诱导小鼠结肠炎的疾病进程。由图1～图3可知，本发明化合物在DSS诱导的小鼠结肠炎模型中可以减缓疾病进程。
实验例5：血浆、回肠、胆囊、胆汁药物浓度测试实验
实验方法：ICR小鼠按体重随机分组，每组3只，实验前过夜禁食，单次口服30mg/kg的实施例12化合物，分别于1h、2h、4h、8h取血，随后处死，取回肠、胆囊、胆汁进行药物浓度测试。定量方法采用LC-MS/MS。试验结果如图4所示。
由图4可知，本发明化合物主要分布于肠道组织中，系统暴露量较低。
实验例6：胆囊实验
实验方法：ICR小鼠按体重随机分组，每组7-8只，实验前过夜禁食，单次口服一定剂量的化合物和空白对照。最后一次给药后0.5h开始喂食，给药后4h处死小鼠，解剖，测量胆囊体积和胆汁对胆汁重量进行称重。胆囊的体积等于长×宽×高×3.14/6。胆汁重量采用分析天平称量。实验结果如表5所示。
表5
其中，MN6为阳性对照物，其化学名全称为1-[4-(2，5-二氯苯氧基)吡啶-3-甲酰基]-4-环丙基-1,2,3,4-四氢喹喔啉，具体参见WO2011089099。
以上数据表明本专利中的化合物相比于系统性TGR5激动剂具有良好的胆囊安全性。
Claims (10)
1.一种如式I所示的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐，
其中，
A表示噻吩环或吡啶环；
R1、R2、R3、R4各自独立地为氢、C1-6烷基、卤素、C1-6烷氧基、羟基、氨基、硝基或氰基；优选各自独立地为氢、C1-4烷基、卤素或C1-4烷氧基；更优选各自独立地为氢或C1-2烷基；最优选均为氢原子；
R5为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基取代的C1-6烷基、C3-6杂环基、C1-6烷基羰基或C1-6烷氧基羰基；优选为氢、C1-4烷基、C3-6环烷基或C3-6杂环基；最优选为氢或环丙基；
R6、R7、R8、R9各自独立地为氢、C1-6烷基、卤素、C1-6烷氧基、羟基、氨基、硝基或氰基；优选各自独立地为氢、C1-4烷基、卤素、C1-4烷氧基、羟基或氨基；更优选地，R6和R8为卤素，R7和R9为氢；或者R7和R9为卤素，R6和R8为氢；
W1和W2各自独立地为IIa或IIb所示的基团：
m、n各自独立地为1～7的整数，优选为1～3的整数；
R21、R22各自独立地为氢、C1-6烷基、或被羧基取代的C1-6烷基，优选各自独立地为氢、C1-4烷基或被羧基、C1-C4烷氧基羰基取代的C1-4烷基，更优选各自独立地为氢、C1-2烷基或被羧基、C1-C4烷氧基羰基取代的C1-2烷基，最优选各自独立地为氢、甲基或羧甲基；
L为IIIa或IIIb所示的基团：
其中，q为1～20的整数，优选为1～10的整数；r为1～10的整数，优选为1～5的整数；
X为IV所示的基团：
R为H、C1-C4烷基、苯基取代的C1-C4烷基、羟基取代的C1-C4烷基、C1-C6烷氧基取代的C1-C4烷基，优选为甲基、苄基、羟基取代的甲基和叔丁氧基取代的甲基；s为1-3的整数。
2.根据权利要求1所述的式I所示的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，所述式I所示的化合物选自如式IA、IB、IC和ID所示的化合物：
其中，A、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、L和X的定义如权利要求1中所述。
3.根据权利要求1或2所述的式I所示的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，
R1、R2、R3、R4各自独立地为氢、卤素、羟基、氨基、硝基或氰基，优选均为氢；
R5为氢、C1-3烷基、C3-6环烷基或C3-6杂环基，优选为氢或环丙基；
R6、R7、R8、R9各自独立地为氢、卤素、C1-3烷氧基、羟基、氨基、硝基或氰基；优选为氢或卤素。
4.根据权利要求1或2所述的式I所示的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，所述式I所示化合物选自以下结构式所示的化合物：
5.制备如权利要求2～4任一项所述的化合物的方法，其特征在于，所述方法为选自以下方式1～方式4中的至少一种：
方式1、制备通式IA所示的化合物，至少包括以下步骤：
S1、化合物Ia通过与连接片段前体化合物NH2-L-N3进行酰胺缩合得到化合物Ib；
S2、化合物Ib在通过氢化还原反应得到化合物Ic；
S3、化合物Id通过亲核取代反应与溴乙酸苄酯反应得到Ie；
S4、化合物Ie通过氢化还原反应脱苄得到If；
S5、化合物If与化合物Ic通过酰胺缩合反应得到化合物Ig；
S6、化合物Ig脱去保护基反应得到化合物IA；
反应式如下：
方式2、制备通式IB所示的化合物，至少包括以下步骤：
S1、化合物Ib与溴乙酸叔丁酯通过亲核取代反应得到化合物IIa；
S2、化合物IIa通过氢化还原反应得到化合物IIb；
S3、化合物IIb与化合物If通过酰胺缩合反应得到化合物IIc；
S4、化合物IIc与溴乙酸叔丁酯通过亲核取代反应得到化合物IId；
S5、化合物IId脱去保护基并水解得到IB；
反应式如下：
方式3、制备通式IC所示的化合物，包括以下步骤：
S1、化合物If在硼烷的还原下反应得到化合物IIIa；
S2、化合物IIIa通过Dess-Martin试剂经氧化反应得到化合物IIIb；
S3、化合物IIIb与化合物Ic通过还原胺化反应得到化合物IIIc；
S4、化合物IIIc脱去保护基得到化合物IC；
反应式如下：
方式4、制备通式ID所示的化合物，包括以下步骤：
S1、化合物Ia在硼烷的还原下得到化合物IVb；
S2、化合物IVb通过Dess-Martin试剂氧化得到化合物IVc；
S3、化合物IVc与连接片段前体化合物NH2-L-N3通过还原胺化反应后再与Boc酸酐反应得到化合物IVd；
S4、化合物IVd在氢气-钯碳条件下还原叠氮基团得到化合物IVe；
S5、化合物IVe与化合物If通过酰胺缩合得到化合物IVf；
S6、化合物IVf脱去保护基Boc得到化合物ID；
反应式如下：
其中，X1选自
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、L、A、R、S和X的定义同对应权利要求。
6.权利要求1-4中任一项所述的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐在制备用于治疗由TGR5和/或DPP4介导的疾病的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，所述由TGR5和/或DPP4介导的疾病包括糖尿病、肥胖症、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎和炎症性肠病。
8.一种药物组合物，其包含治疗有效量的选自如权利要求1-4中任一项所述的化合物、立体异构体和药学上可接受的盐中的一种或多种以及任选地，药学上可接受的辅料。
9.根据权利要求8所述的组合物，所述的药物组合物还包含一种或多种治疗由TGR5或DPP4介导的疾病的其他药物；优选的，所述其他药物选自降糖药物、减肥药物、非酒精性脂肪性肝病药物、非酒精性脂肪性肝炎药物和炎症性肠病药物中的一种或多种。
10.权利要求1-4中任一项所述的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐在制备作为TGR5激动剂和/或DPP4抑制剂的药物的应用。
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