CN1154068A - 含有嵌合体tnf结合蛋白的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及使用含有人p55-或p75-TNF-受体可溶部分和全部或部分人免疫球蛋白重链或轻链恒定功能区的嵌合体TNF结合蛋白或其药用盐制备治疗自身免疫疾病的药物组合物。

Description

含有嵌合体TNF结合蛋白的药物组合物

本发明涉及含有人p55-或p75-THF-受体可溶部分和人免疫球蛋白重链或轻链恒定功能区的部分或全部的嵌合体TNF结合蛋白和其药用盐用于治疗自身免疫疾病方法的用途，这些自身免疫疾病常常与例如类风湿性关节炎的炎症过程，青少年时期起始的I型糖尿病，系统性红斑狼疮，甲状腺炎，尤其是多发性硬化有关，本发明还涉及所述嵌合体TNF结合蛋白制备治疗上述疾病的药物组合物的用途。

多发性硬化(MS)是中枢神经系统(CNS)炎症疾病，被认为是起源于髓磷脂成份为靶物的自身免疫失调疾病。在人体内发现以髓磷脂碱性蛋白质(MBP)反应性T淋巴细胞的事实提供了对MS自身免疫起因的支持，MBP反应性T淋巴细胞表现型相似于试验性变应性脑脊髓炎中的MBP特异致脑炎T细胞〔Sun，Acta.Neurol.Scand.Suppl.142，1-56(1993)；Voskuhl等，Autoimmunity 15，137-143(1993)〕，并且有证据证明MS患者中MBP反应性T细胞克隆次数升高〔Allegretta等，Science 247，718-721(1990)〕。另外，已经开发出多种模拟人MS病理生理学方面的试验用自身免疫脑脊髓炎动物模型(参见下文)。但也有存在地理上完全确定的地方性地区所表现的控制MS发生的环境因素。

MS以炎性细胞病灶性积累，浮肿和CNS组织中脱神经髓鞘作用为特征。很早就发现与从临床状态预测相比，尸检发现更多的病灶损伤。一般情况下，损伤开始为在蛋白物质中单核细胞的渗入物渗入，结果产生浮肿。渗入细胞显然介导了髓鞘选择性损伤而轴突未受损。在进一步发展中，呈形胶质细胞增生，产生0.1至几个cm直径大小被称为MS斑的神经胶质瘢痕。MS临床病程可以在疾病期间宽范围不定间隔缓解/复发，或者慢性发展，这表明所经历的病理生理学过程受不均匀控制。

临床病理学研究表明在MS损伤中存在产生TNF的细胞。主要的TNF阳性细胞形态学分类是反应性纤维星形胶质细胞。双向免疫染色实验证明多数反应性细胞是呈形胶质细胞，其余的是单核细胞/巨噬细胞〔Hofman等，J.Exp.Med.170，607-612(1989)〕。另外研究证明MS斑中星形胶质细胞和单核细胞中TNF的阳性免疫反应性，也研究了淋巴毒素(LT)免疫反应性。令人感兴趣的是，除所预料的淋巴细胞外，发现小神经胶质细胞对LT呈阳性〔Selmaj等，J.Clin.Invest.87，949-954(1991a)〕。并且通过原位杂交的细胞因子在MS损伤中的mRNA细胞因子表达的研究表明在所有炎性血管周损伤中存在高水平TNF，IL-6和TFN-γ(和其它细胞因子)mRNAs。在严重脱神经髓鞘作用损伤中TNF，IL-2和IFN-γmRNAs水平特别高〔Woodroofe和Cuzner，Cytokine 5，583-588(1993)〕。

已经报导了小鼠脊髓组织髓磷脂化培养物中对少突神经胶质细胞的直接细胞毒作用，而IFN-γ，IL-2，T细胞上清液或抗半乳糖脑苷脂抗血清则没有用〔Selmaj和Raine，Ann.Neurol.23，339-346(1988)]。这些培养物的TNF处理引起少突神经胶质细胞坏死；一些神经纤维发展成脱神经髓鞘作用。

一些研究人员已测量了MS患者血清和脑脊髓液(CSF)中的TNF浓度。一致认为，明显百分数的MS患者CSF中有升高的TNF，而在血清中要少得多。TNF浓度不直接与CSF细胞含量有关，表明CSF TNF含量可能反映MS损伤中或MS损伤周围TNF的产生，尤其是着眼于损伤经常发生在心室旁。

试验性脑脊髓炎(EAE)动物研究明显印证了自身免疫源的人MS中细胞因子的作用。通过髓磷脂抗原活化致敏或者通过特异性T细胞克隆继承性转移到同系的未经免疫的宿主动物体内来诱发EAE。髓磷脂抗原免疫应答的试验性诱导引发与人MS相似的疾病，这一发现是关于MS自身免疫源的一个重要的争论。抗TNF单克隆抗体治疗的保护性功效证明在响应疾病特征病理学的建立和作用机理中TNF的角色〔Ruddle等，〕Exp.Med.172，1193-1200(1990)；Selmaj等，Ann.Neurol.30，694-700(1991b)〕。减少产生TNF(和其它细胞因子)的细胞相应地会抑制EAE〔Huitinga等，J.Exp.Med.172，1025-1033(1990)〕。继承性转移中的致脑炎性紧密地取决于全部识别相同MBP肽的各种T细胞克隆的TNF和LT的产生能力，这一发现提供了进一步证明EAE中TNF的重要作用的证据〔Powell等，Intern.Immunol.2,539-544(1990)〕。

EP512528中已公开了用人p55-和p75-TNF-受体可溶部分治疗大鼠试验性脑脊髓炎(EAE)。但至今没有报导关于嵌合体TNF结合蛋白和其药用盐保护效果的数据。因此用含有人p55-或p75-TNF-受体可溶部分和全部或部分人免疫球蛋白重链或轻链恒定功能区的嵌合体TNF结合蛋白或其药用盐制备治疗自身免疫疾病例如多发性硬化的药物组合物是本发明的一个目的，尤其是，其中嵌合体TNF结合蛋白含有人p55-TNF-受体的可溶部分。本发明一个进一步优选的实例是这样一种用途，其中嵌合体TNF结合蛋白含有除人免疫球蛋白重链恒定区第一功能区之外的所有功能区，这意谓着人p55-TNF-受体可溶部分在其C末端与免疫球蛋白重链的绞链区融合。这种免疫球蛋白可以是IgG，IgA，IgM或IgE，特别是IgG，象IgG1或IgG3。术语“人p55-或p75-TNF-受体可溶部分”在本发明说明书中指这些受体或其部分中的一个受体的完全细胞外区，该外区仍结合着人TNF，例如在p55-TNF-受体的情况下，细胞外区缺失头12个N-末端氨基酸。

本发明再一个目的是提供治疗哺乳动物自身免疫疾病的方法，其包括对所述哺乳动物给予治疗有效量的上文定义的嵌合体TNF结合蛋白或其盐，其改善这种自身免疫疾病，特别是提供其中自身免疫疾病是多发性硬化的治疗方法。

用于本发明目的的嵌事体TNF结合蛋白的制备详细描述于欧州专利申请公开号No.(EP)417563和Loetscher等，J.Biol.Chem.266，18324-18329(1991)中。而且下面专利公开中描述的TNF结合蛋白或其部分可以用于制备这种嵌合体TNF结合蛋白：EP308378，EP422339，GB2218101，EP393438，WO90/13575，EP398327，EP412486，WO91/03553，EP418014，JP127,800/1991，EP433900，U.S.Patent No.5,136,021，GB2246569，EP464533，WO92/01002，WO92/13095，WO92/16221，EP512528，EP526905,WO93/07863，EP568928，WO93/21946，WO93/19777，EP417563 and WO94/06476。

贯穿说明书使用的术语嵌合体TNF结合蛋白也包括其中免疫球蛋白部分或TNF结合部分的任何基酸缺失或被一个或多个氨基酸取代或者加入一个或多个氨基酸，只要TNF结合部分仍结合TNF并且免疫球蛋白部分具有一种或多种其特征性质的蛋白质。在免疫球蛋白部分由除重链恒定区第一功能区之外包括绞链区的所有功能区组成的情况下，这种绞链区可以缺少头5个N末端氨基酸。这种嵌合体TNF结合蛋白的突变蛋白可以通过本领域公知方法制备，并描述在Sambrook等人的“分子克隆”(第二版，1989，Cold Spring Harboo Laboatory Press，纽约)或一个或几个上文提到的专利公开中。

而且本发明嵌合体TNF结合蛋白也可以以修饰形式使用，例如当与化学实体偶合而不致变其基本生理活性的修饰形式。优选和公知的修饰是与水溶聚合物例如分子量范围很宽的例如500至20000道尔顿的聚乙二醇或聚丙二醇偶合。这产生基本上非免疫原性的保护的蛋白质。通过不同键使聚合物与蛋白质偶连的几种方式是本技术领域已知的且描述于例如，一般性说明参见“生物缀合物化学展望”(“Perspectives inBioconjugate Chemistry”)，  C.F.Meares出版，美国化学会志，华盛顿，1993，具体地描述于例如U.S.4179337中。

进一步讲，本发明嵌合体TNF结合蛋白可以以其药用盐的形式存在。羧基的盐可以通过本领域已知的方法生成，且包括无机盐，例如，钠盐，钙盐，铵盐，铁盐或锌盐及类似盐，和与有机碱生成的盐，例如，与胺，如三乙醇胺，精氨酸或赖氨酸，哌啶，普鲁卡因及类似物结合生成的盐。酸加成盐包括，例如，与无机酸，例如，盐酸或硫酸生成的盐，和与有机酸如，例如，乙酸或草酸生成的盐。

用于本发明的目的嵌合体TNF结合蛋白优选肠胃外注射给药，但其它有效给药方式，如关节内注射或经皮离子电渗疗法也是可以的。一种优选的载体是生理盐水，但不排除也可以使用其它药学上可接受载体。这种载体中的基本溶剂是含水或非水的。另外载体可以含有改变或保持pH，每公升渗透克分子浓度，粘度，澄清度，颜色，无菌，稳定性，溶解速度，或气味的其它药学上可接受的赋形剂。类似地，载体还可以含有改变或保持嵌合体TNF结合蛋白稳定性，溶解速度，释放，或吸收的其它药学上可接受的赋形剂。这些赋形剂是通常和习惯上用来配制单位制剂或多剂形式肠胃外给药的剂量的那些物质。

一旦配制成药物组合物，可以以溶液，悬液，凝胶，乳液，固体，或脱水物形式，例如作为冻干粉剂在无菌管形瓶中保存。这些制剂可以以备用形式或者给药前需要瞬时再配制的形式保存。这些制剂优选在至少4℃的温度下保存，优选-70℃保存。也优选将这些制剂以生理pH或接近生理pH下保存和给药。

治疗多发性硬化可能的剂量范围可以是每1-4周单剂量每公斤患者体重给药大约0.001-5.0，优选0.1-5.0，更优选0.1-2.0mg，且更优选每1-4周每公斤患者体重大约0.1-2.0mg单剂量给予含有人p55-TNF-受体可溶部分和全部或部分人免疫球蛋白重链或轻链恒定功能区的嵌合体TNF结合蛋白或其药学上可接受盐，优选其中所述嵌合体TNF结合蛋白含有除人免疫球蛋白如IgG，IgA，IgM重链恒定区第一功能区之外的所有功能区，并且更优选其中人免疫球蛋白是IgG，特别是IgG1或IgG3。剂量次数和优化剂量取决于所用制剂嵌合体TNF结合蛋白的药物动力学参数。

不考虑给药方式，具体剂量根据患者的大药体重计算。确定用每种上述制剂进行治疗的合适的剂量所需的进一步精确的计算是本领域熟练技术人员经常做到的。

实施例实施例1急性EAE横型(AHH/R大鼠)

用含有豚鼠脊髓和含有结核分枝杆菌(Difio Laboratories，Detroit，MI，USA)(10mg/ml)的弗氏完全佐剂(1∶1)的乳液(0.05ml)在两足后爪足底表面对雌性AHH/R大鼠〔Bloxham等，J.Pharmacol.Exp.Ther.252，1331-1340(1990)〕接种。每天测量动物体重并根据4点评分体系(临床评分)评价神经病学指标：0＝正常；1＝尾巴软弱无力；2＝部分后肢麻痹；3＝全部后肢麻痹；4＝四肢麻痹。用人p55-TNF-受体的细胞外域(该受体头182个N-末端氨基酸)与人IgGγ1重链的绞链区融合并在CHO细胞中表达的组建(“融合体组建”)(腹膜内)对各组大鼠给药，或者只用磷酸盐缓冲盐水(PBS)赋形剂给药。对大鼠给药致脑炎悬浮液导致神经病学症状发作(10天)，第14天达到高峰。神经病学症状伴随明显体重下降。用融合体组建治疗(1，5和10mg/kg，腹膜内，每日一剂量，EAE诱发后第8-14天)，依剂量方式明显减缓EAE症状并且改变了体重，〔图1表明自10至21天每组10只动物的平均临床评分，图2表明自第8至20天相应的平均体重；p值通过Mann-Whitney-U-试验测定(参见statistical Methods inBiology，Bailey N.T.J.，Hodder和Staughton，London)〕。在第二系列实验中，诱发后整个疾病“表现”期(第8-20天)给予融合体组建(10mg/kg，腹膜内)，也明显减缓EAE症状，并在至多第14天改变了体重〔图3表示第10-20天10只动物的平均临床评分值，p值通过Mann-Whitney-U-试验测定，参见上文，图4表示相应的平均体重，p值通过未配对-T-试验测定(参见Statistical Meth9ods inBiology，见上文)〕。实施例II慢性EAE模型(Biozzi小鼠)

喂养近亲繁殖的Biozzi Selection I AB/H小鼠〔Baker等，J.Neuroimmunol.，28，261-270(1990)，使其自由进食标准片状食物和水。用含有6.6mg/ml冻干Biozzi脊髓的磷酸盐缓冲盐水〔PBS〕和60mg加热杀死的分枝杆菌〔结核分枝杆菌H37 Ra和乳酪分枝杆菌(8∶1)；Difco，见上文〕的0.15ml沸氏不完全佐剂(Baker等，见上文)的0.3ml(总共0.6ml)乳液在腹部两处皮下对小鼠接种。7天后重复注射。每天称量小鼠体重并根据5点评分体系价估神经病学指标：0＝正常，1＝尾巴软弱无力；2＝削弱的正位反射(IRR)；3＝部分后肢麻痹；4＝完全的后肢麻痹；5＝死亡。用融合体组建(参见实施例1)(腹膜内，i.p.)或用磷酸盐缓冲盐水(PBS)赋形剂对各组小鼠给药。在慢性EAE模型中，Biozzi小鼠急性疾病在赋形剂组中的发生率是90％，EAE诱发后第14天出现神经病学症状。用融合体组建预处理(贯穿实验方案始终每3天一剂量，7mg/kg，i.p.)，与对照组相比(分别是9/10和6/8)，疾病的急性阶段(3/9)和复发阶段(1/7)期间都降低了呈现出麻痹的(5点评分体系中第1-4)动物数目〔参见表1和图5，图5中图5a表示只用纯盐水(“赋形剂”)的对照实验，图5b表示用融合体组建的情况，其中条形线给出临床评分值，曲线表示体重变化(g)〕。在紧接着的剂量效应研究中，诱发疾病后(第10-30天)给予融合体构建(1-14mg/kg，i.p.)，也证明了有益效果，7mg/kg是最小有效剂量。实施例III一般方法动物，试剂，和细胞系

自Charles RIVER WIGA  (Sulzfeld，BRD)获得体重120至150g近亲繁殖的Lewis大鼠。从整个脑中分离豚鼠髓磷脂为碱性蛋白(MBP)〔Eylar等，J.Methods Enzymol.32B，323(1979)〕。C1，MBP致脑炎肽(氨基酸68-88)自Peptide Prodncts(PortonDown，United Kingdom)购得。牛S100β蛋白由Sigma化学公司(st.Louis，MO，USA)获得。从结核分枝杆菌中获得的蛋白质纯化衍生物(PPD)从Statens Serumin stitut  (Kopenhagen，Denmark)获得。抗髓磷脂少突神经胶质细胞糖蛋白的单克隆抗体〔抗-MOG Mab 8-18 C5，Schliisener等，J.Immunol.139，4016(1987)〕由杂交瘤上清液制备，并在蛋白质A-琼脂糖凝胶球(Sigma)上纯化。免疫

用在补加了4mg/ml结核分枝杆菌(H37 Ra，Difco，Detroit，USA)的弗氏佐剂(Gibco BRL AG，Basle，CH)中乳化的MBP(100μg/鼠)，C1(50μg/鼠)或S100β蛋白(50μg/鼠)在后脚掌免疫Lewis大鼠。抗原特异性T细胞

用于该项研究中的T细胞系对豚鼠MBP和/或C1(F8，C1-C9，C1，LMBP)或牛S100β蛋白，非髓磷脂，钙结合蛋白(LS1)特异。用两种不同方案建立抗原特异性T细胞系。免疫10天后，从排泄

(draining popliteal)，腹股沟，和双动脉淋巴结中制备单细胞悬液。致敏细胞或者以10⁷个细胞/ml(5ml，培养皿)的浓度与抗原一起培养建立大量T细胞系(LS1，C1，LMBP)或者连续稀释以提供大量的少数克隆T细胞系(F8，C1-C9)。在后一种情况中，以细胞数范围2×10⁵至100个细胞/孔在96孔圆底微量滴定板中培养淋巴结细胞悬液。用抗原和扩散的(4000rad)同系胸腺细胞作为存在抗原的细胞来源(APC’S)补充上述细胞液，使富集L-天冬酰胺(36mg/ml)，L-谷酰胺(2mM)，丙酮酸钠(1mM)，非必需氨基酸(1％v/v)，青霉素(100U/mg)，链霉素(100mg/ml；Gibco)和自身大鼠血清(1％)的Eagle’s培养基(GA)中最终细胞数是2×10⁵/孔。72小时后去除培养基，在补充有IL-2的培养基中将保留的T细胞再扩展7-10天。然后在2×10⁵扩散的APC’S存在下用抗原再次刺激T细胞。目测观察培养物，生长阳性的细胞在存在IL-2下扩展。从淋巴制备一梯度(密度1.077g/ml，Nycoled Pharma AS，Oslo，Norway)的界面收集大量培养物中的活化的母淋巴细胞。然后在扩散的APL’S存在下再刺激剩余的T细胞(T细胞与胸腺细胞比∶1∶30)。然后重复含IL-2培养基中增殖和刺激循环，直到建立稳定的T细胞系。特异性测定

为评价T细胞特异性，使用了标准T细胞增殖试验。在APC’S(6×10⁵/ml)和相关抗原MBP，C1或S100β(20μg/ml)，非相关抗原PPD(10μg/ml)和Con A(2.5μg/ml)存在下，在平底微量滴定板中(200μg/孔)再次刺激T细胞(2×10⁴/ml)。培养72小时后，用1μCi/孔含氚胸苷(³H-dT；2Ci/mmol；Amesham-Bachler，Braunschwei，BRD)脉冲16小时后收获细胞。在玻璃纤维过滤器上收集放射标记细胞，并用Maxtrix 96计数器(Cahberra packard，Frankfurt，BRD)定量测定冲洗和干燥过滤器的放射性。主动EAE

用MBP或C1免疫后诱发大鼠被动EAE。每天临床检查监测体重和临床评分。如下评价临床疾病：0＝正常，1＝尾巴软弱无力，2＝下肢轻瘫，步态不灵活，3＝后肢麻痹，4＝后肢和前肢麻痹，5＝死亡。以盲目方式进行研究，即观察者不知道试验方案。被动EAE

腹膜内注射新鲜抗原激活T细胞母细胞(5-7×10⁶/鼠)后诱发同系大鼠被动EAE。如果用S100β特异性T细胞诱发EAE，则大鼠接受10⁷个细胞，接着在细胞转移后第5天给予单剂量Mab 8-18 C5(3-5mg/鼠)。如上所述每天监测体重和临床评分。在合适的时间点杀死动物并用于常规中枢和外周神经组织学研究。EAE的治疗

重复或一次腹膜内注射10mg/kg融合体组建(参见实施例1)以治疗主动或被动诱发的EAE。FACS分析

在蛋白G-琼脂糖凝胶球(Sigma，Taut-kirchen，BRD)上纯化杂交上清液中小鼠抗大鼠T细胞特异性单克隆抗体(MAb)pan-T(W3.13)，CD4(W3.25)，CD8(OX-8)，αβ-TcR〔R73，Hunig等，J.Exp.Med.169，73(1989)〕。对于TcR Vβ同种型特异性Mabs B73(V8.5)，G101(Vβ10)，和R78(Vβ8.2)参见Torres-Nage(，Immuno genetics 37,305(1993)。用DTAF标记山羊抗小鼠IgG(H+L链)的F(ab’)2片段检测标记的特异性MAbs。用FACS can(Becton Dickinson，Heidelberg，BRD)测定不含碘化丙锭(10μg/ml，Sigma)的活细胞免疫荧光。实施例III.1融合体组建对活性试验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)的作用

该模型覆盖相对广谱的病理机理，包括体内自身攻击性T细胞激活和中枢神经系统的各种炎症疾病期。但该疾病通常只限于血管周渗入且不与初级大规模脱神经髓鞘作用有关。

用跨越豚鼠MBP致脑炎功能区的C1肽，对于Lewis大鼠是氨基酸68-88，对各组Lewis大鼠(n＝3)进行免疫。在接下来的8天，所有的大鼠增加了体重(图6)，接着第9天开始他们的体重曲线变平。从第9天开始，对照的未用融合体组建处理的组表现快的体重减轻，发展性尾巴软弱无力，接着是明显的后肢软弱和皮毛粗糙。也发现正位反射部分失去或失禁。这些疾症临床症状持续到第16天，大鼠开始恢复并增加体重。接受腹膜内注射融合体组建的那些大鼠呈现在第9天体重曲线变平，但治疗结果显著减缓了临床症状的严重度。总的来说它们的行为临床上正常。只是从第13天开始发现尾巴强健度稍微部分减弱，并持续2-3天，不再发展。实施例III.2

融合体组建对T细胞介导转移EAE(tEAE)的作用

该模型的基础是自MBP或MBP-肽免疫的大鼠回收的T淋巴细胞。建立细胞并体外保持作为抗原特异系的细胞系。它们以CD4⁺，CD8^-，TcR Vβ8.2⁺为特征，II类MHC限制T细胞，T细胞能预计地再现地诱导EAE体内转移到正常原始受体中。与活性模型中的相似，tEAE不以脱神经髓鞘作用为特征，而集中于EAE再循环和炎性效应阶段，包括T细胞和血脑屏障间的病理性相互作用。

各组Lewis大鼠(n＝3)用C1特异性T细胞(C1-C9)腹膜内被动转移。没用融合体组建治疗的对照组(图7)在细胞转移后第2天开始发生tEAE典型的严重迹象，伴有严重体重减轻。第2天后临床症状发作变快，象是主动EAE。大约第6天大鼠灰复。在三个不同时间点用融合体组建治疗的那些大鼠只表现出在第3天开始有轻微的体重轻减。但在第3-5天时发现临床症状大大减轻并只有尾巴强健度部分减弱。实施例III.3融合体构建对转移试验性自身免疫脑脊髓炎(tEAP)的作用

在该模型中，自免疫大鼠衍生的S100β-特异性T细胞介导贯穿整个CNS，脊髓，视神经，视网膜和眼色素层的炎性损伤。但是，象人多发性硬化(MS)一样，眼部通常受视网膜静脉周炎的影响。血管周以及实质周围发现细胞渗入物，与MBP诱发EAE相比，存在较少ED1⁺巨噬细胞。只发现温和临床症状如体重减轻。注射Mab8-18 C5后发生临床严重症状〔Linington等，J.Immunol.23，1364(1993)〕。在渗入物周围分布的脱神经髓鞘作用从组织上大量汇合病灶，并以该模型与人MS的一些情况相关。

用S100β蛋白特异性T细胞(LS1)被动转移各组Lewis大鼠(n＝3)。这些细胞诱发神经系统严重炎症应答，在原始同系受体中只诱发小的神经学机能障碍(图8，#1-3)。但在细胞转移后第5天，当大鼠接受抗-MOG单克隆抗体时(图8，#4)-6，临床症状变得剧烈(ouvert)。所有大鼠呈现尾强健力完全消失，持续48小时。相反，除接受Mab 8-18 C5外也接受融合体组建的大鼠不表现任何临床症状，行为完全正常(图8，#7-9)。

Claims (7)

1.使用含有人p55-或p75-TNF-受体可溶部分和全部或部分人免疫球蛋白重链或轻链恒定功能区的嵌合体TNF结合蛋白或其药用受盐制备治疗自身免疫疾病的药物组合物。

2.权利要求1的应用，其中自身免疫疾病是多发性硬化。

3.权利要求1或2的应用，其中嵌合体TNF结合蛋白含有人p55-TNF—受体可溶部分。

4.任一权利要求1至3的应用，其中嵌合体TNF结合蛋白含有除人免疫球蛋白如IgG，IgA，IgM或IgE重链恒定区第一功能区外所有的功能区。

5.权利要求4的应用，其中人免疫球蛋白是IgG，尤其是IgG1或IgG3。

6.一种治疗哺乳动物自身免疫疾病的方法，包括对所述哺乳动物给予治疗有效量的任一权利要求1和3至5中定义的使这种自身免疫疾病结果转佳的嵌合体TNF结合蛋白或其盐。

7.权利要求6的方法，其中自身免疫疾病是多发性硬化。

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