CN115379857A

CN115379857A - 骨条藻属的极性提取物在光动力疗法中的使用

Info

Publication number: CN115379857A
Application number: CN202180028034.XA
Authority: CN
Inventors: J-B·贝拉尔德; L·勒富隆; L·皮科特; T-S·欧克; N·萨德; C·兰多特; K·格雷尼尔; V·索尔
Original assignee: Nantes University Affiliated Hospital; French Institute For Marine Development; Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Universite de Limoges; La Rochelle Universite
Current assignee: Nantes University Affiliated Hospital; French Institute For Marine Development; Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Universite de Limoges; La Rochelle Universite
Priority date: 2020-04-14
Filing date: 2021-04-13
Publication date: 2022-11-22
Also published as: US20230241142A1; EP4135768A1; JP2023529257A; FR3109086A1; BR112022020932A2; WO2021209441A1; FR3135893A1; ZA202210407B; KR20230002645A

Abstract

本发明涉及用于治疗痤疮或细菌感染的皮肤科组合物，其包含至少一种骨条藻属的藻类的极性提取物或从其衍生的光敏剂；以及涉及使用骨条藻属的藻类的极性提取物或从其衍生的光敏剂用于净化表面的方法。

Description

骨条藻属的极性提取物在光动力疗法中的使用

本专利申请要求于2020年4月14日提交的法国专利申请FR20/03712的优先权，并通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及一种用于光动力疗法(PDT)的组合物，特别是用于治疗皮肤疾病(如痤疮(acne))。

背景技术

痤疮与皮脂腺分泌皮脂过多，导致皮肤毛孔堵塞有关。造成的损害随后会并发炎症，其中所述炎症由皮脂中与痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、化脓性葡萄球菌(Staphylococcus pyogenes)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)或毛囊脂螨(Acarus folliculorum)相关的细菌增殖导致。

在青春期，当由于雄激素的激素刺激使皮脂腺成熟时，痤疮开始。在成年人中，痤疮是皮脂腺受到刺激，同时由于化妆导致皮脂分泌不良或由于压力导致肾上腺皮质激素合成增加的结果。

光动力疗法(PhotoDynamic Therapy；PDT)的基本原理由光敏剂的光暴露组成，其导致单线态氧和其他活性氧(R.O.S)的产生，从而导致附近生物体的死亡(细菌引起痤疮中的炎症)。

在这种痤疮相关的PDT中，光敏剂局部应用于皮肤表面。然后光敏剂在皮脂腺水平被吸收。然后通过激光或脉冲光照射待治疗区域，该照射允许光敏剂的激活以及单线态氧和R.O.S的产生。构成超活性化学物质的单线态氧的存在，导致在皮肤毛孔中增殖的细菌死亡和皮肤局部脱皮，从而使堵塞的毛孔得以释放。

在欧洲专利EP 1 755 676 B1、EP 2 152 259 B1或EP 3 082 788 B1中公开了通过光动力疗法治疗痤疮的示例。

为保持有效，光敏剂在没有光刺激时不被激活时，必须在体内稳定，并在光照后表现出强的光活性。

目前重要的是光敏剂尽可能地保护皮肤细胞，并且不增加痤疮引起的炎症。

发明内容

发明人现已证明，玛氏骨条藻(Skeletonema

)的极性提取物同时具有光敏剂、抗炎剂和脂肪生成抑制剂的特性。

藻类生长和繁殖需要光。为了进行光合作用，它们通过叶绿体中的色素吸收光。因此，它们产生氧气，从而将光能转化为物质。

显然，参与光合作用的玛氏骨条藻的化合物具有特别有趣的性质，特别是用于治疗痤疮。

因此，第一目的涉及一种用于光动力疗法(PDT)的组合物，其包含至少一种骨条藻属的藻类的极性提取物或从其衍生的光敏剂。

优选地，该组合物是皮肤科组合物。

有利地，该组合物还旨在通过将组合物局部应用于受试者的皮肤表面并结合该皮肤表面的光暴露以允许激活光敏剂来预防和/或治疗受试者中的痤疮。

更广泛地，该组合物旨在通过将该组合物局部应用于受试者的上皮表面并结合该上皮表面的光暴露以允许激活光敏剂来预防和/或治疗受试者中的细菌感染。

第二目的涉及一种光动力治疗方法，其包括以下步骤：

1)将治疗有效量的上述组合物局部施用于受试者的上皮表面；和

2)光暴露该上皮表面，以允许激活光敏剂。

有利地，光动力治疗旨在预防和/或治疗受试者中的痤疮。

还有利地，光动力治疗旨在预防和/或治疗受试者中的细菌感染。

本发明的第三目的涉及一种旨在消除皮肤缺陷(如黑头)的美容方法，其包括以下步骤：

1)将有效量的上述组合物局部施用于受试者的上皮表面；和

2)光暴露该上皮表面，以允许激活光敏剂。

本发明的第四目的涉及一种用于光动力治疗的试剂盒，其包括：

1)如前所述的组合物；和

2)光源。

本发明的第五目的涉及一种用于净化表面的方法，该方法至少包括以下步骤：

1)施用有效量的至少一种骨条藻属的藻类的极性提取物或从其衍生的光敏剂；和

2)光暴露该表面，以允许激活光敏剂。

有利地，该方法用于医院卫生。在这种情况下，待净化的表面是医疗装置、假体或植入物的表面。

还有利地，该方法用于食品工业，且待净化的表面是食品(肉、鱼等)表面、金属表面(机器、工件表面等)、地板或甚至墙壁。

本发明的第六目的涉及一种用于受试者伤口光凝固(photo-coagulation)的方法，该方法至少包括以下步骤：

1)将有效量的至少一种骨条藻属的藻类的极性提取物或从其衍生的光敏剂施用于受试者伤口表面；和

2)光暴露该表面，以允许激活光敏剂。

具体实施方式

骨条藻属的藻类是单细胞藻类，也是硅藻(硅藻门(Bacillariophyta))。

作为这种藻类的示例，可提及特别是Skeletonema ardens、巴巴多斯骨条藻(Skeletonema barbadense)、中肋骨条藻(Skeletonema costatum)、细柱骨条藻(Skeletonema cylindraceum)、齿状骨条藻(Skeletonema denticulatum)、多恩骨条藻(Skeletonema dohrnii)、格里斯骨条藻(Skeletonema grethae)、桂式骨条藻(Skeletonema grevillei)、日本骨条藻(Skeletonema japonicum)、玛氏骨条藻(Skeletonema marinoi)、地中海骨条藻(Skeletonema mediterraneum)、曼氏骨条藻(Skeletonema menzelii)、Skeletonema mirabile、江河骨条藻(Skeletonema potamos)、Skeletonema probabile、拟中肋骨条藻(Skeletonema pseudocostatum)、辛比尔斯克骨条藻(Skeletonem simbirskianum)、敏盐骨条藻(Skeletonema subsalum)、热带骨条藻(Skeletonema tropicum)、Skeletonema utriculosa和Skeletonema ventricosum。

优选地，骨条藻属的藻类选自包括中肋骨条藻、格里斯骨条藻、玛氏骨条藻、曼氏骨条藻和敏盐骨条藻的组。

在特别优选的实施例中，骨条藻属的藻类对应于玛氏骨条藻或格里斯骨条藻，更具体地，对应于玛氏骨条藻，这是大西洋中相对常见的物种(通常是大西洋沿海水域的主要物种)。该物种的细胞在细胞分裂后保持彼此附着。此外，该物种的藻类以3至15个细胞的链的形式存在。

“骨条藻属的藻类的极性提取物”是指通过使用极性溶剂对骨条藻属的藻类进行提取而获得的组合物。

“极性溶剂”指由具有偶极矩(dipole moment)的分子组成的溶剂。这种极性溶剂可以是质子性的或非质子性的，这取决于它是否能够释放酸性H+离子。

极性非质子溶剂的示例包括酮(如丙酮或丁酮)、亚砜(如DMSO)、N,N二取代酰胺(N,N二甲基甲酰胺)、腈(如乙腈)、酯(如乙酸乙酯)、叔胺(如三乙胺)、氮杂环(如吡啶)。

极性质子溶剂的示例包括水、醇、羧酸(例如甲酸和乙酸)或伯胺和仲胺。

优选地，使用的极性溶剂为质子极性溶剂，其中，优选使用醇。

在可使用的醇中，可提及甲醇、乙醇甚至异丙醇，优选乙醇和异丙醇。

使用的骨条藻属的藻类的极性提取物优选为从经历了先前细胞裂解步骤的微藻(microalga)中获得的极性提取物。

这种细胞裂解步骤可以简单地通过冷冻/解冻(优选在低于-20℃的温度下)、微波处理或超声波处理这种藻类来进行。

骨条藻属的藻类的极性提取物通过将该藻类在极性溶剂中浸渍至少5分钟，优选至少10分钟而产生。通常，该浸渍时间小于24小时，优选小于12小时，或甚至小于6小时。举例来说，这种骨条藻属的藻类的极性提取物将通过将该藻类在极性溶剂中浸渍10至60分钟，优选20至40分钟而获得。理想情况下，这种浸渍在室温或更低温度下使用极性溶剂，以尽可能多地保存所获得的极性提取物的光敏剂。

对于这种骨条藻属的藻类的极性提取物，其通过使用每克微藻(以干重表示)至少1mL极性溶剂，优选每克微藻至少10mL极性溶剂，以及特别优选每克微藻至少20mL极性溶剂进行提取而产生。举例来说，骨条藻属的藻类的极性提取物使用每克微藻(以干重表示)1至200mL极性溶剂，优选每克微藻类10至100mL极性溶剂，特别优选每克微藻(以干重量表示)20至50mL极性溶剂而获得。

有利地，骨条藻属的藻类的极性提取物在提取后将经历至少一次过滤(例如0.2μm、0.4μm或其他过滤器)和/或至少一次离心(仅回收上清液)。

“衍生自骨条藻属的藻类的极性提取物的光敏剂”是指从骨条藻属的藻类的极性提取物中纯化的化合物(例如，通过HPLC)或存在于骨条藻属的藻类的极性提取物内的化合物，其在光激活时允许产生单线态氧和R.O.S。

用于光动力治疗的组合物中，包含的骨条藻属的藻类的提取物含量(以提取物干重相对于组合物总重量计算)为0.001％至5％，优选为0.01％至2％，特别优选为0.1％至1％。

在本发明组合物的制备过程中，极性提取物的整合优选在惰性气氛(例如氮气或氩气)和/或黑暗中进行。这种整合条件使得能够最好地保护提取物的活性分子。

关于组合物的形式，其可以根据所需的给药模式采取任何所需形式。目前，该组合物优选施用于上皮表面(如皮肤)。此外，它优选采取皮肤科组合物的形式，例如软膏、霜、乳液或甚至凝胶。

优选地，该组合物还可包含至少一种抗氧化剂。作为可用于这种组合物中的抗氧化剂的示例，可提及维生素原A、维生素C、维生素E、多酚或番茄红素。优选地，选择维生素原A、维生素C或维生素E。

现在一般而言，该组合物可包括用于药物或美容制剂(优选皮肤科制剂)的多种类型的佐剂或活性成分，无论是脂肪物质、有机溶剂、增稠剂、胶凝剂、软化剂、抗氧化剂、乳浊剂、稳定剂、发泡表面活性剂和/或洗涤剂、润肤剂、富脂剂(superfatting agent)、香水、离子或非离子乳化剂、填充剂、多价螯合剂(sequestrant)、螯合剂(chelator)、防腐剂、精油、着色剂(coloring matter)、色素(pigments)、亲水性或亲脂性活性剂、保湿剂(例如甘油或二醇)、防腐剂、染剂(dye)、美容活性剂、矿物和/或有机防晒剂、矿物填料、合成填料、硅酮弹性体(silicone elastomer)或植物提取物或甚至脂囊泡(lipid vesicle)，或通常用于美容中的任何其他成分。

油的示例包括石蜡、异链烷烃(isoparaffin)、白色矿物油、植物油(来自花卉、水果、蔬菜、树木、谷物、油籽等)、动物油、合成油、硅油和氟化油；更特别的是：植物源油，如甜杏仁油、椰子油、蓖麻油、霍霍巴油(jojoba oil)、橄榄油、菜籽油、花生油、葵花油、小麦胚芽油、玉米胚芽油、大豆油、棉籽油、苜蓿油、l罂粟油、南瓜油、月见草油、小米油、大麦油、黑麦油、红花油、石栗油(bankoulier oil)、西番莲油、榛子油、棕榈油、乳木果油、杏仁油、海棠籽油(calophyllum oil)、seedwort oil、鳄梨油、金盏花油、来自花卉或蔬菜的油；乙氧基植物油；动物源油，如角鲨烯、角鲨烷；矿物油，如石蜡油、凡士林和异链烷烃；合成油，特别是脂肪酸酯，如肉豆蔻酸丁酯、肉豆蔻酸丙酯、肉豆蔻酸棕榈醇酯(cetyl myristate)、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、硬脂酸十六酯、硬脂酸异丙酯、硬脂肪酸辛酯、异鲸蜡醇硬脂酸酯、月桂醇油酸酯、月桂酸己酯、丙二醇二辛酸酯；衍生自羊毛脂酸的酯，如羊毛脂酸异丙酯、羊毛脂酸异辛酯、单酸甘油酯、双甘油和三甘油脂肪酸，如甘油三庚酸酯、烷基苯甲酸酯、聚α烯烃、聚烯烃(如聚异丁烯)、合成异烷烃(如异十六烷、异十二烷)、全氟化油和硅油。在后者中，可以提及更特别是二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、胺改性的硅酮、脂肪酸改性的硅酮、醇改性的硅酮、醇和脂肪酸改性的硅酮、聚醚基团改性的硅酮、改性的环氧硅酮、氟化基团改性的硅酮、环状硅酮和烷基改性的硅酮。

至于其他脂肪，可以提及直链或支链、饱和或不饱和的脂肪醇，直链和/或支链、饱和的和/或不饱和的脂肪醇的混合物，或直链或支链、饱和或不饱和的脂肪酸，直链或支链、饱和或不饱和脂肪酸的混合物。

在可使用的增稠和/或乳化聚合物中，存在例如丙烯酸或丙烯酸衍生物的均聚物或共聚物、甲基丙烯酸或甲基丙烯酸衍生物的均聚物或共聚物、丙烯酰胺的均聚物或共聚物、丙烯酰胺衍生物的均聚物或共聚物、丙烯酰胺甲基丙磺酸的均聚物或共聚物、乙烯基单体的均聚体或共聚物、丙烯酸三甲氨基乙酯的均聚剂或共聚物、植物或生物合成来源的水胶体，例如黄原胶、卡拉胶、角叉菜胶(carrageenan)、海藻酸盐；硅酸盐；纤维素及其衍生物；淀粉及其亲水衍生物；聚氨酯。

在可用于制备适用于制备W/O、O/W、W/O/W或O/W/O乳液的凝胶水相，或包含SEPIBIO^TM POTENTILLA 217的水凝胶的聚电解质型聚合物中，存在例如丙烯酸和2-甲基-[(l-氧代-2-丙烯基)氨基酸]1-丙烷磺酸(AMPS)的共聚物，丙烯酰胺和2-甲基-[(1-氧代-2-丙烯基)氨基]1-丙烷磺酸、2-酸共聚物-甲基-[(l-氧代-2-丙烯基]氨基]1-丙烷磺酸和(2-羟乙基)丙烯酸酯的共聚物，2-甲基-[(l-氧代-2-丙烯基)氨基]1-丙磺酸的均聚物，丙烯酸的均聚物，丙烯酰基乙基三甲基氯化铵和丙烯酰胺的共聚物，AMPS和乙烯基吡咯烷酮的共聚物，l'AMPS和N,N-二甲基丙烯酰胺的共聚物，AMPS、丙烯酸和N,N-二甲基丙烯酰胺的三元共聚物，丙烯酸和烷基丙烯酸酯(其碳链包含10至30个碳原子)的共聚物、AMPS和烷基丙烯酸酯(其碳链包括10至30个碳原子)的共聚物。

在可用于根据本发明的组合物中的蜡中，可以提及例如蜂蜡、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、小冠巴西棕榈蜡、日本蜡、中国蜡、米糠蜡、蒙丹蜡、软木纤维或甘蔗蜡、石蜡、褐煤蜡、微晶蜡、羊毛脂蜡、地蜡、聚乙烯蜡、氢化油、硅酮蜡、烯酮蜡、植物蜡、脂肪醇和脂肪酸(在室温下呈固体)、甘油酯(在室温下为固体)。

在可用于根据本发明的组合物的乳化剂中，可以提及：

-任选烷氧基化的烷基聚糖苷的脂肪酯；

-烷氧基化的脂肪酯；

-含脂肪链的聚亚烷基二醇氨基甲酸酯；

-脂肪酸、乙氧基化脂肪酸、脂肪酸山梨醇酯、乙氧基化脂肪酸酯、聚山梨酯、聚甘油酯、乙氧基化脂肪醇、蔗糖酯、烷基聚糖苷、醇硫酸化和磷酸化的脂肪或烷基聚糖苷和脂肪醇的混合物；

-选自烷基聚糖苷的乳化表面活性剂的组合；

-烷基聚糖苷与脂肪醇、聚甘油酯或聚二醇或多元醇的缔合。

在可用于根据本发明的组合物的表面活性剂中，可以提及典型地通常用于该活性领域的局部可接受的阴离子、阳离子、两性或非离子表面活性剂。

在可用于根据本发明的组合物的阴离子表面活性剂中，特别提及以下化合物的碱金属盐、碱土金属盐、铵盐、氨基酸盐、氨基醇盐：烷基醚硫酸盐、烷基硫酸盐、烷基酰胺基醚硫酸盐、烷芳基聚醚硫酸盐、单甘油酯硫酸盐、α-烯烃磺酸盐、链烷烃磺酸盐、烷基磷酸盐、烷基醚磷酸盐、烷基磺酸盐、烷基酰胺磺酸盐、烷芳基磺酸盐、烃基羧酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、烷基醚磺基琥珀酸盐、烷基酰胺磺基珀琥酸盐、烷基磺基乙酸盐、烷基肌氨酸盐、酰基羟乙基磺酸盐、N-酰基月桂酸盐、酰基乳酸盐。

在可用于根据本发明的组合物的两性表面活性剂中，可提及烷基甜菜碱、烷基酰胺基甜菜碱、苏丹碱(sultaines)、烷基酰胺烷基磺基甜菜碱、咪唑啉衍生物、磷酸甜菜碱、两性聚乙酸盐和两性丙酸盐。

为了进一步增强通过根据本发明的组合物所获得的活性，其可与其他活性成分组合，特别是已知用于抗老化、紧致、重组、刺激、激活、抗皱、保湿、抗菌、皮脂调节、净化、舒缓、放松、去收缩、抗压力、增亮、免疫调节、刺激细胞更新、提升、丰满、改善肤色光泽等的活性成分。

关于待治疗区域的光暴露以允许激活提取物中存在的光敏剂，所述光暴露是对具有包括在400至800nm之间(优选在450至700nm之间)的波长，以及在1J/cm²至100J/cm²之间(优选在1至10J/cm²之间)的强度(通量)的光波的暴露。

这种光波可以通过激光、脉冲光甚至LED获得。在治疗用途(且特别是皮肤科用途)的背景下，考虑到受试者的细胞不经历加热，优选使用LED，以限制其真皮和表皮所遭受的损伤。目前，这样的光波也可能对应于日光。

暴露时间包括在1分钟至2小时之间，优选在1至30分钟之间，或者甚至在1至10分钟之间，特别优选在2至5分钟之间。

与骨条藻的极性提取物相关的光敏活性的证明，使其可以用于任何类型的光动力治疗(PDT)。

“光动力治疗”是指在施用组合物后，通过组合物的光暴露进行治疗，以允许激活存在于骨条藻属的藻类的极性提取物中的光敏剂。

多种光动力治疗是可能的，例如痤疮的治疗、皮肤或牙龈的细菌感染的治疗、通过破坏毛囊的多毛症治疗、通过刺激脱发区域的头皮的秃发治疗、炎症性角化病(inflammatory keratoses)的治疗、黑色素瘤前皮肤区域的治疗、银屑病的治疗、良性皮肤病(如葡萄酒色斑、疣)的治疗、不同形式的汗腺炎(如化脓性汗腺炎、韦尔讷伊氏病(Verneuil's disease))的治疗，或甚至是抗血管生成的治疗，特别是玫瑰花结(rosette)的治疗。

优选地，皮肤科组合物旨在通过将组合物局部应用于受试者的皮肤表面，结合该皮肤表面的光暴露，以允许激活提取物中存在的光敏剂，治疗受试者中的痤疮。

与痤疮相关，这最好是对应于寻常痤疮、多形痤疮、囊肿型痤疮和聚合性痤疮以及继发性痤疮(例如，日光性痤疮或与治疗相关的痤疮)。

有利地，根据本发明的组合物旨在预防和/或治疗皮脂腺过度分泌皮脂。

目前，根据本发明的组合物还可以通过在受试者的上皮表面局部施用组合物，结合该上皮表面的暴露光，以允许激活提取物中存在的光敏剂，从而预防和/或治疗受试者中的细菌感染。

举例来说，我们可以明显地引用牙龈炎(细菌感染后牙龈发炎)或牙周炎(细菌炎症后牙周组织发炎)的预防或治疗，皮肤细菌感染(如传染性口角炎(perleche)、擦烂(intertrigo)、丹毒(erysipelas)、脓疱病(impetigo)或瘭疽(felon))的预防。

优选地，细菌感染是革兰氏阳性细菌感染。

施用皮肤科组合物的上皮表面可对应于牙龈(牙龈炎或牙周炎)，甚至对应于皮肤表面，例如面部、躯干、腿部、背部或手指，优选对应于面部。

关于受试者，它是哺乳动物，优选是人类。

在痤疮治疗的情况下，受试者通常在10至20岁之间。目前，痤疮的出现可能在约7-8岁，并在20年后持续，受试者可以小于10岁，也可以大于20岁。

根据本发明的组合物每天至少一次施用于受影响的上皮表面(皮肤、牙龈等)。

根据本发明的组合物的施用和光暴露的组合进行持续至少一周，以获得最佳效果，且优选的持续时间包含4至12周。

关于根据本发明的光动力治疗的方法，后者自然使用上述组合物。

光动力治疗对应于上述的其中一种治疗。

有利地，根据本发明的方法旨在预防和/或治疗受试者的痤疮。

还有利地，根据本发明的方法旨在预防和/或治疗受试者的细菌感染。

“治疗有效量”指足以达到所需生物效果的量。

关于根据本发明的美容治疗的方法，后者也使用上述组合物。

对此，目的与之前设想的一样。

有利地，该目的旨在消除黑头。

目前，关于根据本发明的试剂盒，除了包括如上所述的组合物之外，还包括能够诱导激活藻类提取物中存在的光敏剂的光源。

通常，这种光源发射的光辐射具有包括在400至800nm之间(优选在450至700nm之间)的波长，具有包括在1J/cm²至100J/cm²之间(优选在1至10J/cm²之间)的强度(通量)。

这种光源通常选自激光器、脉冲光，甚至LED，优选在脉冲光和LED之间。

现在转向用于净化表面的方法，这可以针对食品(农业食品)或医院使用。在医疗领域，可以对医疗装置、假体、植入物或其他进行消毒。在食品工业中，它可用于食品表面(肉、鱼等)的净化，以及我们所说的保护，即金属表面(机器、工作计划等)或地板或墙壁的净化。

在根据本发明的方法的情况下，优选使用提取物的制剂，允许其在待净化的表面上蒸发。因此，喷雾型制剂构成特别合适的制剂。

根据以下示例，将更好地理解本发明，这些示例仅用于说明目的，并不旨在限制所附权利要求书所限定的本发明的范围。

示例

示例1：获得骨条藻属的藻类的极性提取物：

优选地，所有提取都在惰性气氛(氮气饱和)下进行，以避免活性分子的明显降解。

对于该提取，使用10克生物量(玛氏骨条藻、格里斯骨条藻、敏盐骨条藻或曼氏骨条藻)。

优选地，在将藻类浸入400mL乙醇中之前，在-20℃下冷冻，并在室温下搅拌至少一小时(通常为4小时)。

在该浸渍步骤之后，将提取物离心以除去特别含有二氧化硅的颗粒，然后过滤上清液(例如0.2μm过滤器)。

最后，获得每克材料约40ml的提取物。

然后使用C18柱通过HPLC色谱(UV-DAD)分析由此获得的极性提取物。使用的洗脱梯度(流速为1mL/min)如下表1所示。

[表1]

洗脱组分的吸光度分析显示了许多吸光度峰。

示例2：骨条藻属的藻类的极性提取物的抗菌作用：

通过对以下菌株的琼脂扩散试验，评估所获得的玛氏骨条藻极性提取物的抗菌活性：痤疮丙酸杆菌(CIP53.117T)、金黄色葡萄球菌(CIP76.25)、表皮葡萄球菌(CIP109.562)。

对于每种菌株，在指数生长期对细菌悬浮液进行十倍稀释。将1mL稀释的细菌悬浮液接种到培养皿中的营养琼脂上，然后在琼脂中形成沉积区。

这些液滴区填充有：

-50μl极性提取物，20倍稀释

-50μl极性提取物，两倍稀释

-50μl庆大霉素(gentamicin)，其证明试验正常进行，该抗生素对受试菌株具有已证实的生物活性

-50μl营养培养基，补充乙醇作为溶剂对照(记为“Et5％”)。

在沉积溶液后，培养皿接受或不接受提供白光(总通量为25J/cm²)或红光(总通量为37.5J/cm²)的光源照射。在没有光照的情况下，进行无光照条件以确定提取物是否具有抗菌活性(毒性)。

通过样品沉积区域周围存在生长抑制区来显示抗菌活性。

白光下的结果如下表2所示。

[表2]

红光下的结果如下表3所示。

[表3]

正如预期的那样，结果显示了使用庆大霉素对每种菌株均存在细菌生长抑制区，无论是无光照还是用白光或红光照射。同样地，无论有无光照，均未观察到与阴性对照相关的细菌生长抑制。至于藻类骨条藻的极性提取物，在没有光照的情况下，极少或没有观察到对细菌生长的抑制。另一方面，观察到对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的细菌生长的抑制，随着提取物稀释度的降低，对所有菌的抑制作用更强。

总之，结果表明，极性提取物对黑暗中的细菌模型不具有抗菌活性或毒性。另一方面，提取物是可光激活的，因为它在白光和红光下均产生生长抑制区。此外，存在剂量效应，因为与稀释至1/2的提取物相比，稀释至1/20的提取物观察到更大的生长抑制区。

示例3：测定骨条藻属的藻类极性提取物的MIC(最小抑制浓度)和MBC(最小杀菌浓度)：

在96孔板中，通过微量法测定了玛氏骨条藻、格里斯骨条藻、敏盐骨条藻和曼氏骨条藻极性提取物的MIC和MBC。提取物的MIC(最小抑制浓度)对应于足以抑制细菌菌株生长的极性提取物的最小浓度。提取物的MBC(最小杀菌浓度)对应于足以杀死初始接种物中99.99％细菌的提取物的最低浓度。处于指数生长期的细菌(痤疮丙酸杆菌(S.aureus)、金黄色葡萄球菌(S.epidermidis)、表皮葡萄球菌(C.acnes))在不同浓度的极性提取物存在下进行培养。然后，将存在极性提取物的细菌进行白光(总通量为25J/cm²)或红光(总通量为37.5J/cm²)照射。在没有光照(黑暗)的情况下，进行无光照条件以确定测试的极性提取物是否具有抗菌活性(毒性)。在光照期后，然后将96孔板在符合细菌生长最佳条件的烘箱中进行孵育。

以下表4和表5分别示出了在白光下的MIC和MBC的结果。MIC和MBC值以μg/mL极性提取物表示。

[表4]

[表5]

以下表6和表7分别示出了在红光下的MIC和MBC的结果。MIC和MBC值以μg/ml极性提取物表示。

[表6]

[表7]

以下表8和表9示出了无光照情况下的MIC和MBC结果。MIC和MBC值以μg/mL极性提取物表示。

[表8]

[表9]

结果证实，骨条藻的极性提取物的光敏剂引起所观察到的细菌生长的抑制以及所观察到的细菌裂解，特别是用玛氏骨条藻的提取物(表4和表5与表8和表9相比)。然而，现在看来，这些提取物中的其他化合物也有助于(但轻微地)抑制金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的生长(参见[表8])。

示例4：玛氏骨条藻的极性藻类提取物的抗炎作用的体外评价

4.1方法

在正常人表皮角质形成细胞(NHEK)上评估了玛氏骨条藻的极性藻类提取物的抗炎特性。

将这些NHEK人表皮角质形成细胞接种于96孔板中添加0.25ng/mL EGF(表皮生长因子)、25μg/mL垂体提取物和25μg/mL庆大霉素的K-SFM培养基中，然后在37℃、含5％CO₂的气氛下进行孵育。培养至少1天后，在存在或不存在不同浓度的玛氏骨条藻的极性提取物的情况下，对NHEK细胞进行预孵育24小时。作为抗炎活性的阳性对照，NHEK细胞也在巴佛洛霉素(bafilomycin)(100nM)存在下进行预孵育。在该预孵育后，重新进行处理，然后NHEK细胞在Poly(I:C)存在下进行孵育24小时以诱导炎症。平行进行不含炎症诱导剂的对照条件(无刺激对照)。

孵育后收集培养上清液，通过测定IL-6分泌量，通过ELISA法测定角质形成细胞炎症水平。

4.2结果

[表10]

4.3解释和结论

正如预期的那样，与无刺激的细胞相比，用1μg/mL Poly(I:C)刺激NHEK细胞可诱导强烈产生促炎细胞因子IL-6(IL-6:1495vs<9)。在100nM巴佛洛霉素存在下，Poly(I:C)对NHEK细胞的作用被完全抑制(阳性参照)。

发现，当用浓度等于10μg/mL的提取物处理受刺激的NHEK细胞时，极性藻类玛氏骨条藻的提取物对由Poly(I:C)诱导的促炎细胞因子IL-6的释放诱导弱抑制(17％)，但有显著性。

示例5：玛氏骨条藻的极性藻类提取物的抗脂肪生成作用的体外评价

5.1方法

在由脂肪生成因子和雄激素因子刺激的SEBO662AR系(BIOALTERNATIVES系)的人皮脂腺细胞上，研究了玛氏骨条藻的极性藻类提取物对脂质过量产生的影响。

SEBO662AR人皮脂腺细胞首先在37℃下，在5％CO₂和抗生素存在下的专用培养基中进行培养。培养至少1天后，通过在脂肪生成因子和雄激素因子存在下孵育SEBO662AR细胞，在SEBO662AR细胞中诱导脂肪生成。然后在存在或不存在3种不同浓度的极性提取物的情况下孵育细胞。作为脂肪生成抑制活性的阳性对照，SEBO662AR细胞在浅蓝菌素(cerulenin)存在下进行孵育。在孵育期结束时，对总脂质进行荧光标记，并确定每种条件下的脂肪生成的抑制。

5.2结果

[表7]

***：p<0.001(极显著)；**：0.001≤p≤0.01(非常显著)；*：p>0.05(不显著)

5.3解释和结论

正如预期的那样，与无刺激的皮脂细胞相比，用含雄激素的脂肪生成混合物刺激SEBO662AR皮脂细胞会导致脂滴的形成和积聚(荧光强度/细胞核数量：298525比7895)。

表7中记录的测量结果表明，与受刺激且未经处理的细胞相比，用10μg/mL的玛氏骨条藻的极性藻类提取物处理受刺激细胞可以抑制51％的脂质生成。通过比较，与受刺激且未处理的细胞相比，用浅蓝菌素(阳性对照)处理这些相同的细胞仅抑制38％的脂质产生。表7中记录的测量结果表明，由玛氏骨条藻的极性藻类提取物诱导的脂肪生成抑制作用具有剂量依赖性。提取物浓度降低两倍产生38％的抑制；并且降低10倍产生21％的抑制。

最后，应注意的是，玛氏骨条藻的极性藻类提取物对细胞活力没有影响。事实上，计算每个视野的细胞核数量表明所有测试条件下具有全局可比性的细胞核数量。此外，在孵育结束时进行的显微镜观察期间，未观察到形态学变化。因此，玛氏骨条藻的藻类提取物对脂肪生成的抑制作用具有特异性，并且与相关的部分细胞毒性现象无关。

Claims

1.一种用于光动力疗法(PDT)的皮肤科组合物，其包括至少一种骨条藻属的藻类的极性提取物或从其衍生的光敏剂，其特征在于，其旨在通过将组合物局部施用于受试者的皮肤表面并结合所述皮肤表面的光暴露以允许激活光敏剂来预防或治疗受试者中的痤疮或细菌感染。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物旨在治疗痤疮。

3.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述骨条藻属的藻类选自包括Skeletonema ardens、巴巴多斯骨条藻、中肋骨条藻、细柱骨条藻、齿状骨条藻、多恩骨条藻、格里斯骨条藻、桂式骨条藻、日本骨条藻、玛氏骨条藻、地中海骨条藻、曼氏骨条藻、Skeletonema mirabile、江河骨条藻、Skeletonema probabile、拟中肋骨条藻、辛比尔斯克骨条藻、敏盐骨条藻、热带骨条藻、Skeletonema utriculosa和Skeletonema ventricosum的组。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述骨条藻属的藻类选自包括中肋骨条藻、格里斯骨条藻、玛氏骨条藻、曼氏骨条藻和敏盐骨条藻的组。

5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，骨条藻属的藻类的极性提取物通过用醇进行提取而获得，优选用乙醇或异丙醇。

6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，用于治疗痤疮的皮肤科组合物中，骨条藻属的藻类的提取物含量以提取物干重相对于组合物的总重量计算为在0.001％至5％之间，优选在0.01％至1％之间。

7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，待治疗区域的光暴露用于允许激活提取物中存在的光敏剂，所述光暴露对应于具有在400至800nm之间，优选在450至700nm之间的波长的光波的暴露。

8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，待治疗区域的光暴露用于允许激活提取物中存在的光敏剂，所述光暴露对应于具有包括在1J/cm²至100J/cm²之间，优选在1至10J/cm²之间的强度(通量)的光波的暴露。

9.一种用于去除黑头的美容方法，其包括以下步骤：

a)将有效量的组合物局部施用于受试者的上皮表面，所述组合物包含至少一种骨条藻属的藻类的极性提取物或从其衍生的光敏剂；和

b)光暴露所述上皮表面，以允许激活光敏剂。

10.一种用于光动力疗法的试剂盒，其包括：

a)组合物，其包含至少一种骨条藻属的藻类的极性提取物或由其衍生的光敏剂；和

b)光源。