CN115304053B - 碳纳米点、可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种碳纳米点、可注射碳点‑ε‑聚赖氨酸水凝胶及其制备方法与应用，属于水凝胶技术领域。解决了现有技术中的纳米杀菌剂存在固有的毒性、高成本、长期留存性等缺陷的技术问题。该碳纳米点的制备方法，步骤如下：将戊二醛和聚乙二醇溶解在溶剂中，得到的混合溶液在140℃‑200℃下加热2‑10h，冷却至室温后，得到的棕色固体分散在去离子水中，离心去沉淀，得到的粗产物用二次水透析，冷却，干燥，得到碳纳米点。该碳纳米点的水溶液与ε‑聚赖氨酸水溶液混合形成的水凝胶，具有显著的广谱抗菌活性、优异的促伤口愈合能力和良好的生物相容性等优点，可显著加速伤口愈合，促进上皮形成和血管生成。

Description

碳纳米点、可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶及其制备方法 与应用
技术领域
本发明属于水凝胶技术领域，具体涉及一种碳纳米点、可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶及其制备方法与应用，具体涉及该可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶在制备具有抗菌和促细菌感染伤口愈合的药物中的应用。
背景技术
细菌感染严重威胁着全世界人民的生命，人类与细菌的斗争从未停歇。虽然一些抗生素已能够抑制细菌性疾病，但滥用抗生素促进了耐药菌的进化，严重威胁公众健康。纳米技术的最新研究进展为抗菌治疗提供了良机，可以在不使用抗生素的情况下解决细菌感染带来的挑战。大量的纳米级杀菌剂，如贵金属(如Au、Ag、Pd、Ru、Pt)纳米颗粒(NPs)、金属氧化物(如ZnO、TiO2和CuO)纳米颗粒以及碳基纳米颗粒等因具有高效和广谱抗菌活性，已被用作抗生素的替代品。然而，这些纳米杀菌剂所固有的毒性、高成本、长期留存性等缺陷阻碍了它们的临床应用。
碳纳米点(CDs)由于具有易于表面功能化、高稳定性、强亲水性、良好的生物相容性和低毒性等优点而广泛应用于生物成像、传感、药物、染料、蛋白质递送和癌症治疗等领域。相比之下，尽管CDs比含金属的纳米杀菌剂和传统抗生素具有耐用和环保的优点，但是对其潜在抗菌活性的研究却很少。此外，大多数CDs必须辅助外部试剂或设备来实现抑菌。例如，Sun等人报道的CDs在可见光照射下可有效杀灭细菌。Huang等人制备了卤素/氮掺杂的CDs，通过在LED照射时产生活性氧(ROS)来杀死细菌。Zhang等人制备了掺铈的CDs，用于紫外激发下的伤口愈合。Qu等人报道的CDs在H2O2的帮助下增强其抗菌性能。然而，额外添加药剂或辅助光照相对复杂，可能会对某些健康组织造成伤害。因此，研制无需借助外界刺激即可杀菌和治愈伤口感染的CDs基纳米杀菌剂正成为人们关注的焦点。通常认为，带高正电荷的CDs很容易与带负电荷的细菌发生静电相互作用，直接破坏细菌的细胞膜。例如，Wu课题组构建的季铵化CDs灭活了革兰氏阳性菌。Zhao等人制备的季铵化CDs可以杀死革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。由Jian等人合成的超阳离子CDs可以有效消灭非多重耐药菌、多重耐药菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。然而，据我们所知，尚未发现具有显著抗菌活性的带负电荷的CDs。
水凝胶是一种具有多孔结构、吸水能力强、生物相容性良好的三维软材料。传统水凝胶的实际应用通常受到机械性能差和功能有限等缺点的阻碍。近年来，由含金属纳米颗粒、无金属纳米颗粒和金属有机框架等纳米材料构建的纳米水凝胶，集纳米材料和大分子的功能于一体，显著丰富了其应用。更重要的是，基于CDs的纳米水凝胶融合了CDs和水凝胶的特性，在传感、环境污染物去除、微生物消除、软骨再生和超级电容器等方面具有显著的优势。但是，关于CDs抗菌水凝胶的报道很少。因此，迫切需要开发一种简便的方法来构建CDs基抗菌水凝胶，以有效杀死细菌和治愈组织的细菌感染。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术中的纳米杀菌剂存在固有的毒性、高成本、长期留存性等缺陷的技术问题，提供一种碳纳米点、可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶及其制备方法与应用，该碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶具有显著的广谱抗菌活性、优异的促伤口愈合能力和良好的生物相容性等优点，可显著加速伤口愈合，促进上皮形成和血管生成。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明提供一种碳纳米点的制备方法，步骤如下：
步骤一、将戊二醛(GA)和聚乙二醇(PEG)按照体积比(1-100)：(1-100)溶解在溶剂中，得到混合溶液；
步骤二、将混合溶液在140℃-200℃下加热2-10h，冷却至室温后，得到棕色固体；
步骤三、将棕色固体分散在去离子水中，离心去沉淀，得到粗产物；
步骤四、将粗产物用二次水透析，冷却，干燥，得到碳纳米点。
优选的是，所述聚乙二醇为PEG 200-600。
优选的是，所述步骤一中，溶剂为乙醇、甲醇、水、二甲基亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的一种或多种的混合物。
优选的是，所述步骤一中，戊二醛和聚乙二醇的体积比为(1-100)：(1-10)，更优选的是(1-10)：(1-10)，尤其优选为3:1。
优选的是，所述步骤二在高压釜中进行。
优选的是，所述步骤三中，离心的转速为3000-10000rpm，离心的时间为5-20min。
优选的是，所述步骤四中，通过透析袋用二次水透析，透析袋的截止Mn为3.5kDa以内，透析时间为6-48h。
本发明还提供上述碳纳米点的制备方法制备的碳纳米点。
本发明还提供含有上述碳纳米点的可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶，经ε-聚赖氨酸(Plys)水溶液和碳纳米点水溶液混合而成；
所述ε-聚赖氨酸水溶液的浓度为50-400mg/mL，碳纳米点水溶液的浓度为50-200mg/mL，ε-聚赖氨酸水溶液和碳纳米点水溶液的质量比为(1-2):1。
优选的是，所述ε-聚赖氨酸水溶液与碳纳米点水溶液的质量比为2:1或1:1。
本发明还提供上述可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶的制备方法，步骤如下：按配比，将ε-聚赖氨酸水溶液与碳纳米点水溶液充分混合后，室温下放置5-40min，得到可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶。
本发明还提供上述可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶在制备具有抗菌和促细菌感染伤口愈合的药物中的应用。
本发明的原理为：戊二醛作为前体与聚乙二醇按照特定比例反应，得到一系列带负电荷的CDs。CDs表面的醛基可以破坏细菌膜，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌表现出显著的抑制作用。Plys具有一定的杀菌作用，通过CDs与Plys结合形成稳定、可注射、自愈合和抗菌的CD-Plys水凝胶。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的CD-Plys水凝胶具有很强的广谱抗菌效果，能够适用于各种形状的创口，促进伤口闭合和避免感染，为伤口愈合提供合适的生理环境，促进伤口愈合，促进上皮形成和血管生成，且无毒性，生物相容性好。经体内伤口愈合实验表明，CD-Plys水凝胶可以完全覆盖整个伤口，促进全层皮肤伤口愈合。经溶血和细胞毒性实验证实CD-Plys水凝胶具有良好的生物相容性。因此，CD-Plys水凝胶在细菌诱导的伤口感染和组织重建中具有巨大的应用潜力。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为CDs的Zeta电位；
图2为CDs的体外抗菌实验，a为CDs对大肠杆菌的抗菌测定，b为金黄色葡萄球菌的抗菌测定，c为用CD31接种2h的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的LB琼脂平板；
图3为CD110和CD1100对大肠杆菌的抗菌活性测定；
图4为CD110和CD1100针对金黄色葡萄球菌的抗菌测定；
图5为Plys对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌测定；
图6为平板计数法测定Plys对金黄色葡萄球菌的抗菌活性；
图7为CD31对L929细胞的MTT测定；
图8为Plys对L929细胞的MTT测定；
图9中，a为CD31的TEM分析，插图是CD31的粒径分布；比例尺：50nm；b为CD-Plys水凝胶的SEM图像，比例尺：200nm；c为Plys溶液(400mg/mL)、CD31溶液(200mg/mL)和CD-Plys水凝胶(Plys＝400mg/mL,CD31＝200mg/mL)在室温下的照片(从左至右)；d和e分别为可注射CD-Plys水凝胶在自然光下拍照和紫外灯365nm光下的照片；f为CD-Plys水凝胶的自愈合性能，从左至右依次为切割前的CD-Plys水凝胶，切割后的CD-Plys水凝胶，切割后相互接触30min后的CD-Plys水凝胶；g为CD-Plys水凝胶的频率扫描测量；h为CD-Plys水凝胶在1Hz的固定角频率下的应变扫描测量；i为CD-Plys水凝胶的溶血活性(从左至右依次为PBS、CD-Plys水凝胶和Triton X-100)；
图10为CD31在去离子水中的紫外-可见吸收光谱；
图11中，a和b分别为CD31水溶液和CD-Plys水凝胶在不同波长激发下的光致发光光谱；
图12为CD31、Plys和CD-Plys水凝胶的FT-IR光谱；
图13为CD31、Plys和CD-Plys水凝胶的X射线衍射图；
图14为CD31、Plys和CD-Plys水凝胶的Zeta电位；
图15为PBS、CD-Plys水凝胶和Triton X-100的溶血测定；
图16为L929细胞直接与CD-Plys水凝胶接触12、24和48h的细胞存活率；
图17中，a为CDs的制备及其对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌的抗菌活性的示意图，b为CD-Plys水凝胶的合成及其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用，c为CD-Plys水凝胶用作伤口敷料以防止细菌感染并促进伤口愈合；
图18为CD-Plys水凝胶的体外抗菌实验，a为CD-Plys水凝胶对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌敏感性，在24h进行琼脂扩散实验，b为用未包被或CD-Plys水凝胶包被的底物接种的LB琼脂，白点是板中活细菌的菌落，c和d分别为未使用/使用CD-Plys水凝胶处理的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的SYTO9/PI染色图像，比例尺：20mm；
图19为用CD31和CD-Plys水凝胶处理的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的SEM图像，未经处理的细菌为对照组；
图20为体内感染伤口愈合评估，a为大肠杆菌感染伤口的愈合图像，b为金黄色葡萄球菌感染伤口的愈合图像，c为伤口区域在治疗7天期间的变化(从外至内依次为：0天：红色图案；3天：蓝色图案；5天：黄色图案；7天：绿色图案)，d和e分别为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染伤口在不同时间点的伤口愈合率，数据表示为平均值，标准偏差为误差线(n＝6)；
图21为CD-Plys水凝胶对感染伤口的抗菌作用和皮肤伤口愈合能力的体内评估，a为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌从伤口组织中获得并在LB琼脂板上孵育，b和c分别为大肠杆菌金黄色葡萄球菌菌落在LB琼脂平板上的百分比，对照组(n＝6)；
图22为用PBS、CD31、Plys和CD-Plys水凝胶处理的皮肤组织的H&E染色图像(血管：白色箭头；毛囊：灰色箭头)，比例尺：200μm。
具体实施方式
为了进一步理解本发明，下面对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。
本发明的可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶的制备方法，步骤如下：
步骤一、将GA和PEG按照体积比(1-100)：(1-100)溶解在溶剂中，得到混合溶液；
步骤二、将混合溶液在140℃-200℃下加热2-10h，冷却至室温后，得到棕色固体；
步骤三、将棕色固体分散在去离子水中，离心去沉淀，得到粗产物；
步骤四、将粗产物用二次水透析，冷却，干燥，得到棕色CDs。
上述技术方案，步骤一中，聚乙二醇为PEG 200-600，优选PEG 200。
上述技术方案，步骤一中，有机溶剂没有特殊限制，优选为乙醇、甲醇、水、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中的一种或多种的混合物，更优选为乙醇。
上述技术方案，步骤一中，GA和PEG的体积比优选为(1-100)：(1-10)，更优选(1-10)：(1-10)，尤其优选3:1。
尤其优选为3:1，对应制备一系列不同的带负电荷的CDs。
上述技术方案，步骤二优选在高压釜(衬有聚四氟乙烯)中进行。
上述技术方案，步骤三中，离心的转速和时间没有特殊要求，能实现去沉淀的效果即可，优选离心的转速为3000-10000rpm，离心的时间为5-20min。
上述技术方案，步骤四中，通过透析袋用二次水透析，透析袋的截止Mn为3.5kDa以内，透析时间为6-48h。
本发明还提供上述碳纳米点的制备方法制备的碳纳米点，该CDs带负电荷，CDs表面带有醛基，可以破坏细菌膜，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌表现出显著的抑制作用。
本发明的可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶，经质量比为(1-2):1的Plys水溶液和CDs水溶液混合、静置而成，Plys水溶液的浓度为400mg/mL，CDs水溶液的浓度为200mg/mL。Plys具有一定的杀菌作用，通过CDs与Plys结合形成稳定、可注射、自愈合和抗菌的CD-Plys水凝胶。水一般采用去离子水。
上述技术方案中，Plys水溶液与CDs水溶液的质量比优选为2:1或1:1。
本发明的可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶的制备方法，步骤如下：按配比，将Plys水溶液和CDs水溶液充分混合后，室温下放置5-40min(放置过程中，碳纳米点上的醛基与Plys的氨基通过席夫碱反应共价连接形成CD-Plys水凝胶)，得到可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶。
本发明还提供上述可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶在制备具有抗菌和促细菌感染伤口愈合的药物中的应用。该药物没有特殊限制，可以是敷料，膏剂等等。
在本发明中所使用的术语，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义，除非另有说明。为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合实施例对本发明作进一步的详细介绍。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、装置、仪器、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。ε-聚赖氨酸(Plys)购自美伦生物科技有限公司。琼脂、蛋白胨和酵母粉购自CSI生化科技有限公司。氯化钠、氢氧化钠、戊二醛、无水乙醇和聚乙二醇(PEG200)购自国药化学试剂有限公司。活/死细胞双染试剂盒购自江苏凯基生物科技有限公司。MTT细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒购自上海远业生物科技有限公司。细胞培养基(DMEM)购自Gibco。SYTO 9/PI试剂盒购自江苏凯基生物技术股份有限公司。LB液体培养基(蛋白胨1％、酵母粉0.5％、氯化钠1％)。LB固体培养基(蛋白胨1％、酵母粉0.5％、氯化钠1％、琼脂粉1.5％)。
以下结合实施例进一步说明本发明。
实施例1
将GA和PEG200按照体积比(1-100)：(1-100)溶解在5mL乙醇中，得到的混合溶液转移至内衬为聚四氟乙烯的高压釜中，150℃下加热140min，冷却至室温后，将得到的棕色固体分散在去离子水中，10000rpm的转速离心20min除去沉淀，得到的粗产物通过透析袋(截止Mn：3.5kDa)用二次水透析24h，冷冻，干燥，得到棕色CDs。
以不同体积比的GA和PEG200制备一系列不同的带负电荷的CDs。具体如下：CD31、CD1001、CD101、CD11、CD13、CD110和CD1100的GA和PEG200的体积比分别为3:1(300μL:100μL)、100:1(1000μL:10μL)、10:1(100μL:10μL)、1:1(100μL:100μL)、1:3(100μL:300μL)、1:10(10μL:100μL)、1:100(10μL:1000μL)。
实施例2
按质量比2:1和1:1，分别将Plys水溶液(400mg/mL)和实施例1的一系列不同的带负电荷的CDs(200mg/mL)充分混合后，室温下放置40min(放置过程中，CDs上的醛基与Plys的氨基通过席夫碱反应共价连接形成CD-Plys水凝胶)，得到CD-Plys水凝胶(实验数据为按质量比2:1制备的CD-Plys水凝胶)。
对实施例1制备的CDs和实施例2制备的CD-Plys水凝胶的性能进行检测。
1、检测方法
1.1、CDs、Plys和CD-Plys水凝胶基本表征
傅里叶变换红外(FTIR)光谱通过Bruker Vertex 70IR分光光度计获得。紫外可见吸收光谱在UV-2450PC分光光度计(Shimadzu，Japan)上进行。荧光光谱由LS-55荧光光谱仪(Perkin-Elmer，美国)测量。通过JEM-1011电子显微镜(JEOL Co.，Japan)获得透射电子显微镜(TEM)图像。CD-Plys水凝胶的形态表征在扫描电子显微镜(SEM，Micromeritics FEIPHILIPS)上进行，加速电压为10kV。样品通过导电双面胶带安装在样品台上，并用金溅射40s。在Bruker D8衍射仪上进行X射线衍射(XRD)图谱。通过Zeta-sizer Nano ZS(MalvernInstruments Ltd.,UK)测量电位。流变仪(Anton Paar，Physical MCR 302)用于评估水凝胶的动态流变行为。使用蔡司共聚焦激光显微镜(蔡司LSM 700)获得细菌的激光共聚焦图像。
1.2、CDs和Plys的体外抗菌活性
用不同浓度的CDs或Plys处理后的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌液分别在37℃下孵育30min。将200μL与细菌共孵育的样品溶液在Luria-Bertani(LB)琼脂板上进行平板涂覆实验，并将涂好的平板在37℃下孵育24h。计算处理样品组和对照组的菌落数，菌落数以CFU/mL计数。
1.3、CD-Plys水凝胶的流变特性
通过流变仪测量了CD-Plys水凝胶的储能模量(G')和损耗模量(G')。将水凝胶样品置于25mm锥体的中心，上板置于0.5mm处，温度设置为37℃。首先，固定角频率，测量试样在0.01～100％剪切应力范围内的G'。以剪应力为横坐标，G'为纵坐标来确定线性粘弹性。选择0.1到100rad/s的角频率，测量样品的G'和G2，以角频率为横坐标，G'和G2为纵坐标绘制流变曲线。
1.4、溶血测定
将血液分别与CD-Plys水凝胶、PBS和Triton X-100在37℃下孵育60min。离心后测定各组上清液在540nm处的吸光度。
溶血(％)通过以下等式计算：
溶血(％)＝[(ODx－ODo)/(ODy－ODo)]×100
其中ODx、ODo和ODy分别是CD-Plys水凝胶、PBS中的稀释血液和Triton X-100中的稀释血液的吸光度值。
1.5、MTT检测
通过MTT法评估CDs和Plys对L929成纤维细胞系的细胞毒性。首先，将1.0×104个细胞接种到DMEM中的96孔板中，并在37℃的5％CO2培养箱中。然后用不同浓度的CD31或Plys溶液与L929成纤维细胞共孵育24h。接下来，每孔加入10μL MTT溶液，避光孵育4h。添加二甲亚砜以溶解MTT甲臜晶体。最后，使用酶标仪(Bio TeKtronixELX808TM USA)在490nm处测量吸光度。所有实验均进行三个平行测定。
CD-Plys水凝胶的细胞毒性通过与L929细胞直接接触来评估。将100μL CD-Plys水凝胶溶液加入到96孔细胞培养板的每个孔中。60min后，CD-Plys水凝胶形成并用无菌PBS溶液洗涤。此后，将L929细胞以每孔1.0×104个细胞的密度接种在CD-Plys水凝胶上。将细胞在37℃、5％CO2加湿培养箱中孵育12、24和48h，通过MTT法测定细胞活力。通过酶标仪测量490nm处的OD值。所有实验均进行三个平行测定。
1.6、体外抗菌实验
采用抑菌圈实验法评估CD-Plys水凝胶对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌活性。首先，将大肠杆菌或金黄色葡萄球菌的密度调整为105CFU/mL，然后将细菌分别铺展在琼脂表面。之后，将水凝胶置于琼脂板中心，与大肠杆菌或金黄色葡萄球菌在37℃下共培养24h。通过抑菌圈的直径来比较抗菌效果。
1.7、细菌活/死染色测定
将细菌和CDs-Plys共培养4h，并在黑暗中用SYTO 9(绿色荧光)和PI(红色荧光)染色30min。然后用CarlZeiss LSM 710共焦激光扫描显微镜观察混合物。
1.8、体内感染伤口愈合
所有动物程序均按照中国科学院长春应用化学研究所动物伦理委员会批准的指南(编号：2021-0004)进行。创建小鼠皮肤上的感染伤口以评估CDs、Plys、CD-Plys水凝胶的体内抗菌和愈合能力。总共将24只雌性小鼠随机分为8组。将所有小鼠背部皮肤的毛剃光后，在小鼠背部形成全层皮肤切除圆形伤口(直径8毫米)。伤口感染大肠杆菌(20μL PBS中1×105CFU)或金黄色葡萄球菌(20μL PBS中1×105CFU)，然后分别用PBS(对照组)、CDs、Plys和CD-Plys水凝胶处理。创面用无菌纱布覆盖，以上操作均在戊巴比妥麻醉下进行。此外，对实验情况进行详细记录，并在治疗后0、3、5、7天用Image J软件分析数据。各时间点四组创面闭合率按下式计算：
愈合率(％)＝[(A0-At)/A0]×100％
A0代表初始伤口面积，At代表每个时间点的残余伤口面积。
1.9、皮肤菌落计数方法
感染建模伤口处治疗1天后，提取伤口组织并浸泡在无菌盐水(1mL)中以获得含菌溶液。将稀释样品的等分试样置于琼脂上用于细菌生长，并在溶液在37℃培养后计数菌落用于分析。
1.10、组织学分析
7天后处死所有小鼠，采集伤口皮肤。通过使用光学显微镜(Nikon，Japan)拍摄苏木精和伊红(H&E)染色切片的照片。
2、检测结果
2.1 CDs的体外抗菌活性
CD1001、CD101、CD31、CD11、CD13、CD110和CD1100的zeta电位分别为-13.2、-9.8、-9.0、-11.1、-14.9、-20.4和-20.4mV(图1)。为验证碳纳米点的抗菌性能，选择大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别作为革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌的模型，通过细菌生长抑制测定来评估CDs的抗菌活性。如图2中a和2中b所示，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长状况与CDs的剂量相关，随着CDs浓度从8μg/mL增加到16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL、128μg/mL和256μg/mL，细菌活力逐渐下降。CD110可部分抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的增殖，直至浓度分别达到256μg/mL和64μg/mL。相比之下，CD1100在实验浓度范围内没有表现出抑菌效果(图3和图4)。在CDs中，CD31表现出最强的杀菌活性，并且通过菌落形成单位(CFU)计数测定进一步估计了其抗菌活性。如图2中c所示，随着CD31浓度从8μg/mL上升到256μg/mL，两种菌株的菌落数量明显减少。CD31对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度((MIC)分别为64μg/mL和32μg/mL，CDs表面的醛基可以破坏细菌膜，有效消灭细菌，证明CD31是一种广谱高效的杀菌剂。评估Plys的抗菌活性，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的存活率随着Plys剂量的增加而降低(图5)，Plys对两种菌株的MIC为128μg/mL(图6)。通过MTT测定评估CD31(图7)和Plys(图8)对L929细胞的细胞相容性。实验结果显示，即使浓度高达400μg/mL所有细胞存活率均超过89％，验证了CD31和Plys均具有良好的生物相容性。
2.2.CD31的表征
透射电子显微镜(TEM)图像(图9中a)显示CD31是球形的，平均直径为6.96±0.3nm。CD31在紫外可见区域具有较宽的吸收，在233nm和292nm有两个典型吸收带(图10)，前者归因于π-π*跃迁(C＝C)，后者对应于n-π*跃迁(C＝O)。CD31的发射光谱(图11a)表明，在400nm的最佳激发波长下，CD31在483nm处具有最强发射光谱。CD31的傅里叶变换红外(FT-IR)光谱(图12)证实有-OH和-CH2(3000-2800cm-1)、-CHO(1700cm-1)和-C-O～(1100cm-1)等基团的存在。CD31的X射线衍射图(XRD，图13)所示，在24.2°处的强衍射峰证实了CD31的结晶性。
2.3.CD-Plys水凝胶的表征
将Plys水溶液(400mg/mL)与CD31水溶液以2:1的质量比混合。将Plys水溶液和CD31水溶液充分混合后，室温下放置40min。在此过程中，CD31上的醛基与Plys的氨基通过席夫碱反应共价连接形成CD-Plys水凝胶，并通过“从溶胶到凝胶”的方法验证了水凝胶的粘度(图9c)。CDs-Plys水凝胶的发射光谱如图11b所示，在530nm处观察到CD-Plys水凝胶的最大发射光谱，其相对于CDs的发射光谱红移45nm。通过FT-IR光谱进一步阐明CD-Plys水凝胶的形成(图12)。CD-Plys水凝胶的FT-IR光谱具有亚胺键的特征振动(1658cm-1)，并伴随着醛基特征峰(1700cm-1)的减弱，表明CD31中的醛基与Plys中的氨基成功结合。Plys的XRD光谱在27.4°处呈现强尖峰，在40.3°处呈现宽带，而CD-Plys水凝胶在25.8°和39.5°处具有两个宽特征峰(图13)，验证了CD-Plys水凝胶是由CD31和Plys反应合成的。CD31、Plys和CD-Plys水凝胶的zeta电位分别为-9.0、+9.29和+9.18mV，进一步证明了CD-Plys水凝胶的成功制备(图14)。
扫描电子显微镜(SEM)分析表明，CD-Plys水凝胶具有多孔结构，这可归因于CD31和Plys之间的交织网络(图9中b)。CD-Plys水凝胶固有的多孔结构可以显著增加与伤口的接触面积，并迅速吸收血液和组织渗出物。如图9中d和e所示，CD-Plys水凝胶可以通过注射器针头连续注入载玻片上，写出字母“CCUT”(指长春工业大学)和“CIAC”(指中科院长春应用化学研究所)，具备很好的挤出性。图9中f展示了CD-Plys水凝胶的自修复特性。切下的两块水凝胶相互接触后30min内即可融合在一起。由于网络中的亚胺键是可逆的，CD-Plys水凝胶很容易被切成两半。一旦这两个片段相互接触，断裂表面上的氨基将与接触的醛基快速反应并再生亚胺键，从而实现水凝胶的自我修复。为了测试CD-Plys水凝胶的力学性能，进行了不同频率和应变下的流变分析。如图9中g所示，在整个频率扫描范围内，储能模量(G')值远高于损耗模量(G”)，证实CD-Plys水凝胶确实拥有完善的3D网络。随着频率的增加，最大G'值达到3.3kpa，表明CD-Plys水凝胶具有较高的机械强度。通过动态流变仪研究了CD-Plys水凝胶的触变行为。图9中h显示CD-Plys水凝胶的水凝胶结构直到应变超过400％才被破坏。CD-Plys水凝胶对红细胞(RBC)的溶血毒性如图9中i和图15所示。CD-Plys水凝胶组仅有1.4％的红细胞裂解，说明CD-Plys水凝胶具有良好的血液相容性。通过MTT测定评估CD-Plys水凝胶对L929细胞的细胞相容性(图16)。即使在与CD-Plys水凝胶直接接触48h后，L929的细胞存活率也超过95％。CD-Plys水凝胶表现出增强的广谱抗菌功效(图17中a和b)，能够自动适应不同的伤口状况，促进伤口闭合，避免感染和污染，为伤口愈合提供合适的生理环境，促进伤口愈合(图17中c)。优异的生物安全性赋予CD-Plys水凝胶在生物医学应用中的巨大潜力。
2.4 CD-Plys水凝胶的体外抗菌
当大肠杆菌或金黄色葡萄球菌在37℃下用不同浓度(50或200mg/mL)的CD-Plys水凝胶处理24h时，会形成大小不同的抑菌圈(图18中a)。对于200mg/mL的CD-Plys水凝胶，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌组的抑菌圈直径分别约为2.0±0.05cm和3.0±0.06cm。对于50mg/mL的CD-Plys水凝胶，大肠杆菌组和金黄色葡萄球菌组的抑菌圈直径分别约为1.0±0.02cm和1.7±0.02cm。结果表明，CD-Plys水凝胶对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有优异的广谱抗菌功效，其抗菌活性呈浓度依赖性。此外，CD-Plys水凝胶对金黄色葡萄球菌的抗菌活性高于大肠杆菌。然后，通过在琼脂板表面涂覆CD-Plys水凝胶，评估CD-Plys水凝胶对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的接触抗菌能力，对照组未经过CD-Plys水凝胶处理。如图18中b所示，从涂有CD-Plys水凝胶基底收集的细菌悬浮液几乎没有增殖大肠杆菌或金黄色葡萄球菌菌落，而对照组明显观察到细菌菌落。这些结果证实了CD-Plys水凝胶可以作为具有抗菌作用的局部抗菌涂层。为了进一步评估CDs-Plys的抗菌活性，使用SYTO 9绿色染料和碘化丙啶(PI)红色染料分别对活细菌和死细菌进行了活/死染色测定。将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌与CD-Plys水凝胶一起孵育12h，然后用SYTO 9和PI共染色。如图18中c和18中d所示，对照组中的细菌发出强烈的绿色荧光，表明细菌存活。相比之下，CDs-Plys组中的细菌显示出强烈的红色信号，表明所有的细菌都被CD-Plys水凝胶杀死。
2.5 CD31和CD-Plys水凝胶的抗菌机制
SEM用于研究用CD31和CD-Plys水凝胶处理后细菌的形貌变化(图19)。未经处理的细菌具有规则的形状，完整的膜和清晰的边缘。与CD31共孵育后，大肠杆菌的膜收缩并破裂，而金黄色葡萄球菌被破坏，细胞质流出。众所周知，纳米杀菌剂的表面性质直接影响其与细菌的相互作用。虽然CD31的zeta电位为负，但醛基可以不可逆地破坏细菌细胞壁和细胞质膜，最终导致细菌死亡。对于用CD-Plys水凝胶处理的细菌，观察到更严重的收缩、塌陷、开裂、融合和细胞内成分渗出等现象，证实CD-Plys水凝胶对细菌有严重的破坏作用。
2.6 CD-Plys水凝胶的体内抗菌和皮肤伤口愈合
在小鼠背部创建具有圆形皮肤损伤(直径8毫米)的全层伤口缺损模型。随后将48只小鼠随机分为8组。随机选择四组小鼠感染大肠杆菌，其余四组小鼠感染金黄色葡萄球菌。监测不同条件下的伤口愈合过程(图20中a和20中b)，并在7天的治疗期间绘制伤口闭合的情况(图20中c)。在图20中d和20中e中评估并计算第3、5和7天的伤口愈合率。
感染伤口处理24h后，从伤口组织中提取残留液，用LB培养基培养24h，然后通过标准平板计数法进行测量(图21中a)。用CD、Plys或CD-Plys水凝胶处理的伤口组织中几乎没有细菌菌落。图21中a的统计分析分别如图21中b(大肠杆菌)和图21中c(金黄色葡萄球菌)所示。结果表明，CD-Plys水凝胶具有最强的抗菌能力。对于所有小鼠，伤口大小都随时间逐渐减小。第三天，两个CD-Plys水凝胶组感染伤口的表皮开始再生。第7天，CD-Plys水凝胶治疗的两组小鼠伤口愈合最好，伤口接近闭合，愈合率分别为90％(大肠杆菌)和92％(金黄色葡萄球菌)，此外，长了很多毛发。结果证实，CD-Plys水凝胶增强的抗菌活性是CD31和Plys的协同作用，可显著加速皮肤伤口闭合和组织再生。
组织学分析用于评估再生伤口组织的愈合效果。治疗7天后，解剖组织用苏木精和伊红(H&E)染色(图22)。对照组中大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染的组织显示出严重的炎症细胞浸润。对于CD31组和Plys组，观察到一些新的血管和毛囊。CD-Plys水凝胶组表现出组织良好的层状上皮和有序的肉芽组织，具有大量新生血管和毛囊。组织切片的结果表明，CD-Plys水凝胶可用作治疗细菌感染和促进皮肤伤口愈合过程的有效伤口敷料。
本发明由GA和PEG200合成了具有强抗菌活性的带负电荷的CD31，可有效破坏大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，MIC分别为64μg/mL和32μg/mL。然后CD31与Plys反应制备CD-Plys水凝胶。CD-Plys水凝胶可以整合CD31和Plys的有利特性，达到“一加一大于二”的协同抑菌效果。结合良好的可注射性、自愈性、生物相容性和广谱抗菌活性等特性，CD-Plys水凝胶可显著促进全层皮肤伤口愈合，加速伤口闭合并改善皮肤再生。
显然，上述实施方式仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施例的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有实施例予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.碳纳米点的制备方法，其特征在于，步骤如下：
步骤一、将戊二醛和聚乙二醇按照体积比(1-100)：(1-100)溶解在溶剂中，得到混合溶液；
步骤二、将混合溶液在140℃-200℃下加热2-10h，冷却至室温后，得到棕色固体；
步骤三、将棕色固体分散在去离子水中，离心去沉淀，得到粗产物；
步骤四、将粗产物用二次水透析，冷却，干燥，得到碳纳米点。
2.根据权利要求1所述的碳纳米点的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，聚乙二醇为PEG 200-600；
溶剂为乙醇、甲醇、水、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中的一种或多种的混合物；
戊二醛和聚乙二醇的体积比为(1-100):(1-10)。
3.根据权利要求2所述的碳纳米点的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，戊二醛和聚乙二醇的体积比为3:1。
4.根据权利要求1所述的碳纳米点的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，离心的转速为3000-10000rpm，离心的时间为5-20min。
5.根据权利要求1所述的碳纳米点的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，通过透析袋用二次水透析，透析袋的截止Mn为3.5kDa以内，透析时间为6-48h。
6.权利要求1-5任何一项所述的碳纳米点的制备方法制备的碳纳米点。
7.含有权利要求1-5任何一项所述的碳纳米点的可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶，其特征在于，经ε-聚赖氨酸水溶液和碳纳米点水溶液混合而成；
所述ε-聚赖氨酸水溶液的浓度为50-400mg/mL，碳纳米点水溶液的浓度为50-200mg/mL，ε-聚赖氨酸水溶液和碳纳米点水溶液的质量比为(1-2):1。
8.根据权利要求7所述的可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶，其特征在于，所述ε-聚赖氨酸水溶液与碳纳米点水溶液的质量比为2:1或1:1。
9.权利要求7所述的可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤如下：按配比，将ε-聚赖氨酸水溶液与碳纳米点水溶液充分混合后，室温下放置5-40min，得到可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶。
10.权利要求7所述的可注射碳纳米点-ε-聚赖氨酸水凝胶在制备具有抗菌和促细菌感染伤口愈合的药物中的应用。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101301494A (zh) * 2008-07-08 2008-11-12 中南大学 一种中枢神经修复用水凝胶材料及其制备方法
US20130224282A1 (en) * 2010-09-21 2013-08-29 Massachusetts Institute Of Technology Multistage Nanoparticles
CN105727378A (zh) * 2014-12-09 2016-07-06 中国科学院大连化学物理研究所 一种心肌修复用bFGF缓释明胶-聚乙二醇复合凝胶膜的制备方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05310507A (ja) * 1992-05-15 1993-11-22 Mitsubishi Materials Corp 粉末タイプの殺菌、消臭剤

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101301494A (zh) * 2008-07-08 2008-11-12 中南大学 一种中枢神经修复用水凝胶材料及其制备方法
US20130224282A1 (en) * 2010-09-21 2013-08-29 Massachusetts Institute Of Technology Multistage Nanoparticles
CN105727378A (zh) * 2014-12-09 2016-07-06 中国科学院大连化学物理研究所 一种心肌修复用bFGF缓释明胶-聚乙二醇复合凝胶膜的制备方法

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