CN115152619A - 一种利用洋葱无蜡粉可视化标记选育全不育型抗葱蓟马杂交种的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用洋葱无蜡粉可视化标记选育全不育型抗葱蓟马杂交种的方法，该方法利用洋葱无蜡粉抗葱蓟马形态学特征、分子标记筛选无蜡粉保持株和不育株，或者转育无蜡粉不育系，建立稳定的无蜡粉抗葱蓟马不育系，再利用筛选的优良无蜡粉保持系与不育系进行杂交配组，筛选优良杂交组合，从而获得利用洋葱无蜡粉可视化标记选育全不育型抗葱蓟马杂交种。采用本发明方法选育全不育型抗葱蓟马杂交种，能够有效减少化学农药的使用量，产品达到绿色安全标准和减少种植户成本的投入；自留种后代表面有蜡粉，失去抗虫的特征，有效的保护了品种权，该方法具有自主创新性，可重复性，为洋葱制种提供新的思路与方法。
Description
技术领域
本发明涉及洋葱新品种选育技术领域，具体涉及一种利用洋葱无蜡粉可视化标记选育全不育型抗葱蓟马杂交种的方法。
背景技术
洋葱(Allium cepa L.)是世界上主要蔬菜种类之一，中国是栽培面积最多的国家之一。近十年来大部分洋葱杂交种为国外进口，缺乏自主创新品种，近几年国内洋葱育种者开始进行洋葱杂交种的选育，生产中的葱蓟马是主要的害虫，而抗虫材料的筛选鉴定才起步，另外洋葱由于皮色市场要求纯紫色、黄或者白色，也有粉红色，通过颜色来选育杂交种控制分离比较困难，而纯色杂交种很多种植户还会继续留种，全不育型杂交种的应用能够解决品种权保护的核心问题，通过集成形态学无蜡粉可视化标记特点，能够有效保护品种特征，兼顾抗葱蓟马和F1杂交种均为不育株的特点来达到优良的洋葱杂交种的生产。提高自主品种的创新、品种权保护以及降低农药使用量，节本增效。
发明内容
本发明的目的是针对现有洋葱品种权保护困难、缺乏抗虫自主创新品种的技术问题，提供一种利用洋葱无蜡粉可视化标记选育全不育型抗葱蓟马杂交种的方法。该方法利用洋葱无蜡粉抗葱蓟马形态学特征、分子标记筛选无蜡粉保持株和不育株，或者转育无蜡粉不育系，建立稳定的无蜡粉抗葱蓟马不育系，再利用筛选的优良无蜡粉保持系与不育系进行杂交配组，筛选优良杂交组合，从而获得利用洋葱无蜡粉可视化标记选育全不育型抗葱蓟马杂交种的方法，以解决减少农药使用和品种权保护的问题。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种利用洋葱无蜡粉可视化标记选育全不育型抗葱蓟马杂交种的方法，该方法包括如下步骤：
a、从洋葱资源圃中筛选出叶片表面无蜡粉的洋葱苗，收获洋葱球后存储，当年10月份定植田间；
b、第二年春天，给选中的洋葱种球套隔离网罩，进行人工辅助单株自交授粉；
c、9月中旬将收获的种子进行播种，洋葱苗移栽前进行叶片蜡粉观察，拔掉有蜡粉植株，若超过1/3有蜡粉则淘汰；
d、移栽苗叶片全部表现为无蜡粉特征，在洋葱苗返青期、膨大期、倒伏期进行长势、叶片开展度、蓟马数量、熟期、球型、抗病、产量数据统计；
e、根据育种目标特性进行分类，将洋葱叶片上蓟马数量少，洋葱球产量高作为关键指标，选择综合评价最高的育种目标材料，收获的种球越夏存储后，淘汰腐烂洋葱球，11月份每个品系群体定植，优先选择地理隔离或者采用大型防虫网进行隔离，人工辅助授粉；
f、开花期人工鉴定无蜡粉不育株，并利用分子标记jnurf13鉴定无蜡粉可育株中的保持株得到无蜡粉保持株，对不育株和无蜡粉保持株进行杂交获得无蜡粉不育系D；
或者，若田间未发现不育株或筛选得到的不育株数量较少，且群体无法扩大，需要进行洋葱无蜡粉由可育转不育，由鉴定获得的无蜡粉保持株A(mm)与前期筛选有蜡粉不育株B(MM)杂交获得有蜡粉不育F1(Mm)，与父本无蜡粉保持株A(mm)杂交获得无蜡粉不育CF2(mm)，再与父本无蜡粉保持株A(mm)杂交获得纯合的无蜡粉不育系D；
g、以获得的无蜡粉不育系D作为母本，分子标记jnurf13重新鉴定优良无蜡粉抗葱蓟马可育株中的保持株F，扩繁获得保持系群体F为父本，进行杂交获得无蜡粉全不育型杂交种，对F1群体进行抗蓟马特性研究，筛选出全不育型无蜡粉抗蓟马杂交组合，继而扩大父母本量进行杂交制种获得全不育型抗葱蓟马杂交种。
一种利用洋葱无蜡粉可视化标记选育全不育型抗葱蓟马杂交种的方法，该方法包括如下步骤：
a、从洋葱资源圃中筛选出叶片表面无蜡粉的洋葱苗，收获洋葱球后存储，当年10月份定植田间；
b、第二年春天，给选中的洋葱种球套隔离网罩，进行人工辅助单株自交授粉；
开花期人工鉴定获得无蜡粉不育株W，并利用分子标记jnurf13鉴定无蜡粉可育株中的保持株得到无蜡粉保持株T，对无蜡粉不育株W和无蜡粉保持株T进行杂交获得无蜡粉不育系Z；
c、9月中旬将收获的无蜡粉不育系Z种子进行播种，洋葱苗移栽前进行叶片蜡粉观察，保留无蜡粉植株；
d、移栽苗叶片全部表现为无蜡粉特征，在洋葱苗返青期、膨大期、倒伏期进行长势、叶片开展度、蓟马数量、熟期、球型、抗病、产量数据统计；
e、根据育种目标特性进行分类，将洋葱叶片上蓟马数量少，洋葱球产量高作为关键指标，收获的种球越夏存储后，淘汰腐烂洋葱球，11月份将无蜡粉不育株Z与无蜡粉保持株T进行群体配组混合定植；
f、以获得的无蜡粉不育系Z作为母本与无蜡粉保持株T系列为父本分别配组进行扩繁配组获得杂交种子，然后进行杂交组合区域试验，筛选出全不育型无蜡粉抗蓟马杂交组合，继而扩大父母本量进行杂交制种获得全不育型抗葱蓟马杂交种。
作为一种优选技术方案，上述方法的步骤(a)中，在洋葱资源圃中通过肉眼观察筛选出叶片表面无蜡粉的洋葱苗，是获得无蜡粉可视化标记的关键材料，群里数量要多，筛选的突变材料要在30株以上，品种选自黄、紫、白三种颜色中的至少一种，要在洋葱苗床中筛选，苗床面积在5亩以上。在商业化洋葱杂交种子无蜡粉突变概率低些，常规自留种中突变会高些。
作为一种优选技术方案，上述方法的步骤(a)中，洋葱球收获后通过网袋自然条件悬挂存储，每个网袋装10个洋葱球，去除腐烂洋葱，获得抗性耐存储的材料，并于当年10月份定植田间，定植一般以单个洋葱球定植，每个洋葱球株行距保持1～1.5m。
作为一种优选技术方案，上述方法的步骤(b)中，第二年春天，在5月初单株选中的洋葱种球套隔离网罩，网的高度要保持离地在1.5～2m高，中间用钢管支撑，顶部细钢筋撑开隔离网，并将洋葱花薹和花球宽松的绑在中间的钢管上，便于开花后花球集中，方便授粉。
作为一种优选技术方案，上述方法的步骤(b)中，开花时每天上午9～11点和下午3～4点，用宽度2～3cm软毛刷对洋葱小花进行授粉，授粉前后对双手酒精喷雾消毒，用完的毛刷用套子包好，防止雨水沾湿，毛刷与洋葱球一一对应，完成人工辅助单株自交授粉。
作为一种优选技术方案，上述方法的步骤(c)中，收获的种子在中日照地区9月10日至20日进行播种，每株洋葱单独一个区域进行播种，并编上编号；11月10日-15日对洋葱苗进行叶片蜡粉观察。
作为一种优选技术方案，方法一中开花期人工鉴定不育株是在步骤(b)中的开花期或者/和步骤(f)中的开花期人工鉴定不育株。
进一步优选的：开花期人工鉴定不育株时，由于不育株的数量相对较少，在群体数量较多的条件下，能够筛选出不育株，并利用分子标记jnurf13鉴定无蜡粉可育株中的保持株获得无蜡粉保持株，对不育株和无蜡粉保持株进行杂交获得无蜡粉不育系，并对保持株进行扩繁；
或者，开花期人工鉴定不育株时，田间不育株未发现或筛选得到的数量较少，且群体无法扩大，减慢了育种进程，需要进行洋葱无蜡粉由可育转不育，此方法的前提条件是有稳定的无蜡粉保持系和有蜡粉不育系；无蜡粉保持株A(mm)利用分子标记能够在群体中筛选到一定群体数量，无蜡粉保持株A(mm)与有蜡粉不育株B(MM)可以是洋葱单株，也可以是同一品种的群体。
作为一种优选技术方案，上述方法中利用分子标记jnurf13鉴定无蜡粉可育株中的保持株的引物对为：上游引物TGCAAGCTTGGAACTTACGC，下游引物TTGCCAAAGGTTGCAATACA。
本发明相比现有技术有如下优点：
本发明利用无蜡粉材料进行抗葱蓟马的筛选，能够有效减少化学农药的使用量，产品达到绿色安全标准和减少种植户成本的投入；然后对抗虫材料分别进行保持株和不育系的筛选，建立稳定的配套不育系，利用优良抗虫保持株进行杂交种配置，筛选出优良组合，F1能够保持全部不育，种植户无法留种，即使收到种子也是杂合，表面有蜡粉，失去抗虫的特征，有效的保护了品种权，另外叶片无蜡粉使得一眼就能认出自己的品种，该方法具有自主创新性，可重复性，为洋葱制种提供新的思路与方法。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例1紫皮早中熟抗葱蓟马洋葱‘连抗320’
a、在2014年洋葱资源圃801、803、807中通过肉眼观察筛选出叶片表面无蜡粉的紫色洋葱苗40株，待收获洋葱球后网袋自然条件悬挂存储，每个网袋装10个洋葱球，去除腐烂洋葱，获得抗性耐存储的材料，并于当年10月份定植田间32个葱球，定植一般以单个洋葱球定植，每个洋葱球株行距保持1～1.5m；
b、2015年春天，给选中的洋葱种球单株套隔离网罩，网的高度要保持离地在1.5～2m高，中间用钢管支撑，顶部细钢筋撑开隔离网，并将洋葱花薹和花球宽松的绑在中间的钢管上，便于开花后花球集中，方便授粉。
5月份开花时，每天上午9～11点和下午3～4点，用宽度2～3cm软毛刷对洋葱小花进行人工辅助单株自交授粉，授粉前后对双手酒精喷雾消毒，用完的毛刷用套子包好，防止雨水沾湿，毛刷与洋葱球一一对应，防止交叉串粉，完成人工辅助单株自交授粉。
c、2015年9月中旬(9月10日至20日)对收获的种子在江苏、安徽、山东等中日照地区进行播种，每株洋葱单独一个区域进行播种，并编上编号；11月10日-15日对洋葱苗进行叶片蜡粉观察，统计有蜡粉和无蜡粉的数量，如果有蜡粉则拔掉有蜡粉植株，若超过1/3有蜡粉则淘汰此材料。
洋葱苗移栽前进行叶片蜡粉观察，全部为无蜡粉，进行小区区域抗虫研究，对照组有正常使用农药管理，抗蓟马组均不使用任何农药；
d、移栽苗叶片全部表现为无蜡粉特征，在2016年春天洋葱苗返青期、膨大期、倒伏期进行长势、叶片开展度、蓟马数量、熟期、球型、抗病、产量等数据统计；
e、根据育种目标特性进行分类，将洋葱叶片上蓟马数量少，洋葱球产量高作为关键指标，综合评价最高的育种目标材料，2016年收获多个优良抗葱蓟马单株群体，种球越夏存储后，淘汰腐烂洋葱球，11月份每个品系群体混合定植，优先选择地理隔离或者采用大型防虫网进行隔离，人工辅助授粉；
f、2017年5月刚开始开花后人工鉴无蜡粉定不育株，取叶片提取DNA并利用分子标记jnurf13(上游引物TGCAAGCTTGGAACTTACGC，下游引物TTGCCAAAGGTTGCAATACA)鉴定无蜡粉可育株中的保持株得到无蜡粉保持株，PCR扩增程序为95℃4min；95℃30s，65℃(退火温度每次0.8℃递减)30s，72℃1min，循环10次；95℃30s，57℃30s，72℃1min，循环35次；最后72℃10min，PCR扩增产物用9％的聚丙烯酰胺电泳检测，对不育株和无蜡粉保持株进行杂交获得无蜡粉不育系D，并对无蜡粉保持株进行扩繁，当年并未发现不育株。
考虑田间发现不育株概率小，2017年5月进行洋葱无蜡粉由可育转不育，由步骤f中获得无蜡粉保持株A(mm)与前期筛选有蜡粉不育株(不育系T系列，[1]杨海峰,惠林冲,陈微,李威亚,何林玉,郇国磊,王江英,徐卫平,李景芳,缪美华,陈振泰,潘美红.应用分子标记辅助选育洋葱不育系及其杂交应用[J].江西农业学报,2019,31(07):1-9.[2]潘美红,杨海峰,惠林冲,薛萍,张新圣,缪美华,陈振泰.洋葱CMS-T型育性分子标记的筛选与鉴定[J].西北农业学报,2018,27(04):576-585.)B(MM)杂交获得有蜡粉不育F1(Mm)，2018年小株留种与父本无蜡粉保持株A(mm)杂交获得无蜡粉不育CF2(mm)，2019年再由父本无蜡粉保持株A(mm)获得纯合的无蜡粉不育系D，A和B可以是洋葱单株，也可以是同一品种的群体。
g、2020年对获得的无蜡粉不育系D作为母本，分子标记jnurf13重新鉴定优良无蜡粉抗葱蓟马可育株中的保持株F，扩繁获得保持系群体F为父本，进行杂交获得无蜡粉全不育型杂交种，对F1群体进行抗蓟马特性研究，2021年筛选出全不育型无蜡粉抗蓟马杂交组合，继而扩大父母本量进行杂交制种，选育出紫皮早中熟抗葱蓟马洋葱‘连抗320’，进行区域试点、示范和推广，继而扩大父母本量进行杂交制种。对田间抗蓟马抗性研究在不使用农药的情况下与使用农药抗虫效果基本一致，产量无差别，本发明方法选育的全不育型无蜡粉抗葱蓟马杂交种减少化学杀虫剂90％以上的使用，保护生态环境和产品质量安全。
实施例2黄皮中晚熟洋葱‘连抗501’
a、在2014年洋葱资源圃501中通过肉眼观察筛选出叶片表面无蜡粉的洋葱苗54株，待收获洋葱球后网袋自然条件悬挂存储，每个网袋装10个洋葱球，去除腐烂洋葱，获得抗性耐存储的材料，并于当年10月份定植田间38个葱球，定植一般以单个洋葱球定植，每个洋葱球株行距保持1～1.5m；
b、2015年春天，给选中的洋葱种球单株套隔离网罩，网的高度要保持离地在1.5～2m高，中间用钢管支撑，顶部细钢筋撑开隔离网，并将洋葱花薹和花球宽松的绑在中间的钢管上，便于开花后花球集中，方便授粉。
5月份开花时，每天上午9～11点和下午3～4点，用宽度2～3cm软毛刷对洋葱小花进行人工辅助单株自交授粉，授粉前后对双手酒精喷雾消毒，用完的毛刷用套子包好，防止雨水沾湿，毛刷与洋葱球一一对应，防止交叉串粉，完成人工辅助单株自交授粉。
其中有1株是无蜡粉不育株W，对另外37株进行分子标记jnurf13鉴定无蜡粉可育株中的保持株(鉴定过程同实施例1)，发现2株为无蜡粉保持株T，对无蜡粉不育株W和无蜡粉保持株T进行杂交获得无蜡粉不育系Z；
c、2015年9月中旬(9月10日至20日)对收获的种子Z在江苏、安徽、山东等中日照地区进行播种，每株洋葱单独一个区域进行播种，并编上编号；11月10号-15号对洋葱苗移栽前进行叶片蜡粉观察，全部为无蜡粉，进行小区区域抗虫研究，对照组有正常使用农药管理，抗蓟马组均不使用任何农药；
d、移栽苗Z叶片全部表现为无蜡粉特征，在2016年春天洋葱苗返青期、膨大期、倒伏期进行长势、叶片开展度、蓟马数量、熟期、球型、抗病、产量等数据统计；
e、根据育种目标特性进行分类，将洋葱叶片上蓟马数量少，洋葱球产量高作为关键指标，综合评价最高的育种目标材料，2016年收获多个优良抗葱蓟马单株群体，种球越夏存储后，淘汰腐烂洋葱球，11月份无蜡粉不育株Z与无蜡粉保持株T进行群体配组混合定植优先选择地理隔离或者采用大型防虫网进行隔离，人工辅助授粉；
f、2017年7月收获的种子进行拱棚加温达到春化条进行扩繁配组(无蜡粉Z为母本与无蜡粉T系列父本分别配组)，2018年7月获得杂交种子，9月进行杂交组合区域试验，翌年筛选出全不育型无蜡粉抗蓟马杂交组合，继而扩大父母本量进行杂交制种，选育出黄皮中晚熟洋葱‘连抗501’。在不使用农药情况下与使用农药抗虫效果基本一致，产量无差别，本发明方法减少化学杀虫剂90％以上的使用，保护生态环境和产品质量安全。
本发明利用自然突变无蜡粉材料进行抗葱蓟马的筛选，能够有效减少化学农药的使用量，产品达到绿色安全标准和减少种植户成本的投入；然后对抗虫材料分别进行保持株和不育系的筛选，建立稳定的配套不育系，利用优良抗虫保持株进行杂交种配置，筛选出优良组合，F1能够保持全部不育，种植户无法留种，即使收到种子也是杂合，表面有蜡粉，失去抗虫的特征，有效的保护了品种权，另外叶片无蜡粉使得一眼就能认出自己的品种，该方法具有自主创新性，可重复性，为洋葱制种提供新的思路与方法。
以上实施例仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明保护范围之内；本发明未涉及的技术均可通过现有技术加以实现。
Claims (10)
1.一种利用洋葱无蜡粉可视化标记选育全不育型抗葱蓟马杂交种的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
a、从洋葱资源圃中筛选出叶片表面无蜡粉的洋葱苗，收获洋葱球后存储，当年10月份定植田间；
b、第二年春天，给选中的洋葱种球套隔离网罩，进行人工辅助单株自交授粉；
c、9月中旬将收获的种子进行播种，洋葱苗移栽前进行叶片蜡粉观察，拔掉有蜡粉植株，若超过1/3有蜡粉则淘汰；
d、移栽苗叶片全部表现为无蜡粉特征，在洋葱苗返青期、膨大期、倒伏期进行长势、叶片开展度、蓟马数量、熟期、球型、抗病、产量数据统计；
e、根据育种目标特性进行分类，将洋葱叶片上蓟马数量少，洋葱球产量高作为关键指标，收获的种球越夏存储后，淘汰腐烂洋葱球，11月份每个品系群体定植；
f、开花期人工鉴定不育株，并利用分子标记jnurf13鉴定无蜡粉可育株中的保持株得到无蜡粉保持株，对不育株和无蜡粉保持株进行杂交获得无蜡粉不育系D；
或者，若田间未发现不育株或筛选得到的不育株数量较少，且群体无法扩大，需要进行洋葱无蜡粉由可育转不育，由鉴定获得的无蜡粉保持株与有蜡粉不育株杂交获得有蜡粉不育F1，与父本无蜡粉保持株杂交获得无蜡粉不育CF2，再与父本无蜡粉保持株杂交获得纯合的无蜡粉不育系D；
g、以获得的无蜡粉不育系D作为母本，分子标记jnurf13重新鉴定优良无蜡粉抗葱蓟马可育株中的保持株F，扩繁获得保持系群体F为父本，进行杂交获得无蜡粉全不育型杂交种，对F1群体进行抗蓟马特性研究，筛选出全不育型无蜡粉抗蓟马杂交组合，继而扩大父母本量进行杂交制种获得全不育型抗葱蓟马杂交种。
2.一种利用洋葱无蜡粉可视化标记选育全不育型抗葱蓟马杂交种的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
a、从洋葱资源圃中筛选出叶片表面无蜡粉的洋葱苗，收获洋葱球后存储，当年10月份定植田间；
b、第二年春天，给选中的洋葱种球套隔离网罩，进行人工辅助单株自交授粉；
开花期人工鉴定获得不育株，并利用分子标记jnurf13鉴定无蜡粉可育株中的保持株得到无蜡粉保持株，对不育株和无蜡粉保持株进行杂交获得无蜡粉不育系Z；
c、9月中旬将收获的无蜡粉不育系Z种子进行播种，洋葱苗移栽前进行叶片蜡粉观察，保留无蜡粉植株；
d、移栽苗叶片全部表现为无蜡粉特征，在洋葱苗返青期、膨大期、倒伏期进行长势、叶片开展度、蓟马数量、熟期、球型、抗病、产量数据统计；
e、根据育种目标特性进行分类，将洋葱叶片上蓟马数量少，洋葱球产量高作为关键指标，收获的种球越夏存储后，淘汰腐烂洋葱球，11月份将无蜡粉不育株Z与无蜡粉保持株进行群体配组混合定植；
f、以获得的无蜡粉不育系Z作为母本与无蜡粉保持株系列为父本父本分别配组进行扩繁配组获得杂交种子，然后进行杂交组合区域试验，筛选出全不育型无蜡粉抗蓟马杂交组合，继而扩大父母本量进行杂交制种获得全不育型抗葱蓟马杂交种。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(a)中，在洋葱资源圃中通过肉眼观察筛选出叶片表面无蜡粉的洋葱苗，是获得无蜡粉可视化标记的关键材料，群里数量要多，筛选的突变材料要在30株以上，品种选自黄、紫、白三种颜色中的至少一种，要在洋葱苗床中筛选，苗床面积在5亩以上。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(a)中，洋葱球收获后通过网袋自然条件悬挂存储，每个网袋装10个洋葱球，去除腐烂洋葱，获得抗性耐存储的材料，并于当年10月份定植田间，定植一般以单个洋葱球定植，每个洋葱球株行距保持1～1.5m。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(b)中，第二年春天，在5月初单株选中的洋葱种球套隔离网罩，网的高度要保持离地在1.5～2m高，中间用钢管支撑，顶部细钢筋撑开隔离网，并将洋葱花薹和花球宽松的绑在中间的钢管上，便于开花后花球集中，方便授粉。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(b)中，开花时每天上午9～11点和下午3～4点，用宽度2～3cm软毛刷对洋葱小花进行授粉，授粉前后对双手酒精喷雾消毒，用完的毛刷用套子包好，防止雨水沾湿，毛刷与洋葱球一一对应，完成人工辅助单株自交授粉。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(c)中，收获的种子在中日照地区9月10日至20日进行播种，每株洋葱单独一个区域进行播种，并编上编号；11月10日-15日对洋葱苗进行叶片蜡粉观察。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的开花期人工鉴定不育株是在步骤(b)中的开花期或者/和步骤(f)中的开花期人工鉴定不育株。
9.根据权利要求1或8所述的方法，其特征在于：开花期人工鉴定不育株时，由于不育株的数量相对较少，在群体数量较多的条件下，能够筛选出不育株，并利用分子标记jnurf13鉴定无蜡粉可育株中的保持株获得无蜡粉保持株，对不育株和无蜡粉保持株进行杂交获得无蜡粉不育系，并对保持株进行扩繁；
或者，开花期人工鉴定不育株时，田间不育株未发现或筛选得到的数量较少，且群体无法扩大，减慢了育种进程，需要进行洋葱无蜡粉由可育转不育。
10.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：利用分子标记jnurf13鉴定无蜡粉可育株中的保持株的引物对为：上游引物TGCAAGCTTGGAACTTACGC，下游引物TTGCCAAAGGTTGCAATACA。
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