CN115135151A - 1-苯基-四氢化萘衍生物的农药组合物 - Google Patents

Abstract

本发明发现了1‑苯基‑四氢化萘衍生物对若干担子菌、子囊菌门和不等鞭毛门真菌以及假单胞菌属的原细菌具有高效的杀虫活性。

Description

1-苯基-四氢化萘衍生物的农药组合物

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年2月2日提交的美国专利申请号62/969,111的优先权权益，该专利申请的内容通过引用以其全文并入本文中。

技术领域

本发明总体上涉及用于农业用途的具有杀真菌特性和杀菌特性的化合物。

背景技术

植物害虫和病害是现代农业生产力的主要挑战。锈菌是多样化的植物病原体组，具有数十属和数千种。它们具有巨大的经济重要性，并且可能导致谷物、玉米和大豆产量损失几十个百分点(Gessese 2019；Groth等人,1998年；Hershman等人,2011)。

柄锈菌(Puccinia)属，是一种强制性病原真菌，并且也是属于担子菌(Basidiomycete)系统发育谱系的植物锈菌的主要属。柄锈菌(Puccinia)属，在谷物(诸如小麦中的黄锈病)和玉米(普通锈病)中引起广泛范围的商业上显著的植物病害(Gessese2019；Groth等人,1998年)。

土壤传播的植物病原体对农作物造成了严重的损害。植物病原真菌丝核菌(Rhizoctonia)属属于担子菌的系统发育谱系。其引起广泛范围的商业上显著的植物病害，诸如褐斑病、幼苗立枯病、蔬菜作物的根腐病和腹腐病以及水稻的纹枯病。植物中的所有丝核菌病以及随后的二次侵染都很难控制(Erlacher等人,2014)。

腐霉菌(Pythium)属，是植物病原真菌样生物，属于被称为卵菌(Oomycete)的真核微生物的系统发育谱系，导致烟草、番茄、芥末、辣椒和水芹幼苗的广泛“立枯”病害(Martin&Loper,2010)。

疫霉菌(Phytophthora)属，是一种强制性植物真菌样病原体，属于被称为卵菌的真核微生物的系统发育谱系。马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)是一种严重的马铃薯病害，称为马铃薯枯萎病，导致叶枯病和块茎腐烂。该病害可导致马铃薯收成完全丧失(Sedláková等人,2012)。疫霉菌侵袭多种植物种类的地上部分，并且是引起番茄、南瓜等作物枯病、溃疡病和果实腐烂病的主要原因。

葡萄孢菌(Botrytis)属是一种普遍存在的丝状真菌病原体，广泛存在于属于子囊菌(Ascomycete)系统发育谱系的植物物种中。葡萄孢菌能在一定程度上侵染其寄主植物的所有地上部分。葡萄孢菌在各种不同的重要的农业作物和商品植物中引起一种称为灰霉病的病害，诸如葡萄藤、番茄、草莓、黄瓜、球根花卉、切花和观赏植物(J.A.L.van Kan,2005)。

镰刀菌(Fusarium)属是丝状真菌的大属，属于子囊菌的系统发育谱系。许多物种的镰刀菌对植物是致病的，并导致严重的病害，像重要的经济植物(主要是蔬菜)的枯萎或‘腐烂’。另外，镰刀菌物种侵染谷物，导致玉米中的赤霉病和穗腐病，并导致在某些条件下的毒菌毒素积累(J.E.E.Jenkins,Y.S.Clark和A.E.Buckle,1998)。

链格孢菌(Alternaria)属是一种普遍存在的真菌属，有许多物种，对农产品造成显著损害，包括谷物、水果和蔬菜-苹果、土豆、番茄等(Patriarca,A.,&Fernández Pinto,V.2018)。

假单胞菌(Pseudomonas)属是一种植物病原细菌属，在各种不同的作物中具有毒性，并引起显著的叶损伤和茎损伤。假单胞菌(Pseudomonas)属在经济上显著的作物和果园中引起以下病害，诸如欧洲防风草和番茄的髓坏死、水稻的褐斑病和叶鞘褐腐病、杏仁的细菌溃疡病和橄榄的橄榄结病(Moore L.W.,1988；Hofte M.和De Vos P.,2006)。

已经测试了多种方法来管理作物中的假单胞菌属。包括文化管理、寄主抗性、微生物拮抗剂的生物控制和化学控制。它们都没有完全的控制权。

由于日益增长的抗虫性、不稳定的气候条件和不断增加的监管压力，可用于作物保护目的以对抗这些病害的有效成分的数量逐年减少。开发新的环境可持续作物保护解决方案迫切需要新的活性成分。

发明内容

在本发明的一个方面，一种用于控制、防止、减少或根除植物、植物器官、植物部分或植物繁殖材料上的植物病原体侵染实例的方法，所述方法包括：向植物、植物部分、植物器官或植物繁殖材料或向所述植物周围的土壤应用杀虫有效量的至少一种式(I)化合物：

其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、甲基、羟基和甲氧基以及卤素原子(F、Cl、Br、I)；R₅和R₆独立地选自氢、甲基和乙基；和R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基；或它们的立体异构体或它们农业上可接受的盐。

在具体实施例中，应用于本发明方法的式(I)化合物是：

化合物3：(1S,4R)-4-(3,4-二氯苯基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-氯化铵，

化合物1：(5R,6R,7R)-5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇；和

化合物2：4-((1R,2R,3R)-7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇。

在一些实施例中，将化合物3应用于植物病原体，植物病原体是选自以下各项的成员：柄锈菌(Pucciniomycetes)纲或丝核菌属的担子菌(Basidomycete)；座囊菌(Dothideomycetes)纲的子囊菌门或选自葡萄孢菌和镰刀菌的属；以及卵菌纲的不等鞭毛门。

在其他实施例中，将化合物1应用于植物病原体，植物病原体是选自以下各项的成员：柄锈菌纲或丝核菌属的担子菌；卵菌纲的不等鞭毛门；以及假单胞菌目的原养菌。

在仍其他实施例中，将化合物2应用于植物病原体，植物病原体是选自以下各项的成员：柄锈菌纲或丝核菌属的担子菌；腐霉菌(Pythiaceae)科的不等鞭毛门；以及假单胞菌目的原养菌。

在本发明的另一方面，农药组合物包括至少一种式(I)化合物，

其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、甲基、羟基和甲氧基以及卤素原子(F、Cl、Br、I)；R₅和R₆独立地选自氢、甲基和乙基；和R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基；它们的立体异构体或它们农业上可接受的盐。

在具体实施例中，本发明组合物的式(I)化合物是：

化合物3：(1S,4R)-4-(3,4-二氯苯基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-氯化铵，

化合物1：(5R,6R,7R)-5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇；和

化合物2：4-((1R,2R,3R)-7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇。

附图说明

图1示出了化合物1对玉米叶被玉米柄锈菌(Puccinia sorghi)侵染的影响，确定为被该真菌覆盖的叶表面百分比(％)。***，P＜0.001ppm，百万分率。(实验343。)

图2和图3示出了化合物1在两个独立实验中对小麦叶锈菌(Puccinia triticina)(叶锈病)侵染小麦叶的影响，确定为侵染后10天孢子发芽(病害严重程度)的百分比(％)。

(BASF)-一种参考杀菌剂，含有26.7％w/w啶酰菌胺和6.7％w/w吡唑醚菌酯(阳性对照)。在实例9中–参见调配物1的组成和制备；***，p＜0.001。(分别为实验952和实验973。)

图4至图6示出了化合物3在三个独立的实验中，对玉米叶被玉米柄锈菌侵染的影响，确定为被真菌覆盖的叶表面百分比(％)。***，P＜0.001。调配物1-5–参见实例10。(分别为实验270、实验284和实验294。)

图7至图9示出了使用治疗方法和喷雾应用，化合物3对已侵染的小麦植物的小麦叶锈菌病害严重程度的影响，确定为孢子发芽的％。调配物2–参见实例9；*，p＜0.05；**，p＜0.01；***，p＜0.001和n.s.–与未经处理的对照相比无显著差异。(分别为实验135、实验153和实验208。)

图10至图16示出了使用治疗方法并经由喷雾进行应用，化合物3对温室条件下番茄植物上马铃薯晚疫病菌病害严重程度的影响，确定为％病害严重程度。调配物2–参见实例9；

(50％烯酰吗啉，BASF)；*，p＜0.05；**，p＜0.01；***，p＜0.001和n.s.–与未经处理的对照相比无显著差异。(分别为实验254、实验262a、实验262b、实验275a、实验275b、实验312a、实验312b。)

图17示出了使用预防性方法并经由喷雾进行应用，化合物3对番茄植物上番茄早疫病菌(Alternaria solani)病害严重程度的影响，确定为％病害严重程度。调配物2–参见实施例9；*表示p值＜0.05；**表示p值＜0.01；***表示p值＜0.001，n.s.意指与未处理的对照相比无显著差异。(实验327)。

图18和图19示出了使用预防性方法并经由喷雾进行应用，化合物3对番茄植物上葡萄孢菌(Botrytis cinerea)病害严重程度的影响，确定为％病害严重程度。调配物1和2–参见实施例9；*表示p值＜0.05；**表示p值＜0.01；***表示p值＜0.001，n.s.意指与未处理的对照相比无显著差异。(分别为实验314a和实验314b。)

具体实施方式

根据本发明，已经发现下式(I)的1-苯基-四氢化萘衍生物、立体异构体或其农业上可接受的盐是针对若干担子菌、子囊菌和不等鞭毛门真菌以及假单胞菌属原细菌的有效杀虫剂：

其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、甲基、羟基和甲氧基以及卤素原子(F、Cl、Br、I)；

R₅和R₆独立地选自氢、甲基和乙基；并且

R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

在特定实施例中，本发明的化合物是式(I)化合物，其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、甲基、羟基和甲氧基以及卤素原子(F、Cl、Br、I)；R₅和R₆是甲基；和R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

在更特定实施例中，本发明的化合物是式(I)化合物，其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、羟基和甲氧基；R₅和R₆是甲基；和R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

在具体实施例中，本发明的化合物是式(I)化合物，其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、羟基和甲氧基；R₅和R₆是甲基；和R₇是氢。

在本发明的具体实施例中，所述化合物是：

化合物1：(5R,6R,7R)-5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇：

化合物2：4-((1R,2R,3R)-7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇：

化合物4：5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇：

化合物5：

4-(7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇：

在进一步的特定实施例中，本发明的化合物是式(I)化合物，其中R_1a、R_1b、R₂独立地选自氢和卤素原子(F、Cl、Br、I)；R₃、R₄、R₅和R₆是氢；和R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

在又进一步的具体实施例中，本发明的化合物是式(I)化合物，其中R_1a、R_1b、R₂独立地选自氢和氯原子；R₃、R₄、R₅和R₆是氢；和R₇是甲基氨基。

根据以上实施例的本发明的具体化合物是：

化合物3：(1S,4R)-4-(3,4-二氯苯基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-氯化铵：

通常，化合物1是1-苯基-四氢化萘衍生物，是1-芳基四氢化萘木脂素类的成员。化合物2是另一种1-苯基-四氢化萘衍生物，也是1-芳基四氢化萘木脂素类的成员。化合物3被称为盐酸舍曲林，并且是一种选择性羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)抗抑郁药。这三种具体化合物是式(I)的立体异构1-苯基-四氢化萘衍生物。

一方面，本发明提供了一种用于控制、防止、减少或根除植物、植物器官、植物部分或植物繁殖材料上的植物病原体侵染或其实例的方法，所述方法包括：向植物、植物器官或植物繁殖材料或所述植物周围的土壤应用杀虫有效量的至少一种化合物3：(1S,4R)-4-(3,4-二氯苯基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-氯化铵或立体异构体或其农业上可接受的盐，或化合物3的农药组合物，所述植物病原体是选自以下各项的成员：柄锈菌纲或丝核菌属的担子菌；座囊菌纲的子囊菌门或选自葡萄孢菌和镰刀菌的属；和卵菌的不等鞭毛门。

另一方面，本发明提供了一种用于控制、防止、减少或根除植物、植物器官、植物部分或植物繁殖材料上的植物病原体侵染实例的方法，所述方法包括：向植物、植物部分、植物器官或植物繁殖材料或向所述植物周围的土壤应用杀虫有效量的化合物1：(5R,6R,7R)-5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇，或立体异构体，或其农业上可接受的盐，所述植物病原体是选自以下各项的成员：柄锈菌纲或丝核菌属的担子菌；卵菌的不等鞭毛门；和假单胞菌目的原养菌。

在另外的方面，本发明提供了一种用于控制、防止、减少或根除植物、植物器官、植物部分或植物繁殖材料上的植物病原体侵染实例的方法，所述方法包括：向植物、植物部分、植物器官或植物繁殖材料或向所述植物周围的土壤应用杀虫有效量的化合物2：4-((1R,2R,3R)-7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇或立体异构体或其农业上可接受的盐，所述植物病原体是选自以下各项的成员：柄锈菌纲或丝核菌属的担子菌；腐霉菌科的不等鞭毛门；和假单胞菌目的原养菌。

根据本文所公开的实施例中任一实施例，本发明的处理方法可用于例如针对下列病害：玉米中的常见锈病；燕麦和黑麦草的冠锈病；小麦和草地早熟禾的茎锈病，或谷物的黑锈病；黄花菜锈病；谷物中的小麦锈病；褐色或红色锈病；谷物中的“黄锈病”；甘蔗的‘褐锈病’或‘橙锈病’；或咖啡叶锈病；大麦的叶锈病和茎锈病；马铃薯枯萎病、可可的棕榈疫霉、番茄和南瓜的溃疡病、果实腐烂病；疫霉菌属、梨果和核果的冠腐病和领腐病；在烟草、番茄、黄瓜、芥末、辣椒和水芹幼苗中腐霉菌属引起的“立枯”病害；鲜食葡萄和酿酒葡萄、草莓和蔬菜作物中的灰霉病(葡萄孢菌)；镰刀菌属引起蔬菜、香蕉枯萎或‘腐烂’；玉米中的赤霉病和穗腐病的镰刀菌属；小粒禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)赤霉病；丝核菌属引起蔬菜褐斑病、立枯病、根腐病、腹腐病和水稻纹枯病；链格孢菌属引起叶片和果实上的斑点、腐烂和枯萎。

在某些实施例中，植物病原体是柄锈菌纲的成员，选自卷担子菌目、霜杯耳目、泛胶耳目、柄锈菌目和隔担菌(Septobasidiales)目。在具体实施例中，植物病原体是柄锈菌目的成员。

在一些实施例中，所述柄锈菌植物病原体是选自夏康锈菌科、鞘锈菌科、柱锈菌科、栅锈菌科、小内格尔锈菌科、层锈菌科、多胞锈菌科、帽孢锈菌科、柄锈菌科、链孢锈菌科、膨痂锈菌科、伞锈菌科、球锈菌科、钩锈菌科、肥柄锈菌科、丝裂柄锈菌、和柄锈菌科地位未定的家族成员。在特定实施例中，所述柄锈菌植物病原体是柄锈菌科的成员。

在其他实施例中，所述柄锈菌植物病原体是柄锈菌属的成员，诸如玉米柄锈菌、冠柄锈菌(Puccinia coronate)、禾柄锈菌(Puccinia graminis)、萱草柄锈菌(Pucciniahemerocallidis)、黄花菜柄锈菌(Puccinia hemerocallidis)、小麦禾柄锈菌(Pucciniapersistens subsp.Triticina)、条形柄锈菌(Puccinia striiformis)、黑顶柄锈菌(Puccinia melanocephala)、屈恩氏柄锈菌(Puccinia kuehnii)和咖啡驼孢锈菌(Hemileia vastatrix)。在具体实施例中，所述柄锈菌植物病原体选自玉米柄锈菌和小麦叶锈菌。

在进一步的实施例中，通过如以上所描述的应用化合物3、1或2中的任一种或它们的任何组合，本发明的方法可用于控制、防止、减少或根除以上所描述的柄锈菌植物病原体中的任一种，特别是玉米锈病菌和小麦叶锈菌。

在一些实施例中，植物病原体是丝核菌属的成员(其属于鸡油菌(Cantharellales)目角担菌(Ceratobasidiaceae)科)，诸如立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、广生亚大茎点菌(Rhizoctonia bataticola)(也称为壳球孢菌(Macrophominaphaseolina))、胡萝卜丝核菌(Rhizoctonia carotae)(也称为胡萝卜丝核菌(Fibulorhizoctonia carotae))、谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)、紫纹羽丝核菌(Rhizoctonia crocorum)(也称为紫纹羽丝核菌(Thanatophytum crocorum))、草莓花枯病菌(Rhizoctonia fragariae)、匍匐天鹅绒兰丝核菌(Rhizoctonia goodyerae-repentis)也称为小麦纹枯病菌(Ceratobasidium cornigerum)、稻枯斑丝核菌(Rhizoctoniaoryzae)，也称为旋卷似串担革菌(Waitea circinate)、以及多枝丝核菌(Rhizoctoniaramicola)，也称为小麦角菌根菌(Ceratorhizaramicola)。在特定实施例中，植物病原体是立枯丝核菌。

在进一步的实施例中，通过如以上所描述的应用化合物3、1或2中的任一种或它们的任何组合，本发明的方法可用于控制、防止、减少或根除以上所描述的丝核菌植物病原体中的任一种，特别是立枯丝核菌。

在另一个实施例中，植物病原体是座囊菌纲的成员，选自煤炱目、座囊菌目、多腔菌目、纵裂菌目、Jahnulales、Mytilinidiales、格孢菌目、葡萄座腔菌目、小盾壳目、胶皿菌目、和乳嘴衣目。在具体实施例中，植物病原体是格孢菌目的成员。

在其他实施例中，所述格孢菌目植物病原体是选自下述的家族成员：悬岩菌科，羊蚊霉科，葫芦霉科，隐裂壳菌科、紧束腔菌科、小双腔菌科、隔孢假壳科、哈罗鸠勒菌科、扁囊壳菌科、细球腔菌科、林德菌科、扁孔壳菌科、黑团壳科、亚胶孢黑团壳科、黑球腔菌科、山野壳菌科、暗壳腔菌科、暗盾壳科、多黑团壳科、隔孢腔菌科、荚孢腔菌科、黑星菌科、格孢陷壳科、四重球腔菌科、龟囊壳科、畸球腔菌科、和措普夫壳菌科。在特定实施例中，所述格孢菌目植物病原体是格孢菌(Pleosporaceae)科的成员。

在一些实施例中，所述隔孢腔菌科植物病原体是选自链格孢属、平脐蠕孢属、旋孢腔菌属、克里韦利亚菌属、饰孢菌属、突脐蠕孢属、镰形孢属、克里格菌属、李维菌属、大孢菌属、单孢菌属、皮司霉属、Platysporoides、格孢腔菌属、Pseudoyuconia、核腔菌属、毛球腔菌属和Zeuctomorpha的属的成员。在某些实施例中，所述隔孢腔菌科植物病原体是链格孢菌属的成员。

在其他实施例中，所述链格孢菌植物病原体选自互隔交链孢霉、莲子草交链孢霉、乔木链格孢、Alternaria arbusti、艾纳香链格孢、芸苔链格孢、芸苔生链格孢、巴恩斯链格孢、Alternaria carotiincultae、红花链格孢、青潲链格孢、Alternaria cinerariae、柑橘链格孢、Alternaria conjuncta、瓜链格孢-生长在各种葫芦上、胡萝卜链格孢、石竹链格孢、石竹生链格孢、水葫芦链格孢、大戟生链格孢、梨黑斑链格孢、向日葵链格孢、Alternariahelianthicola、Alternaria hungarica、侵染链格孢、日本链格孢、Alternarialimicola、亚麻生链格孢、长柄链格孢、苹果链格孢、槐叶苹链格孢、人参链格孢、等斑乳链格孢、石蛇床根链格孢、葱链格孢、Alternaria quercicola、根链格孢、萝卜链格孢、石竹链格孢、Alternaria selini、千里光链格孢、茄链格孢、Alternaria smyrnii、细极链格孢、小麦链格孢、葫芦猪笼草链格孢、和百日草链格孢。在进一步的具体实施例中，所述链格孢植物病原体选自互隔交链孢霉和番茄早疫病菌。

在其他实施例中，本发明的方法可用于通过应用如以上所描述的化合物3来控制、防止、减少或根除以上所描述的座囊菌植物病原体中的任一种，特别是互隔交链孢霉；和番茄早疫病菌，通过如以上所描述的应用化合物3、1或2中的任一种或它们的任何组合。

在其他实施例中，植物病原体是锤舌菌(Leotiomycetes)纲的成员，选自瘿果盘菌目、白粉菌目、柔膜菌目、锤舌菌目、和斑痣盘菌目、寡囊盘菌目。

在进一步的实施例中，植物病原体是柔膜菌目的成员。在又进一步的实施例中，所述柔膜菌目植物病原体是选自展盘菌科、皮盘菌科、柔膜菌科、半星裂盘菌科、晶杯菌科、长毛球壳科、星裂盘菌科、蜡盘菌科、Sclerotinaceae、和水盘菌科的家族成员。在特定实施例中，所述柔膜菌目植物病原体是核盘菌科的成员。在其他特定实施例中，所述核盘菌科植物病原体是葡萄孢菌属的成员。

在某些实施例中，所述葡萄孢菌植物病原体选自蔥腐葡萄孢、大葱葡萄孢(Botrytis allii)、大葱葡萄孢(Botrytis allii-fistulosi)、Botrytis ampelophila、Botrytis anacardii、喜花葡萄孢、木棉虫葡萄孢、Botrytis arisaemae、木菠萝葡萄孢、狐尾椰葡萄孢、布雷葡萄孢、Botrytis capsularum、叶子万年青葡萄孢、卡罗莱纳葡萄孢、红花葡萄孢、Botrytis cercosporaecola、Botrytis cercosporicola、葡萄孢菌、橘蜡蚧葡萄孢、黄花菜葡萄孢、铃兰葡萄孢、西红花葡萄孢、介壳虫葡萄孢、密集葡萄孢、柿落果葡萄孢、椭圆葡萄孢、蚕豆葡萄孢、Botrytis fabiopsis、Botrytis galanthina、剑兰葡萄孢、棉色二孢葡萄孢、Botrytis hormini、风信子葡萄孢、Botrytis isabellina、由珠形葡萄孢、百合葡萄孢、蛞蝓科葡萄孢、Botrytis luteobrunnea、橙黄葡萄孢、马里葡萄孢、串珠状粉葡萄孢、Botrytis necans、白芍葡萄孢、Botrytis peronosporoides、Botrytis pistiae、钝顶螺旋藻葡萄孢、白粉葡萄孢、Botrytis pseudocinerea、水塔花葡萄孢、驴蹄草葡萄孢、玫瑰红葡萄孢、冬凌草葡萄孢、Botrytis rudiculoides、Botrytis sekimotoi、Botrytisseptospora、Botrytis setuligera、Botrytis sinoallii、苦苣菜葡萄孢、灿烂颤藻葡萄孢、葱鳞葡萄孢、出租车葡萄孢、蒺藜葡萄孢、嗜管半知点葡萄孢、人乳腺癌葡萄孢、郁金香葡萄孢、Botrytis viciae-hirsutae、和袁葡萄孢。在一些实施例中，植物病原体是葡萄孢菌。

在其他实施例中，植物病原体是选自冠囊菌目、Glomerellales、肉座菌目、黑孢壳目、微囊菌目、团壳菌目、美球菌目、刺球菌目、Coniochaetales、间座壳菌目、大角间座壳目、长喙壳菌目、粪壳菌目、炭角菌目、紧塞菌目、路霉目、小煤炭菌目、黑痣菌目、和假毛球壳目的目的子囊菌纲的成员。

在仍其他实施例中，植物病原体是肉座菌目的成员。在某些实施例中，所述肉座菌目植物病原体是选自生赤壳科、虫草菌科、麦角菌科、肉座菌科、丛赤壳科、Niessliaceae、线虫草科、和葡萄穗霉科的家族成员。在特定实施例中，所述肉座菌目植物病原体是丛赤壳科的成员。

在进一步的实施例中，所述丛赤壳科植物病原体是镰刀菌属的成员。在某些实施例中，所述镰刀菌植物病原体选自Fusarium acaciae、黑荆镰刀菌、尖孢炭镰刀菌、Fusarium aderholdii、锐顶镰刀菌、仿射镰刀菌、关节类镰刀菌、燕麦镰刀菌、布比水杨镰刀菌、松树脂溃疡病镰刀菌、克地镰刀菌、黄色镰刀菌、禾谷镰刀菌、变红镰刀菌、镰刀镰刀菌、芒果畸形病病原菌、节状鐮刀菌、尖孢镰刀菌、苍白镰刀菌、梨孢镰孢菌、层生镰刀菌、小麦冠腐病菌、芬芳镰刀菌、甘蔗镰孢菌、茄病镰刀菌、拟分枝孢镰刀菌、Fusariumsterilihyphosum、亚粘团镰孢霉、硫色镰刀菌、三线镰刀菌、镶片镰孢、串珠镰刀菌、和大豆猝死综合症病菌。在一些实施例中，植物病原体是尖孢镰刀菌物种。

在进一步的实施例中，植物病原体是选自链壶菌目、水节霉目、露菌目、囊轴霉目、和水霉目的卵菌纲的成员。在某些实施例中，植物病原体是霜霉菌目的卵菌纲的成员。

在一些实施例中，所述霜霉菌属植物病原体是选自链壶菌科、链油壶菌科、离壶菌科、水节霉科、白锈菌科、霜霉菌科、腐霉菌科、囊轴霉科、外壶菌科、海壶菌科、尾细囊霉科、和水霉科的家族成员。在特定实施例中，植物病原体是霜霉菌科或腐霉菌科的成员。

在某些实施例中，所述霜霉菌科植物病原体是选自Baobabopsis、圆梗霉属、Benua、霜霉属、Calycofera、Eraphthora、食禾梯管蚜、活体营养型卵菌、Nothophytophthora、Novotelnova、类霜霉属、Perofascia、指霜霉属、霜霉属、疫霉菌属、单轴霉属、Plasmoverna、Protobremia、假霜霉属、指疫霉属、指梗霉属和Viennotia的成员。

在某些实施例中，所述霜霉菌科植物病原体是疫霉菌属的成员。在具体实施例中，所述疫霉属植物病原体选自小升麻疫霉菌属、Phytophthora agathidicida、赤杨衰退病原菌、赤杨衰退病原菌、Phytophthora alticola、Phytophthora amaranthi、安氏疫霉、Phytophthora amnicola×moyootj、Phytophthora andina、Phytophthora aquimorbida、槟榔疫霉、Phytophthora arenaria、Phytophthora cf.arenaria、Phytophthoraaff.arenaria、亚洲疫霉、Phytophthora asparagi、Phytophthora aff.asparagi、Phytophthora attenuata、Phytophthora austrocedrae、Phytophthora balyanboodja、Phytophthora batemanensis、Phytophthora bilorbang、Phytophthora bisheria、Phytophthora bishii、苎麻疫霉菌、Phytophthora boodjera、北方疫霉、葡萄疫霉、簇囊疫霉(Phytophthora cf.botryosa)、簇囊疫霉(Phytophthora aff.botryosa)、Phytophthorabrassicae、恶疫霉菌、马铃薯疫霉变种、恶疫霉菌×hedraiandra、Phytophthora cajani、栗黑水疫霉、辣椒疫霉、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、辣椒疫霉菌(Phytophthora aff.capsici)、Phytophthora captiosa、Phytophthoracastaneae、Phytophthora castanetorum、疫霉菌属真菌、菊疫霉、Phytophthoracichorii、Phytophthora aff.cichorii、樟疫霉、樟疫霉变种樟、樟疫霉变种细小孢霉、肉桂疫霉变种槐、柑桔生疫霉(Phytophthora citricola)、柑桔生疫霉(Phytophthoraaff.citricola)、柑桔褐腐疫霉(Phytophthora citrophthora)、柑橘疫霉菌变种、柑桔褐腐疫霉(Phytophthora aff.citrophthora)、Phytophthora clandestina、Phytophthoracocois、芋疫霉、Phytophthora condilina、Phytophthora constricta、Phytophthoracooljarloo、Phytophthora crassamura、隐地疫霉(Phytophthora cryptogea)、隐地疫霉(Phytophthora aff.cryptogea)、Phytophthora cuyabensis、莎草疫霉菌、Phytophthoradauci、Phytophthora aff.dauci、掘氏疫霉、Phytophthora drechsleri var.cajani、Phytophthora elongata、Phytophthora cf.elongata、红腐疫霉、马铃薯绯腐病菌、Phytophthora aff.erythroseptica、Phytophthora estuarina、欧洲疫霉、Phytophthorafallax、Phytophthora flexuosa、河弧菌疫霉、河弧菌疫霉×moyootj、台湾疫霉(Phytophthora foliorum)、台湾疫霉(Phytophthora formosa)、台湾疫霉(Phytophthoraformosana)、草莓疫莓、草莓疫霉稻苗变种、Phytophthora frigida、Phytophthoragallica、双子疫霉、Phytophthora gibbosa、Phytophthora glovera、节水霉状疫霉、Phytophthora gondwanensis、大豆茎褐腐病菌(Phytophthora gregata)、大豆茎褐腐病菌(Phytophthora cf.gregata)、Phytophthora hedraiandra、Phytophthoraaff.hedraiandra、Phytophthora×heterohybrida、橡胶树疫霉、冬生疫霉、Phytophthorahimalayensis、Phytophthora himalsilva、Phytophthora aff.himalsilva、腐植疫霉(Phytophthora humicola)、腐植疫霉(Phytophthora aff.humicola)、Phytophthorahydrogena、Phytophthora hydropathica、Phytophthora idaei、Phytophthora ilicis、疫霉属×厚榧螺、马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)、马铃薯晚疫病菌(Phytophthora aff.infestans)、Phytophthora inflata、缺雄疫霉(Phytophthorainsolita)、缺雄疫霉(Phytophthora cf.insolita)、居间疫霉、Phytophthora intricata、Phytophthora inundata、Phytophthora ipomoeae、Phytophthora iranica、Phytophthorairrigata、桂氏疫霉、Phytophthora kelmania、Phytophthora kernoviae、Phytophthorakwongonina、Phytophthora lactucae、Phytophthora lacustris、Phytophthoralacustris×河岸葡萄、雪松疫霉、Phytophthora lilii、露疫病菌、Phytophthoralitoralis、Phytophthora litoralis×moyootj、Phytophthora macilentosa、Phytophthora macrochlamydospora、蜜色疫霉(Phytophthora meadii)、蜜色疫霉(Phytophthora aff.meadii)、苜蓿疫霉、苜蓿疫霉×隐地蛋白、Phytophthora megakarya、大雄疫霉、瓜疫霉、Phytophthora mengei、墨西哥疫霉(Phytophthora mexicana)、墨西哥疫霉(Phytophthora cf.mexicana)、君子兰疫霉、Phytophthora mississippiae、Phytophthora morindae、Phytophthora moyootj、Phytophthora moyootj×河弧菌、Phytophthora moyootj×嗜热高温球菌(litoralis)、Phytophthora moyootj×嗜热毁丝霉、疫霉属×多条形、Phytophthora multivesiculata、Phytophthora multivora、Phytophthora nagaii、Phytophthora nemorosa[11]、香草兰疫霉菌、烟草疫霉变种寄生菌、香草兰疫霉菌×仙人掌鹦哥、Phytophthora niederhauserii、Phytophthoracf.niederhauserii、Phytophthora obscura、Phytophthora occultans、Phytophthoraoleae、Phytophthora ornamentata、Phytophthora pachypleura、少病原菌棕榈疫霉、棕榈疫霉变种、寄生疫霉、黑疫霉变种烟草、辣椒疫霉菌变种、Phytophthora parsiana、Phytophthora aff.parsiana、Phytophthora parvispora、疫霉×pelgrandis、菜豆疫霉病菌、疫霉扎、松针疫霉病、Phytophthora pisi、Phytophthora pistaciae、Phytophthoraplurivora、Phytophthora pluvialis、波兰疫霉、葱疫霉、Phytophthora primulae、Phytophthora aff.primulae、假隐地疫霉、假莴苣疫霉、Phytophthorapseudorosacearum、丁香假单胞菌疫霉、假松杉灵芝疫霉(Phytophthora pseudotsugae)、假松杉灵芝疫霉(Phytophthora aff.Pseudotsugae)、嗜冷芽孢八叠球菌疫霉、酥灰蝶疫霉、栎迷孔菌疫霉、Phytophthora quininea、橡树猝死病、曼格食蚊鱼疫霉、马蹄莲疫霉、沙燕疫霉、Phytophthora rosacearum、Phytophthora aff.rosacearum、覆盆子疫霉、Phytophthora sansomea、Phytophthora sansomeana、Phytophthora aff.Sansomeana、疫霉×serendipita、中华疫霉、Phytophthora siskiyouensis、大豆疫霉、劲直白酒草疫霉、Phytophthora sulawesiensis、丁香疫霉、疫霉烟、触手纲疫霉、疫霉终末病、四膜虫疫霉、四膜虫疫霉×库页岛蝗莺、四膜虫疫霉×moyootj、人乳腺癌细胞疫霉、热带念珠菌疫霉(Phytophthora cf.tropicalis)、热带念珠菌疫霉(Phytophthora cf.tropicalis)、管灰霉疫霉、Phytophthora tyrrhenica、雀舌草疫霉、水苦荬疫霉、单形类疫霉、豇豆疫霉、小豆疫霉茎腐病、金缕梅疫霉、和火山疫霉。在其他具体实施例中，所述植物病原体是马铃薯晚疫病菌物种。

在让其他实施例中，所述霜霉科植物病原体是腐霉菌科的成员。在某些实施例中，所述腐霉菌科植物病原体是选自Cystosiphon、轮枝霉、Globisporangium、链壶菌属、串孢壶菌属、疫霉、腐霉属、和Trachysphaera的属的成员。

在进一步的实施例中，所述腐霉菌科植物病原体是腐霉属的成员。在具体实施例中，所述腐霉属植物病原体是选自以下各项的物种：瓜果腐霉菌、棘腐霉、刺器腐霉、顶生腐霉、粘腐霉、孤雌腐霉、安鼓腐霉、狭囊腐霉、卵悬腐霉、浮游腐霉、芒孢腐霉、强雄腐霉、引雄腐霉、二歧腐霉、北方腐霉、毕思曼腐霉、巴特勒腐霉、卡姆兰腐霉、钟形腐霉、卡纳瑞恩腐霉、凯皮萨腐霉、卡波尼腐霉、卡地腐霉、链状腐霉、匍丝腐霉、康锥蔻拉、桔腐霉、色孢腐霉、菌丝状腐霉、康替瓜腐霉、密码畸雄腐霉、葫芦科腐霉、筒孢腐霉、蘣菁腐霉、德巴利腐霉、德里腐霉、毁坏性腐霉、异丝腐霉、异形腐霉、无明喻腐霉、宽雄腐霉、针棘腐霉、隆起腐霉、猬木腐霉、福来文斯腐霉、囊形腐霉、球序腐霉、禾生腐霉菌、囊腐霉、贵阳腐霉、旋雄腐霉、旋柄腐霉、异宗结合腐霉、齿孢腐霉、海波荄姆腐霉、木蓝腐霉、肿囊腐霉、苜蓿腐霉、闻型腐霉、畸雌腐霉、岩山腐霉、菑丝堥莥腐霉、昆明腐霉、莉陶锐腐霉、长雄腐霉、长囊腐霉、鲁塔瑞姆腐霉、大孢腐霉、突腐霉、海洋腐霉、袋囊腐霉、拟南芥与腐霉、阔叶腐霉、奇雄腐霉、小腐霉、简囊腐霉、山肉桂腐霉、多孢腐霉、群结腐霉、长井腐霉、结节腐霉、纳恩腐霉、肿雄腐霉、奥卡诺根恩瑟腐霉、寡雄腐霉、卵突腐霉、奥纳卡蒲腐霉、直生藏卵腐霉、介形类腐霉、粗缆腐霉、粗缆腐霉、褐色雪腐霉、侧雄腐霉、短小腐霉、果胶裂解腐霉、周雄腐霉、缠器腐霉、合欢腐霉、无序腐霉、芦根腐霉、卵塞腐霉、多卵腐霉、极地腐霉、棓乐马斯塔腐霉、紫菜腐霉、前扁平腐霉、层出腐霉、绚丽腐霉、琵瑞蒌柏腐霉、蒙栎盘腐霉、P辐射腐霉、分枝状腐霉、规则腐霉、稻根腐霉、根甘蔗腐霉、荛斯綽蒂菲腐霉、喙腐霉、角柄腐霉、硬腐霉、塞尼泰腐霉、针腐霉、刺腐霉、华丽腐霉、斯特林腐霉、密集腐霉、沟腐霉、土栖腐霉、簇囊腐霉、嗜管腐霉、终极腐霉、嗜管腐霉、弯柱腐霉、波状腐霉、范特腐霉、葡萄腐霉、紫菜腐霉、P卷旋腐霉、姜腐霉、以及生姜腐霉。在其他具体实施例中，植物病原体是瓜果腐霉菌物种。

在本发明的其他实施例中，本发明的方法可用于通过应用如以上所描述的化合物3来控制、防止、减少或根除以上所描述的卵菌植物病原体中的任一种，特别是马铃薯晚疫病菌；和瓜果腐霉菌，通过应用如以上所描述的化合物3或1或它们的组合。

在进一步的实施例中，植物病原体是诸如铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeroginosa)和丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)等假单胞菌属的成员。在特定实施例中，植物病原体是丁香假单胞菌物种。在又进一步的实施例中，通过如以上所描述的应用化合物1或2或它们的组合中的任一种，本发明的方法可用于控制、防止、减少或根除以上所描述的假单胞菌植物病原体中的任一种，特别是丁香假单胞菌。

另一方面，本发明提供了一种农药组合物，包括杀虫有效量的至少一种式(I)化合物，

其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、甲基、羟基和甲氧基以及卤素原子(F、Cl、Br、I)；R₅和R₆独立地选自氢、甲基和乙基；和R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基；它们的立体异构体或其农业上可接受的盐。

在进一步的实施例中，本发明提供了一种农药组合物，包括式(I)的化合物，其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、甲基、羟基和甲氧基以及卤素原子(F、Cl、Br、I)；R₅和R₆是甲基；和R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

在又进一步的实施例中，本发明提供了一种农药组合物，包括式(I)化合物，其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、羟基和甲氧基；R₅和R₆是甲基；和R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

在特定实施例中，本发明提供了一种农药组合物，包括式(I)化合物，其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、羟基和甲氧基；R₅和R₆是甲基；和R₇是氢。

在具体实施例中，本发明的农药组合物包括：

化合物1：(5R,6R,7R)-5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇：

或

化合物2：4-((1R,2R,3R)-7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇：

在另一个实施例中，本发明提供了一种农药组合物，包括式(I)化合物，其中R_1a、R_1b、R₂独立地选自氢和卤素原子(F、Cl、Br、I)；R₃、R₄、R₅和R₆是氢；并且R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

在具体实施例中，本发明提供了一种农药组合物，包括式(I)化合物，其中R_1a、R_1b、R₂独立地选自氢和氯原子；R₃、R₄、R₅和R₆是氢；和R₇是甲基氨基。

在另一个具体实施例中，本发明的农药组合物包括：

化合物3：(1S,4R)-4-(3,4-二氯苯基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-氯化铵：

在某些实施例中，上述实施例中的任何实施例的农药组合物或调配物还包括农业上合适或可接受的溶剂或增溶剂。在其他某些实施例中，农业上可接受的溶剂或增溶剂是能够溶解或增溶1-苯基-四氢化萘化合物的水混溶性溶剂。

在一些实施例中，能够溶解或增溶1-苯基-四氢化萘化合物的水混溶性溶剂是极性溶剂，诸如醇、酮、内酯、酮醇、二醇、乙二醇醚、酰胺、链烷醇胺、亚砜和吡咯烷酮。在特定实施例中，上述实施例中的任何实施例的组合物包括选自二甲基亚砜或乙醇的溶剂。在具体实施例中，组合物进一步包括聚山梨醇酯型非离子表面活性剂，例如聚山梨醇酯20。

本发明的农药组合物可以调配成调配物以促进活性农药成分的应用。调配物可以是水混溶性制剂，例如悬浮剂(SC)、胶囊悬浮剂(CS)、水可分散粒剂(WG)、可乳化浓缩物(可乳化浓缩物)、可湿性粉剂(WP)、可溶性(液体)浓缩物(SL)或可溶性粉剂(SP)。

本发明的组合物或调配物还可以包括至少一种佐剂、载剂、稀释剂和/或表面活性剂。佐剂的非限制性实例是活化剂佐剂，例如阳离子、阴离子或非离子表面活性剂；能够提高农药产品活性的油和氮基肥料。油可以是植物油，例如石蜡或石脑油基石油、基于可乳化石油基油的植物油浓缩物，以及衍生自种子油的植物油浓缩物，通常是棉花、亚麻子、大豆或向日葵油，用于控制杂草。氮基肥料可以是硫酸铵或尿素-硝酸铵。

在本实施例的组合物中也用作触变剂的多糖佐剂的非限制性实例是黄原胶(由CPKelco以商标

购得)，其由单糖使用发酵工艺生产，并且其名称来源于所用的细菌种类，野油菜黄单胞菌。用作辅助剂的油可以是植物油，例如石蜡或石脑油基石油、基于可乳化石油基油的植物油浓缩物，以及衍生自种子油的植物油浓缩物，通常是棉花、亚麻子、大豆或向日葵油，用于控制杂草。氮基肥料可以是硫酸铵或尿素-硝酸铵。

增溶剂或溶剂的非限制性实例是石油基溶剂、上述油、脂肪酸的液体混合物、乙醇、甘油和二甲基亚砜。农业上可接受的溶剂或增溶剂可以是能够溶解或增溶1-苯基-四氢化萘化合物的水混溶性溶剂，例如极性溶剂，例如，醇、酮、内酯、酮醇、二醇、乙二醇醚、酰胺、链烷醇胺、亚砜和吡咯烷酮。载剂的非限制性实例是沉淀二氧化硅、胶态二氧化硅、绿坡缕石、瓷土、滑石、高岭土及其组合。

本发明的农药组合物或调配物还可以包括稀释剂，例如乳糖、淀粉、尿素、水溶性无机盐及其组合。农药组合物或调配物还可以包括一种或多种表面活性剂，例如聚山梨醇酯型非离子表面活性剂，如聚山梨醇酯20或三硅氧烷非离子表面活性剂、苯乙烯丙烯酸类分散剂聚合物、酸性树脂共聚物基分散剂、聚羧酸钾、烷基萘磺酸钠共混物、二异丙基萘磺酸钠、萘磺酸盐缩合物的钠盐、木质素磺酸盐及其组合。

三硅氧烷非离子表面活性剂或聚醚二甲基硅氧烷(PEMS)，通常被称为超展着剂或超润湿剂，被添加到农药中，以通过促进活性物质在叶片疏水表面上方的快速展着来增强其活性和耐雨性。一些改性的三硅氧烷型的展着剂将非常低分子量的三硅氧烷与聚醚基团结合，并且能够降低表面张力并在难以润湿的表面上快速扩散。

活性试剂、组合物或包括其的调配物以上述实施例中的任何实施例的方法通过喷雾、浸泡、敷料、包衣、制粒或浸泡施加到植物或其部分、器官或植物繁殖材料上。

在某些实施例中，本发明的1-苯基-四氢化萘化合物在包括其的组合物或调配物中的浓度可以在10ppm至2000ppm、10ppm至1500ppm、10ppm至1000ppm、10ppm至900ppm、10ppm至800ppm、10ppm至700ppm、10ppm至600ppm、10ppm至500ppm、10ppm至400ppm、10ppm至300ppm、10ppm至200ppm、10ppm至100ppm、10ppm至90ppm、10ppm至80ppm、10ppm至70ppm、10ppm至60ppm、10ppm至50ppm、10ppm至40ppm、10ppm至30ppm、10ppm至20ppm、20ppm至2000ppm、20ppm至1500ppm、20ppm至1000ppm、20ppm至900ppm、20ppm至800ppm、20ppm至700ppm、20ppm至600ppm、20ppm至500ppm、20ppm至400ppm、20ppm至300ppm、20ppm至200ppm、20ppm至100ppm、20ppm至90ppm、20ppm至80ppm、20ppm至70ppm、20ppm至60ppm、20ppm至50ppm、20ppm至40ppm、20ppm至30ppm、20ppm至20ppm、30ppm至2000ppm、30ppm至1500ppm、30ppm至1000ppm、30ppm至900ppm、30ppm至800ppm、30ppm至700ppm、30ppm至600ppm、30ppm至500ppm、30ppm至400ppm、30ppm至300ppm、30ppm至200ppm、30ppm至100ppm、30ppm至0ppm、30ppm至100ppm、30ppm至90ppm、30ppm至80ppm、30ppm至70ppm、30ppm至60ppm、30ppm至50ppm、30ppm至40ppm、40ppm至2000ppm、40ppm至1500ppm、40ppm至1000ppm、40ppm至900ppm、40ppm至800ppm、40ppm至700ppm、40ppm至600ppm、40ppm至500ppm、40ppm至400ppm、40ppm至300ppm、40ppm至200ppm、40ppm至100ppm、40ppm至90ppm、40ppm至80ppm、40ppm至70ppm、40ppm至60ppm、40ppm至50ppm、50ppm至2000ppm、50ppm至1500ppm、50ppm至1000ppm、50ppm至900ppm、50ppm至800ppm、50ppm至700ppm、50ppm至600ppm、50ppm至500ppm、50ppm至400ppm、50ppm至300ppm、50ppm至200ppm、50ppm至100ppm、50ppm至90ppm、50ppm至80ppm、50ppm至70ppm、50ppm至60ppm、60ppm至2000ppm、60ppm至1500ppm、60ppm至1000ppm、60ppm至900ppm、60ppm至800ppm、60ppm至700ppm、60ppm至600ppm、60ppm至500ppm、60ppm至400ppm、60ppm至300ppm、60ppm至200ppm、60ppm至100ppm、60ppm至90ppm、60ppm至80ppm、60ppm至70ppm、70ppm至2000ppm、70ppm至1500ppm、70ppm至1000ppm、70ppm至900ppm、70ppm至800ppm、70ppm至700ppm、70ppm至600ppm、70ppm至500ppm、70ppm至400ppm、70ppm至300ppm、70ppm至200ppm、70ppm至100ppm、70ppm至90ppm、70ppm至80ppm、80ppm至2000ppm、80ppm至1500ppm、80ppm至1000ppm、80ppm至900ppm、80ppm至800ppm、80ppm至700ppm、80ppm至600ppm、80ppm至500ppm、80ppm至400ppm、80ppm至300ppm、80ppm至200ppm、80ppm至100ppm、80ppm至90ppm、90ppm至2000ppm、90ppm至1500ppm、90ppm至1000ppm、90ppm至900ppm、90ppm至800ppm、90ppm至700ppm、90ppm至600ppm、90ppm至500ppm、90ppm至400ppm、90ppm至300ppm、90ppm至200ppm、90ppm至100ppm、100ppm至2000ppm、100ppm至1500ppm、100ppm至1000ppm、100ppm至900ppm、100ppm至800ppm、100ppm至700ppm、100ppm至600ppm、100ppm至500ppm、100ppm至400ppm、100ppm至300ppm、100ppm至200ppm、200ppm至2000ppm、200ppm至1500ppm、200ppm至1000ppm、200ppm至900ppm、200ppm至800ppm、200ppm至700ppm、200ppm至600ppm、200ppm至500ppm、200ppm至400ppm、200ppm至300ppm、300ppm至2000ppm、300ppm至1500ppm、300ppm至1000ppm、300ppm至900ppm、300ppm至800ppm、300ppm至700ppm、300ppm至600ppm、300ppm至500ppm、300ppm至400ppm、400ppm至2000ppm、400ppm至1500ppm、400ppm至1000ppm、400ppm至900ppm、400ppm至800ppm、400ppm至700ppm、400ppm至600ppm、400ppm至500ppm、500ppm至2000ppm、500ppm至1500ppm、500ppm至1000ppm、500ppm至900ppm、500ppm至800ppm、500ppm至700ppm、500ppm至600ppm、600ppm至2000ppm、600ppm至1500ppm、600ppm至1000ppm、600ppm至900ppm、600ppm至800ppm、600ppm至700ppm、700ppm至2000ppm、700ppm至1500ppm、700ppm至1000ppm、700ppm至900ppm、700ppm至800ppm、800ppm至2000ppm、800ppm至1500ppm、800ppm至1000ppm、800ppm至900ppm、900ppm至2000ppm、900ppm至1500ppm、900ppm至1000ppm、1000ppm至2000ppm、或1000ppm至1500ppm的范围内。

具体地，1-苯基-四氢化萘化合物在包括其的组合物或调配物中的浓度可以是10ppm、20ppm、30ppm、40ppm、50ppm、60ppm、70ppm、80ppm、90ppm、100ppm、110ppm、120ppm、130ppm、140ppm、150ppm、160ppm、170ppm、180ppm、190ppm、200ppm、210ppm、220ppm、230ppm、240ppm、250ppm、260ppm、270ppm、280ppm、290ppm、300ppm、310ppm、320ppm、330ppm、340ppm、350ppm、360ppm、370ppm、380ppm、390ppm、400ppm、410ppm、420ppm、430ppm、440ppm、450ppm、460ppm、470ppm、480ppm、490ppm、500ppm、1000ppm、1500ppm或2000ppm。

可以根据本发明方法的以上实施例中的任一实施例使用以上浓度范围或浓度中的任一个，包括针对任何一种上述病原体，并通过使用以上所提及的方式中的任一种应用所述组合物或调配物。

定义

如本文所使用的术语“植物器官”是指叶结构、茎结构、根结构和生殖结构。如本文所使用的术语“植物部分”是指营养植物材料；诸如插条或块茎；叶片、花、树皮或茎。如本文所使用的术语“植物繁殖材料”是指种子、根、果实、块茎、球茎、根茎或植物的一部分。本文所使用的术语“农药有效量”是指能够导致至少一种害虫死亡，或显著减少害虫生长、取食或正常生理发育的农药量。根据《国际藻类、真菌和植物命名法规》第3.1条，术语“纲”、“目”、“科”、“属”和“种”是本文所使用的。

权利要求中所使用的术语“包括”是“开放式的”，并且意指所述元素，或者其结构或功能上的等效物，加上没有叙述的任何其他元素。其不应该被解释为限于其后列出的手段；其并不排除其他元素或步骤。其需要被解释为如指定所规定的特征、整数、步骤或组件的存在，但不排除一个或多个其他特征、整数、步骤或组件或其组合的存在或添加。因此，表述“包括x和z的组合物”的范围不应被限于仅组分x和z组成的组合物。同样，表述“包括步骤x和z的方法”的范围不应被限于仅由这些步骤组成的方法。

除非另有说明，本说明书中使用的所有数字应理解为在所有情况下都被术语“约”修饰。除非明确规定，否则如在本文所使用的，术语“约”被理解为在本领域的正常容差范围内，例如，在平均数的2个标准偏差之内。在一个实施例中，术语“约”意指正在使用的数字的数值的所报告的数值的10％以内，优选的在所报告的数值的5％以内。例如，术语“约”可以被立即理解为在所规定的值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、或0.01％之内。在其他实施例中，术语“约”可以意指更高的变化容差，这取决于例如所使用的实验技术。指定值的所述变化是本领域技术人员所理解的，并且在本发明的上下文内。作为说明,“约1至约5”的数值范围应被解释为不仅包括明确列举的约1至约5的值，还包括指示范围内的单个值和子范围。因此，在此数值范围中单独地包括诸如2、3和4等单个值和子范围，例如1至3、2至4和3-5，以及1、2、3、4、5或6。此相同的原理适用于仅列举一个数值作为最小值或最大值的范围。

除非另外从上下文清楚可见，否则本文所提供的所有数值被术语“约”修饰。其他类似的术语，诸如“基本上”、“一般地”、“高达”等应被解释为修饰术语或值，使得它不是绝对的。此类术语将由情况和它们所修饰的术语来定义，因为这些术语是本领域技术人员所理解的。这至少包括用于测量值的给定实验、技术或仪器的预期实验误差、技术误差和仪器误差的程度。

如本文所使用的，术语“和/或”包括一个或多个相关列出项目的任何和所有组合。除非另有定义，否则本文所使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)均具有与本发明所属领域普通技术人员所通常理解的相同含义。还将理解的是，术语，例如在常用词典中定义的那些术语，应该被解释为具有与它们在说明书和相关领域的上下文中的含义一致的含义，并且不应该以理想化或过于正式的意义来解释，除非在此明确定义。为了简洁和/或清楚起见，可能不详细描述众所周知的功能或结构。

现将通过以下非限制性实例说明本发明。

实例

缩写列表：

RPM-每分钟转动次数

RCF-相对离心力

CFUCFU-菌落形成单位

PDBT-具有20μg/ml氯霉素的马铃薯葡萄糖培养液

PDAC-具有20μg/ml氯霉素的马铃薯葡萄糖琼脂

PDAC具有12μg/ml四环素的马铃薯葡萄糖琼脂

DMSO-二甲基亚砜

LB-LB培养液

LBA-LB琼脂

SCH-Schmittner介质

2:PDBC-PDBC用无菌蒸馏水稀释2倍

PDA-马铃薯葡萄糖琼脂

PDBT-具有12μg/ml四环素的马铃薯葡萄糖培养液

实例1基于微孔板的1-苯基-四氢萘化合物对玉米锈病菌生物活性的测定

背景：玉米锈病菌是属于担子菌的一种真菌并且是一种空气传播的病原体。在生长室中，在玉米植物上生长柄锈菌孢子，并且针对每个实验从已侵染的玉米叶片制备新鲜孢子悬浮液。由于玉米锈病菌是一种强制性的病原体，并且不能在合成培养基上生长，因此监测孢子的发芽作为1-苯基-四氢萘化合物生物活性的指标。

概述：稀释在DMSO中的1-苯基-四氢化萘化合物中(化合物1：(5R,6R,7R)-5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇，化合物2：4-((1R,2R,3R)-7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇，和化合物3：(1S,4R)-4-(3,4-二氯苯基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-氯化铵)分别加入微孔板孔中，并与新鲜制备的孢子悬浮液混合。通过显微镜下进行目视检查来监测孢子的发芽。

使用了以下材料、方法和设备：

材料：

20(Tidea有限公司)非离子洗涤剂，DMSO-二甲基亚砜(J.T.Baker-波兰)溶剂，氯霉素(AlfaAesar-UK)

设备：离心机、振荡器、培养箱、显微镜、过滤系统

方法：

A.柄锈菌孢子的制备

用于接种玉米幼苗的制备：

1)使用120×80×80mm盆。

2)使用标准花园土壤和肥料。

3)使用敏感品种的玉米种子。

4)把盆放在小托盘里。

5)用泥土填充盆，直到顶部。

6)为种子做一个小圆槽。

7)在每个盆中种植大约10粒玉米种子。

8)用另外的土壤覆盖种子。

9)在托盘中添加水-每个盆约100ml。土壤应湿润，并且24小时后托盘中不应有水。

10)玉米在22℃的生长室中生长7天(直至第二片叶片出现)。

B.用于接种和发芽研究的孢子悬浮液[来自玉米叶片]制备

1)将20片带有孢子的玉米叶片插入50ml无菌管中。

2)添加50ml冰冷却的0.05％

20溶液。

3)将管插入密封的、冰冷却的塑料盒中。

4)用振荡器以300RPM振荡盒子15分钟。

5)将悬浮液(不具有叶片)转移至干净的无菌50ml管中。

6)将带有孢子悬浮液的试管放在冰上。

C.接种制备：

1)用冷的0.05％

20溶液稀释孢子悬浮液至300ml。

2)检查悬浮液中的孢子浓度-浓度应为约600个孢子/毫升，并且悬浮液应为浅棕色。

3)将孢子悬浮液放在冰上。

D.发芽评估

1)用5微米膜制备过滤系统，并用无菌冷水洗涤滤膜。

2)将50ml管中的孢子悬浮液缓慢悬浮并倾析至膜中心的过滤系统中-孢子应该积聚在膜上。

3)洗涤孢子以丢弃细菌和其他真菌孢子-停止真空并喷洒冷无菌水以悬浮和洗涤孢子，恢复真空。

4)再重复洗涤孢子2次。

5)将带有孢子的膜插入装有30ml 0.05％

20的无菌冷管中，并用手振荡管。

6)移除膜并将膜丢弃。

7)将过滤后的液体倾析至水槽中，并用自来水洗涤过滤系统并将过滤系统干燥。

8)添加30μl氯霉素储备溶液(20mg/ml)至孢子悬浮液，直至最终浓度达到20ug/ml。

9)将孢子悬浮液通过8层纱布过滤到50ml的管中。

10)检查悬浮液中的孢子浓度-浓度应约为7.5X 10³孢子/毫升，且应为棕色。30ml孢子悬浮液应该足以筛选20个微孔板。

11)将孢子悬浮液放在冰上。

E.幼苗侵染

1)将孢子悬浮液转移至250ml烧杯中。

2)用搅拌器以500RPM混合孢子悬浮液，以使孢子保持悬浮。

3)将盆中所有幼苗的叶片浸入孢子悬浮液中10分钟。

4)将具有接种幼苗的盆置于潮湿腔室中，在温度为22℃、湿度为99％的湿度下加热的水持续24小时(将水加热至32℃)。

5)24小时后，将盆转移至生长室，并用塑料袋覆盖幼苗

6)在22℃的生长室中生长玉米。

7)接种后7天，叶片上应观察到褐色斑点。

8)接种11天后，移除塑料袋以防止真菌污染，并使用橡皮筋将幼苗固定在一起。

9)接种12天后，可以收集带有孢子的叶片以用于制备孢子悬浮液。

F.基于柄锈菌孢子发芽测定的生物活性筛选微孔板制备

1)从-20℃冷冻箱中取出装有在DMSO溶剂中的1％1-苯基-四氢化萘化合物的储备溶液的板，并在工作台上将其解冻至少20分钟。

2)从-20℃冷冻箱中取出带有材料的对照板，并且在台面上解冻至少20分钟。

3)所有微孔板应含有10μl的1-苯基-四氢化萘化合物溶液。

4)向微孔板的所有孔中加入15μl柄锈菌孢子悬浮液。在将孢子悬浮液转移至孔中之前，通过移液管(上下)悬浮孢子，以获得25ppm的最终浓度。

5)用透明密封剂密封所有板。

6)将所有测试板在1000RCF下离心1秒，并停止收集板底部的液体。

7)以1000RPM的速度振荡所有板10秒，并检查孔中的孢子分散情况。

8)将所有的板插入到塑料盒，并将盒子放入25℃的培养箱中过夜。

G.板的筛选

1)在悬浮液制备后12小时-24小时，使用10X10放大倍数的显微镜筛选板。

2)将每个孔的孢子发芽与对照板孔(含有可商购获得的杀真菌剂或0.5％DMSO溶液的孔)的孢子发芽进行比较。

3)在Excel表格中报告孢子发芽：

类型1-如果孢子已经正常发芽(正常的管伸长)；

类型2，如果孢子发芽不良或以任何方式不正常(发芽管很短，发芽孢子的频率低，管损坏)；

类型3，如果孢子根本没有发芽(健全的孢子，没有管)。

4)计算每种材料的分数2或3的重复次数。

5)计算每种材料的分数2和3之和。

6)最佳分数：重复次数＝4，分数总和＝12。

结果参见实例9

实例2基于微孔板的1-苯基-四氢萘化合物对立枯丝核菌的生物活性测定

概述：将稀释在DMSO中的1-苯基-四氢化萘化合物(化合物1、2或3)分别添加到微孔板孔中，并与50μl菌丝悬浮液混合，并通过读板仪和目视检查来监测从共混的菌丝开始的真菌的生长。

使用了以下材料、方法和设备：

材料：PDAC、PDBC、DMSO。

设备：读板仪、离心机、振荡器、培养箱。

方法：

A.立枯丝核菌菌丝接种物制备

1)在PDAC 90mm培养皿中培养丝核菌，在1天至4天内得到生长的菌丝。

2)将50ml的PDBC培养基添加至250ml无菌锥形瓶中。

3)用手术刀将固体培养基切割成若干小块，并且将该若干小块插入至锥形瓶中。

4)用振荡器在27℃和150RPM的温度下培养2天至4天。

5)丢弃液体，并且将菌丝倒在空培养皿上。

6)使用手术刀从菌丝上切割许多小块，并且然后将它们插入装有50ml的PDBC培养基的250ml无菌锥形瓶中。

7)制备具有4个培养物的瓶，并在27℃在150RPM下振荡生长3天。

8)将培养物在冰箱中冷藏1小时。

9)将冷却的培养物倒入至250ml烧杯中。

10)添加20ml冷PDBC，使得混合物将覆盖搅拌刀。

11)用共混器在冰上以最大速度共混培养物2分钟，上下移动搅拌器若干次。

12)把混合物在冰上保持。

13)将约5ml共混混合物转移至15ml冰上的管中。

14)在冰上均质化15ml管中的培养物2分钟，根据需要上下移动试管。

15)如上所述，匀质化若干批5ml以制备所需的量(5ml的匀质化的培养物将制得约100ml接种物)。

16)将匀质化的一部分稀释10倍，以检查匀质化的浓度。悬浮液的浓度应为4X10⁴CFU/ml(稀释10倍后的浓度应为4000CFU/ml)。

17)在PDBC以1:20稀释接种物原种，在20ml中稀释1ml，或计算所需的稀释度，以制备2000CFU/ml的最终浓度。每个孔中的量应为约100CFU。

B.用于1-苯基四氢化萘化合物生物活性实验的微孔板制备

1)从-20℃冷冻箱中取出已纯化的1％1-苯基-四氢化萘化合物之一的DMSO储备溶液，并将其在工作台上解冻。

2)取1μl 1％1-苯基-四氢化萘化合物的储备溶液，用39μl水稀释至250ppm。

3)使用多移液管将10μl已稀释的(250ppm)1-苯基-四氢化萘化合物溶液加入微孔板的孔中。

4)使用多移液管向微孔板的孔中添加40ul充分混合的孢子悬浮液接种物。

5)以2000RPM振荡板10分钟，以将1-苯基-四氢化萘化合物与菌丝悬浮液混合。

6)将板在1000RCF下离心1秒，并停止收集板底部的液体。

7)将微孔板保持在工作台上，直到其被读板仪读取。

8)使用读板仪读取板。

9)收集工作台上的板。

10)将已收集的板插入带布盖的塑料盒中，并将盒子置于27℃的培养箱中。

C.板的筛选

1)筛选板3个日期以上：测定开始后的第3天、第7天、第14天和第21天。

2)计算每个筛选与零点读数之间的吸光度差异。

3)计算每个时间点每个孔的生长抑制百分比。使用对照板的DMSO处理结果作为100％生长。

结果参见实例9

实例3基于微孔板筛选对瓜果腐霉菌具有潜在生物活性的1-苯基-四氢化萘化合物

概述：将稀释在DMSO中的1-苯基-四氢化萘化合物(化合物1、2或3)分别添加到微孔板孔中，并与PDBC悬浮液中的50μl游动孢子混合，并通过读板仪和目视检查来监测从游动孢子开始的真菌的生长。

使用了以下材料、方法和设备：

材料：SCH、PDBC、DMSO。

设备：读板仪、离心机、振荡器、培养箱。

方法：

A.腐霉属菌丝接种物制备

1)将瓜果腐霉菌在90mm培养皿中的SCH上生长，以得到产孢菌丝。每个板将产生50ml的游动孢子悬浮液，这将足以用于10个96孔板的生物活性筛选。

2)将60ml无菌水加入到250ml无菌锥形瓶中。

3)用手术刀将2个板的固体培养基切割成12块(每个板)，并将其插入到锥形瓶(固体块应被水覆盖)中。

4)让菌丝在17℃下形成孢子过夜。

5)用手振荡锥形瓶以悬浮游动孢子。

6)用16层纱布将悬浮液过滤至50ml的管中。

7)将悬浮液转移至500ml无菌瓶中。

8)丢弃固体并用次氯酸盐消毒锥形瓶。

9)在冰上冷藏游动孢子悬浮液。

10)评估悬浮液中游动孢子浓度(浓度应为1000孢子/毫升-4000孢子/毫升)。

11)用无菌冰箱冷却的蒸馏水将悬浮液稀释在500ml无菌瓶中。

12)添加相同体积(与悬浮液相同)的无菌冰箱冷却2:PDBC获得500孢子/毫升-2000孢子/毫升接种物。此稀释将导致每个孔中有25个游动孢子-100个游动孢子。

13)将游动孢子悬浮液接种物保持在冰上。

B.用于1-苯基-四氢化萘化合物生物活性实验的微孔板制备

1)取已纯化的1％1-苯基-四氢化萘化合物(1、2或3)在DMSO中的储备溶液，并在工作台上将其解冻至少20分钟。

2)取1μl 1％1-苯基-四氢化萘化合物的储备溶液，用39μl水稀释至250ppm。

3)使用多移液管将10μl已稀释的(250ppm)1-苯基-四氢化萘化合物溶液加入微孔板的孔中。

4)使用多移液管向微孔板的孔中添加40ul的游动孢子悬浮液接种物。通过手用力混合孢子悬浮液，并倾析一个板(5ml)所需的量，以保持游动孢子良好悬浮。

5)用透明密封剂密封板。

6)以2000RPM振荡板10分钟，以将1-苯基-四氢化萘化合物与菌丝悬浮液混合。

7)将板在1000RCF下离心1秒，并停止收集板底部的液体。

8)将微孔板保持在工作台上，直到其被读板仪读取。

9)使用读板仪读取板。

10)收集工作台上的板。

11)将已收集的板插入带布盖的塑料盒中，并将盒子置于27℃的培养箱中。

C.板的筛选

1)读出3个以上日期的板：测定开始后的第3天、第7天、第14天和第21天。

2)计算每次读出与零点读出之间的吸光度差异。

3)计算每个时间点每个孔的生长抑制百分比。使用对照板的DMSO处理结果作为100％生长。

结果参见实例9

实例4基于微孔板筛选对葡萄孢菌具有潜在生物活性的1-苯基四氢化萘化合物

概述：将具有稀释在DMSO中的化合物1、2或3的微孔板与冷冻孢子悬浮液混合，并通过目视检查监测从冷冻孢子开始的真菌的生长。

背景：葡萄孢菌是属于子囊菌纲的真菌，并且是空气传播的病原体。很容易产生大量的葡萄孢孢子，在-20℃的60％甘油液体中存活。因此，我们在生物活性筛选实验中使用冷冻孢子原种，而不是为每个实验制备新鲜孢子。

目的：用于确定1-苯基-四氢化萘化合物对葡萄孢菌存活和生长的影响。

使用了以下材料、方法和设备：

材料：PDAC、PDBC、DMSO。

设备：离心机-Eppendorf5810R；振荡器-科学工业，多微孔板基因；培养箱-Pol-Eco apartura；读板仪。

方法：

A.葡萄孢孢子悬浮液制备

1)将PDAC葡萄孢块放在PDAC板的中间，并在22℃下生长12天。

2)将板在冰箱中冷藏至少1小时。

3)向管中添加25ml的冰箱冷却的60％无菌甘油溶液。

4)将带有菌丝和孢子的琼脂切割成8块，并将其插入50ml无菌管中。

5)在3000RPM下震荡1分钟。

6)在整个过程期间将孢子保持在冰上。

7)将液体转移到新的50ml无菌管中–应该回收约25ml。

8)将孢子悬浮液通过16的层纱布直接过滤到干净无菌的50ml管中以丢弃菌丝：约可以回收20ml。

9)计算孢子浓度，并用冷无菌的60％甘油溶液稀释至2×10⁵孢子/毫升。

10)将1ml孢子悬浮液等分至1.5ml管中-每个等分试样应足以用于20个板的筛选。

11)将孢子悬浮液储存在-20℃下。

B.用于筛选的孢子悬浮液制备

1)从冷冻箱中取出200μl冷冻孢子悬浮液，并将其在冰上解冻。

2)将孢子悬浮液与20ml冰冷PDBC在50-ml管中混合，使4个微孔板的孢子浓度为每毫升2×10⁵个。

3)使用此悬浮液进行筛选实验。

C.使用高压灭菌器对以下物品进行消毒：50-ml管×36；贮存器×4；400-ml PDBC。

D.用于1-苯基-四氢化萘化合物生物活性实验的微孔板制备

1)取已纯化的1％1-苯基-四氢化萘化合物在DMSO中的储备溶液，并在工作台上将其解冻至少20分钟

2)取1μl 1％1-苯基-四氢化萘化合物的储备溶液，用39μl水稀释至250ppm。

3)使用多移液管将10μl已稀释的(250ppm)1-苯基-四氢化萘化合物溶液加入微孔板的孔中。

4)向微孔板的孔中添加40ul孢子悬浮液，通过手用力混合孢子悬浮液，并倾析一个板(5ml)所需的量，以保持孢子良好悬浮。

5)用透明密封剂密封板。

6)以2000RPM震荡板10分钟，使材料与菌丝悬浮液混合。

7)将板在1000RCF下离心1秒后停止，收集板底部的液体。

8)将微孔板保持在工作台上，直到其被读板仪读取。

9)使用读板仪和目视检查评估板上的真菌生长。

10)收集工作台上的板。

11)将已收集的板插入带布盖的塑料盒中，并将盒子置于22℃的培养箱中。

E.板的读出

1)在3个以上日期收集板读出:测定开始后的第3天、第7天、第14天和第21天。

2)计算每次读出与零点读出之间的吸光度差异。

3)计算每个孔在每个时间跨度的生长抑制百分比，使用对照板的DMSO处理结果作为100％生长。

4)“命中”是那些具有4个“干净孔”重复或与DMSO 0.5％溶液相比显示病原体生长少于20％的化合物。

结果参见实例9

实例5基于微孔板筛选对镰刀菌具有潜在生物活性的1-苯基四氢化萘化合物

概述：将稀释在DMSO中的化合物1、2或3添加到微孔板孔中，并与新鲜制备的孢子悬浮液混合，并使用读板仪并通过目视检查来监测从冷冻孢子开始的真菌的生长。

背景：镰刀菌是属于子囊菌的真菌，并且是一种土传病原体。很容易产生大量的镰刀菌孢子，并且在-20℃的60％甘油液体中存活。因此，我们在生物活性筛选实验中使用冷冻孢子原种，而不是为每个实验制备新鲜孢子。

目的：为了确定1-苯基四氢化萘化合物对镰刀菌存活和生长的影响。

使用了以下材料、方法和设备：

材料：PDAC、PDBC、DMSO。

设备：读板仪、离心机、振荡器、培养箱。

方法：

A.镰刀菌孢子悬浮液制备

1)将生长镰刀菌的琼脂块置于PDAC板中间的PDAC上，并在25℃下生长9天。

2)将板在冰箱中冷藏至少1小时。

3)向50mL管中添加30ml的冰箱冷却的60％无菌甘油溶液。

4)用手术刀将一个板上带有菌丝和孢子的琼脂切割成小块，并将其插入装有30ml的60％甘油的50ml管中。

5)在3000RPM下震荡1分钟。

6)在整个过程期间将孢子保持在冰上。

7)将液体转移到新的50ml无菌管中-应该回收约25ml。

8)将孢子悬浮液通过16层纱布直接过滤到干净无菌的50ml管中，以除去菌丝。

9)计算孢子浓度(在40X10放大倍数下)，并通过冷无菌的60％甘油溶液稀释，以得到2X 10⁵孢子/毫升。

10)将1ml孢子悬浮液等分至1.5mL管中-每个等分试样应产生20个板用于筛选。

11)将孢子悬浮液储存在-20℃下。

B.用于筛选的孢子悬浮液制备

1)从冷冻箱中取出1ml冷冻孢子悬浮液，并在冰上解冻。

2)将200μl孢子悬浮液与20ml冰箱冷却的PDBC混合在50ml的管中，制成2000个孢子/毫升悬浮液。

3)使用此量筛选4个微孔板，其中每孔100个孢子。

C.用于1-苯基-四氢化萘化合物生物活性实验的微孔板制备

1)取已纯化的1％1-苯基-四氢化萘化合物在DMSO中的储备溶液，并在工作台上将其解冻至少20分钟。

2)取1μl 1％1-苯基-四氢化萘化合物的储备溶液，用39μl水稀释至250ppm。

3)使用多移液管将10μl已稀释的(250ppm)1-苯基-四氢化萘化合物溶液加入微孔板的孔中。

4)使用多移液管向微孔板的孔中添加40ul的孢子悬浮液接种物。

5)通过手用力混合孢子悬浮液，并倾析一个板(5ml)所需的量，以保持孢子良好悬浮。

6)用透明密封剂密封板。

7)以2000RPM震荡板10分钟，使材料与菌丝悬浮液混合。

8)将板在1000RCF下离心1秒后停止，收集板底部的液体。

9)将微孔板保持在工作台上，直到其被读板仪读取。

10)使用读板仪读取板。

11)收集工作台上的板。

12)将已收集的板插入带布盖的塑料盒中，并将盒子置于25℃的培养箱中。

D.板的读出

在3个以上日期收集板的读出：试验开始后的第3天、第7天、第14天和第21天。

1)计算每次读出与零点读出之间的吸光度差异。

2)计算每个时间进程中每个孔的生长抑制百分比。使用对照板的DMSO处理结果作为100％生长。

结果参见实例9

实例6基于微孔板筛选对马铃薯晚疫病菌具有潜在生物活性的1-苯基-四氢化萘化合物

背景：马铃薯晚疫病菌是来自卵菌的一种强制性的病原体，在合成培养基上很难生长。因此，使用基于从离体番茄叶片制备的叶盘的生物活性筛选系统。

概述：将稀释在DMSO中的化合物1、2或3添加到侵染了疫霉菌的番茄叶盘中，并通过目视检查来监测病害进展。

整体描述：番茄叶片上的接种和维持、孢子悬浮液的制备、在微孔板中的叶盘上的生长以及通过放大镜检查马铃薯晚疫病菌的侵染严重程度。

使用了以下材料、方法和设备：

方法：

A.用于接种叶片生产番茄幼苗的制备

1)使用大小为120×80×80的幼苗盆。

2)使用标准花园泥土和肥料。

3)使用4周的番茄幼苗。

4)把6个盆放在小托盘里。

5)每盆放一棵幼苗。

6)在托盘中添加水-每个盆约100ml。泥土应湿润，并且24小时后托盘中不应有水。

7)在22℃和16小时光照/黑暗条件下在生长室中生长番茄植物。

8)当植物生长时(种植后4周)，将其转移至5L的盆中，并且每周施肥。

B.用于接种番茄叶片的制备

1)将两张无菌纸置于正方形培养皿中。

2)在无菌条件下工作。

3)使用5周大或更大的番茄植物的叶片。

4)用无菌手术刀切割叶片。

5)添加20ml无菌蒸馏水湿润纸(纸应最大限度湿润，但不能具有额外的滴水)。

6)将约6瓣叶片放在一个正方形培养皿中，放在湿纸上(叶片的下侧朝上)。

7)用其盖子覆盖板。

C.接种物的制备和叶盘侵染

孢子囊悬浮液的制备

1)将侵染了疫霉的10瓣番茄叶片(侵染后4天-6天)放入50ml无菌管中，装入40ml冰箱冷却的无菌蒸馏水。

2)用手轻轻混合管，将孢子囊转移至水中，但避免叶片解体。

3)将孢子悬浮液通过16层纱布过滤到50-ml的管中。

4)计算孢子浓度——使用200X的放大倍数的显微镜。预计浓度为6000个孢子囊/毫升。

5)在冰上冷藏管。

D.孢子囊洗涤和过滤浓缩物

1)制备具有膜(0.65微米-5微米)的过滤系统，并用无菌冷水洗涤膜。

2)将孢子悬浮液从50ml管中缓慢悬浮并将其倾入至过滤系统中。使用低真空，不要让膜干燥-在过滤器上留下4ml未过滤的悬浮液。

3)洗涤孢子以丢弃细菌和其他真菌孢子(使用40ml水洗涤)—喷洒冷无菌水以悬浮和洗涤孢子。

4)再重复孢子洗涤5次。不要让膜变干。留下4ml未过滤的悬浮液。

5)使用1000μl移液器将孢子悬浮液收集到干净的50-ml管中。

6)将膜轻轻插入至50-ml管混合物中，以悬浮粘附在膜上的孢子囊。

7)丢弃待高压灭菌的膜。

8)丢弃液体，并使用次氯酸盐对过滤系统消毒30分钟。

9)用自来水洗涤过滤系统，并用塑料筐中的纸擦干过滤系统。

10)计算孢子囊浓度-使用200X的放大倍数的显微镜-预计浓度为10,000孢子囊/毫升–50,000个孢子囊/毫升。

11)将孢子囊悬浮液保存在冰上。

E.在离体叶片上接种孢子以维持疫霉菌

1)将1000μl疫霉菌孢子悬浮液喷洒在一个正方形皿中的所有叶片瓣上，并覆盖皿。

2)用真菌侵染叶片，并将叶片放入17℃的黑暗培养箱中24小时。

3)将板转移到22℃、光照12小时的培养箱中，另外培养3-5天，以便孢子囊生长。

F.用于筛选的番茄叶盘微孔板制备

1)取48孔板。

2)制备0.5％无菌水琼脂，用它预热，但要冷。

3)向微孔板孔中添加100μl 0.5％无菌水琼脂。

4)将从第3片、第4片或第5片叶片制备的番茄叶片放入到微孔板孔中。轻轻按压盘以确保与液体琼脂溶液的最大接触。

G.叶盘微孔板接种孢子用于材料筛选

1)将孢子悬浮液插入到微孔板进行测试。

2)用透明密封剂密封化学微孔板。

3)以2000RPM振荡微孔板10分钟，以将材料与已添加的孢子悬浮液混合。

4)以1000RCF离心微孔板1秒后停止，收集板底部的液体。

5)将5μl孢子悬浮液添加到微孔板的每个盘的中间。

6)用透明密封剂密封叶盘板。

7)将已密封的叶盘板插入至培养箱中，在17℃的黑暗中放置24小时，并且然后在22℃的光照/黑暗条件下放置12小时，持续3-5天。

8)进行生物活性评估。

H.生物活性评估

1)一个时间点下的筛选板：使用X5放大镜制备悬浮液后5天。

2)在Excel表格中报告受侵染的盘：

类型1-如果盘被完全侵染；

类型2-不确定；

类型3-如果盘根本没有被侵染。

3)计算每种材料的分数3的重复次数。

4)计算每种材料的分数3之和。

5)最佳分数计算如下：重复次数＝4，分数之和＝12。

6)“击中”是那些具有4或3个重复，和6-12之和的材料。

结果参见实例9

实例7基于微孔板筛选对丁香假单胞菌具有潜在生物活性的1-苯基-四氢化萘化合物

背景：假单胞菌是一种杆状革兰氏阴性细菌。60％甘油中的冷冻细菌原种被用作生物活性筛选实验的接种物。

概述：将稀释在DMSO中的化合物1或2添加到微孔板孔中，并与冷冻的细菌悬浮液混合，并通过目视检查监测假单胞菌的生长。

使用了以下材料、方法和设备：

材料：LB、LBA、DMSO。

设备：离心机、振荡器、培养箱。

方法：

A.假单胞菌悬浮液制备：

1)在28℃的LBA板上培养假单胞菌2天以得到单个菌落。

2)用无菌牙签将单个菌落转移至含有5ml LB的50ml无菌管中，并在28℃和150RPM下生长24小时。

3)将管在冰箱中冷藏1小时。

4)向管中添加7.5ml冰箱冷却的无菌甘油溶液，以得到60％甘油溶液。

5)混合均匀，但要轻柔，以获得完美的混合-使用1000RPM的涡流。

6)将100ul含60％甘油的细菌悬浮液等分至1.5-ml管中-每个等分应足以筛选10个微孔板。

7)将细菌悬浮液储存在-20℃下的60％甘油中。

B.假单胞菌悬浮液制备用于生物活性筛选实验：

1)从冷冻箱中取出1.5-ml的含有100ul冷冻假单胞菌悬浮液的管，并在冰上将其解冻。

2)在护罩中制备具有40ml冷却的LB的50-ml管。

3)将40μl细菌悬浮液与40ml冰箱冷却的LB混合在50-ml管中。此量足以进行10个微孔板的活性筛选。

4)使用此悬浮液进行生物活性筛选实验。

C.微孔板制备用于生物活性筛选实验：

1)取已纯化的1％1-苯基-四氢化萘化合物1或2在DMSO中的储备溶液，并在工作台上将其解冻至少20分钟。

2)取1μl 1％1-苯基-四氢化萘化合物的储备溶液，用39μl水稀释至250ppm。

3)使用多移液管将10μl已稀释的(250ppm)1-苯基-四氢化萘化合物溶液加入微孔板的孔中。

4)使用多移液管向微孔板的每个孔中添加80μl含生长培养基的细菌悬浮液。

5)用透明密封剂密封板。

6)以2000RPM振荡板10分钟，以将1-苯基-四氢化萘化合物与细菌悬浮液混合。

7)将板在1000RCF下离心1秒后停止，收集板底部的液体。

8)将板插入到带盖的塑料盒中，并将盒放入28℃下的培养箱中。

D.微孔板的生物活性筛选：

1)在5个日期筛选微孔板：接种后第3天、第5天、第7天、第14天和第21天。

2)使用灯来视觉上评估细菌生长。

3)制备用于筛选的板：以2000RPM振荡板2分钟以悬浮细菌，然后以1000RCF离心板几秒钟。

4)移除筛选微孔板的盖后，如果盖上有液体(从内部)，用加热块在60℃下蒸发液体。

5)将每个孔的透明度与对照孔(含有对照杀菌剂或0.5％DMSO溶液的孔)的透明度进行比较。

6)使用以下解释记录结果：清澈＝3(没有细菌生长)，混浊＝1(正常细菌生长)，不确定＝2(与在0.5％DMSO溶液中生长相比，浊度非常低)。

结果参见实例9

实例8基于微孔板的1-苯基-四氢化萘化合物对互隔交链孢霉潜在生物活性的测试

背景：互隔交链孢霉是一种主要植物病原体，对许多农作物造成巨大损害。互隔交链孢霉是属于子囊菌的一种真菌，并且是一种空气传播的病原体。很容易产生大量的互隔交链孢霉，并且其在-20℃的60％甘油液体中存活，这导致决定在此筛选中使用冷冻孢子原种，而不是为每个实验制备新鲜孢子。

概述：将稀释在DMSO中的化合物1、2或3添加到微孔板孔中，并与冷冻的细菌悬浮液混合，并通过目视检查监测链格孢菌的生长。

使用了以下材料、方法和设备：

材料：LB、LBA、DMSO。

设备：离心机、振荡器、培养箱。

方法：

A.链格孢菌孢子悬浮液制备

1)将链格孢菌的PDAT块放在PDAT板的中间，并在25℃下在装有硅胶的盒中生长21天。

2)将板在冰箱中冷藏至少1小时。

3)添加25ml冰箱冷却的无菌水。

4)用手术刀将带有菌丝和孢子的琼脂从一个板切割成8块，并将其插入50-ml无菌管中。

5)在3000RPM下震荡1分钟。

6)在整个过程期间将孢子保持在冰上。

7)将液体转移到新的50-ml无菌管中-应该回收约25ml。

8)将孢子悬浮液通过16层纱布直接过滤到干净无菌的50ml管中以丢弃菌丝：约可以回收20ml。

9)孢子的预期浓度为25,000孢子/毫升。

10)以4500RCF离心带有孢子的50-ml管5分钟。在管底部处应该可以看到黑色的小团粒。

11)轻轻丢弃液体，并且保留孢子的沉淀，每个管中约含3ml液体。

12)在冰上保持。

13)通过涡旋悬浮孢子。

14)将所有管中的悬浮液收集到一个50-ml的管中。

15)计算孢子浓度(在20X10放大倍数下计数×10稀释度)。

16)以4500RCF离心带有孢子的50-ml管5分钟。在管底部处应该可以看到黑色的小团粒。

17)离心后调整孢子浓度(使用体积比进行计算)。浓度应为5×10⁵，通过添加水或通过减少装有孢子团粒的管中的水量来调节孢子浓度。

18)添加冷无菌甘油(100％)以得到60％的甘油溶液。最终孢子浓度应为2×10⁵。

19)将孢子悬浮液混合均匀。

20)将1ml孢子悬浮液的等分至1.5-ml管中。

21)将孢子悬浮液储存在-20℃下。

B.用于筛选的孢子悬浮液制备

1)从冷冻箱中取出400μl冷冻孢子悬浮液，并将其在冰上解冻。

2)将孢子悬浮液与50ml管中的20ml冰冷PDBC混合，使4个微孔板的孢子浓度为每毫升2×10³个。

3)使用此悬浮液进行筛选实验。

C.使用高压灭菌器对以下物品进行蒸汽消毒：50-ml管×36；贮存器×4；400-mlPDBC。

D.用于筛选实验的微孔板制备

1)从-20℃冷冻箱中取出已纯化的1％1-苯基-四氢化萘化合物的DMSO储备溶液，并将其在工作台上解冻。

2)取1μl 1％1-苯基-四氢化萘化合物的储备溶液，用39μl水稀释至250ppm。

3)使用多移液管将10μl已稀释的(250ppm)1-苯基-四氢化萘化合物溶液加入微孔板的孔中。

4)使用多移液管向微孔板的孔中添加40ul充分混合的孢子悬浮液接种物，并用透明密封剂密封板。

5)以2000RPM震荡板10分钟，使材料与菌丝悬浮液混合。

6)将板在1000RCF下离心1秒后停止，收集板底部的液体。

7)收集工作台上的板，直至所有板准备好培养。

8)将已收集的板插入至塑料盒，并将盒放入25℃的培养箱中。

E.板的筛选

1)3个日期的筛选板：接种后第7天、第14天和第21天。

2)使用灯对化合物对真菌生长随时间推移的影响进行目视评估。

3)移除筛选板的盖后，如果盖上有液体(从内部)，用加热块在60℃下蒸发液体。

4)将每个孔的菌丝生长与对照板孔(含有可商购获得的杀真菌剂或0.5％DMSO溶液的孔)的菌丝生长进行比较。

5)使用以下等级解释结果：透明孔＝3(无菌丝生长)，正常菌丝结构＝0(正常生长)，不确定＝2(非预期类型的固体结构，或部分覆盖该区域)。

结果参见实例9

实例9基于实例1至实例8的方案的体外实验结果。

体外筛选基质

针对选定的农业害虫筛选1-苯基-四氢化萘化合物(如下表所指示的)，生物活性值以％为单位，并且反映了根除目标害虫的潜力。

生物活性相对值计算规则(以最大值的百分比表示)

a.玉米锈病菌,马铃薯晚疫病菌-活性等级(1/2/3)X重复#/12(最大值3X 4＝12)×100

B.互隔交链孢霉、葡萄孢菌、立枯丝核菌、核盘菌、镰刀菌、瓜果腐霉菌-活性等级(1/2/3)X重复次数#X活性天数/252(最大值3×4×21＝252)×100

C.丁香假单胞菌、胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium caratovorum)-活性等级(1/2/3)X重复次数#X活性天数/168(最大值3×4×14＝168)×100

总之，1-苯基-四氢化萘化合物被证明是针对下列害虫的有效杀虫剂：玉米锈病菌(在下面的活体转化法结果章节中提供了阳性结果)、马铃薯晚疫病菌(在番茄离体叶片验证实验和温室体内验证实验中提供了阳性结果)、立枯丝核菌、瓜果腐霉、互隔交链孢霉、葡萄孢菌(在温室条件下提供了体内番茄验证实验的阳性结果)、镰刀菌和丁香假单胞菌。

用于验证实验的统计分析

为了评估已测试的化合物在受侵染植物中与对照植物(受侵染但未处理)相比的效果，通过学生的t测试分析数据并计算p-值。每个实验的最小重复次数是3次。如果p＜0.05，则认为结果有意义。数据表示为生物复制的平均值和标准误差平均值。^*意指p值＜0.05，^**意指p值＜0.01，^***意指p值＜0.001，#意指p值＜0.1，n.s.–意指与对照组相比无显著影响。

用于验证实验的调配物配方

调配物1的制备

三种类型的储备溶液用于400ppm的最终1-苯基-四氢化萘化合物调配物制备(调配物1)：

(A)1-苯基-四氢化萘化合物在水和乙酸中的溶液。

将1-苯基-四氢化萘化合物溶解在水中以获得0.2％的水溶液，随后添加2％的乙酸。将最终溶液在室温下超声处理5分钟。溶液应该是清澈且无色的。

(B)在水中的0.4％黄原胶(w/w)。

(C)水中0.6％的

应用于玉米植物的最终调配物由以下成分组成：20％的储备溶液A、10％的储备溶液B和C以及60％的水。

最终调配的1-苯基-四氢化萘化合物以400ppm应用或稀释至所需浓度并应用于植物。

调配物2的制备

三种类型的储备溶液用于400ppm的最终1-苯基-四氢化萘化合物调配物的制备：

(A)1-苯基-四氢化萘化合物在水中的悬浮液。

A.使用研磨机研磨1-苯基-四氢化萘化合物，使用已研磨的化合物获得该化合物在无菌水中的1％悬浮液。1-苯基-四氢化萘化合物的原始重量应为50mg。研磨1ml体积的1-苯基-四氢化萘化合物(50次振荡/秒，1分钟)，重复5次，以获得最终体积5ml的悬浮液和1％的最终浓度。

(B)在水中的0.4％黄原胶(w/w)。

(C)水中0.6％的

应用于小麦植物的最终调配物由以下成分组成：

4％的储备溶液(A)、10％的储备溶液(B)、3.3％的原液(C)以及82.7％的水。

最终调配的1-苯基-四氢化萘化合物以400ppm应用或稀释至所需浓度并应用于植物。

实例10玉米的活体转化法验证

方案名称：玉米幼苗的玉米锈病菌侵染测试

整体描述：玉米上的接种、收集、玉米锈病菌孢子悬浮液的制备和1-苯基-四氢化萘化合物1或3对玉米锈病菌的生物活性评估。

使用了以下材料、方法和设备：

方法：

A.用于接种玉米幼苗的制备

1)使用：120×80×80mm的盆、标准花园土壤、肥料和锈病敏感品种的玉米种子。

2)将盆放在托盘中，并用土壤填满花盆直到顶部。

3)为种子制得小槽。

4)在每个盆中种植大约10粒玉米种子。

5)用另外的土壤覆盖种子。

6)在托盘中添加水-每个盆约100ml(填充托盘三次)。

7)玉米在22℃的生长室中生长8天(直至第二片叶片出现)。

B.用于接种孢子悬浮液[从玉米叶片]的制备

1)将20片带有孢子的已侵染的玉米叶片插入50-ml无菌管中。

2)添加50ml冷却的0.05％

20溶液。

3)将管插入密封的、冰冷的塑料盒中。

4)使用振荡器以3000RPM振荡盒子15分钟。

5)将悬浮液(不具有叶片)转移至干净的无菌50-ml管中。

6)将孢子悬浮液通过16层纱布过滤到另一个无菌的50-ml的管中。

7)将带有孢子悬浮液的试管放在冰上。

8)在5微米滤膜上洗涤并浓缩孢子。用冰冷无菌水洗涤4次，并且收集0.05％

20溶液中的孢子。

9)接种时，用冷的0.05％吐温20溶液稀释孢子悬浮液，使孢子浓度达到8000个孢子/毫升。

C.生长室实验

1)使用如上所述制备的8天龄幼苗。

2)准备喷洒处理-每个植物约1ml。

3)将

20添加到处理，最多添加0.05％。

4)对叶片进行喷雾处理，直到完全饱和(使用喷雾瓶)，并在生长室中晾干。

5)第二天重复喷雾，并让其变干。

6)在第二天(处理喷雾约4小时后)，用柄锈菌孢子悬浮液接种植物。

7)用喷雾瓶向9日龄玉米幼苗的叶片上喷洒约1ml(直至完全饱和)的孢子悬浮液。

8)将装有已接种幼苗的盆放在底部有热水的黑暗潮湿腔室里。腔室应保持在22℃、湿度为99％的室中24小时(热水温度应为32℃)。

9)24小时后，将盆转移至生长室。

10)在22℃的生长室里种植玉米。

11)接种后7天，叶片上应出现褐色斑点。

12)接种9天后记录柄锈菌褐斑病的叶片覆盖率。

13)比较处理过的幼苗和水处理过的幼苗的叶片覆盖率。

用于实验343的化合物1调配物(参考图1)

将化合物1以1:9的重量比溶解在二甲基亚砜溶剂中，并且然后用双蒸馏水补足用于验证的最终体积。喷洒前，将非离子洗涤剂

20添加至最终浓度为0.05％。

用于实验270、284、294的化合物3调配物1-5(参考图4至图6)

将化合物3以1:36的重量比溶解在无水乙醇中，或以1:17的重量比溶解在二甲基亚砜中，超声5分钟，并且然后添加另一部分非离子去污剂，或是与化合物3的重量比1:4.5的

20，或是与化合物3的重量比1:1的

以完成调配物。在一些情况下，使用Na₂CO₃将pH值调节至6。

结果

在生长室的受控环境下进行了若干实验，其中估计了化合物1和化合物3防止和控制玉米植物中的玉米锈病菌的潜力(图1、图4、图5和图6)。化合物1和化合物3表现非常好，并且在受控的生长条件下显示出非常好的功效。1-苯基-四氢化萘化合物对玉米锈病菌的防止和控制的平均功效在200ppm时为95.17％，并且在400ppm时为97.06％。

实例11在生长腔室条件下在侵染叶锈病(小麦柄锈菌)的小麦中进行的活体转化验证实验

整体描述：用叶锈病接种小麦，喷洒潜在的生物活性化合物以控制侵染，以及评估侵染水平的程序。

方法：

A.用于接种小麦幼苗的制备

1)使用：大小为90×80×80的幼苗盆，带有肥料的标准花园泥土和敏感品种的小麦种子(来自以色列Beit Hashita农场)。

2)将12个盆放在一个大托盘中，并用泥土填满盆直到顶部。

3)用250ml的制得种子槽。

4)每个盆里放10粒小麦种子(围成一圈)。

5)用另外的泥土覆盖种子，并用力按压。

6)在托盘中添加水-每个盆约100ml(填充托盘三次)。

7)接种前，在24℃的生长室中培养小麦2周。

B.孢子悬浮液的制备

1)将30片带有孢子的小麦叶片插入50-ml无菌管中。

2)添加40ml冷却的0.05％

20溶液。

3)在涡旋上以最大速度振荡管2分钟。

4)将悬浮液(不具有叶片)转移至在冰上的干净的无菌50-ml管中。

5)将孢子悬浮液通过16层纱布直接过滤到干净无菌的50-ml管中以丢弃菌丝：约可以回收30ml。

6)洗涤5微米孔膜上的孢子以丢弃细菌和其他真菌孢子-停止真空并喷洒冷无菌水以悬浮和洗涤孢子，再次启动真空泵。

7)再次重复洗涤孢子。

8)将孢子悬浮在装有10ml无菌冷0.05％

20溶液的50-ml管中—将带有孢子的膜插入装有

20溶液的管中，并用手振荡管。

9)移除膜并将膜丢弃。

10)将过滤后的液体倾析到水槽中，并用自来水洗涤过滤系统并将过滤系统干燥。

11)[任选的]添加10μl氯霉素储备溶液(20mg/ml)，使最终浓度为20μg/ml。

12)检查悬浮液中的孢子浓度-浓度应约为30,000孢子/毫升，且应为棕色。

13)用冷的0.05％

20溶液稀释孢子悬浮液以得到4000孢子/毫升。

14)将孢子悬浮液放在冰上。

C.接种小麦植物进行侵染实验

1)种植植物约2周，直到第一个叶片完全发育。

2)使用具有9-10株的盆。

3)将4000孢子/毫升的孢子悬浮液喷洒在小麦植物上，每株0.1ml。

4)使用带有0.5-mm孔口的压缩机漆刷系统，在40PSI的压力下，喷洒孢子悬浮液，并在旋转托盘上一次喷洒4罐，进行两次。

5)将装有接种了小麦的植物的盆插入20℃的潮湿腔室中(热水为30℃，室温为18℃)过夜。

6)在湿润腔室之后，立即将圆柱体放在盆上，并将其转移到培养室。

7)小麦在24℃下，光照时间为16小时/黑暗时间为8小时的生长室中生长。

D.侵染水平分析

1)侵染水平的分析在约2周后进行。

2)单独分析第一个叶片的侵染水平。

3)根据孢子斑块的叶片覆盖度对侵染水平进行评分。

4)应在实验前确定100％的孢子斑块覆盖率，此类叶片的照片将用于评估侵染水平。

E.已测试的化合物的应用

1)在接种前一天经由喷雾给予已调配的化合物1处理。

2)用100ul已调配的化合物1喷洒每株植物(参见实例9)。

3)每个处理包括4个盆，其中每个盆中有9-10株。

结果

在生长室的受控环境下进行了两个实验，其中估计了化合物1防止和控制玉米植物中的玉米柄锈菌的生物活性潜力(图2和图3)。化合物1表现非常好，并且在受控的生长条件下显示出非常好的功效。化合物1对小麦柄锈菌的防止和控制的平均功效在200ppm时为95.17％，并且在400ppm时为97.06％。

实例12侵染马铃薯晚疫病菌的番茄离体叶片验证实验

整体描述：用1-苯基-四氢化萘化合物处理番茄离体叶片，并用马铃薯晚疫病菌的孢子侵染。

疫霉菌孢子悬浮液制备：根据实例6制备孢子，并用水稀释至1000孢子/毫升。

A.用于接种番茄叶片的制备:

1)将两张无菌纸置于正方形培养皿中。

2)在无菌条件下工作。

3)从顶部开始使用第3片到第5片叶片。

4)添加无菌蒸馏水以湿润纸张。

5)用无菌手术刀从叶片上切割瓣。

6)将10瓣叶片放在正方形培养皿中，放在湿纸上，叶片的下侧应该面向纸。

7)用盖子覆盖板。

B.离体叶片上孢子的处理和接种

1)将1ml处理剂喷洒在一个正方形皿中的所有叶片上(使用喷雾注射器),喷洒在叶片的上侧，并让叶片在化学护罩中干燥。

2)将1ml疫霉菌孢子悬浮液喷洒在一个正方形皿中的所有叶片上(使用喷洒工具)叶片的上侧。

3)覆盖皿并用拉伸的尼龙将其密封，根据实例6使真菌在叶片上生长，并记录7天后的侵染水平。

实验487、492、500中使用的调配物的方法(参见下表4-6)

将化合物3以1:36的重量比溶解在无水乙醇中，或以1:17的重量比溶解在二甲基亚砜中，超声5分钟，并且然后添加另一部分非离子去污剂，或是与化合物3的重量比1:4.5的

20，或是与化合物3的重量比1:1的

以完成调配物。在一些情况下，使用碳酸钠(Na₂CO₃)将pH值调节至6。

结果

在离体番茄叶片中进行了三个独立的实验，其中估计了化合物3防止和控制马铃薯晚疫病菌的生物活性潜力(参见以下表4-6中的结果)。疫霉菌侵染的严重程度使用下列等级来评估，这些等级表示被真菌覆盖的叶片面积：0＝清澈；1＝低覆盖率；2＝中等覆盖率；3＝高覆盖率。

化合物3在200ppm下以73％至83％的功效控制了疫霉菌侵染。

表4实验487：化合物3对番茄叶片侵染的影响由被疫霉菌覆盖的叶片表面积(0-3)确定

表5实验492：化合物3对番茄叶片侵染的影响由被疫霉菌覆盖的叶片表面积(0-3)确定

表6实验500：化合物3对番茄叶片侵染的影响由被疫霉菌覆盖的叶片表面积(0-3)确定

实例13温室条件下侵染小麦柄锈菌的小麦体内验证实验

整体描述：用已调配的化合物3(处理)喷洒带有叶锈病菌落的小麦叶片，并在处理后的三个时间点(第1天、第7天和第14天)评估孢子发芽的百分比。

子方案：1)脓疱发芽；2)用柄锈菌接种小麦。

方法：

1)用小麦柄锈菌预接种来自敏感栽培品种(Beit Hashita，Hazera公司，以色列)的小麦植物，并转移到温室或种植/温室/田地中。不同年龄和成熟度的菌落/脓疱发育。

2)以相关浓度应用已调配的化合物3，直到叶片完全排水(5毫升/盆)。详细参见下文。

3)在处理后的第1天、第7天、第14天，收集叶片并储存在潮湿腔室中，并发送到实验室进行分析。

4)制备用于孢子发芽测定96孔板：

a)从已收集的叶片切割20个菌落(脓疱)/处理。每个菌落都应该用实验室手术刀分别切割。

b)使用96孔板进行孢子发芽。

c)在每个孔中插入一个脓疱状的柄锈菌。确保每次处理经测试的菌落的数量为20。

d)作为对照，取在小麦上发育且未用化合物3处理的实验室生长的小麦柄锈菌的叶片。

e)用150μl的0.05％

20溶液填充每个孔。

f)用板覆盖密封板，并将其放在2000rpm的振荡器上10分钟。

g)从每个孔中取出叶片。

h)取出120μl溶液，并在每个孔中留下25-30ul。

i)禁止振荡板！

5)在17℃黑暗下温育过夜。

6)第二天-检查对照样品中发芽的孢子。

7)使用显微镜(X10量级)计数每个孔中10个孢子中发芽孢子的数量。禁止计数每个孔中的所有孢子，而是仅选择10个孢子进行测量，并从所选的10个孢子中计数发芽的孢子。

8)计算发芽孢子/处理的平均百分比。

9)对所有20个样品/处理执行平均。

10)与未处理的对照相比进行统计分析。

A.用于在盆中生成小麦柄锈菌预接种植物小麦幼苗的制备

1)使用大小为120×80×80的幼苗盆。

2)使用混有肥料的标准花园土壤(50％的椰子、44％的木髓和6％的石英，其中起子18-24-5肥料5kg/m³，并且缓慢释放14-14-14肥料)。

3)使用敏感品种的小麦种子(使用来自Beit Hashita农场)。

4)将12个盆放入一个大托盘中，并用土壤将盆填满至顶部，并稍微将其按压。

5)为种子制得槽。

6)在每个盆里放12粒玉米种子(围成一圈)，用另外的土壤混合物覆盖种子，并用力按压。

7)在托盘中添加水-每个盆约100ml(填充托盘三次)。

8)接种前，在24℃的生长室中培养小麦3周。

9)将小麦幼苗移至温室中进一步生长。

10)将幼苗种植在清洁的区域(周围无病害或已接种植物)。

B.预接种小麦柄锈菌小麦植物的制备

1)将30-40片带有孢子的已侵染的小麦叶片插入50-ml无菌管中。

2)添加40ml冷却的0.05％

20溶液。

3)在涡旋上以最大速度振荡管2分钟。

4)将悬浮液(不具有叶片)转移至在冰上的干净的无菌50-ml管中。

5)将孢子悬浮液通过16层纱布直接过滤到干净无菌的50-ml管中以丢弃菌丝：约可以回收30ml。

6)使用真空泵洗涤5微米孔膜上的孢子以丢弃细菌和其他真菌孢子-停止真空并喷洒冷无菌水以悬浮和洗涤孢子，再次启动真空泵。

7)再次重复洗涤孢子。

8)小心地将膜从泵中取出，放入新的50-ml管中，并用10ml无菌冷的0.05％

20溶液悬浮孢子，并用手振荡试管，以从膜中释放孢子。

9)移除膜并将膜丢弃。

10)将过滤后的液体倾析到水槽中，并用自来水洗涤过滤系统并将过滤系统干燥。

11)[任选的]添加10μl氯霉素储备溶液(20mg/ml)，使最终浓度为20μg/ml。

12)在显微镜下使用血细胞计数器检查悬浮液中的孢子浓度。浓度应约为30,000孢子/毫升，且应为棕色。

13)用冷的0.05％

20溶液稀释孢子悬浮液以得到4000孢子/毫升。

14)将孢子悬浮液放在冰上。

15)用孢子悬浮液喷洒3周的小麦幼苗(1毫升/幼苗)。

16)将喷洒后的幼苗移入黑暗潮湿的腔室内过夜。

17)将植物从黑暗潮湿的盒中取出。用透明的塑料圆柱体覆盖每个盆，以保持小麦叶片周围湿润。将受侵染的幼苗移入生长腔室，以便进一步发育。

18)应在7至10天内在小麦叶片上观察到小麦柄锈菌的脓疱。

调配物制备

参见实例9中调配部分的调配物2制备。

结果

在温室条件下进行了三个实验，其中估计了化合物3抑制小麦柄锈菌孢子发芽的生物活性潜力(图7至图10)。化合物3表现非常好，并且在温室条件下显示出非常好的功效。化合物3在400ppm时抑制小麦柄锈菌孢子发芽的功效高达72.8％。

实例14温室条件下侵染马铃薯晚疫病菌的番茄体内验证实验

整体描述：用1-苯基-四氢化萘衍生物处理后，评估由马铃薯晚疫病菌引起的晚疫病的严重程度。用1-苯基-四氢化萘衍生物治愈性处理后，用孢子囊侵染3-4周龄的番茄年轻幼苗。

A.病原体孢子囊制备(在板/固体培养基上生长)

孢子囊悬浮液的制备

1)将10瓣4天龄疫霉菌感染的番茄叶片放入无菌的50ml管中。

2)用40ml的4ml的冷无菌蒸馏水填充管。

3)用手轻轻混合管，将孢子囊释放到水中，但要避免损伤叶片组织。

4)将孢子悬浮液通过16层米拉布过滤到50-ml管中。

5)用200X的放大倍数的显微镜计算孢子浓度，预计为3000个孢子囊/毫升。

6)在冰上冷藏管。

B.孢子囊洗涤和过滤浓缩物

1)用过滤膜(孔径范围为0.45μM至5μM)制备过滤系统，并用无菌冷水洗涤膜。

2)将孢子悬浮液从50-ml管中缓慢悬浮并将其倾入到过滤系统中。使用低真空，不要让膜干燥-在过滤器上留下4ml未过滤的悬浮液。

3)用40ml无菌冷却蒸馏水洗涤孢子，以丢弃细菌和其他真菌孢子。

4)重复5次洗涤过程。确保膜在洗涤步骤之间不会变干。

5)将孢子悬浮液收集到一个干净的50-ml管中。

6)将用于过滤的膜插入装有孢子囊的管中，并轻轻悬浮留在膜上的孢子囊。

7)丢弃膜，并用次氯酸盐溶液(0.1％)洗涤并消毒过滤-真空系统-使得在次氯酸盐溶液中静置至少1小时。

8)计算孢子囊浓度-使用X200放大倍数显微镜血球计数器载玻片。接种所需的最终浓度为6000孢子/毫升。

9)将孢子囊储存在冰箱中。

C.植物/幼苗发芽条件

1)使用标准温室土壤混合物将番茄Ikram/Brigade/Shani栽培品种(对疫霉菌敏感)在幼苗托盘中发芽。幼苗在温度为24℃，光照时间12小时/黑暗时间为12小时的干净生长腔室中生长。将具有4片真叶片的3-4周龄的幼苗用于实验。

2)将每次处理所需的植物从幼苗托盘中转移到专用的实验托盘。

3)用小塑料标签标记每个幼苗上的两片叶片。在每个已标记的叶片上，最后最大的3片叶子用于实验。

D.接种物应用(治疗方法)

1)将年轻的番茄幼苗移至用于实验程序的温室中。

2)在治疗方法中，应用接种物，然后在接种后24小时，应用处理：

a)将10μl马铃薯晚疫病菌滴在每个已标记的叶子上。

b)将带有已标记的接种叶片的托盘放入潮湿的暗盒中，在暗盒的底部有低水位的水。盒在17℃保持24小时。

c)24小时后，将装有已接种植物的托盘移至温室台，让病害发展。

E.处理应用(治疗方法)

1)接种后24小时应用1-苯基-四氢化萘化合物。将植物从潮湿盒中取出。

2)使用手动喷雾器应用已调配的1-苯基-四氢化萘化合物，直到番茄叶片完全排水。在叶片的上侧和下侧应用处理。

3)每2株植物应用3.5ml已调配的处理。

4)在第一次处理24小时后，再次进行处理。

F.接种应用(预防性方法)

在预防性方法中，在用化合物3进行两次重复处理后应用接种：

a)将10μl新鲜制备的(6000孢子/毫升)马铃薯晚疫病菌孢子悬浮液滴在每个已标记的叶子上(每株植物6个叶子)。

b)将已接种的植物放入潮湿盒中24小时。

c)24小时后，将带有已接种植物的托盘从潮湿盒中取出，并放入温室中，用于进一步生长和病害发展。

G.处理应用(预防性方法)

1)使用具有4片真叶片的4周龄的健康番茄幼苗。每株植物上两片成熟叶片的最后三片叶片被标记有小塑料标签。

2)在接种前48小时(2天)，用已调配的化合物3处理植物，并使用手动喷雾器进行相应的对照处理，直到番茄叶片(1毫升/株)在叶片的上侧和下侧完全排水。

3)在接种前24小时(1天)，用相同的处理再次处理植物。

H.生长和分析

1)处理和接种后，植物在正常温室条件下生长，并根据需要浇水。

2)接种后5天，在已标记的叶片上观察到病害。

3)切割并收集已标记的叶片，每个处理单独进行，并移至实验室测量腐烂百分比，以病害严重程度％表示。

4)晚疫病症状应观察为出现在感染斑点上的褐绿色斑点，然后大面积的叶片完全变成褐色。

调配物制备

参见实例9中调配部分的调配物制备。

结果

在侵染了疫霉菌的番茄植物中进行了七个独立的实验，其中估计了化合物3防止和控制马铃薯晚疫病菌的潜力(图10至图16)。

化合物3对疫霉菌侵染的控制功效高达100％。

实例15温室条件下侵染番茄早疫病菌的番茄体内验证实验

整体描述：用化合物3处理后，评估由番茄早疫病菌引起的早疫病的严重程度。在用1-苯基-四氢化萘化合物进行预防性处理后，孢子分离物用于侵染3-4周龄番茄幼苗的叶片。

A.链格孢菌孢子悬浮液制备

1)将链格孢菌的PDAT块放在PDAT板的中间，并在25℃下生长9天或更多天。

2)向50-ml管中添加25ml冰箱冷无菌PDB。

3)用手术刀将带有菌丝和孢子的琼脂从一个板切割成8块，并将其插入50-ml无菌管中。

4)振荡1分钟。

5)在整个过程期间将孢子保持在冰上。

6)将液体转移到新的50-ml无菌管中-应该回收约25ml。

7)将孢子悬浮液通过16层纱布直接过滤到干净无菌的50-ml管中以丢弃菌丝：约可以回收20ml。

8)计算孢子浓度(在20×10放大倍数下计数X10稀释度)，并记录。

9)浓度应为10⁴-10⁵孢子/毫升。

B.番茄植物制备

1)对链格孢菌敏感的番茄品种栽培品种Ikram/Brigade/Shani，在实验前4周，在幼苗托盘中使用普通温室土壤混合物(土壤组成为：44％的木髓、50％的椰子、6％的石英，以及长效肥料[osmocote 14:14:14]和NPK肥料18:24:55千克/M3)发芽。幼苗在温度为24℃，光照时间为12小时/黑暗时间为12小时的干净培养腔室中进行发芽和生长。使用具有4片真叶片的3-4周龄幼苗进行实验。

2)将实验所需的植物转移到专用的实验托盘中。

3)用小塑料标签标记每株番茄植物上的两片叶片。在每个已标记的叶片上，最后最大的3片叶子用于实验。

C.处理应用(预防性方法)

1)将具有4片真叶片、干净和健康的4周龄的番茄幼苗移至温室用于实验程序。

2)接种前48小时(2天)，根据实验计划用适当的处理方法处理植物。

3)实验计划包括化合物3，其以上述浓度应用。实验中还包括化学参考处理和未处理的植物。

4)使用手动喷雾器经由喷雾将已调配的化合物3应用于植物，直到番茄叶片完全排水(1毫升/株)。在叶片的上侧和下侧应用处理。

5)接种前24小时(1天)，对植物进行第二次处理。

6)计算平均值、标准误差和统计分析。

D.生长和分析

1)接种和处理后，将植物移至正常温室条件下生长，根据需要，根据季节进行浇水。

2)接种后第10天至第14天，在已标记的叶片上观察到病害。

3)分别从每个处理中收集已标记的叶片，并转移到实验室以收集损伤发展的数据。

4)观察到早疫病症状(链格孢菌)为出现在已侵染斑点上的黄褐色斑点。测量每个已标记的叶子上腐烂的黄褐色直径。同样测量了总叶子大小。

5)每个已标记叶子上腐烂的黄褐色直径和病害严重程度被估计为腐烂面积占总已标记叶子面积的百分比。

调配物制备

参见实例9中调配部分的调配物2制备。

结果

在侵染了链格孢菌的番茄植物中进行实验，其中估计了化合物3防止和控制番茄早疫病菌的潜力(参见图17)。

化合物3对链格孢菌侵染的控制功效高达75.8％。

实例16温室条件下侵染葡萄孢菌的番茄体内验证实验

A.葡萄孢孢子悬浮液制备

1)将葡萄孢菌的PDAT块放在小皮氏PDAT板的中间，并在23℃下生长12天。保持板盖朝上(因此干旱将影响并促进孢子形成)。在分生孢子贯穿所有板生长后，葡萄孢菌菌丝应该繁殖(白色-浅灰色)并在接种物上发育孢子(灰色)。

2)将板在冰箱中冷藏1小时。

3)用手术刀将带有菌丝和孢子的琼脂从一个板切割成8块，并将其插入50-ml无菌管中。

4)向管中添加25ml的冰箱冷却的无菌8X-PDB溶液。

5)在3000RPM下震荡1分钟。

6)在过程期间将孢子保持在冰上。

7)将液体转移到新的50-ml无菌管中-应该回收约25ml。

8)将孢子悬浮液通过16层纱布直接过滤到干净无菌的50ml管中以丢弃菌丝：约可以回收20ml。

9)计算孢子浓度(在40X10放大倍数下计数×10稀释度)，并用冷无菌8×PDB溶液稀释以得到2×10⁵孢子/毫升原液(稀释前的浓度预计为3×10⁵)。

10)用8×PDB稀释孢子悬浮液原液以得到接种孢子悬浮液1×10⁵孢子/毫升。

11)立即用于侵染番茄叶片或在4℃下储存最多1周。

B.植物/幼苗发芽条件

1)番茄品种栽培品种Ikram/Brigade/Shani，在幼苗托盘中使用普通温室土壤混合物(土壤组成为：44％的木髓、50％的椰子、6％的石英，以及长效肥料[osmocote 14:14:14]和NPK肥料18:24:55千克/M3)发芽。幼苗的发芽和生长在温度为24℃以及光照时间为12小时/黑暗时间为12小时的干净培养腔室中进行。具有4片真叶片的3-4周龄幼苗用于实验。

2)将每次处理所需的植物转移到专用的实验托盘。

3)用小塑料标签标记每个幼苗上的两片叶片。仅最后3片叶子用于实验。

C.处理应用(预防性方法)

4)将具有4片真叶片、干净和健康的4周龄的番茄幼苗移至用于实验程序的温室中。每株植物上两片成熟叶片的最后三片叶片被标记有塑料标签。

5)接种前48小时(2天)，根据实验计划用适当浓度的已调配的化合物3处理植物。

6)实验中还包括化学参考处理和未处理的植物。

7)使用手动喷雾器将已调配的化合物3应用于植物直到番茄叶片完全排水(5毫升/2植物)。在叶片的上侧和下侧应用处理。

8)接种前24小时(1天)，对植物应用第二次喷洒。

D.接种应用

1)用细记号笔在每个已标记的叶子上标记黑点

2)使用200-μl的尖端，在靠近已标记点处轻轻划一个小伤口，不要撕开叶片。

3)在治疗方法中，应用接种，然后在接种后72小时后，应用以下MI处理：

A)在每片叶子上，在每个已标记的叶子的黑点处滴上10μl葡萄孢菌。使其停留30分钟，使得液滴浸透纸巾。

B)将装有已标记的接种植物的托盘插入潮湿盒，盒底部的水位较低。将已接种的植物放在盒里72小时。

C)3天后，轻轻打开盒盖(半开)，使盒子和环境之间的不同湿度水平缓慢平衡。湿度平衡后，取出植物托盘，并施加处理。

E.处理应用(治疗方法)

1)接种后72小时施加处理。

2)使用手动喷雾器将已调配的化合物3应用于植物直到番茄叶片完全排水。在叶片的上侧和下侧应用处理。

F.生长和分析

1)处理和接种后，将植物移至生长台上，并维持在正常温室条件下，根据季节需要进行浇水。

2)接种后10天至14天，在已标记的叶片上观察到病害。

3)分别从每个处理中收集已标记的叶片，并转移到实验室以测量每片叶子和腐烂大小。

4)在老叶片上观察到灰霉(葡萄孢菌)症状，并且具有绿色或黄绿色斑点，这将发展成坏死。

5)测量每片叶子的损伤直径和叶子大小。

6)计算平均值、标准误差和统计分析。

调配物制备

参见实例9中调配部分的调配物1和2制备。

结果

在侵染了葡萄孢菌的番茄植物中进行了两个独立的实验，其中估计了化合物3防止和控制葡萄孢菌的潜力(参见图18和图19)。

化合物3对葡萄孢菌侵染的控制功效高达100％。

参考文献

ErlacherA.,Cardinale M.,Grosch R.,Grube M.,Berg G.“病原菌立枯丝核菌及其有益的对应解淀粉芽孢杆菌对本地生菜微生物群的影响(The impact ofthe pathogenRhizoctonia solani and its beneficial counterpart Bacillus amyloliquefacienson the indigenous lettuce microbiome)”,《前沿微生物群(Front Microbiol)》,2014；5:175。于2014年4月21日在线发布。doi:10.3389/fmicb.2014.00175。

Mesfin Kebede Gessese.通过年度致病型调查和受控多致病型测试确定的小麦锈病及其毒性变异的描述。“农业进展(Advances inAgriculture)”,2019；文章ID2673706。

Groth,J.V.,Zeyen,R.J.,Davis,D.W.,&Christ,B.J.(1983)。“在甜玉米(玉蜀黍)杂交中由普通锈病(新疆玉米普通锈病)引起的产量和质量损失(Yield and qualitylosses causedby common rust(Puccinia sorghi Schw.)in sweet corn(Zea mays)hybrids)”,《作物保护(Crop Protection)》,2(1),105–111。

Hershman D.E.,Sikora E.J.,Giesler L.J.Soybean Rust PIPE:“过去、现在和未来”,《害虫综合管理杂志(Journal ofIntegrated Pest Management)》,第2卷，第2期,2011年10月1日,pp D1–D7,https://doi.org/10.1603/IPM11001。

Hofte M.and De Vos P.“植物病原假单胞菌物种(Plant pathogenicpseudomonas species)”,Gnanamanickam S.S.(编),《植物相关细菌(Plant-AssociatedBacteria)》,2006；507–533。

J.A.L.van Kan,“葡萄孢菌的侵染策略(Infection Strategies ofBotrytiscinerea)”,《观赏植物的采后生理学第8学报(Proc.VIIIth IS PostharvestPhys.Ornamentals.),Acta Hort,669，ISHS 2005。

Jenkins J.E.E.,Clark Y.S.以及Buckle A.E.“谷物的镰刀菌病(Fusariumdiseases of cereals)”,研究综述4,1988年10月。

FrankN.Martin&Joyce E.Loper,“腐霉菌引起的土传植物病害：生态学、流行病学和生物控制的前景(Soilborne Plant Diseases Caused by Pythium spp.:Ecology,Epidemiology,and Prospects for Biological Control)”,《植物科学评论(CriticalReviews in Plant Sciences)》,1999；18:111-181。

Moore.L.W.,“丁香假单胞菌：病害和冰核活动(Pseudomonas syringae:diseaseand ice nucleation activity),《观赏植物西北通讯(Ornamentals NorthwestNewsletter)》,(1988)12:4-16。

Patriarca,A.,&Fernández Pinto,V.(2018)，“链格孢菌(Alternaria)”☆,《食品科学参考模块(Reference Module in Food Science.)》,doi:10.1016/b978-0-08-100596-5.22572-9

SedlákováV.,DejmalováJ.,Hausvater E.,Sedlák P.,

P.&MazákováJ.,“马铃薯晚疫病菌对马铃薯产量的影响：品种特性与杀菌剂控制的关系(EffectofPhytophthora infestans on potato yield in dependence on varietycharacteristics and fungicide control)”,《植物土壤环境(Plant Soil Environ.)》,57,2011(10):486–491.

Claims (64)

1.一种用于控制、防止、减少或根除植物、植物器官、植物部分或植物繁殖材料上的植物病原体侵染实例的方法，其特征在于，所述方法包括：向植物、植物部分、植物器官或植物繁殖材料或向植物周围的土壤应用杀虫有效量的至少一种式(I)化合物：

其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、甲基、羟基和甲氧基以及卤素原子(F、Cl、Br、I)；

R₅和R₆独立地选自氢、甲基和乙基；并且

R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基，

或它们的立体异构体或它们农业上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，R_1a、R_1b、R₂独立地选自氢和卤素原子(F、Cl、Br、I)；

R₃、R₄、R₅和R₆是氢；并且

R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，R_1a、R_1b、R₂独立地选自氢和氯原子；

R₃、R₄、R₅和R₆是氢；并且

R₇是甲氨基。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述化合物是(1S,4R)-4-(3,4-二氯苯基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-氯化铵。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、甲基、羟基和甲氧基以及卤素原子(F、Cl、Br、I)；

R₅和R₆是甲基；并且

R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、羟基和甲氧基；

R₅和R₆是甲基；并且

R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、羟基和甲氧基；

R₅和R₆是甲基；并且

R₇是氢。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述化合物选自：

5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇；

(5R,6R,7R)-5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇；

4-(7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇；和

4-((1R,2R,3R)-7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇，

或者它们的组合。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述化合物是(5R,6R,7R)-5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述化合物是4-((1R,2R,3R)-7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇。

11.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，应用所述化合物的植物病原体选自：柄锈菌纲或丝核菌属的担子菌；座囊菌纲的子囊菌门或选自葡萄孢菌和镰刀菌的属；以及卵菌纲的不等鞭毛门。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是柄锈菌目的柄锈菌纲植物病原体的成员。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述柄锈菌植物病原体是柄锈菌科的成员。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述柄锈菌科植物病原体是柄锈菌属的成员。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述植物病原体选自玉米柄锈菌和小麦柄锈菌。

16.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是立枯丝核菌种的立枯丝核菌属成员。

17.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是格孢菌目的座囊菌纲的成员。

18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述格孢菌目植物病原体是格孢菌科的成员。

19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述格孢菌科植物病原体是链格孢菌属的成员。

20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述链格孢菌植物病原体选自互隔交链孢霉和番茄早疫病菌。

21.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是葡萄孢菌物种的葡萄孢菌的成员。

22.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是尖孢镰刀菌属的镰刀菌属成员。

23.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是霜霉菌目的卵菌纲的成员。

24.根据权利要求23所述的方法，其特征在于，所述霜霉菌植物病原体是霜霉菌科或腐霉菌科的成员。

25.根据权利要求24所述的方法，其特征在于，所述霜霉菌植物病原体是疫霉菌属的霜霉菌科的成员。

26.根据权利要求25所述的方法，其特征在于，所述疫霉菌植物病原体是马铃薯晚疫病菌。

27.根据权利要求24所述的方法，其特征在于，所述霜霉菌植物病原体是腐霉属的腐霉菌科的成员。

28.根据权利要求27所述的方法，其特征在于，所述腐霉属植物病原体是瓜果腐霉菌。

29.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，应用所述化合物的植物病原体选自：柄锈菌纲或丝核菌属的担子菌；卵菌纲的不等鞭毛门；以及假单胞菌目的原养菌。

30.根据权利要求29所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是柄锈菌目的柄锈菌纲植物病原体的成员。

31.根据权利要求30所述的方法，其特征在于，所述柄锈菌植物病原体是柄锈菌科的成员。

32.根据权利要求31所述的方法，其特征在于，所述柄锈菌科植物病原体是柄锈菌属的成员。

33.根据权利要求32所述的方法，其特征在于，所述植物病原体选自玉米柄锈菌和小麦柄锈菌。

34.根据权利要求29所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是立枯丝核菌种的立枯丝核菌属成员。

35.根据权利要求29所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是霜霉菌目的卵菌纲的成员。

36.根据权利要求35所述的方法，其特征在于，所述霜霉菌植物病原体是霜霉菌科或腐霉菌科的成员。

37.根据权利要求36所述的方法，其特征在于，所述霜霉菌植物病原体是疫霉菌属的霜霉菌科的成员。

38.根据权利要求37所述的方法，其特征在于，所述疫霉菌植物病原体是马铃薯晚疫病菌。

39.根据权利要求36所述的方法，其特征在于，所述霜霉菌植物病原体是腐霉属的腐霉菌科的成员。

40.根据权利要求39所述的方法，其特征在于，所述腐霉属植物病原体是瓜果腐霉菌。

41.根据权利要求29所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是假单胞菌科的假单胞菌目的成员。

42.根据权利要求41所述的方法，其特征在于，所述假单胞菌科植物病原体属于假单胞菌属。

43.根据权利要求42所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是丁香假单胞菌。

44.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，应用所述化合物的植物病原体选自：柄锈菌纲或丝核菌属的担子菌；腐霉菌科的不等鞭毛门；以及假单胞菌目的原养菌。

45.根据权利要求44所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是柄锈菌目的柄锈菌纲植物病原体的成员。

46.根据权利要求45所述的方法，其特征在于，所述柄锈菌植物病原体是柄锈菌科的成员。

47.根据权利要求46所述的方法，其特征在于，所述柄锈菌科植物病原体是柄锈菌属的成员。

48.根据权利要求47所述的方法，其特征在于，所述植物病原体选自玉米柄锈菌和小麦柄锈菌。

49.根据权利要求33所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是立枯丝核菌种的立枯丝核菌属成员。

50.根据权利要求44所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是腐霉属的腐霉菌科的成员。

51.根据权利要求50所述的方法，其特征在于，所述腐霉属植物病原体是瓜果腐霉菌。

52.根据权利要求44所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是假单胞菌科的假单胞菌目的成员。

53.根据权利要求52所述的方法，其特征在于，所述假单胞菌科植物病原体属于假单胞菌属。

54.根据权利要求53所述的方法，其特征在于，所述植物病原体是丁香假单胞菌。

55.一种农药组合物，其特征在于，所述农药组合物包括至少一种式(I)化合物，

其中R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、甲基、羟基和甲氧基以及卤素原子(F、Cl、Br、I)；

R₅和R₆独立地选自氢、甲基和乙基；并且

R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基；

它们的立体异构体或它们农业上可接受的盐。

56.根据权利要求55所述的农药组合物，

其特征在于，R_1a、R_1b、R₂独立地选自氢和卤素原子(F、Cl、Br、I)；

R₃、R₄、R₅和R₆是氢；并且

R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

57.根据权利要求56所述的农药组合物，

其特征在于，R_1a、R_1b、R₂独立地选自氢和氯原子；

R₃、R₄、R₅和R₆是氢；并且

R₇是甲氨基。

58.根据权利要求57所述的农药组合物，其特征在于，所述式(I)化合物是(1S,4R)-4-(3,4-二氯苯基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-氯化铵。

59.根据权利要求55所述的农药组合物，

其特征在于，R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、甲基、羟基和甲氧基以及卤素原子(F、Cl、Br、I)；

R₅和R₆是甲基；并且

R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

60.根据权利要求59所述的农药组合物，

其特征在于，R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、羟基和甲氧基；

R₅和R₆是甲基；并且

R₇选自氢、甲基、氨基、甲氨基、二甲氨基、羟基和甲氧基。

61.根据权利要求60所述的农药组合物，

其特征在于，R_1a、R_1b、R₂、R₃和R₄独立地选自氢、羟基和甲氧基；

R₅和R₆是甲基；并且

R₇是氢。

62.根据权利要求61所述的农药组合物，其特征在于，所述式(I)化合物选自：

5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇；

(5R,6R,7R)-5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇；

4-(7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇；和

4-((1R,2R,3R)-7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇，

或者它们的组合。

63.根据权利要求62所述的农药组合物，其特征在于，所述式(I)化合物是(5R,6R,7R)-5-(3,4-二羟基苯基)-6,7-二甲基-5,6,7,8-四氢化萘-2,3-二醇。

64.根据权利要求62所述的农药组合物，其特征在于，所述式(I)化合物是4-((1R,2R,3R)-7-羟基-6-甲氧基-2,3-二甲基-1,2,3,4-四氢化萘-1-基)苯-1,2-二醇。

Images