CN114989048A - 环丁-1-烯胺类化合物及其制备方法和在抗ⅱ型登革病毒药物中的应用 - Google Patents

环丁-1-烯胺类化合物及其制备方法和在抗ⅱ型登革病毒药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属药物化学领域，公开了一种环丁‑1‑烯胺类化合物及其制备方法和在抗Ⅱ型登革病毒药物中的应用。其为通式（I）结构，其中，EWG选自芳基或烷基取代的磺酰基；R选自氢，烷基，烷氧基，卤素，硝基。该类化合物具有较好的抗Ⅱ型登革病毒活性以及较低的细胞毒性，将其应用于制备抗Ⅱ型登革病毒药物的研究，具有很好的应用前景。

Description

环丁-1-烯胺类化合物及其制备方法和在抗Ⅱ型登革病毒药 物中的应用
技术领域
本发明属药物化学领域，具体涉及一种环丁-1-烯胺类化合物及其制备方法和在抗Ⅱ型登革病毒药物中的应用。
背景技术
环丁-1-烯胺类化合物是一种重要的结构单元，存在于许多活性天然产物中。另外，因其较强的环张力，使该类化合物具有很好的反应活性，在有机合成中常被用作构建重要化合物的中间体。传统的制备环丁-1-烯胺类化合物通过Ficini[2+2]环加成反应实现，即炔酰胺与环状缺电子烯酮在加热条件下发生[2+2]环加成反应生成环丁-1-烯胺，该类方法存在着反应条件苛刻、反应产率低、底物普适性窄等缺点。继2010年Hsung课题组首次通过CuCl2和AgSbF6共催化炔酰胺与烯酮发生Ficini[2+2]环加成反应合成环丁-1-烯胺(Org.Lett.,2010,12,3780-3783)之后，出现了Cu(I)、Ag(I)、Rh(I)、Ru(II)等金属催化炔酰胺参与的[2+2]环加成反应。但是，目前所报道的这些环丁-1-烯胺类化合物的构建方法大都使用重金属催化剂，存在着催化剂价格昂贵、反应成本高、环境污染等缺陷。因此，开发一种高效、绿色构建环丁-1-烯胺类化合物的方法并对其进行活性研究具有重要的意义。申请人在前期研究环丁-1-烯胺类化合物及其制备方法和在药物中的应用(见专利CN114436918 A)的基础上，为了更好地拓展环丁-1-烯胺及其类似物的用途，对环丁-1-烯胺中氮上的吸电子取代基和芳环上的取代基进行改进，发现了具有更好的抗Ⅱ型登革病毒活性的先导化合物，而且毒性也很低。
发明内容
在前期工作基础上，对环丁-1-烯胺类化合物进行了进一步研究，发现该类化合物具有较好的抗Ⅱ型登革病毒(DENV-2)活性以及较低的细胞毒性，可将其应用于制备治疗抗Ⅱ型登革病毒药物的研究。
为此，本发明目的在于提供一类新的环丁-1-烯胺类化合物；另一目的在于提供其在抗Ⅱ型登革病毒药物中的应用。
为实现本发明目的，具体技术方案如下：
所述环丁-1-烯胺类化合物结构通式为：
Figure BDA0003753641520000011
其中，EWG选自磺酰基，芳基取代的磺酰基或烷基取代的磺酰基；R选自氢，烷基，烷氧基，卤素，硝基。
优选：EWG选自磺酰基，苯基取代的磺酰基或C1-3烷基取代的磺酰基；R选自氢，卤素，硝基，C1-3烷基或C1-3烷氧基，在苯环上单取代或双取代。
更优选：EWG选自C1-3烷基取代的磺酰基；R选自氢，C1-3烷基或卤素，在苯环上单取代。
所述环丁-1-烯胺类化合物合成路线如下：
Figure BDA0003753641520000021
具体合成步骤如下：
将炔酰胺原料1加入干燥的反应瓶内，在氮气保护下，将其加热至熔融状态，在该温度下维持其熔融状态至反应完全，柱层析分离得到环丁-1-烯胺类化合物2。
进一步地，在上述技术方案中，所述炔酰胺原料1的合成路线如下：
Figure BDA0003753641520000022
具体合成步骤如下：
将磺酰胺3和碳酸铯置于圆底烧瓶中，并进行氮气保护，加入无水N,N-二甲基甲酰胺，于室温下搅拌；在0℃且避光的条件下向反应体系内缓慢加入溶于无水二氯甲烷的TMS-EBX碘代物4，逐渐升至室温，再搅拌至反应完全，随后抽滤，减压浓缩除去溶剂，直接柱层析分离得炔酰胺原料1。
所述步骤中磺酰胺3、TMS-EBX碘代物4和碳酸铯的摩尔比为1:1.5:1.3；N,N-二甲基甲酰胺和二氯甲烷的体积比为1:2.5。
进一步地，在上述技术方案中，所述环丁-1-烯胺类化合物在抗Ⅱ型登革病毒药物中的应用，经体外活性细胞实验验证，环丁-1-烯胺类化合物显示出较好的抗Ⅱ型登革病毒活性以及较低的细胞毒性，可将其应用于制备治疗抗Ⅱ型登革病毒药物的研究。
与现有技术相比，本发明提供的环丁-1-烯胺类化合物在抗Ⅱ型登革病毒药物中的应用，具有如下优势：该类化合物具有较好的抗Ⅱ型登革病毒活性以及较低的细胞毒性，将其应用于抗Ⅱ型登革病毒药物的研究，具有很好的应用前景。
附图说明
图1是本发明化合物2a的1H NMR谱图；
图2是本发明化合物2a的13C NMR谱图；
图3是本发明化合物2b的1H NMR谱图；
图4是本发明化合物2b的13C NMR谱图；
图5是本发明化合物2c的1H NMR谱图；
图6是本发明化合物2c的13C NMR谱图；
图7是本发明化合物2d的1H NMR谱图；
图8是本发明化合物2d的13C NMR谱图；
图9是本发明化合物2e的1H NMR谱图；
图10是本发明化合物2e的13C NMR谱图；
图11是本发明化合物2f的1H NMR谱图；
图12是本发明化合物2f的13C NMR谱图；
图13是本发明化合物2g的1H NMR谱图；
图14是本发明化合物2g的13C NMR谱图；
图15是本发明化合物2h的1H NMR谱图；
图16是本发明化合物2h的13C NMR谱图；
图17是本发明化合物2i的1H NMR谱图；
图18是本发明化合物2i的13C NMR谱图；
图19是本发明化合物2j的1H NMR谱图；
图20是本发明化合物2j的13C NMR谱图；
图21是本发明化合物2k的1H NMR谱图；
图22是本发明化合物2k的13C NMR谱图；
图23是本发明化合物2l的1H NMR谱图；
图24是本发明化合物2l的13C NMR谱图；
图25是本发明化合物2a-2l的抗Ⅱ型登革病毒活性初步筛选柱状图；
图26是本发明化合物2a，2d-2g，2j和利巴韦林的抗Ⅱ型登革病毒活性柱状图；
图27是本发明化合物2a，2d-2g，2j细胞毒性柱状图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式，对发明技术方案做进一步的详细描述，但本发明的保护范围并不局限于此。若未特别指明，以下实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
主要仪器与化学试剂
核磁共振波谱仪：Bruker AscendTM 400；高分辨质谱仪：Bruker MicrOTOF-Q II质谱仪；红外光谱仪：知微Smart傅立叶变换红外光谱仪(天津港东科技股份有限公司)；三用紫外线分析仪：ZF-6型(上海高鹏科技有限公司)；测定用熔点仪：XT4A显微熔点测定仪(北京科仪电光仪器厂)。
本应用实施过程中所用的原料、溶剂均为商业途径购进。
实施例1：炔酰胺原料1a-1l的合成
特别说明，化合物结构中简写：Ts代表对甲基苯磺酰基，Mbs代表对甲氧基苯磺酰基，Cs代表对氯苯磺酰基。
Figure BDA0003753641520000041
以炔酰胺1a具体合成步骤为例，向25mL圆底烧瓶中依次加入磺酰胺3a(123.7mg,0.50mmol)，碳酸铯(211.8mg,0.65mmol)，并进行氮气保护，再加入无水N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)，室温搅拌0.5h；在0℃避光下向反应体系缓慢加入溶于二氯甲烷(2.5mL)的TMS-EBX碘代物4(258.2mg,0.75mmol)，逐渐升至室温搅拌0.5h；TLC监测反应进程，待反应完全后，过硅胶抽滤，减压除去溶剂，所得粗产物以石油醚/乙酸乙酯(10:1～4:1)为洗脱剂柱层析分离得到白色固体原料1a(135.2mg,0.498mmol)，产率为99％。
将对应的磺酰胺3b-3l分别按本实施例中上述方法制备化合物1，对应得到化合物1b-1l。
Figure BDA0003753641520000042
化合物1a：白色固体，99％产率，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,2H,J＝8.3Hz),7.34-7.31(m,3H),7.30-7.24(m,4H),2.84(s,1H),2.44(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ145.3,138.4,133.0,129.7,129.3,128.6,128.4,126.4,76.7,59.1,21.9.
Figure BDA0003753641520000043
化合物1b：白色固体，95％产率，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.63(d,2H,J＝9.0Hz),7.35-7.31(m,3H),7.28-7.25(m,2H),6.94(d,2H,J＝9.0Hz),3.88(s,3H),2.84(s,1H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ164.1,138.5,130.7,129.3,128.6,127.6,126.5,114.2,76.9,59.1,55.9.
Figure BDA0003753641520000044
化合物1c：白色固体，85％产率，Rf＝0.55[石油醚/乙酸乙酯(5:1)]；mp＝102–103℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.63(d,2H,J＝8.8Hz),7.48(d,2H,J＝8.8Hz),7.37-7.33(m,3H),7.26-7.24(m,2H),2.85(s,1H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ141.0,138.1,134.3,129.8,129.5,128.9,126.4,76.2,59.4,其中，在129.5ppm处有一个碳信号重叠；IR(neat)(cm-1)3307m,2129w,1486m,1371s,1177s,1085s,755s；HRMS(ESI):m/z calcd for C14H11ClNO2S[M+H]+292.0194,found 292.0197.
Figure BDA0003753641520000051
化合物1d：白色固体，90％产率，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(d,2H,J＝8.4Hz),7.29(d,2H,J＝8.0Hz),7.14-7.09(m,4H),2.81(s,1H),2.45(s,3H),2.34(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ145.2,138.8,135.8,133.1,129.9,129.7,128.4,126.4,76.9,58.7,21.9,21.3.
Figure BDA0003753641520000052
化合物1e：白色固体，88％产率，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,2H,J＝8.4Hz),7.30(d,2H,J＝8.1Hz),7.24-7.19(m,2H),7.04-6.99(m,2H),2.84(s,1H),2.45(s,3H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ162.4(C-F,1JC-F＝247.4Hz),145.5,134.3(C-F,4JC-F＝3.2Hz),132.7,129.8,128.5(C-F,3JC-F＝8.9Hz),128.4,116.3(C-F,2JC-F＝22.9Hz),76.6,59.2,21.9.
Figure BDA0003753641520000053
化合物1f：白色固体，80％产率，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,2H,J＝8.3Hz),7.30(d,4H,J＝8.9),7.20(d,2H,J＝8.8Hz),2.85(s,1H),2.45(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ145.5,137.0,134.4,132.7,129.8,129.5,128.4,127.6,76.2,59.6,21.9.
Figure BDA0003753641520000054
化合物1g：白色固体，79％产率，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,2H,J＝8.3Hz),7.45(d,2H,J＝8.6Hz),7.30(d,2H,J＝8.1Hz),7.14(d,2H,J＝8.6Hz),2.85(s,1H),2.45(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ145.6,137.5,132.7,132.5,129.8,128.4,127.9,122.5,76.2,59.6,21.9.
Figure BDA0003753641520000061
化合物1h：白色固体，93％产率，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.60(d,2H,J＝8.3Hz),7.29(d,2H,J＝8.0Hz),7.20(t,1H,J＝7.8Hz),7.14-7.08(m,2H),7.01(d,1H,J＝7.8Hz),2.82(s,1H),2.45(s,3H),2.32(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ145.2,139.4,138.3,133.2,129.7,129.4,129.0,128.5,127.2,123.4,76.8,58.9,21.9,21.4.
Figure BDA0003753641520000062
化合物1i：白色固体，86％产率，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.62(d,2H,J＝8.3Hz),7.30(d,2H,J＝8.1Hz),6.95(s,1H),6.85(s,2H),2.81(s,1H),2.45(s,3H),2.27(s,6H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ145.1,139.1,138.2,133.3,130.4,129.6,128.5,124.2,77.0,58.8,21.9,21.3.
Figure BDA0003753641520000063
化合物1j：白色固体，81％产率，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.60(d,2H,J＝8.3Hz),7.30(d,3H,J＝8.3Hz),7.12-7.10(m,1H),7.05-7.00(m,2H),2.89(s,1H),2.45(s,3H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ162.6(C-F,1JC-F＝246.7Hz),145.6,139.8(C-F,3JC-F＝9.8Hz),132.8,130.3(C-F,3JC-F＝8.9Hz),129.9,128.4,121.7(C-F,4JC-F＝3.3Hz),115.5(C-F,2JC-F＝20.8Hz),113.5(C-F,2JC-F＝24.4Hz),76.0,60.0,21.9.
Figure BDA0003753641520000064
化合物1k：白色固体，72％产率，Rf＝0.50[石油醚/乙酸乙酯(5:1)]；mp＝74–75℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.60(d,2H,J＝8.4Hz),7.32-7.27(m,5H),7.22-7.19(m,1H),2.88(s,1H),2.45(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ145.6,139.5,134.8,132.8,130.2,129.9,128.7,128.4,126.3,124.4,76.0,60.0,21.9；IR(neat)(cm-1)3290w,2131w,1587m,1371s,1166s,1085m,670s；HRMS(ESI):m/z calcd for C15H13ClNO2S[M+H]+306.0350,found306.0346.
Figure BDA0003753641520000065
化合物1l：白色固体，72％产率，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(d,2H,J＝8.4Hz),7.46-7.43(m,1H),7.42(t,1H,J＝2.0Hz),7.31(d,2H,J＝8.0Hz),7.25-7.24(m,1H),7.23-7.19(m,1H),2.89(s,1H),2.46(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ145.6,139.6,132.8,131.6,130.5,129.9,129.1,128.4,124.9,122.5,76.0,60.0,21.9.
实施例2：化合物2a-2l的合成
特别说明，化合物结构中简写：Ts代表对甲基苯磺酰基，Mbs代表对甲氧基苯磺酰基，Cs代表对氯苯磺酰基。
Figure BDA0003753641520000071
以化合物2a具体合成步骤为例，将炔酰胺1a(81.4mg,0.3mmol)加入干燥的反应瓶中，并进行氮气保护，随后将反应体系升温至其呈熔融状态(100℃)，在该温度下维持其熔融状态，TLC监测反应进程，2.0h后反应完成。所得粗产物以石油醚/乙酸乙酯(3.5:1)为洗脱剂柱层析分离得到白色固体产物2a(70.8mg，0.131mmol)，产率为87％。
将实施例1中制备得到的炔酰胺1b-1l分别按本实施例中上述方法制备化合物2，对应得到化合物2b-2l。
Figure BDA0003753641520000072
化合物2a：白色固体，87％产率，Rf＝0.25[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝86–89℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(d,2H,J＝8.3Hz),7.48(d,2H,J＝8.4Hz),7.46-7.38(m,3H),7.33-7.24(m,6H),7.18-7.08(m,3H),6.76-6.73(m,2H),5.94(s,1H),4.91(s,1H),2.45(s,3H),2.42(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.1,152.0,148.9,146.0,145.5,135.7,133.1,132.9,130.2,130.1,130.02,129.97,129.5,129.4,129.1,128.4,124.8,121.7,118.6,76.0,21.94,21.89；IR(neat)(cm-1)1769w,1695w,1552s,1486m,1320m,1173s,694s；HRMS(ESI):m/z calcd for C30H27N2O4S2[M+H]+543.1407,found 543.1411.
Figure BDA0003753641520000073
化合物2b：白色固体，82％产率，Rf＝0.12[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝94–97℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.84(d,2H,J＝8.9Hz),7.52(d,2H,J＝9.0Hz),7.46-7.38(m,3H),7.28(t,2H,J＝7.7Hz),7.17-7.09(m,3H),6.98(d,2H,J＝8.9Hz),6.89(d,2H,J＝9.0Hz),6.78(d,2H,J＝7.3Hz),5.93(s,1H),4.91(s,1H),3.87(s,3H),3.84(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.5,164.3,153.3,152.2,148.9,135.7,132.2,130.6,130.11,130.07,129.3,129.1,127.3,124.8,121.8,118.2,114.5,114.0,76.1,55.9,55.8,其中，在129.1ppm处有一个碳信号重叠；IR(neat)(cm-1)1697w,1592m,1551s,1260s,1136s,1083s,832s；HRMS(ESI):m/z calcd for C30H27N2O6S2[M+H]+575.1305,found 575.1303.
Figure BDA0003753641520000081
化合物2c：白色固体，74％产率，Rf＝0.50[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝105–108℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.85(d,2H,J＝8.7Hz),7.60(d,2H,J＝8.8Hz),7.50(d,3H,J＝8.8Hz),7.48-7.43(m,3H),7.30(t,3H,J＝7.5Hz),7.17-7.11(m,3H),6.75(d,2H,J＝7.3Hz),5.94(s,1H),5.01(s,1H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ152.4,151.7,148.5,141.7,141.3,135.3,135.0,134.5,131.3,130.5,129.94,129.86,129.8,129.7,129.3,125.2,121.6,119.2,76.1,其中，在129.3ppm处有一个碳信号重叠；IR(neat)(cm-1)2920w,1645w,1560s,1260m,1083s,1013s,756s；HRMS(ESI):m/z calcd for C28H21Cl2N2O4S2[M+H]+583.0314,found 583.0317.
Figure BDA0003753641520000082
化合物2d：白色固体，81％产率，Rf＝0.37[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝100–101℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(d,2H,J＝8.3Hz),7.48(d,2H,J＝8.4Hz),7.31(d,2H,J＝8.0Hz),7.25(d,2H,J＝8.0Hz),7.19(d,2H,J＝8.3Hz),7.08(d,2H,J＝8.0Hz),7.02(d,2H,J＝7.6Hz),6.64(d,2H,J＝8.2Hz),5.93(s,1H),4.87(s,1H),2.45(s,3H),2.42(s,3H),2.40(s,3H),2.32(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ152.6,151.9,146.4,145.9,145.4,140.4,134.5,133.1,133.0,132.7,130.1,130.0,129.9,129.8,129.7,129.4,128.4,121.7,118.6,76.0,21.94,21.88,21.5,21.1；IR(neat)(cm-1)1695w,1554s,1450w,1320m,1172s,1137s,667s；HRMS(ESI):m/z calcd for C32H31N2O4S2[M+H]+571.1720,found571.1716.
Figure BDA0003753641520000083
化合物2e：白色固体，87％产率，Rf＝0.37[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝90–91℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.76(d,2H,J＝8.2Hz),7.50(d,2H,J＝8.1Hz),7.33-7.27(m,4H),7.16-7.05(m,4H),7.00-6.94(m,2H),6.73-6.68(m,2H),5.95(s,1H),4.88-4.87(m,1H),2.45(s,3H),2.43(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.3(C-F,1JC-F＝250.1Hz),160.3(C-F,1JC-F＝242.2Hz),153.0,151.9,146.3,145.6,144.9(C-F,4JC-F＝2.9Hz),132.9,132.8,132.1(C-F,3JC-F＝9.1Hz),131.5(C-F,4JC-F＝3.2Hz),130.1,129.9,129.5,128.3,123.0(C-F,3JC-F＝8.0Hz),118.2,116.5(C-F,2JC-F＝23.0Hz),115.8(C-F,2JC-F＝22.3Hz),75.9,21.91,21.87；IR(neat)(cm-1)1695w,1558s,1498s,1219m,1082m,1017w,668s；HRMS(ESI):m/z calcd for C30H25F2N2O4S2[M+H]+579.1218,found 579.1221.
Figure BDA0003753641520000091
化合物2f：白色固体，84％产率，Rf＝0.46[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝104–105℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(d,2H,J＝8.3Hz),7.50(d,2H,J＝8.3Hz),7.37-7.27(m,6H),7.24(d,2H,J＝8.6Hz),7.12-7.06(m,2H),6.67(d,2H,J＝8.6Hz),5.93(s,1H),4.88(s,1H),2.46(s,3H),2.43(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.4,151.9,147.4,146.4,145.7,136.5,134.1,132.9,132.8,131.3,130.3,130.2,129.9,129.7,129.6,129.2,128.4,123.0,118.4,75.8,22.0,21.9；IR(neat)(cm-1)1690w,1554s,1374m,1138s,1083s,1016m,666s；HRMS(ESI):m/z calcd for C30H25Cl2N2O4S2[M+H]+611.0627,found 611.0630.
Figure BDA0003753641520000092
化合物2g：白色固体，85％产率，Rf＝0.50[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝99–102℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(d,2H,J＝8.3Hz),7.54-7.49(m,4H),7.39(d,2H,J＝8.6Hz),7.33-7.28(m,4H),7.02(d,2H,J＝8.1Hz),6.61(d,2H,J＝8.6Hz),5.92(s,1H),4.87(s,1H),2.46(s,3H),2.44(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.4,151.9,147.9,146.4,145.7,134.6,132.9,132.8,132.7,132.2,131.6,130.2,129.9,129.6,128.4,124.7,123.4,118.4,118.1,75.8,21.99,21.95；IR(neat)(cm-1)1695w,1551s,1399w,1373m,1284m,1174s,662s；HRMS(ESI):m/z calcd for C30H25Br2N2O4S2[M+H]+698.9617,found 698.9615.
Figure BDA0003753641520000101
化合物2h：白色固体，91％产率，Rf＝0.40[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝77–78℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(d,2H,J＝8.3Hz),7.50(d,2H,J＝8.4Hz),7.32(d,2H,J＝7.9Hz),7.27-7.24(m,4H),7.16(t,1H,J＝7.9Hz),6.98-6.89(m,3H),6.54-6.51(m,2H),5.90(s,1H),4.90(s,1H),2.46(s,3H),2.43(s,3H),2.35(s,3H),2.31(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ152.9,151.9,148.9,145.9,145.4,139.5,138.9,135.5,133.2,133.0,130.9,130.7,130.1,129.9,129.4,129.0,128.9,128.5,127.0,125.6,122.4,118.7,118.6,76.1,21.93,21.88,21.6,21.5；IR(neat)(cm-1)1769w,1595w,1551s,1370m,1172s,1136s,670s；HRMS(ESI):m/z calcd for C32H31N2O4S2[M+H]+571.1720,found 571.1718.
Figure BDA0003753641520000102
化合物2i：白色固体，87％产率，Rf＝0.50[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝132–134℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(d,2H,J＝8.2Hz),7.51(d,2H,J＝8.4Hz),7.31(d,2H,J＝8.0Hz),7.26(d,2H,J＝8.2Hz),7.06(s,1H),6.78-6.72(m,3H),6.30(s,2H),5.88(s,1H),4.89(s,1H),2.46(s,3H),2.43(s,3H),2.29(s,6H),2.26(s,6H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ152.8,151.9,148.9,145.8,145.2,139.1,138.7,135.3,133.3,133.0,131.8,130.1,129.8,129.4,128.6,127.6,126.4,119.4,118.8,76.1,21.92,21.88,21.5,21.4.IR(neat)(cm-1)2920w,1594w,1553s,1318m,1147s,1082m,683s；HRMS(ESI):m/z calcd forC34H35N2O4S2[M+H]+599.2033,found 599.2031.
Figure BDA0003753641520000103
化合物2j：白色固体，88％产率，Rf＝0.37[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝81–82℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(d,2H,J＝8.3Hz),7.52(d,2H,J＝8.3Hz),7.39-7.28(m,5H),7.24-7.12(m,2H),6.95-6.91(m,2H),6.81(td,1H,J＝8.4,2.0Hz),6.55-6.52(m,1H),6.42(dt,1H,J＝10.0,2.2Hz),5.94(s,1H),4.94(s,1H),2.46(s,3H),2.43(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.2(C-F,1JC-F＝244.8Hz),162.5(C-F,1JC-F＝248.2Hz),153.7,151.9,150.6(C-F,3JC-F＝9.0Hz),146.4,145.8,136.8(C-F,3JC-F＝9.8Hz),133.0,132.9,130.4(C-F,3JC-F＝8.8Hz),130.3(C-F,3JC-F＝9.3Hz),130.1,129.9,129.6,128.3,125.7(C-F,4JC-F＝2.5Hz),118.5,117.6(C-F,2JC-F＝23.3Hz),117.5(C-F,2JC-F＝20.8Hz),117.4(C-F,4JC-F＝2.8Hz),111.6(C-F,2JC-F＝21.1Hz),108.9(C-F,2JC-F＝22.4Hz),75.9,21.9,其中，在21.9ppm处有一个碳信号重叠；IR(neat)(cm-1)1702w,1552s,1480m,1373m,1173s,1024w,670s；HRMS(ESI):m/z calcd for C30H25F2N2O4S2[M+H]+579.1218,found 579.1216.
Figure BDA0003753641520000111
化合物2k：白色固体，91％产率，Rf＝0.35[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝82–83℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(d,2H,J＝8.3Hz),7.52(d,2H,J＝8.2Hz),7.45(d,1H,J＝8.1Hz),7.37-7.29(m,5H),7.20(t,1H,J＝8.0Hz),7.13-7.07(m,3H),6.66-6.63(m,1H),6.60(t,1H,J＝2.0Hz),5.91(s,1H),4.91(s,1H),2.47(s,3H),2.44(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.8,151.9,150.1,146.5,145.8,136.6,134.9,134.6,132.9,132.8,130.5,130.3,130.17,130.16,130.13,129.9,129.6,128.4,124.8,121.6,120.0,118.4,75.9,21.95,21.92,其中，在130.16ppm处有一个碳信号重叠；IR(neat)(cm-1)1696w,1550s,1288m,1175m,1081m,1021w,667s；HRMS(ESI):m/z calcd for C30H25Cl2N2O4S2[M+H]+611.0627,found 611.0628.
Figure BDA0003753641520000112
化合物2l：白色固体，91％产率，Rf＝0.42[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]；mp＝88–89℃；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(d,2H,J＝8.3Hz),7.60(d,1H,J＝8.1Hz),7.52(d,2H,J＝7.8Hz),7.35-7.29(m,5H),7.23(d,2H,J＝8.1Hz),7.14(t,2H,J＝7.8Hz),6.72(t,1H,J＝1.8Hz),6.70(d,1H,J＝7.8Hz),5.89(s,1H),4.91(s,1H),2.48(s,3H),2.45(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.8,151.9,150.3,146.5,145.8,136.7,133.4,132.9,132.8,132.7,130.6,130.5,130.2,129.9,129.6,128.9,128.4,127.7,124.4,122.6,122.5,120.4,118.3,75.8,22.0,21.9；IR(neat)(cm-1)1696w,1547s,1373m,1288s,1175s,1019w,664s；HRMS(ESI):m/z calcd for C30H25Br2N2O4S2[M+H]+698.9617,found 698.9614.
实施例3：本发明实施例2所合成的代表性化合物的抗Ⅱ型登革病毒活性研究，以下没有特别说明，均为质量百分比。
3.1主要材料及方法
3.1.1化合物的储存液配制及保存
环丁-1-烯胺类化合物2a-2l原液以DMSO稀释至10mM或20mM，-80℃保存；储存液解冻后，用细胞培养基DMEM/10％FBS/1％Pen/Strep稀释。
3.1.2细胞及毒株
非洲绿猴肾Vero细胞培养在完全DMEM培养基(Gibco)中，其含10％胎牛血清(Gibco)，100U/mL盘尼西林(Invitrogen)和100U/mL链霉素(Invitrogen)，置于37℃，体积百分比5％CO2恒温培养箱培养。
DENV-2(16681)毒株在vero细胞中进行扩繁，以MOI＝0.1感染vero细胞4h后，加入DMEM培养基(Gibco)，其含2％胎牛血清(Gibco)，100U/mL盘尼西林(Invitrogen)和100U/mL链霉素(Invitrogen)，培养4天后收集细胞上清并分装。病毒颗粒用绝对定量PCR进行拷贝数的定量。
3.1.3环丁-1-烯胺类化合物抗Ⅱ型登革病毒(DENV-2)活性检测
环丁-1-烯胺类化合物在50μM浓度下对抗Ⅱ型登革病毒活性进行初步筛选，以利巴韦林作为抗Ⅱ型登革病毒阳性对照药，利用qRT-PCR半定量检测病毒3’-UTR基因的表达，对环丁-1-烯胺类化合物进行抗Ⅱ型登革病毒活性的初步筛选，实验步骤如下：
1)利用qRT-PCR半定量检测病毒3’-UTR一段保守序列的表达，引物序列如下表1；
表1 DENV-2病毒3’-UTR引物序列
Figure BDA0003753641520000121
2)提前一天，将vero细胞(每孔2x105个)铺于24孔板，加入培养基：DMEM/10％FBS/1％Pen/Strep培养过夜；
3)第二天，以MOI＝10感染DENV-2(16681)4h后，1x PBS洗掉未结合的病毒，加入稀释好的化合物，终浓度为50μM，以100μM利巴韦林作为阳性对照药物；
4)继续培养48h后，收集细胞，提取细胞总的RNA，反转录为cDNA；
5)利用qRT-PCR半定量检测病毒3’-UTR基因的表达；
6)计算病毒的相对复制能力。
3.1.4化合物2a，2d-2g，2j的抗病毒剂量依赖效应检测
由环丁-1-烯胺类化合物抗Ⅱ型登革病毒活性检测结果得出化合物2a，2d-2g，2j的抗病毒效果较好，接着进行化合物2a，2d-2g，2j的抗病毒剂量依赖效应检测，以100μM利巴韦林作为抗Ⅱ型登革病毒阳性对照药，倍比稀释化合物浓度(50μM，10μM，2μM，0μM)，利用qRT-PCR半定量检测病毒3’-UTR基因的表达，进行化合物2a，2d-2g，2j的抗病毒剂量依赖效应检测，实验步骤如下：
1)提前一天，将vero细胞(每孔2x105个)铺于24孔板，加入培养基：DMEM/10％FBS/1％Pen/Strep培养过夜；
2)第二天，以MOI＝10感染DENV-2(16681)4h后，1x PBS洗掉未结合的病毒，加入稀释好的化合物，终浓度为50μM，10μM，2μM，0μM，以利巴韦林作为阳性对照药物；
3)继续培养48h后，收集细胞，提取细胞总的RNA，反转录为cDNA；
4)利用qRT-PCR半定量检测病毒3’-UTR基因的表达；
5)计算病毒的相对复制能力。
3.1.5化合物2a，2d-2g，2j对vero细胞毒性检测
使用MTT比色法检测化合物2a，2d-2g，2j的细胞毒性，实验步骤如下：
1)提前一天，将细胞vero(每孔2.5x104个)接种于96孔细胞培养板，加入培养基：DMEM/10％FBS/1％Pen/Strep；
2)第二天，加入待检测化合物溶液和阳性对照药利巴韦林，化合物终浓度为250μM，50μM，10μM，2μM，0.4μM，利巴韦林终浓度为1000μM，200μM，40μM，8μM，1.6μM，同时设置不含化合物的对照组；
3)细胞培养48h后，弃100μL培养基/孔，加10μL/孔MTT(5mg/mL)，在细胞培养箱内继续孵育4h；
4)加入100μL/孔DMSO，37℃摇床震荡至formazen全部溶解；
5)酶标仪(检测波长595nm，参考波长630nm)读取各孔OD值，计算样品对vero细胞的半数毒性浓度CC50。
3.2环丁-1-烯胺类化合物检测结果
3.2.1化合物抗DENV-2病毒活性初步筛选
初步筛选结果显示化合物2a，2d-2g，2j表现出较好的抑制DENV-2(16681)复制活性：(A)表示初步筛选有抗病毒活性的化合物(图25A)，(B)表示有效化合物的复筛(图25B)。
3.2.2化合物抗病毒剂量依赖性和细胞毒性检测
根据化合物2a，2d-2g，2j和利巴韦林抗病毒剂量依赖效应检测，计算不同浓度的化合物2a，2d-2g，2j和利巴韦林对Ⅱ型登革病毒的抑制率，计算半数有效浓度EC50值(图26)；根据MTT比色法检测不同浓度化合物2a，2d-2g，2j作用下细胞vero的存活率，计算半数毒性浓度CC50(图27)，结果如下表2：
表2化合物2a，2d-2g，2j及利巴韦林抗DENV-2活性(EC50)及细胞毒性(CC50)
化合物 EC<sub>50</sub>(μM) CC<sub>50</sub>(μM) SI
2a 3.93 ＞250 ＞63.61
2d 6.82 11.05 1.62
2e 5.32 ＞250 ＞46.99
2f 5.51 207.92 37.74
2g 3.16 167.02 52.85
2j 4.87 ＞250 ＞51.33
利巴韦林 4.24 ＞250 ＞58.96
表中，*CC50代表抑制半数细胞生长所需要的药物浓度，*EC50代表抑制半数DENV-2病毒所需要的药物浓度，*SI指药物的选择性指数。
3.3总结
利用vero细胞评价本发明所合成的环丁-1-烯胺类化合物2a-2l对Ⅱ型登革病毒的抑制活性。实验结果表明N-Ts取代的环丁-1-烯胺苯环上不含取代基的化合物2a、苯环对位含有吸电子取代基(F、Cl、Br)的化合物2e-2g，以及苯环间位含有取代基F的化合物2j均表现出较好的抗Ⅱ型登革病毒活性及很低的细胞毒性；苯环对位含有取代基Me的化合物2d虽具有较好的抗Ⅱ型登革病毒活性,但细胞毒性较强。另外，图26表明化合物2a，2d-2g，2j呈剂量依赖性地抑制了DENV-2(16681)毒株的复制。本发明在抗Ⅱ型登革病毒药物的制备与研究中有很好的应用前景。

Claims (4)

1.一类环丁-1-烯胺类化合物，其特征在于，结构通式如下：
Figure FDA0003753641510000011
EWG选自C1-3烷基取代的磺酰基或苯基取代的磺酰基；R选自氢，C1-3烷基或卤素，在苯环上单取代或双取代。
2.如权利要求1所述环丁-1-烯胺类化合物，其特征在于，EWG选自C1-3烷基取代的磺酰基；R选自氢，C1-3烷基或卤素，在苯环上单取代。
3.如权利要求2所述环丁-1-烯胺类化合物，其特征在于，选自如下化合物：
Figure FDA0003753641510000012
4.如权利要求1—3其中之一所述的环丁-1-烯胺类化合物在抗病毒药物中的应用，其特征在于，以其为活性成分，将其应用于制备治疗抗Ⅱ型登革病毒药物中。
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