CN114885906A - 抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合与纯化的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合与纯化的方法，步骤为S1、非抗BmNPV的黄茧雌蚕与抗BmNPV的白茧雄蚕杂交得F1；S2、F1饲养制种得F2；S3、F2混合收蚁，四龄起蚕时添食含BmNPV的桑叶，存活个体黄×黄杂交得F3；S4、F3单蛾收蚁，四龄起蚕时添食含BmNPV的桑叶，无发病个体且全为黄茧的每个蛾区自交作为1组制种得F4；S5、F4每组单蛾收蚁，四龄起蚕时添食含BmNPV的桑叶，整组无发病个体且全为黄茧的蛾区自交得F5；S6、F5单蛾收蚁饲养，黄×黄蛾区内自交制种继代，获得的后代重复该步骤至全部为黄茧，本发明能够将抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合和纯化。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及一种抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合与纯化的方法。
背景技术
近年，广西蚕业的发展正从量的扩增向质的提升转变，由传统单一的茧丝绸产业集群向传统的茧丝绸加特色家纺等多元化产业集群发展。为此，国内也先后育成了天然黄色茧蚕品种“彩茧1号”、“粤蚕黄茧1号”等，并开展非印染天然黄色丝、家纺及服装等产品开发；但这些品种抗BmNPV(家蚕血液型脓病)能力弱，而BmNPV是蚕业生产中危害最大的流行病，在高温多湿季节易发生血液型脓病大面积暴发，造成蚕农养蚕减产或失收，高产稳产性较差。近年区内外先后育成了一系列抗BmNPV能力强的优良白茧家蚕品种，区内也育成了一对黄色茧抗BmNPV蚕品种，但是采用的是“中(抗BmNPV、白茧)·中(抗BmNPV、白茧)×日(非抗BmNPV、黄茧)·日(非抗BmNPV、黄茧)”正反杂交方式才能实现抗BmNPV与黄色茧同步，控制天然黄茧的亲本没有抗BmNPV特性。这种方式在应用过程中，常常因良繁过程中白茧抗BmNPV杂交原种人为雌雄蛹分检或雌雄蛾分检不彻底时，生产的天然黄茧中会出现不同程度的白茧混杂，不利于后继加工。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合与纯化的方法，能够快速将抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合和纯化。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供一种抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合与纯化的方法，包括以下具体步骤：
S1、将天然黄茧雌蚕与抗BmNPV白茧雄蚕杂交转育方式制种继代，后代为F1代；
S2、从所述F1代中优选10-20个蛾区混合收蚁饲养，制种继代，获得F2代；
S3、从所述F2代中优选30-50个蛾区混合收蚁饲养，在四龄起蚕时，使用含有BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食饲养，在存活的家蚕结茧后，选取的黄茧雌雄个体杂交继代，获得F3代；
S4、从所述F3代中优选30-50个蛾区单蛾收蚁饲养，在四龄起蚕时，全部蛾区使用含有BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食饲养，选留无BmNPV个体发病的蛾区，结茧后，淘汰出现白茧或杂色茧的蛾区，选留的黄茧的蛾区，在每个入选的蛾区内，采用黄茧雌雄个体蛾区内自交的方式作为独立的一组进行制种继代，获得F4代；
S5、将所述F4代按制种组编号，以组为单位进行分组单蛾收蚁饲养，每个组收蚁30-50单蛾，在四龄起蚕时，全部蛾区使用含有BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食饲养，选留整组没有出现BmNPV发病个体的蛾区，饲养至结茧后，从中选留茧色均匀、深且无白茧及杂色茧的蛾区，采用黄茧雌雄个体蛾区内自交的方式制种继代，获得F5代；
S6、从所述F5代中优选30-50个蛾区单蛾收蚁饲养，结茧后，选留黄茧匀且无白茧及杂色茧的蛾区，黄茧雌雄个体蛾区内自交的方式制种继代，将制种继代获得的后代重复该步骤直至后代全部为黄色茧为止，即获得抗BmNPV天然黄茧家蚕品种。
优选的是，步骤S3-S5中所述BmNPV多角体的溶液的浓度为3×107个/mL。
优选的是，步骤S1中制种20-50蛾区继代。
优选的是，步骤S2中制种50-100蛾区继代。
本发明至少包括以下有益效果：
本发明能够将抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合和纯化，缩短了蚕品种的选育时间，提高了选育效率，为加快抗BmNPV天然黄茧家蚕新品系的创新和亲本全为抗BmNPV天然黄茧家蚕新品种的育成提供技术支撑，解决现行抗BmNPV天然黄茧家蚕品种易出现白茧混杂的问题，助推全国蚕业多元化发展，提高蚕业抗市场风险的能力。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
本申请提供了一种抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合与纯化的方法，包括以下具体步骤：
S1、将天然黄茧雌蚕与抗BmNPV白茧雄蚕杂交转育方式制种继代，后代为F1代，即以天然黄茧蚕品种为母本，抗BmNPV白茧蚕品种为父本，通过“黄茧(非抗BmNPV)×白茧(抗BmNPV)”杂交转育方式制种20-50蛾区继代，获得F1代，目的是使天然黄色蚕品中与抗BmNPV基因有效融合，其中，天然黄茧雌蚕可以是9黄B、7Y7A甲等，抗BmNPV白茧品可以是9MN9、7MH7等。
S2、从所述F1代中优选10-20个蛾区混合收蚁饲养，制种50-100蛾区继代，获得F2代；
S3、从所述F2代中优选30-50个蛾区混合收蚁饲养，在四龄起蚕时，使用含有BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食饲养，存活的家蚕个体结茧后，选取颜色均匀且深的天然黄茧雌雄个体杂交，获得F3代，由于F2代是天然黄茧与白茧基因、抗BmNPV与非抗BmNPV基因等产生分离世代，在四龄起蚕时，全部用浓度为3×107个/mL BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食，无抗BmNPV基因的个体发病致死，淘汰无抗BmNPV基因的个体(约占总数的25％)；只含有抗BmNPV基因的个体成活，其中抗BmNPV纯合个体比例为1/3，成活个体结茧后，优选颜色匀、深的黄茧以“黄×黄”的方式制种继代获得F3代，其中，一个蛾区即为以一只雌蚕所产的蚕卵为一个群体，计量单位为蛾或蛾区。
S4、从所述F3代中优选30-50个蛾区单蛾收蚁饲养，在四龄起蚕时，全部蛾区使用含有BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食饲养，选留无BmNPV发病个体的蛾区，结茧后，淘汰出现白茧或杂色茧的蛾区，选留颜色均匀且深的黄茧的蛾区，在每个入选的蛾区内，采用黄茧雌雄个体蛾区内自交的方式作为独立的一组进行制种继代，获得F4代，在四龄起蚕时，全部蛾区用浓度为3×107个/mL BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食，淘汰有BmNPV发病的蛾区，选留无BmNPV发病个体或发病率低的蛾区，结茧后，淘汰出现白茧或杂色茧的蛾区，选留颜色匀、深的黄茧的蛾区，每个入选蛾区采用“黄×黄”蛾区内自交的方式作为独立的一组进行制种继代，获得F4代；
S5、将所述F4代按制种组编号，以组为单位进行分组单蛾收蚁饲养，每个组收蚁30-50单蛾，在四龄起蚕时，全部蛾区使用含有BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食饲养，选留整组没有出现BmNPV发病个体的蛾区，饲养至结茧后，从中选留茧色均匀、深且无白茧及杂色茧的蛾区，采用黄茧雌雄个体在蛾区内自交的方式制种继代，获得F5代，在四龄起蚕时，全部蛾区用浓度为3×107个/mL BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食，以组为单位进行淘汰筛选，只要组内出现有BmNPV发病的蛾区，说明该组的上一代抗BmNPV为杂合体(没纯合)，整组所有蛾区均淘汰，只有整组内所有蛾区均无BmNPV发病个体的，才能说明该组的上一代为抗BmNPV纯合体(已经纯合)，本代所有蛾区的抗BmNPV控制基因已经纯合的蛾区，为选留的对象；结茧后从中选留茧色深匀且无白茧或杂色茧的蛾区，采用“黄×黄”蛾区内自交的方式制种继代获得F5代；
S6、从所述F5代中优选30-50个蛾区单蛾收蚁饲养，采用黄茧雌雄个体在蛾区内自交的方式制种继代，将制种继代获得的后代重复该步骤直至后代全部为黄色茧为止，即获得抗BmNPV天然黄茧家蚕品种。
传统方法
传统方法1(“二龄取样添食”抗BmNPV+黄色茧同步筛选模式)，包括以下具体步骤：
SA、以常规天然黄色茧品种为母本(天然黄茧)，抗BmNPV白茧家蚕品种(抗BmNPV白茧)为父本，通过“黄茧(非抗BmNPV)×白茧(抗BmNPV)”杂交转育方式制种20-50蛾区继代，获得F1代，目的是使黄茧、抗BmNPV基因有效融合；
SB、从F1代中优选10-20个蛾区混合收蚁饲养，制种50-100蛾区继代，获得F2代；
SC、从F2代中优选30-50个蛾区单蛾收蚁饲养，F2代是天然黄茧与白茧基因、抗BmNPV与非抗BmNPV基因等产生分离世代。在二龄起蚕时，每个蛾区随机抽取约60头蚕分两区重复，用浓度3×107个/mL BmNPV多角体的溶液涂抹处理的桑叶定量添食,调查发病率，淘汰发病率高的对应蛾区，选留发病率低或趋于0％的对应蛾区；结茧后，优选颜色匀、深的黄茧以“黄×黄”(天然黄茧雌雄个体自交)的方式制种继代，获得F3代；
SD、从F3代中优选30个蛾，单蛾收蚁饲养，在二龄起蚕时，每个蛾区随机抽取约60头蚕分两区重复，用浓度3×107个/mL BmNPV多角体的溶液涂抹处理的桑叶定量添食，调查发病率，淘汰发病率高的对应蛾区，选留发病率低或趋于0％的对应蛾区；结茧后，优选颜色匀、深的黄茧以“黄×黄”(天然黄茧雌雄个体自交)的方式制种继代，获得F4代；
SE、从F4代中优选30蛾区，单蛾收蚁饲养，在二龄起蚕时，每个蛾区随机抽取约60头蚕分两区重复，用浓度3×107个/mL BmNPV多角体的溶液涂抹处理的桑叶定量添食，调查发病率，淘汰发病率高的对应蛾区，选留发病率低或趋于0％的对应蛾区；结茧后，优选颜色匀、深的黄茧以“黄×黄”(天然黄茧雌雄个体自交)的方式制种继代，直到抽样添食的发病率连续3－4代全部趋于0，才能说明抗BmNPV基因基本纯合，蛾区的蚕茧连续2－3代均为黄茧，无杂色茧或白茧，说明黄色茧基因已经纯合，即获得了抗BmNPV天然黄茧同步纯合的家蚕新品种。
传统方法2(“四龄添食+二龄起蚕取样添食”抗BmNPV+黄色同步筛选模式)，包括以下具体步骤：
Sa、以常规天然黄色茧品种为母本(天然黄茧)，抗BmNPV白茧家蚕品种(抗BmNPV白茧)为父本，通过“黄茧(非抗BmNPV)×白茧(抗BmNPV)”杂交转育方式制种20-50蛾区继代，获得F1代，目的是使黄茧、抗BmNPV基因有效融合；
Sb、从F1代中优选10-20个蛾区混合收蚁饲养，制种50-100蛾区继代，获得F2代；
Sc、从F2代中优选30-50个蛾区混合收蚁饲养，F2代是天然黄茧与白茧基因、抗BmNPV与非抗BmNPV基因等产生分离世代，在四龄起蚕时，全部用浓度3×107个/mL BmNPV多角体的溶液涂抹处理的桑叶定量添食，无抗BmNPV基因的个体发病致死，淘汰无抗BmNPV基因的个体(约占总数的25％)；只含有抗BmNPV基因的个体成活，其中抗BmNPV纯合个休比例为1/3；成活个体结茧后，优选颜色匀、深的黄茧以“黄×黄”(天然黄茧抗BmNPV雌雄个体杂交)的方式制种继代，获得F3代；
Sd、从F3代中优选30-50个蛾区单蛾收蚁饲养，在二龄起蚕时，每个蛾区随机抽取约60头蚕分两区重复，用浓度3×107个/mL BmNPV多角体的溶液涂抹处理的桑叶定量添食，调查发病率，淘汰发病率高的对应蛾区，选留发病率低或趋于0％的对应蛾区；结茧后，优选颜色匀、深的黄茧以“黄×黄”(天然黄茧雌雄个体自交)的方式制种继代，获得F4代；
Se、从F4代中优选30个蛾区，单蛾收蚁饲养，在二龄起蚕时，每个蛾区随机抽取约60头蚕分两区重复，用浓度3×107个/mL BmNPV多角体的溶液涂抹处理的桑叶定量添食，调查发病率，淘汰发病率高的对应蛾区，选留发病率低或趋于0％的对应蛾区；结茧后，优选颜色匀、深的黄茧以“黄×黄”(天然黄茧雌雄个体自交)的方式制种继代，获得F5代；
Sf、从F5代中优选30个蛾区，单蛾收蚁饲养，在二龄起蚕时，每个蛾区随机抽取约60头蚕分两区重复，用浓度3×107个/mL BmNPV多角体的溶液涂抹处理的桑叶定量添食，调查发病率，淘汰发病率高的对应蛾区，选留发病率低或趋于0％的对应蛾区；结茧后，优选颜色匀、深的黄茧以“黄×黄”(天然黄茧雌雄个体自交)的方式制种继代，添食的发病率连续3－4代全部趋于0，才能说明该组抗BmNPV基因基本纯合；如果蛾区的蚕茧连续2－3代均为黄茧，无杂色茧或白茧，说明黄色茧基因已经纯合，即获得了抗BmNPV天然黄茧同步纯合的家蚕新品种。
具体实例见表1～表2：表1～表2为选育9黄N(9黄B×9MN9)与7YH(7Y7A甲×7MH7)采用本发明方法与传统方法的比较，采用本发明方法抗BmNPV的纯合率达到100％比传统方法3～4个世代(一个世代约45天)，黄茧纯合率达100％本发明方法与传统方法基本一致，本发明方法抗BmNPV与黄茧的纯合率经4世代左右能够同步达到100％。综合来看，采用本发明方法抗BmNPV和天然黄茧纯合率同步达到100％的过程要比传统方法快3～4世代，选育过程缩短了近1年(每年一般只能选育4个世代，每个世代45天)。
表1不同方法选育9黄N(9黄B×9MN9)实例比较
表2不同方法选育7YH(7Y7A甲×7MH7)实例比较
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
Claims (4)
1.抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合与纯化的方法，其特征在于，包括以下具体步骤：
S1、将天然黄茧雌蚕与抗BmNPV白茧雄蚕杂交转育方式制种继代，后代为F1代；
S2、从所述F1代中优选10-20个蛾区混合收蚁饲养，制种继代，获得F2代；
S3、从所述F2代中优选30-50个蛾区混合收蚁饲养，在四龄起蚕时，使用含有BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食饲养，在存活的家蚕结茧后，选留黄茧雌雄个体杂交继代，获得F3代；
S4、从所述F3代中优选30-50个蛾区单蛾收蚁饲养，在四龄起蚕时，全部蛾区使用含有BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食饲养，选留无BmNPV发病个体蛾区，结茧后，淘汰出现白茧或杂色茧的蛾区，选留黄茧的蛾区，在每个入选的蛾区内，采用黄茧雌雄个体蛾区内自交的方式作为独立的一组进行制种继代，获得F4代；
S5、将所述F4代按制种组编号，以组为单位进行分组单蛾收蚁饲养，每个组收蚁30-50单蛾，在四龄起蚕时，全部蛾区使用含有BmNPV多角体的溶液涂抹的桑叶定量添食饲养，选留整组没有出现BmNPV发病个体的蛾区，饲养至结茧后，从中选留茧色均匀、深且无白茧及杂色茧的蛾区，采用黄茧雌雄个体蛾区内自交的方式制种继代，获得F5代；
S6、从所述F5代中优选30-50个蛾区单蛾收蚁饲养，结茧后，选留黄茧匀且无白茧及杂色茧的蛾区，黄茧雌雄个体蛾区内自交的方式制种继代，将制种继代获得的后代重复该步骤直至后代全部为黄色茧为止，即获得抗BmNPV天然黄茧家蚕品种。
2.权利要求1所述的抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合与纯化的方法，其特征在于，步骤S3-S5中所述BmNPV多角体的溶液的浓度为3×107个/mL。
3.权利要求1所述的抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合与纯化的方法，其特征在于，步骤S1中制种20-50蛾区继代。
4.权利要求1所述的抗BmNPV性状与家蚕黄茧性状快速融合与纯化的方法，其特征在于，步骤S2中制种50-100蛾区继代。
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- 2022-04-28 CN CN202210460773.2A patent/CN114885906A/zh active Pending
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