CN114828883A - 减毒禽类呼肠孤病毒株94826 c140和96139 c140 - Google Patents
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Abstract
呈现了家禽中与禽类呼肠孤病毒相关的病毒性关节炎/腱鞘炎的减毒分离株,包括以专利名称PTA‑126077保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株94826C140及其子代或衍生物,以及以专利名称PTA‑126078保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株96139C140及其子代或衍生物。还呈现了用于施用分离株或组合物作为疫苗以控制鸡形目禽中呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的组合物和方法。
Description
继续申请数据
本申请要求于2019年12月2日提交的美国临时申请序列号62/942,426的权益,该美国临时申请通过引用并入本文。
背景技术
禽类呼肠孤病毒与家禽中的若干疾病相关联,这些疾病包括吸收不良综合征和生长障碍与营养吸收不良综合征(RSS),尽管这些禽类呼肠孤病毒在这些临床综合征上作为原发性病原体的作用尚不清楚。相比之下,禽类呼肠孤病毒与病毒性关节炎/腱鞘炎的临床病例的关联是相当清楚的,因为呼肠孤病毒已经从受影响的禽类的腱中分离出来。对呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的控制可以通过用活疫苗和/或灭活疫苗与传递给子代、用于针对场激发的早期保护的母源性免疫组合接种肉种鸡而达到。在肉鸡中,减毒活疫苗对于在孵化当天使用和在卵内使用是可用的。目前的商业疫苗株(仅举几例,S1133、1733、2408、和2177)是在二十世纪六十至七十年代被分离的并且不提供保护对抗来自病毒性关节炎/腱鞘炎的确诊病例的目前流行的呼肠孤病毒分离株。因此,对分离和表征目前流行的禽类呼肠孤病毒以及研制有效的疫苗存在着需求。
发明内容
本发明包括分离的禽类呼肠孤病毒,其中该分离的禽类呼肠孤病毒是以专利名称PTA-126077保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株94826 C140,或其子代或衍生物,其中,其子代或衍生物基本上具有以专利名称PTA-126077保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株94826 C140的生物学和血清学特征。
本发明包括分离的禽类呼肠孤病毒,其中该分离的禽类呼肠孤病毒是以专利名称PTA-126078保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株96139 C140,或其子代或衍生物,其中,其子代或衍生物基本上具有以专利名称PTA-126078保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株96139 C140的生物学和血清学特征。
在一些方面,本发明包括如本文所述的禽类呼肠孤病毒的主种子病毒(MasterSeed virus)制剂。
在一些方面,该分离的禽类呼肠孤病毒是冻干的、冷冻干燥的、冷冻的或泡腾的片剂。
在一些实施例中,本发明包括包含如本文所述的分离的禽类呼肠孤病毒的组合物。在一些方面,组合物包含佐剂。在一些方面,组合物包含药学上可接受的载剂。在一些方面,该组合物被配制成用于鼻内、眼内、口服、粘膜、肌肉内、皮下或卵内施用。在一些方面,该组合物被配制成用于喷雾或雾化。
在一些实施例中,本发明包括一种疫苗,其包含如本文所述的分离的禽类呼肠孤病毒或如本文所述的组合物。在一些方面,该疫苗降低了鸡形目(Galliformes)禽对呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的易感性。在一些方面,呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群1/基因型5诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。在一些方面,呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群2/基因型1诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。
在一些实施例中,本发明包括一种用于鸡形目禽的疫苗,其包含足以保护这些禽免于感染呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的量的以专利名称PTA-126077保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株94826 C140或其子代或衍生物,以及药学上可接受的载剂。在一些方面,呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群1/基因型5诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。
在一些实施例中,本发明包括一种用于鸡形目禽的疫苗,其包含足以保护这些禽免于感染呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的量的以专利名称PTA-126078保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株禽类呼肠孤病毒株96139 C140或其子代或衍生物,以及药学上可接受的载剂。在一些方面,呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群2/基因型1诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。
在一些实施例中,本发明包括包含如本文所述的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗的泡腾片剂。
本发明包括一种用于降低鸡形目禽对呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的易感性的方法,该方法包括向该禽施用如本文所述的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗。
本发明包括一种用于保护鸡形目禽免于感染呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的方法,该方法包括向该禽施用如本文所述的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗。
在本文所述方法的一些方面,呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群1/基因型5诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。在一些方面,呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群2/基因型1诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。在本文所述方法的一些方面,施用是鼻内、眼内、口服、粘膜、肌肉内或皮下施用。在本文所述方法的一些方面,施用包括卵内施用。在本文所述方法的一些方面,该禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗通过气溶胶施用。在本文所述方法的一些方面,该禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗通过饮用水施用。在一些方面,该禽是鸡或火鸡。在本文所述方法的一些方面,施用是施用至种母鸡或公鸡。
本发明包括一种在家禽中产生抗呼肠孤病毒抗体的方法,该方法包括向该禽施用如本文所述的分离的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗。在一些方面,该禽是鸡或火鸡。
本发明包括一种诊断试剂盒,其包含如本文所述的分离的禽类呼肠孤病毒。
本发明包括一种在禽中检测禽类呼肠孤病毒暴露的方法,该方法包括确定从该禽中获得的抗血清样品与如本文所述的禽类呼肠孤病毒特异性结合。在一些方面,该禽是鸡或火鸡。
本发明包括一种超免疫血清,其针对如本文所述的禽类呼肠孤病毒。
本发明包括一种抗体,该抗体与如本文所述的禽类呼肠孤病毒结合,并且不与禽类呼肠孤病毒株S1133、1733、2408、和/或2177结合。在一些方面,该抗体是单克隆抗体。
本发明的以上概述不意在描述本发明的每个所披露的实施例或每一个实施方式。以下描述更加特别地示例了说明性实施例。在整个申请中的若干个地方,通过实例列表提供了指导,这些实例能以各种组合使用。在每种情况下,所述列表仅用作代表组,而不应解释为排他性列表。
具体实施方式
本发明提供了两种减毒禽类呼肠孤病毒株——禽类呼肠孤病毒株94826 C140和禽类呼肠孤病毒株96139 C140及其子代和衍生物。这些减毒呼肠孤病毒株作为活性配制品施用至禽时,在预防禽类呼肠孤病毒感染和降低呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎和/或腱鞘炎的发病率和严重程度方面是安全并且有效的。
在一个方面,本发明包括禽类呼肠孤病毒株94826 C140及其子代和衍生物。禽类呼肠孤病毒株94826 C140是禽类呼肠孤病毒株94826的减毒株,其是通过将禽类呼肠孤病毒株94826在鸡胚中传代一百四十次获得的。禽类呼肠孤病毒株94816是与家禽中的病毒性关节炎和腱鞘炎相关的类群1/基因型5呼肠孤病毒。禽类呼肠孤病毒株94816在国际申请号PCT/US2015/013449(WO 2015/116778)和美国专利申请号15/223,623中有更详细的描述,这些申请通过引用以其全文特此并入。减毒禽类呼肠孤病毒株94826 C140也是类群1/基因型5禽类呼肠孤病毒。减毒禽类呼肠孤病毒株94826 C140在2019年8月13日以专利保藏名称PTA-126077保藏于美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,),美国弗吉尼亚州马纳萨斯大学大道10801号,20110-2209(10801UniversityBoulevard,Manassas,VA 20110-2209,USA)。遵照用于专利程序目的的国际承认的微生物保藏的布达佩斯条约进行此保藏。减毒禽类呼肠孤病毒94826 C140在佐治亚大学(University of Georgia)的家禽诊断和研究中心(Poultry Diagnostic and ResearchCenter,PDRC)的病毒库中也存档为PDRC参考号:121116,该中心位于佐治亚州雅典镇学院站路953号,20602(953 College Station Road Athens Georgia,20602)。实例3更详细地描述了禽类呼肠孤病毒株94826 C140作为活的减毒呼肠孤病毒疫苗的安全性和功效。
在另一方面,本发明包括禽类呼肠孤病毒株96139 C140及其子代和衍生物。禽类呼肠孤病毒株96139 C140是禽类呼肠孤病毒株96139的减毒株,其是通过将禽类呼肠孤病毒株96139在鸡胚中传代一百四十次获得的。禽类呼肠孤病毒株96139是与家禽中的病毒性关节炎和腱鞘炎相关的类群2/基因型1禽类呼肠孤病毒。禽类呼肠孤病毒株96139在国际申请号PCT/US2015/013449(WO 2015/116778)和美国专利申请号15/223,623中有更详细的描述,这些申请通过引用以其全文特此并入。禽类呼肠孤病毒株96139在2019年3月7日以专利保藏名称PTA-125688保藏于减毒禽类呼肠孤病毒96139 C140也是类群2/基因型1禽类呼肠孤病毒。减毒禽类呼肠孤病毒96139 C140在2019年8月13日以专利保藏名称PTA-126078保藏于美国典型培养物保藏中心美国弗吉尼亚州马纳萨斯大学大道10801号,20110-2209。遵照用于专利程序目的的国际承认的微生物保藏的布达佩斯条约进行此保藏。减毒禽类呼肠孤病毒9619 C140在佐治亚大学的家禽诊断和研究中心(PDRC)的病毒库中也存档为PDRC参考号:119812,该中心位于佐治亚州雅典镇学院站路953号,20602。实例3更详细地描述了禽类呼肠孤病毒株96139 C140作为活的减毒呼肠孤病毒疫苗的安全性和功效。
如在国际申请号PCT/US2015/013449(WO 2015/116778)和美国专利申请号15/223,623中更详细的讨论,禽类呼肠孤病毒株94826和96139代表已经从腱鞘炎的临床病例中分离出的两组在遗传学上和血清学上不同的禽类呼肠孤病毒。它们的禽类呼肠孤病毒σC蛋白的遗传分析揭示了新颖的基因型与目前的禽类呼肠孤病毒疫苗株是无关的。
禽类呼肠孤病毒,连同哺乳动物呼肠孤病毒,包括呼肠孤病毒科中的正呼肠孤病毒属(Orthoreovirus)。这些病毒包含10个dsRNA基因组片段,这些基因组片段封闭于约80nm的无包膜、二十面体双衣壳内。这些基因组片段可以基于电泳迁移率被分离成三个大的(L1,L2,L3)、三个中的(M1,M2,M3)以及四个小的(S1,S2,S3,S4)片段,这些片段各自编码蛋白λ1、λ2、λ3、μ1、μ2、μNS、σ3、σ1、σ2、σNS。σ2蛋白是一种携带类群特异性中和表位的外部衣壳蛋白。它还结合双链RNA并且已经被鉴定为一种锌金属蛋白。σC蛋白,即通过σ1片段编码的较小外部衣壳蛋白,是禽类呼肠孤病毒的分子表征的标靶并且对细胞附着以及类型特异性中和抗体的诱导负责。禽类呼肠孤病毒粒子包含衣壳、核心以及核蛋白复合物。该病毒衣壳是不包膜的。该衣壳/核衣壳是二十面体对称等距的并且具有约80-82nm的直径。该病毒粒子的衣壳是由两层构成的。通常所有的壳是存在的,或者外壳经常在制备期间消失。衣壳呈圆形。衣壳表面结构揭示出具有明显特征的规则模式。衣壳粒排列是清楚可见的。不存在表面突起。内衣壳核具有约60nm的直径。病毒制剂包含一种粒子组分。具有约49nm的直径的核心是球形的并且由dsRNA基因组组成。这些纤维的末端几乎突出穿过衣壳表面。
本发明包括从禽类呼肠孤病毒株94826 C140(2019年8月13日以专利保藏名称PTA-126077保藏于)或禽类呼肠孤病毒株96139 C140(2019年8月13日以专利保藏名称PTA-126078保藏于)制备的主种子病毒制剂。可以根据美国联邦法规(Codeof Federal Regulations,CFR)§113.332标题9(腱鞘炎疫苗)制备和测试本发明的主种子病毒制剂。
本发明中还包括具有同等或类似的生物学、血清学、和/或遗传学特征的禽类呼肠孤病毒株94826 C140(2019年8月13日以专利保藏名称PTA-126077保藏于)和禽类呼肠孤病毒株96139 C140(2019年8月13日以专利保藏名称PTA-126078保藏于)的分离子代和分离衍生物。如本文所用,血清学、生物学和遗传学特征可以包括本文所含实例中的数据中描述的一个或多个特征。更特别地,PTA-126077或PTA-1260789495的子代或衍生株可以保留属于本发明的特别有利的保护特性,如本文所含实例中更详细地描述的。
根据本发明的禽类呼肠孤病毒可以通过常规方法繁殖,这些方法包括但不限于本文包括的实例部分中所述的那些方法中的任何方法。简而言之,向能够支持禽类呼肠孤病毒复制的基质接种本发明的禽类呼肠孤病毒并进行繁殖直至该病毒复制至希望的感染效价或抗原量容量。然后收获包含原料的呼肠孤病毒。适合的基质可以包括含胚卵、原发性(禽类)细胞培养物(例如像,鸡胚肝细胞、鸡胚成纤维细胞、或鸡肾细胞),哺乳动物细胞系(例如像,VERO细胞系或BGM-70细胞系),或禽类细胞系(例如像,QT-35、QM-7或LMH)。
本发明包括组合物和疫苗,这些组合物和疫苗包含本文所述的分离的病毒中的一种或多种。可以根据美国联邦法规(CFR)§113.332标题9(腱鞘炎疫苗)制备和测试本发明的疫苗制剂。
在一些实施例中,该病毒是活的。在一些实施例中,该病毒是灭活的或杀死的。在一些实施例中,病毒或其组合物或疫苗可以是冻干的。在一些实施例中,病毒或其组合物或疫苗可以是冷冻的。在一些实施例中,病毒或其组合物或疫苗可以是冷冻干燥的。
在一些实施例中,病毒或其组合物或疫苗可以被配制为泡腾片剂。例如,此类泡腾片剂可以包装在轻质铝泡罩中。片剂可溶解在水中,并且例如通过口服、鼻内或通过气溶胶喷雾进行施用,从而使液滴经由禽的粘膜进入。
此类组合物和疫苗可以作为活性组分施用以使禽免疫从而引起对类群1和/或类群2禽类呼肠孤病毒的免疫应答和/或从而诱导对抗此类禽类呼肠孤病毒的免疫。免疫可以包括疫苗接种后与未接种疫苗的类群相比,在禽种群中诱导较高水平的保护。该免疫应答可以赋予或不赋予保护性免疫。免疫应答可以例如包括细胞介导的免疫应答和/或体液免疫应答中的一种或多种,细胞介导的免疫应答涉及淋巴细胞响应于抗原暴露的产生,体液免疫应答涉及血浆淋巴细胞(B细胞)响应于抗原暴露的产生,随后是抗体产生。免疫作用可以促使减轻、抑制或预防禽类呼肠孤病毒相关的病毒性关节炎(VA)/腱鞘炎的症状中的一种或多种。此类症状可以包括体重抑制、产蛋下降、死亡率、肉眼可见的损伤(包括但不限于腱肿胀、腱鞘炎、腱破裂、以及心包积液)、以及组织学变化(包括但不限于淋巴细胞性腱鞘炎、淋巴细胞性心外膜炎、和淋巴细胞性心肌炎)中的一种或多种。
本发明的组合物或疫苗还可以包含一种或多种具有佐剂活性的化合物。出于此目的的适合的化合物或组合物包括氢氧化铝、磷酸铝、氧化铝、植物油、动物油、基于例如矿物油(如Bayol FTM或Marcol 52TM、完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂)、或植物油(vegetableoil)(如维生素E醋酸酯)的水包油或油包水乳液、以及皂甙类。
本发明的组合物或疫苗可以包含一种或多种适合的药学上可接受的载剂或稀释剂。本发明的免疫原性组合物或疫苗还可以含有一种或多种稳定剂。可以使用任何适合的稳定剂,包括碳水化合物如山梨糖醇、甘露醇、淀粉、蔗糖、糊精、或葡萄糖;蛋白如白蛋白或酪蛋白;以及缓冲剂如碱金属磷酸盐等。当通过冻干法制备干疫苗制剂时,稳定剂是特别有利的。
本发明的组合物或疫苗可以进一步包含一种或多种源自其他感染家禽的病原体的免疫原。此类免疫原可以源自,例如,马立克氏病病毒(Marek's disease virus)(MDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus)(NDV)、产蛋下降综合征(EDS)病毒、火鸡鼻气管炎病毒(TRTV)、痘病毒、呼肠孤病毒、鸡细小病毒、以及禽类肾炎病毒(包括但不限于ANV-1和ANV-2)。
可以通过接种家禽的任何适合的已知的方法施用本发明的组合物或疫苗,包括经鼻、经眼、通过注射、在饮用水中、在饲料中、通过暴露、在卵内、经母体、通过呼吸吸入、等等。可以通过许多施用技术施用该免疫原性组合物或疫苗,如通过放置该疫苗在饮用水中或通过喷雾或雾化。当通过注射施用时,免疫原性组合物或疫苗可以肠胃外施用。肠胃外施用包括例如通过静脉内、皮下、肌肉内、或腹膜内注射施用。
在一些实施例中,活疫苗能以每只禽不少于102滴定单位(其中滴定单位是在美国联邦法规(Code of Federal Regulations),部分113.332,标题9中定义的)的剂量施用,并且疫苗可以含有每只禽104-1010TCID50的抗原当量(其中TCID是组织培养感染剂量的缩写)。
在一些实施例中,能以约101.5至约107TCID或EID(胚感染剂量)的剂量施用活疫苗。
在一些方面,疫苗可以含有约101.5TCID50/禽、约102TCID50/禽、约103TCID50/禽、约104TCID50/禽、约105TCID50/禽、约106TCID50/禽、约107TCID50/禽、约108TCID50/禽、约109TCID50/禽、约1010TCID50/禽或其任何范围的抗原当量。
本发明的组合物和疫苗可以是基本上纯的。如本文所用,“基本上纯的”将意味着材料基本上不含通常会与它在自然界中发现的类似的任何大分子或其它生物实体。
本发明的组合物和疫苗可以对许多禽类物种中的任何一种中的禽施用,包括但不限于家禽、鸡形目禽以及外来禽物种,这些禽类物种易感染禽类呼肠孤病毒。鸡形目禽包括但不限于鸡、火鸡、松鸡、鹌鹑以及野鸡。如本文所用,家禽包括出于收集它们的蛋的目的而饲养或为了它们的肉和/或羽毛的目的而杀死的驯化的禽。这些最典型的是鸡雁小纲(Galloanserae)总目(家禽),尤其是鸡形目(包括例如,鸡、鹌鹑、火鸡以及松鸡)和鸭(Anatidae)科(在雁形目(Anseriformes)中),通常称作“水禽”(包括例如,鸭、鹅、以及天鹅)的成员。家禽还可以包括其他禽,这些禽因它们的肉被杀死,如鸽或白鸽或被认为是猎物的禽如野鸡。鸡包括但不限于,母鸡、公鸡、肉仔鸡、肉禽、蛋鸡(layer)、种鸡、种母鸡的后代、以及蛋鸡(layer)。如本文所用,术语“易感”意指当与非易感的个体或类群相比时,对于对照的微生物的有害应答的可能性或现实性,和/或禽类呼肠孤病毒感染指示的一个或多个病理状态。
可以在孵化之前或之后向家禽施用本发明的疫苗。家禽可以在多个年龄时接受疫苗。例如,肉仔鸡可以在卵内、在一日龄、或在2-3周龄时疫苗接种。产蛋家畜或繁育家畜可以例如在约6至12周龄时疫苗接种并且在约16至20周龄时加强。此类产蛋家畜或繁育家畜可以在约6、在约7、在约8、在约9、在约10、在约11、或在约12周龄时疫苗接种。而且,在一些实施例中,此类产蛋家畜或繁育家畜可以在约前两周龄内疫苗接种。此类产蛋家畜或繁育家畜可以在约16、在约17、在约18、在约19、或在约20周龄时加强。此类产蛋家畜或繁育家畜的后代可以展示对如本文所述的多肽的抗体效价,这将预防或缓解该后代中的禽类呼肠孤病毒感染症状。卵内疫苗接种可以例如,在约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天、约20天、或在其任何范围时发生。
可以在任何适合的年龄并且通常在第一次疫苗接种前的约一至三日龄对鸡进行疫苗接种。这些鸡可以仅疫苗接种一次。或者,如果使用两个剂量疫苗,例如当这些鸡是3日龄至一周龄时给予第一剂量并且在另外的1-10周后随后给予第二剂量。
可以贯穿鸡的一生施用该组合物的多剂量。由于母源性免疫是给肉仔鸡子代提供保护的原始来源,所以种鸡典型地被疫苗接种,虽然如果需要的话肉鸡也可以疫苗接种。
本发明包括一种在家禽中产生抗变体类群1和/或变体类群2禽类呼肠孤病毒免疫应答的方法,该方法包括施用如本文所述的分离的病毒、组合物或疫苗。在一些方面,免疫包含体液免疫和/或细胞免疫。在一些方面,免疫包含粘膜免疫。
本发明包括一种在家禽中预防禽类呼肠孤病毒感染的方法,该方法包括施用如本文所述的分离的病毒、组合物或疫苗。
在本发明的方法的一些方面,施用包括注射、喷雾、口服施用、或呼吸施用。在本发明的方法的一些方面,施用诱导粘膜免疫。在本发明的方法的一些方面,施用包括卵内施用。在一些方面,卵内施用包括在约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天、约20天、或其任何范围时施用。
本发明包括一种在禽中检测变体类群1和/或变体类群2禽类呼肠孤病毒暴露的方法,该方法包括确定从该禽获得的抗血清样品是否特异性结合本发明的病毒。例如,本发明包括本发明的一种或多种禽类呼肠孤病毒在检测禽中禽类呼肠孤病毒暴露的方法中的用途,该方法包括确定从该禽获得的抗血清样品与本发明的禽类呼肠孤病毒特异性结合。
本发明还包括试剂盒,这些试剂盒包含本发明的禽类呼肠孤病毒中的一种或多种。试剂盒可以包含装有本发明的禽类呼肠孤病毒的一个或多个容器。在一些方面,病毒可以是例如是冻干的、冷冻干燥的、冷冻的或被配制为泡腾片剂。试剂盒可以包含其他禽类呼肠孤病毒株或其他家禽病原体的另外的独立容器。此类试剂盒可以包括另外的组分,例如像,阳性对照病毒、阴性对照病毒、第二抗体、和/或可检测标志物。另外,试剂盒可以包含其他试剂,例如缓冲剂,并且实践本发明所需要的溶液也包含在内。任选地与这样一种或多种容器相关联的可以是商品描述或印刷的说明书。本发明的试剂盒可以包括“包装材料”。如本文所用,术语“包装材料”是指用于储藏该试剂盒内容物的一种或多种物理结构。包装材料通过众所周知的方法构建,优选地提供无菌的、无污染物的环境。包装材料可以是固体基质或材料,例如玻璃、塑料、纸、箔等。
本发明提供了检测和/或测量从禽中获得的样品中的类群1或类群2禽类呼肠孤病毒的量的方法。此类方法可以包括将样品与抗体接触,该抗体与如本文所述的如本文所述的禽类呼肠孤病毒选择性结合;以及测量抗体与样品中的病毒或蛋白结合的量。样品可以是任何生物材料,如组织、骨骼、血液、尿液或粪便。本发明的这一方面的方法例如可用于确定家禽是否被本发明的禽类呼肠孤病毒感染。然后,为了阻止该呼肠孤病毒扩散至其他动物,可以隔离或杀死鉴定为此的感染的动物。
如本文所用,“分离的”是指从其原始环境(例如,如果它是天然存在的,那么是自然环境)移除的材料并且因此“通过人工”从其自然状态改变。
术语“和/或”意指所列举的要素的一个或所有或所列举的要素的任两个或更多个的组合。
词语“优选的”和“优选地”是指本发明的在某些情况下可以提供某些益处的实施例。然而,在相同或其他情况下,其他实施例也可以是优选的。此外,叙述一个或多个优选实施例不意味着其他实施例是没用的,并且不旨在将其他实施例排除在本发明的范围之外。
术语“包含”及其变型在这些术语出现在说明书和权利要求书中时不具有限制意义。
除非另外说明,否则“一个/种(a/an)”、“该”和“至少一个”可互换使用,并且意指一个或多于一个。
同样在本文中,通过端点叙述的数值范围包括该范围内所包含的所有数值(例如1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。
对于本文披露的包括不连续的步骤的任何方法,这些步骤可以按任何可行顺序实施。并且,如果适宜,两个或更多个步骤的任何组合可以同时实施。
除非另外指示,否则本说明书和权利要求书中使用的表示组分的量、分子量等等的所有数值应被理解为在所有情况下由术语“约”修饰。因此,除非另外指示相反含义,否则在说明书和权利要求书中阐述的数值参数是近似值,可以根据本发明所寻求获得的所需特性而变化。至少,并不是试图将等同原则限制在权利要求书的范围内,每个数值参数至少应该根据报告的有效数位的数量并通过应用普通的舍入技术来解释。
虽然阐述本发明的广泛范围的数值范围和参数是近似值,但是在具体实例中阐述的数值是尽可能精确地报告。然而,所有数值固有地含有一个范围,该范围必然是其各自的测试测量中存在的标准偏差所产生的。
在整个申请中的若干个地方,通过实例列表提供了指导,这些实例能以各种组合使用。在每种情况下,所述列表仅用作代表组,而不应解释为排他性列表。应该理解的是,特定实例、材料、量和程序应根据如本文所阐述的本发明的范围和精神来宽泛地解释。
所有标题旨在方便读者并且不应当用来限制该标题后续文本的意思,除非如此说明。
在权利要求书中限定了本发明。然而,以下提供了非限制性实施例的非穷尽性列表。这些实施例的任何一个或多个特征可以与本文所述的另一实例、实施例或方面的任何一个或多个特征相结合。
1.一种分离的禽类呼肠孤病毒,其中该分离的禽类呼肠孤病毒是以专利名称PTA-126077保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株94826 C140,或其子代或衍生物,其中,其子代或衍生物基本上具有以专利名称PTA-126077保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株94826 C140的生物学和血清学特征。
2.一种分离的禽类呼肠孤病毒,其中该分离的禽类呼肠孤病毒是以专利名称PTA-126078保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株96139 C140,或其子代或衍生物,其中,其子代或衍生物基本上具有以专利名称PTA-126078保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株96139 C140的生物学和血清学特征。
3.如实施例1或2所述的分离的禽类呼肠孤病毒,其中该分离的禽类呼肠孤病毒包含主种子病毒。
4.如实施例1至3中任一项所述的分离的禽类呼肠孤病毒,其中该分离的禽类呼肠孤病毒是冻干的、冷冻干燥的、冷冻的或泡腾的片剂。
5.一种组合物,其包含如实施例1至4中任一项所述的分离的禽类呼肠孤病毒。
6.如实施例5所述的组合物,其包含佐剂。
7.如实施例5或6所述的组合物,其包含药学上可接受的载剂。
8.如实施例5至7中任一项所述的组合物,其中该组合物被配制成用于鼻内、眼内、口服、粘膜、肌肉内、皮下或卵内施用。
9.如实施例5至8中任一项所述的组合物,其中该组合物被配制成用于喷雾或雾化。
10.一种疫苗,其包含如实施例1至4中任一项所述的分离的禽类呼肠孤病毒或如实施例5至9中任一项所述的组合物。
11.如实施例10所述的疫苗,其中该疫苗降低了鸡形目禽对呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的易感性。
12.一种用于鸡形目禽的疫苗,其包含足以保护这些禽免于感染呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的量的以专利名称PTA-126077保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株94826 C140或其子代或衍生物,以及药学上可接受的载剂。
13.如实施例11或12所述的疫苗,其中该呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群1/基因型5诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。
14.一种用于鸡形目禽的疫苗,其包含足以保护这些禽免于感染呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的量的以专利名称PTA-126078保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株禽类呼肠孤病毒株96139 C140或其子代或衍生物,以及药学上可接受的载剂。
15.如实施例13或14所述的疫苗,其中该呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群2/基因型1诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。
16.一种泡腾片剂,其包含如实施例1至15中任一项所述的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗。
17.一种用于降低鸡形目禽对呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的易感性的方法,该方法包括向该禽施用如实施例1至16中任一项所述的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗。
18.一种用于保护鸡形目禽免于感染呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的方法,该方法包括向该禽施用如实施例1至16中任一项所述的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗。
19.如实施例17或18所述的方法,其中该呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群1/基因型5诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。
20.如实施例17或18所述的方法,其中该呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群2/基因型1诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。
21.如实施例17至20中任一项所述的方法,其中施用是鼻内、眼内、口服、粘膜、肌肉内或皮下施用。
22.如实施例17至20中任一项所述的方法,其中施用包括卵内施用。
23.如实施例17至20中任一项所述的方法,其中该禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗通过气溶胶施用。
24.如实施例17至20中任一项所述的方法,其中该禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗通过饮用水施用。
25.如实施例17至24中任一项所述的方法,其中施用包括施用至种母鸡或公鸡。
26.一种在家禽中产生抗呼肠孤病毒抗体的方法,该方法包括向该禽施用如实施例1至16中任一项所述的分离的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗。
27.如实施例17至26中任一项所述的方法,其中该禽是鸡或火鸡。
28.一种诊断试剂盒,其包含如实施例1至4中任一项所述的分离的禽类呼肠孤病毒。
29.一种在禽中检测禽类呼肠孤病毒暴露的方法,该方法包括确定从该禽中获得的抗血清样品与如实施例1至3中任一项所述的禽类呼肠孤病毒特异性结合。
30.一种超免疫血清,其针对如实施例1至3中任一项所述的禽类呼肠孤病毒。
31.一种抗体,其与如实施例1至3中任一项所述的禽类呼肠孤病毒结合并且不与禽类呼肠孤病毒株S1133、1733、2408、和/或2177结合。
32.如实施例31所述的抗体,其中该抗体是单克隆抗体。
本发明通过以下实例来说明。应该理解的是,特定实例、材料、量和程序应根据如本文所阐述的本发明的范围和精神来宽泛地解释。
实例
实例1
94826 C140-变体类群1/基因型5禽类呼肠孤病毒
通过将94826禽类呼肠孤病毒在鸡胚中传代140次,获得了减毒禽类呼肠孤病毒94826 C140。减毒禽类呼肠孤病毒94826 C140在2019年8月13日以专利保藏名称PTA-126077保藏于减毒禽类呼肠孤病毒94826 C140在佐治亚大学的家禽诊断和研究中心(PDRC)的病毒库中也存档为PDRC参考号:121116,该中心位于佐治亚州雅典镇学院站路953号,20602。实例3更详细地描述了94826 C140作为活的减毒呼肠孤病毒疫苗的安全性和功效。
亲本94826禽类呼肠孤病毒是类群1/基因型5禽类呼肠孤病毒,并且在国际申请号PCT/US2015/013449(WO 2015/116778)和美国专利申请号15/223,623中有更详细的描述,这些申请通过引用并入本文。
实例2
96139 C140-变体类群2/基因型1禽类呼肠孤病毒
通过将96139禽类呼肠孤病毒在鸡胚中传代140次,获得了减毒禽类呼肠孤病毒96139 C140。减毒禽类呼肠孤病毒96139 C140在2019年8月13日以专利保藏名称PTA-126078保藏于减毒禽类呼肠孤病毒9619C140在佐治亚大学的家禽诊断和研究中心(PDRC)的病毒库中也存档为PDRC参考号:119812,该中心位于佐治亚州雅典镇学院站路953号,20602。实例3更详细地描述了96139 C140作为活的减毒呼肠孤病毒疫苗的安全性和功效。
亲本96139禽类呼肠孤病毒是类群2/基因型1禽类呼肠孤病毒,在国际申请号PCT/US2015/013449(WO 2015/116778)和美国专利申请号15/223,623中有更详细的描述,这两者都通过引用并入本文,并且在2019年3月7日以PTA-125688专利保藏名称保藏在
实例3
减毒活呼肠孤病毒疫苗候选株94826 C140和96139 C140分离株
94826 C140禽类呼肠孤病毒是变体类群1/基因型5禽类呼肠孤病毒,如实例1所述。
96139 C140禽类呼肠孤病毒是变体类群2/基因型1禽类呼肠孤病毒,如实例2所述。96139 C140
胚传代
两种病毒分离株均经由尿囊绒膜(CAM)接种途径在无特定病原体(SPF)胚中连续传代。具体而言,将来自原始分离株的CAM在无菌最小必需培养基(MEM)中1:100稀释,并且将0.1ml接种到9-11天龄SPF胚的CAM中。在接种后48小时,将胚在4℃下冷藏4小时,并且从胚收集CAM,混合,使用Omni珠破裂器在病毒运输介质(VTM)中均质化,在1500x g下澄清,并且在-80℃下储存,直到下一次胚传代。
C140原种效价
下表1显示了94826 C140和96139 C140的原种效价。
表1.C140原种效价表示为胚感染剂量50/ml。
病毒 | 效价(EID50/ml) |
94826 C140 | 10<sup>7.6</sup> |
96139 C140 | 10<sup>8.2</sup> |
身份测试
每10-20次胚传代进行身份测试。简而言之,为呼肠孤病毒σCRT-PCR提交CAM传代的等分试样,测序并将核苷酸和氨基酸序列与原始传代和先前传代进行比较,以确认其身份。
纯度测试
根据美国联邦法规9(9CFR)第113.332节(9 CFR§113.332)中规定的指南,以及通过培养和RT-PCR/PCR方法,对C140原种进行纯度测试。
细菌、真菌和霉菌培养表明,94826 C140和96139 C140原种的细菌、真菌和霉菌培养均呈阴性。
PCR表明94826 C140和96139 C140原种的鸡毒支原体(Mycoplasmagallisepticum,MG)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)均为阴性。
外源病毒的PCR/RT-PCR表明,94826 C140和96139 C140原种的外源禽类病毒均为阴性。
根据9 CFR§113.332(b)(2)(3)中规定的指南,对原种病毒进行淋巴样白血病污染测试的结果如下表2所示,并且表明94826 C140和96139 C140原种均无白血病污染。
表2.淋巴样白血病污染测试的结果
A 3周龄SPF禽
B DF-1细胞中的病毒分离和LLAG ELISA;一式两份进行测试
C在胸肌中肌肉内注射
安全性测试
根据美国联邦法规9(9CFR)第113.332节中概述的指南,对两种分离株的CAM传代140(C140)进行了安全性测试。
实验概述
·禽来源
·来自安伟捷公司(Aviagen)的亲本家畜(肉仔鸡型禽)
·用商业活的和灭活的S1133疫苗接种的种鸡
·呼肠孤病毒94826和96139抗体阴性的肉仔鸡
·根据9 CFR进行安全性测试
·根据9 CFR评估参数
·94826 C140(VG1/GT5)104EID50/0.2ml[29只雏鸡]
·94826 C140(VG1/GT5)105EID50/0.2ml[30只雏鸡]
·96139 C140(VG2/GT1)104EID50/0.2ml[30只雏鸡]
·96139 C140(VG2/GT1)105EID50/0.2ml[30只雏鸡]
·每天监测持续21天
·跛行、腱/跗关节肿胀的评估
·死亡率
抗94826和96139抗体阴性的1日龄商品肉仔鸡的10X评估的结果如下表3所示。结果显示,在疫苗接种后21天的评估期内,皮下注射104EID50或105EID50剂量的94826或96139的肉仔鸡中,未观察到任何临床体征或肉眼可见的损伤。这些剂量的疫苗被认为对1日龄的肉仔鸡而言是安全的。
表3. 1日龄肉仔鸡中10X安全性研究的结果
抗94826和96139抗体阴性的28日龄商品肉仔鸡的10X评估的结果如下表4所示。结果显示,在疫苗接种后21天的评估期内,皮下注射104EID50或105EID50剂量的94826或96139的肉仔鸡中,未观察到任何临床体征或肉眼可见的损伤。这些剂量的疫苗被认为对28日龄的肉仔鸡而言是安全的。
表4.28日龄肉仔鸡中10X安全性研究的结果
功效测试
根据9 CFR 113.332(4)(c)(1,2,3)对C140原种进行功效评估
抗94826和96139呼肠孤病毒抗体阴性的1日龄肉仔鸡的功效测试
·接种疫苗/皮下注射
·94826 C140(VG1/GT5)102.5EID50/0.2ml[31只雏鸡]
·94826 C140(VG1/GT5)103EID50/0.2ml[31只雏鸡]
·96139 C140(VG2/GT1)102.5EID50/0.2ml[30只雏鸡]
·96139 C140(VG2/GT1)103EID50/0.2ml[30只雏鸡]
·未接种疫苗的对照
·20只雏鸡在1日龄时被放置在隔离单元中,作为未接种疫苗的/激发的对照
·21日龄(接种疫苗的/subQ和未接种疫苗的)
·所有组经由足垫注射104EID50/0.05ml 94826 Li7或96139 Li5(亲本病毒)进行激发
·每日观察持续14天
·死亡率
·抑郁
·跛行/跛
·肿胀的足垫和/或腱
来自1日龄肉仔鸡的功效测试的结果如下表5所示。结果显示,每剂量接种102.5或103EID50的1日龄雏鸡在受到同源亲本病毒激发后受到保护。
表5.来自1日龄肉仔鸡的功效测试的结果
A日龄
B胚感染剂量
C激发后天数
D无临床体征
未接种疫苗的/亲本病毒激发的肉仔鸡的结果如下表6所示。结果表明,基于未接种疫苗的/激发的肉仔鸡的临床体征,功效测试是有效的。
表6.未接种疫苗的/亲本病毒激发的肉仔鸡的结果
来自1日龄功效研究的C140原种-胚中滴定的稀释C140原种(102.5和103EID50/剂量)的等分试样(5个重复)的反向滴定的结果如下表7所示。
表7. 1日龄功效研究中使用的C140呼肠孤病毒的滴定。
GMT=几何平均效价
1日龄肉仔鸡功效测试总结
以102.5和103剂量使用94826 C140或96139 C140进行日龄疫苗接种,防止使用亲本病毒进行足垫激发后出现临床体征。
未接种疫苗的/激发的对照均在9CFR 113.332(4)(c)(3)中概述的两种亲本病毒的可接受限值范围内。
根据9CFR指南,1日龄肉仔鸡的测试是可接受的。
本文引用的所有专利、专利申请、以及出版物和电子可得材料(包括,例如,提交到例如GenBank和RefSeq中的核苷酸序列,以及提交到例如SwissProt数据库、PIR、PRF、PDB中的氨基酸序列,以及来自GenBank和RefSeq中的注释编码区的翻译)的完整披露内容通过引用并入。在本申请的披露内容和通过引用并入本文的任何文件的披露内容之间存在任何不一致性的情况下,本申请的披露内容应当占据主导。仅出于清楚理解起见给出以上详细说明和实例。不应将其理解成不必要的限制。本发明不限于所示和所述的精确细节,因为将在权利要求定义的本发明内包含对于本领域技术人员而言显而易见的变体。
Claims (32)
1.一种分离的禽类呼肠孤病毒,其中该分离的禽类呼肠孤病毒是以专利名称PTA-126077保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株94826C140,或其子代或衍生物,其中,其子代或衍生物基本上具有以专利名称PTA-126077保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株94826C140的生物学和血清学特征。
2.一种分离的禽类呼肠孤病毒,其中该分离的禽类呼肠孤病毒是以专利名称PTA-126078保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株96139C140,或其子代或衍生物,其中,其子代或衍生物基本上具有以专利名称PTA-126078保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株96139C140的生物学和血清学特征。
3.如权利要求1或2所述的分离的禽类呼肠孤病毒,其中该分离的禽类呼肠孤病毒包含主种子病毒。
4.如权利要求1至3中任一项所述的分离的禽类呼肠孤病毒,其中该分离的禽类呼肠孤病毒是冻干的、冷冻干燥的、冷冻的或泡腾的片剂。
5.一种组合物,其包含如权利要求1至4中任一项所述的分离的禽类呼肠孤病毒。
6.如权利要求5所述的组合物,其包含佐剂。
7.如权利要求5或6所述的组合物,其包含药学上可接受的载剂。
8.如权利要求5至7中任一项所述的组合物,其中该组合物被配制成用于鼻内、眼内、口服、粘膜、肌肉内、皮下或卵内施用。
9.如权利要求5至8中任一项所述的组合物,其中该组合物被配制成用于喷雾或雾化。
10.一种疫苗,其包含如权利要求1至4中任一项所述的分离的禽类呼肠孤病毒或如权利要求5至9中任一项所述的组合物。
11.如权利要求10所述的疫苗,其中该疫苗降低了鸡形目禽对呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的易感性。
12.一种用于鸡形目禽的疫苗,其包含足以保护这些禽免于感染呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的量的以专利名称PTA-126077保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株94826C140或其子代或衍生物,以及药学上可接受的载剂。
13.如权利要求11或12所述的疫苗,其中该呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群1/基因型5诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。
14.一种用于鸡形目禽的疫苗,其包含足以保护这些禽免于感染呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的量的以专利名称PTA-126078保藏在ATCC的禽类呼肠孤病毒株禽类呼肠孤病毒株96139C140或其子代或衍生物,以及药学上可接受的载剂。
15.如权利要求13或14所述的疫苗,其中该呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群2/基因型1诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。
16.一种泡腾片剂,其包含如权利要求1至15中任一项所述的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗。
17.一种用于降低鸡形目禽对呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的易感性的方法,该方法包括向该禽施用如权利要求1至16中任一项所述的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗。
18.一种用于保护鸡形目禽免于感染呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎的方法,该方法包括向该禽施用如权利要求1至16中任一项所述的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗。
19.如权利要求17或18所述的方法,其中该呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群1/基因型5诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。
20.如权利要求17或18所述的方法,其中该呼肠孤病毒诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎是变体类群2/基因型1诱发的病毒性关节炎/腱鞘炎。
21.如权利要求17至20中任一项所述的方法,其中施用是鼻内、眼内、口服、粘膜、肌肉内或皮下施用。
22.如权利要求17至20中任一项所述的方法,其中施用包括卵内施用。
23.如权利要求17至20中任一项所述的方法,其中该禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗通过气溶胶施用。
24.如权利要求17至20中任一项所述的方法,其中该禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗通过饮用水施用。
25.如权利要求17至24中任一项所述的方法,其中施用包括施用至种母鸡或公鸡。
26.一种在家禽中产生抗呼肠孤病毒抗体的方法,该方法包括向该禽施用如权利要求1至16中任一项所述的分离的禽类呼肠孤病毒、组合物或疫苗。
27.如权利要求17至26中任一项所述的方法,其中该禽是鸡或火鸡。
28.一种诊断试剂盒,其包含如权利要求1至4中任一项所述的分离的禽类呼肠孤病毒。
29.一种在禽中检测禽类呼肠孤病毒暴露的方法,该方法包括确定从该禽中获得的抗血清样品与如权利要求1至3中任一项所述的禽类呼肠孤病毒特异性结合。
30.一种超免疫血清,其针对如权利要求1至3中任一项所述的禽类呼肠孤病毒。
31.一种抗体,其与如权利要求1至3中任一项所述的禽类呼肠孤病毒结合并且不与禽类呼肠孤病毒株S1133、1733、2408、和/或2177结合。
32.如权利要求31所述的抗体,其中该抗体是单克隆抗体。
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