CN114796265A - S-nanoFe用于制备抗败血症及其诱发的心肌损伤药物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了S‑nanoFe用于制备治疗和/或预防败血症及其诱发的心肌损伤药物的应用。本发明研究发现：S‑nanoFe可增加败血症损伤后的小鼠生存率，改善败血症评分和肛温，升高白细胞、淋巴细胞、中间细胞、中性粒细胞和血小板的数量，降低红细胞的数量，以及降低乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、尿素氮的水平和升高白蛋白的水平；同时发现S‑nanoFe具有改善心脏功能以及维持心肌组织正常形态的作用；还发现S‑nanoFe具有减轻心肌组织纤维化的作用，以及抑制败血症诱发的心肌损伤炎症相关分子的升高，从而发挥抗败血症及其引发的心肌损伤的作用。

Description

S-nanoFe用于制备抗败血症及其诱发的心肌损伤药物的应用

技术领域

本发明涉及S-nanoFe的新适应症，具体涉及S-nanoFe用于抗败血症及其诱发的心肌损伤药物的应用。

背景技术

S-nanoFe(硫代铁纳米簇)是文献1：“Hydroxyl Radical-Involving p-Nitrophenol Oxidation during ItsReduction by Nanoscale Sulfidated ZerovalentIron under AnaerobicConditions”中公开的一种新型材料，并根据文献中报导的方法制备，但目前尚未对其药理作用做进一步研究。

发明内容

发明人通过构建败血症及其诱发的心肌损伤动物模型，观察小鼠生存率、败血症评分、肛温、血常规、血生化、心脏超声、心肌组织形态、纤维化、炎症等各项指标发现：

新制备或保存一定时间后的S-nanoFe可增加败血症损伤后的生存率、改善败血症评分和肛温，升高白细胞(White Blood Cell，WBC)、淋巴细胞 (Lymphocyte，LYM)、中间细胞(Intermediate cell，MID)、中性粒细胞 (Granulocyte，GRA)和血小板(Platelet，PLT)数量，降低红细胞(RedBlood Cell，RBC)数量，以及降低乳酸脱氢酶(LactateDehydrogenase，LDH)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase，AST)、尿素氮(BloodUrea Nitrogen， BUN)的水平和升高白蛋白(Albumin，ALB)的水平；

新制备或保存一定时间后的S-nanoFe可增加败血症损伤后的每搏输出量(StrokeVolume，SV)、心输出量(Cardiac Output，CO)、左心室收缩末期容积(Left VentricularEnd Systolic Volume，LVESV)、左心室舒张末期容积(Left Ventricular End DiastolicVolume，LVEDV)；以及降低败血症损伤后的左心室收缩末期后壁厚度(Left VentricularEnd Systolic Posterior Wall， LVPWs)、左心室舒张末期后壁厚度(Left VentricularEnd Diastolic Posterior Wall，LVPWd)，从而达到改善心脏功能的作用；同时，S-nanoFe可改善由败血症引起的心肌组织形态紊乱，减轻纤维化，从而发挥减轻心肌损伤的作用。

S-nanoFe可抑制败血症诱发的心肌组织损伤后Ly6c、TNF-α、NLRP3、 IL-1β、IL-6等分子的高表达，发挥抗炎作用。

S-nanoFe与铁纳米簇相比，理化性质更加稳定，可以长期保存，并能保持良好的药理作用。

基于上述发现，本发明提供了S-nanoFe用于制备治疗和/或预防败血症及其诱发的心肌损伤药物的应用。

同时提供一种药物，所述药物由S-nanoFe和药物辅料制备而成。

进一步，所述药物为静脉注射或腹腔注射给药制剂。

更进一步，所述药物的给药剂量为每千克体重5mg-20mg S-nanoFe。

所述的S-nanoFe为新制备的S-nanoFe或为保存数天后的S-nanoFe。

附图说明

图1为按照文献1所公开方法制备的S-nanoFe的表征信息：图A为新制备的铁纳米簇和S-nanoFe的拉曼光谱图，图B为新制备的铁纳米簇nanoFe、新制备的S-nanoFe和保存30天的S-nanoFe的粉末X射线衍射谱(XRD) 图，图C为新制备的铁纳米簇、新制备的S-nanoFe和保存30天的S-nanoFe 纳米粒子表面电势；

图2为S-nanoFe对CLP损伤后小鼠生存率的影响，观察CLP术后72h 内各组小鼠的生存情况，图2A为小鼠生存率造模图片，图2B为小鼠生存率曲线，结果以“均数±标准差”表示，n＝12；^*vs.CLP组，^*P<0.05；

图3为S-nanoFe对CLP损伤后8h小鼠败血症评分以及肛温的影响，按照败血症评分相关指标对小鼠损伤后状态进行评分，图3A为小鼠功能学造模图片，图3B为败血症评分结果，图3C图为小鼠肛温统计分析图，结果以“均数±标准差”表示，n＝6；^*vs.CLP组，^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001，^****P<0.0001；

图4为S-nanoFe对CLP损伤后8h小鼠血常规各项指标的影响，于小鼠术后8h测定血常规，WBC，白细胞；LYM，淋巴细胞；MID，中间细胞； GRA，中性粒细胞；PLT，血小板；RBC，红细胞。结果以“均数±标准差”表示，n＝6；^*vs.CLP组，^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001，^****P<0.0001；

图5为S-nanoFe对CLP损伤8h后小鼠血生化各项指标的影响，于小鼠术后8h测定血生化，LDH，乳酸脱氢酶；AST，谷草转氨酶；BUN，尿素氮；ALB，白蛋白；结果以“均数±标准差”表示，n＝6；^*vs.CLP组，^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001，^****P<0.0001；

图6为S-nanoFe对CLP损伤8h后心脏功能各项指标的影响，图6A为超声心动图长轴M模典型图片，以及各项心脏功能指标的统计分析图：SV，每搏输出量；CO，心输出量；LVPWs，左心室收缩末期后壁厚度；LVPWd，左心室舒张末期后壁厚度；LVESV，左心室收缩末期容积；LVEDV，左心室舒张末期容积；图6B为超声心动图短轴M模典型图片，以及各项心脏功能指标的统计分析图；结果以“均数±标准差”表示，n＝6，^*vs.CLP组，^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001，^****P<0.0001；

图7为S-nanoFe对CLP损伤8h后心肌组织形态的影响，心肌组织切片HE染色结果；HE，苏木精-伊红；

图8为S-nanoFe对CLP损伤8h后心肌组织纤维化的影响，心肌组织切片Masson染色结果；

图9为S-nanoFe对CLP损伤8h后心肌炎症相关指标的影响，图9A为炎症相关典型指标Ly6c、TNF-α的免疫组织化学染色结果；图9B为炎症相关分子NLRP3、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平的统计分析图；结果以“均数±标准差”表示，n＝6，^*vs.CLP组，^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001，^****P <0.0001；

图10为S-nanoFe(保存1天)与铁纳米簇对败血症心肌损伤的保护效果对比结果，图10A为败血症评分；图10B为肛温；图10C为血生化相关指标检测结果；图10D为血常规相关指标检测结果；图10E为心脏功能相关指标检测结果；

图11为铁纳米簇(保存1天)与铁纳米簇(保存30天)对败血症心肌损伤的保护效果对比相关指标结果；

图12为S-nanoFe保存1天)与S-nanoFe(保存30天)对败血症心肌损伤的保护效果对比相关指标结果；

图13为实施例1中的给药流程图。

具体实施方式

败血症是指宿主对感染的反应失调导致的危及生命的器官功能障碍。败血症加重可引起感染性休克、弥散性血管内凝血和器官功能受损，严重威胁患者生命。心脏是败血症损伤最为严重的器官之一。临床研究表明，伴有严重心肌损伤的败血症患者死亡率高达50％。在败血症早期，心肌损伤可加速败血症病情恶化。因此，对败血症诱发的心肌损伤进行早期干预和治疗具有十分重要的临床意义。

盲肠结扎穿孔(Cecal Ligation and Puncture，CLP)动物模型是经典的败血症动物模型，本发明采用CLP动物模型为研究对象，该动物模型可造成急性心肌损伤，即败血症诱发的心肌损伤。

败血症诱发的心肌损伤属于感染性心肌损伤的一种。感染性心肌损伤指病毒感染过程中或恢复期中出现的如心脏扩大、心力衰竭、心源性休克或心律异常等心肌损伤，典型的症状为疲乏无力、食欲不振、恶心、呕吐、呼吸困难、面色苍白、发热。

本发明所述的保存数天为1、2、3、…、29、30天，保存条件为常温、密封、避光、容器材质为不与硫代铁纳米簇发生反应的材料，如玻璃、塑料。

以下通过实施例对本发明做进一步的阐述。实施例是对本发明进行详细说明，但本发明并不受这些的任何限定。

需要说明的是，以下实验所用的S-nanoFe是按背景技术文献1中所述方法制备，所有用到的水都是去氧水。所用动物购自空军军医大学实验动物中心，所用试剂为市场采购。如无特殊说明，以下实施例中所采用的实验方法或相关检测方法采用本领域已知方法。以下实施例1-7所述硫代铁纳米簇为新制备的硫代铁纳米簇。

实施例1:发明人研究发现S-nanoFe能增加败血症损伤后的小鼠生存率方案：

采用CLP手术，于在体水平上构建败血症模型，给予S-nanoFe预保护。

步骤：

使用野生型BALB/c小鼠作为研究对象，按照研究设计，用随机数字表法进行随机分组，小鼠感染性心肌损伤模型按照Rittirsch D等发表的CLP 实验方法，复制重度感染性心肌损伤模型。具体实验步骤如下：

(1)分组：生存率实验：将BALB/c小鼠分为假手术组、CLP组、 S-nanoFe+CLP组(5、10、20mg/kg剂量)，每组12只。

(2)CLP造模：①第7天造模。采用小动物吸入麻醉系统对小鼠进行麻醉：小鼠吸入浓度为3％的异氟烷(空气流量为1L/min)，造模过程中持续麻醉的异氟烷浓度为1.5％(空气流量为1L/min)。麻醉程度监测标准为肢体的撤回反射消失，将小鼠固定并持续吸入含异氟烷2％的氧气维持麻醉；②小鼠腹正中区域备皮，用75％乙醇将皮肤消毒两次，沿中下腹部正中行纵切口1cm，逐层切开分离皮肤、皮下组织，见腹白线，沿腹白线切开腹直肌及腹膜，切口两侧用0.9％生理盐水湿润，用弯镊进腹，找到盲肠后轻柔牵出，将靠近回盲瓣处的粪便轻柔挤向盲肠末端(避免空气残留)，在盲肠末端至回盲瓣连线上2/3处(生存率实验为CLP损伤加重模型，功能学检测采用盲肠末端至回盲瓣连线上1/3处结扎，其余步骤与加重模型相同)用4 号无菌手术缝线结扎盲肠，在结扎线与盲肠末端中点处用25G注射器针头对穿已结扎盲肠(避开血管)，穿孔后轻轻挤压盲肠，可见结扎段盲肠内容物质顺穿刺孔流出，将盲肠连同周围所有肠管还纳入腹腔，用4号无菌手术缝线逐层间断缝合腹膜及皮肤；③术毕，所有实验小鼠均于术后立即背部皮下注射37℃生理盐水(10ml/kg体重)进行液体复苏，妥善标记后放回鼠笼，等待苏醒。

(3)假手术组：假手术组除不进行盲肠结扎穿孔外，其余步骤与CLP 组造模相同。

(4)给药：CLP造模前6天对各组小鼠进行预处理(腹腔注射)，给予假手术组、CLP组去氧水；S-nanoFe+CLP组：3mg/ml的S-nanoFe，用去氧水稀释，制成剂量分别为5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg的S-nanoFe溶液，每2天给药1次，共3次，确保每次给药的时间段以及手术时间相同。具体给药流程如图13所示。

(5)CLP手术后开始计时，每1h观察一次，记录72h内各个分组小鼠死亡数量，统计并分析生存率。

(6)根据各组生存率结果，进行功能学实验，所取得的标本进行后续检测。

结果：

小鼠生存率曲线结果如图2B所示，与Sham组相比，CLP处理后，小鼠72h内生存率为16.67％(P<0.05)。与CLP组相比，5mg/kg S-nanoFe 处理后小鼠生存率为83.33％(P<0.05)；10mg/kg S-nanoFe处理后小鼠生存率为100％(P<0.05)；20mg/kg S-nanoFe处理后小鼠生存率为66.67％(P< 0.05)。提示S-nanoFe可以提高小鼠CLP后的生存率，且S-nanoFe最佳保护剂量为10mg/kg(后续功能学检测均采用此最佳保护剂量)。

实施例2:发明人研究发现S-nanoFe能改善败血症评分、小鼠肛温及败血症引起的血常规变化

方案：

采用CLP手术，于在体水平上构建败血症及其诱发的心肌损伤模型(后续所有功能学检测采用盲肠末端至回盲瓣连线上1/3处结扎，其余步骤与加重模型相同，如图3A)，给予S-nanoFe处理。

步骤：

(1)分组：功能学检测：将BALB/c小鼠分为Sham组、CLP组、 S-nanoFe+CLP组(10mg/kg剂量，腹腔注射)，每组6只；

(2)CLP造模：结扎位置采用盲肠末端至回盲瓣连线上1/3处结扎，其余步骤同实施例1；

(3)根据文献“A robust scoring system to evaluate sepsisseverity in ananimal model”中公开的败血症评分表对CLP后8h的小鼠进行评分；

(4)检测CLP手术8h后小鼠肛温的变化：损伤8h后，固定住小鼠，用棉球将小鼠的肛门清理干净，将温度检测探针轻轻插入肛门，待数据稳定后记录温度；

(5)检测CLP手术8h后小鼠血常规各项指标的变化：损伤8h后，采用摘眼球取血法取血，用全自动血常规仪进行血常规检测；

结果：

于小鼠CLP处理8h后进行败血症评分，结果如图3B所示，与Sham 组相比，CLP组败血症评分显著升高(P<0.0001)，给予S-nanoFe保护后，败血症评分显著降低(P<0.0001)；

于小鼠CLP处理8h后进行肛温检测，结果如图3C所示，与Sham组相比，CLP组肛温显著降低(P<0.001)，给予S-nanoFe保护后，肛温显著升高(P<0.01)；

于小鼠CLP处理8h后检测了血常规相关指标的变化，结果如图4所示，与Sham组相比，WBC、LYM、MID、GRA、PLT显著下降(P<0.001)， RBC显著上升(P<0.01)；与CLP组相比，给予S-nanoFe处理后WBC、LYM、 MID、GRA、PLT均显著上升(P<0.001)，RBC显著下降(P<0.01)。实施例3:发明人研究发现S-nanoFe能改善败血症引起的血生化变化方案：

采用CLP手术，于在体水平上构建败血症及其诱发的心肌损伤模型，给予S-nanoFe处理，具体步骤同实施例2。

步骤：

检测CLP手术8h后小鼠血生化各项指标的变化：损伤8h后，采用摘眼球取血法取血，收集每组全血，3000rpm/min，离心10min，吸取血清，随后使用全自动血生化分析仪进行检测。

结果：

于小鼠CLP处理8h后检测了血生化相关指标的变化，结果如图5所示，与Sham组相比，CLP损伤8h后，血清中LDH、AST、BUN水平均显著上升(P<0.0001)，ALB水平显著下降(P<0.0001)；与CLP组相比，给予S-nanoFe 处理后，LDH、AST、BUN水平明显下降(P<0.0001)，ALB水平明显上升 (P<0.01)。

实施例4：发明人研究发现S-nanoFe可以改善败血症心肌损伤引发的心功能损伤

方案：

采用CLP手术，于在体水平上构建败血症及其诱发的心肌损伤模型，给予S-nanoFe处理，具体步骤同实施例2。

步骤：

小动物超声检测CLP手术8h后小鼠心脏功能：各组动物于超声检测前一天脱去小鼠左胸区域被毛，小鼠经2％异氟烷麻醉，麻醉气体流量为1L/min，异氟烷吸入麻醉后固定于37℃恒温板上，充分暴露左侧胸廓，采用30MHz 探头，选取标准胸骨旁左室长轴切面及标准左心室乳头肌短轴切面，记录M 模心脏超声切面图像，测量指标包括：每搏输出量、心输出量、左室收缩末期后壁厚度、左室舒张末期后壁厚度、左室收缩末期容积、左室舒张末期容积等。

在检测过程中应该注意以下几点可能影响检测结果的细节：第一，麻醉状态不可以过深，否则会影响小鼠的心率和收缩功能；第二，小鼠的体位要摆好，四肢不可固定地过伸过紧，否则会压迫小鼠心脏，最终影响心功能检测的准确性；第三，小鼠靠近心脏部分至少提前一天进行脱毛处理，脱毛太早会导致检测时生出新毛发，成像时生成伪影，影响超声结果，太晚则使小鼠处于应激状态干扰心功能结果。

结果：

小动物超声检测CLP手术8h后小鼠心肌收缩功能，结果如图6A(左室长轴超声结果)、6B(左室短轴超声结果)所示，与Sham相比，小鼠心脏的SV、CO、LVESV、LVEDV显著下降(P<0.0001)，LVPWs、LVPWd 明显增加(P<0.0001)；与CLP组相比，给予S-nanoFe保护后，上述心功能明显改善。

实施例5:发明人研究发现S-nanoFe能改善败血症引起的心肌组织损伤方案：

采用CLP手术，于在体水平上构建败血症及其诱发的心肌损伤模型，给予S-nanoFe处理，具体步骤同实施例2。

步骤：

取心脏放入4％多聚甲醛中进行固定，用于后续HE染色。

器官组织HE染色：

①石蜡包埋：将组织放入4％多聚甲醛中，固定至少24h；石蜡包埋、切片与脱蜡(按照顺序依次在80％、95％、95％、100％乙醇中浸泡40min，再按照100％乙醇、100％乙醇：二甲苯＝1：1混合液、二甲苯浓度梯度浸泡 30min进行组织脱水透明；然后于包埋机中浸蜡3h，最后进行滴蜡包埋。

②切片：设置切片厚度为5μm，使用捞片法将切片贴于多聚赖氨酸覆膜载玻片上，70℃烤片1h后，60℃烤片5h。

③染色：将切片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯再次浸泡10min，按照100％、100％、95％、95％、80％乙醇、去离子水的顺序依次浸泡2min 脱蜡至水，以备染色；将切片浸入苏木素染液染色3min，使用自来水轻柔冲洗5min；浸入1％盐酸乙醇30s，1％氨水3min脱色，使用自来水轻柔冲洗3min；浸入伊红染液染色3min，使用自来水轻柔冲洗3min；按照70％、 80％浓度乙醇30s，95％、95％、95％、100％、100％浓度梯度乙醇、二甲苯、二甲苯的顺序分别浸泡2min进行脱水透明处理；中性树胶封片。

结果：

小鼠心肌组织HE染色结果如图7所示，与Sham相比，CLP损伤后心肌组织结构紊乱，心肌组织纤维断裂，间质水肿增加，细胞完整性破坏；与 CLP组相比，给予S-nanoFe后，显著减轻CLP引起的心肌形态损伤。

实施例6:发明人研究发现S-nanoFe能减轻败血症引起的心肌组织纤维化。方案：

采用CLP手术，于在体水平上构建败血症及其诱发的心肌损伤模型，给予S-nanoFe处理，具体步骤同实施例2。

步骤：

心肌组织Masson染色：

①石蜡包埋、切片步骤同实施例4。

②染色：脱蜡至水；流水冲洗数分钟；1％的丽春红和酸性品红混合溶液滴染3-5min；蒸馏水洗；1％磷钼酸浸泡5min；2％亮绿溶液滴染3min；流水冲洗；0.2％醋酸溶液分色10s；流水冲洗；脱水、透明、中性树胶封片，显微镜下观察并拍照。

结果：

小鼠心肌组织Masson染色结果如图8所示，与Sham组相比，CLP损伤后蓝色胶原纤维显著增多；与CLP组相比，给予S-nanoFe处理后蓝色胶原纤维显著减少，纤维化程度降低。

实施例7：发明人研究发现S-nanoFe通过减轻炎症反应，改善CLP引起的心肌损伤。

方案：

采用CLP手术，于在体水平上构建败血症及其诱发的心肌损伤模型，给予S-nanoFe处理，具体步骤同实施例2。

步骤：

(1)免疫组织化学检测：

①石蜡包埋、切片步骤同实施例4。

②染色：切片常规脱蜡至水：根据试剂盒要求(购自武汉赛维尔生物科技有限公司)：分别取各组小鼠心脏组织石蜡切片，依次经二甲苯2次，每次10min，100％乙醇2次、每次10min；95％、90％、80％、70％乙醇各1 次，每次5min，最后浸入蒸馏水中5min；抗原修复：柠檬酸钠缓冲液微波抗原修复20min，流水冲洗10min；阻断内源性过氧化物酶：3％双氧水，室温20min。PBS洗3次，每次5min；封闭：滴加5％正常山羊血清封闭液，室温孵育30min；滴加一抗：擦去多余血清，加一抗，4℃孵育过夜。PBS 洗3次，每次5min；滴加二抗：滴加辣根过氧化物酶HRP标记的二抗(1:5000， PBS配制)，37℃温箱内孵育1h，PBS洗3次，每次5min；DAB显色：滴加DAB 0.5-3min，镜下控制显色程度，流水冲洗10min，苏木素复染，1％盐酸酒精分化，1％氨水脱色，脱水，经二甲苯透明后用中性树胶封片。

③显微镜下观察并拍照：显微镜下观察并拍照，每张切片随机找出20-30 个不重叠视野，光镜下组织切片呈棕黄色颗粒性沉积区域为阳性染色部位。

(2)实时定量荧光PCR：

①样品总RNA提取：将装有小鼠心脏样本的离心管从液氮中取出后，加入1mLTrizol(购自Takara生物公司)和2个研磨小珠，置于组织破碎仪上于60Hz破碎1min，轻轻摇晃使Trizol与样品混匀，置于冰上裂解5min；加入200μL氯仿，手动剧烈震荡管体15s，室温孵育15min后，置于4℃高速离心机离心15min，转速为12000rpm/min；此时RNA全部位于上层水相中，用移液器吸取400μL水相转移至干净的无RNA酶的离心管中，加入等体积的异丙醇进行混合，手动摇晃15s，室温孵育10min后，置于4℃高速离心机离心15min，转速为12000rpm/min；弃上清，加入75％乙醇(用 DEPC水配制)，手动摇晃使RNA沉淀悬浮，室温孵育5min后，4℃，8000 rpm/min离心5min，重复该操作一次；弃去乙醇溶液，留下RNA沉淀，室温干燥5-10min；采用20μL DEPC水溶解RNA沉淀，打开DNA/RNA浓度测定仪，测定样品的浓度，放于-80℃冰箱进行保存。

②反转录：将提取的总RNA从-80℃冰箱中取出，加入反转录试剂后置于PCR仪器中进行反转录，反转录程序为：37℃15min；85℃5s；反转后的cDNA放于-20℃保存，反转录体系如表1所示：

表1反转录体系

③qRT-PCR：将cDNA、试剂盒(购自湖南艾科瑞生物工程有限公司) 及所需引物(购自苏州金唯智生物科技有限公司，NLRP3：正向引物： 5’-TCTACTCTATCAAGGACAGGAACG-3’；反向引物5’-CCTTTCTCGGGCGGGTAAT-3’；IL-1β：正向引物 5’-CCTTGTGCAAGTGTCTGAAGC-3’；反向引物 5’-AAGGGCTTGGAAGCAATCCT-3’；IL-6：正向引物 5’-TCCGGAGAGGAGACTTCACA-3’；反向引物 5’-TGCCATTGCACAACTCTTTTCT-3’)从-20℃冰箱中取出，准备好实验所需的器材；待样品和试剂盒融化后，按照以下比例配制溶液后，使用qRT-PCR 仪器设置好的程序进行实验。反应条件为：95℃预变性10min；95℃变性 15s；58℃退火延伸20s；72℃终末延伸30s，共40个循环，反应体系如表 2所示：

表2qRT-PCR反应体系

结果：

小鼠心肌组织IHC染色结果如图9A所示，与Sham组相比，CLP损伤后Ly6c、TNF-α表达均显著升高；与CLP组相比，给予S-nanoFe处理后其表达显著降低；

小鼠心肌组织qRT-PCR结果如图9B所示，与Sham组相比，CLP损伤后炎症相关分子NLRP3、IL-1β、IL-6的mRNA水平均显著升高(P<0.01)；与CLP组相比，给予S-nanoFe处理后NLRP3、IL-1β、IL-6的水平显著下降(P<0.01)。

实施例8：发明人研究发现与铁纳米簇相比，S-nanoFe的稳定性更好方案：

采用CLP手术，于在体水平上构建败血症及其诱发的心肌损伤模型，分别给予S-nanoFe、铁纳米簇处理，每组6只，具体步骤同实施例2。

步骤：

(1)分组：将BALB/c小鼠分为铁纳米簇(保存1天)+CLP组、铁纳

米簇(保存30天)+CLP组、

S-nanoFe(保存1天)+CLP组、S-nanoFe(保存30天)+CLP组(铁纳米簇的剂量为20mg/kg、S-nanoFe的剂量为10mg/kg，腹腔注射)，每组6只。

(2)CLP造模：具体步骤同实施例2

(3)根据败血症评分表对CLP后8h的小鼠进行评分。

(4)检测CLP手术8h后小鼠肛温、血常规各项指标、血生化各项指标、心脏功能各项指标，具体步骤同实施例2、实施例3、实施例4。

结果：

于小鼠CLP处理8h后进行铁纳米簇与S-nanoFe相关指标检测，图10 的结果所示，与铁纳米簇(保存1天)+CLP组相比，S-nanoFe(保存1天) +CLP组败血症评分、肛温、血生化、血常规、心脏功能等相关指标无显著变化，证明现制的S-nanoFe和铁纳米簇对败血症心肌损伤具有相似的保护效果；

于小鼠CLP处理8h后进行铁纳米簇相关指标检测，结果如图11所示，与CLP组相比，铁纳米簇(保存1天)+CLP组的败血症评分、肛温、血生化、血常规、心脏功能等指标均有显著恢复，而铁纳米簇(保存30天)+CLP 组的败血症评分、肛温、血生化、血常规、心脏功能等指标无明显变化，证明放置30天的铁纳米簇失去了对败血症心肌损伤的保护作用；

于小鼠CLP处理8h后进行S-nanoFe相关指标检测，结果如图12所示，与CLP组相比，S-nanoFe(保存1天)+CLP组的败血症评分、肛温、血生化、血常规、心脏功能等指标显著恢复，且S-nanoFe(保存30天)+CLP 组的败血症评分、肛温、血生化、血常规、心脏功能等相关指标也明显恢复，证明放置30天的S-nanoFe仍然具有对败血症心肌损伤的保护作用，进一步说明S-nanoFe的稳定性更好，药理作用持续时间更长。

Claims (8)

1.S-nanoFe用于制备治疗和/或预防败血症药物的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的S-nanoFe为新制备的S-nanoFe或为保存数天后的S-nanoFe。

3.S-nanoFe用于制备治疗和/或预防败血症诱发的心肌损伤药物的应用.

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的S-nanoFe为新制备的S-nanoFe或为保存数天后的S-nanoFe。

5.一种药物，其特征在于，所述药物由S-nanoFe和药物辅料制备而成。

6.如权利要求5所述的药物，其特征在，所述的S-nanoFe为新制备的S-nanoFe或为保存数天后的S-nanoFe。

7.如权利要求5所述药物，其特征在于，所述药物为静脉注射或腹腔注射给药制剂。

8.如权利要求5、6或7所述药物，其特征在于，所述药物的给药剂量为每千克体重5mg-20mg S-nanoFe。

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