CN114651787A - 用于构建小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的小鼠的构建方法及其应用 - Google Patents
用于构建小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的小鼠的构建方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114651787A CN114651787A CN202210423375.3A CN202210423375A CN114651787A CN 114651787 A CN114651787 A CN 114651787A CN 202210423375 A CN202210423375 A CN 202210423375A CN 114651787 A CN114651787 A CN 114651787A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mouse
- mice
- optic nerve
- constructing
- tamoxifen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 title claims abstract description 54
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 title claims abstract description 37
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 title claims abstract description 36
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims abstract description 73
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims abstract description 61
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 27
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 claims abstract description 26
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000011419 induction treatment Methods 0.000 claims abstract description 3
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 claims description 27
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 claims description 27
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 claims description 20
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 102000002233 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Human genes 0.000 claims description 6
- 108010000123 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Proteins 0.000 claims description 6
- 238000003304 gavage Methods 0.000 claims description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 claims description 5
- 230000006651 lactation Effects 0.000 claims description 3
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 2
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 claims 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 claims 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 claims 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 abstract description 10
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 abstract description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 10
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 abstract description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 abstract description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 4
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 abstract description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 21
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 14
- 101800001649 Heparin-binding EGF-like growth factor Proteins 0.000 description 11
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102400001369 Heparin-binding EGF-like growth factor Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 9
- 101150036876 cre gene Proteins 0.000 description 9
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000003210 demyelinating effect Effects 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 6
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 6
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 6
- 230000023105 myelination Effects 0.000 description 6
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 6
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 4
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 4
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 4
- 210000003666 myelinated nerve fiber Anatomy 0.000 description 4
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 4
- 208000003435 Optic Neuritis Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 3
- 230000004973 motor coordination Effects 0.000 description 3
- 210000003007 myelin sheath Anatomy 0.000 description 3
- 210000000535 oligodendrocyte precursor cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000012549 training Methods 0.000 description 3
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 3
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DSRJIHMZAQEUJV-UHFFFAOYSA-N Cuprizon Chemical compound C1CCCCC1=NNC(=O)C(=O)NN=C1CCCCC1 DSRJIHMZAQEUJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M Pentobarbital sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)[N-]C1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010052160 Site-specific recombinase Proteins 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 208000008795 neuromyelitis optica Diseases 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 1
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018710 Heparin-binding EGF-like Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 206010061296 Motor dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 241000699729 Muridae Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 235000011449 Rosa Nutrition 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- ABUBSBSOTTXVPV-UHFFFAOYSA-H [U+6].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O Chemical class [U+6].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O ABUBSBSOTTXVPV-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 210000000877 corpus callosum Anatomy 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 239000012024 dehydrating agents Substances 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 210000003195 fascia Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003701 histiocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000006724 microglial activation Effects 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 230000007658 neurological function Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000000956 olfactory bulb Anatomy 0.000 description 1
- 210000005112 optic tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000004421 optic tracts Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 229960002275 pentobarbital sodium Drugs 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 210000000977 primary visual cortex Anatomy 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000001032 spinal nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000020238 sunflower seed Nutrition 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供一种用于构建小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的小鼠的构建方法,包括:1)筛选获得基因型为Promoter(OL)‑CreERT2+/‑;ROSA26iDTR+/+的新生小鼠;2)在所述新生小鼠出生后的第3‑6天内,对所述新生小鼠施加他莫昔芬进行诱导处理;3)将经上述诱导处理的新生小鼠培养至成年或实验所需的特定时间,即得。本发明克服现有实验性脱髓鞘动物模型的缺点与限制,基于转基因动物的条件性基因表达技术,结合啮齿类动物CNS髓鞘发育的时空差异化特性,建立小鼠视神经特异性脱髓鞘模型。
Description
技术领域
本发明涉及动物模型技术领域,特别是指一种小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的小鼠的构建方法。
背景技术
脱髓鞘性视神经炎(demyelination optic neuritis,DON)、多发性硬化(multiple sclerosis,MS)相关性视神经炎(multiple sclerosis related opticneuritis,MS-ON)以及视神经脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)是一类累及视神经的炎性脱髓鞘疾病,尤其在青壮年人群中具有较高的临床发病率,上述疾病易复发,并且致盲及致残率高。由于缺乏具有特异性的、能够准确模拟临床病理表型的实验动物模型,制约了对其发病机制和救治方法的研究,及其特效药物的筛选和研制。
目前,国内外用于研究中枢神经系统(CNS)脱髓鞘的实验动物模型,主要有实验性自身变态反应性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠模型以及由Cuprizone、lysophosphatidylcholine等化学试剂诱导的动物脱髓鞘模型。然而,上述模型的病理表型为CNS系统性的严重脱髓鞘病变,导致包括视觉传导通路、感觉、运动以及认知等多系统神经功能的严重损害,难以符合视神经局部脱髓鞘病变的机制研究和治疗药物筛选的要求。因此,亟需一种高效可靠的视神经特异性脱髓鞘的动物实验模型。
视神经及视觉传导通路是CNS高度髓鞘化的部分(白质)。作为白质的主要组成结构,髓鞘具有保护、营养神经元轴突以及促进神经冲动高速传导等重要的作用。髓鞘是由少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPC)经发育、分化形成少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL),成熟OL的膜状突起包绕轴突形成髓鞘。髓鞘的发育不良或病理性脱髓鞘将严重影响机体感觉、认知及运动等神经功能,还将导致神经环路功能的异常。已公开的研究显示,哺乳动物CNS髓鞘形成的解剖位置和顺序并不是均一进行的,即髓鞘发育具有显著的时空差异化特征。人胚胎是在24周开始出现OPC,随后在特定的时间、在不同的区域形成髓鞘。小鼠自出生后3天(P3)开始,在脊髓白质和视神经眶内段最先形成髓鞘,出生后3天(P7)在胼胝体和小脑开始髓鞘化,而大脑皮层等区域的髓鞘形成相对滞后。因此,基于视神经与CNS其它区域髓鞘形成的时空差异化特性,利用条件性、时空性基因表达(敲除)小鼠技术,使构建成年小鼠视神经局部特异性脱髓鞘模型(Optic nervedemyelination,OND)成为可能。
白喉毒素(diphtheria toxin,DT)是由白喉棒状杆菌分泌的外毒素,为一条分子量为58kDa的多肽链,该蛋白链进入体内后被蛋白水解切割成两个由二硫键连接的片段,即A(21kDa)和B(37kDa)。研究证实,A片段是DT结构中具有酶活性并发挥细胞毒性的效应分子,而B片段则与介导毒素与受体结合并转运至细胞胞质内有关。DTA进入细胞后将NAD作为底物催化真核细胞氨基转移酶II(EF-2)导致二磷酸腺苷(ADP)的核糖基化,从而抑制真核细胞蛋白质的合成导致细胞死亡。利用白喉毒素这一独特的、高效杀伤细胞的生物学特性,将其作为实验工具,在调控高等动物的组织细胞功能以及活性等研究领域,具有良好的应用前景。然而,啮齿类(鼠科)动物天然不携带编码白喉毒素受体(diphtheria toxinreceptor,DTR)的基因,因而DT对实验室常用的野生型小鼠品系(如BALB/c和C57BL/J6)不产生细胞毒性作用。
Cre/loxP位点特异性重组酶系统是目前体内、外条件性基因敲除(或表达)的常用工具。可以使靶基因的缺失或表达发生在实验动物发育的某一阶段或某一特定组织器官。其中环化重组酶(Cyclization Recombination Enzyme,Cre)是从P1噬菌体中发现的,由343个氨基酸组成的、具有稳定催化活性的单体蛋白。Cre能识别特异的DNA序列中的loxP位点,使loxP位点间的基因序列被删除或重组。LoxP(locus of X(cross)-over in P1)序列是由两个13bp反向重复序列和间隔的8bp序列组成。其中13bp的反向重复序列是Cre酶的识别位点,Cre通过与其共价结合进而催化DNA链发生同源重组。将Cre基因置于可诱导的、他莫昔芬(Tamoxifen)依赖的雌激素突变体启动子的控制下,通过给予Tamoxifen的诱导使Cre重组酶得以表达,从而将loxP位点之间的基因敲除。值得注意的是,该段被切除的基因也可以是终止密码子(Stop Cassette),从而能够使位于这段序列后被抑制转录的基因在生物体内特定的时间和组织中实现表达,即条件性基因表达。
发明内容
本发明基于小鼠CNS髓鞘发育的时空差异化特性,培育Promoter(OL)-CreERT2;ROSA26iDTR转基因小鼠(Promoter(OL)代表少突胶质细胞特异性标志物启动子),即诱导性少突胶质细胞条件性表达DTR小鼠,运用Cre/loxP位点特异性重组酶系统进行条件性基因表达,使首先形成视神经髓鞘的成熟OL特异性地表达DTR,而视路和CNS其它区域因尚未形成成熟OL,而不表达DTR。根据实验需要在小鼠不同的发育时期或成年/老年阶段给予DT处理,DT进入体内与视神经成熟OL表达的DTR结合,发挥毒性效应导致细胞死亡、髓鞘损伤,从而构建出小鼠视神经特异性脱髓鞘模型。本发明首次将转基因动物技术、条件性基因表达技术与组织发育学特性相结合,利用白喉毒素与受体结合后产生的细胞生物学效应,提供了一种实验用小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的构建方法。
本发明首先提供了一种用于构建小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的小鼠的构建方法,包括:
1)筛选获得基因型为Promoter(OL)-CreERT2+/-;ROSA26iDTR+/+的新生小鼠;所述Promoter(OL)为成熟少突胶质细胞的特异性标志物,优选为蛋白脂蛋白(proteolipidprotein,PLP)、髓鞘碱性蛋白(myelin based protein,MBP)或髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG);
2)在所述新生小鼠出生后的第3-6天内,对所述新生小鼠施加他莫昔芬进行诱导处理;
3)将经上述诱导处理的新生小鼠培养成年或实验所需的特定时间,即得。
在根据本发明的一个实施方案中,所述新生小鼠是通过包括下述步骤的方法获得的:
将Promoter(OL)-CreERT品系小鼠与ROSA26iDTR品系小鼠杂交,将子代进行基因型筛选后获得。
在根据本发明的一个实施方案中,所述施加他莫昔芬的方法选自对母体喂食或灌胃,或者,对新生小鼠灌胃给药。
在根据本发明的一个实施方案中,在新生小鼠出生后第3天和第4天连续2天分别对母鼠施加他莫昔芬,使他莫昔芬可通过乳汁分泌对新生鼠给药;在新生小鼠出生后第5天对新生小鼠施加他莫昔芬;
优选地,对母鼠灌胃施加他莫昔芬浓度为30mg/kg;对新生小鼠的灌胃给药浓度为10mg/kg。
本发明还提供了基于上述的构建方法获得的小鼠在构建视神经特异性脱髓鞘模型中的应用。
本发明进一步提供了一种小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的构建方法,其特征在于,向基于上述的构建方法获得的小鼠施加白喉毒素,即得。
在根据本发明的一个实施方案中,所述白喉毒素的施加量为200ng/只,连续施加6天。
在根据本发明的一个实施方案中,施加的方式为喂食。
在根据本发明的一个实施方案中,所述白喉毒素施加前以生理盐水溶解并稀释至终浓度为100ng/ml。
本发明的上述技术方案的有益效果如下:
本发明提供的小鼠视神经特异性脱髓鞘模型构建方法在使视神经发生特异性脱髓鞘损伤,同时避免对视路以及CNS其它区域的神经元和髓鞘造成额外的严重脱髓鞘损害。与传统的EAE模型以及由溶血卵磷脂、Cuprizon等化学试剂诱导的系统性脱髓鞘模型相比,其视神经的病理损伤具有特异性和高效性的优点,尤其对小鼠的致死率和致残率均显著降低,因此更符合实验动物福利伦理的原则。本发明的实现能够为脱髓鞘性视神经炎的损伤与修复的相关研究提供更贴近于临床表型的实验模型,还可为包括视觉系统在内的CNS白质损伤、神经环路的发育与调控以及继发性退变(损伤)等神经科学的基础研究提供高效可靠的平台,具有良好的应用前景。
附图说明
图1为小鼠双眼视神经特异性脱髓鞘模型建立的原理示意图;
图2为少突胶质细胞条件性表达白喉毒素受体小鼠的杂交策略示意图;
图3为小鼠他莫昔芬诱导和白喉毒素给药时间点的实验设计图谱;
图4为PLP-CreERT;ROSA26iDTR小鼠经他莫昔芬诱导后视神经髓鞘白喉毒素受体的特异性表达图谱;
图5为PLP-CreERT;ROSA26iDTR小鼠经他莫昔芬诱导和白喉毒素处理后视神经的脱髓鞘损伤(OND)相关图谱;
图6为PLP-CreERT;ROSA26iDTR小鼠OND处理后视神经少突胶质细胞数量显著降低,伴随小胶质细胞活化相关图谱,其中CC1为成熟少突胶质细胞标志物;Iba-1为小胶质细胞标志物;
图7为OND小鼠初级视皮质(V1)未发生明显脱髓鞘损伤图谱;
图8为OND小鼠视神经g-ratio显著高于EAE模型小鼠相关图谱;其中,g-ratio为轴突直径/神经纤维(轴突+髓鞘)直径的比率,表明OND小鼠视神经脱髓鞘的病变程度明显重于EAE小鼠;
图9为Promoter(OL)-CreERT2;ROSA26iDTR转基因鼠(iDTR)给予DT处理(OND)的相关图谱(**P<0.01,与EAE组比较,n=10),结果显示其生存率显著高于EAE模型小鼠;
图10为OND小鼠和EAE模型小鼠脱髓鞘临床评分图谱,其表明OND处理使小鼠系统性脱髓鞘的病变程度显著低于EAE;
图11为小鼠平衡木行走实验(Beam Walking test)结果图谱,其中,OND小鼠的失足次数(foot slippage)显著低于EAE模型小鼠(**P<0.01,与EAE组比较,n=7),表明OND处理对小鼠脊髓神经功能(运动协调能力)的损伤相比EAE明显减轻。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚,下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。
一、主要仪器设备(主要用于脱髓鞘模型的验证)
1.荧光倒置显微镜(M2,Zeiss);
2.激光共聚焦显微镜(SP8,Leica);
3.视觉电生理检查仪(Ganzfeld Q450,ROLAND CONSULT)
二、主要实验材料
1.C57BL/6-Gt(ROSA)26Sortm1(HBEGF)Awai/J转基因小鼠(ROSA26iDTR,来源于美国Jackson Laboratory,产品目录号:007900)
2.PLP-CreERT2转基因小鼠(来源于美国Jackson Laboratory,产品目录号:005975)
3.TaqMasterMix(Dye)基因鉴定试剂盒(CWBIO公司产品)
4.他莫昔芬(Sigma-Aldrich,USA)
5.白喉毒素(List Biological Laboratories,INC,USA)
6.0.9%医用生理盐水
7.小鼠灌胃针
8.移液器
9.医用一次性注射器(规格:1.5ml)
10.33G微量注射器(Hamilton,USA)
实施例1实验性小鼠双眼视神经特异性脱髓鞘模型的建立
1.基于Cre/loxP和白喉毒素生物学效应的模型建立原理。(见图1)
2.将PLP-CreERT品系小鼠(来源于美国Jackson Laboratory,产品目录号:005975)与ROSA26iDTR小鼠杂交,在子代中通过基因型鉴定,筛选出携带PLP-CreERT+/-;ROSA26iDTR+/+的新生鼠。雌雄鼠均可用于脱髓鞘模型的构建。
(见图2)
3.在P3(出生后第3天)和P4对母鼠进行连续2天的他莫昔芬灌胃处理,给药剂量为100mg/kg(溶剂为葵花籽油,终浓度:30mg/ml),他莫昔芬可通过乳汁分泌对新生鼠给药。在P5对新生鼠灌胃给药1次,剂量为10mg/kg(见图3)。
4.经他莫昔芬诱导的新生鼠在标准条件下饲养至成年(性成熟大约P60)。
5.PLP-CreERT+/-;ROSA26iDTR+/+小鼠白喉毒素的处理。
以生理盐水溶解白喉毒素冻干粉,梯度稀释至终浓度为100ng/ml,采取喂食的方式,用带有体积刻度的特定容器喂水,DT给药量为3.5μg/只,每只小鼠每天摄入约500ng),连续给药6天(P60-P65)(见图3)。
6.动物处死与组织取材
(1)经DT处理后7天,1%戊巴比妥钠深度麻醉小鼠。
(2)将小鼠取仰卧位,四肢外展固定于操作台上,从上腹部做切口,避免损伤肝脏及主血管,向上分离并打开胸腔,剪开肋骨及膈肌,钝性分离心脏周围的血管及筋膜,充分暴露心脏。
(3)将灌注针头插入小鼠左心室,用止血钳固定针头及灌注管,在右心耳处以眼科剪剪开,将恒流泵调节至合适流速,先以预热至37℃的生理盐水进行灌注,待小鼠肝脏变白、观察右心耳处无明显血液流出后,立即换用预冷的4%多聚甲醛(4%PFA)溶液继续灌注(体内前固定处理),用量约为5ml/只。
(4)用显微镊和小梁剪分别从双眼颞侧球结膜逐层分离至球后,紧贴眼球后壁剪断双侧视神经后将全脑组织从前向后的方向逐渐剜出,将双侧视神经自视神经孔连同脑组织向后一并取出。
(5)置于4%PFA中后固定处理12h。将组织按照1:50的体积比转移至30%蔗糖溶液4℃脱水处理24小时以上。
7.组织冰冻切片
(1)捞取视神经及脑组织,用滤纸吸干组织表面液体。
(2)在切片机底座滴加包埋剂,分别将嗅球端及小脑端去除并切割平整后竖直放置于底座上,整体放入冰冻切片机内的标本台,依次少量滴加包埋剂使其均匀包裹脑组织外表面。
(3)待包埋剂完全凝固后将整体固定于载物基座并装入刀片,切片厚度为10μm(视神经),20μm(脑)。
8.免疫荧光染色
(1)从冰冻保护液中捞取视神经和脑组织切片,0.01M PBS漂洗,8分钟换液一次,共3次;
(2)组织打孔处理:将切片置于0.5%Triton X-100溶液中室温处理10分钟;
(3)0.01M PBS漂洗5min/3次;
(4)以5%BSA+0.3%Triton X-100混合溶液室温封闭2h;
(5)使用封闭液稀释抗体至目标浓度,一抗孵育,4℃摇床过夜(孵育时间大于12h);
(6)第二日:将脑切片捞出,置于0.01M PBS溶液漂洗,8分钟换液一次,共3次;
(7)室温避光条件下,摇床孵育二抗1.5-2h;
(8)0.01M PBS溶液漂洗,8min*3次;
(9)加入预先配制好的DAPI溶液,继续孵育10min染核;
(10)0.01M PBS溶液漂洗,8min*3次,将冰冻切片铺于载玻片上(尽量防止皱折),待切片彻底晾干后,滴加水溶性封片剂,缓慢释放盖玻片(尽量避免气泡产生),严格避光平放,待封片剂完全凝固后用酒精擦拭玻片表面,进行图像采集。所用一抗(表1)和二抗(表2)见下表:
表1一抗基本信息及稀释比例
表2二抗基本信息及稀释比例
实验结果
1.经他莫昔芬(Tamoxifen)诱导后P60小鼠视神经和视交叉白喉毒素受体(DTR)+MBP荧光双标染色。(见图4)
2.成年小鼠经DT处理(连续6天给药完成)后的3天(OND-3d),视神经MBP荧光强度和密度与对照组相比无统计学差异。在OND第7天处理组小鼠视神经MBP的荧光密度相比对照组显著降低;小鼠经OND处理后3天双眼视神经CC1+阳性细胞的数量相比未处理组显著减少,部分CC1+阳性细胞失去原有类圆形的正常细胞形态,胞体缩小、突起减少以及异型性细胞数量显著增高。(见图5)3.经OND处理后7天,视神经小胶质细胞数量相比对照组显著增高,提示OND激活小胶质细胞的吞噬活性。(见图6)
4.OND处理后3天和7天,小鼠脑初级视皮质区(V1区)髓鞘(MBP)及少突胶质细胞(CC1+)的数量分别与未处理组相比没有统计学差异,提示OND对视皮质区不产生明显的脱髓鞘损伤。(见图7)
5.透射电镜分析OND处理后视神经g-ratio值
(1)1%戊巴比妥钠深度麻醉小鼠,使用37℃生理盐水经左心室内灌注冲洗至小鼠肝脏变白,尽可能去除掉残留的血液。
(2)电镜固定液进行内灌注固定后,剥离出大脑组织和视神经放于4℃电镜固定液中进行后固定。
(3)使用电镜标本漂洗液漂洗组织块2天(30min*3次/天)。漂洗后使用1%锇酸溶液(0.1M PBS稀释)4℃固定2h,固定后先用0.1M PBS溶液漂洗后再使用50%丙酮脱水(15min),使用饱和醋酸铀溶液进行再次脱水和初染,4℃冰箱过夜。(4)依次经过70%丙酮溶液(15min)、90%丙酮溶液(15min)、100%丙酮两次(15min)、加入脱水剂的丙酮(15min)以及环氧丙烷(15min),以尽可能脱去水分。环氧丙烷-618树脂(1:1)混合试剂浸透2h后继续使用不含加速剂的树脂浸透,在乳胶板中放入含加速剂的树脂,将标本移入乳胶板中37℃过夜(5)将恒温箱温度上调至68℃待树脂聚合。用薄刀片对树脂块进行修整至切面暴露,采用超薄切片机(LKB-V,LKB Produkter AB,Sweden)进行切片(厚度为60nm),获得的视神经切片使用铅染液染色后在透射电镜(HT7700,TITACHI,Japan)下观察并采图,计算有髓神经纤维的g-ratio值(g=轴突直径/有髓神经纤维直径)。
结果显示:OND小鼠视神经有髓神经纤维的g-ratio值(g=轴突直径/有髓神经纤维直径)显著高于EAE模型鼠(*P<0.05,与EAE组比较,***P<0.001,与生理盐水组比较,n=4),提示OND小鼠视神经髓鞘厚度相比于EAE模型鼠显著变薄,换言之,OND小鼠视神经脱髓鞘损伤程度更重。(见图8)
6.与EAE模型鼠比较,OND小鼠60天内生存率显著提高。(见图9)
7.OND小鼠临床评分显著低于EAE模型鼠,说明OND处理对小鼠神经功能的损伤相比EAE处理显著减轻。(见图10)
8.小鼠平衡杆行走实验(beam walking test)以检测并比较各组小鼠是否存在运动协调功能的障碍。分别选取不同处理后14天的小鼠,将一根顶部粗糙、宽度为0.5cm的木杆悬空放于离地高50cm的支撑架上,杆的一端放置于明亮白炽灯下,另一端伸入一个有开口的避光暗箱中,暗箱中放置少量垫料。选取开场实验中无明显运动功能障碍的小鼠进行实验,将小鼠放于平衡杆的光亮端,由于小鼠的趋暗特性和暗箱中垫料的吸引,促使其走过木杆进入暗箱中。在实验操作过程中,实验者会对小鼠进行3次(1次/日)适应性训练。每次训练中将小鼠分别放置在距离暗箱入口30cm、50cm以及70cm的位置处,训练过程中当小鼠停下时,实验人员可用手指轻轻碰触小鼠尾端使小鼠继续前进至进入暗箱,每两次训练之间间隔5min。在第4天进行平衡杆实验测试,将小鼠放于木杆的光亮端,使小鼠走过90cm距离进入暗箱中,在平衡杆两侧设置摄像机,对每只小鼠通过平衡杆过程中后肢滑落的次数进行分析和计数,当小鼠的后肢从平衡杆顶部平面滑下且后肢处于平衡杆侧面时记为滑落一次。将双侧后肢滑落次数之和作为平衡杆实验的检测参数。
统计结果显示OND小鼠的后肢滑落次数明显少于EAE小鼠,提示OND处理对小鼠运动协调功能的损伤较小。(见图11)
实施例2实验性小鼠双眼视神经特异性脱髓鞘模型的建立
1.将MOG-CreERT品系小鼠与ROSA26iDTR小鼠杂交,在子代中通过基因型鉴定,筛选出携带MOG-CreERT+/-;ROSA26iDTR+/+的新生鼠。雌雄鼠均可用于脱髓鞘模型的构建。
2.小鼠的饲养方法和他莫昔芬诱导方式参考实施例1。
3.MOG-CreERT+/-;ROSA26iDTR+/+小鼠白喉毒素的处理
以生理盐水溶解并稀释白喉毒素至终浓度为2μg/ml,采取皮下注射,2次/日,0.1ml/只(200ng/只),连续给药5天,即得。
以上所述的实施例为本发明较优的实施方式,然而本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,任何不背离本发明实质与原理的替换,例如不同实验用啮齿类动物的替换、其它条件性基因敲除/表达系统的替换、其它作为Cre启动子的少突胶质细胞谱系标志物(例如髓鞘碱性蛋白(myelin based protein,MBP)、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MyelinOligodendrocyte Glycoprotein,MOG)等)的替换,以及不同的白喉毒素受体诱导表达的方法、白喉毒素给药的方式和剂量均应视为等效的变换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
以上所述是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明所述原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种用于构建小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的小鼠的构建方法,其特征在于,包括:
1)筛选获得基因型为Promoter(OL)-CreERT2+/-;ROSA26iDTR+/+的新生小鼠;所述Promoter(OL)为成熟少突胶质细胞的特异性标志物,优选为蛋白脂蛋白(proteolipidprotein,PLP)、髓鞘碱性蛋白(myelin based protein,MBP)或髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG);
2)在所述新生小鼠出生后的第3-6天内,对所述新生小鼠施加他莫昔芬进行诱导处理;
3)将经上述诱导处理的新生小鼠培养至成年或实验所需的特定时间,即得。
2.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述新生小鼠是通过包括下述步骤的方法获得的:
将Promoter(OL)-CreERT品系小鼠与ROSA26iDTR品系小鼠杂交,将子代进行基因型筛选后获得。
3.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述施加他莫昔芬的方法选自对母体喂食或灌胃,或者,对新生小鼠灌胃给药。
4.如权利要求3所述的构建方法,其特征在于,在新生小鼠出生后第3天和第4天连续2天分别对母鼠施加他莫昔芬,使他莫昔芬通过乳汁分泌从而对新生鼠给药;在新生小鼠出生后第5天对新生小鼠施加他莫昔芬;
优选地,对母鼠灌胃施加他莫昔芬浓度为30mg/kg;对新生小鼠的灌胃给药浓度为10mg/kg。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的构建方法获得的小鼠在构建视神经特异性脱髓鞘模型中的应用。
6.一种小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的构建方法,其特征在于,向基于权利要求1-4中任一项所述的构建方法获得的小鼠施加白喉毒素,即得。
7.如权利要求6所述的小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的构建方法,其特征在于,所述白喉毒素的施加量为200ng/只,连续施加6天。
8.如权利要求6所述的小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的构建方法,其特征在于,施加的方式选自喂食、灌胃、皮下注射或腹腔注射中的任一种。
9.如权利要求6所述的小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的构建方法,其特征在于,所述白喉毒素施加前以生理盐水溶解并稀释至终浓度为100ng/ml。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210423375.3A CN114651787A (zh) | 2022-04-21 | 2022-04-21 | 用于构建小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的小鼠的构建方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210423375.3A CN114651787A (zh) | 2022-04-21 | 2022-04-21 | 用于构建小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的小鼠的构建方法及其应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114651787A true CN114651787A (zh) | 2022-06-24 |
Family
ID=82037428
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210423375.3A Pending CN114651787A (zh) | 2022-04-21 | 2022-04-21 | 用于构建小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的小鼠的构建方法及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114651787A (zh) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105531365A (zh) * | 2013-04-23 | 2016-04-27 | 耶达研究及发展有限公司 | 分离的幼稚多能干细胞和产生所述细胞的方法 |
CN108938613A (zh) * | 2017-05-27 | 2018-12-07 | 首都医科大学附属北京口腔医院 | 他莫昔芬的用途以及一种构建腭裂动物模型的方法 |
CN109789128A (zh) * | 2016-07-27 | 2019-05-21 | 凯斯西储大学 | 促进髓鞘形成的化合物和方法 |
CN109803662A (zh) * | 2016-08-12 | 2019-05-24 | 加利福尼亚大学董事会 | 髓鞘再生疗法 |
CN111700034A (zh) * | 2020-05-22 | 2020-09-25 | 中国人民解放军空军军医大学 | 一种基于中枢神经系统髓鞘功能改变的精神分裂症动物模型的构建方法和应用 |
-
2022
- 2022-04-21 CN CN202210423375.3A patent/CN114651787A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105531365A (zh) * | 2013-04-23 | 2016-04-27 | 耶达研究及发展有限公司 | 分离的幼稚多能干细胞和产生所述细胞的方法 |
CN109789128A (zh) * | 2016-07-27 | 2019-05-21 | 凯斯西储大学 | 促进髓鞘形成的化合物和方法 |
CN109803662A (zh) * | 2016-08-12 | 2019-05-24 | 加利福尼亚大学董事会 | 髓鞘再生疗法 |
CN108938613A (zh) * | 2017-05-27 | 2018-12-07 | 首都医科大学附属北京口腔医院 | 他莫昔芬的用途以及一种构建腭裂动物模型的方法 |
CN111700034A (zh) * | 2020-05-22 | 2020-09-25 | 中国人民解放军空军军医大学 | 一种基于中枢神经系统髓鞘功能改变的精神分裂症动物模型的构建方法和应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
张舟: "NLRP3炎症小体参与视神经损伤导致视皮质继发性退变的实验研究", 《中国博士论文全文数据库 医学卫生科技辑》 * |
杜慧杰等: "视神经脊髓炎谱系疾病患者血清AQP4-IgG抗体水平变化及意义", 《山东医药》 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Singh et al. | Retinal stem cell transplantation: Balancing safety and potential | |
Pang et al. | Inducible rodent models of glaucoma | |
LaVail et al. | C57BL/6J mice with inherited retinal degeneration | |
O'Rourke et al. | Dynamic aspects of retinotectal map formation revealed by a vital-dye fiber-tracing technique | |
Tracy et al. | Intravitreal implantation of TPP1-transduced stem cells delays retinal degeneration in canine CLN2 neuronal ceroid lipofuscinosis | |
de Castro et al. | Cone photoreceptors develop normally in the absence of functional rod photoreceptors in a transgenic swine model of retinitis pigmentosa | |
Hattiangady et al. | Neural stem cell grafting in an animal model of chronic temporal lobe epilepsy | |
Lin et al. | Assessment of safety and functional efficacy of stem cell-based therapeutic approaches using retinal degenerative animal models | |
Bobbert | Ethical questions concerning research on human embryos, embryonic stem cells and chimeras | |
Elsayed et al. | Use of fetal cortical grafts in hypoxic-ischemic brain injury in neonatal rats | |
del Cerro et al. | The first decade of continuous progress in retinal transplantation | |
Przedborski et al. | Sham transplantation protects against 6-hydroxydopamine-induced dopaminergic toxicity in rats: behavioral and morphological evidence | |
TW201137354A (en) | Myelin basic protein luciferase (MBP-luci) bioimaging model | |
JP2001511788A (ja) | ヒトhNTニューロン細胞を用いる失明の治療方法 | |
Levin | Animal and culture models of glaucoma for studying neuroprotection | |
CN114651787A (zh) | 用于构建小鼠视神经特异性脱髓鞘模型的小鼠的构建方法及其应用 | |
Sawin | Recent genetics of the domestic rabbit | |
Yin et al. | In vitro and in vivo methods for studying retinal ganglion cell survival and optic nerve regeneration | |
CN111876418B (zh) | 先天性黑蒙模型犬的建立方法 | |
Hormigo et al. | Radial glial cell line C6-R integrates preferentially in adult white matter and facilitates migration of coimplanted neurons in vivo | |
Sohal et al. | Effects of optic primordium removal on the development of the isthmo-optic nucleus in the duck (Anas platyrhynchos) | |
Madison et al. | Retinal ganglion cells and axons survive optic nerve transection | |
Seal et al. | Implementing the chick embryo model to study vestibular developmental disorders | |
Brüstle et al. | Experimental transplantation in the embryonic, neonatal, and adult mammalian brain | |
Sandvig et al. | Using manganese-enhanced MRI to assess optic nerve regeneration |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |