CN114557359A

CN114557359A - 一种用于防治松材线虫病的农药组合物及其复配制剂和应用

Info

Publication number: CN114557359A
Application number: CN202210046163.8A
Authority: CN
Inventors: 倪安顺; 王永春; 孙学书; 叶建仁
Original assignee: Hangzhou Yisenjian Biotechnology Co ltd; Nanjing Forestry University
Current assignee: Hangzhou Yisenjian Biotechnology Co ltd; Nanjing Forestry University
Priority date: 2022-01-14
Filing date: 2022-01-14
Publication date: 2022-05-31

Abstract

本发明公开了一种用于防治松材线虫病的农药组合物及其复配制剂和应用，属于农药技术领域。本发明将质量百分比浓度为2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺与5％阿维菌素和5％氟吡菌酰胺进行对比，通过浸虫法分析三种药剂对松材线虫的致死效果。处理松材线虫24h后，2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺、5％阿维菌素、5％氟吡菌酰胺的LC₅₀分别为2.0208、51.1536、21.6071mg·L^‑1，LC₂₀分别为0.4479、12.0318、8.5582mg·L^‑1，杀线效果2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺>5％氟吡菌酰胺>5％阿维菌素。2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺作为一种新型复配杀线药剂，对松材线虫具有较强的抑制效果。

Description

一种用于防治松材线虫病的农药组合物及其复配制剂和应用

技术领域

本发明属于农药技术领域，涉及松材线虫病的防治，更具体涉及一种用于防治松材线虫病的农药组合物及其复配制剂和应用。

背景技术

松材线虫病(Bursaphelenchus xylophilus)是由松材线虫引起的一种系统侵染性病害，能短时间造成松属(Pinus)树种大量萎蔫死亡。该病害起源于北美，目前主要分布在加拿大、墨西哥、美国、中国、日本、韩国、葡萄牙和西班牙等(王曦茁等，2018)，亚洲是受松材线虫病影响最严重的地区。我国与1982年在南京中山陵首次发现松材线虫病(孙永春，1982)，目前已扩散至全国19个省、728个县级行政区，发生面积已超过180万hm²，探寻出有效的防病措施迫在眉睫。

松材线虫病的防治主要有早期疫情检测、疫木除治、媒介昆虫防治、树干注射等(叶建仁，2019)，其中树干注射化学药剂因其简便高效，有持效性等优点，渐渐成为当今大面积防治松材线虫的一种重要方法。树干注射的有效应用受限于化学药剂在树木木质部的移动(Navarro et al.，1992)，而化学药剂在树体内的运输依赖于水的流动，化合物的水溶性对其防治效果尤为重要(Takai et al.，2001)。目前，用于树干注射控制松材线虫的化学药剂主要是甲维盐和阿维菌素，它们在21℃时的水溶性只有10μg L^-1(Cabrera et al.，2013)，水溶性差可能是制约它们在树体内发挥作用的一个重要因素，且长期使用甲维盐和阿维菌素容易使松材线虫产生抗药性(Zhao et al.，2006)，因此迫切需要一种新的，更有效的杀线剂应用与松材线虫病的防治。

氟吡菌酰胺(Fluopyram)是吡啶类杀菌剂，通过抑制琥珀酸脱氢酶的电子转移而抑制线粒体呼吸，具有广谱性和内吸性，可防治真菌病原菌引起的灰酶病、白粉病和霜酶病等(Labourdette et al.，2010)。近年来，拜耳作物科学公司发现氟吡菌酰胺还具有优良的杀线虫活性，并在2015年登记该品种在杀线虫活性方面的应用(杨子辉等，2017)。现已发现氟吡菌酰胺对南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、小麦孢囊线虫(Heteroderaavenae)、肾型肾状线虫(Rotylenchulus reniformis)具有良好杀线效果(迟元凯等，2019；Faske et al.，2015)，但是其对于松材线虫的作用效果的研究极少。此外，氟吡菌酰胺在20℃时的水溶性为16mg·L^-1(杨子辉等，2017)，远高于甲维盐和阿维菌素，更易被树体吸收运输，有望成为一种良好的树干注射替代剂。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的第一技术问题在于提供一种用于防治松材线虫病的农药组合物；本发明所要解决的第二技术问题在于提供一种用于防治松材线虫病的复配制剂；本发明所要解决的第三技术问题在于提供上述农药组合物及其复配制剂在防治松材线虫病中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种用于防治松材线虫病的农药组合物，有效成分为阿维菌素与氟吡菌酰胺二元复配。

进一步的，用于防治松材线虫病的农药组合物的有效成分为质量百分比浓度为2％阿维菌素与质量百分比浓度为6％氟吡菌酰胺二元复配。

一种用于防治松材线虫病的复配制剂，包括所述的用于防治松材线虫病的农药组合物和制剂用辅料。

所述的农药组合物在防治松材线虫病中的应用。

所述的复配制剂在防治松材线虫病中的应用。

进一步的，通过打孔将复配制剂注射入松属树种中，预防、控制松材线虫。

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明通过对比了三种不同杀线药剂2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺与5％阿维菌素和5％氟吡菌酰胺的室内杀线效果、对松材线虫繁殖量和卵孵化率等抑制作用，发现2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺作为一种新型复配杀线药剂，对松材线虫具有较强的抑制效果，且随着温度的升高，杀线效果越好。该复配药剂具有良好的防治松材线虫病的应用潜力，可作为甲维盐和阿维菌素的替代药剂。

附图说明

图1为不同药剂处理6天后，培养皿内灰葡萄孢被松材线虫取食面积图；

图中，a为无菌水对照；b为5％阿维菌素；c为2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺；d为5％氟吡菌酰胺；

图2为不同药剂亚致死浓度LC₂₀处理对松材线虫种群繁殖量和繁殖速率影响图；图中，不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)；

图3为不同药剂对松材线虫卵孵化率的影响图；

图4为不同药剂10mg·L^-1处理24h后卵形态变化图；图中，a为无菌水对照；b为5％阿维菌素；c为2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺；d为5％氟吡菌酰胺；箭头表示形成液泡；

图5为不同温度下2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺对松材线虫致死效果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。以下实施例中如无特殊说明，实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。

以下实施例所使用的供试虫源为：南京林业大学森林保护实验室保存的松材线虫AMA3种群。

以下实施例所使用的供试药剂为：5％氟吡菌酰胺，5％阿维菌素，2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺。此处的浓度均为质量百分比浓度。

实施例1

一、不同药剂对松材线虫室内毒力测定

采用浸虫法测定三种药剂对松材线虫室内毒杀效果。用贝尔曼漏斗法收集培养在灰葡萄孢菌上的松材线虫，3500r/min离心3min，沉淀经无菌水冲洗3次，配制成约为2500条/mL线虫液。用无菌水将三种供试药剂分别稀释为五个浓度梯度，每个浓度为1个处理，每个处理重复3次，以无菌水作为空白对照。将药剂与虫液1∶9混合加入1.5mL离心管中，将所有离心管置于25℃恒温培养箱中，24h后在显微镜下观察并计算松材线虫的存活与死亡数。

对照死亡率(％)＝对照死亡数/对照供试虫数×100；

校正死亡率(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照组死亡率)×100；

由于线虫存在假死现象，可对呈“C”形或“J”形的线虫用昆虫针反复刺激，若仍僵直不动，则可判定死亡。

不同药剂在不同浓度下对松材线虫的致死力见表1，三种药剂相比，复配药剂2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺的室内杀线效果明显较好，LC₅₀浓度值在2.0208mg·L^-1，LC₂₀浓度值仅在0.4479mg·L^-1；其次是5％氟吡菌酰胺，LC₅₀和LC₂₀浓度值分别是21.6071mg·L^-1和8.5582mg·L^-1；5％阿维菌素的杀线效果最差，LC₅₀和LC₂₀浓度值分别达到了51.1536mg·L^-1和12.0318mg·L^-1，这可能是因为阿维菌素的长期应用使得松材线虫本身产生抗药性。

表1不同药剂对松材线虫毒力分析(24h)

二、不同药剂对松材线虫繁殖取食影响

将灰葡萄孢培养5-7天后，采用喷雾法用显色喷雾器均匀加入0.5ml浓度为LC₂₀的药剂，对照组加无菌水。每皿接入约400条松材线虫，置于25℃恒温培养箱培养。对照培养皿中的灰葡萄孢被吃完后全部停止培养，采用贝尔曼漏斗法分离松材线虫，将虫液定容至一定的体积，摇匀后吸取100μl置于载玻片上，微微加热至线虫死亡，在显微镜下观察并统计数量，计算不同处理各个重复的线虫总数。每个处理设3个重复。

结果表明，6天后对照组各培养皿中的灰葡萄孢均已被松材线虫取食完，但药剂处理组基本还可看到灰葡萄孢(如图1)。其中5％氟吡菌酰胺处理组和复配药剂2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺处理组无明显差异(P＝0.31)，其余各组间的种群数量差异均达显著水平(P＜0.05)(如图2)。复配药剂2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺对松材线虫种群数量的抑制作用最明显，其次是5％氟吡菌酰胺，抑制效果最差的是5％阿维菌素，三种药剂处理后的每皿松材线虫种群数量分别为1425±250、1675±377和10925±504头，而对照组线虫数量均大于20000条/皿。

此外，本试验还测定了松材线虫种群繁殖速率(pf/pi)，结果显示对照处理组具有较高繁殖速率(50.75)，5％阿维菌素处理组具有中等繁殖速率(27.31)，5％氟吡菌酰胺处理组和复配药剂2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺处理组繁殖速率较低，分别为4.19和3.56(图2)。

三、不同药剂对松材线虫卵孵化率影响

将培养在灰葡萄孢上的松材线虫用贝尔曼漏斗法漏2小时，收集到15ml离心管内，3500r/min离心3min，去上清。用无菌水清洗2-3遍，加无菌水配制成一定浓度的线虫悬浮液。取适量松材线虫悬浮液于3cm培养皿内，放到25℃恒温培养箱培养8-12h，产生大量的松材线虫卵粒并粘附在培养皿底部，将悬浮液连同松材线虫一起轻轻倒掉，用无菌水冲洗3-4次，即可收集获得松材线虫卵粒。将上述方法得到的松材线虫卵置于1、1.5、2、2.5和3mg·L^-15个不同浓度药剂中，在24h和48h后，用显微镜观察并记录卵的孵化情况，每个处理设3次重复。

孵化率＝(松材线虫幼虫数/松材线虫幼虫与卵总数)×100。

药剂处理24h后，首先在光学显微镜下，用移液枪将药剂浸渍后的松材线虫卵挑出放置在载玻片上，滴水润湿后加上盖玻片，后利用蔡司荧光显微镜观察挑出的松材线虫卵形态结构。

不同药剂在24h和48h对松材线虫卵孵化率的影响见图3。在24h时，2阿维菌素.6％氟吡菌酰胺在0.5、1、1.5、2、2.5和3mg·L^-15个浓度的孵化率分别是73.37％、62.23％、42.19％、34.55％、20.32％；5％阿维菌素孵化率分别为83.22％、51.87％、39.62％、27.44％、21.36％；5％氟吡菌酰胺孵化率分别为52.58％、45.00％、36.42％、28.25％、22.89％，均远低于对照组93.88％。48h时卵孵化率均上升，且浓度越低，上升越明显。在浓度1mg·L^-1时，对卵孵化抑制效果5％氟吡菌酰胺＞2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺＞5％阿维菌素；在浓度3mg·L^-1时，对卵孵化抑制效果2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺＞5％阿维菌素＞5％氟吡菌酰胺，说明该复配药剂在较低浓度下对松材线虫卵孵化仍有良好的抑制效果，可以在树体内较长时间发挥作用。

不同药剂在10mg·L^-1处理24h后卵的形态变化见图4，对照组松材线虫卵基本已孵化为二龄幼虫，药剂处理组卵孵化率均较低。在10mg·L^-1时，复配药剂2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺处理组松材线虫卵内形成多个液泡与空洞，可能是因为高浓度药剂破坏了卵细胞的渗透屏障，导致卵死亡，其他两种药剂处理组卵虽未孵化，但卵内未形成液泡，卵未死亡。

四、不同温度下2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺对松材线虫致死效果

不同温度条件下复配药剂对松材线虫致死效果见图5，在15℃、20℃、25℃、30℃、35℃条件下复配药剂2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺的LC₅₀分别为3.6447、2.9595、2.0208、1.8508、1.7441mg·L^-1。同一浓度下，随着温度升高，松材线虫的死亡率增加。

温度对松材线虫的生长繁殖影响很大，松材线虫的生长最适温度为25℃，温度低于10℃则不能完成生长发育，温度大于28℃时繁殖被明显抑制，温度大于33℃时不能繁殖，在不同温度下，药剂对松材线虫的毒杀效果不同，随着温度的升高，2％阿维菌素·6％氟吡菌酰胺杀线效果增强，且在25℃之前，每增加5℃杀线活性提升更快，这可能是因为随着温度的升高，松材线虫新陈代谢更旺盛，而低温条件下松材线虫会进入滞育状态，脂肪相对积累率显著上升，这使得松材线虫对与药剂处理的敏感性下降，存活率上升。

Claims

1.一种用于防治松材线虫病的农药组合物，其特征在于，所述农药组合物的有效成分为阿维菌素与氟吡菌酰胺二元复配。

2.根据权利要求1所述的用于防治松材线虫病的农药组合物，其特征在于，所述农药组合物的有效成分为质量百分比浓度为2％阿维菌素与质量百分比浓度为6％氟吡菌酰胺二元复配。

3.一种用于防治松材线虫病的复配制剂，其特征在于，所述制剂包括权利要求1-2任意一项所述的用于防治松材线虫病的农药组合物和制剂用辅料。

4.权利要求1-2任意一项所述的农药组合物在防治松材线虫病中的应用。

5.权利要求3所述的复配制剂在防治松材线虫病中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，通过打孔将复配制剂注射入松属树种中，预防、控制松材线虫。