CN114431136B - 一种兼用型高抗性淀粉马铃薯的选育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种兼用型高抗性淀粉马铃薯的选育方法,该方法包括以中薯5号为父本,中薯3号为母本,杂交得F1种子;F1种子培养成苗,构建马铃薯试管小薯体系,取试管小薯,采用碘染表面染色法初筛,选留RS2≥亲本B的小薯,获得S1;S1株系种植选留染色与中薯5号染色深浅相仿或更深的株系,再分别选留RS2≥亲本B和RS3≥亲本A的无性系S2;种植S2选留RS2≥40%、RS3≥5%的无性系S3;种植S3选留还原糖含量≤双亲的无性系S4;构建无性系S5的种苗繁育及良种栽培技术,选育兼用型高抗性淀粉的马铃薯。该选育方法获得的马铃薯,既可以新鲜食用又可以膨化加工,有望形成更完善产业链,助力未来乡村的提质增效。
Description
技术领域
本发明涉及马铃薯育种技术领域,尤其涉及一种兼用型高抗性淀粉马铃薯的选育方法。
背景技术
然而,与马铃薯、小麦、玉米等育种目标与品种的多样化相比,马铃薯育种及用途非常单一,且适应主粮化的专用品种少。为将其主粮消费的潜力及食品创新的魅力充分挖掘,功能型马铃薯育种是关键。
据健康中国行动估算,我国糖尿病患病率12.8%,患者1.5亿;血脂异常患病率18.6%,患者1.6亿。抗性淀粉(Resistant Starch,RS)是健康人体小肠内难以消化吸收的淀粉及淀粉降解物的总称,具有降血糖、降血脂、控制体重、有利于肠道健康等重要的生理功能,对糖尿病患者和减肥人群具有特殊意义。一般情况下,生的马铃薯中抗性淀粉(RS2)较高,但煮熟后的抗性淀粉(RS3)较低。
为此,提供一种兼用型高抗性淀粉马铃薯的选育方法,选育的RS2和RS3“双高”的马铃薯新品种,鲜食与膨化两种用途兼顾,既满足健康中国行动的营养需求,又提质增效助力乡村振兴。
发明内容
本发明提供了一种兼用型高抗性淀粉马铃薯的选育方法,该选育方法获得的抗性淀粉RS3和RS2都高的马铃薯新品种,鲜食与膨化两种用途兼顾。
具体技术方案如下:
1、一种兼用型高抗性淀粉马铃薯的选育方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)以中薯5号为父本,中薯3号为母本,进行杂交,获得F1代实生种子;
(2)将F1代实生种子在无菌环境下培养成苗,构建马铃薯试管小薯体系,取试管小薯,切成两块,取其中一块作为样品,以中薯5号为对照,先采用碘染表面染色法初筛,选留与中薯5号染色深浅相仿或更深的样品,再测定样品对应生薯中的抗性淀粉RS2含量,选取RS2≥亲本B样品所对应的小薯,进行微型薯生产,获得S1;
(3)S1株系种植,收获薯块,采用碘染法进行表面染色,选留染色与中薯5号染色深浅相仿或更深且纯合稳定的株系,再分别测定生薯中的抗性淀粉RS2和熟薯中的抗性淀粉RS3含量,选留RS2≥亲本B和RS3≥亲本A的无性系S2;
(4)种植S2,测定S2的抗性淀粉,选留RS2≥45%、RS3≥5%的“双高”无性系S3;
(5)种植S3,测定S3的还原糖含量,选留还原糖含量≤双亲的“双高一低”无性系S4;
(6)种植S4,构建种苗繁育及栽培技术,最终选育得到兼用型高抗性淀粉的马铃薯。
上文所述的中薯5号是中国农业科学院蔬菜花卉研究所选育的鲜食马铃薯新品种,品种审定证书号为湘审薯2016003;中薯3号是中国农业科学院蔬菜花卉研究所选育的鲜食马铃薯新品种,品种审定证书号为桂审薯2004003号。
中薯5号为中薯3号天然结实后代,两个品种遗传背景密切但特性显著不同,因农艺性状一致具有稳定更快的特点,便于聚焦目标性状聚合改良。
上文所述的构建马铃薯试管小薯的方法参见Gopal等.Microtuberization inpotato(Solanum tuberosum L.).Plant Cell Reports,1998,17:794-798。
步骤(2)和(3)中采用碘液表面染色法简易鉴定马铃薯中的直链淀粉含量参见:徐昌杰等.淀粉含量测定的一种简便方法──碘显色法[J].生物技术.1998,(02)。该方法的实施:一是马铃薯新鲜茎块简便易切且切口平整,原理是依据直链淀粉遇碘即呈蓝色,瞬间可获取结果;二是为方便识别选择,碘液的浓度按亲本B等的染色稀释调整。
步骤(2)~(4)中的RS2和RS3含量测定方法,参见:Shu等.The influences ofchain length of amylopectin on resistant starch in rice(Oryza sativa L.).2007,59:504-509。
步骤(5)中还原糖含量测定方法,参见:食品中还原糖的测定GB/T 5009.7-2003;步骤(6)中构建种苗繁育及栽培技术的方法,参见:崔杏春主编。《马铃薯良种繁育与高效栽培技术》.2010年8月1日化学工业出版社
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
(1)本发明以用途兼用的马铃薯为目标,针对性选育RS2和RS3两类抗性淀粉含量都高的马铃薯,既可以新鲜食用又可以膨化加工,有利于形成更完善产业链,助力未来乡村的提质增效。
(2)本发明方法构建以马铃薯F1代实生苗为基础的脱毒微型薯及试管小薯体系,不但极显著缩小了马铃薯杂交育种的种子量需求(一般需3000粒及以上实生种子),而且试管小薯也为早期鉴定及快速推进育种进程提供了基础,另外采用碘液表面染色法简易初筛(利用性状关联,间接筛选鉴定直链淀粉与RS3),显著缩减了流程繁琐复杂测定两种抗性淀粉的样品数量,育种方法具有省时、省工、节本的技术优势。
(3)本发明方法具有密切亲缘关系但特性显著不同的中薯3号和中薯5号为亲本,有效克服了马铃薯多倍体遗传杂合、农艺性状不易稳定的问题,便于聚焦目标两类抗性淀粉的针对性聚合改良,同时针对性以易开花结实的中薯5号为母本便于获得大的育种群体,育种方法具有简捷高效的突出优点。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述,以下列举的仅是本发明的具体实施例,但本发明的保护范围不仅限于此。
下列实施例中提供的育种方法是以RS3较高的中薯3号和RS2较高的中薯5号为基础的兼用型高抗性淀粉马铃薯的育种方法。
其中,中薯3号是中国农业科学院蔬菜花卉研究所选育的鲜食马铃薯新品种,品种审定证书号为桂审薯2004003号。该亲本RS3含量4.5%,RS2含量30.6%,可购于中国农业科学院或一般市场。
中薯5号是中国农业科学院蔬菜花卉研究所选育的鲜食马铃薯新品种,品种审定证书号为湘审薯2016003。该亲本RS3含量2.3%,RS2含量43.8%,可购于中国农业科学院或一般市场。
实施例1
马铃薯试管小薯和成熟薯块碘染色、RS3、RS2及直链淀粉相关性研究
选用中薯3号、中薯5号、中薯早30、青薯5号、青薯9号、兴佳2号、浙薯937、东农303、中早45、中薯早39、AG370等11个品种各10块试管小薯及成熟薯块为材料,开展了碘染色、RS3、RS2及直链淀粉的相关性研究(见表1),结果发现:试管小薯的碘染色及RS3、RS2、直链淀粉与成熟薯块的都显著相关,碘染色、RS3和直链淀粉三者之间显著相关,而碘染色、RS3、直链淀粉与RS2之间相关性不显著。因此,可以利用小薯碘染色法进行早期间接快速初筛成熟薯块的RS3,试管小薯RS2进行成熟薯块的RS2的早期初筛,这不但为本发明早期鉴定及快速育种提供了基础,而且省工节本,显著缩减了样品数量。
表1马铃薯试管小薯与成熟茎块及碘染法与直链淀粉、RS3和RS2相关系数
实施例2
一种兼用型高抗性淀粉马铃薯的选育方法,具体步骤如下:
(1)以中薯3号为父本,以更易开花结实的中薯5号为母本,进行杂交,获得的F1代实生种子50粒;
(2)将F1代实生种子,在无菌培养基上发芽成苗,构建马铃薯试管小薯体系,取试管小薯781块,切成两块,取其一块,以中薯3号为对照先采用碘染表面染色法初筛,选留与中薯3号染色深浅相仿或更深的183块,再测定RS2含量,选取RS2≥中薯5号(43.8%)样品的对应小薯32块,进行微型薯生产,获得S1 46个;
(3)S1,株系种植,收获薯块,采用碘染法进行表面染色,选留染色以亲本B染色深浅相仿或更深且株系内纯合稳定的株系23个,分别测定RS2和RS3含量,选留RS2≥中薯5号(43.8%)和RS3≥中薯3号(4.5%)的无性系S2 17个;
(4)S2,综合评价抗性淀粉,选留RS2≥45%、RS3≥5%无性系S3 6个;
(5)S3,测定还原糖含量,选留还原糖含量≤双亲(中薯3号0.32%和中薯5号0.56%)的无性系S4 2个;
(6)S4,构建种苗繁育及良种栽培技术,最终选育兼用型高抗性淀粉马铃薯1个,初定名“浙宜糖薯”。
各品种的干物质、还原糖、RS2、RS3、铁及锌的比较见表2。
表2中薯3号和中薯5号杂交选育“浙宜糖薯”的各性状指标比较
备注:*表示0.05水平上极显著差异
表2中各个指标的测定方法如下:干物质:GBT8858-1988水果、蔬菜产品中干物质和水分含量测定方法;还原糖含量测定方法:GB/T 5009.7-2003食品中还原糖的测定;RS2和RS3:Shu等.The influences of chain length of amylopectin on resistant starchin rice(Oryza sativa L.).2007,59:504-509;脂肪:GB/T 5009.6-2003食品中脂肪的测定;估算血糖生成指数(eGI):等.A starch hydrolysis procedure toestimate glycemic index,Nutrition Research,1997,17:427-437;锌:GB/T5009.14-2003。
经品比试验,选育的“浙宜糖薯”干物质含量18.9%、还原糖含量0.29%、RS2含量45.3%、RS3含量5.1%、脂肪含量0.5%、估算血糖生成指数仅57.3及锌含量13.6mg/kg。其中,还原糖含量和估算血糖生成指数低于双亲、RS2、RS3和脂肪高于双亲,尤其是估算血糖生成指数显著更低,特别适合糖尿病及高血脂的人群食用,这与品种的干物质含量高有关,也可能与微型薯培养过程中发生体细胞发生变异有关。估算血糖生成指数显著更低,是还原糖含量低、高RS2和高RS3的综合作用结果,同时脂肪含量高也容易与直链淀粉形成直链淀粉-脂质复合体,起到有效阻止淀粉酶接触消化的积极作用。
另外,锌营养被美誉为生命之花,对婴幼儿童智力于生体发育尤为重要。锌是微营养生物强化的重点,这种重要营养的含量“浙宜糖薯”为13.6mg/k,高于双亲,具有更高的微营养品质,这可能与抗性淀粉含量的提高有利于促进矿质元素的吸收有关。
因此,本发明选育的品种,具有更优的功能营养特性,这正是健康中国行动所需的,既适合特殊糖尿病及高血脂的人群食用,也有助于改善全球关注的锌微营养缺乏公共问题。另外,本发明选育的品种,RS2和RS3都高,蒸煮鲜食和膨化食品开发兼顾,完善产业链,是未来提质增效的亮点。
Claims (1)
1.一种兼用型高抗性淀粉马铃薯的选育方法,其特征在于,具体步骤如下:
(1)以中薯3号为父本,以更易开花结实的中薯5号为母本,进行杂交,获得的F1代实生种子;
(2)将F1代实生种子,在无菌培养基上发芽成苗,构建马铃薯试管小薯体系,取试管小薯,切成两块,取其一块,以中薯3号为对照先采用碘染表面染色法初筛,选留与中薯3号染色深浅相仿或更深的小薯块,再测定RS2含量,选取RS2≥中薯5号样品的对应小薯,中薯5号的RS2含量为43.8%,进行微型薯生产,获得S1;
(3)S1,株系种植,收获薯块,采用碘染法进行表面染色,选留染色以中薯3号染色深浅相仿或更深且株系内纯合稳定的株系,分别测定RS2和RS3含量,选留RS2≥中薯5号和RS3≥中薯3号的无性系S2,中薯5号的RS2含量为43.8%,中薯3号的RS3含量为4.5%;
(4)S2,综合评价抗性淀粉,选留RS2≥45%、RS3≥5%无性系S3;
(5)S3,测定还原糖含量,选留还原糖含量≤双亲的无性系S4,中薯3号 的还原糖含量为0.32%,中薯5号的还原糖含量为0.56%;
(6)S4,构建种苗繁育及良种栽培技术,最终选育兼用型高抗性淀粉马铃薯。
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