CN114394945A - 一种化合物作为靶向磷酸甘油酸激酶pgk1的抑制剂的应用 - Google Patents

一种化合物作为靶向磷酸甘油酸激酶pgk1的抑制剂的应用 Download PDF

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CN114394945A CN202111676212.8A CN202111676212A CN114394945A CN 114394945 A CN114394945 A CN 114394945A CN 202111676212 A CN202111676212 A CN 202111676212A CN 114394945 A CN114394945 A CN 114394945A
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Abstract

本发明涉及药物的研发技术领域，尤其涉及一种化合物作为靶向磷酸甘油酸激酶PGK1的抑制剂的应用，所述化合物具有式Ⅰ所示的结构；其中，R1选自式Ⅱ或式Ⅲ所示的结构；R2、R3、R4和R7独立的选自氢或C1～C30烷基；R5选自经取代的或未经取代的C6～C30芳基；R6选自氢、C1～C30烷基或卤素。本发明对具有式Ⅰ所示结构的化合物进行生物实验验证，通过PQ毒素诱导的果蝇模型发现所述化合物具有抗氧化应激作用；通过酶活实验发现化合物在一定范围内能激活PGK1；通过细胞缺氧缺血模型发现化合物具有神经保护作用；通过流式及western blot实验发现化合物具有抗炎，抑制细胞凋亡的作用。

Description

一种化合物作为靶向磷酸甘油酸激酶PGK1的抑制剂的应用
技术领域
本发明涉及药物的研发技术领域，尤其涉及一种化合物作为靶向磷酸甘油酸激酶PGK1的抑制剂的应用。
背景技术
脑卒中(Cerebral Stroke)又称中风，是因脑部血管堵塞或破裂导致脑组织缺血缺氧， 进而造成脑组织损伤的一组疾病，具有发病率高、致残率高、死亡率高和复发率高的特点 (Stroke and stroke care in China:huge burden,significant workload,and anational priority. Stroke 2011,42,3651-3654.)。缺血性脑卒中最常见的发病原因是脑部供血血管内壁上有血 栓，脱落后导致动脉栓塞，引起急性神经细胞死亡和迟发型神经细胞死亡，后者主要是一 种程序性细胞死亡，即细胞凋亡(Delayed neuronal death inthe CA1 pyramidal cell layer of the gerbil hippocampus following transientischemia is apoptosis.J Neurosci 15,1001-1011.)，是脑 组织缺血缺氧性损伤后的主要病理改变(Programmed cell death in cerebral ischemia.J Cereb Blood FlowMetab 21,99-109)。脑卒中治疗研究者认为“血管再通+神经保护”治疗模式是 最佳的治疗策略(脑卒中治疗靶点和药物研究.中国药理学与毒理学杂志， 2016,30(12):1264-1272.)，但临床上并没有理想的神经保护药物可用。因此，迫切需要开发 新颖、具有神经保护作用的抗细胞凋亡药物，用于脑卒中的临床治疗(Neuroprotective strategiestargeting apoptotic and necrotic cell death or stroke.Apoptosis,2009, 14(4):469–477.)。
ɑ1肾上腺素受体拮抗剂特拉唑嗪(Terazosin，TZ)通过促进PGK1释放ATP，进而 激活分子伴侣Hsp90的活性，提高抗逆性，保护应激细胞，抑制细胞凋亡，缓解大鼠脑卒 中症状(Terazosin activates Pgk1 and Hsp90 to promote stressresistance.Nature ChemBio, 2015,11(1):19-25.)。TZ临床上作为降血压药物使用，在起到抑制细胞凋亡作用的同时，不 可避免的会带来血压降低的副作用。因此，TZ对于PGK1的激活作用存在一定的缺陷。所 以寻找新的靶向PGK1抗细胞凋亡抑制剂，对脑卒中治疗有重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种化合物作为靶向磷酸甘油酸激酶 PGK1的抑制剂的应用。
本发明提供了一种化合物作为靶向磷酸甘油酸激酶PGK1的抑制剂的应用，所述化合 物具有式Ⅰ所示的结构；
Figure BDA0003451388480000011
其中，R1选自式Ⅱ或式Ⅲ所示的结构；
Figure BDA0003451388480000021
R2、R3、R4和R7独立的选自氢或C1～C30烷基；
R5选自经取代的或未经取代的C6～C30芳基；
R6选自氢、C1～C30烷基或卤素。
R1选自式Ⅱ所示的结构时，所述化合物具有式Ⅰ-1所示的结构；
Figure BDA0003451388480000022
式Ⅰ-1中，R2、R3和R4独立的选自氢或C1～C30烷基；
R5选自经取代的或未经取代的C6～C30芳基；
R6选自氢、C1～C30烷基或卤素。
R1选自式Ⅲ所示的结构时，所述化合物具有式Ⅰ-2所示的结构；
Figure BDA0003451388480000023
式Ⅰ-2中，R2、R3、R4和R7独立的选自氢或C1～C30烷基；
R5选自经取代的或未经取代的C6～C30芳基。
在本发明的某些实施例中，R2、R3、R4和R7独立的选自氢或C1～C10烷基。
在本发明的某些实施例中，R2选自氢或甲基。
在本发明的某些实施例中，R3选自氢、甲基、乙基或异丙基。
在本发明的某些实施例中，R4选自氢或甲基。
在本发明的某些实施例中，R7选自氢或甲基。
在本发明的某些实施例中，R5选自经取代的或未经取代的C6～C30芳基，所述取代的 取代基为卤素。
在本发明的某些实施例中，R5选自
Figure BDA0003451388480000024
在本发明的某些实施例中，R6选自氢、C1～C10烷基或卤素。
在本发明的某些实施例中，R6选自氢、甲基或氟。
在本发明的某些实施例中，具有式Ⅰ-1所示结构的化合物选自以下结构；
Figure BDA0003451388480000031
Figure BDA0003451388480000041
Figure BDA0003451388480000051
Figure BDA0003451388480000061
Figure BDA0003451388480000071
Figure BDA0003451388480000081
Figure BDA0003451388480000091
Figure BDA0003451388480000101
Figure BDA0003451388480000111
Figure BDA0003451388480000121
在本发明的某些实施例中，具有式Ⅰ-2所示结构的化合物选自以下结构；
Figure BDA0003451388480000122
Figure BDA0003451388480000131
Figure BDA0003451388480000141
Figure BDA0003451388480000151
Figure BDA0003451388480000161
Figure BDA0003451388480000171
本发明对上文所述的具有式Ⅰ所示的结构的化合物的来源并无特殊的限制，可以自 制，也可以为一般市售。
本发明还提供了一种上文所述的具有式Ⅰ所示结构的化合物的互变异构体、内消旋 体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体和可药用盐中的至少一种作为靶向磷酸甘油酸 激酶PGK1的抑制剂的应用。
本发明还提供了一种上文所述的具有式Ⅰ所示结构的化合物、其互变异构体、内消旋 体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体和可药用盐中的至少一种在抑制细胞凋亡中的 应用。
本发明还提供了一种上文所述的具有式Ⅰ所示结构的化合物、其互变异构体、内消旋 体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体和可药用盐中的至少一种在制备预防或治疗脑 卒中神经保护药物中的应用。
在本发明的某些实施例中，所述脑卒中为缺血性脑卒中。
在本发明的某些实施例中，所述预防或治疗脑卒中神经保护药物包括上文所述的具有 式Ⅰ所示结构的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体和可药用盐中的至少一种，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明还提供了一种上文所述的具有式Ⅰ所示结构的化合物、其互变异构体、内消旋 体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体和可药用盐中的至少一种在制备抗炎药物中的 应用。
在本发明的某些实施例中，所述抗炎药物包括上文所述的具有式Ⅰ所示结构的化合 物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体和可药用盐中的至少一种，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明对具有式Ⅰ所示结构的化合物进行生物实验验证，通过PQ毒素诱导的果蝇模 型发现所述化合物具有抗氧化应激作用；通过酶活实验发现化合物在一定范围内能激活 PGK1；通过细胞缺氧缺血模型发现化合物具有神经保护作用；通过流式及western blot实 验发现化合物具有抗炎，抑制细胞凋亡的作用，有希望成为潜在的细胞凋亡抑制剂，为缺 血性脑卒中的治疗提供了新的选择。
附图说明
图1为本发明实施例1中的两种化合物对PQ诱导的果蝇氧化应激模型的作用；
图2为不同浓度的化合物在一定范围内对PGK1激活作用；
图3为不同浓度的化合物对缺血缺氧后PC12细胞活性的影响；
图4为本发明的化合物对缺血缺氧后PC12细胞凋亡的影响；
图5为本发明中不同浓度的化合物作用于LPS诱导RAW264.7细胞对炎症释放 因子NO的影响；
图6为本发明中不同浓度的化合物作用于LPS诱导RAW264.7细胞对炎症释放 因子TNF-α、IL-1β的影响；
图7为本发明中不同浓度的化合物作用于LPS诱导RAW264.7细胞的抗氧化作 用；
图8为本发明中不同的化合物作用于LPS诱导RAW264.7细胞对炎症相关蛋白 iNOX和COX-2的影响。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描 述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本 领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明 保护的范围。
实施例中采用的原料及试剂均为一般市售。
其中，果蝇w1118来自于兰州大学，生长状态良好。
人源PGK1的cDNA来自于上海生工生物工程股份有限公司。
含有His标签的pET28a(+)载体来自于北京索莱宝科技有限公司。
BL21(DE3)化学感受态细胞来自于上海翌圣生物科技公司。
大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)来自于武汉普诺赛生命科技有限公司。
RAW264.7细胞来自于中国科学院。
实施例1
PQ(百草枯)诱导的果蝇氧化应激模型效果
果蝇w1118饲养在生化培养箱中，温度设定为25℃，在含有20g玉米粉、5.875g酵母、1.625g琼脂、34.375g蔗糖、0.5g苯甲酸钠、3.1mL丙酸和1L水的混合物上饲养。每组果 蝇20只。
选取具有式Ⅰ-1所示结构中的一种化合物，具有式Ⅰ-1-1所示的结构；
Figure BDA0003451388480000181
选取具有式Ⅰ-2所示结构中的一种化合物，具有式Ⅰ-2-1所示的结构；
Figure BDA0003451388480000182
每个化合物分别设置对照组和实验组。对照组：用蔗糖溶液配置好的质量浓度为0.002％的化合物溶液处理果蝇48h；对照组的目的是证明该化合物在此浓度下对果蝇正常存活无影响。实验组：先用蔗糖溶液配置好的质量浓度为0.002％的化合物溶液处理果蝇24h，再用6mg/mL百草枯处理，监测各组果蝇的存活情况。
图1为本发明实施例1中的两种化合物对PQ诱导的果蝇氧化应激模型的作用，其中， 797指式Ⅰ-1-1，Z11指式Ⅰ-2-1。从图1中可知，上述化合物在质量浓度为0.002％时对果蝇的正常生长无影响；加入6mg/mL百草枯处理后果蝇致死率达到50％，而加入质量浓度0.002％的化合物后果蝇的存活率明显提高，说明这种化合物具有抗氧化作用，且在PQ诱导的氧化模型中效果显著。
实施例2
对PGK1激活作用的效果
为了诱导PGK1在体外的表达，将人源PGK1的cDNA克隆到含有His标签的pET28a(+)载体。用0.5mM IPTG诱导蛋白质的表达。5mM IPTG诱导BL21(DE3)化学感受态细胞 中的蛋白质表达。在提取缓冲液(20mM磷酸钠，500mM氯化钠，5mM咪唑，5％的甘油， 蛋白酶抑制剂混合物(100倍浓缩DMSO溶液)，pH7.9)中裂解细胞后，上清液用镍珠 (AdarBiotech)纯化。洗脱缓冲液(20mM磷酸钠，500mM氯化钠，80mM咪唑，5％的 甘油，蛋白酶抑制剂混合物(100倍浓缩DMSO溶液)，pH7.9)被用来洗脱His标记的PGK1。 为了测量PGK1活性，将饱和量的底物(1.6mM GAP，1mM(βNAD，1mM ADP，20ng/μL GAPDH)与纯化的重组小鼠PGK1 His蛋白(2μg/mL)混合，并在缓冲液(20mM Tris， 100mM NaCl，0.1mM MgSO4，10mM Na2HPO4，2mMDTT，pH 8.6)中加入实施例1 中的化合物(1μM～1nM)进行反应，在339nm的吸光度波长下检测。
图2为不同浓度的化合物在一定范围内对PGK1激活作用。从图2中可知，在一定范围内，化合物式Ⅰ-1-1(10μM～1nM)和化合物式Ⅰ-2-1(10μM～1nM)均对PGK1具有激 活作用。
实施例3
对神经细胞缺血缺氧损伤的保护效果
将大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)接种于96孔板，培养至贴壁，然后分为对照组、OGD/R1组和OGD/R2组。对照组用Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM,HyClone)在体积浓度95％O2、5％CO2的培养箱中培养。OGD/R1组加入化合物式Ⅰ-1-1 (12.5～1.5625μM)，OGD/R2组加入化合物式Ⅰ-2-1(12.5～1.5625μM)，在体积浓度95％O2、 5％CO2的培养箱中培养24h。然后换成含有药物的无糖培养基(北京阳光生物技术有限公 司)，其中含有除葡萄糖以外的所有标准成分，在37℃的三气培养箱(体积浓度94％N2、 5％CO2和1％O2)中培养12h。用含有葡萄糖的DMEM培养基代替，并在37℃的体积浓 度95％O2、5％CO2的培养箱中培养24h进行复氧。
图3为不同浓度的化合物对缺血缺氧后PC12细胞活性的影响。从图3中可知，化合物在1.5625～25μM浓度下对PC12细胞的正常生长无影响；经过OGD12h/R24h处理，PC12 细胞存活率仅为50％左右，而加入化合物式Ⅰ-1-1和化合物式Ⅰ-2-1(1.5625-25μM)后 PC12细胞的存活率明显提高，说明随着化合物浓度增大(1.5625-25μM)，缺血缺氧损伤 后PC12细胞活力有明显改善。
实施例4
抑制细胞凋亡的效果
PC12细胞以每孔4×105个的密度一式三份的接种于6孔板中培养至贴壁，分别加入实 施例1的化合物1.5625μM孵育24h。经过OGD 12h/R24h处理后收集细胞，并用PBS洗 涤细胞，用1×Binding Buffer悬浮细胞，离心，弃上清，用1×Binding Buffer重悬细胞，每管加入100μL细胞(1×105个)，加入5μL Annexin V-FITC，室温，避光混匀10min，加入 5μLPI避光孵育5min，加入PBS至500μL，1h后用流式细胞仪检测。
图4为本发明的化合物对缺血缺氧后PC12细胞凋亡的影响，其中，797指式Ⅰ-1-1，Z11指式Ⅰ-2-1。从图4中可知，加入化合物式Ⅰ-1-1或化合物式Ⅰ-2-1(3.125μM)之后， 对于PC12细胞，凋亡细胞逐渐减少，说明化合物可以抑制缺血缺氧损伤后PC12细胞凋亡。
实施例5
抑制细胞炎症的效果
RAW264.7细胞以每孔5,000个细胞接种于96孔板中培养至贴壁。在无血清培养基中 加LPS(1μg/mL)处理细胞1.5h后，再加入化合物Ⅰ-1-1或Ⅰ-2-1(0.32～8μM)培养24h。 用硝酸盐/亚硝酸盐检测试剂盒测量上清液的NO产生，使用Griess试剂在540nm的光密 度下进行测定。使用ELISA试剂盒(Boster，中国武汉)测量IL-6、TNF-α和IL-1β的浓 度。通过荧光染色和流式细胞仪测定细胞中ROS含量。
图5为本发明中不同浓度的化合物作用于LPS诱导RAW264.7细胞对炎症释放因子NO的影响(图5中的图A为化合物式Ⅰ-1-1作用于LPS诱导RAW264.7细胞对炎症释放 因子NO的影响，图5中的图B为化合物式Ⅰ-2-1作用于LPS诱导RAW264.7细胞对炎症 释放因子NO的影响)；图6为本发明中不同浓度的化合物作用于LPS诱导RAW264.7细 胞对炎症释放因子TNF-α、IL-1β的影响(图A为化合物式Ⅰ-1-1对IL-1β的影响，图B 为化合物式Ⅰ-1-2对IL-1β的影响，图C为化合物式Ⅰ-1-1对TNF-α的影响，图D为化合 物式Ⅰ-1-2对TNF-α的影响)。从图5、图6中可知，加入化合物式Ⅰ-1-1和化合物式Ⅰ-2-1 之后，对于LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型，化合物具有抗炎的能力。
图7为本发明中不同浓度的化合物作用于LPS诱导RAW264.7细胞的抗氧化作用，其中，7979989指式Ⅰ-1-1，Z112553128指式Ⅰ-2-1，加入化合物式Ⅰ-1-1或化合物式Ⅰ-2-1 之后抑制LPS诱导的细胞内ROS产生。图7中的A为ROS荧光染色图像对比，图7 中的B为相对荧光强度分析的量化图。其他图为流式细胞仪检测不同浓度下，对ROS产 生的影响，绿色代表M组，红色代表对照组，粉色代表研究组。与模型组和对照组相比， 说明了化合物式Ⅰ-1-1和化合物式Ⅰ-2-1对细胞内ROS生成的抑制作用。图7中的C为8 μM下化合物式Ⅰ-1-1的ROS产生抑制情况，图7中的D为化合物式Ⅰ-1-1 1.6μM的 ROS产生抑制情况，图7中的E为化合物式Ⅰ-1-1在0.32μM下的ROS产生抑制情况， 图7中的F为化合物式Ⅰ-2-1在8μM的ROS产生抑制情况，图7中的G是化合物式 Ⅰ-2-1的1.6μM下ROS抑制情况，图7中的H为化合物式Ⅰ-2-1的0.32μM下的ROS 产生情况。从图7中可知，对于LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型，化合物式Ⅰ-1-1和化 合物式Ⅰ-2-1具有抗氧化的能力。
实施例6
实施例1中的化合物对炎症相关蛋白，iNOS和COX-2蛋白表达的效果
RAW264.7细胞以每孔5,000个细胞接种于96孔板中培养至贴壁。加入LPS(1μg/mL)预培养1.5h后，再加入化合物式Ⅰ-1-1和化合物式Ⅰ-2-1(0.32～8μM)培养24h，低温离 心收集RAW264.7细胞，加入细胞裂解液进行裂解。裂解液在低温离心机中14000xg离心 15min，上清液待用。测不同浓度的标准品在570nm的吸光度并分别减去空白孔吸光度值， 绘制在570nm吸光度对浓度(μg/ml)的标准曲线。使用标准曲线定量待测样品蛋白浓度。 待测蛋白样品液加入1×buffer缓冲液，煮沸10min，分装待用。
配制分离胶和浓缩胶，插入梳子，加入1×电泳缓冲液，拔去梳子，上样。样品首先在 80V恒压下电泳至染料接近分离胶顶端，条带呈平的状态，然后在120V恒压下电泳至染料接近分离胶底部。然后把胶放在1×转膜缓冲液中，按照以下顺序进行转膜操作；白板(正极)-纤维垫-滤纸-PVDF膜-凝胶-滤纸-纤维垫-黑板(负极)，在100V恒压下，4℃条件下 转膜。膜在5％脱脂奶粉中室温孵育75min，封闭膜上的非特异性结合，封闭的膜用TBST 洗膜10min×3次。按照MARKER的分子量大小对膜进行裁剪，之后将裁剪后的膜分别孵 育iNOX和COX-2一抗，4℃孵育过夜，次日用TBST洗膜10min×3次，加入HRP标记的 二抗室温孵育1h，TBST洗膜10min×3次，曝光处理，每个特异性条带的灰度值用Image J 软件进行分析。
图8为本发明中不同的化合物作用于LPS诱导RAW264.7细胞对炎症相关蛋白iNOX和COX-2的影响，其中，7979989指式Ⅰ-1-1，Z112553128指式Ⅰ-2-1，化合物式Ⅰ-1-1 和化合物式Ⅰ-2-1可以降低LPS诱导的iNOS和COX-2蛋白表达。蛋白质印迹分析检 测iNOS和COX-2的蛋白表达。图A为化合物式Ⅰ-1-1处理后的蛋白表达水平印迹图， 图B为化合物式Ⅰ-1-1影响的COX-2蛋白表达水平量化图，图C为化合物式Ⅰ-1-1影响 的iNOS蛋白表达水平量化图，图D为添加化合物式Ⅰ-2-1后的蛋白表达水平印迹图，图 E为COX-2蛋白表达水平受化合物式Ⅰ-2-1影响，图F为iNOS蛋白表达水平受化合物式 Ⅰ-2-1影响。从图8中可知，随着化合物式Ⅰ-1-1和化合物式Ⅰ-2-1(0.32～8μM)浓度的 升高，化合物式Ⅰ-1-1和式Ⅰ-2-1可能通过减少促炎症介质iNOS和COX-2的表达达到抗 炎的作用。
本发明的化合物适用于缺血性脑卒中，化合物式Ⅰ-1-1和式Ⅰ-2-1能够保护缺血缺氧 损伤后的神经细胞，抑制细胞凋亡；还具有抗炎能力，能够减少脂多糖处理后巨噬细胞释 放的炎症因子，并且可能通过减少促炎症介质iNOS和COX-2的表达达到抗炎的作用。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。对这些实施例的多 种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不 脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于 本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范 围。

Claims (9)

1.一种化合物作为靶向磷酸甘油酸激酶PGK1的抑制剂的应用，所述化合物具有式Ⅰ所示的结构；
Figure FDA0003451388470000011
其中，R1选自式Ⅱ或式Ⅲ所示的结构；
Figure FDA0003451388470000012
R2、R3、R4和R7独立的选自氢或C1～C30烷基；
R5选自经取代的或未经取代的C6～C30芳基；
R6选自氢、C1～C30烷基或卤素。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，R2、R3、R4和R7独立的选自氢或C1～C10烷基；
R5选自经取代的或未经取代的C6～C30芳基，所述取代的取代基为卤素；
R6选自氢、C1～C10烷基或卤素。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，
R2选自氢或甲基；
R3选自氢、甲基、乙基或异丙基；
R4选自氢或甲基；
R5选自
Figure FDA0003451388470000013
R6选自氢、甲基或氟；
R7选自氢或甲基。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物选自以下结构；
Figure FDA0003451388470000021
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Figure FDA0003451388470000151
Figure FDA0003451388470000161
5.权利要求1～4任意一项所述的具有式Ⅰ所示结构的化合物的互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体和可药用盐中的至少一种作为靶向磷酸甘油酸激酶PGK1的抑制剂的应用。
6.权利要求1～4任意一项所述的具有式Ⅰ所示结构的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体和可药用盐中的至少一种在抑制细胞凋亡中的应用。
7.权利要求1～4任意一项所述的具有式Ⅰ所示结构的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体和可药用盐中的至少一种在制备预防或治疗脑卒中神经保护药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述脑卒中为缺血性脑卒中。
9.权利要求1～4任意一项所述的具有式Ⅰ所示结构的化合物、其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体和可药用盐中的至少一种在制备抗炎药物中的应用。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1934095A (zh) * 2004-03-08 2007-03-21 惠氏公司 离子通道调节剂
US20110112098A1 (en) * 2008-04-09 2011-05-12 Piona Dariavach Molecules inhibiting a metabolic pathway involving the syk protein tyrosine kinase and method for identifying said molecules
US20110212467A1 (en) * 2008-08-27 2011-09-01 University Of Southern California INHIBITORS OF dUTPase
US20110288083A1 (en) * 2010-05-21 2011-11-24 New York University Method of treating cancer by inhibition of protein kinase-like endoplasmic reticulum protein kinase
CN105920582A (zh) * 2008-12-10 2016-09-07 普渡研究基金会 基于细胞渗透性肽的激酶抑制剂
CN114306323A (zh) * 2021-12-31 2022-04-12 深圳瑞德林生物技术有限公司 一种化合物作为靶向磷酸甘油酸激酶pgk1的抑制剂的应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1934095A (zh) * 2004-03-08 2007-03-21 惠氏公司 离子通道调节剂
US20110112098A1 (en) * 2008-04-09 2011-05-12 Piona Dariavach Molecules inhibiting a metabolic pathway involving the syk protein tyrosine kinase and method for identifying said molecules
US20110212467A1 (en) * 2008-08-27 2011-09-01 University Of Southern California INHIBITORS OF dUTPase
CN105920582A (zh) * 2008-12-10 2016-09-07 普渡研究基金会 基于细胞渗透性肽的激酶抑制剂
US20110288083A1 (en) * 2010-05-21 2011-11-24 New York University Method of treating cancer by inhibition of protein kinase-like endoplasmic reticulum protein kinase
CN114306323A (zh) * 2021-12-31 2022-04-12 深圳瑞德林生物技术有限公司 一种化合物作为靶向磷酸甘油酸激酶pgk1的抑制剂的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHAO-JIA QIANG，等: "The Discovery of Novel PGK1 Activators as Apoptotic Inhibiting and Neuroprotective Agents", 《FRONT PHARMACOL.》, pages 1 - 17 *
VILLOUTREIX, BRUNO O.，等: "Tyrosine kinase Syk non-enzymatic inhibitors and potential anti-allergic drug-like compounds discovered by virtual and in vitro screening", 《PLOS ONE》, vol. 6, no. 6, pages 1 - 10 *

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