CN114375830B - 一种茭白花粉萌发的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种茭白花粉萌发的方法，旨在解决现有技术中茭白花粉离体培养不易萌发的问题。茭白花粉萌发的方法包括：将茭白雄花和茭白雌花采摘后放在培养皿中，将培养皿盖上培养皿盖后放入30‑35℃培养箱，放置50‑70分钟；收集茭白雄花中的花粉，并洒落在茭白花粉萌发剂中；所述茭白花粉萌发剂包括5.5质量份的马铃薯淀粉、18质量份的蔗糖、0.008质量份的硼酸、10质量份的PEG4000、0.05质量份的Ca(NO3)2和66.442质量份的蒸馏水。将洒落有花粉的茭白花粉萌发剂，置于28℃培养箱培养30‑35min。本发明中采用本发明中的茭白花粉萌发剂和萌发方法，可以使得茭白花粉萌发。
Description
技术领域
本发明属于茭白杂交技术领域，具体涉及一种茭白花粉萌发的方法。
背景技术
茭白是无性繁殖的作物，正常情况下不开花。茭白品种选育通常采用系统选育的方法，从自然变异株中选择优良单株进行选育。由于自然变异率低，优异变异数量少，导致茭白品种选育随机性大，效率低。目前，我们已研发了诱导茭白开花的方法，进一步通过应用杂交定向育种技术，可能成为破解这一瓶颈的关键。花粉活性是影响杂交育种的重要因素，茭白花粉本身活性较低，低温保存后活性会进一步下降，因此，通过离体培养的方式确认花粉活性，是茭白杂交育种的基础。
发明内容
本发明提供了一种茭白花粉萌发的方法，旨在解决现有技术中茭白花粉离体培养不易萌发的问题。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：一种茭白花粉萌发的方法，包括以下步骤：
步骤一：将茭白雄花和茭白雌花采摘后放在培养皿中，将培养皿盖上培养皿盖后放入30-35℃培养箱，放置50-70分钟；
步骤二：收集茭白雄花中的花粉，并洒落在茭白花粉萌发剂中；所述茭白花粉萌发剂包括5.5质量份的马铃薯淀粉、18质量份的蔗糖、0.008质量份的硼酸、10质量份的PEG4000、0.05质量份的Ca(NO3)2和66.442质量份的蒸馏水。
步骤三：将洒落有花粉的茭白花粉萌发剂，置于28℃培养箱培养30-35min。
进一步改进的方案：在步骤一中，将雌花的颖壳去除后保留柱头，然后放在培养皿中。
由于对花粉起到诱导作用的部位主要是柱头，通过去除颖壳，可以将柱头更好的裸露出来，对花粉的诱导效果更好。
进一步改进的方案：所述雄花和雌花来自不同的植株。
来自于不同植株的雌花对花粉的诱导效果更好。
进一步改进的方案：所述萌发剂制备时，先将马铃薯淀粉加入蒸馏水中，然后加热煮沸至马铃薯淀粉溶于蒸馏水中，然后加入蔗糖、硼酸、PEG4000和Ca(NO3)2。
进一步改进的方案：步骤一中的茭白雄花的采摘时间为散粉当天早上7点之前，采摘的雌花为处于授粉阶段的雌花。
进一步改进的方案：在步骤一中，将培养皿盖上培养皿盖后放入32℃培养箱，放置60分钟。
进一步改进的方案：在步骤二中，在茭白花粉萌发剂中加入IAA并使IAA浓度为10mmol/L。
茭白花粉萌发剂中加入IAA，可以进一步提高茭白花粉萌发剂对花粉的萌发效果。
本发明的有益效果为：
本发明中茭白花粉萌发剂采用5.5质量份的马铃薯淀粉、18质量份的蔗糖、0.008质量份的硼酸、10质量份的PEG4000、0.05质量份的Ca(NO3)2和66.442质量份的蒸馏水，萌发温度采用28℃；采用本发明中的除了该比例以外和温度外，茭白花粉的萌发率会受到严重影响甚至萌发率为0；此外，茭白花粉萌发剂若少了一种成分会导致茭白花粉的萌发率为0；其中，蔗糖和硼酸的质量份数尤其重要，对萌发率起着至关重要的作用。采用本发明中的茭白花粉萌发剂和萌发温度，可以使得茭白萌发率达到37.2％。此外，在将花粉洒落至茭白花粉萌发剂之前，先采用茭白雌花进行诱导花粉萌发，可以进一步提高茭白花粉的萌发率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简要介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关附图。
图1是采用本发明中萌发剂配方的花粉萌发的显微图。
图2是采用现有萌发剂配方的花粉萌发的显微图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚完整的描述。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明的实施例，本领域技术人员在没有创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例一：
本实施例提供了一种茭白花粉萌发的方法，包括以下步骤：
步骤一：将茭白雄花和茭白雌花采摘后放在培养皿中，将培养皿盖上培养皿盖后放入30-35℃培养箱，放置50-70分钟；其中，培养箱最佳温度为32℃，放置时间可以为60分钟。
可以将雌花的颖壳去除后保留柱头，然后放在培养皿中；在选择雌花时，优选来自于不同植株的雌花，采摘的雌花为处于授粉阶段的雌花。所述茭白雄花的采摘时间最好为散粉当天早上7点之前。
步骤二：收集茭白雄花中的花粉，并洒落在茭白花粉萌发剂中；所述茭白花粉萌发剂包括5.5质量份的马铃薯淀粉、18质量份的蔗糖、0.008质量份的硼酸、10质量份的PEG4000、0.05质量份的Ca(NO3)2和66.442质量份的蒸馏水。
其中，所述萌发剂制备过程为：先将马铃薯淀粉加入蒸馏水中，然后加热煮沸至马铃薯淀粉溶于蒸馏水中，然后加入蔗糖、硼酸、PEG4000和Ca(NO3)2。
步骤三：将洒落有花粉的茭白花粉萌发剂，置于28℃培养箱培养30-35min。
在上述方案的基础上，在步骤二中，还可以在茭白花粉萌发剂中加入IAA并使IAA浓度为10mmol/L。茭白花粉萌发剂中加入IAA，可以进一步提高茭白花粉萌发剂对花粉的萌发效果。
下面结合实验对本发明做进一步说明：
对比试验1：
S1、收集清晨采摘的1朵茭白雄花中的花粉，并洒落在0.1mL茭白花粉萌发剂中；所述茭白花粉萌发剂包括5.5质量份的马铃薯淀粉、a份质量份的蔗糖、b质量份的硼酸、10质量份的PEG4000、0.05质量份的Ca(NO3)2和蒸馏水(补充萌发剂到100质量份)。
S2、将洒落有花粉的茭白花粉萌发剂，置于c℃培养箱培养30min。
诱导萌发完毕后，将载玻片放在显微镜下观察。以花粉管长度等于或大于花粉粒直径作为萌发标准，统计每个视野中花粉萌发的数量和花粉粒总数，计算每个视野中的花粉萌发率，取平均值。
蔗糖质量份数梯度试验结果，其中，b为0.008，c为28：
硼酸质量份数梯度试验结果，其中，a为18，c为28：
| 硼酸质量份数(b) | 萌发率 |
| 0.002 | 0 |
| 0.004 | 0 |
| 0.006 | 7.5％ |
| 0.008 | 37.2％ |
| 0.01 | 12.7％ |
温度梯度试验结果，其中，a为18，b为0.008：
由此可知，当蔗糖质量份数为18，硼酸质量份数为0.008，萌发温度为28℃时，萌发条件最佳，萌发率为37.2％。
对比试验2：
S1、清晨将采摘的1朵茭白雄花和5朵茭白雌花采摘后放在培养皿中，将培养皿盖上培养皿盖后放入32℃培养箱，放置60分钟。
S2、收集1朵茭白雄花中的花粉，并洒落在0.1mL茭白花粉萌发剂中；所述茭白花粉萌发剂包括5.5质量份的马铃薯淀粉、18份质量份的蔗糖、0.008质量份的硼酸、10质量份的PEG4000、0.05质量份的Ca(NO3)2和蒸馏水(补充萌发剂到100质量份)。
S3、将洒落有花粉的茭白花粉萌发剂，置于28℃培养箱培养30min。
萌发率为42.7％，与对比实验1相比，效果更好；萌发图如图1。
对比试验3：
市场上用于萌发其它花粉的萌发剂及其它配方，如图2，萌发率均为0。
通过对比实验1-3可以得出，采用对比试验2为最佳方案，即本发明中的方案，为最佳方案。
本发明不局限于上述可选实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是落入本发明权利要求界定范围内的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种茭白花粉萌发的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：将茭白雄花和茭白雌花采摘后放在培养皿中，将培养皿盖上培养皿盖后放入30-35℃培养箱，放置50-70分钟；
步骤二：收集茭白雄花中的花粉，并洒落在茭白花粉萌发剂中；所述茭白花粉萌发剂包括5.5质量份的马铃薯淀粉、18质量份的蔗糖、0.008质量份的硼酸、10质量份的PEG4000、0.05质量份的Ca(NO3)2和66.442质量份的蒸馏水；
步骤三：将洒落有花粉的茭白花粉萌发剂，置于28℃培养箱培养30-35min。
2.根据权利要求1所述的一种茭白花粉萌发的方法，其特征在于：在步骤一中，将雌花的颖壳去除后保留柱头，然后放在培养皿中。
3.根据权利要求1或2所述的一种茭白花粉萌发的方法，其特征在于：所述雄花和雌花来自不同的植株。
4.根据权利要求1所述的一种茭白花粉萌发的方法，其特征在于：所述萌发剂制备时，先将马铃薯淀粉加入蒸馏水中，然后加热煮沸至马铃薯淀粉溶于蒸馏水中，然后加入蔗糖、硼酸、PEG4000和Ca(NO3)2。
5.根据权利要求1所述的一种茭白花粉萌发的方法，其特征在于：步骤一中的茭白雄花的采摘时间为散粉当天早上7点之前，采摘的雌花为处于授粉阶段的雌花。
6.根据权利要求1所述的一种茭白花粉萌发的方法，其特征在于：在步骤一中，将培养皿盖上培养皿盖后放入32℃培养箱，放置60分钟。
7.根据权利要求1所述的一种茭白花粉萌发的方法，其特征在于：在步骤二中，在茭白花粉萌发剂中加入IAA并使IAA浓度为10mmol/L。
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