CN114324902A - 胆固醇稳态的生物标志物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本公开提供胆固醇稳态生物标志物,其检测方法及其应用。本公开涉及的胆固醇稳态生物标志物包括谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇、24‑脱氢胆固醇,提供样本中生物标志物的参考范围,以及胆固醇合成综合评分的计算方法,并进一步给出根据胆固醇稳态标志物浓度范围或综合评分来评估受试者胆固醇代谢特征的方法,以及指导对胆固醇代谢异常进行个性化干预的方法。本公开提供的标志物检测方法及应用对人群的普适性强,可准确、全面地反映受试者的胆固醇代谢特征,揭示受试者血脂相关指标异常的主要原因,有效地提高医学干预过程的精准性。
Description
技术领域
本公开涉及胆固醇稳态的生物标志物及其应用。
背景技术
在植物中发现的植物固醇和动物中发现的动物固醇主要是一系列的芳香族三萜分子组分。它们具有多种生理功能,如调节细胞膜流动性等;其在脂筏中的结构会影响细胞信号。胆固醇主要是一类动物固醇,是类固醇激素和非人类胆汁酸的前体物质,但是在一些植物中也被发现存在。细胞中过量的胆固醇可能会结晶并导致细胞死亡。
胆固醇分为高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇两种,前者对心血管有保护作用,后者偏高则会增加个体罹患冠心病的风险。动脉粥样硬化性心血管疾病公认为当前全球健康的主要问题之一,其关键风险因素包括血液胆固醇水平的不平衡,尤其是高浓度的低密度脂蛋白胆固醇(Krobot K.J.,Yin D.D.,et al.2005)。
非胆固醇的固醇(noncholesterol Sterols,NCS,又名异固醇)主要是指在结构上与胆固醇相似的各种固醇,包括植物甾醇和几种环状前体分子。血液循环中高水平的胆固醇和潜在的植物甾醇被认为在动脉粥样硬化形成中起因果作用。与血清植物甾醇水平相关的基因变异会影响冠心病的风险。
生物体内胆固醇的稳态是一种在内源性合成、外源性(饮食)吸收和排泄(胆汁酸或胆汁胆固醇)之间的严格调节平衡。游离胆固醇的整体肠道吸收是由位于肠细胞和肝胆的胆固醇转运蛋白(NPCIL1)和由两个ATP结合盒(ABC)外排转运体组成的异二聚体(亚分类的5和8,即ABCG5和ABCG8)之间的相互作用调节的(Levy E,Spahis S,Sinnett D,etal.2007)。后者存在于小肠上皮细胞的顶部和肝胆的界面,不仅将多余的胆固醇运出到肠腔和胆汁而避免细胞受损,也可以防止饮食中植物甾醇在体内积累。
用于降低人体血浆胆固醇水平的干预方法主要涉及:1)抑制胆固醇生物合成;2)增加从组织到肠腔的胆固醇清除;3)减少胃肠道的胆固醇吸收。
目前对胆固醇代谢紊乱、血脂异常个体的干预还存在不足,其原因之一是每个个体的胆固醇代谢途径具有各自的特点,例如有的个体以胆固醇吸收增多为主,有的个体则表现为体内较高的胆固醇合成水平,笼统的干预方案并不能达到精确、有针对性的血脂管理效果。
当前针对血脂相关的检测项目主要有以下7项:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、脂蛋白(a)(LP(a))、载脂蛋白A(apo A)、载脂蛋白B(apo B)。然而直接测量血浆/血清中胆固醇并不能揭示其来源是细胞合成还是肠道吸收。
最近业界也开始探索利用与胆固醇代谢相关的生物标志物来了解个体的胆固醇代谢特征,指导患者降脂方案和生活方式的选择。但目前对标志物水平的生物学和临床意义的认识还不够深入全面,利用标志物进行的筛选、评估、预测工作存在效能不足的问题。
发明内容
有鉴于目前临床工作中对胆固醇代谢、血脂异常个体的医学干预存在针对性不强、干预效果不理想的问题,本公开提供胆固醇稳态生物标志物的检测方法及其用途。本公开亦提供胆固醇稳态生物标志物以及用于定量检测胆固醇稳态生物标志物的试剂在制备用于检测胆固醇稳态或评估受试者胆固醇代谢特征的试剂盒中的应用。
本公开的一方面提供胆固醇稳态生物标志物在评估受试者胆固醇代谢特征中的用途,所述胆固醇稳态生物标志物为选自谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇、24-脱氢胆固醇中的一种或多种。
在本公开进一步的实施方案提供的胆固醇稳态生物标志物在评估受试者胆固醇代谢特征中的用途中,所述评估包括:
从所述受试者采集血清或血浆样本;
检测所述样本中所述胆固醇稳态生物标志物的浓度;
将测得的所述样本中所述胆固醇稳态生物标志物的浓度与参考范围相比较;
根据比较结果提示所述受试者的胆固醇代谢特征。
在本公开进一步的实施方案提供的胆固醇稳态生物标志物在评估受试者胆固醇代谢特征中的用途中,所述参考范围为:
谷甾醇:1.78-4.10μg/mL,
菜油甾醇:3.61-7.40μg/mL,
胆甾烷醇:3.12-4.96μg/mL,
24-脱氢胆固醇:0.86-1.49μg/mL;
当检测到所述样本中谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇的一项或多项的浓度高于对应的所述参考范围的最大值时,提示所述受试者存在胆固醇吸收过度;当检测到所述样本中24-脱氢胆固醇的浓度高于对应的所述参考范围的最大值时,提示所述受试者存在胆固醇合成过度。
在本公开进一步的实施方案提供的胆固醇稳态生物标志物在评估受试者胆固醇代谢特征中的用途中,所述评估包括:
从所述受试者采集血清或血浆样本;
检测所述样本中所述胆固醇稳态生物标志物的浓度;
根据测得的所述样本中所述胆固醇稳态生物标志物的浓度计算胆固醇吸收综合评分;
根据胆固醇吸收综合评分提示所述受试者的胆固醇代谢特征。
在本公开进一步的实施方案提供的胆固醇稳态生物标志物在评估受试者胆固醇代谢特征中的用途中,所述胆固醇吸收综合评分的计算方式为:
当所述样本中谷甾醇浓度<1.78μg/mL时,计谷甾醇分值为1.0,当所述样本中谷甾醇浓度为1.78-4.10μg/mL时,计谷甾醇分值为3.5,当所述样本中谷甾醇浓度>4.10μg/mL时,计谷甾醇分值为7.0;
当所述样本中菜油甾醇浓度<3.61μg/mL时,计菜油甾醇分值为1.0,当所述样本中菜油甾醇浓度为3.61-7.40μg/mL时,计菜油甾醇分值为3.5,当所述样本中菜油甾醇浓度>7.40μg/mL时,计菜油甾醇分值为7.0;
当所述样本中胆甾烷醇浓度<3.12μg/mL时,计胆甾烷醇分值为1.0,当所述样本中胆甾烷醇浓度为3.12-4.96μg/mL时,计胆甾烷醇分值为3.5,当所述样本中胆甾烷醇浓度>4.96μg/mL时,计胆甾烷醇分值为7.0;
胆固醇吸收综合评分=谷甾醇分值+菜油甾醇分值+胆甾烷醇分值。
在本公开进一步的实施方案提供的胆固醇稳态生物标志物在评估受试者胆固醇代谢特征中的用途中,当胆固醇吸收综合评分>12.0时,提示所述受试者存在胆固醇吸收过度。
在本公开进一步的实施方案提供的胆固醇稳态生物标志物在评估受试者胆固醇代谢特征中的用途中,当提示所述受试者存在胆固醇吸收过度时,进一步指导所述受试者使用抑制胆固醇吸收的药物;当提示所述受试者存在胆固醇合成过度时,进一步指导所述受试者使用控制胆固醇合成的药物。
在本公开进一步的实施方案提供的胆固醇稳态生物标志物在评估受试者胆固醇代谢特征中的用途中,检测所述样本中所述胆固醇稳态生物标志物的浓度的步骤包括:
向所述样本中加入氘代内标;
用碱性溶液将所述样本皂化;
用有机溶剂从皂化后的溶液中萃取脂类,将萃取到的脂类干燥;
以复溶液将萃取到的脂类复溶;
通过液质联用法对胆固醇稳态生物标志物的浓度进行定量检测。
本公开的又一方面提供一种试剂盒,所述试剂盒包含用于定量检测样本中胆固醇稳态生物标志物浓度的试剂,所述胆固醇稳态生物标志物为选自谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇、24-脱氢胆固醇中的一种或多种,所述样本为血清或血浆。
在本公开进一步的实施方案提供的试剂盒中,所述用于定量检测样本中胆固醇稳态生物标志物浓度的试剂包括谷甾醇-d7,菜油甾醇-d6,24-脱氢胆固醇-d6,正己烷,氢氧化钾,乙醇,甲醇,异丙醇。
本公开的技术方案具备以下优点:
1.提供的生物标志物的检测方法样本用量小,前处理过程简便,定量准确快速,适合临床工作的需求。
2.提出了胆固醇稳态生物标志物绝对浓度的参考范围,对人群的普适性好,使得评估过程受个体差异的影响小,能够更灵敏地发现受试者在胆固醇吸收或合成方面的异常情况。
3.提出了多指标联合得出胆固醇吸收综合评分的方案,可更准确、全面地反映受试者的胆固醇代谢特征,揭示受试者血脂相关指标异常的主要原因,提供个性化的医学干预方案,有效地提高干预手段的精准性。
附图说明
参考以下附图,根据一个或多个不同实施例对本公开进行详细描述。提供的附图是为了便于理解本公开,而不应认为是对本公开的广度、范围或适用性的限制。
图1是血清样本胆固醇合成标志物水平与总胆固醇(TC)水平的线性相关图。
图2是血清样本胆固醇合成标志物水平与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的线性相关图。
图3是血清样本胆固醇吸收综合评分与总胆固醇(TC)水平的线性相关图。
图4是血清样本胆固醇吸收综合评分与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的线性相关图。
具体实施方式
本公开涉及多种与胆固醇稳态相关的标志物的采样、检测和应用。
本公开的一方面涉及从受试者采集血浆或血清样品,对样本中一个或多个胆固醇稳态生物标志物进行定量分析。进一步地,本公开涉及血浆或血清样品的前处理方法;样品中生物标志物的定量检测方法;用于定量检测胆固醇稳态生物标志物的试剂,及包含该试剂的试剂盒。本公开也涉及胆固醇稳态生物标志物以及用于定量检测胆固醇稳态生物标志物的试剂在制备用于检测胆固醇稳态或评估受试者胆固醇代谢特征的试剂盒中的应用。
本公开的又一方面涉及对样品中胆固醇稳态生物标志物的定量检测结果进行分析和/或利用的方法。进一步地,本公开涉及多个胆固醇稳态生物标志物定量值的参考范围;利用多个胆固醇稳态生物标志物的定量检测数值进行评分的方法;利用参考范围和/或评分来评估受试者胆固醇代谢特征的方法,以及进一步指导对受试者进行医学干预或调整生活方式的方法。
在本公开中,术语“受试者”意指动物,优选哺乳动物,更优选人。优选地,本公开涉及的受试者可以是表观健康的,即并未表现明显的疾病症状,但受试者有可能在一项或多项血脂相关指标上偏离一般认为的正常范围。在本公开中,当采集自受试者的血清样本胆固醇浓度水平≥5.2mmol/L或LDL-C浓度水平≥3.4mmol/L时,认为该受试者存在血脂相关指标偏离正常范围(或称胆固醇水平偏离正常范围)的现象。
本公开涉及的胆固醇稳态生物标志物主要包括β-谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇、24-脱氢胆固醇。以β-谷甾醇、菜油甾醇等为代表的植物甾醇不能由人体合成,全部由饮食中获取,本公开以谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇作为胆固醇吸收的标志物。在涉及超过20种酶的两条胆固醇体内合成途径中,同时也生成了7-胆烯烷醇和24-脱氢胆固醇,本公开以24-脱氢胆固醇作为胆固醇合成的标志物。
生物标志物的定量检测方法和试剂
本公开提供一种方法,用于对采集自受试者的血清或血浆样品进行上述一种或多种胆固醇稳态生物标志物(谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇、24-脱氢胆固醇)的定量分析。出于定量准确的考虑,优选向样品中加入适当的已知量的氘代内标。与本公开待测标志物相适应的氘代内标优选为谷甾醇-d7,菜油甾醇-d6,24-脱氢胆固醇-d6。样品的前处理过程包括用碱性溶液进行皂化,进行溶剂萃取,并以适当的溶剂将脂类复溶。经前处理的样品可利用色谱-质谱联用法检测目标生物标志物,优选液质联用,特别优选三重四极杆液质联用。液相色谱串联质谱的整个检测过程可在7分钟内快速完成,适合临床工作的需要。
进一步地,本公开也提供试剂,用于定量检测选自谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇、24-脱氢胆固醇中的一种或多种生物标志物。所述试剂包括谷甾醇-d7,菜油甾醇-d6,24-脱氢胆固醇-d6,正己烷,氢氧化钾,乙醇,甲醇,异丙醇。本公开还提供包含上述试剂的试剂盒。利用上述试剂或试剂盒,可对采集自受试者的血清或血浆样本中的生物标志物进行定量分析,并基于分析结果评估受试者的胆固醇代谢特征,指导受试者进行医学干预或调整生活方式。
生物标志物的参考范围
发明人对采集自受试者(表观健康,但可存在血脂相关指标偏离正常范围)的血清样本进行了检测。基于对大量临床样本检测结果的统计分析,得出胆固醇吸收标志物谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇的20%分位数处浓度值、80%分位数处浓度值如下表1所示。
表1大量临床样本的生物标志物百分位浓度值
百分位数 | 谷甾醇(μg/mL) | 菜油甾醇(μg/mL) | 胆甾烷醇(μg/mL) |
20% | 1.78 | 3.61 | 3.12 |
80% | 4.10 | 7.40 | 4.96 |
综合考虑受试者的人种、生活方式等因素,将适合中国人群的胆固醇稳态生物标志物浓度的参考范围确定如下。
胆固醇吸收标志物:
谷甾醇:1.78-4.10μg/mL
菜油甾醇:3.61-7.40μg/mL
胆甾烷醇:3.12-4.96μg/mL
胆固醇合成标志物:
24-脱氢胆固醇:0.86-1.49μg/mL
对于存在血脂相关指标偏离正常范围现象的受试者而言,当检测到其一个或多个胆固醇吸收标志物的浓度范围高于上述参考范围的最大值时,提示该受试者胆固醇异常可能源于吸收过度;当检测到其胆固醇合成标志物的浓度范围高于上述参考范围的最大值时,提示该受试者胆固醇异常可能源于合成过度。
通过对大量受试者的统计分析,发现人群中胆固醇代谢特征存在很大的个体差异。本公开提出以血清/血浆中胆固醇吸收、合成标志物的浓度绝对值的参考范围作为判断受试者胆固醇代谢类型的基础,相比于以标志物的相对比值为基础来进行判断的方式,本公开的判断方式具有更高的灵敏度,检出效能稳定,受个体差异的影响小。
胆固醇吸收评分
在得出胆固醇吸收/代谢标志物参考数值范围的基础上,经过大量样本的深入分析,本公开进一步提出:在检测到血清样本中各标志物的浓度数值后,根据数值分段赋予不同的权重,给出下列表2所示的评分方式。
表2血清胆固醇吸收标志物评分标准
按上表确定各个吸收标志物的分值后,计算胆固醇吸收综合评分:
胆固醇吸收综合评分=谷甾醇分值+菜油甾醇分值+胆甾烷醇分值
当某一存在胆固醇水平偏离正常范围的受试者的胆固醇吸收综合评分≤12时,认为其胆固醇吸收基本处于正常水平,考虑其胆固醇水平偏离正常范围主要是由于合成过度,在选择干预方案时考虑控制胆固醇合成,例如使用他汀类(statin)降脂药物。当某一胆固醇水平偏离正常范围的受试者的胆固醇吸收综合评分>12时,考虑其胆固醇水平偏离正常范围主要是由于吸收过度,在选择干预方案时考虑抑制胆固醇的小肠吸收,例如使用依折麦布等药物。
例:某总胆固醇异常个体的血清甾醇浓度检测结果:谷甾醇1.83μg/mL,菜油甾醇3.45μg/mL,胆甾烷醇4.32μg/mL,24-脱氢胆固醇1.64μg/mL。根据表2的评分标准,该个体血清的谷甾醇浓度在1.78-4.10μg/mL的范围内,分值为3.5;菜油甾醇浓度<3.61μg/mL,分值为1.0;胆甾烷醇浓度在3.12-4.96μg/mL的范围内,分值为5.0。该个体的胆固醇吸收综合评分为3.5+1.0+5.0=9.5,综合评分<12。因此提示该个体的胆固醇吸收基本正常,该个体胆固醇异常的主要原因为胆固醇合成过度。这一判别结果也与基于合成标志物24-脱氢胆固醇浓度进行的判别结果一致。由于检测结果提示该个体存在胆固醇合成过度,在临床指导其降脂用药时,优先考虑使用抑制胆固醇合成的药物,如他汀类降脂药物等。
基于大量样本的数据分析和验证表明,将多个吸收标志物的检测数值联合应用,采用胆固醇吸收综合评分的方式,可以比单个标志物更准确、全面地反映受试者的胆固醇代谢特征,对人群中绝大部分个体可实现血脂异常主要原因的正确提示,有效地降低临床干预手段选择的盲目性。
以下结合实施例对本公开的技术方案作进一步解释。本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本公开,而不应视为对本公开范围的限定。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1临床样本胆固醇稳态的生物标志物检测方法
在2.5mL玻璃试管中加入25μL血清样品和30μL氘代内标,混合后,加入300μL 2%氢氧化钾乙醇溶液,在45℃皂化30min。
向每支试管中加入200μL纯水混匀,再加入1.0mL正己烷。
用盖板盖住试管,颠倒混合10次。上清转移至13×100mm试管中,在氮气下干燥约45分钟或直至完全干燥。用200μL的甲醇:异丙醇=80:20的复溶液进行复溶。
在AB Sciex 5500上注入复溶后的样品,用APCI离子源采用正离子模式进行检测。
检测的离子对为:谷甾醇的离子对为397/147,菜油甾醇的离子对为383/147,胆甾烷醇的离子对为371/95,24-脱氢胆固醇的离子对为367/161,谷甾醇-d7内标的离子对为404/161,菜油甾醇-d6内标的离子对为389/161,24-脱氢胆固醇-d6内标的离子对为373/161。
通过AB Sciex 5500系统的OS软件进行数据处理分析,得到胆固醇的吸收/合成标志物的浓度。
该方法的检测限见表3。
表3生物标志物的检测限
谷甾醇 | 菜油甾醇 | 胆甾烷醇 | 24-脱氢胆固醇 | |
LOQ(μg/mL) | 0.040 | 0.047 | 0.050 | 0.043 |
%CV | 15.435% | 8.511% | 7.118% | 5.805% |
临床可报告范围:0.1-160μg/mL
方法的精密度见表4。
表4生物标志物检测的精密度
谷甾醇 | 菜油甾醇 | 胆甾烷醇 | 24-脱氢胆固醇 | |
%CV | 8.895% | 8.147% | 8.878% | 9.371% |
实施例2胆固醇稳态的生物标志物与受试者血脂指标的相关性分析
为了考察选取的胆固醇稳态生物标志物与受试者血脂指标的相关性,验证利用标志物反映胆固醇代谢状况的可靠性,本实施例对采集自82名随机选取的表观健康受试者的血清样本进行检测。首先对82例样本进行常规生化血脂检测,同时采用实施例1的方法进行胆固醇稳态标志物的检测。测得各标志物浓度数值后,按照表2所示的评分标准,计算各样本的胆固醇吸收综合评分。
采用Pearson积矩相关系数进行总胆固醇(TC)水平、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平与胆固醇合成标志物(24-脱氢胆固醇)浓度、胆固醇吸收综合评分的相关性分析,结果如表5所示。
表5TC、LDL-C与胆固醇合成标志物浓度、胆固醇吸收综合评分的相关系数R
血清样本中合成标志物24-脱氢胆固醇的浓度与总胆固醇(TC)水平、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的线性相关图分别如附图1、2所示。血清样本的胆固醇吸收综合评分与总胆固醇(TC)水平、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的线性相关图分别如附图3、4所示。
由以上数据可见,相较于胆固醇合成标志物水平,血清样本的胆固醇吸收综合评分与TC和LDL-C的相关性明显更高,证明本公开提出的胆固醇吸收综合评分这一指标能够更灵敏可靠地提示受试者血脂异常的主要原因,相比于基于单一标志物的判断更加准确,对指导个性化诊疗具有很高价值。
经统计,在82例样本中:
TC异常者20例,在这20例中有9例的胆固醇合成标志物浓度高于参考值(24-脱氢胆固醇>1.49μg/mL),有19例的胆固醇吸收综合评分>12;
LDL-C异常者17例,在这17例中有8例的胆固醇合成标志物浓度高于参考值(24-脱氢胆固醇>1.49μg/mL),有13例的胆固醇吸收综合评分>12。
从以上统计数据可见,对于血脂相关指标异常,尤其是TC异常的受试者,实际存在胆固醇合成异常的个体仅占约一半,而绝大多数存在胆固醇吸收异常的情况。中国人群胆固醇异常与从饮食中过度吸收胆固醇有着非常密切的关系,虽然人体70%的胆固醇来源于体内合成,但是最终导致疾病或者升高疾病风险的因素在很大程度上并不是主要由胆固醇合成异常所致。目前临床实践中常见未经评估而直接采用抑制胆固醇合成的他汀类药物,在很大一部分患者中效果不尽人意。本公开提出了胆固醇稳态标志物的参考标准,并给出胆固醇吸收综合评分计算法,根据这些指标可良好地提示胆固醇异常的主要原因,为有针对性的个性化用药提供有效指导。
LDL-C的含量与心血管疾病的发病率及病变程度相关,被认为是动脉粥样硬化的主要致病因子,其浓度与冠心病的发病率有明显正相关,也是评价个体冠心病发生的危险因素的一个重要指标。本公开提出的参考标准对于LDL-C异常原因的判断同样具有很高的指导意义,有助于临床实践中正确选取降低LDL-C水平的诊疗方案。
实施例3胆固醇稳态的生物标志物临床应用案例
2018年首诊评估显示该受试者多项胆固醇指标超标:总胆固醇(TC)、低密胆固醇(LDL-C)、非高密胆固醇(Non-HDL-C)、甘油三酯(TG)、甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值(TG/HDL-C)均高于正常值。检测结果如表6所示。
表6受试者2018年检查结果
根据该受试者胆固醇水平、合成指标以及吸收综合评分均超标的情况,治疗方案先使用抑制胆固醇合成的他汀类药物瑞舒伐他汀钙(rosuvastatin calcium)10mg/天。经过半年治疗,2019年复查检测结果如表7所示。
表7受试者2019年检查结果
受试者的复查检测结果显示:经他汀类药物干预,总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、非高密度脂蛋白胆固醇指标均显著下降,但尚未达到理想的正常范围。胆固醇合成指标24-脱氢胆固醇的水平达到正常范围内,一项胆固醇吸收指标胆甾烷醇的水平亦处于正常范围,但胆固醇吸收综合评分为19.0,处于超标范围(>12.0),提示该受试者存在胆固醇吸收过度。为了进一步降低总胆固醇和低密胆固醇水平,增加给予抑制小肠胆固醇吸收的药物依折麦布(ezetimibe)10mg/天。
经过医学干预,2020年和2021年的复查结果显示:该受试者总胆固醇、低密胆固醇、非高密胆固醇指标均达到正常值。复查的结果如下:
表8受试者跟踪复查结果
项目 | 22/08/2019 | 05/06/2020 | 05/01/2021 | 07/07/2021 | 参考值 |
HDL-C(mmol/L) | 1.60 | 1.42↓ | 1.52↓ | 1.50↓ | >1.53 |
Non-HDL-C(mmol/L) | 2.54 | 2.60 | <3.37 | ||
LDL-C(mmol/L) | 3.22↑ | 1.90 | 2.16 | 1.86 | <2.59 |
TG(mmol/L) | 2.82↑ | 1.59 | 1.04 | 1.05 | <1.69 |
TC(mmol/L) | 5.46↑ | 3.96 | 4.12 | 3.84 | <5.17 |
本实施例的临床案例表明,本公开提出的胆固醇稳态标志物的分析方法、参考值范围及胆固醇吸收综合评分体系,对于降胆固醇药物治疗方案的选择有很强的指导意义,有助于帮助医师选择适合病人的优化的个体化降胆固醇治疗方案,及时对干预效果不理想的治疗方案进行调整,减少和避免过度使用他汀类药物造成的肌痛、胃肠不适等临床副作用,获得更优的干预效果。
虽然已经参考优选实施例详细地示出和描述了本发明的特征,但是本领域技术人员将理解,在不脱离本发明的范围的精神的情况下,可以在其中进行其他改变。本公开的广度和范围不应受任何上述示例性实施例的限制。
Claims (10)
1.胆固醇稳态生物标志物在评估受试者胆固醇代谢特征中的用途,其特征在于,所述胆固醇稳态生物标志物为选自谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇、24-脱氢胆固醇中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的用途,其中所述评估包括:
从所述受试者采集血清或血浆样本;
检测所述样本中所述胆固醇稳态生物标志物的浓度;
将测得的所述样本中所述胆固醇稳态生物标志物的浓度与参考范围相比较;
根据比较结果提示所述受试者的胆固醇代谢特征。
3.根据权利要求2所述的用途,其中,所述参考范围为:
谷甾醇:1.78-4.10μg/mL,
菜油甾醇:3.61-7.40μg/mL,
胆甾烷醇:3.12-4.96μg/mL,
24-脱氢胆固醇:0.86-1.49μg/mL;
当检测到所述样本中谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇的一项或多项的浓度高于对应的所述参考范围的最大值时,提示所述受试者存在胆固醇吸收过度;当检测到所述样本中24-脱氢胆固醇的浓度高于对应的所述参考范围的最大值时,提示所述受试者存在胆固醇合成过度。
4.根据权利要求1所述的用途,其中所述评估包括:
从所述受试者采集血清或血浆样本;
检测所述样本中所述胆固醇稳态生物标志物的浓度;
根据测得的所述样本中所述胆固醇稳态生物标志物的浓度计算胆固醇吸收综合评分;
根据胆固醇吸收综合评分提示所述受试者的胆固醇代谢特征。
5.根据权利要求4所述的用途,其中所述胆固醇吸收综合评分的计算方式为:
当所述样本中谷甾醇浓度<1.78μg/mL时,计谷甾醇分值为1.0,当所述样本中谷甾醇浓度为1.78-4.10μg/mL时,计谷甾醇分值为3.5,当所述样本中谷甾醇浓度>4.10μg/mL时,计谷甾醇分值为7.0;
当所述样本中菜油甾醇浓度<3.61μg/mL时,计菜油甾醇分值为1.0,当所述样本中菜油甾醇浓度为3.61-7.40μg/mL时,计菜油甾醇分值为3.5,当所述样本中菜油甾醇浓度>7.40μg/mL时,计菜油甾醇分值为7.0;
当所述样本中胆甾烷醇浓度<3.12μg/mL时,计胆甾烷醇分值为1.0,当所述样本中胆甾烷醇浓度为3.12-4.96μg/mL时,计胆甾烷醇分值为3.5,当所述样本中胆甾烷醇浓度>4.96μg/mL时,计胆甾烷醇分值为7.0;
胆固醇吸收综合评分=谷甾醇分值+菜油甾醇分值+胆甾烷醇分值。
6.根据权利要求5所述的用途,其中,当胆固醇吸收综合评分>12.0时,提示所述受试者存在胆固醇吸收过度。
7.根据权利要求3或6所述的用途,其中,当提示所述受试者存在胆固醇吸收过度时,进一步指导所述受试者使用抑制胆固醇吸收的药物;当提示所述受试者存在胆固醇合成过度时,进一步指导所述受试者使用控制胆固醇合成的药物。
8.根据权利要求2或4所述的用途,其中,检测所述样本中所述胆固醇稳态生物标志物的浓度的步骤包括:
向所述样本中加入氘代内标;
用碱性溶液将所述样本皂化;
用有机溶剂从皂化后的溶液中萃取脂类,将萃取到的脂类干燥;
以复溶液将萃取到的脂类复溶;
通过液质联用法对胆固醇稳态生物标志物的浓度进行定量检测。
9.一种试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含用于定量检测样本中胆固醇稳态生物标志物浓度的试剂,所述胆固醇稳态生物标志物为选自谷甾醇、菜油甾醇、胆甾烷醇、24-脱氢胆固醇中的一种或多种,所述样本为血清或血浆。
10.根据权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述用于定量检测样本中胆固醇稳态生物标志物浓度的试剂包括谷甾醇-d7,菜油甾醇-d6,24-脱氢胆固醇-d6,正己烷,氢氧化钾,乙醇,甲醇,异丙醇。
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