CN114225039A - 一种拮抗剂组合物及其在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用 - Google Patents

一种拮抗剂组合物及其在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种拮抗剂组合物及其在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用，所述拮抗剂组合物包括CRH受体拮抗剂和谷氨酸能受体拮抗剂。本发明首次发现调控丘脑底核促肾上腺皮质激素释放激素神经元或其下游外侧苍白球脑区神经元活性可以改变REM睡眠时长/稳定性和恐惧反应程度，说明丘脑底核及其下游脑区是睡眠障碍与恐惧失调相关精神疾病共患的功能调控靶点。本发明还首次发现丘脑底核CRH神经元与谷氨酸能神经元有很高的重合比例。基于以上发现，本发明将CRH受体拮抗剂与谷氨酸能受体拮抗剂进行组合，以调控丘脑底核—外侧苍白球的CRH和谷氨酸信号传输，从而改善睡眠障碍和与恐惧情绪失调相关的精神疾病异常共患病。

Description

一种拮抗剂组合物及其在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患 病的药物中的应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种拮抗剂组合物及其在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用。
背景技术
睡眠障碍和精神疾病之间存在很高的共患病比例，David Nutt等人在2008年报道超过83％的抑郁症患者存在睡眠障碍，Luc Staner在2003年报道51％-78％的焦虑症患者存在睡眠障碍。这体现了睡眠和精神疾病的发生发展的高相关性。睡眠包含非快速眼动睡眠(non-rapid eye movement sleep,NREM)及快速眼动睡眠(rapid eye movement sleep,REM)，各自有不同功能。REM睡眠结构变化多见于与恐惧失调的精神疾病如抑郁症，焦虑症和创伤后应激障碍患者中，如Dieter Riemann等人在2019年报道在抑郁症患者中REM睡眠的潜伏期缩短(从入睡到第一次发生REM的时间间隔)，REM睡眠的发生密度升高，片段化以及总REM时间的延长。这提示我们REM睡眠的异常和精神疾病的发生之间存在因果关系。
以抑郁症为例，临床上也有使用镇静剂用于治疗如抑郁症/焦虑症/创伤后应激障碍等精神疾病患者，在使得病人平静下来的同时减轻精神疾病症状，是一种较为有效的治疗方案，但镇静剂类药物具有成瘾性。不良反应包括连续使用的成瘾问题及急性中毒。抗抑郁药物很多皆伴有抑制REM睡眠效果，同时具有对抑郁症状的改善作用，这类药物体现了REM睡眠调控与抑郁症状改善的高相关性，但是抗抑郁药物在大脑中作用靶点大多并不明确，尤其是对睡眠的调控机制。由于对抑郁症的发生机制了解不清，因此无法针对性地设计抗抑郁药物。而且也因为作用机制不清，无法作用于局部范围，因其作用靶点，作用范围未知，因此产生的副作用不可控，更容易导致副作用的产生。目前，现有技术中并没有针对睡眠与精神疾病共患病的很好的治疗方法。
因此，如何提供一种作用机制与作用靶点明确、安全性高的用于睡眠与精神疾病共患病治疗的药物，成为了本领域亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种拮抗剂组合物及其在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种拮抗剂组合物，所述拮抗剂组合物包括CRH受体拮抗剂和谷氨酸能受体拮抗剂。
(1)本发明首次发现调控丘脑底核促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropinreleasing hormone,CRH)神经元或其下游外侧苍白球脑区神经元活性可以改变REM睡眠时长/稳定性和恐惧反应程度，说明丘脑底核及其下游脑区是睡眠障碍与恐惧失调相关精神疾病共患的功能调控靶点。
(2)本发明还首次发现丘脑底核CRH神经元与谷氨酸能神经元有很高的重合比例，提示这种神经元存在CRH与谷氨酸递质的共同释放。
(3)基于以上发现，本发明将CRH受体拮抗剂与谷氨酸能受体拮抗剂进行组合，以实现调控丘脑底核—外侧苍白球的CRH和谷氨酸信号传输，从而改善睡眠障碍和与恐惧情绪失调相关的精神疾病异常共患病。
优选地，所述CRH受体拮抗剂与谷氨酸能受体拮抗剂的物质的量的比为(1-10):(1-10)，所述(1-10)中的具体数值例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10等。
优选地，所述CRH受体拮抗剂包括具有式I所示结构的化合物、具有式Ⅱ所示结构的化合物、具有式Ⅲ所示结构的化合物、具有式Ⅳ所示结构的化合物、N-丁基-N-乙基-2,5-二甲基-7-(2,4,6-三甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-D]嘧啶-4-胺)、NBI30775、3-(6-(二甲基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)-2,5-二甲基-N,N-二丙基吡唑并[1,5-A]嘧啶-7-胺、维替泊芬或盐酸安那拉明中的任意一种或至少两种的组合；
Figure BDA0003443171750000031
所述至少两种的组合例如维替泊芬与盐酸安那拉明的组合、NBI30775与3-(6-(二甲基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)-2,5-二甲基-N,N-二丙基吡唑并[1,5-A]嘧啶-7-胺的组合、N-丁基-N-乙基-2,5-二甲基-7-(2,4,6-三甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-D]嘧啶-4-胺)与NBI30775的组合等，其他任意的组合方式均可。
优选地，所述CRH受体拮抗剂包括具有式I所示结构的化合物、具有式Ⅱ所示结构的化合物、具有式Ⅲ所示结构的化合物、具有式Ⅳ所示结构的化合物中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合例如具有式I所示结构的化合物与具有式Ⅱ所示结构的化合物的组合、具有式Ⅲ所示结构的化合物与具有式Ⅳ所示结构的化合物的组合、具有式Ⅱ所示结构的化合物与具有式Ⅲ所示结构的化合物的组合等，其他任意的组合方式均可。
优选地，所述CRH受体拮抗剂包括具有式Ⅲ所示结构的化合物，其名称为CP-154526。
优选地，所述谷氨酸受体拮抗剂包括N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂、α-氨基-3羟基-5-甲基-4-异恶唑受体拮抗剂、海人藻酸受体拮抗剂或代谢型谷氨酸受体拮抗剂中的任意一种或至少两种的组合。所述至少两种的组合例如N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂与海人藻酸受体拮抗剂的组合、海人藻酸受体拮抗剂与代谢型谷氨酸受体拮抗剂的组合、海人藻酸受体拮抗剂与N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂的组合等，其他任意的组合方式均可。
优选地，所述谷氨酸受体拮抗剂包括N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂。
优选地，所述N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂包括AP5、AP7、CGP-37849、CPP、赛福太、金刚烷胺、阿托莫西汀、右美沙芬、地卓西平、氯胺酮、美金刚、阿替加奈、福定碱、7-氯犬尿酸或TK-40中的任意一种或至少两种的组合。所述至少两种的组合例如右美沙芬和地卓西平的组合、氯胺酮和美金刚的组合、福定碱和7-氯犬尿酸的组合等，其他任意的组合方式均可。
优选地，所述α-氨基-3羟基-5-甲基-4-异恶唑受体拮抗剂包括NBQX、AMP397、CNQX、替占帕奈,NGX426、MQPX或Kaiocephalin中的任意一种或至少两种的组合。所述至少两种的组合例如NBQX和AMP397的组合、AMP397和CNQX的组合、CNQX和替占帕奈的组合等，其他任意的组合方式均可。
优选地，所述海人藻酸受体拮抗剂包括UBP、替占帕奈、CNQX、NS102或Dasolampanel中的任意一种或至少两种的组合。所述至少两种的组合例如UBP和替占帕奈的组合、替占帕奈和CNQX的组合、CNQX和NS102的组合等，其他任意的组合方式均可。
特别说明：替占帕奈和CNQX既属于α-氨基-3羟基-5-甲基-4-异恶唑受体拮抗剂，也属于海人藻酸受体拮抗剂。
优选地，所述代谢型谷氨酸受体拮抗剂包括MTEP、Lithium、APICA或EGLU中的任意一种或至少两种的组合。所述至少两种的组合例如MTEP和Lithium的组合、Lithium和APICA的组合、APICA和EGLU的组合等，其他任意的组合方式均可。
第二方面，本发明提供如第一方面所述的拮抗剂组合物在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用。
第三方面，本发明提供CRH受体拮抗剂在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用。
优选地，所述CRH受体拮抗剂包括具有式I所示结构的化合物、具有式Ⅱ所示结构的化合物、具有式Ⅲ所示结构的化合物、具有式Ⅳ所示结构的化合物、N-丁基-N-乙基-2,5-二甲基-7-(2,4,6-三甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-D]嘧啶-4-胺)、NBI30775、3-(6-(二甲基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)-2,5-二甲基-N,N-二丙基吡唑并[1,5-A]嘧啶-7-胺、维替泊芬或盐酸安那拉明中的任意一种或至少两种的组合；
Figure BDA0003443171750000051
优选地，所述CRH受体拮抗剂包括具有式I所示结构的化合物、具有式Ⅱ所示结构的化合物、具有式Ⅲ所示结构的化合物、具有式Ⅳ所示结构的化合物中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述CRH受体拮抗剂包括具有式Ⅲ所示结构的化合物，其名称为CP-154526。
第四方面，本发明提供谷氨酸能受体拮抗剂在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用。
优选地，所述谷氨酸受体拮抗剂包括N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂、α-氨基-3羟基-5-甲基-4-异恶唑受体拮抗剂、海人藻酸受体拮抗剂或代谢型谷氨酸受体拮抗剂中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述谷氨酸受体拮抗剂包括N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂。
优选地，所述N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂包括AP5、AP7、CGP-37849、CPP、赛福太、金刚烷胺、阿托莫西汀、右美沙芬、地卓西平、氯胺酮、美金刚、阿替加奈、福定碱、7-氯犬尿酸或TK-40中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述α-氨基-3羟基-5-甲基-4-异恶唑受体拮抗剂包括NBQX、AMP397、CNQX、替占帕奈,NGX426、MQPX或Kaiocephalin中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述海人藻酸受体拮抗剂包括UBP、替占帕奈、CNQX、NS102或Dasolampanel中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述代谢型谷氨酸受体拮抗剂包括MTEP、Lithium、APICA或EGLU中的任意一种或至少两种的组合。
本发明所述精神疾病包括抑郁症、焦虑症、双向情感障碍、创伤后应激障碍、恐慌症、强迫症或自闭症谱系障碍中的任意一种或至少两种的组合。
在使用对象方面，本发明所述由CRH受体拮抗剂、谷氨酸能受体拮抗剂或拮抗剂组合物制得的治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物可用于睡眠和精神疾病共患病的动物，包括人或者非人灵长类，大鼠、小鼠等等也包括在内。
在使用方式方面，本发明所述由CRH受体拮抗剂、谷氨酸能受体拮抗剂或拮抗剂组合物制得的治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物可通过局部给药方式或者靶向给药方式给予药物，目的是限制药物扩散范围，减少副作用产生，减少非特异性药物结合。局部给药可以使用微型套管给药方式，具体地，将微型套管植入在受试者外侧苍白球上方，通过套管结合微量注射泵进行给药。此外也可结合靶向药物递送系统用于递送药物，如针对外侧苍白球特异性的蛋白结合位点进行药物释放。
本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明首次发现调控丘脑底核促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropinreleasing hormone,CRH)神经元或其下游外侧苍白球脑区神经元活性可以改变REM睡眠时长/稳定性和恐惧反应程度，说明丘脑底核及其下游脑区是睡眠障碍与恐惧失调相关精神疾病共患的功能调控靶点。
(2)本发明还首次发现丘脑底核CRH神经元与谷氨酸能神经元有很高的重合比例，提示这种神经元存在CRH与谷氨酸递质的共同释放，通过光遗传技术刺激刺激受试者丘脑底核—外侧苍白球环路可以增加REM睡眠，并调控防御逃跑行为，而通过小型套管给药方式给予受体拮抗剂到外侧苍白球，再激活丘脑底核CRH神经元则能够基本消除光刺激造成的REM睡眠改变和恐惧反应的变化，基于本发明发现CRH神经元基本为谷氨酸能神经元，因此使用CRH和谷氨酸受体拮抗剂对外侧苍白球进行调控，可以通过减弱或阻断丘脑底核—外侧苍白球环路的信号传导，从而实现对睡眠及恐惧反应异常相关的精神疾病症状的调控，是一种有效的改善睡眠障碍和与恐惧情绪失调相关的精神疾病异常共患病的方法。
(3)基于以上发现，本发明创造性地提出CRH受体拮抗剂，以及谷氨酸能受体拮抗剂在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用。并提出谷氨酸能受体拮抗剂与CRH受体拮抗剂联合使用，以进一步改进对丘脑底核-外侧苍白球环路的调控手段，用于制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物。所述药物可通过局部给药方式作用于丘脑底核——外侧苍白球环路，作用范围小，作用靶点已知，因此使用安全性更高(此处安全性指产生的副作用更小)，通过两种拮抗剂的共同作用，以实现对睡眠和精神疾病共患病的调控，这也是申请者查阅到的首个可作用于睡眠与精神疾病共患病调控靶点的组合物。
本发明并未否定其他精神疾病药物的作用，仅提供一种拮抗剂组合物，其可用于制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物，从而可针对用于睡眠与精神疾病共患病的患者中，尤其是其他精神疾病药物不起效的患者中使用。
附图说明
图1是CRH启动子序列示意图。
图2A是化学抑制病毒注射及电生理功能验证示意图。
图2B是测试受试者睡眠状态下对天敌气味的反应的示意图。
图2C是非快速眼动睡眠下天敌气味刺激诱发觉醒测试结果图。
图2D是快速眼动睡眠下天敌气味刺激诱发觉醒测试结果图。
图2E是觉醒状态下天敌气味诱发防御反应测试结果图。
图2F是觉醒状态下视觉恐惧刺激诱发防御反应测试结果图。
图2G是受试者丘脑底核的病毒注入和光纤植入示意图。
图2H是快速眼动睡眠下光刺激诱发觉醒测试结果图。
图3A是荧光标记病毒注射示意图。
图3B是Vglut2探针标记细胞与病毒EYFP标记细胞重合结果图。
图3C是病毒标记丘脑底核谷氨酸能神经元后到外侧苍白球的投射图。
图3D是丘脑底核CRH神经元与谷氨酸能神经元的重合情况的测试结果图。
图4A是光遗传病毒及拮抗剂注射示意图。
图4B是非快速眼动睡眠下无天敌气味时光诱发觉醒测试结果图。
图4C是快速眼动睡眠下无天敌气味时光诱发觉醒测试结果图。
图4D是快速眼动睡眠下有天敌气味时光诱发觉醒测试结果图。
图4E是视觉本能恐惧looming测试结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
探究丘脑底核CRH神经元对REM睡眠及恐惧反应的调控作用
本实施例探究了丘脑底核CRH神经元对REM睡眠及恐惧反应的调控作用。
首先通过脑区立体定位及微量病毒注射，在受试者(C57BL6J野生型小鼠)丘脑底核表达AAV9-Crh-Cre与AAV9-DIO-Syn-hM4Di-mCherry(实验组)(将二者以1:1的物质的量比混合后共注射75纳升)；或者AAV9-Crh-Cre与AAV9-DIO-Syn-mCherry(对照组)(将二者以1:1的物质的量比混合后共注射75纳升)。其中AAV9-Crh-cre用于在受试者表达CRH的神经元中表达Cre酶，其中所述CRH启动子序列为J Chen等人于2012年报道(具体见图1)。AAV9-DIO-Syn-hM4Di-mCherry与AAV9-DIO-Syn-mCherry序列中包含loxp位点，可被Cre酶识别，并被Cre酶翻转序列，从而启动功能蛋白的表达，以实现在受试者中表达hM4Di-mCherry(即化学抑制受体hM4Di以及红色标记荧光蛋白mCherry)或者表达mCherry。通过腹腔注射结合化学抑制受体的化学配体分子Clozapine N Oxide，从而结合hM4Di蛋白以实现对丘脑底核CRH神经元的抑制，而只表达mCherry不表达hM4Di则不会产生抑制效果，由此可以观测CRH神经元被抑制/正常活性情况下对REM睡眠及恐惧反应的影响(图2A上图：病毒注射示意图，比例尺为500μm)。在注射hM4Di-mCherry病毒4周后，进行了全细胞膜片钳记录，以验证hM4Di抑制神经元活性效果(图2A下图)。
在确认病毒表达良好并确认功能后，测试受试者睡眠状态下对天敌气味的反应(图2B)，受试者埋植EEG(脑电图)/EMG(肌电图)以记录睡眠状态变化，分别在识别到NREM或者REM睡眠情况下给予天敌气味，结果如图2C及图2D所示，受试者在感受到天敌气味时觉醒，觉醒的潜伏期(即从给天敌气味刺激到醒来的时间间隔)NREM更长，mCherry对照组与hM4Di均在40s左右。而REM状态下，mCherry组平均觉醒潜伏期约2s，这说明相较于NREM睡眠，REM睡眠下受试者对天敌气味的响应更快。hM4Di组则为约10s，说明化学抑制CRH神经元延长了觉醒潜伏期。其中图2C/图2D的中间图和右图分别为给受试者天敌气味刺激前的平均脑电功率密度谱图。此外，在受试者清醒情况下，给予天敌气味刺激，可以发现，与mCherry对照组相比，hM4Di实验组的天敌诱发的冻结样行为占比更小，冻结的潜伏期(即从给予天敌气味刺激到开始冻结样行为的时间间隔)更长，意味着受试者的本能恐惧防御反应更弱。此外，给予受试者视觉天敌恐惧刺激，发现相较于mCherry组，hM4Di实验组受试者视觉天敌刺激诱发的逃跑反应的反应潜伏期(即从给予天敌刺激到开始启动逃跑防御反应的时间间隔，见图2F左图)更长，返回安全区域的需要的时间更长(图2F中间图)，在安全区域呆的时间更短(图2F右图)，说明化学抑制丘脑底核CRH神经元显著降低了视觉本能恐惧反应。以上结果说明，丘脑底核CRH神经元在REM睡眠及清醒状态下可以调控受试者的本能恐惧反应。
图2G是受试者丘脑底核的病毒注入和光纤植入示意图。将AAV-Crh-Cre与AAV-DIO-EF1a-Arch3.0-EYFP以1:1的物质的量比混合后共注射75纳升，作为实验组；将AAV-Crh-Cre与AAV-DIO-EF1a-EYFP以1:1的物质的量比混合后共注射75纳升，作为对照组。其中，AAV-Crh-Cre病毒可以用于在丘脑底核CRH表达的神经元中表达Cre酶，而Arch3.0是一类被改造的氢离子泵通道，在受到外界黄光刺激时促进氢离子外流，实现神经元抑制效果，可用于实时黄光刺激引起神经元抑制，两者组合，以实现对丘脑底核CRH神经元的光抑制效果。病毒注射表达4周在丘脑底核病毒注射区域上方0.1mm埋植光纤用于递送黄光刺激，此外埋植EEG/EMG用于记录睡眠觉醒状态。在REM睡眠开始时启动光刺激，在REM睡眠结束时终止。结果发现表达Arch蛋白后，给予光刺激显著减少了REM睡眠的持续时间，并且从EEG功率图(图2H)来看，光刺激导致频谱发生变化，主要是4-8Hz波减弱，0-4Hz波增高，说明光抑制CRH神经元影响了REM睡眠的稳定性。所有数据均表示为平均值±SEM。
综上，本实施例证实了丘脑底核CRH神经元对REM睡眠及恐惧反应的调控作用。
实施例2
探究丘脑底核CRH神经元与谷氨酸能神经元的重合情况
本发明通过实施例1证实了丘脑底核CRH神经元对REM睡眠及恐惧反应的调控作用后，接下来对丘脑底核的CRH神经元类型进行深入分析。本实施例探究了丘脑底核CRH神经元与谷氨酸能神经元的重合情况。
通过对Vglut2-Cre鼠注射AAV-DIO-EYFP病毒(注射75纳升)到丘脑底核(图3A)，以感染丘脑底核谷氨酸能神经元，观测到丘脑底核表达大量谷氨酸能神经元。通过原位杂交染色判断内源性谷氨酸RNA的表达是否与病毒表达EYFP存在高比例共标，以验证所用VGLUT2-cre鼠的特异性。统计结果如图3B所示，可以看到Vglut2探针标记细胞与病毒EYFP标记细胞有90％以上的共同标记，证明了VGLUT2-cre转基因鼠的特异性。
之后观测了VGLUT2-Cre鼠在丘脑底核注射AAV-DIO-EF1a-EYFP病毒(注射75纳升)标记丘脑底核谷氨酸能神经元后到外侧苍白球(lateral globus pallidus，LGP)的投射，发现有高密度的轴突末梢存在(图3C左图)，证明丘脑底核谷氨酸能神经元有到外侧苍白球的投射输出。通过原位杂交染色CRH的RNA发现，丘脑底核CRH与病毒EYFP标记的细胞存在80％以上高共同标记比例(图3D)，证明CRH与谷氨酸在标记的神经元中存在高度共表达。数据均表示为平均值±SEM。
本发明所用引物序列均来自Allen Brain Atlas：
其中，slc17a6/Vglut2探针引物序列为：CCAAATCTTACGGTGCTACCTC/TAGCCATCTTTCCTGTTCCACT(SEQ ID NO 1)。CRH探针引物序列为：TAGAGCCTGTCTTGTCTGTGG/AGCATGGGCAATACAAATAACGCT(SEQ ID NO 2)。
综上，本实施例探究结果表明：丘脑底核CRH神经元与谷氨酸能神经元有很高的重合比例，提示这种神经元存在CRH与谷氨酸递质的共同释放。
实施例3
探究CRH受体拮抗剂对睡眠及恐惧反应的影响
本实施例探究了施用CRH受体拮抗剂对睡眠及恐惧反应的影响。
以给予CRH拮抗剂组为实验组，给予DMSO溶剂组作为对照组。CRH拮抗剂选用CP154526，其可与CRH受体1型结合，从而竞争性阻断CRH递质的结合。在受试者(C57BL6J野生型小鼠)丘脑底核注射75纳升AAV-DIO-EF1a-ChR2-mCherry与AAV-Crh-cre的混合物(物质的量比1:1)，以在丘脑底核的CRH类型神经元中表达ChR2光激活蛋白，病毒表达4周后在丘脑底核埋植光纤以递送蓝光，从而蓝光刺激ChR2蛋白实现对丘脑底核CRH神经元的激活，并在外侧苍白球给予DMSO(注射400纳升)或者CRH拮抗剂(注射400纳升，浓度为3.5毫克/毫升，溶剂为DMSO)，实现阻断丘脑底核—外侧苍白球环路CRH递质传递的同时，激活丘脑底核CRH神经元并进行行为测试(图4A为光遗传病毒及拮抗剂注射示意图)。结果表明，在非快速眼动睡眠下蓝光刺激丘脑底核CRH神经元诱发较快速觉醒，与外侧苍白球注入DMSO溶剂对照组相比，给予CRH受体拮抗剂的受试者觉醒潜伏期较长(见图4B)。在快速眼动睡眠下蓝光刺激丘脑底核CRH神经元，与外侧苍白球注入DMSO溶剂对照组相比，给予CRH受体拮抗剂的受试者快速眼动睡眠无显著改变(见图4C)。而在快速眼动睡眠期间给予受试者天敌气味测试发现，与DMSO组相比，CRH拮抗剂组的天敌气味诱发的觉醒潜伏期显著延长(见图4D)。说明CRH拮抗剂减弱了REM睡眠期间对天敌刺激的响应。图4E为视觉本能恐惧looming测试结果图，如图所示，与对照组DMSO相比，CRH拮抗剂组的启动防御反应时间显著延长，返回安全区域时间延长，在安全区域呆的时间缩短，说明在清醒情况下CRH拮抗剂减弱了视觉本能恐惧刺激诱发的防御反应。
综上，本实施例证明了CRH拮抗剂可减弱REM睡眠期间对天敌刺激的响应，并减弱视觉本能恐惧刺激诱发的防御反应。而基于实施例2证实的丘脑底核谷氨酸能神经元与CRH神经元高度共表达，存在对睡眠与防御反应的共同调控，因此提出将谷氨酸能受体拮抗剂与CRH受体拮抗剂联合使用，以改进对丘脑底核-外侧苍白球环路的调控手段，用于制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种拮抗剂组合物及其在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国科学院深圳先进技术研究院
<120> 一种拮抗剂组合物及其在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应
用
<130> 2021-12-28
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<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ccaaatctta cggtgctacc tctagccatc tttcctgttc cact 44
<210> 2
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
tagagcctgt cttgtctgtg gagcatgggc aatacaaata acgct 45

Claims (10)

1.一种拮抗剂组合物，其特征在于，所述拮抗剂组合物包括CRH受体拮抗剂和谷氨酸能受体拮抗剂。
2.如权利要求1所述的拮抗剂组合物，其特征在于，所述CRH受体拮抗剂与谷氨酸能受体拮抗剂的物质的量的比为(1-10):(1-10)。
3.如权利要求1或2所述的拮抗剂组合物，其特征在于，所述CRH受体拮抗剂包括具有式I所示结构的化合物、具有式Ⅱ所示结构的化合物、具有式Ⅲ所示结构的化合物、具有式Ⅳ所示结构的化合物、N-丁基-N-乙基-2,5-二甲基-7-(2,4,6-三甲基苯基)-7H-吡咯并[2,3-D]嘧啶-4-胺)、NBI30775、3-(6-(二甲基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)-2,5-二甲基-N,N-二丙基吡唑并[1,5-A]嘧啶-7-胺、维替泊芬或盐酸安那拉明中的任意一种或至少两种的组合；
Figure FDA0003443171740000011
优选地，所述CRH受体拮抗剂包括具有式I所示结构的化合物、具有式Ⅱ所示结构的化合物、具有式Ⅲ所示结构的化合物、具有式Ⅳ所示结构的化合物中的任意一种或至少两种的组合。
4.如权利要求1-3中任一项所述的拮抗剂组合物，其特征在于，所述谷氨酸受体拮抗剂包括N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂、α-氨基-3羟基-5-甲基-4-异恶唑受体拮抗剂、海人藻酸受体拮抗剂或代谢型谷氨酸受体拮抗剂中的任意一种或至少两种的组合。
5.如权利要求1-4中任一项所述的拮抗剂组合物，其特征在于，所述谷氨酸受体拮抗剂包括N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂。
6.如权利要求4或5所述的拮抗剂组合物，其特征在于，所述N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂包括AP5、AP7、CGP-37849、CPP、赛福太、金刚烷胺、阿托莫西汀、右美沙芬、地卓西平、氯胺酮、美金刚、阿替加奈、福定碱、7-氯犬尿酸或TK-40中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述α-氨基-3羟基-5-甲基-4-异恶唑受体拮抗剂包括NBQX、AMP397、CNQX、替占帕奈,NGX426、MQPX或Kaiocephalin中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述海人藻酸受体拮抗剂包括UBP、替占帕奈、CNQX、NS102或Dasolampanel中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述代谢型谷氨酸受体拮抗剂包括MTEP、Lithium、APICA或EGLU中的任意一种或至少两种的组合。
7.如权利要求1-6中任一项所述的拮抗剂组合物在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用。
8.CRH受体拮抗剂在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用。
9.谷氨酸能受体拮抗剂在制备治疗睡眠障碍与精神疾病共患病的药物中的应用。
10.如权利要求7-9中任一项所述的应用，其特征在于，所述精神疾病包括抑郁症、焦虑症、双向情感障碍、创伤后应激障碍、恐慌症、强迫症或自闭症谱系障碍中的任意一种或至少两种的组合。
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