CN114025793A - 用于预防由rsv感染引起的疾病或障碍的方法 - Google Patents

Abstract

本发明总体上涉及经修饰的或突变的呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)蛋白及制造和使用它们的方法，包括免疫原性组合物，诸如用于治疗和/或预防RSV感染的疫苗。具体地，本公开文本提供了一种母体免疫的方法，所述方法包括向怀有妊娠婴儿的孕妇施用包含RSV F蛋白和佐剂的组合物，其中在所述婴儿出生后在所述婴儿体内所述方法诱导针对至少一种与RSV下呼吸道感染(LRTI)相关的症状的免疫反应。

Description

用于预防由RSV感染引起的疾病或障碍的方法

相关申请的交叉引用

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技术领域

本发明总体上涉及经修饰的或突变的呼吸道合胞病毒融合(F)蛋白及制造和使用它们的方法，包括免疫原性组合物，诸如用于治疗和/或预防RSV感染的疫苗。

背景技术

呼吸道合胞病毒(RSV)是副粘病毒科肺病毒属的成员。人RSV(HRSV)是导致幼儿重度下呼吸道疾病的主要原因，并且是人类相当大的发病率和死亡率的主要原因。RSV也被认为是在免疫受损的成年人中和在老年人中的疾病的重要原因。由于自然感染后感染的宿主对RSV的抗性不完全，可能在儿童期和成年期多次感染RSV。

开发有效的疫苗依赖于科研成果的组合。疫苗必须以使其有益的足够量刺激有效的免疫反应以减少感染或疾病。疫苗还必须足够稳定以在可能无法制冷的具有挑战性的环境中使用。因此，人们一直对生产针对RSV病毒的疫苗感兴趣。

发明内容

本公开文本提供了母体免疫的方法，所述方法包括向怀有妊娠婴儿的孕妇施用包含RSV F蛋白和佐剂的组合物，其中在所述婴儿出生后在所述婴儿体内所述方法诱导针对至少一种与RSV下呼吸道感染(LRTI)相关的症状的免疫反应，并且其中所述孕妇怀孕约28周至约33周。

具体实施方式

定义

如本文和所附权利要求所用，单数形式“一个/一种(a、an)”和“所述(the)”包括复数指代物，除非上下文另外明确地规定。因此，例如，提及“一种蛋白质”可以指一种蛋白质或这种蛋白质的混合物，并且提及“所述方法”包括提及本领域技术人员已知的等同步骤和/或方法，等等。

如本文所用，术语“佐剂”是指当与免疫原组合使用时增加或以其他方式改变或修饰针对所述免疫原诱导的免疫反应的化合物。免疫反应的修饰可以包括强化或扩大抗体免疫反应和细胞免疫反应中任一者或两者的特异性。

如本文所用，当在数值之前时，术语“约”或“大约”指示所述值加或减10％的范围。例如，“约100”包括90和110。

如本文所用，术语“免疫原”、“抗原”和“表位”是指能够引发免疫反应的物质，诸如蛋白质(包括糖蛋白)和肽。

如本文所用，“免疫原性组合物”是包含抗原的组合物，其中向受试者施用所述组合物导致在所述受试者中产生针对所述抗原的体液免疫反应和/或细胞免疫反应。

如本文所用，“亚单位”组合物(例如疫苗)包括一种或多种来自病原体的选定抗原，但不是全部抗原。这样的组合物基本上不含完整的病毒或此类细胞或颗粒的裂解物，并且通常由至少部分纯化的(通常基本上纯化的)来自所述病原体的免疫原性多肽制备。通常使用杆状病毒系统，通常以重组方式制备本文所公开的亚单位组合物中的抗原。

如本文所用，“基本上”是指这样分离物质(例如化合物、多核苷酸或多肽)，使得所述物质形成包含其的样品的大多数百分比。例如，在样品中，基本上纯化的组分构成所述样品的85％，优选85％-90％，更优选至少95％-99.5％，并且最优选至少99％。如果组分基本上被替代，则在样品中剩余的量小于或等于约0.5％至约10％，优选小于约0.5％至约1.0％

如本文所用，术语“治疗”(“treat”、“treatment”和“treating”)是指用于获得有益或希望的结果(例如，临床结果)的方法。出于本公开文本的目的，有益或希望的结果可以包括抑制或压制感染或疾病的开始或进展；改善感染或疾病的症状或减轻其发展；或其组合。

如本文所用，“预防”(“prevention”)与“防预”(“prophylaxis”)可互换使用，并且可以意指完全预防感染或疾病，或预防这种感染或疾病的症状的发展；延迟感染或疾病或其症状的发作；或降低随后发展的感染或疾病或其症状的严重性。

如本文所用，“有效剂量”或“有效量”是指免疫原的这样的量，所述量足以诱导减轻病原体感染的至少一种症状的免疫反应。可以例如通过测量中和分泌抗体和/或血清抗体的量，例如通过噬斑中和、补体结合、酶联免疫吸附(ELISA)或微量中和测定来确定有效剂量或有效量。

如本文所用，术语“疫苗”是指用于诱导针对病原体的免疫反应的免疫原性组合物，诸如源自所述病原体的免疫原，所述免疫反应提供保护性免疫力(例如，保护受试者免于所述病原体感染和/或降低由所述病原体感染引起的疾病或病症的严重性的免疫力)。保护性免疫反应可以包括抗体和/或细胞介导的反应的形成。取决于上下文，术语“疫苗”也可以指施用至脊椎动物以产生保护性免疫力的免疫原悬浮液或溶液。

如本文所用，术语“受试者”包括人和其他动物。通常，受试者是人。例如，受试者可以是成人、青少年、儿童(2岁至14岁)或婴儿(0岁至2岁)。在一些方面，成人是约65岁或更大或约60岁或更大的年长者。在一些方面，受试者是孕妇或打算怀孕的妇女。在其他方面，受试者不是人；例如非人灵长类动物；例如，狒狒、黑猩猩、大猩猩或猕猴。在某些方面，受试者可以是宠物，诸如狗或猫。

在一些方面，受试者是怀孕约28周至约33周的妇女。在一些方面，受试者是怀孕多于33周的妇女。如本文所用，术语“妊娠婴儿”意指孕妇的胎儿或发育中的胎儿。

如本文所用，术语“药学上可接受的”意指由美国联邦政府或州政府的监管机构批准或在美国药典、欧洲药典或其他公认药典中列出用于哺乳动物，更特别地用于人。这些组合物可以用作用于在脊椎动物中诱导保护性免疫反应的疫苗和/或抗原组合物。

如本文所用，术语“约”意指加或减所指示数值的10％。

概述

RSV病毒具有由单链负义RNA构成的基因组，所述单链负义RNA与病毒蛋白紧密关联以形成核衣壳。病毒包膜由质膜衍生的脂质双层构成，所述脂质双层含有病毒编码的结构蛋白。病毒聚合酶与病毒粒子一起包装，并且将基因组RNA转录为mRNA。RSV基因组编码三种跨膜结构蛋白F、G和SH，两种基质蛋白M和M2，三种核衣壳蛋白N、P和L，以及两种非结构蛋白NS1和NS2。

HRSV和细胞膜的融合被认为发生在细胞表面，并且是在感染的早期将病毒核糖核蛋白转移到细胞质中的必要步骤。此过程是由融合(F)蛋白介导的，所述融合(F)蛋白还促进感染细胞的膜与相邻细胞的膜融合以形成特征性的合胞体，这既是显著的细胞病变效应，又是病毒传播的另外的机制。因此，融合活性的中和在宿主免疫中很重要。事实上，针对F蛋白开发的单克隆抗体已经显示出中和病毒感染性并且抑制膜融合(Calder等人,2000,Virology 271:122-131)。

RSV的F蛋白与其他副粘病毒的F糖蛋白具有相同的结构特征和有限的但是显著的氨基酸序列同一性。它是作为574个氨基酸的无活性前体(F0)合成的，所述前体是在内质网中的天冬酰胺上共翻译糖基化的，在内质网中它组装成同质低聚物。在到达细胞表面之前，F0前体被蛋白酶从N末端切割成F2，从C末端切割成F1。F2和F1链通过一个或多个二硫键保持共价连接。

已经发现免疫亲和纯化的全长F蛋白以胶束(也表征为玫瑰花环)的形式积累，类似于用其他全长病毒膜糖蛋白观察到的那些(Wrigley等人,1986,in ElectronMicroscopy of Proteins,第5卷,第103-163页,Academic Press,伦敦)。在电子显微镜下，玫瑰花环中的分子显现为倒锥形棒(约70％)或棒棒糖形(约30％)结构，其中它们的较宽的末端从玫瑰花环的中心突出。棒状构象状态与融合前失活状态的F糖蛋白相关，而棒棒糖构象状态与融合后活性状态的F糖蛋白相关。

如Calder等人,2000,Virology 271:122-131所证明的，电子显微照相可用于区分融合前和融合后(可替代地称为促融合前和促融合)构象。通过脂质体关联分析，也可以将融合前构象与促融合(融合后)构象区分开。此外，可以使用特异性识别存在于RSV F蛋白的融合前形式或促融合形式中的一个或另一个上的构象表位的抗体(例如，单克隆抗体)来区分融合前构象和促融合构象。此类构象表位可能是由于分子表面上抗原决定簇的优先暴露。可替代地，构象表位可以由线性多肽中不连续的氨基酸的并置产生。

先前已经显示，F前体在两个位点(位点I，在残基109之后，和位点II，在残基136之后)处被切割，这两个位点之前都有被弗林蛋白酶样蛋白酶识别的基序。位点II与融合肽相邻，并且在两个位点处的F蛋白的切割对于膜融合是需要的(Gonzalez-Reyes等人,2001,PNAS 98(17):9859-9864)。当在两个位点处均完成切割时，认为存在从锥形棒到棒棒糖形棒的过渡。

纳米颗粒结构和形态

本公开文本的纳米颗粒包含与非离子型去污剂核心缔合的抗原。有利地，所述纳米颗粒具有改善的耐环境胁迫性，使得它们提供增强的稳定性。

在特定实施方案中，纳米颗粒由围绕非离子型去污剂核心的多个蛋白质三聚体构成。例如，每个纳米颗粒可以含有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个或15个三聚体。通常，每个纳米颗粒含有2至9个三聚体。在特定实施方案中，每个纳米颗粒含有2至6个三聚体。本文所公开的组合物可以含有具有不同数量的三聚体的纳米颗粒。例如，组合物可包含其中三聚体的数量在2-9范围内的纳米颗粒；在其他实施方案中，组合物中的纳米颗粒可包含2-6个三聚体。在特定实施方案中，组合物包含纳米颗粒的异质群体，每个纳米颗粒具有2至6个三聚体，或者每个纳米颗粒具有2至9个三聚体。在其他实施方案中，组合物可包含纳米颗粒的基本上均质的群体。例如，所述群体可以含有约95％的具有5个三聚体的纳米颗粒。

抗原与纳米颗粒的含非离子型去污剂的核心缔合。通常，去污剂选自聚山梨醇酯-20(PS20)、聚山梨醇酯-40(PS40)、聚山梨醇酯-60(PS60)、聚山梨醇酯-65(PS65)和聚山梨醇酯-80(PS80)。去污剂的存在通过形成组织并呈现抗原的核心促进纳米颗粒的形成。因此，在某些实施方案中，纳米颗粒可包含组装成多寡聚糖蛋白-PS80蛋白-去污剂纳米颗粒的抗原，其中头部区域向外突出并且疏水区域和PS80去污剂形成被抗原包围的中央核心。

本文所公开的纳米颗粒的Z-ave尺寸范围为从约20nm至约60nm、约20nm至约50nm、约20nm至约45nm或约25nm至约45nm。除非另有规定，否则使用Malvern Zetasizer通过动态光散射(DLS)来测量粒度(Z-ave)。

在本文所公开的疫苗组合物中可以包括若干种纳米颗粒类型。在一些方面，纳米颗粒类型呈各向异性棒的形式，其可以是二聚体或单体。在其他方面，纳米颗粒类型是球形寡聚体。在又其他方面，所述纳米颗粒可以被描述为中间体纳米颗粒，其具有介于前两种类型之间的沉降特性。可以通过控制产生过程期间的去污剂和蛋白质浓度来调节纳米颗粒类型的形成。可以通过测量沉降系数来确定纳米颗粒类型。

纳米颗粒产生

本公开文本的纳米颗粒是非天然存在的产物，其组分在自然界中不会一起出现。通常，本文所公开的方法使用去污剂交换方法，其中使用第一去污剂来分离蛋白质，然后将该第一去污剂交换成第二去污剂以形成纳米颗粒。

所述纳米颗粒中包含的抗原通常是通过在宿主细胞中重组表达而产生的。可以使用标准重组技术。通常，使用杆状病毒系统在昆虫宿主细胞中表达所述蛋白质。在优选实施方案中，所述杆状病毒是组织蛋白酶-L敲除的杆状病毒。在其他优选实施方案中，所述杆状病毒是几丁质酶敲除的杆状病毒。在又其他优选实施方案中，所述杆状病毒是对于组织蛋白酶-L和几丁质酶两者的双重敲除。在昆虫细胞表达系统中可以获得高水平的表达。昆虫细胞的非限制性例子是草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)(Sf)细胞(例如Sf9、Sf21)、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)细胞(例如High Five细胞)、和果蝇(Drosophila)S2细胞。

典型的转染和细胞生长方法可以用于培养所述细胞。可以根据本领域中熟知的方法将载体(例如包含编码融合蛋白的多核苷酸的载体)转染到宿主细胞中。例如，可以通过磷酸钙共沉淀、电穿孔、显微注射、脂质转染和采用多胺转染试剂的转染来实现将核酸引入真核细胞中。在一个实施方案中，所述载体是重组杆状病毒。

使宿主细胞生长的方法包括但不限于分批、补料分批、连续和灌注细胞培养技术。细胞培养意指细胞在生物反应器(发酵室)中的生长和繁殖，在所述生物反应器中细胞繁殖并表达蛋白质(例如重组蛋白)以用于纯化和分离。通常，细胞培养是在生物反应器中在无菌、受控的温度和大气条件下进行。生物反应器是可以监测环境条件诸如温度、大气、搅拌和/或pH的用于培养细胞的室。在一个实施方案中，所述生物反应器是不锈钢室。在另一个实施方案中，所述生物反应器是预灭菌的塑料袋(例如

Wave Biotech，新泽西州布里奇沃特)。在其他实施方案中，所述预灭菌的塑料袋是约50L至3500L的袋。

纳米颗粒的去污剂提取和纯化

在宿主细胞生长后，可以使用去污剂和纯化方案从宿主细胞中收获所述蛋白质。一旦宿主细胞已生长48至96小时，便从培养基中分离细胞，并且添加含去污剂的溶液以溶解细胞膜，从而使蛋白质释放到去污剂提取物中。Triton X-100和tergitol(也称为NP-9)是用于提取的各自优选去污剂。可以将去污剂添加至约0.1％至约1.0％的最终浓度。例如，浓度可以为约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.5％、约0.7％、约0.8％或约1.0％。在某些实施方案中，范围可以是约0.1％至约0.3％。优选地，所述浓度为约0.5％。

在其他方面，不同的第一去污剂可以用于从宿主细胞中分离所述蛋白质。例如，第一去污剂可以是双(聚乙二醇双[咪唑基羰基])、壬苯醇醚-9、双(聚乙二醇双[咪唑基羰基])、

35、

56、

72、

76、

92V、

97、

58P、

EL、十乙二醇单十二烷基醚、N-癸酰基-N-甲基葡糖胺、正癸基α-D吡喃葡萄糖苷、癸基β-D-吡喃麦芽糖苷、正十二酰基-N-甲基葡糖酰胺、正十二烷基α-D-麦芽糖苷、正十二烷基β-D-麦芽糖苷、正十二烷基β-D-麦芽糖苷、七乙二醇单癸基醚、七乙二醇单十二烷基醚、七乙二醇单十四烷基醚、正十六烷基β-D-麦芽糖苷、六乙二醇单十二烷基醚、六乙二醇单十六烷基醚、六乙二醇单十八烷基醚、六乙二醇单十四烷基醚、Igepal CA-630、IgepalCA-630、甲基-6-0-(N-庚基氨基甲酰基)-α-D-吡喃葡萄糖苷、九乙二醇单十二烷基醚、N-壬酰基-N-甲基葡糖胺、N-壬酰基N-甲基葡糖胺、八乙二醇单癸基醚、八乙二醇单十二烷基醚、八乙二醇单十六烷基醚、八乙二醇单十八烷基醚、八乙二醇单十四烷基醚、辛基-β-D吡喃葡萄糖苷、五乙二醇单癸基醚、五乙二醇单十二烷基醚、五乙二醇单十六烷基醚、五乙二醇单己基醚、五乙二醇单十八烷基醚、五乙二醇单辛基醚、聚乙二醇二环氧甘油醚、聚乙二醇醚W-1、聚氧乙烯10十三烷基醚、聚氧乙烯100硬脂酸酯、聚氧乙烯20异十六烷基醚、聚氧乙烯20油烯基醚、聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚氧乙烯50硬脂酸酯、聚氧乙烯8硬脂酸酯、聚氧乙烯双(咪唑基羰基)、聚氧乙烯25丙二醇硬脂酸酯、来自皂树(Quillaja)树皮的皂苷、

20、

40、

60、

65、

80、

85、Tergitol类型15-S-12、Tergitol类型15-S-30、Tergitol类型15-S-5、Tergitol类型15-S-7、Tergitol类型15-S-9、Tergitol类型NP-10、Tergitol类型NP-4、Tergitol类型NP-40、Tergitol,类型NP-7Tergitol类型NP-9、Tergitol类型TMN-10、Tergitol类型TMN-6、Triton X-100、或其组合。

然后可以使用离心从细胞碎片中分离所述纳米颗粒。在一些实施方案中，可以使用诸如采用氯化铯、蔗糖和碘克沙醇的梯度离心。其他技术可以用作替代或补充，例如标准纯化技术，包括例如离子交换色谱、亲和色谱和凝胶过滤色谱。

例如，第一柱可以是离子交换色谱树脂，如

EMD TMAE(EMDMillipore)，第二柱可以是小扁豆(Lens culinaris)凝集素亲和树脂，并且第三柱可以是阳离子交换柱，如

EMD SO3(EMD Millipore)树脂。在其他方面，阳离子交换柱可以是MMC柱或Nuvia C Prime柱(Bio-Rad Laboratories,Inc)。优选地，本文所公开的方法不使用去污剂提取柱；例如疏水相互作用柱。这样的柱通常在纯化期间用于去除去污剂，但可能对此处公开的方法产生负面影响。

去污剂交换

为了形成纳米颗粒，用于从宿主细胞中提取蛋白质的第一去污剂基本上被第二去污剂替代以得到纳米颗粒结构。NP-9是优选的提取去污剂。通常，当通过HPLC测量时，所述纳米颗粒不含有可检测的NP-9。所述第二去污剂通常选自PS20、PS40、PS60、PS65和PS80。优选地，所述第二去污剂是PS80。为了保持纳米颗粒配制品的稳定性，第二去污剂与蛋白质之比保持在某一范围内。

在特定方面，使用亲和色谱以结合糖蛋白(经由其碳水化合物部分)来进行去污剂交换。例如，亲和色谱可以使用豆类凝集素柱。豆类凝集素是最初在植物中鉴定出的蛋白质，并且发现其与碳水化合物残基特异性地且可逆地相互作用。参见例如，Sharon和Lis,“Legume lectins--a large family of homologous proteins,”FASEB J.1990年11月；4(14):3198-208；Liener,“The Lectins:Properties,Functions,and Applications inBiology and Medicine,”Elsevier,2012。合适的凝集素包括伴刀豆球蛋白A(con A)、豌豆凝集素、红豆草凝集素和小扁豆凝集素。小扁豆凝集素由于其结合特性是用于去污剂交换的优选柱。参见例如实施例10。凝集素柱可商购获得；例如，Capto小扁豆凝集素可以从GEHealthcare获得。在某些方面，小扁豆凝集素柱可以使用重组凝集素。在分子水平上，认为碳水化合物部分与小扁豆凝集素结合，释放蛋白质的氨基酸以在去污剂周围聚结，导致形成去污剂核心，从而提供具有多个抗原拷贝(例如，糖蛋白寡聚体)的纳米颗粒，所述糖蛋白寡聚体可以是锚定在去污剂中的二聚体、三聚体或四聚体。

当在去污剂交换期间与蛋白质一起孵育形成纳米颗粒时，去污剂在早期纯化步骤期间可以以多至约0.1％(w/v)存在，并且使此量降低以获得具有最佳稳定性的最终纳米颗粒。例如，非离子型去污剂(例如，PS80)可以为约0.03％至约0.1％。优选地，为了改善稳定性，纳米颗粒含有约0.03％至约0.05％的PS80。配制品中低于约0.03％PS80的量未表现出良好的稳定性。此外，如果PS80以高于约0.05％存在，则形成聚集体。因此，约0.03％至约0.05％PS80提供了结构和稳定性益处，这允许纳米颗粒的长期稳定性和降低的降解。

可以使用如下蛋白质进行去污剂交换，将所述蛋白质如上文所讨论地纯化，并且纯化、冷冻储存，然后解冻以进行去污剂交换。

纳米颗粒的增强的稳定性和增强的免疫原性

不受理论束缚，认为将抗原与非离子型去污剂核心缔合提供了优异的稳定性和抗原呈递。本文所公开的纳米颗粒提供出乎意料好的稳定性和免疫原性。有利的稳定性对于在缺乏适当存储的国家中使用的疫苗特别有用；例如，非洲的某些地方可能缺乏冷藏，并且因此用于在面临困难的储存条件的地区流行的疾病(诸如埃博拉病毒和RSV)的疫苗尤其受益于改善的稳定性。此外，使用中性pH方法生产的HA流感纳米颗粒展现优于已知重组流感疫苗的折叠。

值得注意的是，使用去污剂生产RSV疫苗(包括裂解疫苗)的现有方法(诸如在Colau等人的US 2004/0028698中所述)未能产生有效的结构。与如本文所公开的具有围绕去污剂核心的蛋白质的纳米颗粒不同，Colau等人的组合物含有缺乏可鉴定的病毒结构的无定形材料，推测这导致未能有效地向免疫系统呈递表位。此外，所公开的纳米颗粒具有特别增强的稳定性，因为抗原(通常是糖蛋白)在去污剂核心周围的取向在空间上阻碍了引起蛋白质降解的酶和其他化学物质的进入。

纳米颗粒具有增强的稳定性，这是由它们在暴露于不同胁迫后维持免疫原性的能力决定的。稳定性可以以多种方式测量。在一种方法中，可以制备肽图谱，以在设计成通过模拟苛刻的储存条件来胁迫纳米颗粒的各种处理后确定抗原蛋白的完整性。因此，稳定性的度量是与对照样品相比胁迫样品中抗原肽的相对丰度。即使在对RSV F纳米颗粒组合物施加各种不同胁迫之后，也可以实现稳健的免疫反应。使用高于0.015％的PS80水平，纳米颗粒具有改善的蛋白酶抗性。值得注意的是，在18个月时，与0.015％PS80相比，0.03％的PS80显示出截短物质形成中的50％减少。本文公开的纳米颗粒在2℃-8℃下是稳定的。然而，有利的是，它们也在25℃下稳定至少2个月。在一些实施方案中，所述组合物在25℃下稳定至少3个月、至少6个月、至少12个月、至少18个月或至少24个月。对于RSV-F纳米颗粒，可以通过测量截短的F1蛋白的形成来确定稳定性。有利地，响应于多种胁迫(包括pH(pH3.7)、高pH(pH10)、升高的温度(50℃持续2周)和甚至被过氧化物氧化)，如通过肽作图所测量的，与对照RSV-F蛋白相比，本文公开的RSV-F纳米颗粒以90％至100％的丰度有利地保持完整的抗原位点II。

认为糖蛋白锚定在去污剂核心中的位置通过减少不希望的相互作用而提供增强的稳定性。例如，可以通过屏蔽作用来实现针对基于蛋白酶的降解的改善的保护，由此以本文所公开的摩尔比将糖蛋白锚定在核心中导致了空间位阻，从而阻断蛋白酶进入。

因此，在特定方面，本文公开了RSV-F纳米颗粒和含有所述纳米颗粒的组合物，响应于选自以下的一种或多种处理：在50℃下孵育2周、在25℃下在pH 3.7下孵育1周、在25℃下在pH 10下孵育1周、在25℃搅动1周、和在25℃下与氧化剂(诸如过氧化氢)一起孵育1周，与未处理的对照相比，所述RSV-F纳米颗粒和含有所述纳米颗粒的组合物保持90％至100％的完整位点II肽。此外，在这样的处理之后，所述组合物的功能被保留。例如，与对照相比，中和抗体，抗RSV IgG和PCA滴度被保留。

增强的免疫原性以流感纳米颗粒实现的交叉中和为例。人们认为，从核心突出的流感抗原的取向提供了表位向免疫系统的更有效的呈递。

纳米颗粒RSV抗原

在典型的实施方案中，用于产生纳米颗粒的抗原是病毒蛋白。在一些方面，可以将所述蛋白质修饰，但保留刺激针对天然肽的免疫反应的能力。在一些方面，所述蛋白质固有地含有或适于含有跨膜结构域以促进将所述蛋白质缔合到去污剂核心中。通常，所述蛋白质天然地是糖蛋白。

在一方面，病毒是呼吸道合胞病毒(RSV)，并且病毒抗原是融合(F)糖蛋白。RSV F蛋白的结构和功能得到了很好的表征。用于在本文所述的组合物中使用的合适的RSV-F蛋白可源自RSV株系，如A2、Long、ATCC VR-26、19、6265、E49、E65、B65、RSB89-6256、RSB89-5857、RSB89-6190、和RSB89-6614。在某些实施方案中，RSV F蛋白与其天然变体相比发生了突变。这些突变赋予所需的特征，例如改善的蛋白质表达、增强的免疫原性等。描述RSV-F蛋白结构的另外的信息可以在以下文献中找到：Swanson等人A Monomeric UncleavedRespiratory Syncytial Virus F Antigen Retains Prefusion-Specific NeutralizingEpitopes.Journal of Virology,2014,88,11802–11810。Jason S.McLellan等人Structure of RSV Fusion Glycoprotein Trimer Bound to a Prefusion-SpecificNeutralizing Antibody.Science,2013,340,1113–1117。

初级融合切割位于与SEQ ID NO:2对应的残基131至136。初级融合切割位点的失活可以通过使位点中的残基突变来实现，结果是弗林蛋白酶不再能够识别共有位点。例如，初级弗林蛋白酶切割位点的失活可以通过在与野生型RSV F蛋白(SEQ ID NO:2)的精氨酸133、精氨酸135和精氨酸136对应的位置处引入至少一个氨基酸取代来实现。在特定方面，一个、两个或全部三个精氨酸均被突变成谷氨酰胺。在其他方面，失活是通过使野生型位点突变成以下序列之一来实现：KKQKQQ(SEQ ID NO:14)、QKQKQQ(SEQ ID NO:15)、KKQKRQ(SEQID NO:16)、和GRRQQR(SEQ ID NO:17)。

在特定方面，可以缺失与SEQ ID NO:2的酸137至146对应的1至10个氨基酸，包括下面所示的合适RSV F蛋白的特定例子。可以任选地使用活性初级融合切割位点KKRKRR(SEQ ID NO:18)来制备SEQ ID NO 3-13中的每一个。SEQ ID NO:2中的野生型株系具有测序错误(A测成P、V测成I、和V测成M)，所述测序错误已在SEQ ID NO:3-13中改正。在宿主细胞中表达RSV-F蛋白后，将N末端信号肽切割以提供最终序列。通常，所述信号肽被宿主细胞蛋白酶切割。然而，在其他方面，可以从宿主细胞中分离出全长蛋白质，并且随后切割信号肽。N末端RSV F信号肽由SEQ ID NO:26的氨基酸(MELLILKANAITTILTAVTFCFASG)组成。因此，例如，在表达和纯化期间从SEQ ID NO:8切割信号肽后，获得具有SEQ ID NO:19的序列的成熟蛋白，并将其用于产生RSV F纳米颗粒疫苗。任选地，可以将一个或多个、多至全部RSV F信号肽氨基酸缺失、突变，或者可以将整个信号肽缺失并用不同的信号肽替代以增强表达。保持起始的甲硫氨酸残基以起始表达。

在一些方面，本文所公开的RSV F蛋白仅通过融合结构域中的缺失(任选地其中初级切割位点失活)从野生型株系改变。在其他方面，可以对RSV F蛋白进行另外的改变。通常，将半胱氨酸残基突变。通常，不将N连接的糖基化位点突变。另外，保留了抗原位点II，因为帕利珠单抗(Palivizumab)抗体能够结合所述位点，所述抗原位点II在本文中也称为帕利珠单抗位点。莫他韦珠单抗(Motavizumab)抗体也在位点II结合。通过引用并入的另外的合适RSV-F蛋白发现于美国公开案US 2011/0305727中，具体地包括含有跨越在此文献图1C中所披露的残基100至150的序列的RSV-F蛋白。

在某些其他方面，RSV F1或F2结构域可以具有相对于如SEQ ID NO:2所示的野生型株系的修饰。例如，F1结构域可以具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个改变，其可以是突变或缺失。类似地，F2结构域可以具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个改变，其可以是突变或缺失。F1和F2结构域可以各自独立地保留与野生型序列至少90％、至少94％、至少95％、至少96％、至少98％、至少99％或100％的同一性。

在特定的例子中，RSV纳米颗粒药物产品可以含有约0.025％至约0.03％PS80，以及在约270μg/mL至约300μg/mL、或约60μg/mL至约300μg/mL范围内的RSV F。在其他方面，纳米颗粒药物产品可以在组合物中含有约0.035％至约0.04％PS80、以及在300μg/mL至约500μg/mL的RSV F。在又其他方面，纳米颗粒药物产品可以在组合物中含有约0.035％至约0.04％PS80、以及在350-500μg/mL的RSV F。

因为抗原和去污剂的浓度可以变化，所以各自的量能以非离子型去污剂:蛋白质的摩尔比提及。例如，通过使用通过ELISA/A280测量的PS80浓度和抗原的蛋白质浓度以及它们各自的分子量来计算PS80与蛋白质的摩尔比。用于计算的PS80的分子量为1310，并且使用RSV F为例，RSV F的分子量为65kD。将摩尔比计算如下：(PS80浓度×10×65000)÷(1310×以mg/mL计的RSV F浓度)。因此，例如，通过蛋白质测量的纳米颗粒浓度为270μg/mL，并且PS80浓度为0.015％和0.03％。这些分别具有如下的PS80与RSV F蛋白的摩尔比：27:1(即0.015x 10x 65000/(1310x 0.27))和55:1。

在特定方面，摩尔比在约30:1至约80:1、约30:1至约70:1、约30:1至约60:1、约40:1至约70:1、或约40:1至约50:1范围内。通常，替代非离子型去污剂是PS80，并且PS80:蛋白质的摩尔比为约30:1至约50:1。对于RSV-F糖蛋白，具有在35:1至约65:1范围内的摩尔比(以及特别是约45:1的比率)的纳米颗粒是尤其稳定的。

经修饰的抗原

本文所公开的抗原涵盖那些抗原的变异和突变体。在某些方面，抗原可以与所公开的抗原共享同一性。通常，并且除非在具体鉴定的抗原的上下文中特别定义，否则百分比同一性可以为至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或至少98％。可以使用比对程序ClustalW2(可获自www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/)来计算百分比同一性。可以将以下默认参数用于配对比对：蛋白权重矩阵(Protein Weight Matrix)＝Gonnet；空位开放＝10；空位延伸＝0.1。

在特定方面，纳米颗粒中所含的蛋白质由此蛋白质组成。在其他方面，纳米颗粒中所含的蛋白质包含此蛋白质。向蛋白质本身的添加可能是出于多种目的。在一些方面，抗原可以在N末端、C末端或两者处延伸。在一些方面，所述延伸物是对诸如纯化或检测等功能有用的标签。在一些方面，所述标签含有表位。例如，所述标签可以是聚谷氨酸标签、FLAG标签、HA标签、聚组氨酸标签(具有约5-10个组氨酸)、Myc标签、谷胱甘肽-S-转移酶标签、绿色荧光蛋白标签、麦芽糖结合蛋白标签、硫氧还蛋白标签或Fc标签。在其他方面，所述延伸物可以是与蛋白质融合以增强表达的N末端信号肽。尽管此类信号肽通常在细胞中表达期间被切割，但一些纳米颗粒可以含有具有完整信号肽的抗原。因此，当纳米颗粒包含抗原时，所述抗原可以含有延伸物，因此当掺入纳米颗粒中时可以是融合蛋白。出于计算与序列的同一性的目的，不包括延伸物。

在一些方面，抗原可以是截短的。例如，N末端可被截短约10个氨基酸、约30个氨基酸、约50个氨基酸、约75个氨基酸、约100个氨基酸或约200个氨基酸。代替N末端或除了N末端之外，C末端可以是截短的。例如，C末端可以被截短约10个氨基酸、约30个氨基酸、约50个氨基酸、约75个氨基酸、约100个氨基酸或约200个氨基酸。出于计算与具有截短的蛋白质的同一性的目的，在蛋白质的剩余部分上测量同一性。

组合纳米颗粒

如本文所用，组合纳米颗粒是指诱导针对两种或更多种不同病原体的免疫反应的纳米颗粒。取决于特定的组合，病原体可以是同一物种的不同株系或亚型，或者病原体可以是不同的物种。为了制备组合纳米颗粒，可以通过在去污剂交换阶段将来自多种病原体的糖蛋白结合，从而将它们组合到单个纳米颗粒中。在去污剂交换前使糖蛋白与柱结合允许在去污剂核心周围形成多种糖蛋白类型，以提供组合纳米颗粒。

本公开文本还提供了疫苗组合物，所述疫苗组合物通过组合各自诱导针对不同病原体的反应的两种或更多种纳米颗粒来诱导针对两种或更多种不同病原体的免疫反应。任选地，疫苗组合物可以含有单独的或与另外的纳米颗粒组合的一种或多种组合纳米颗粒，与另外的纳米颗粒组合的目的是最大化针对多种病原体的免疫反应，同时减少向受试者施用的疫苗组合物的数量。

在另一个例子中，流感和RSV二者都引起呼吸系统疾病，并且因此可以将HA、NA和/或RSV F混合到组合纳米颗粒中，或者可以将多种纳米颗粒组合在疫苗组合物中，以诱导针对RSV和一种或多种流感株系的反应。

疫苗组合物

本文所公开的组合物可以预防性地或治疗性地使用，但是通常将是预防性的。因此，本公开文本包括用于治疗或预防感染的方法。在一些方面，所述感染是由RSV引起的。在一些方面，所述感染是下呼吸道感染(LRTI)。所述方法涉及向受试者施用治疗量或预防量的本公开文本的免疫原性组合物。优选地，药物组合物是提供保护作用的疫苗组合物。在其他方面，所述保护作用可以包括在一定百分比的暴露人群中改善与感染相关的症状。例如，与未经治疗的受试者相比，取决于病原体，所述组合物可以预防或减少选自以下的一种或多种病毒疾病症状：发热疲劳、肌肉疼痛、头痛、喉咙痛、呕吐、腹泻、皮疹、肾和肝功能受损的症状、内出血和外出血。

可以在存在各种赋形剂、缓冲剂等的情况下将所述纳米颗粒配制用于作为疫苗施用。例如，所述疫苗组合物可以含有磷酸钠、氯化钠和/或组氨酸。磷酸钠可以以约10mM至约50mM、约15mM至约25mM或约25mM存在；在特定情况下，存在约22mM磷酸钠。组氨酸可以以约0.1％(w/v)、约0.5％(w/v)、约0.7％(w/v)、约1％(w/v)、约1.5％(w/v)、约2％(w/v)或约2.5％(w/v)存在。氯化钠(当存在时)可以为约150mM。在某些组合物(例如流感疫苗)中，氯化钠可以以更高的量存在，包括约200mM、约300mM、或约350mM。

某些纳米颗粒(特别是RSV F纳米颗粒)在弱酸性pH水平下具有改善的稳定性。例如，含有纳米颗粒的组合物的pH范围可以为约pH 5.8至约pH 7.0、约pH 5.9至约pH 6.8、约pH 6.0至约pH 6.5、约pH 6.1至约pH 6.4、约pH 6.1至约pH 6.3、或约pH 6.2。通常，RSV F蛋白纳米颗粒的组合物为约pH 6.2。在其他纳米颗粒中，组合物可以趋于中性；例如，流感纳米颗粒可以为约pH 7.0至pH 7.4；通常为约pH 7.2。

佐剂

在某些实施方案中，本文所公开的组合物可以与一种或多种佐剂组合以增强免疫反应。在其他实施方案中，所述组合物是在没有佐剂的情况下制备的，因此可用来作为无佐剂组合物施用。有利地，当作为单剂施用时，本文所公开的无佐剂组合物可以提供保护性免疫反应。诱导稳健的免疫反应的无明矾组合物尤其可用于约60岁及以上的成人。

基于铝的佐剂

在一些实施方案中，所述佐剂可以是明矾(例如AlPO₄或Al(OH)₃)。通常，所述纳米颗粒基本上结合至明矾。例如，所述纳米颗粒可以是至少80％结合、至少85％结合、至少90％结合或至少95％结合至明矾。通常，在组合物中，所述纳米颗粒是92％至97％结合至明矾。每剂存在的明矾的量通常在约400μg至约1250μg之间的范围内。例如，明矾可以以每剂约300μg至约900μg、约400μg至约800μg、约500μg至约700μg、约400μg至约600μg或约400μg至约500μg的量存在。通常，对于120μg蛋白纳米颗粒的一个剂量，明矾以约400μg存在。

皂苷佐剂

含有皂苷的佐剂也可以与本文所公开的免疫原组合。皂苷是源自皂树(Quillajasaponaria Molina)树皮的糖苷。通常，使用多步纯化过程制备皂苷，从而产生多种级分。如本文所用，术语“来自皂树的皂苷级分”一般用于描述皂树的半纯化或确定的皂苷级分或其基本上纯的级分。

皂苷级分

用于产生皂苷级分的若干种方法是合适的。级分A、B和C描述于美国专利号6,352,697中并且可以如以下制备。通过色谱法分离来自Quil A(一种粗水性皂树提取物)的亲脂级分，并且将其用水中的70％乙腈洗脱以回收亲脂级分。然后通过半制备型HPLC分离这种亲脂级分，使用在酸性水中的从25％至60％乙腈的梯度进行洗脱。在本文中称为“级分A”或“QH-A”的级分是或对应于在大约39％乙腈下洗脱的级分。在本文中称为“级分B”或“QH-B”的级分是或对应于在大约47％乙腈下洗脱的级分。在本文中称为“级分C”或“QH-C”的级分是或对应于在大约49％乙腈下洗脱的级分。关于级分纯化的另外信息可见于美国专利号5,057,540。当如本文所述制备时，皂树的级分A、B和C各自表示具有可定义特性的化学上紧密相关分子的组或家族。获得所述级分的色谱条件使得就洗脱曲线和生物活性而言批次间重现性是高度一致的。

已经描述了其他皂苷级分。级分B3、B4和B4b描述于EP0436620中。级分QA1-QA22是描述的EP03632279 B2，Q-VAC(Nor-Feed,AS丹麦)，皂树(Quillaja saponaria Molina)Spikoside(lsconova AB,Ultunaallén2B,756 51乌普萨拉,瑞典)。可以使用EP 0 3632279B2中的级分QA-1、QA-2、QA-3、QA-4、QA-5、QA-6、QA-7、QA-8、QA-9、QA-10、QA-11、QA-12、QA-13、QA-14、QA-15、QA-16、QA-17、QA-18、QA-19、QA-20、QA-21和QA-22，尤其是QA-7、QA-17、QA-18和QA-21。如EP 0 3632 279B2中(尤其是在第6页以及在第8和9页中的实施例1中)所述获得所述级分。

本文所述并用于形成佐剂的皂苷级分通常是基本上纯的级分；也就是说，所述级分基本上不存在来自其他材料的污染。在特定方面，基本上纯的皂苷级分可以含有按重量计至多40％、按重量计至多30％、按重量计至多25％、按重量计至多20％、按重量计至多15％、按重量计至多10％、按重量计至多7％、按重量计至多5％、按重量计至多2％、按重量计至多1％、按重量计至多0.5％或按重量计至多0.1％的其他化合物，诸如其他皂苷或其他佐剂材料。

ISCOM结构

皂苷级分能以称为ISCOM(免疫刺激复合物)的笼状颗粒的形式施用。ISCOM可以如EP 0109942B1、EP 0242380B1和EP 0180546 B1中所述制备。在特定实施方案中，可以使用转运和/或乘客抗原，如EP 9600647-3(PCT/SE97/00289)中所述。

基质佐剂

在一些方面，所述ISCOM是ISCOM基质复合物。所述ISCOM基质复合物包含至少一种皂苷级分和脂质。所述脂质至少是固醇，诸如胆固醇。在特定方面，所述ISCOM基质复合物还含有磷脂。所述ISCOM基质复合物还可以含有一种或多种其他免疫调节(佐剂活性)物质，不一定是糖苷，并且可以如EP 0436620B1中所述产生。

在其他方面，所述ISCOM是ISCOM复合物。ISCOM复合物含有至少一种皂苷、至少一种脂质和至少一种抗原或表位。所述ISCOM复合物含有通过去污剂处理缔合的抗原，使得一部分抗原整合到颗粒中。相比之下，ISCOM基质被配制为与抗原的混合物，并且ISCOM基质颗粒与抗原之间的缔合通过静电和/或疏水相互作用来介导。

根据一个实施方案，整合到ISCOM基质复合物或ISCOM复合物中的皂苷级分或也整合到ISCOM或ISCOM基质复合物中或与其混合的至少一种另外的佐剂选自皂树的级分A、级分B或级分C、皂树的半纯化制剂、皂树的纯化制剂或任何经纯化的亚级分(例如，QA 1-21)。

在特定方面，每个ISCOM颗粒可以含有至少两种皂苷级分。可以使用不同皂苷级分的重量％的任何组合。可以使用任何两种级分的重量％的任何组合。例如，所述颗粒可以分别含有任何重量％的级分A和任何重量％的另一种皂苷级分，诸如粗皂苷级分或级分C。因此，在特定方面，每个ISCOM基质颗粒或每个ISCOM复合物颗粒可以含有按重量计0.1％至99.9％、按重量计5％至95％、按重量计10％至90％、按重量计15％至85％、按重量计20％至80％、按重量计25％至75％、按重量计30％至70％、按重量计35％至65％、按重量计40％至60％、按重量计45％至55％、按重量计40％至60％或按重量计50％的一种皂苷级分(例如级分A)以及在每种情况下其余多至100％的另一种皂苷(例如任何粗级分或任何其他级分，例如级分C)。所述重量被计算为皂苷级分的总重量。ISCOM基质复合物和ISCOM复合物佐剂的例子公开于美国公开的申请号2013/0129770中。

在特定实施方案中，所述ISCOM基质或ISCOM复合物包含按重量计5％-99％的一种级分(例如级分A)和其余按重量计多至100％的另一种级分(例如粗皂苷级分或级分C)。所述重量被计算为皂苷级分的总重量。

在另一个实施方案中，所述ISCOM基质或ISCOM复合物包含按重量计40％至99％的一种级分(例如级分A)和按重量计1％至60％的另一种级分(例如粗皂苷级分或级分C)。所述重量被计算为皂苷级分的总重量。

在又另一个实施方案中，所述ISCOM基质或ISCOM复合物包含按重量计70％至95％的一种级分(例如，级分A)和按重量计30％至5％的另一种级分(例如，粗皂苷级分或级分C)。所述重量被计算为皂苷级分的总重量。在其他实施方案中，来自皂树的皂苷级分选自QA1-21中的任一种。

除了含有皂苷级分的混合物的颗粒之外，ISCOM基质颗粒和ISCOM复合物颗粒各自都可以仅使用一种皂苷级分形成。本文所公开的组合物可以含有多个颗粒，其中每个颗粒仅含有一种皂苷级分。也就是说，某些组合物可以含有一种或多种不同类型的ISCOM-基质复合物颗粒和/或一种或多种不同类型的ISCOM复合物颗粒，其中每个单独的颗粒含有来自皂树的一种皂苷级分，其中一种复合物中的皂苷级分与另一种复合物颗粒中的皂苷级分不同。

在特定方面，一种类型的皂苷级分或粗皂苷级分可以整合到一种ISCOM基质复合物或颗粒中，并且另一种类型的基本上纯的皂苷级分或粗皂苷级分可以整合到另一种ISCOM基质复合物或颗粒中。组合物或疫苗可以包含至少两种类型的复合物或颗粒，每种类型具有一种类型的整合到物理上不同的颗粒中的皂苷。

在所述组合物中，可以使用ISCOM基质复合物颗粒和/或ISCOM复合物颗粒的混合物，其中将一种皂苷级分皂树和另一种皂苷级分皂树分开掺入不同的ISCOM基质复合物颗粒和/或ISCOM复合物颗粒中。

各自具有一种皂苷级分的ISCOM基质或ISCOM复合物颗粒可以按重量％的任何组合存在于组合物中。在特定方面，组合物可以含有按重量计0.1％至99.9％、按重量计5％至95％、按重量计10％至90％、按重量计15％至85％、按重量计20％至80％、按重量计25％至75％、按重量计30％至70％、按重量计35％至65％、按重量计40％至60％、按重量计45％至55％、按重量计40至60％或按重量计50％的含有第一皂苷级分的ISCOM基质或复合物，其余部分由含有不同皂苷级分的ISCOM基质或复合物构成。在一些方面，所述其余部分是一种或多种ISCOM基质或复合物，其中每个基质或复合物颗粒仅含有一种皂苷级分。在其他方面，所述ISCOM基质或复合物颗粒可以含有多于一种皂苷级分。

在特定组合物中，第一ISCOM基质或ISCOM复合物颗粒中的皂苷级分是级分A，并且第二ISCOM基质或ISCOM复合物颗粒中的皂苷级分是级分C。

优选的组合物包含含有级分A的第一ISCOM基质和含有级分C的第二ISCOM基质，其中级分A ISCOM基质占总皂苷佐剂重量的约70％，并且级分C ISCOM基质占总皂苷佐剂重量的约30％。在另一种优选的组合物中，级分A ISCOM基质占总皂苷佐剂重量的约85％，并且级分C ISCOM基质占总皂苷佐剂重量的约15％。因此，在某些组合物中，级分A ISCOM基质存在的范围为所述组合物中皂苷佐剂总重量的约70％至约85％，并且级分CISCOM基质存在的范围为约15％至约30％。示例性QS-7和QS-21级分、它们的生产和它们的用途描述于美国专利号5,057,540；6,231,859；6,352,697；6,524,584；6,846,489；7,776,343和8,173,141中，将这些公开文本通过引用并入。

其他佐剂

在一些组合物中，可以另外或替代地使用其他佐剂。包括在以下文献中所述的任何佐剂设想在本公开文本的范围内：Vogel等人,“ACompendium of Vaccine Adjuvantsand Excipients(第2版),”(出于所有目的通过引用以其整体并入本文)。其他佐剂包括完全弗氏佐剂(免疫反应的非特异性刺激剂，含有杀死的结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis))、不完全弗氏佐剂和氢氧化铝佐剂。其他佐剂包括GMCSP、BCG、MDP化合物(诸如thur-MDP和nor-MDP)、CGP(MTP-PE)、脂质A和单磷酰脂质A(MPL)、MF-59、RIBI(其含有从细菌中提取的三种组分)、MPL、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和在2％角鲨烯/

80乳剂中的细胞壁骨架(CWS)。在一些实施方案中，所述佐剂可以是少层状脂质囊泡(paucilamellar lipid vesicle)；例如

是在从约100nm至约500nm范围内的少层状非磷脂囊泡。它们包含Brij 72、胆固醇、油酸和角鲨烯。已经显示Novasomes是有效的佐剂(参见，美国专利号5,629,021、6,387,373、和4,911,928)。

施用和剂量

本文所公开的组合物可以经由全身途径或粘膜途径或透皮途径施用或直接施用到特定组织中。如本文所用，术语“全身施用”包括肠胃外施用途径。特别地，肠胃外施用包括皮下、腹膜内、静脉内、动脉内、肌内或胸骨内注射、静脉内或肾脏透析输注技术。通常，全身肠胃外施用是肌内注射。如本文所用，术语“粘膜施用”包括口服、鼻内、阴道内、直肠内、气管内、肠和眼部施用。优选地，施用是肌内的。

可以以单剂量方案或多剂量方案施用组合物。可以在初次免疫方案或在加强免疫方案中使用多剂量。在多剂量方案中，各个剂量可以通过相同或不同的途径施用，所述途径例如为肠胃外初次和粘膜加强、粘膜初次和肠胃外加强等。在一些方面，在先前剂量之后约2周、约3周、约4周、约5周或约6周施用后续加强剂量。然而，通常，将本文所公开的组合物仅施用一次，但仍提供保护性免疫反应。

在一些实施方案中，以μg测量的剂量可以是包括溶质的剂量的总重量，或RSV F纳米颗粒的重量，或RSV F蛋白的重量。使用蛋白质浓度测定(A280或ELISA)来测量剂量。

包括用于小儿施用的抗原剂量可以在约30μg至约300μg、约90μg至约270μg、约100μg至约160μg、约110μg至约150μg、约120μg至约140μg、或约140μg至约160μg的范围内。在特定实施方案中，剂量为约120μg，与明矾一起施用。在一些方面，小儿剂量可以在约30μg至约90μg的范围内。可以在有或没有佐剂的情况下向某些人群施用。例如，当向年长者施用时，优选地没有明矾。在某些方面，组合物可以不含添加的佐剂。在此类情况下，可以将剂量增加约10％。

在一些实施方案中，可以将剂量在约0.1mL至约1.5mL、约0.3mL至约1.0mL、约0.4mL至约0.6mL、或约0.5mL的体积中施用，这是典型的量。

在用于RSV疫苗的特定实施方案中，剂量可以包含约175μg/mL至约325μg/mL、约200μg/mL至约300μg/mL、约220μg/mL至约280μg/mL、或约240μg/mL至约260μg/mL的RSV F蛋白浓度。

含有RSV F蛋白的组合物，诸如疫苗组合物和纳米颗粒进一步描述于美国申请号16/009,257和美国申请号15/819,962中，将所述两个美国申请出于所有目的通过引用以其整体并入本文。

将本公开文本中引用的所有专利、专利申请、参考文献和期刊文章出于所有目的通过引用以其整体明确地并入本文。

实施例

实施例1-通过孕妇的疫苗接种保护婴儿免受RSV下呼吸道感染(LRTI)

将包含具有铝佐剂的RSV融合(F)蛋白重组纳米颗粒的疫苗组合物施用至怀孕约28周至约33周的妇女。结果显示，所述疫苗保护婴儿免受RSV感染的严重后果，包括重度低氧血症。保护作用减少了住院治疗。

在婴儿的生命的前90天，针对RSV LRTI住院治疗的疫苗有效率为53％，并且针对重度RSV低氧血症的疫苗有效率为70％。与之形成鲜明对比的是，向怀孕多于33周的妇女施用疫苗显示，疫苗有效率显著降低。在多于33周时施用导致关于LRTI住院治疗的有效率仅为26％，并且关于重度RSV低氧血症的有效率为44％，如在她们的婴儿的生命的前90天所测量的。

此研究强调了出乎意料的结果，即在狭窄的怀孕窗口期间向妇女施用疫苗可对婴儿在出生后具有显著有益的结果。这些结果代表了在III期试验中，针对RSV的疫苗组合物首次显示出针对由RSV感染引起的重度低氧血症的高有效率。

序列表

<110> 诺瓦瓦克斯股份有限公司

<120> 用于预防由RSV感染引起的疾病或障碍的方法

<130> NOVV-084/01WO 305047-2875

<150> US 62/811,945

<151> 2019-02-28

<160> 29

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 1725

<212> DNA

<213> 呼吸道合胞病毒

<400> 1

atggagttgc taatcctcaa agcaaatgca attaccacaa tcctcactgc agtcacattt 60

tgttttgctt ctggtcaaaa catcactgaa gaattttatc aatcaacatg cagtgcagtt 120

agcaaaggct atcttagtgc tctgagaact ggttggtata ccagtgttat aactatagaa 180

ttaagtaata tcaaggaaaa taagtgtaat ggaacagatg ctaaggtaaa attgataaaa 240

caagaattag ataaatataa aaatgctgta acagaattgc agttgctcat gcaaagcaca 300

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aatgccaaaa aaaccaatgt aacattaagc aagaaaagga aaagaagatt tcttggtttt 420

ttgttaggtg ttggatctgc aatcgccagt ggcgttgctg tatctaaggt cctgcaccta 480

gaaggggaag tgaacaagat caaaagtgct ctactatcca caaacaaggc tgtagtcagc 540

ttatcaaatg gagttagtgt cttaaccagc aaagtgttag acctcaaaaa ctatatagat 600

aaacaattgt tacctattgt gaacaagcaa agctgcagca tatcaaatat agaaactgtg 660

atagagttcc aacaaaagaa caacagacta ctagagatta ccagggaatt tagtgttaat 720

gcaggtgtaa ctacacctgt aagcacttac atgttaacta atagtgaatt attgtcatta 780

atcaatgata tgcctataac aaatgatcag aaaaagttaa tgtccaacaa tgttcaaata 840

gttagacagc aaagttactc tatcatgtcc ataataaaag aggaagtctt agcatatgta 900

gtacaattac cactatatgg tgttatagat acaccctgtt ggaaactaca cacatcccct 960

ctatgtacaa ccaacacaaa agaagggtcc aacatctgtt taacaagaac tgacagagga 1020

tggtactgtg acaatgcagg atcagtatct ttcttcccac aagctgaaac atgtaaagtt 1080

caatcaaatc gagtattttg tgacacaatg aacagtttaa cattaccaag tgaaataaat 1140

ctctgcaatg ttgacatatt caaccccaaa tatgattgta aaattatgac ttcaaaaaca 1200

gatgtaagca gctccgttat cacatctcta ggagccattg tgtcatgcta tggcaaaact 1260

aaatgtacag catccaataa aaatcgtgga atcataaaga cattttctaa cgggtgcgat 1320

tatgtatcaa ataaagggat ggacactgtg tctgtaggta acacattata ttatgtaaat 1380

aagcaagaag gtaaaagtct ctatgtaaaa ggtgaaccaa taataaattt ctatgaccca 1440

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aaagatcaac tgagtggtat aaataatatt gcatttagta actaa 1725

<210> 2

<211> 574

<212> PRT

<213> 呼吸道合胞病毒

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210 215 220

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 137的缺失 (Δ1)

<400> 3

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Gly Glu Val Asn Lys Ile Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala

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<210> 4

<211> 572

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 4

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<210> 5

<211> 571

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 137-139的缺失 (Δ3)

<400> 5

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Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser

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Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gln Glu Gly Lys Ser Leu

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Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser Lys Asp Gln

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565 570

<210> 6

<211> 570

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 137-140的缺失 (Δ4)

<400> 6

Met Glu Leu Leu Ile Leu Lys Ala Asn Ala Ile Thr Thr Ile Leu Thr

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Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe

20 25 30

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275 280 285

Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gln Leu Pro Leu Tyr Gly Val

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Ile Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro Leu Cys Thr Thr

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Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn Ile Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg Gly

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Pro Lys Tyr Asp Cys Lys Ile Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser Ser

385 390 395 400

Ser Val Ile Thr Ser Leu Gly Ala Ile Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr

405 410 415

Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly Ile Ile Lys Thr Phe Ser

420 425 430

Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val

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Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gln Glu Gly Lys Ser Leu Tyr

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Val Lys Gly Glu Pro Ile Ile Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro

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Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser Ile Ser Gln Val Asn Glu Lys Ile Asn

485 490 495

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Ser Gly Ile Asn Asn Ile Ala Phe Ser Asn

565 570

<210> 7

<211> 569

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 137-141的缺失 (Δ5)

<400> 7

Met Glu Leu Leu Ile Leu Lys Ala Asn Ala Ile Thr Thr Ile Leu Thr

1 5 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe

20 25 30

Tyr Gln Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu

35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val Ile Thr Ile Glu Leu Ser Asn Ile

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Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu Ile Lys

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Leu Ser Lys Lys Gln Lys Gln Gln Leu Gly Val Gly Ser Ala Ile Ala

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Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn

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Lys Ile Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val Ser Leu

165 170 175

Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn

180 185 190

Tyr Ile Asp Lys Gln Leu Leu Pro Ile Val Asn Lys Gln Ser Cys Ser

195 200 205

Ile Ser Asn Ile Glu Thr Val Ile Glu Phe Gln Gln Lys Asn Asn Arg

210 215 220

Leu Leu Glu Ile Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val Thr Thr

225 230 235 240

Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu Leu Leu Ser Leu Ile

245 250 255

Asn Asp Met Pro Ile Thr Asn Asp Gln Lys Lys Leu Met Ser Asn Asn

260 265 270

Val Gln Ile Val Arg Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Met Ser Ile Ile Lys

275 280 285

Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gln Leu Pro Leu Tyr Gly Val Ile

290 295 300

Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro Leu Cys Thr Thr Asn

305 310 315 320

Thr Lys Glu Gly Ser Asn Ile Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg Gly Trp

325 330 335

Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe Pro Gln Ala Glu Thr

340 345 350

Cys Lys Val Gln Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp Thr Met Asn Ser Leu

355 360 365

Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val Asp Ile Phe Asn Pro

370 375 380

Lys Tyr Asp Cys Lys Ile Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser Ser Ser

385 390 395 400

Val Ile Thr Ser Leu Gly Ala Ile Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys

405 410 415

Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly Ile Ile Lys Thr Phe Ser Asn

420 425 430

Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly

435 440 445

Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gln Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val

450 455 460

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465 470 475 480

Asp Glu Phe Asp Ala Ser Ile Ser Gln Val Asn Glu Lys Ile Asn Gln

485 490 495

Ser Leu Ala Phe Ile Arg Lys Ser Asp Glu Leu Leu His Asn Val Asn

500 505 510

Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn Ile Met Ile Thr Thr Ile Ile Ile Val

515 520 525

Ile Ile Val Ile Leu Leu Ser Leu Ile Ala Val Gly Leu Leu Leu Tyr

530 535 540

Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser Lys Asp Gln Leu Ser

545 550 555 560

Gly Ile Asn Asn Ile Ala Phe Ser Asn

565

<210> 8

<211> 564

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 137-146的缺失 (Δ10)

<400> 8

Met Glu Leu Leu Ile Leu Lys Ala Asn Ala Ile Thr Thr Ile Leu Thr

1 5 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe

20 25 30

Tyr Gln Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu

35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val Ile Thr Ile Glu Leu Ser Asn Ile

50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu Ile Lys

65 70 75 80

Gln Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gln Leu Leu

85 90 95

Met Gln Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro

100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr

115 120 125

Leu Ser Lys Lys Gln Lys Gln Gln Ala Ile Ala Ser Gly Val Ala Val

130 135 140

Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn Lys Ile Lys Ser Ala

145 150 155 160

Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser

165 170 175

Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn Tyr Ile Asp Lys Gln

180 185 190

Leu Leu Pro Ile Val Asn Lys Gln Ser Cys Ser Ile Ser Asn Ile Glu

195 200 205

Thr Val Ile Glu Phe Gln Gln Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu Ile Thr

210 215 220

Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr

225 230 235 240

Met Leu Thr Asn Ser Glu Leu Leu Ser Leu Ile Asn Asp Met Pro Ile

245 250 255

Thr Asn Asp Gln Lys Lys Leu Met Ser Asn Asn Val Gln Ile Val Arg

260 265 270

Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Met Ser Ile Ile Lys Glu Glu Val Leu Ala

275 280 285

Tyr Val Val Gln Leu Pro Leu Tyr Gly Val Ile Asp Thr Pro Cys Trp

290 295 300

Lys Leu His Thr Ser Pro Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser

305 310 315 320

Asn Ile Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala

325 330 335

Gly Ser Val Ser Phe Phe Pro Gln Ala Glu Thr Cys Lys Val Gln Ser

340 345 350

Asn Arg Val Phe Cys Asp Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu

355 360 365

Val Asn Leu Cys Asn Val Asp Ile Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys

370 375 380

Ile Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser Ser Ser Val Ile Thr Ser Leu

385 390 395 400

Gly Ala Ile Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn

405 410 415

Lys Asn Arg Gly Ile Ile Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val

420 425 430

Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr

435 440 445

Val Asn Lys Gln Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro Ile

450 455 460

Ile Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala

465 470 475 480

Ser Ile Ser Gln Val Asn Glu Lys Ile Asn Gln Ser Leu Ala Phe Ile

485 490 495

Arg Lys Ser Asp Glu Leu Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr

500 505 510

Thr Asn Ile Met Ile Thr Thr Ile Ile Ile Val Ile Ile Val Ile Leu

515 520 525

Leu Ser Leu Ile Ala Val Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser

530 535 540

Thr Pro Val Thr Leu Ser Lys Asp Gln Leu Ser Gly Ile Asn Asn Ile

545 550 555 560

Ala Phe Ser Asn

<210> 9

<211> 568

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 137-142的缺失 (Δ6)

<400> 9

Met Glu Leu Leu Ile Leu Lys Ala Asn Ala Ile Thr Thr Ile Leu Thr

1 5 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe

20 25 30

Tyr Gln Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu

35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val Ile Thr Ile Glu Leu Ser Asn Ile

50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu Ile Lys

65 70 75 80

Gln Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gln Leu Leu

85 90 95

Met Gln Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro

100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr

115 120 125

Leu Ser Lys Lys Gln Lys Gln Gln Gly Val Gly Ser Ala Ile Ala Ser

130 135 140

Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn Lys

145 150 155 160

Ile Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val Ser Leu Ser

165 170 175

Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn Tyr

180 185 190

Ile Asp Lys Gln Leu Leu Pro Ile Val Asn Lys Gln Ser Cys Ser Ile

195 200 205

Ser Asn Ile Glu Thr Val Ile Glu Phe Gln Gln Lys Asn Asn Arg Leu

210 215 220

Leu Glu Ile Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val Thr Thr Pro

225 230 235 240

Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu Leu Leu Ser Leu Ile Asn

245 250 255

Asp Met Pro Ile Thr Asn Asp Gln Lys Lys Leu Met Ser Asn Asn Val

260 265 270

Gln Ile Val Arg Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Met Ser Ile Ile Lys Glu

275 280 285

Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gln Leu Pro Leu Tyr Gly Val Ile Asp

290 295 300

Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro Leu Cys Thr Thr Asn Thr

305 310 315 320

Lys Glu Gly Ser Asn Ile Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg Gly Trp Tyr

325 330 335

Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe Pro Gln Ala Glu Thr Cys

340 345 350

Lys Val Gln Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp Thr Met Asn Ser Leu Thr

355 360 365

Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val Asp Ile Phe Asn Pro Lys

370 375 380

Tyr Asp Cys Lys Ile Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser Ser Ser Val

385 390 395 400

Ile Thr Ser Leu Gly Ala Ile Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys Cys

405 410 415

Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly Ile Ile Lys Thr Phe Ser Asn Gly

420 425 430

Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly Asn

435 440 445

Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gln Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys

450 455 460

Gly Glu Pro Ile Ile Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp

465 470 475 480

Glu Phe Asp Ala Ser Ile Ser Gln Val Asn Glu Lys Ile Asn Gln Ser

485 490 495

Leu Ala Phe Ile Arg Lys Ser Asp Glu Leu Leu His Asn Val Asn Ala

500 505 510

Gly Lys Ser Thr Thr Asn Ile Met Ile Thr Thr Ile Ile Ile Val Ile

515 520 525

Ile Val Ile Leu Leu Ser Leu Ile Ala Val Gly Leu Leu Leu Tyr Cys

530 535 540

Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser Lys Asp Gln Leu Ser Gly

545 550 555 560

Ile Asn Asn Ile Ala Phe Ser Asn

565

<210> 10

<211> 567

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 137-143的缺失 (Δ7)

<400> 10

Met Glu Leu Leu Ile Leu Lys Ala Asn Ala Ile Thr Thr Ile Leu Thr

1 5 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe

20 25 30

Tyr Gln Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu

35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val Ile Thr Ile Glu Leu Ser Asn Ile

50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu Ile Lys

65 70 75 80

Gln Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gln Leu Leu

85 90 95

Met Gln Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro

100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr

115 120 125

Leu Ser Lys Lys Gln Lys Gln Gln Val Gly Ser Ala Ile Ala Ser Gly

130 135 140

Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn Lys Ile

145 150 155 160

Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val Ser Leu Ser Asn

165 170 175

Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn Tyr Ile

180 185 190

Asp Lys Gln Leu Leu Pro Ile Val Asn Lys Gln Ser Cys Ser Ile Ser

195 200 205

Asn Ile Glu Thr Val Ile Glu Phe Gln Gln Lys Asn Asn Arg Leu Leu

210 215 220

Glu Ile Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val Thr Thr Pro Val

225 230 235 240

Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu Leu Leu Ser Leu Ile Asn Asp

245 250 255

Met Pro Ile Thr Asn Asp Gln Lys Lys Leu Met Ser Asn Asn Val Gln

260 265 270

Ile Val Arg Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Met Ser Ile Ile Lys Glu Glu

275 280 285

Val Leu Ala Tyr Val Val Gln Leu Pro Leu Tyr Gly Val Ile Asp Thr

290 295 300

Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys

305 310 315 320

Glu Gly Ser Asn Ile Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys

325 330 335

Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe Pro Gln Ala Glu Thr Cys Lys

340 345 350

Val Gln Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu

355 360 365

Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val Asp Ile Phe Asn Pro Lys Tyr

370 375 380

Asp Cys Lys Ile Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser Ser Ser Val Ile

385 390 395 400

Thr Ser Leu Gly Ala Ile Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr

405 410 415

Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly Ile Ile Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys

420 425 430

Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly Asn Thr

435 440 445

Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gln Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly

450 455 460

Glu Pro Ile Ile Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu

465 470 475 480

Phe Asp Ala Ser Ile Ser Gln Val Asn Glu Lys Ile Asn Gln Ser Leu

485 490 495

Ala Phe Ile Arg Lys Ser Asp Glu Leu Leu His Asn Val Asn Ala Gly

500 505 510

Lys Ser Thr Thr Asn Ile Met Ile Thr Thr Ile Ile Ile Val Ile Ile

515 520 525

Val Ile Leu Leu Ser Leu Ile Ala Val Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys

530 535 540

Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser Lys Asp Gln Leu Ser Gly Ile

545 550 555 560

Asn Asn Ile Ala Phe Ser Asn

565

<210> 11

<211> 566

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 137-144的缺失 (Δ8)

<400> 11

Met Glu Leu Leu Ile Leu Lys Ala Asn Ala Ile Thr Thr Ile Leu Thr

1 5 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe

20 25 30

Tyr Gln Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu

35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val Ile Thr Ile Glu Leu Ser Asn Ile

50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu Ile Lys

65 70 75 80

Gln Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gln Leu Leu

85 90 95

Met Gln Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro

100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr

115 120 125

Leu Ser Lys Lys Gln Lys Gln Gln Gly Ser Ala Ile Ala Ser Gly Val

130 135 140

Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn Lys Ile Lys

145 150 155 160

Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly

165 170 175

Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn Tyr Ile Asp

180 185 190

Lys Gln Leu Leu Pro Ile Val Asn Lys Gln Ser Cys Ser Ile Ser Asn

195 200 205

Ile Glu Thr Val Ile Glu Phe Gln Gln Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu

210 215 220

Ile Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser

225 230 235 240

Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu Leu Leu Ser Leu Ile Asn Asp Met

245 250 255

Pro Ile Thr Asn Asp Gln Lys Lys Leu Met Ser Asn Asn Val Gln Ile

260 265 270

Val Arg Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Met Ser Ile Ile Lys Glu Glu Val

275 280 285

Leu Ala Tyr Val Val Gln Leu Pro Leu Tyr Gly Val Ile Asp Thr Pro

290 295 300

Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu

305 310 315 320

Gly Ser Asn Ile Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp

325 330 335

Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe Pro Gln Ala Glu Thr Cys Lys Val

340 345 350

Gln Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro

355 360 365

Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val Asp Ile Phe Asn Pro Lys Tyr Asp

370 375 380

Cys Lys Ile Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser Ser Ser Val Ile Thr

385 390 395 400

Ser Leu Gly Ala Ile Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala

405 410 415

Ser Asn Lys Asn Arg Gly Ile Ile Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp

420 425 430

Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu

435 440 445

Tyr Tyr Val Asn Lys Gln Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu

450 455 460

Pro Ile Ile Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe

465 470 475 480

Asp Ala Ser Ile Ser Gln Val Asn Glu Lys Ile Asn Gln Ser Leu Ala

485 490 495

Phe Ile Arg Lys Ser Asp Glu Leu Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys

500 505 510

Ser Thr Thr Asn Ile Met Ile Thr Thr Ile Ile Ile Val Ile Ile Val

515 520 525

Ile Leu Leu Ser Leu Ile Ala Val Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala

530 535 540

Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser Lys Asp Gln Leu Ser Gly Ile Asn

545 550 555 560

Asn Ile Ala Phe Ser Asn

565

<210> 12

<211> 565

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 137-145的缺失 (Δ9)

<400> 12

Met Glu Leu Leu Ile Leu Lys Ala Asn Ala Ile Thr Thr Ile Leu Thr

1 5 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe

20 25 30

Tyr Gln Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu

35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val Ile Thr Ile Glu Leu Ser Asn Ile

50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu Ile Lys

65 70 75 80

Gln Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gln Leu Leu

85 90 95

Met Gln Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro

100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr

115 120 125

Leu Ser Lys Lys Gln Lys Gln Gln Ser Ala Ile Ala Ser Gly Val Ala

130 135 140

Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn Lys Ile Lys Ser

145 150 155 160

Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val

165 170 175

Ser Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn Tyr Ile Asp Lys

180 185 190

Gln Leu Leu Pro Ile Val Asn Lys Gln Ser Cys Ser Ile Ser Asn Ile

195 200 205

Glu Thr Val Ile Glu Phe Gln Gln Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu Ile

210 215 220

Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr

225 230 235 240

Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu Leu Leu Ser Leu Ile Asn Asp Met Pro

245 250 255

Ile Thr Asn Asp Gln Lys Lys Leu Met Ser Asn Asn Val Gln Ile Val

260 265 270

Arg Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Met Ser Ile Ile Lys Glu Glu Val Leu

275 280 285

Ala Tyr Val Val Gln Leu Pro Leu Tyr Gly Val Ile Asp Thr Pro Cys

290 295 300

Trp Lys Leu His Thr Ser Pro Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly

305 310 315 320

Ser Asn Ile Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn

325 330 335

Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe Pro Gln Ala Glu Thr Cys Lys Val Gln

340 345 350

Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser

355 360 365

Glu Val Asn Leu Cys Asn Val Asp Ile Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys

370 375 380

Lys Ile Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser Ser Ser Val Ile Thr Ser

385 390 395 400

Leu Gly Ala Ile Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser

405 410 415

Asn Lys Asn Arg Gly Ile Ile Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr

420 425 430

Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr

435 440 445

Tyr Val Asn Lys Gln Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro

450 455 460

Ile Ile Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp

465 470 475 480

Ala Ser Ile Ser Gln Val Asn Glu Lys Ile Asn Gln Ser Leu Ala Phe

485 490 495

Ile Arg Lys Ser Asp Glu Leu Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser

500 505 510

Thr Thr Asn Ile Met Ile Thr Thr Ile Ile Ile Val Ile Ile Val Ile

515 520 525

Leu Leu Ser Leu Ile Ala Val Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg

530 535 540

Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser Lys Asp Gln Leu Ser Gly Ile Asn Asn

545 550 555 560

Ile Ala Phe Ser Asn

565

<210> 13

<211> 565

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 具有野生型融合切割位点的137-145的缺失 (Δ9)

<400> 13

Met Glu Leu Leu Ile Leu Lys Ala Asn Ala Ile Thr Thr Ile Leu Thr

1 5 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe

20 25 30

Tyr Gln Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu

35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val Ile Thr Ile Glu Leu Ser Asn Ile

50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu Ile Lys

65 70 75 80

Gln Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gln Leu Leu

85 90 95

Met Gln Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro

100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr

115 120 125

Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Ser Ala Ile Ala Ser Gly Val Ala

130 135 140

Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn Lys Ile Lys Ser

145 150 155 160

Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val

165 170 175

Ser Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn Tyr Ile Asp Lys

180 185 190

Gln Leu Leu Pro Ile Val Asn Lys Gln Ser Cys Ser Ile Ser Asn Ile

195 200 205

Glu Thr Val Ile Glu Phe Gln Gln Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu Ile

210 215 220

Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr

225 230 235 240

Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu Leu Leu Ser Leu Ile Asn Asp Met Pro

245 250 255

Ile Thr Asn Asp Gln Lys Lys Leu Met Ser Asn Asn Val Gln Ile Val

260 265 270

Arg Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Met Ser Ile Ile Lys Glu Glu Val Leu

275 280 285

Ala Tyr Val Val Gln Leu Pro Leu Tyr Gly Val Ile Asp Thr Pro Cys

290 295 300

Trp Lys Leu His Thr Ser Pro Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly

305 310 315 320

Ser Asn Ile Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn

325 330 335

Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe Pro Gln Ala Glu Thr Cys Lys Val Gln

340 345 350

Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser

355 360 365

Glu Val Asn Leu Cys Asn Val Asp Ile Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys

370 375 380

Lys Ile Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser Ser Ser Val Ile Thr Ser

385 390 395 400

Leu Gly Ala Ile Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser

405 410 415

Asn Lys Asn Arg Gly Ile Ile Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr

420 425 430

Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr

435 440 445

Tyr Val Asn Lys Gln Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro

450 455 460

Ile Ile Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp

465 470 475 480

Ala Ser Ile Ser Gln Val Asn Glu Lys Ile Asn Gln Ser Leu Ala Phe

485 490 495

Ile Arg Lys Ser Asp Glu Leu Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser

500 505 510

Thr Thr Asn Ile Met Ile Thr Thr Ile Ile Ile Val Ile Ile Val Ile

515 520 525

Leu Leu Ser Leu Ile Ala Val Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg

530 535 540

Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser Lys Asp Gln Leu Ser Gly Ile Asn Asn

545 550 555 560

Ile Ala Phe Ser Asn

565

<210> 14

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变的弗林蛋白酶切割位点

<400> 14

Lys Lys Gln Lys Gln Gln

1 5

<210> 15

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变的弗林蛋白酶切割位点

<400> 15

Gln Lys Gln Lys Gln Gln

1 5

<210> 16

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变的弗林蛋白酶切割位点

<400> 16

Lys Lys Gln Lys Arg Gln

1 5

<210> 17

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变的弗林蛋白酶切割位点

<400> 17

Gly Arg Arg Gln Gln Arg

1 5

<210> 18

<211> 6

<212> PRT

<213> 未知

<220>

<223> 弗林蛋白酶切割位点

<400> 18

Lys Lys Arg Lys Arg Arg

1 5

<210> 19

<211> 539

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 经修饰的RSV F蛋白

<400> 19

Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe Tyr Gln Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser

1 5 10 15

Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val Ile

20 25 30

Thr Ile Glu Leu Ser Asn Ile Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp

35 40 45

Ala Lys Val Lys Leu Ile Lys Gln Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala

50 55 60

Val Thr Glu Leu Gln Leu Leu Met Gln Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn

65 70 75 80

Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn

85 90 95

Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr Leu Ser Lys Lys Gln Lys Gln Gln Ala

100 105 110

Ile Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu

115 120 125

Val Asn Lys Ile Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val

130 135 140

Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu

145 150 155 160

Lys Asn Tyr Ile Asp Lys Gln Leu Leu Pro Ile Val Asn Lys Gln Ser

165 170 175

Cys Ser Ile Ser Asn Ile Glu Thr Val Ile Glu Phe Gln Gln Lys Asn

180 185 190

Asn Arg Leu Leu Glu Ile Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val

195 200 205

Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu Leu Leu Ser

210 215 220

Leu Ile Asn Asp Met Pro Ile Thr Asn Asp Gln Lys Lys Leu Met Ser

225 230 235 240

Asn Asn Val Gln Ile Val Arg Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Met Ser Ile

245 250 255

Ile Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gln Leu Pro Leu Tyr Gly

260 265 270

Val Ile Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro Leu Cys Thr

275 280 285

Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn Ile Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg

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Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe Pro Gln Ala

305 310 315 320

Glu Thr Cys Lys Val Gln Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp Thr Met Asn

325 330 335

Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val Asp Ile Phe

340 345 350

Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys Ile Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser

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Ser Ser Val Ile Thr Ser Leu Gly Ala Ile Val Ser Cys Tyr Gly Lys

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Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly Ile Ile Lys Thr Phe

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Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser

405 410 415

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Tyr Val Lys Gly Glu Pro Ile Ile Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe

435 440 445

Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser Ile Ser Gln Val Asn Glu Lys Ile

450 455 460

Asn Gln Ser Leu Ala Phe Ile Arg Lys Ser Asp Glu Leu Leu His Asn

465 470 475 480

Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn Ile Met Ile Thr Thr Ile Ile

485 490 495

Ile Val Ile Ile Val Ile Leu Leu Ser Leu Ile Ala Val Gly Leu Leu

500 505 510

Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser Lys Asp Gln

515 520 525

Leu Ser Gly Ile Asn Asn Ile Ala Phe Ser Asn

530 535

<210> 20

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗原位点II的部分

<400> 20

Asn Ser Glu Leu Leu Ser Leu Ile Asn Asp Met Pro Ile Thr Asn Asp

1 5 10 15

Gln Lys Lys

<210> 21

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗原位点II的部分

<400> 21

Leu Met Ser Asn Asn

1 5

<210> 22

<211> 676

<212> PRT

<213> 埃博拉病毒

<400> 22

Met Gly Val Thr Gly Ile Leu Gln Leu Pro Arg Asp Arg Phe Lys Arg

1 5 10 15

Thr Ser Phe Phe Leu Trp Val Ile Ile Leu Phe Gln Arg Thr Phe Ser

20 25 30

Ile Pro Leu Gly Val Ile His Asn Ser Thr Leu Gln Val Ser Asp Val

35 40 45

Asp Lys Leu Val Cys Arg Asp Lys Leu Ser Ser Thr Asn Gln Leu Arg

50 55 60

Ser Val Gly Leu Asn Leu Glu Gly Asn Gly Val Ala Thr Asp Val Pro

65 70 75 80

Ser Val Thr Lys Arg Trp Gly Phe Arg Ser Gly Val Pro Pro Lys Val

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Ile Lys Lys Pro Asp Gly Ser Glu Cys Leu Pro Ala Ala Pro Asp Gly

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Gly Pro Cys Ala Gly Asp Phe Ala Phe His Lys Glu Gly Ala Phe Phe

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Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Thr Thr Phe

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Phe Phe Ser Ser His Pro Leu Arg Glu Pro Val Asn Ala Thr Glu Asp

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210 215 220

Phe Gly Thr Asn Glu Thr Glu Tyr Leu Phe Glu Val Asp Asn Leu Thr

225 230 235 240

Tyr Val Gln Leu Glu Ser Arg Phe Thr Pro Gln Phe Leu Leu Gln Leu

245 250 255

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325 330 335

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355 360 365

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405 410 415

Ala Ser Asp Thr Pro Pro Ala Thr Thr Ala Ala Gly Pro Leu Lys Ala

420 425 430

Glu Asn Thr Asn Thr Ser Lys Ser Ala Asp Ser Leu Asp Leu Ala Thr

435 440 445

Thr Thr Ser Pro Gln Asn Tyr Ser Glu Thr Ala Gly Asn Asn Asn Thr

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465 470 475 480

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Lys Phe Val Phe

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<210> 23

<211> 17

<212> PRT

<213> 埃博拉病毒

<400> 23

His Asn Thr Pro Val Tyr Lys Leu Asp Ile Ser Glu Ala Thr Gln Val

1 5 10 15

Glu

<210> 24

<211> 17

<212> PRT

<213> 埃博拉病毒

<400> 24

Ala Thr Gln Val Glu Gln His His Arg Arg Thr Asp Asn Asp Ser Thr

1 5 10 15

Ala

<210> 25

<211> 17

<212> PRT

<213> 埃博拉病毒

<400> 25

Ala Thr Gln Val Gly Gln His His Arg Arg Ala Asp Asn Asp Ser Thr

1 5 10 15

Ala

<210> 26

<211> 25

<212> PRT

<213> 呼吸道合胞病毒

<400> 26

Met Glu Leu Leu Ile Leu Lys Ala Asn Ala Ile Thr Thr Ile Leu Thr

1 5 10 15

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20 25

<210> 27

<211> 676

<212> PRT

<213> 埃博拉病毒

<400> 27

Met Gly Val Thr Gly Ile Leu Gln Leu Pro Arg Asp Arg Phe Lys Arg

1 5 10 15

Thr Ser Phe Phe Leu Trp Val Ile Ile Leu Phe Gln Arg Thr Phe Ser

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115 120 125

Ile Arg Gly Phe Pro Arg Cys Arg Tyr Val His Lys Val Ser Gly Thr

130 135 140

Gly Pro Cys Ala Gly Asp Phe Ala Phe His Lys Glu Gly Ala Phe Phe

145 150 155 160

Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Thr Thr Phe

165 170 175

Ala Glu Gly Val Val Ala Phe Leu Ile Leu Pro Gln Ala Lys Lys Asp

180 185 190

Phe Phe Ser Ser His Pro Leu Arg Glu Pro Val Asn Ala Thr Glu Asp

195 200 205

Pro Ser Ser Gly Tyr Tyr Ser Thr Thr Ile Arg Tyr Gln Ala Thr Gly

210 215 220

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245 250 255

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Leu Ile Trp Lys Val Asn Pro Glu Ile Asp Thr Thr Ile Gly Glu Trp

275 280 285

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Glu Leu Ser Phe Thr Val Val Ser Asn Gly Ala Lys Asn Ile Ser Gly

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Gln Ser Pro Ala Arg Thr Ser Ser Asp Pro Gly Thr Asn Thr Thr Thr

325 330 335

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Val His Ser Gln Gly Arg Glu Ala Ala Val Ser His Leu Thr Thr Leu

355 360 365

Ala Thr Ile Ser Thr Ser Pro Gln Ser Leu Thr Thr Lys Pro Gly Pro

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Asp Asn Ser Thr His Asn Thr Pro Val Tyr Lys Leu Asp Ile Ser Glu

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Leu Ile Thr Asn Thr Ile Ala Gly Val Ala Gly Leu Ile Thr Gly Gly

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Gln Ile Ile His Asp Phe Val Asp Lys Thr Leu Pro Asp Gln Gly Asp

625 630 635 640

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645 650 655

Gly Val Thr Gly Val Ile Ile Ala Val Ile Ala Leu Phe Cys Ile Cys

660 665 670

Lys Phe Val Phe

675

<210> 28

<211> 676

<212> PRT

<213> 埃博拉病毒

<400> 28

Met Gly Val Thr Gly Ile Leu Gln Leu Pro Arg Asp Arg Phe Lys Arg

1 5 10 15

Thr Ser Phe Phe Leu Trp Val Ile Ile Leu Phe Gln Arg Thr Phe Ser

20 25 30

Ile Pro Leu Gly Val Ile His Asn Ser Thr Leu Gln Val Ser Asp Val

35 40 45

Asp Lys Leu Val Cys Arg Asp Lys Leu Ser Ser Thr Asn Gln Leu Arg

50 55 60

Ser Val Gly Leu Asn Leu Glu Gly Asn Gly Val Ala Thr Asp Val Pro

65 70 75 80

Ser Val Thr Lys Arg Trp Gly Phe Arg Ser Gly Val Pro Pro Lys Val

85 90 95

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100 105 110

Ile Lys Lys Pro Asp Gly Ser Glu Cys Leu Pro Ala Ala Pro Asp Gly

115 120 125

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Gly Pro Cys Ala Gly Asp Phe Ala Phe His Lys Glu Gly Ala Phe Phe

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Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Thr Thr Phe

165 170 175

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180 185 190

Phe Phe Ser Ser His Pro Leu Arg Glu Pro Val Asn Ala Thr Glu Asp

195 200 205

Pro Ser Ser Gly Tyr Tyr Ser Thr Thr Ile Arg Tyr Gln Ala Thr Gly

210 215 220

Phe Gly Thr Asn Glu Thr Glu Tyr Leu Phe Glu Val Asp Asn Leu Thr

225 230 235 240

Tyr Val Gln Leu Glu Ser Arg Phe Thr Pro Gln Phe Leu Leu Gln Leu

245 250 255

Asn Glu Thr Ile Tyr Ala Ser Gly Lys Arg Ser Asn Thr Thr Gly Lys

260 265 270

Leu Ile Trp Lys Val Asn Pro Glu Ile Asp Thr Thr Ile Gly Glu Trp

275 280 285

Ala Phe Trp Glu Thr Lys Lys Asn Leu Thr Arg Lys Ile Arg Ser Glu

290 295 300

Glu Leu Ser Phe Thr Ala Val Ser Asn Gly Pro Lys Asn Ile Ser Gly

305 310 315 320

Gln Ser Pro Ala Arg Thr Ser Ser Asp Pro Glu Thr Asn Thr Thr Asn

325 330 335

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355 360 365

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405 410 415

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420 425 430

Glu Asn Thr Asn Thr Ser Lys Ser Ala Asp Ser Leu Asp Leu Ala Thr

435 440 445

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465 470 475 480

Leu Ile Thr Asn Thr Ile Ala Gly Val Ala Gly Leu Ile Thr Gly Gly

485 490 495

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Leu Ala Asn Glu Thr Thr Gln Ala Leu Gln Leu Phe Leu Arg Ala Thr

565 570 575

Thr Glu Leu Arg Thr Phe Ser Ile Leu Asn Arg Lys Ala Ile Asp Phe

580 585 590

Leu Leu Gln Arg Trp Gly Gly Thr Cys His Ile Leu Gly Pro Asp Cys

595 600 605

Cys Ile Glu Pro His Asp Trp Thr Lys Asn Ile Thr Asp Lys Ile Asp

610 615 620

Gln Ile Ile His Asp Phe Val Asp Lys Thr Leu Pro Asp Gln Gly Asp

625 630 635 640

Asn Asp Asn Trp Trp Thr Gly Trp Arg Gln Trp Ile Pro Ala Gly Ile

645 650 655

Gly Val Thr Gly Val Ile Ile Ala Val Ile Ala Leu Phe Cys Ile Cys

660 665 670

Lys Phe Val Phe

675

<210> 29

<211> 644

<212> PRT

<213> 埃博拉病毒

<400> 29

Ile Pro Leu Gly Val Ile His Asn Ser Thr Leu Gln Val Ser Asp Val

1 5 10 15

Asp Lys Leu Val Cys Arg Asp Lys Leu Ser Ser Thr Asn Gln Leu Arg

20 25 30

Ser Val Gly Leu Asn Leu Glu Gly Asn Gly Val Ala Thr Asp Val Pro

35 40 45

Ser Val Thr Lys Arg Trp Gly Phe Arg Ser Gly Val Pro Pro Lys Val

50 55 60

Val Asn Tyr Glu Ala Gly Glu Trp Ala Glu Asn Cys Tyr Asn Leu Glu

65 70 75 80

Ile Lys Lys Pro Asp Gly Ser Glu Cys Leu Pro Ala Ala Pro Asp Gly

85 90 95

Ile Arg Gly Phe Pro Arg Cys Arg Tyr Val His Lys Val Ser Gly Thr

100 105 110

Gly Pro Cys Ala Gly Asp Phe Ala Phe His Lys Glu Gly Ala Phe Phe

115 120 125

Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Thr Thr Phe

130 135 140

Ala Glu Gly Val Val Ala Phe Leu Ile Leu Pro Gln Ala Lys Lys Asp

145 150 155 160

Phe Phe Ser Ser His Pro Leu Arg Glu Pro Val Asn Ala Thr Glu Asp

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

Tyr Val Gln Leu Glu Ser Arg Phe Thr Pro Gln Phe Leu Leu Gln Leu

210 215 220

Asn Glu Thr Ile Tyr Ala Ser Gly Lys Arg Ser Asn Thr Thr Gly Lys

225 230 235 240

Leu Ile Trp Lys Val Asn Pro Glu Ile Asp Thr Thr Ile Gly Glu Trp

245 250 255

Ala Phe Trp Glu Thr Lys Lys Asn Leu Thr Arg Lys Ile Arg Ser Glu

260 265 270

Glu Leu Ser Phe Thr Ala Val Ser Asn Gly Pro Lys Asn Ile Ser Gly

275 280 285

Gln Ser Pro Ala Arg Thr Ser Ser Asp Pro Glu Thr Asn Thr Thr Asn

290 295 300

Glu Asp His Lys Ile Met Ala Ser Glu Asn Ser Ser Ala Met Val Gln

305 310 315 320

Val His Ser Gln Gly Arg Lys Ala Ala Val Ser His Leu Thr Thr Leu

325 330 335

Ala Thr Ile Ser Thr Ser Pro Gln Pro Pro Thr Thr Lys Thr Gly Pro

340 345 350

Asp Asn Ser Thr His Asn Thr Pro Val Tyr Lys Leu Asp Ile Ser Glu

355 360 365

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370 375 380

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385 390 395 400

Glu Asn Thr Asn Thr Ser Lys Ser Ala Asp Ser Leu Asp Leu Ala Thr

405 410 415

Thr Thr Ser Pro Gln Asn Tyr Ser Glu Thr Ala Gly Asn Asn Asn Thr

420 425 430

His His Gln Asp Thr Gly Glu Glu Ser Ala Ser Ser Gly Lys Leu Gly

435 440 445

Leu Ile Thr Asn Thr Ile Ala Gly Val Ala Gly Leu Ile Thr Gly Gly

450 455 460

Arg Arg Thr Arg Arg Glu Val Ile Val Asn Ala Gln Pro Lys Cys Asn

465 470 475 480

Pro Asn Leu His Tyr Trp Thr Thr Gln Asp Glu Gly Ala Ala Ile Gly

485 490 495

Leu Ala Trp Ile Pro Tyr Phe Gly Pro Ala Ala Glu Gly Ile Tyr Thr

500 505 510

Glu Gly Leu Met His Asn Gln Asp Gly Leu Ile Cys Gly Leu Arg Gln

515 520 525

Leu Ala Asn Glu Thr Thr Gln Ala Leu Gln Leu Phe Leu Arg Ala Thr

530 535 540

Thr Glu Leu Arg Thr Phe Ser Ile Leu Asn Arg Lys Ala Ile Asp Phe

545 550 555 560

Leu Leu Gln Arg Trp Gly Gly Thr Cys His Ile Leu Gly Pro Asp Cys

565 570 575

Cys Ile Glu Pro His Asp Trp Thr Lys Asn Ile Thr Asp Lys Ile Asp

580 585 590

Gln Ile Ile His Asp Phe Val Asp Lys Thr Leu Pro Asp Gln Gly Asp

595 600 605

Asn Asp Asn Trp Trp Thr Gly Trp Arg Gln Trp Ile Pro Ala Gly Ile

610 615 620

Gly Val Thr Gly Val Ile Ile Ala Val Ile Ala Leu Phe Cys Ile Cys

625 630 635 640

Lys Phe Val Phe

Claims (9)

1.一种母体免疫的方法，所述方法包括向怀有妊娠婴儿的孕妇施用包含RSV F蛋白和佐剂的组合物，其中在所述婴儿出生后在所述婴儿体内所述方法诱导针对至少一种与RSV下呼吸道感染(LRTI)相关的症状的免疫反应，并且其中所述孕妇怀孕约28周至约33周。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种症状是低氧血症。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述佐剂是基于铝的佐剂。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述组合物包含含有非离子去污剂核心和RSV F蛋白的纳米颗粒，其中所述RSV F蛋白与所述核心缔合并且所述去污剂以约0.03％至约0.05％存在。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述去污剂选自PS-20、PS-40、PS-60、PS-65和PS-80。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述RSV F蛋白包含与SEQ ID NO:2的氨基酸137-146对应的1至10个氨基酸的缺失以及与SEQ ID NO:2的氨基酸131至136对应的失活的初级弗林蛋白酶切割位点，其中所述初级弗林蛋白酶切割位点通过突变而失活。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述RSV-F蛋白选自SEQ ID NO:3-12。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述RSV-F蛋白由SEQ ID NO:8编码。

9.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述RSV-F蛋白包含SEQ ID NO:19。