CN114019167A - 一种用于诊断胃癌的血清标志物组合、试剂盒及使用方法 - Google Patents

一种用于诊断胃癌的血清标志物组合、试剂盒及使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于诊断胃癌的血清标志物组合，包括链酶亲和素偶联磁珠、生物素标记的捕获抗体、吖啶酯标记的检测抗体、预激发液、激发液、浓缩洗涤液和校准品；所述吖啶酯标记的检测抗体包括吖啶酯标记HLA‑G抗体等；所述生物素标记的捕获抗体包括生物素标记HLA‑G抗体等；所述校准品包括HLA‑G校准品等；所述预激发液包括H2O2和HNO3；所述激发液包括NaOH和Triton X‑100；所述浓缩洗涤液为含有Tween‑20的PBS缓冲液。

Description

一种用于诊断胃癌的血清标志物组合、试剂盒及使用方法
技术领域
本发明属于胃癌的诊断领域，尤其是一种用于诊断胃癌的血清标志物组合、试剂盒及使用方法。
背景技术
肿瘤是一类严重威胁人类健康，具有高发病率和高死亡率的疾病，据Frost&Sullivan(咨询公司)的文件显示，2020年全球新发癌症病例 1929万例，死亡病例996万例。
近年来随着对分子生物学和细胞免疫学的不断深入研究，血清肿瘤标志物检测已被广泛应用于肺癌的诊断中，具有操作简单、价格低廉、无不良反应等优点。但单一肿瘤标志物对诊断胃癌敏感度和特异度均不高，多种肿瘤标志物联合监测可弥补这一不足。
发明内容
本发明提供，旨在提供一种用于诊断胃癌的血清标志物组合及其试剂盒。
为解决上述技术问题，本发明提供一种用于诊断胃癌的血清标志物组合，包括链酶亲和素偶联磁珠、生物素标记的捕获抗体、吖啶酯标记的检测抗体、预激发液、激发液、浓缩洗涤液和校准品；所述吖啶酯标记的检测抗体包括吖啶酯标记HLA-G抗体、吖啶酯标记CEA抗体、吖啶酯标记CA125抗体、吖啶酯标记CA724抗体、吖啶酯标记PGI抗体；所述生物素标记的捕获抗体包括生物素标记HLA-G抗体、生物素标记CEA抗体、生物素标记CA125抗体、生物素标记CA724抗体、生物素标记PGI 抗体；所述校准品包括HLA-G校准品、CEA校准品、CA125校准品、 CA724校准品、PGI校准品；所述预激发液包括H2O2和HNO3；所述激发液包括NaOH和Triton X-100；所述浓缩洗涤液为含有Tween-20的 PBS缓冲液。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的改进：所述吖啶酯标记的检测抗体的浓度为0.1-6μg/ml。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述吖啶酯标记HLA-G抗体的制备如下：取适量白细胞抗原G单克隆抗体和吖啶酯；将白细胞抗原G单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6 的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；透析纯3次，去除未交联的小分子；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述吖啶酯标记CEA抗体的制备如下：取适量癌胚抗原单克隆抗体和吖啶酯；将癌胚抗原单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应 0.5～1.5h；透析纯3次，去除未交联的小分子；加入等体积甘油，于- 20℃以下保存备用。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述吖啶酯标记CA724抗体的制备如下：取适量糖类抗原CA724 单克隆抗体和吖啶酯；将糖类抗原CA724单克隆抗体用0.05mol/L、 pH9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；透析纯3次，去除未交联的小分子；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述吖啶酯标记CA125抗体的制备如下：取适量糖类抗原12-5单克隆抗体和吖啶酯；将糖类抗原12-5单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6 的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；透析纯3次，去除未交联的小分子；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述吖啶酯标记PGI抗体的制备如下：取适量胃蛋白酶原I单克隆抗体和吖啶酯；将胃蛋白酶原I单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6的 PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；透析纯3次，去除未交联的小分子；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述生物素标记的捕获抗体浓度为0.1-2μg/ml。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述生物素标记HLA-G抗体的制备如下：取适量白细胞抗原G 单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS调整浓度为 1mg/mL；按白细胞抗原G单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；转室温反应0.5～1.0h；将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述生物素标记CEA抗体的制备如下：取适量癌胚抗原单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS调整浓度为1mg/mL；按癌胚抗原单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；转室温反应0.5～1.0h；将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述生物素标记CA125抗体的制备如下：取适量糖类抗原12-5 单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS调整浓度为 1mg/mL；按糖类抗原12-5单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；转室温反应0.5～1.0h；将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述生物素标记CA724抗体的制备如下：取适量糖类抗原CA724 单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS调整浓度为 1mg/mL；按糖类抗原CA724单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；转室温反应0.5～1.0h；将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述生物素标记PGI抗体的制备如下：取适量胃蛋白酶原I单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS调整浓度为1mg/mL；按胃蛋白酶原I单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素， 2～8℃反应2h；转室温反应0.5～1.0h；将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述HLA-G校准品的配置如下：取适量白细胞抗原G蛋白抗原，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2ng/mL、5ng/mL、10 ng/mL、25ng/mL、75ng/mL。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述CEA校准品的配置如下：取适量癌胚抗原，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、 75ng/mL。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述CA125校准品的配置如下：取适量糖类抗原12-5，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、 25ng/mL、75ng/mL。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述CA724校准品的配置如下：取适量糖类抗原CA724，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、 25ng/mL、75ng/mL。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述PGI校准品的配置如下：取适量胃蛋白酶原I，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、 25ng/mL、75ng/mL。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的进一步改进：所述预激发液包括0.1-1％的H2O2和0.05-0.5mol/LHNO3；所述激发液包括0.05-1mol/L的NaOH和1-5％TritonX-100；所述含有Tween-20 的PBS缓冲液的pH为7.0-8.0。
一种用于诊断胃癌的血清标志物试剂盒：其R1-R19分别为：R1：链霉亲和素磁微粒悬浮液；R2：吖啶酯标记的HLA-G抗体；R3：吖啶酯标记的CEA抗体；R4：吖啶酯标记的CA125抗体；R5：吖啶酯标记的 CA724抗体；R6：吖啶酯标记的PGI抗体；R7：生物素标记的HLA-G抗体；R8：生物素标记的CEA抗体；R9：生物素标记的CA125抗体； R10：生物素标记的CA724抗体；R11：生物素标记的PGI抗体；R12： HLA-G校准品；R13：CEA校准品；R14：CA125校准品；R15：CA724 校准品；R16：PGI校准品；R17：预激发液；R18：激发液；R19：浓缩洗涤液。
一种用于诊断胃癌的血清标志物试剂的使用方法：分别取待测样本和校准品50μl，分别加入到反应杯中；分别加入50μl吖啶酯标记的抗体液；将物素标记的抗体液分别添加到待测样品反应杯和校准品反应杯中， 37℃孵育30分钟；在待测样品反应杯和校准品反应杯中分别加入链霉亲和素磁微粒悬浮液，37℃孵育20分钟；在待测样品反应杯和校准品反应杯中加入洗涤液，洗涤2遍；加入预激发液及激发液，检测其化学发光光子强度，通过标准曲线对样品浓度进行测定。
作为对对本发明给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物试剂的使用方法的进一步改进：用于诊断胃癌的血清标志物试剂的使用方法：所述校准品由HLA-G校准品、CEA校准品、CA125校准品、CA724校准品、PGI 校准品组成；所述吖啶酯标记的抗体液由吖啶酯标记的HLA-G抗体、吖啶酯标记的CEA抗体、吖啶酯标记的CA125抗体、吖啶酯标记的 CA724抗体、吖啶酯标记的PGI抗体组成；所述物素标记的抗体液由生物素标记的HLA-G抗体、生物素标记的CEA抗体、生物素标记的 CA125抗体、生物素标记的CA724抗体、生物素标记的PGI抗体组成。
基于本发明所公开的技术方案，采用多种肿瘤标志物联合检测可弥补单项检测的不足，有助于提高恶性肿瘤的检出率，从而大大提高诊断的敏感度和特异度。同时，利用肿瘤标志物在不同病理组织分型中具有一定特异度的优势进行早期分类，对治疗方案的选择十分重要。
具体实施方式
实施例1、一种用于诊断胃癌的血清标志物组合，包括链酶亲和素偶联磁珠、生物素标记的捕获抗体、吖啶酯标记的检测抗体、预激发液、激发液、浓缩洗涤液和校准品。
如上所述的吖啶酯标记的检测抗体的浓度为0.1-6μg/ml；吖啶酯标记的检测抗体由吖啶酯标记HLA-G抗体、吖啶酯标记CEA抗体、吖啶酯标记CA125抗体、吖啶酯标记CA724抗体、吖啶酯标记PGI抗体构成。
吖啶酯标记HLA-G抗体的制备如下：
取适量人体白细胞抗原G单克隆抗体和吖啶酯；将白细胞抗原G单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；透析纯3次，去除未交联的小分子；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
吖啶酯标记CEA抗体的制备如下：
取适量癌胚抗原单克隆抗体和吖啶酯；将癌胚抗原单克隆抗体用0. 05mol/L、pH9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～ 25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；透析纯3次，去除未交联的小分子；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
吖啶酯标记CA724抗体的制备如下：
取适量糖类抗原CA724单克隆抗体和吖啶酯；将糖类抗原CA724单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；透析纯3次，去除未交联的小分子；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
吖啶酯标记CA125抗体的制备如下：
取适量糖类抗原12-5单克隆抗体和吖啶酯；将糖类抗原12-5单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按 1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；透析纯3次，去除未交联的小分子；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
吖啶酯标记PGI抗体的制备如下：
取适量胃蛋白酶原I单克隆抗体和吖啶酯；将胃蛋白酶原I单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按 1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；透析纯3次，去除未交联的小分子；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
如上所述的生物素标记的捕获抗体浓度为0.1-2μg/ml；包括生物素标记HLA-G抗体、生物素标记CEA抗体、生物素标记CA125抗体、生物素标记CA724抗体、生物素标记PGI抗体。
生物素标记HLA-G抗体的制备如下：
取适量白细胞抗原G单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6 的PBS调整浓度为1mg/mL；按白细胞抗原G单克隆抗体:生物素＝1∶10 ～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；转室温反应0.5～1.0h；将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
生物素标记CEA抗体的制备如下：
取适量癌胚抗原单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS 调整浓度为1mg/mL；按癌胚抗原单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；转室温反应0.5～1.0h；将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；加入等体积甘油，于- 20℃以下保存备用。
生物素标记CA125抗体的制备如下：
取适量糖类抗原12-5单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6 的PBS调整浓度为1mg/mL；按糖类抗原12-5单克隆抗体:生物素＝1∶10 ～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；转室温反应0.5～1.0h；将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
生物素标记CA724抗体的制备如下：
取适量糖类抗原CA724单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、 pH9.6的PBS调整浓度为1mg/mL；按糖类抗原CA724单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；转室温反应0.5 ～1.0h；将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
生物素标记PGI抗体的制备如下：
取适量胃蛋白酶原I单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的 PBS调整浓度为1mg/mL；按胃蛋白酶原I单克隆抗体:生物素＝1∶10～20 摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；转室温反应0.5～1.0h；将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
如上所述的校准品包括HLA-G校准品、CEA校准品、CA125校准品、CA724校准品、PGI校准品。
HLA-G校准品的配置如下：
取适量白细胞抗原G蛋白抗原，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、75ng/mL。
CEA校准品的配置如下：
取适量癌胚抗原，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2 ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、75ng/mL。
CA125校准品的配置如下：
取适量糖类抗原12-5，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2 ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、75ng/mL。
CA724校准品的配置如下：
取适量糖类抗原CA724，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为 0、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、75ng/mL。
PGI校准品的配置如下：
取适量胃蛋白酶原I，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2 ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、75ng/mL。
如上所述的预激发液包括0.1-1％的H2O2和0.05-0.5mol/L HNO3；激发液包括0.05-1mol/L的NaOH和1-5％Triton X-100；浓缩洗涤液为含有 Tween-20的PBS缓冲液，其pH为7.0-8.0。
如上所述的人类白细胞抗原G(HLA-G)是一种非经典的HLA-I类抗原，其可与表达在免疫细胞上的受体结合直接发挥免疫抑制作用，同时参与免疫耐受过程，使肿瘤细胞逃避宿主免疫监视。HLA-G仅在恶性肿瘤组织中异常表达，在肺癌、乳腺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、宫颈癌、卵巢癌、食管鳞癌、子宫内膜癌、甲状腺癌、恶性胶质细胞瘤上均有不同程度的表达，HLA-G是一种新的、特异性的恶性肿瘤标志物。癌胚抗原 (CEA)是一种参与细胞黏附的酸性糖蛋白，具有人类胚胎抗原特性，广泛存在于内胚层来源的恶性肿瘤细胞表面，在恶性肿瘤中的表达具有广谱性，在正常人胃肠道、胰腺和肝脏中也有少量表达。外周血CEA表达水平与病情进展密切相关，可以作为恶性肿瘤尤其是消化道肿瘤诊断、病情发展、治疗指导和预后评估的一种较好的指标，若与CEA升高有关的肿瘤治疗后，动态检测CEA水平，根据其变化监控肿瘤复发转移。临床上 CEA是常用的辅助诊断恶性肿瘤的参考指标之一。糖类抗原CA724是一种黏蛋白类糖类抗原物质，约85.00％-95.00％的胃、结肠、胰腺、肺和卵巢恶性肿瘤都存在该物质，所以它是一种较为广谱的肿瘤标志物。CA724 与胃癌发生与发展密切相关，具较高敏感性，可以作为胃癌诊断的肿瘤标记物之一,其敏感性甚至比其它肿瘤标志物还高，是目前胃癌诊断较为可靠的肿瘤标志物之一。糖类抗原12-5(CA12-5)是一种表达于胎儿体腔上皮细胞的糖蛋白，作为肺癌的独立预后指标，而不受肿瘤大小、组织类型、分期及患者年龄的影响。胃蛋白酶原I(PGI)是由泌酸腺的主细胞合成，PG是胃蛋白酶的前体，胃粘膜可同时分泌PGI和PGII两种酶原，PGI广泛分布于胃主细胞和粘液颈细胞内，故可反映胃粘膜的状态和分泌功能。当胃粘膜异常病变是，患者血清中的两者含量亦会发生变化。 PGI和PGII比值对早期胃癌筛查、病理分级和术后转移情况有重要临床参考价值。
实施例2、一种用于诊断胃癌的血清标志物试剂盒。
包括R1-R19；其R1-R19分别为：
R1：链霉亲和素磁微粒悬浮液；
R2：吖啶酯标记的HLA-G抗体；
R3：吖啶酯标记的CEA抗体；
R4：吖啶酯标记的CA125抗体；
R5：吖啶酯标记的CA724抗体；
R6：吖啶酯标记的PGI抗体；
R7：生物素标记的HLA-G抗体；
R8：生物素标记的CEA抗体；
R9：生物素标记的CA125抗体；
R10：生物素标记的CA724抗体；
R11：生物素标记的PGI抗体；
R12：HLA-G校准品；
R13：CEA校准品；
R14：CA125校准品；
R15：CA724校准品；
R16：PGI校准品；
R17：预激发液；
R18：激发液；
R19：浓缩洗涤液。
实施例3、一种用于诊断胃癌的血清标志物试剂盒的使用方法。
分别取待测样本和校准品(由HLA-G校准品、CEA校准品、CA125 校准品、CA724校准品、PGI校准品组成)50μl，分别加入到反应杯中；
分别加入50μl吖啶酯标记的抗体液(吖啶酯标记的抗体液由吖啶酯标记的HLA-G抗体、吖啶酯标记的CEA抗体、吖啶酯标记的CA125抗体、吖啶酯标记的CA724抗体、吖啶酯标记的PGI抗体组成)；
将生物素标记的抗体液(生物素标记的抗体液由生物素标记的HLA- G抗体、生物素标记的CEA抗体、生物素标记的CA125抗体、生物素标记的CA724抗体、生物素标记的PGI抗体组成)分别添加到待测样品反应杯和校准品反应杯中，37℃孵育30分钟；
在待测样品反应杯和校准品反应杯中分别加入链霉亲和素磁微粒悬浮液，37℃孵育20分钟；
在待测样品反应杯和校准品反应杯中加入洗涤液(洗涤液为含有 Tween-20的PBS缓冲液，其pH为7.0-8.0)，洗涤2遍；
加入预激发液(包括0.1-1％的H2O2和0.05-0.5mol/L HNO3)及激发液(包括0.05-1mol/L的NaOH和1-5％Triton X-100)，检测其化学发光光子强度，通过标准曲线对样品浓度进行测定，结果如下表所示：
Figure BDA0003314385760000141
特异性、敏感性、准确性分析表1
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的一个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种用于诊断胃癌的血清标志物组合，其特征在于：包括链酶亲和素偶联磁珠、生物素标记的捕获抗体、吖啶酯标记的检测抗体、预激发液、激发液、浓缩洗涤液和校准品；
所述吖啶酯标记的检测抗体包括吖啶酯标记HLA-G抗体、吖啶酯标记CEA抗体、吖啶酯标记CA125抗体、吖啶酯标记CA724抗体、吖啶酯标记PGI抗体；
所述生物素标记的捕获抗体包括生物素标记HLA-G抗体、生物素标记CEA抗体、生物素标记CA125抗体、生物素标记CA724抗体、生物素标记PGI抗体；
所述校准品包括HLA-G校准品、CEA校准品、CA125校准品、CA724校准品、PGI校准品；
所述预激发液包括H2O2和HNO3；
所述激发液包括NaOH和Triton X-100；
所述浓缩洗涤液为含有Tween-20的PBS缓冲液。
2.根据权利要求1给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合，其特征在于：所述吖啶酯标记的检测抗体的浓度为0.1-6μg/ml。
3.根据权利要求1给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合，其特征在于：所述生物素标记的捕获抗体浓度为0.1-2μg/ml。
4.根据权利要求1给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合，其特征在于：所述吖啶酯标记HLA-G抗体的制备如下：
取适量白细胞抗原G单克隆抗体和吖啶酯；
将白细胞抗原G单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；
透析纯3次，去除未交联的小分子；
加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用；
所述吖啶酯标记CEA抗体的制备如下：
取适量癌胚抗原单克隆抗体和吖啶酯；
将癌胚抗原单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；
透析纯3次，去除未交联的小分子；
加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用；
所述吖啶酯标记CA724抗体的制备如下：
取适量糖类抗原CA724单克隆抗体和吖啶酯；
将糖类抗原CA724单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；
透析纯3次，去除未交联的小分子；
加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用；
所述吖啶酯标记CA125抗体的制备如下：
取适量糖类抗原12-5单克隆抗体和吖啶酯；
将糖类抗原12-5单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；
透析纯3次，去除未交联的小分子；
加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用；
所述吖啶酯标记PGI抗体的制备如下：
取适量胃蛋白酶原I单克隆抗体和吖啶酯；
将胃蛋白酶原I单克隆抗体用0.05mol/L、pH 9.6的PBS稀释浓度为1mg/mL后，与吖碇酯按1∶(5～25)摩尔比例混合，室温反应0.5～1.5h；
透析纯3次，去除未交联的小分子；
加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用；
所述生物素标记HLA-G抗体的制备如下：
取适量白细胞抗原G单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS调整浓度为1mg/mL；
按白细胞抗原G单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；
转室温反应0.5～1.0h；
将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；
加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用；
所述生物素标记CEA抗体的制备如下：
取适量癌胚抗原单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS调整浓度为1mg/mL；
按癌胚抗原单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；
转室温反应0.5～1.0h；
将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；
加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用；
所述生物素标记CA125抗体的制备如下：
取适量糖类抗原12-5单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS调整浓度为1mg/mL；
按糖类抗原12-5单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；
转室温反应0.5～1.0h；
将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；
加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用；
所述生物素标记CA724抗体的制备如下：
取适量糖类抗原CA724单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS调整浓度为1mg/mL；
按糖类抗原CA724单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；
转室温反应0.5～1.0h；
将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；
加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用；
所述生物素标记PGI抗体的制备如下：
取适量胃蛋白酶原I单克隆抗体和生物素，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS调整浓度为1mg/mL；
按胃蛋白酶原I单克隆抗体:生物素＝1∶10～20摩尔比加入活化的生物素，2～8℃反应2h；
转室温反应0.5～1.0h；
将反应液移至透析袋，采用0.05mol/L、pH9.6的PBS透析24h；
加入等体积甘油，于-20℃以下保存备用。
5.根据权利要求1给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合，其特征在于：所述HLA-G校准品的配置如下：
取适量白细胞抗原G蛋白抗原，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、75ng/mL；
所述CEA校准品的配置如下：
取适量癌胚抗原，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、75ng/mL；
所述CA125校准品的配置如下：
取适量糖类抗原12-5，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、75ng/mL；
所述CA724校准品的配置如下：
取适量糖类抗原CA724，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、75ng/mL；
所述PGI校准品的配置如下：
取适量胃蛋白酶原I，溶解于牛血清，分别配制HLA-G浓度为0、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、75ng/mL。
6.根据权利要求1给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物组合，其特征在于：所述预激发液包括0.1-1％的H2O2和0.05-0.5mol/L HNO3；
所述激发液包括0.05-1mol/L的NaOH和1-5％TritonX-100；
所述含有Tween-20的PBS缓冲液的pH为7.0-8.0。
7.一种用于诊断胃癌的血清标志物试剂盒，其特征在于：包括R1-R19；其R1-R19分别为：
R1：链霉亲和素磁微粒悬浮液；
R2：吖啶酯标记的HLA-G抗体；
R3：吖啶酯标记的CEA抗体；
R4：吖啶酯标记的CA125抗体；
R5：吖啶酯标记的CA724抗体；
R6：吖啶酯标记的PGI抗体；
R7：生物素标记的HLA-G抗体；
R8：生物素标记的CEA抗体；
R9：生物素标记的CA125抗体；
R10：生物素标记的CA724抗体；
R11：生物素标记的PGI抗体；
R12：HLA-G校准品；
R13：CEA校准品；
R14：CA125校准品；
R15：CA724校准品；
R16：PGI校准品；
R17：预激发液；
R18：激发液；
R19：浓缩洗涤液。
8.根据权利要求1给出一种用于诊断胃癌的血清标志物组合的使用方法，其特征在于：分别取待测样本和校准品50μl，分别加入到反应杯中；
分别加入50μl吖啶酯标记的抗体液；
将物素标记的抗体液分别添加到待测样品反应杯和校准品反应杯中，37℃孵育30分钟；
在待测样品反应杯和校准品反应杯中分别加入链霉亲和素磁微粒悬浮液，37℃孵育20分钟；
在待测样品反应杯和校准品反应杯中加入洗涤液，洗涤2遍；
加入预激发液及激发液，检测其化学发光光子强度，通过标准曲线对样品浓度进行测定。
9.根据权利要求8给出的一种用于诊断胃癌的血清标志物试剂盒的使用方法，其特征在于：所述校准品由HLA-G校准品、CEA校准品、CA125校准品、CA724校准品、PGI校准品组成；
所述吖啶酯标记的抗体液由吖啶酯标记的HLA-G抗体、吖啶酯标记的CEA抗体、吖啶酯标记的CA125抗体、吖啶酯标记的CA724抗体、吖啶酯标记的PGI抗体组成；
所述物素标记的抗体液由生物素标记的HLA-G抗体、生物素标记的CEA抗体、生物素标记的CA125抗体、生物素标记的CA724抗体、生物素标记的PGI抗体组成。
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