CN113950329A

CN113950329A - 多羟基化胆汁酸和法尼醇x受体激动剂的联合

Info

Publication number: CN113950329A
Application number: CN202080039658.7A
Authority: CN
Inventors: 林重庆; 刘琳; 乔纳森·亚哈·谢普斯; 王人学
Original assignee: Shandong Qingbai Xinda Pharmaceutical Technology Co Ltd
Current assignee: Shandong Qingbai Xinda Pharmaceutical Technology Co Ltd
Priority date: 2019-05-29
Filing date: 2020-05-29
Publication date: 2022-01-18
Also published as: US20220227804A1; WO2020240483A1

Abstract

本发明部分涉及多羟基化胆汁酸和法尼醇X受体激动剂的联合疗法。本发明还部分地提供了在制备用于治疗胆道疾病或胃肠道疾病的药物中包含法尼醇X受体激动剂和多羟基化胆汁酸的药物组合物。

Description

多羟基化胆汁酸和法尼醇X受体激动剂的联合

技术领域

本发明提供了一种联合疗法。更具体地，本发明提供了包括多羟基化胆汁酸和法尼醇X受体激动剂的联合疗法。

背景技术

胆汁是由肝脏产生的复杂分泌物。它储存在胆囊中，并定期释放到小肠中以帮助消化。胆汁成分包括胆固醇、磷脂、胆汁色素以及肝脏通过胆汁/粪便排除所清除的各种毒素。胆汁盐被合成并主动分泌穿过胆小管膜，从而提供驱使胆汁流动的渗透力。对于胆汁形成，这是限速步骤(rate-limiting step)。对于肝脏解毒、消化、胆固醇代谢、以及脂溶性营养物和维生素的吸收来说，胆汁流动是必要的。

胆汁酸作为通过胆汁分泌从体内清除胆固醇的载体以及作为摄取脂肪酸和脂溶性维生素的清洁剂至关重要。通过肝细胞中的法尼醇X受体(FXR)(7；8；9；10；11；12)，胆汁酸在调节细胞凋亡/存活(2；3；4；5；6)和调节基因表达方面也发挥重要作用。胆汁酸在肝细胞中由胆固醇合成，在C24位与甘氨酸或牛磺酸结合后分泌到胆汁中，在小肠中重吸收，并通过门静脉再循环回肝细胞。胆汁酸从肝脏向胆汁的小管分泌是胆汁酸肠肝循环的关键过程，其功能障碍会导致不同的肝脏疾病(1)。如果该过程被破坏，则胆汁酸的积累通常会由于去污剂的作用而引起肝脏损伤。在人类中，胆汁酸池每24小时循环6-10次，这导致每天约400毫升的胆汁盐分泌量为20-40克(13；14)。

在所选哺乳动物的胆汁中发现的常见胆汁酸包括如下：

一些胆汁淤积病症(如原发性胆汁性肝硬化)通过补充通常在人胆汁中不存在的低毒性胆汁酸熊去氧胆酸(UDCA)来治疗。

四羟基化胆汁酸(THBA)是一类胆汁酸，其可刺激胆汁流动，同时降低胆汁酸池的疏水性，从而治疗胆道疾病和胆汁淤积病症，例如，如2011年3月3日公开的WO 2011/022838中所公开的。

法尼醇X受体(FXR)，也称为胆汁酸受体(BAR))或NR1H4(核受体亚家族1，H组，成员4)是由人的NR1H4基因编码的核受体(NR)超家族的一员。FXR与胆汁酸合成、结合和转运的调节有关(36)。

奥贝胆酸(OCA)(鹅去氧胆酸(CDCA)的6α-乙基衍生物)是FXR的激动剂。OCA有效抑制胆汁酸合成，从而通过FXR介导的基因调控减少循环胆汁酸。OCA，作为药物产品

由FDA批准用于治疗成人患者中的原发性胆汁性胆管炎(PBC)。OCA还被指定用于联合UDCA治疗对UDCA应答不佳的成人PBC，或作为单一疗法用于无法耐受UDCA的成人。已有报道，大剂量OCA与UDCA联合会在那些未从UDCA单一疗法中获益的患者中引起黄疸(15)。

Tropifexor(TXR)，2-[(1R,5S)-3-[[5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-噁唑-4-基]甲氧基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-甲酸，是FXR激动剂，正在研究用于治疗胆汁淤积性肝病和非酒精性脂肪性肝炎。

发明内容

在一个方面中，本发明提供了一种药物组合物，包括i)多羟基化胆汁酸；和ii)不实用量(inoperable amount)的法尼醇X受体激动剂，联合药学上可接受的载体。

在一些实施方式中，法尼醇X受体激动剂的不实用量可以是亚治疗量或毒性量。在一些实施方式中，法尼醇X受体激动剂与多羟基化胆汁酸的比率可以等于或小于1:100。在各种实施方式中，法尼醇X受体激动剂可以是奥贝胆酸或tropifexor；多羟基化胆汁酸可以是四羟基化胆汁酸，如3多羟基化胆汁酸可以是四羟四羟基-5基基胆烷-24-酸；和/或四羟基化胆汁酸可以是结合化合物，如牛磺酸或甘氨酸结合物。

在另一方面中，本发明提供了一种通过向有需要的受试者施用本文所描述的组合物治疗胆道疾病或胃肠道疾病的方法。在各种实施方式中，胆道疾病可由胆汁淤积引起；胃肠道疾病可以是炎症性疾病。

在另一方面中，本发明提供了一种用于通过包括i)多羟基化胆汁酸；和ii)毒性量的法尼醇X受体激动剂联合药学上可接受的载体降低法尼醇X受体激动剂毒性的方法。

在另一方面中，本发明提供了一种用于通过包括i)多羟基化胆汁酸；和ii)不实用量的法尼醇X受体激动剂联合药学上可接受的载体增强法尼醇X受体激动剂疗效的方法。

在各种实施方式中，法尼醇X受体激动剂可以是奥贝胆酸或tropifexor；多羟基化胆汁酸可以是四羟基化胆汁酸，如3多羟基化胆汁酸可以是四羟四羟基-5基基胆烷-24-酸；和/或四羟基化胆汁酸可以是结合化合物，如牛磺酸或甘氨酸结合物和/或受试者可以是人。

在另一方面中，本发明提供了本文所描述的组合物在制备药物中的用途。

在各种实施方式中，该组合物可用于治疗胆道疾病或胃肠道疾病。

在另一方面中，本发明提供了一种制品或试剂盒，包括本文所描述的组合物以及治疗胆道疾病或胃肠道疾病的说明书。

本发明的发明内容不一定描述了本发明的所有特征。

附图说明

图1示出了在单一治疗条件下喂食1％THBA(w/w)、0.03％OCA(w/w)或对照饮食17周(从3周龄到20周)的Mdr2^-/-小鼠血浆中的胆红素、ALT、ALP和总胆汁酸。单因素方差分析(Tukey多重比较)的统计显著性：*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；****，P<0.0001。

图2示出了在有或没有不同剂量的OCA(0.03％、0.01％和0.003％(w/w))的1％THBA(w/w)的不同剂量组合，或对照饮食4周(从8周龄到12周龄)的治疗下，Mdr2^-/-小鼠血浆中的胆红素、ALT、ALP和总胆汁酸。通过单因素方差分析(Tukey多重比较)的统计显著性：*，P<0.05，**，P<0.01，***，P<0.001，***，P<0.0001。

图3示出了在TXR(0.00001％和0.000003％(w/w))、有或没有不同剂量的TXR(0.00001％和0.000003％(w/w))的1％THBA(w/w)的不同剂量组合，或对照饮食的治疗下，Mdr2^-/-小鼠血浆中的ALP。星号表示每对TXR治疗对THBA喂养组或对照饮食组的单因素方差分析(Tukey多重比较)的统计显著性。*，P<0.05，**，P<0.01，***，P<0.001以及****，P<0.0001。

具体实施方式

本公开部分提供了一种包括多羟基化胆汁酸和法尼醇X激活受体(FXR)激动剂的联合疗法(“要求保护的组合物”或“要求保护的组合”)。

在一些实施方式中，本公开提供了一种包括多羟基化胆汁酸(THBA)和法尼醇X受体(FXR)激动剂的联合疗法。

在一些实施方式中，多羟基化胆汁酸可以是胆汁盐疗法的药剂，与FXR激动剂联合以促进或改善患有胆道疾病或胃肠道(GI)疾病的受试者的胆汁分泌。根据本公开的联合疗法可以进一步联合另外的已知化合物如熊去氧胆酸盐(ursodeoxycholate)或其变体或衍生物使用，以改善肝功能和/或改善胆汁或GI疾病。在一些实施方式中，要求保护的组合物可导致减轻的肝损伤，例如在胆汁淤积性疾病中，或减轻的肠损伤，例如在炎症性胃肠道疾病中。

在一些实施方式中，要求保护的组合物可以降低胆汁酸池的毒性和/或疏水性。在一些实施方式中，要求保护的组合物可以减少有毒胆汁酸如鹅去氧胆酸(CDCA)的产生。在一些实施方式中，要求保护的组合物可以刺激胆汁流动。

在一些实施方式中，要求保护的组合物可以降低FXR激动剂的毒性。因此，在一些实施方式中，本公开提供了通过向有需要的受试者联合施用多羟基化胆汁酸与毒性量的法尼醇X受体激动剂来降低法尼醇X受体激动剂的毒性的方法，其中多羟基化胆汁酸的量足以基本上抵消法尼醇X受体激动剂的毒性。应当理解，如本文所述，某种程度的毒性可以是可接受的。例如，可以将毒性的降低与作为单一疗法施用时的法尼醇X受体激动剂的毒性进行比较。可以使用如本文所述或本领域已知的标准技术测量毒性。

在一些实施方式中，要求保护的组合物可以减少产生疏水性初级胆汁酸胆酸(CA)和CDCA的产生。在一些实施方式中，要求保护的组合物减少疏水性次级胆汁酸石胆酸(LCA)和脱氧胆酸(DCA)的产生。多羟基化胆汁酸在施用于受试者时可以是利胆的(具有胆汁流动刺激特性)。在另一个实施方式中，多羟基化胆汁酸可以刺激任何受试者的胆汁流量，例如，未诊断出患有GI或胆道疾病的受试者。“刺激胆汁流量”是指相对于标准(例如，生物体中胆汁酸的标准水平)，或相对于在施用根据本发明的联合疗法之前在受试者中测量的胆汁水平，增加受试者中的胆汁流量。增加可以是在5％和95％之间、或在10％和90％之间、或在30％和60％之间、或可能超过100％的任何整数值的变化。如本文所用，受试者可以是人、非人灵长类动物、大鼠、小鼠、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫等。受试者可以是临床患者、临床试验志愿者、实验动物等。受试者可以是被怀疑患有GI或胆道疾病或有患GI或胆道疾病的风险，被诊断患有GI或胆道疾病，或者是经确认没有GI或胆道疾病的受试者。用于GI或胆道疾病的诊断方法和测量胆汁流量的方法以及GI或胆道疾病诊断的临床界定是本领域普通技术人员已知的。

胆道疾病

胆道疾病包括可通过施用多羟基化胆汁酸而改善、治疗或预防的任何疾病或病症。示例性胆道疾病可包括但不限于胆汁缺乏、胆汁毒性、消化系统疾病、肝功能受损、胆汁淤积、门静脉高压等。在一些实施方式中，胆道疾病包括已知或预期对以下疗法有反应的任何病症：改善胆汁流量、改善胆汁分泌、减少疏水性初级胆汁酸胆酸(CA)和鹅去氧胆酸(CDCA)的产生、减少有毒胆汁酸(如石胆酸(LCA)和脱氧胆酸(DCA)的产生和/或降低胆汁酸池的疏水性。

胆汁淤积是指其中来自肝脏的胆汁的流动被减少或阻止，或其中存在胆汁流量不足的病症。胆汁流动不足可能发生在肝和胆道系统的任何部位。一般来说，胆汁淤积可以是发生在肝细胞外的肝外胆汁淤积，也可以是发生在肝细胞内的肝内胆汁淤积。

肝外胆汁淤积可由良性胆管狭窄、良性胰腺疾病囊肿、憩室炎、肝损伤、胆总管结石、胰腺炎、胰腺癌或假性囊肿、壶腹周围癌、胆管癌、原发性硬化性胆管炎或外源性导管压迫(例如，由于附近器官上的物质或肿瘤引起的压迫)引起。

肝内胆汁淤积可由以下引起：病毒性肝炎，包括但不限于乙型和丙型肝炎、脓毒症、细菌性脓肿，药物例如药物诱发性特异质肝毒性、淋巴瘤、肺结核、转移癌、结节病、淀粉样变性、静脉内喂养、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、具有或没有肝硬化的酒精性肝炎、具有或没有肝硬化的慢性肝炎、妊娠、舍格伦综合征、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、具有或没有肝硬化的慢性肝炎、妊娠期肝内胆汁淤积症、PFIC等。药物诱发性胆汁淤积是由药物引起的来自肝脏的胆汁流动的阻塞，可能由以下引起：金盐、呋喃妥因、合成代谢类固醇、口服避孕药、氯丙嗪、丙氯拉嗪、舒林酸、西咪替丁、红霉素、甲苯磺丁脲、丙咪嗪、氨苄西林以及其它青霉素类抗生素等。药物诱发性胆汁淤积和肝毒性是临床药物治疗的常见障碍，并构成药物开发和批准药物的新应用的主要问题。药物诱发性胆汁淤积也占黄疸住院患者的2-5％、急性肝炎所有病例的约10％和急性肝功能衰竭的50％以上。

胆汁淤积也可能由遗传性胆汁淤积性肝病、某些药物引起的药物诱发性胆汁淤积以及药物和影响肝功能的炎症引起的急性肝毒性反应引起。

门静脉高压症是指表现为门静脉压力增加的疾病，门静脉是将血液从肠道输送至肝脏的静脉。门静脉压力升高可能由多种原因引起，包括炎症、纤维化、脾动静脉瘘、脾或门静脉血栓形成、巨脾、结节病、血吸虫病、结节性再生性增生、原发性胆汁性肝硬化、肝炎、自身免疫性疾病等。

根据本发明的胆道疾病是由胆汁淤积、门静脉高压引起或可能由其引起的任何疾病，或因施用如本文所描述的联合疗法而受益的任何疾病。胆道疾病包括但不限于良性胆道狭窄、良性胰腺疾病囊肿、憩室炎、肝纤维化、肝损伤、胆总管结石、胰腺炎、胰腺癌或假性囊肿、壶腹周围癌、胆管癌、原发性硬化性胆管炎、自身免疫性胆管炎、外源性胆管压迫(例如，由于附近器官物质或肿瘤引起的压迫、病毒性肝炎(例如，A型、B型、C型、D型、E型肝炎、单纯疱疹、巨细胞病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒、腺病毒)、脓毒症、细菌性脓肿、药物使用(例如，药物诱发性特异质肝毒性)、淋巴瘤、肺结核、转移癌、结节病、淀粉样变性、静脉营养、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、具有或没有肝硬化的酒精性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、具有或没有肝硬化的慢性肝炎、妊娠期肝内胆汁淤积症、胆结石、胆道运动障碍、舍格伦综合征、威尔逊氏病、缺血、急性肝功能衰竭、α性肝抗胰蛋白酶缺乏症、进行性家族性肝内胆汁淤积症(PFIC)如PFIC2、良性复发性肝内胆汁淤积症(BRIC)、肝细胞癌(HCC)、门静脉高压症、静脉闭塞病、肝静脉血栓形成、自身免疫性肝炎等。

胃肠道疾病

胃肠道(GI)疾病包括具有由胆汁酸引起或加重的胃肠道炎症作为促成因素的任何疾病或病症。在一些实施方式中，GI疾病是炎症性GI疾病，如受试者肠道区域内的炎症。在一些实施方式中，炎症性GI疾病可包括但不限于坏死性小肠结肠炎(NEC)、胃炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病、炎症性肠病、肠易激综合征、伪膜性结肠炎、胃肠炎、放射诱导的肠炎、化疗诱导的肠炎、胃食管反流病(GERD)、消化性溃疡、非溃疡性消化不良(NUD)、乳糜泻、肠乳糜泻、减肥手术后的胃肠道并发症、胃癌、或胃或肠切除术后的胃癌。

胆汁酸

胆汁酸是源自胆固醇的两亲性化合物并且是类固醇的亚类。胆汁酸和胆汁醇是类固醇，其结构与胆烷或胆甾烷有关；因此，胆汁酸和胆汁醇可称为类胆烷(cholanoids)(13)。术语“胆汁酸”是具有羧基基团的类胆烷分子的总称，并且不表示电离状态。

术语“胆汁盐”可用于其中阴离子为结合胆汁酸、非结合胆汁酸或胆汁醇结合物的盐，或可用作通用术语以包括自然界中以水溶性阴离子(13)形式存在的结合胆汁酸和胆汁醇结合物。例如，胆汁盐可以是与甘氨酸或牛磺酸结合的胆汁酸的钠盐。

胆汁酸可以具有各种羟基如二羟基化胆汁酸、三羟基化胆汁酸、四羟基化胆汁酸和五羟基化胆汁酸，例如胆酸、熊去氧胆酸、去甲熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、脱氧胆酸、鼠胆酸。

如本文所用，胆汁酸骨架的碳原子的编号系统如下。

C₂₄胆汁酸称为胆烷酸或胆烷酸盐，而C₂₇胆汁酸称为胆甾酸或胆甾酸盐。通常，侧链的构型为17β，具有5β氢(顺式构型中的A/B环结)。“同分异构的(Allo)”胆汁酸是具有5α氢的胆汁酸(13)。

胆汁酸可以是多羟基化的。根据本公开，多羟基化胆汁酸是具有四个或更多个羟基的那些。因此，根据本发明的多羟基化胆汁酸化合物包括但不限于四羟基化胆汁酸、五羟基化胆汁酸、六羟基化胆汁酸等，可达羟基化的可能的最高水平。

在一些实施方式中，四羟基化胆汁酸可以是如式I所示的化合物或其药学上可接受的衍生物：

其中R₁至R₉中的任意四个可为-OH且R₁₀可为-COOH或-CH₂OH。

在一些实施方式中，R₁至R₉中的任意四个可各自独立地为-OH、-F、-Cl、-Br、烷基(例如，-CH₃、-CH₂-CH₃)、-SO₄或葡萄糖和R₁₀可为-COOH或-CH₂OH。

在一些实施方式中，根据本发明的多羟基化胆汁酸至少是四羟基化的，即具有四个或多于四个羟基。在一些实施方式中，羟基存在于类固醇核上。在一些实施方式中，羟基也可存在于烷基侧链上。

根据本发明的四羟基化胆汁酸包括但不限于3,6,7,12-四羟基胆烷酸；3,4,7,12-四羟基胆烷酸；1,2,7,12-四羟基胆烷酸；1,3,7,12-四羟基胆烷酸；2,3,7,12-四羟基胆烷酸；3,7,16,24-四羟基胆烷酸；或3,7,15,24-四羟基胆烷酸，或其衍生物。

根据本发明的3,6,7,12-四羟基胆烷酸包括但不限于3酸包括但不限于于不限于酸四羟基-5基括胆烷-24-酸；3；--但不限于于不限于酸四羟基-5基-胆烷-24-酸；3；--但不限于于不限于酸四羟基-5基-胆烷-24-酸；3；--但不限于于不限于酸四羟基-5基-胆烷-24-酸；3；--但不限于于不限于酸四羟基-5基-胆烷-24-酸；3；--但不限于于不限于酸四羟基-5基-胆烷-24-酸；或3；或-但不限于于不限于酸四羟基-5基-胆烷-24-酸，或其衍生物。

根据本发明的3,4,7,12-四羟基胆烷酸包括但不限于3包括但不限于2-不限于酸四羟基-5基但胆烷-24-酸、3、--不限于2-不限于酸四羟基-5基-胆烷酸，或其衍生物。

根据本发明的1,3,7,12-四羟基胆烷酸包括但不限于1包括但不限于2-不限于酸四羟基-5基但胆烷-24-酸，或其衍生物。

根据本发明的2,3,7,12-四羟基胆烷酸包括但不限于2包括但不限于2-不限于酸四羟基-5基但胆烷-24-酸、2、--不限于2-不2α-四羟基-5基-胆烷酸，或其衍生物。

根据本发明的3,7,16,24-四羟基胆烷酸包括但不限于3包括但不限于24-2α-四羟基-5基但胆烷酸，或其衍生物。

根据本发明的3,7,15,24-四羟基胆烷酸包括但不限于3包括但不限15α6括但-四羟基-5基但胆烷，或其衍生物。

在替代实施方式中，根据本发明的多羟基化胆汁酸化合物包括但不限于3，根据本发明的多羟基化-四羟基-5基据本发明酸；3；基据本发明的多羟基化-四羟基-5基据胆甾-25-烯；3；5-本发明的多羟基化四羟基-5β-胆甾烷；或3甾烷；或发明的多羟基化胆汁酸化五羟基-5基；胆甾烷或其衍生物。

在替代实施方式中，根据本发明的多羟基化胆汁酸化合物比胆酸盐更具亲水性(1,16)，如例如通过极性[OH^-]和非极性(H⁺)残基沿类固醇环的分布和构型，或通过反相HPLC中的保留时间所测量的(17)。在一些实施方式中，根据本发明的多羟基化胆汁酸化合物相对于牛磺胆酸盐(其被赋予值1.0；参见例如Asamoto等人(18))具有小于0.45、0.40、0.35、0.30、0.25、0.20、0.15、0.10或0.05的疏水性。

术语“结合胆汁酸”可用于表示与赋予分子额外亲水性或电荷的基团结合的胆汁酸。在替代实施方式中，根据本发明的多羟基化(如四羟基化)胆汁酸化合物包括牛磺酸和/或甘氨酸结合物。在替代实施方式中，根据本发明的多羟基化(如四羟基化)胆汁酸化合物包括与任何其他合适氨基酸的结合物。在替代实施方式中，根据本发明的多羟基化(如四羟基化)胆汁酸化合物包括与硫酸盐、磷酸盐、辅酶A、葡糖醛酸、葡萄糖、木糖和其他糖类、N-乙酰氨基葡糖等的结合物。例如，根据本发明的结合多羟基化(如四羟基化)化合物包括但不限于3四羟基化)化合物包括但不四羟基-5基基胆烷-24-酸的牛磺酰基或甘氨酰基结合物、3基或甘氨酰基结合物、、合四羟基-5基甘胆烷-24-酸的牛磺酰基或甘氨酰基结合物、3基或甘氨酰基结合物、、合四羟基-5基甘胆烷-24-酸的牛磺酰基结合物、3基结合物、、合物、、、合四羟基-5基合胆烷-24-酸的牛磺酰基结合物、乙磺酸2-[(3,6,7,12-四羟基-24-氧代胆烷-24-基)氨基]，例如乙磺酸2-[(3,6,7,12-物、糖类、、磷酸盐、辅酶结合四羟基-24-氧代胆烷-24-基]氨基]、甘氨酸N-(3,6,7,12-四羟基-24-氧代胆烷-24-基)，例如甘氨酸N-[(36,7,12--物、糖类、、磷酸盐、辅酶结合物。在四羟基-24-氧代胆烷-24-基]、甘氨酸N-[(36,7,12--物、糖类、、磷酸盐、辅酶结合物。在四羟基-24-氧代胆烷-24-基]、甘氨酸N-[(36,7,12--物、糖类、、磷酸盐、辅酶结合物。在四羟基-24-氧代胆烷-24-基]、甘氨酸N-[(36,7,12--物、糖类、、磷酸盐、辅酶结合物。在四羟基-24-氧代胆烷-24-基]等。

在替代实施方式中，多羟基化(如四羟基化)胆汁酸化合物在烷基侧链的24位与本文所描述或本领域已知的基团结合。例如，多羟基化(如四羟基化)胆汁酸化合物可以在多羟基化(如四羟基化)胆汁酸的烷基侧链的24位与牛磺酸或甘氨酸结合。

根据本发明的多羟基化(如四羟基化)胆汁酸化合物包括异构体，例如立体异构体。例如，包括3四和5四羟基四羟基胆烷酸，及其任何立体异构体构型和组合。

根据本发明的多羟基化(如四羟基化)胆汁酸化合物包括生理学或药学上可接受的衍生物，如本文所描述化合物的盐、酯、烯醇醚、烯醇酯、溶剂化物、水合物和前药。药学上可接受的盐包括但不限于胺盐，如但不限于N,N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、氨、二乙醇胺和其他羟基烷基胺、乙二胺、N-甲基葡萄糖胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、1-对氯苄基-2-吡咯烷-1’-基甲基苯并咪唑、二乙胺和其它烷基胺、哌嗪和三(羟甲基)氨基甲烷；碱金属盐，诸如但不限于锂盐、钾盐和钠盐；碱土金属盐，诸如但不限于钡盐、钙盐和镁盐；过渡金属盐，诸如但不限于锌盐、铝盐，以及其它金属盐，如但不限于磷酸氢钠和磷酸二钠；并且还包括但不限于无机酸的盐，如但不限于盐酸盐和硫酸盐；和有机酸的盐，如但不限于乙酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、丁酸盐、戊酸盐和富马酸盐。

本发明的和用于本发明的化合物及其盐通常以基本上纯化的形式提供。当化合物或盐(如果是天然存在的)与其天然伴随的成分(例如，源生物体或组织的细胞)分离时，它是“基本上纯的”或“分离的”。当化合物基本上不含细胞污染物时，即其在体外存在并且其浓度大于源生物体、组织或其他天然来源中的化合物的浓度时，化合物可以是基本上纯的或分离的。通常，当化合物占样品中总材料的至少10％、20％、30％、40％、50％或60％，更通常为70％、75％、80％或85％或超过90％、95％或99％(以重量计)时，化合物是基本上纯的或分离的。因此，例如，化学合成的化合物通常基本上不含其天然结合的成分。例如，可以通过从天然来源中提取或通过化学合成获得基本上纯的化合物。基本上纯的化合物可以包括立体异构体或不同羟基化的混合物。纯度可以使用任何合适的方法如柱色谱、气相色谱或液相色谱或质谱法测量。

在本发明的替代实施方式中，提供了包括多羟基化(如四羟基化)胆汁酸的外消旋混合物的组合物。外消旋混合物可以由多羟基化(如四羟基化)胆汁酸的化学合成产生；或者，可以组合两种或更多种立体化学纯的对映异构体。在替代实施方案中，组合物可包括两种或更多种多羟基化(如四羟基化)胆汁酸。

法尼醇X受体激动剂

法尼醇X受体(FXR)是在肝、肠、肾、肾上腺和脂肪组织中高水平表达的核受体。FXR激动剂包括但不限于奥贝胆酸(OCA)、鹅去氧胆酸(CDCA)的6α-乙基衍生物、咖啡醇、fexaramine、Cilofexor(2-[3-[2-氯-4-[[5-环丙基-3-(2,6-二氯苯基)-4-异噁唑基]甲氧基]苯基]-3-羟基-1-氮杂环丁烷基]-4-吡啶羧酸)、MET409(Metacrine,Inc.)、EDP-305(Enanta Pharmaceuticals,Inc.)、Tropifexor(2-[(1R,5S)-3-[[5-环丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-噁唑-4-基]甲氧基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-羧酸，LJN452，Novartis)、LMB763(Novartis)、EYP001(ENYO Pharma SA)、EP-024297(Enanta Pharmaceuticals,Inc.)、AKN-083(Allergan)、RDX023(Ardelyx,Inc.)、AGN-242256(Allergan)等。另外的FXR激动剂描述于例如2012年6月28日公开的WO/2012/087519、2017年3月23日公开的WO2017049173、以及2017年3月23日公开的WO2017049177中。

多羟基化胆汁酸的制备

根据本发明的或根据本发明使用的THBA化合物，包括其药学上可接受的盐或衍生物，可以通过使用如本文所例举的或本领域已知的常见程序合成来获得。此类合成的THBA化合物可以任选地被标记或衍生化以用于分析或药物开发目的。THBA化合物可以使用标准技术合成，如以下所描述的那些：Tohma等人，1985(19)；Iida等人，1991a(20)；Iida等人，1991b(21)；Aggarwal等人，1992(22)；Iida等人，1993(23)；Kurosawa等人，1995(24)；Kurosawa等人，1996(25)；Iida等人，2002(26)；Tserng KY和Klein PD(1977)(27)、LeppikRA(1983)(28)或IidaT.等人，(1990)(29,30)等，所有这些都通过引用具体并入。例如，可以按照以下所指出的制备THBA：Tohma等人，1985(19)；Iida等人，1991b(21)；Aggarwal等人，1992(22)；Iida等人，1993(23)；Kurosawa等人，1996(25)；或Iida等人，2002(26)。THBA化合物可以如例如2011年3月3日公开的WO 2011/022838中所描述的合成。五羟基胆汁酸可以例如如Kurosawa等人，1996(25)中所指出的制备。

法尼醇X受体激动剂的制备

根据本发明的FXR激动剂或根据本发明使用的FXR激动剂，包括其药学上可接受的盐或衍生物，可以通过使用在本文例举的或本领域已知的普通程序合成获得。此类合成的FXR激动剂化合物可以任选地被标记或衍生化以用于分析或药物开发目的。FXR激动剂可从商业来源获得或按例如31；32)中所描述的制备。

药物组合物、剂量和施用

多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸可与FXR激动剂联合提供(根据本公开的“要求保护的组合”或“联合疗法”)。

在一些实施方式中，FXR激动剂的量可以是不实用的剂量，例如亚治疗剂量、亚临床剂量或毒性剂量。应当理解，不实用的剂量可根据受试者或患者(例如，成人、儿科、老年或患有可影响给药方案的共病的受试者或患者)而变化。

在一些实施方式中，FXR激动剂以低于胆汁酸的剂量提供。

在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂诸如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以等于或小于约1:100(w/w)。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以等于或小于约1:300(w/w)。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以等于或小于约1:500(w/w)。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以等于或小于约1:1000(w/w)。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以等于或小于约1:100000(w/w)。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以是约1:100至约1:300(w/w)，或介于两者之间的任何值。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以是约1:50至约1:500(w/w)，或介于两者之间的任何值。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以大于约1:30。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以大于1:30至等于或小于约1:100000(w/w)，或介于两者之间的任何值。

在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以等于或小于1:100(w/w)。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以等于或小于1:300(w/w)。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以等于或小于1:500(w/w)。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以等于或小于1:1000(w/w)。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以等于或小于1:100000(w/w)。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以是1:100至1:300(w/w)，或介于两者之间的任何值。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以是1:50至1:500(w/w)，或介于两者之间的任何值。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以大于1:30。在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂如OCA或tropifexor与多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸的比率可以是大于1:30至等于或小于1:100000(w/w)，或介于两者之间的任何值。

在一些实施方式中，在要求保护的组合中，FXR激动剂与胆汁酸的比率可以小于共结晶所需的水平。

在一些实施方式中，多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸可以以每名成人受试者每天约50mg至每名成人受试者每天约5000mg的范围施用。

在一些实施方式中，FXR激动剂如OCA或tropifexor，可以以低于每名成人受试者每天约1mg的量施用。

在一些实施方式中，可以以最小治疗有效剂量或低于最小治疗有效剂量的剂量或在GI或胆道疾病的治疗中不表现出治疗益处的剂量(“亚治疗”剂量)施用FXR激动剂。在一些实施方式中，可以以低于标准临床实践中用于治疗GI或胆道疾病的最小剂量的剂量(“亚临床”剂量)施用FXR激动剂。例如，OCA可以以低于约5至约10mg/天或介于两者之间的任何值(对于体重约70kg的人每天约74ug/kg)的剂量施用；EDP-305可以以低于约1mg/天(对于体重约70kg的人每天约14ug/kg)的剂量施用；Cilofexor可以以低于约30mg/天(对于体重约70kg的人每天约0.45mg/kg)的剂量施用；tropifexor可以以低于约0.01mg/天(对于体重约70kg的人每天约0.15ug/kg)的剂量施用；或LMB763可以以低于约5mg/天(对于体重约70kg的人每天约74ug/kg)的剂量施用。

在一些实施方式中，FXR激动剂可以以低于或等于该化合物的标准推荐剂量的五分之一施用。例如，OCA可以以低于或等于约5至约10mg/天或介于两者之间的任何值的五分之一(对于体重约70kg的人每天约74-约148ug/kg)施用；EDP-305可以以低于或等于约1至约2.5mg/天或介于两者之间的任何值的五分之一(对于体重约70kg的人每天约14至约36ug/kg)施用；Cilofexor可以以低于或等于约30至约100mg/天或介于两者之间的任何值的五分之一(对于体重约70kg的人每天约0.45至约1.5mg/kg或介于两者之间的任何值)施用；tropifexor可以以低于或等于约0.01至约0.03mg/天或介于两者之间的任何值的五分之一(对于体重约70kg的人每天约0.15至约0.45ug/kg)施用；或LMB763可以以低于或等于约5mg/天的五分之一(对于体重约70kg的人每天约74ug/kg)施用。

在一些实施方式中，要求保护的组合物可包括剂量为约15mg/Kg/天的3的,6的,7的,12m四羟基-5基m胆烷-24-酸联合剂量为约0.05mg/Kg/天的OCA(33；34)。

在一些实施方式中，要求保护的组合物可包括剂量为约15mg/Kg/天的3的,6的,7的,12m四羟基-5基m胆烷-24-酸联合剂量为约0.0004mg/Kg/天的tropifexor。

在一些实施方式中，要求保护的组合物中FXR激动剂如OCA或tropifexor的量可以显著少于当前治疗实践中使用的量。例如，取决于剂量的耐受程度、患者是否患有失代偿性肝病和/或患者是否也在服用UDCA，成人患者以每周约5mg至每天约10mg的剂量或介于两者之间的任何值给予OCA。在另一个实例中，取决于剂量的耐受程度，成人患者以每周约3mg至每天约0.03mg或介于两者之间的任何值给予tropifexor。

“约”是指与5％或更小的值或范围如0.5％、1％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、3.5％、4.0％、4.5％、5.0％等的偏差(加或减)。

在一些实施方式中，可以以“低于有效剂量”的剂量使用FXR激动剂如OCA或tropifexor。“低于有效剂量”是指低于当前疗法中使用的剂量或不表现出治疗益处的剂量，例如，亚治疗剂量、亚临床剂量。在一些实施方式中，“低于有效剂量”是指当用作单一疗法或联合UDCA、或联合胆汁酸以外的化合物时，在治疗胆道或GI疾病时效果较差或无效的剂量。在一些实施方式中，当作为单一疗法使用，或联合UDCA，或联合胆汁酸以外的化合物时，与多羟基胆汁酸(如THBA)联合使用时的相同剂量相比，在治疗胆道或GI疾病时较不有效的剂量是5％至99％的剂量，或介于两者之间的任何值如5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。

在一些实施方式中，可以以“毒性剂量”使用FXR激动剂如OCA或tropifexor。“毒性剂量”是指当作为单一疗法使用，或联合UDCA，或联合胆汁酸以外的化合物时，与如本文所描述的联合多羟基胆汁酸如THBA时的相同剂量或量相比，在治疗胆道或GI疾病时导致不可接受的毒性水平的剂量或量。在一些实施方式中，毒性剂量或量是将受试者中的一种或多种肝脏指标如胆红素、ALP(碱性磷酸酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(天冬氨酸转氨酶)、γ-GT(γγ谷氨酰转肽酶)等的水平升高到正常临床范围之外的剂量或量，或进一步升高具有较高水平的一种或多种肝脏指标的受试者中的一种或多种肝脏指标如胆红素、ALP(碱性磷酸酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(天冬氨酸转氨酶)、γ-GT(γγ谷氨酰转肽酶)等的水平的剂量或量。在一些实施方式中，肝脏指标如胆红素、ALP(碱性磷酸酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(天冬氨酸转氨酶)、γ-GT(γγ谷氨酰转肽酶)等的升高水平可为约5％至约100％的百分比，或介于两者之间的任何值如5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的升高。在一些实施方式中，与正常临床值或范围相比，肝脏指标如胆红素、ALP(碱性磷酸酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(天冬氨酸转氨酶)、γ-GT(γγ谷氨酰转肽酶)等的升高水平可以超过100％。肝脏指标的正常临床值和范围是众所周知的。在一些实施方式中，所选肝脏指标的正常临床范围可以如下：胆红素：2-17微摩尔/升；ALP(碱性磷酸酶)：30-120IU/L；ALT(丙氨酸转氨酶)：0-45IU/L；AST(天冬氨酸转氨酶)：0-35IU/L；γ-GT(γγ谷氨酰转肽酶)：0-30IU/L。

根据本发明的组合的“有效量”包括治疗有效量或预防有效量或营养有效量。“治疗有效量”是指在剂量和必要时间段上有效达到所期望的治疗结果的量，期望的结果如胆汁流量增加、黄疸缓解或肝功能改善，这由血清肝生化指标如胆红素、ALP(碱性磷酸酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(天冬氨酸转氨酶)、γ-GT(γγ谷氨酰转肽酶)等水平的正常化所指示。化合物的治疗有效量可根据因素如个体的疾病状态、年龄、性别和体重，以及化合物在个体中引发所需反应的能力而变化。可以调整剂量方案以提供最佳治疗反应。治疗有效量也是其中化合物的治疗有益效果超过任何毒性或有害作用的量。“预防有效量”是指在剂量和必要时间段上有效达到所期望的预防结果的量，期望的预防结果如由肝生化指标所指示的胆汁流量增加或肝功能改善、由血清肝生化指标(胆红素、ALP(碱性磷酸酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(天冬氨酸转氨酶)、γ-GT(γ-谷氨酰转肽酶)等的水平)的正常化指示的胆汁流量增加、黄疸缓解或肝功能改善。通常，在疾病之前或早期阶段的受试者中使用预防剂量，使得预防有效量可能小于治疗有效量。化合物的治疗或预防有效量的示例性范围可以是约5至约50mg/天/kg受试者例如人的体重。“营养有效量”是指在剂量和必要时间段上有效达到所期望的结果的量，如由肝脏生化指标所指示的胆汁流量增加或肝功能改善。

需要注意的是，剂量值可能会随着要缓解的病症的严重程度而变化。对于任何特定受试者，可以根据个体需要以及施用或监督组合物施用的人的专业判断随时间调整具体的剂量方案。本文所给出的剂量范围仅是示例性的，并不限制医师可选择的剂量范围。组合物中活性化合物的量可根据因素如个体的疾病状态、年龄、性别和体重而变化。可调整剂量方案以提供最佳治疗反应。例如，可以施用单剂量，可以随时间施用多次分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。在一些实施方式中，多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸可以在单一制剂中与FXR激动剂联合提供。在替代实施方式中，多羟基化胆汁酸如四羟基化胆汁酸可以在与FXR激动剂分开的制剂中同时或在合适的时间段内例如在24小时内提供。以剂量单位形式配制肠胃外组合物可能是有利的，以易于施用和剂量均匀。

一般而言，联合疗法应在不引起显著毒性的情况下使用。可使用标准技术确定联合疗法的毒性，例如，通过在细胞培养物或实验动物或受试者中进行测试并确定治疗指数，即非人动物的LD50(对50％的人群致死的剂量)和ED50(对50％的人群的最小有效剂量)或人的TD50(对50％的人群有毒的剂量)与ED50(对50％的人群的最小有效剂量)之间的比率。可用于确定本发明的化合物毒性的其他方法包括但不限于通过H&E染色、三色染色等的组织学异常；胆汁流速的变化和/或其他胆汁物质的清除(例如，通过胆管插管测定)；HPLC分析、酶分析等；肝脏指标的变化，例如胆红素水平、ALP(碱性磷酸酶)水平、ALT(丙氨酸转氨酶)水平、AST(天冬氨酸转氨酶)水平、γ-GT(γγ谷氨酰转肽酶)水平等。最大耐受剂量(MTD)是在一段时间内在受试者研究中不会引起明显毒性(例如不会引起不可接受的副作用)的化合物或组合物的最高定期施用剂量。例如，受试者可以是人或动物如小鼠或大鼠。定期施用的剂量可以是日剂量，作为单剂量施用；或者，日剂量可分为两个或多个部分剂量，使得受试者随时间接受总日剂量。研究的时间段可以数天至数月，例如约10、20、30、60、90或120天，或它们之间的任何值。明显毒性的实例可包括但不限于明显的细胞死亡或器官功能障碍、预测为实质性缩短受试者寿命的毒性表现、或10％或更大的体重增加延迟。在一些实施方式中，在脂质体、佐剂或任何药学或生理学可接受的载体存在下，要求保护的组合可以以适合于人或动物施用的形式与其他化合物(例如，核酸分子、小分子、肽或肽类似物)一起提供。如果需要，使用根据本发明的要求保护的组合的治疗可以与用于胆道疾病或导致或可能导致肝毒性的疾病的更传统的和现有的疗法相联合，或者与现有的用于刺激胆汁流动或用于GI疾病的营养补充剂相联合。在一些实施方式中，在经批准的用于胆汁淤积的治疗剂熊去氧胆酸盐无效的情况下施用根据本发明的要求保护的组合。在一些实施方式中，根据本发明的要求保护的组合与熊去氧胆酸盐或其变体或衍生物(例如硫酸化熊去氧胆酸盐、糖化熊去氧胆酸盐、牛磺熊去氧胆酸盐等)、利福平或任何可用于治疗胆汁淤积或门静脉高压症或GI疾病，或用于刺激胆汁流动的化合物一起施用。

可采用常规的药物或营养补充剂配方实践来提供合适的配方或组合物，以将要求保护的组合施用于患有胆道疾病或胆道疾病症状发生前或者导致或可能导致肝毒性的疾病的患者，或与现有的用于刺激胆汁流动或用于GI疾病的营养补充剂一起施用。可以采用任何适当的施用途径，例如肠胃外、静脉内、皮下、肌肉内、颅内、眶内、眼科、心室内、囊内、脊柱内、脑内、腹膜内、鼻内、气雾剂或口服施用。治疗制剂可以是液体溶液或悬浮液的形式；对于口服施用，制剂可以是片剂或胶囊剂的形式；对于鼻内制剂，可以是粉剂、滴鼻剂或气雾剂形式。

本领域熟知的用于制备制剂的方法可见于例如Remington’s PharmaceuticalSciences(35)。用于肠胃外施用的制剂可以例如含有赋形剂、无菌水或盐水、聚亚烷基二醇如聚乙二醇、植物来源的油或氢化萘。生物相容的、可生物降解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物可用于控制化合物的释放。用于调节化合物的其他可能有用的肠胃外递送系统包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物颗粒、渗透泵、可植入式注入系统和脂质体。用于吸入的制剂可以含有赋形剂，例如乳糖，或者可以是含有例如聚氧乙烯-9-月桂醚、甘胆酸盐和脱氧胆酸盐的水溶液，或者可以是以滴鼻剂的形式施用的油性溶液，或作为凝胶。

对于治疗性或预防性组合物，可以将要求保护的组合以足以停止或减缓胆汁淤积或维持或增加胆汁流量或改善门静脉高压的量施用于受试者。对于营养补充剂，可以以足以刺激胆汁流动的量向受试者施用要求保护的组合。

在一些实施方式中，要求保护的组合还可以为患有遗传性胆汁淤积性肝病、患有由某些药物的胆汁盐输出泵(BSEP)-抑制活性引起的药物诱发性胆汁淤积、或患有其他胆道疾病的患者提供治疗益处，并且可以有助于缓解由药物和影响胆道功能的炎症引起的急性肝毒性反应。在一些实施方式中，要求保护的组合可以与不抑制BSEP的化合物联合使用。在一些实施方式中，要求保护的组合可以与对BSEP(与P-糖蛋白(Mdr1)相比)不表现出优先亲和力的化合物联合使用。在一些实施方式中，要求保护的组合可以在BSEP起作用的条件下使用，例如与熊去氧胆酸盐组合使用。

在一些实施方式中，要求保护的组合物可以增强FXR激动剂的疗效。因此，在一些实施方式中，本公开提供了一种通过向有需要的受试者施用多羟基化胆汁酸联合不实用量的法尼醇X受体激动剂来增强法尼醇X受体激动剂的疗效的方法。例如，可以将该增强与法尼醇X受体激动剂作为单一疗法施用时的功效进行比较。

制品

提供了包括包装材料和要求保护的组合的制品。

试剂盒

提供了包括要求保护的组合物以及化合物或组合物的使用说明书的试剂盒。该试剂盒可用于治疗受试者的胆道疾病或GI疾病，并且说明书可包括例如剂量浓度、剂量间隔、优选的施用方法等。

将在以下实施例中进一步说明本发明。

实施例1:

在第一项研究中，将1％THBA(3％6％7％12T四羟基-5基r胆烷-24-酸)和0.03％OCA以膳食补充剂(w/w)的形式单独或联合喂养人PSC和PFIC(雌性小鼠，从3周龄开始)的小鼠模型17周。治疗期间每周记录体重和食物消耗。治疗后，对小鼠实施安乐死并对组织/器官进行取样用于进一步分析。在喂养3至20周的0.03％的OCA或1％的THBA单一治疗的任一组中，我们观察到显著改善的肝脏指标概况，没有显著、明显的副作用(图1)。然而，当联合应用时，治疗年龄的Mdr2^-/-小鼠(喂食0.03％的OCA和1％的THBA)早在治疗开始后4天就开始减轻体重并出现黄疸，并且意外地开始死亡。由于这些出乎意料的副作用，该联合治疗被终止。

在后续研究中，我们测试了在8周龄时0.03％、0.01％和0.003％的不同剂量的单独OCA或其与1％THBA联合持续4周。0.03％OCA与1％(w/w)THBA联合喂养的治疗组表现出不良反应，其中五分之二的小鼠必须在终点前终止。雌性Mdr2^-/-小鼠，喂食10倍低剂量的OCA(饮食中0.003％w/w)，本身没有显示任何治疗效果。然而，0.003％OCA与1％THBA的联合产生了优于任一单一治疗的疗效(图2)。在这项研究中，联合治疗导致这些小鼠的碱性磷酸酶(ALP)水平降低，这表明胆管细胞损伤减轻。

实施例2：

在另一项研究中，将1％THBA(3α,6α,7α,12α-四羟基-5β-胆烷-24-酸)和tropifexor(TXR)以膳食补充剂(w/w)的形式单独或联合喂养大约12周龄的雌性Mdr2^-/-小鼠26至28天。在治疗期间每周记录体重和食物消耗。治疗后，对小鼠实施安乐死并对组织/器官进行取样用于进一步分析。膳食补充剂为1).1％THBA +0.00001％TXR；2).仅0.00001％TXR；3)1％THBA+0.000003％TXR；4)0.000003％TXR；5)仅1％THBA；6)对照饮食。利用THBA和TXR治疗减轻了由于Mdr2^-/-小鼠胆汁中缺乏磷脂而导致胆汁中有毒胆汁酸引起的肝损伤，这由雌性Mdr2^-/-小鼠血浆中ALP水平降低所证明(图3)。

其他实施方式

已经参照一个或多个实施方式描述了本发明。然而，对于本领域技术人员来说显而易见的是，在不脱离权利要求所限定的本发明的范围的情况下，可以进行多种变化和修改。因此，尽管在本文中公开了本发明的各种实施方式，但是根据本领域技术人员的公知常识，可以在本发明的范围内进行许多改编和修改。此类修改包括对本发明的任何方面的已知等同物的替换，以便以基本相同的方式实现相同的结果。数字范围包括限定范围的数字。在本说明书中，词语“包含”用作开放式术语，基本等同于短语“包括但不限于”，并且“包括”一词具有相应的含义。然而，应当理解，在本文中使用词语“包含”或“包括”或具有相同词根的变体的情况下，对排除了未指定的任何要素、步骤、或成分的“由……组成”或限制了指定的材料或列举的步骤以及那些不会对要求保护的发明的基本和新特征产生实质性影响的步骤的“基本上由……组成”也是可以预期的。本文引用的参考文献不应被解释为承认此类参考文献是本发明的现有技术。所有出版物均以引用方式并入本文，就好像每个单独的出版物都被具体地和单独地示为通过引用并入本文并且如同在本文中完全阐述一样。本发明包括基本上如上文所述以及参考实施例和附图的所有实施实施方式和变型。

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Claims

1.一种药物组合物，包括：

i)多羟基化胆汁酸；和

ii)不实用量的法尼醇X受体激动剂，

联合药学上可接受的载体。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中法尼醇X受体激动剂的所述不实用量是亚治疗量、亚临床量或毒性量。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述法尼醇X受体激动剂与所述多羟基化胆汁酸的比率等于或小于1:100。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述法尼醇X受体激动剂是奥贝胆酸或tropifexor。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述多羟基化胆汁酸是四羟基化胆汁酸。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述四羟基化胆汁酸是3述四羟基化胆汁酸是中羟基四羟基-5基羟胆烷-24-酸。

7.根据权利要求5或6所述的药物组合物，其中所述四羟基化胆汁酸是结合化合物。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述结合化合物是牛磺酸或甘氨酸结合物。

9.一种治疗胆道疾病或胃肠道疾病的方法，包括向有需要的受试者施用权利要求1至8中任一项所述的药物组合物。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述胆道疾病由胆汁淤积引起。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述胃肠道疾病是炎症性疾病。

12.一种用于降低法尼醇X受体激动剂毒性的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用：

i)多羟基化胆汁酸；和

ii)毒性量的法尼醇X受体激动剂，

联合药学上可接受的载体。

13.一种用于增强法尼醇X受体激动剂疗效的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用：

i)多羟基化胆汁酸；和

ii)不实用量的法尼醇X受体激动剂，

联合药学上可接受的载体。

14.根据权利要求13所述的方法，其中法尼醇X受体激动剂的所述不实用量是亚治疗量、亚临床量或毒性量。

15.根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中所述法尼醇X受体激动剂与所述多羟基化胆汁酸的比率等于或小于1:100。

16.根据权利要求12至15中任一项所述的方法，其中所述法尼醇X受体激动剂是奥贝胆酸或tropifexor。

17.根据权利要求12至16中任一项所述的方法，其中所述多羟基化胆汁酸是四羟基化胆汁酸。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述四羟基化胆汁酸是3α,6四羟基化胆汁酸是四四羟基-5基羟胆烷-24-酸。

19.根据权利要求17或18所述的方法，其中所述四羟基化胆汁酸是结合化合物。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述结合化合物是牛磺酸或甘氨酸结合物。

21.根据权利要求8至20中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。

22.权利要求1至8中任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途。

23.根据权利要求22所述的用途，其中所述药物组合物用于治疗胆道疾病或胃肠道疾病。

24.一种制品，包括权利要求1至8中任一项所述的药物组合物以及治疗胆道疾病或胃肠道疾病的说明书。