CN113917087B - 一种植物病害发生和发病程度的监测方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种植物病害发生和发病程度的监测方法，属于植物病虫害防控技术领域，所述监测方法包括：以质量浓度0.1％～1.5％的单盐溶液处理待测植物的叶片表面；根据所述待测植物的叶片坏死病斑，评价所述待测植物的染病率和发病程度；根据所述染病率和所述发病程度，对所述待测植物的病害风险进行评估。该方法可通过直接观察叶片坏死病斑面积确定植物染病程度，与现有方法在原理和实现手段上全然不同，具有操作简单、灵敏度高、无公害和对病原的广谱性等优点，在作物病虫害防控中将具有广阔的应用前景。本发明还提供了一种植物病害发生和发病程度的监测方法在植物病害的预防和/或治疗中的应用。

Description

一种植物病害发生和发病程度的监测方法及应用
技术领域
本发明属于植物病虫害防控技术领域，特别涉及一种植物病害发生和发病程度的监测方法及应用。
背景技术
植物病虫害的有效防控一直是农业生产中的热点问题。植物病害的防治包括防和治两个方面，一般以预防为上策。但是，无论采取预防和治疗措施，对处理时机的选择和把握都是一个及其关键的问题，处理时机过早将造成农药的浪费和产生不必要的生态甚至人体健康风险，而处理时机过晚除产生更严重的生态和健康风险外，还得承担相应作物减产损失。目前，针对植物病害及其发病程度的监测方法主要采取病症观察法、指示植物法和病原菌检测法几种。
病症观察法通过观察对不同植物病害的病症特征和病症强度等级，确定作物染病程度和类型，然后依据病害类型和程度指定病害防治措施。该方法的优点是操作简单，不需要仪器设备，而且可以初步判定病害的基本类型。指示植物法是利用与目标作物间作的指示植物，通过观察指示植物的发病症状和强度，预测目标作物的病害风险，并采取相应的预防和治疗措施。该技术的优点是可以较早的发现某些病害发生的风险。病原菌检测法通过植物病理学技术检测作物中是否存在某种病原微生物，并根据病原微生物的丰度和监测出的概率判定作物发病的风险，并采取相应的防治策略。该技术的优点是能够准确判定病害的种类。
病症观察法存在三个主要缺陷，一是监测的滞后性；二是针对病症不明显的病害监测不到；三是观察者需要具备较高的专业基础和长期的实践经验才能有效应用。许多植物病害当产生可观察到病症时已经处于发病的严重时期，此时再进行治病处理已为时过晚，病害对作物已经造成不可逆的伤害和损失；此外，该技术针对一些病症不明显或不典型的植物病害无法观察到病害的发生，从而被忽略而可能导致大规模爆发。指示植物法的缺点是监测的病害种类很少，一般只针对某一种植物病害进行监测，而且需要将指示植物与标目作物间种，实际操作繁琐，针对一些作物根本无法使用。病原菌检测法的缺点是技术要求较高，操作繁琐，除了具备专业的病理学知识外还需具备相应的检测设备。因此，本领域亟需一种易于操作、快速灵敏和具有广谱性的植物病害监测方法。
发明内容
为了解决植物病害早期监测的技术问题，本发明提供了一种植物病害发生和发病程度的监测方法，该方法可通过直接观察叶片坏死病斑面积确定植物染病程度，与现有方法在原理和实现手段上全然不同，具有操作简单、灵敏度高、无公害和对病原的广谱性等优点，在作物病虫害防控中将具有广阔的应用前景。
本发明还提供了一种植物病害发生和发病程度的监测方法在植物病害的预防和/或治疗中的应用。
本发明通过以下技术方案实现：
本发明提供一种植物病害发生和发病程度的监测方法，所述监测方法包括：
以质量浓度0.1％～1.5％的单盐溶液处理待测植物的叶片表面；
根据所述待测植物的叶片坏死病斑，评价所述待测植物的染病率和发病程度；
根据所述染病率和所述发病程度，对所述待测植物的病害风险进行评估。
进一步的，所述单盐溶液中，单盐包括NaCl、KCl、CaCl2和Na2SO4中的任意一种。
可选的，所述待测植物为葡萄植株。
优选的，所述单盐溶液中，单盐为NaCl，所述单盐溶液中NaCl的质量浓度为0.5％(质量/体积)。
可选的，所述以质量浓度0.1％～1.5％的单盐溶液处理待测植物的叶片表面，具体包括：
以质量浓度0.1％～1.5％的单盐溶液均匀喷洒在待测植物的叶片正反面。
进一步的，所述以质量浓度0.1％～1.5％的单盐溶液处理待测植物的叶片表面，具体包括：
在所述待测植物的种植区随机选取3～9个处理点，每个所述处理点选取3～5株待测植株；
将质量浓度0.1％～1.5％的单盐溶液均匀喷洒在所述待测植株全部叶片的正反面；
所述单盐溶液的喷洒进行两次，间隔时间≥30min。
可选的，所述根据所述待测植物的叶片坏死病斑，评价所述待测植物的染病率和发病程度，具体包括：
所述待测植物经所述单盐溶液处理完毕3天后，统计所述待测植物出现坏死病斑的叶片数量和坏死病斑面积，评价所述待测植物的染病率和发病程度。
进一步的，所述根据所述待测植物的叶片坏死病斑，评价所述待测植物的染病率和发病程度，具体包括：
所述待测植株经所述单盐溶液处理完毕3天后，统计每个所述处理点的所述待测植株出现坏死病斑的叶片数量和坏死病斑面积；
计算所述待测植物单个处理点和整个种植区的坏死病斑出现率，并计算单个处理叶片、单个处理点和整个种植区的坏死病斑相对面积：
单个处理点坏死病斑出现率(％)＝出现坏死病斑叶片数量/处理点单盐溶液处理过的叶片总数×100；
整个种植区坏死病斑出现率(％)＝种植区内单个处理点坏死病斑出现率的平均值±标准误差；
单个处理叶片坏死病斑相对面积(％)＝坏死病斑总面积/叶片总面积×100；
单个处理点坏死病斑相对面积(％)＝处理点内单个处理叶片坏死病斑相对面积平均值±标准误差；
整个种植区坏死病斑相对面积(％)＝种植区内单个处理叶片坏死病斑相对面积的平均值±标准误差；
根据单个处理点和整个种植区的坏死病斑出现率，以及单个处理叶片、单个处理点和整个种植区的坏死病斑相对面积，评价所述待测植物的染病率和发病程度。
基于同一发明构思，本发明还提供一种植物病害发生和发病程度的监测方法在植物病害的预防和/或治疗中的应用。
可选的，所述植物病害包括霜霉病、白粉病和炭疽病中的至少一种。
本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
1.本发明一种植物病害发生和发病程度的监测方法，该方法操作简便易行，不要求使用具备较高的病理学基础，也不需要检测平台和检测仪器设备；检测快速灵敏，三天即可可获得结果，可在作物染病的最早期被发现；并且无公害，该方法所用试剂仅为单盐，不会带来任何生态和人体健康方面的安全隐患。
2.本发明一种植物病害发生和发病程度的监测方法在植物病害的预防和/或治疗中的应用，本发明的植物病害发生及发病程度的监测方法具有广谱性，并不针对特定病害起作用，监测对象是受到病菌侵染植物叶片细胞，目前已证明对葡萄霜霉病、白粉病和炭疽病等多种病害侵染的葡萄叶片都有很好监测效果，可应用于葡萄霜霉病、白粉病和炭疽病等多种病害的预防和/或治疗。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为单盐溶液处理后葡萄叶片病害程度显示图。
图2为不同浓度NaCl溶液处理对葡萄叶的影响图：其中，A为不同浓度NaCl溶液处理后葡萄叶病斑坏死图；B为不同浓度NaCl溶液处理后葡萄叶病斑坏死指数柱状图；图中，1表示0％NaCl溶液处理，2表示0.3％NaCl溶液处理，3表示0.5％NaCl溶液处理，4表示0.7％NaCl溶液处理，5表示0.9％NaCl溶液处理，6表示1.1％NaCl溶液处理。
图3为不同单盐溶液处理对葡萄叶的影响图：其中，A为不同单盐溶液处理后葡萄叶病斑坏死图；B为不同单盐溶液处理后葡萄叶病斑坏死指数柱状图；图中，1表示0.5％NaCl溶液处理，2表示0.5％KCl溶液处理，3表示0.5％KI溶液处理，4表示0.5％CaCl2溶液处理，5表示0.5％Na2SO4溶液处理，6表示0.5％MgSO4溶液处理。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
本发明实施例提供的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：
申请人经过研究发现，NaCl溶液处理可以影响葡萄叶的生长状态。过量的盐离子浓度，会对葡萄叶片造成离子毒害，加剧葡萄叶片的氧化胁迫、渗透胁迫和养分失衡。葡萄是对盐十分敏感的植物，NaCl溶液处理后葡萄叶受到的伤害大部分是由于过量的钠离子和氯离子在葡萄叶细胞中的积累，钠离子是导致葡萄叶片发生盐害现象的主要离子。过量的盐离子会破坏葡萄叶细胞质膜的透性，进而影响葡萄叶细胞内的酶活性和各种生理代谢，最终对葡萄叶的正常生长产生影响。同时，过高的外部溶质浓度会导致细胞内浓度相对较低，细胞内水分外流，严重时出现质璧分离、影响细胞正常的生理活动。
申请人经试验发现，面对一定浓度的盐离子，正常部位可以通过多种抗盐途径来减少盐离子在细胞质中的累积。而受到白粉病等病害影响的葡萄叶片病斑部分，叶片自身的调节能力下降，对盐离子的耐受性降低，就产生了坏死状况。而且在一定浓度的盐离子作用下，致病菌细胞会由于胞内过高浓度的盐离子产生毒害作用或者由于高渗透胁迫，使细胞丧失膨压脱水死亡。
基于此，本发明提供了一种植物病害发生和发病程度的监测方法及应用，通过特定浓度单盐溶液处理植物染病叶片，使叶片染病部位坏死，正常部位不受影响，从而获取植物病害发生率和发病程度数据，同时达到杀灭致病菌的效果，该方法与现有监测技术在基本原理上就有着本质的区别，同时也克服了一些现有技术的缺陷。(1)操作简便易行，不要求使用具备较高的病理学基础，也不需要检测平台和检测仪器设备；(2)快速灵敏：三天内可以看到结果，可以在作物染病的最早期被发现；(3)广谱性：本技术并不针对特定病害起作用，监测对象是受到病菌侵染植物叶片细胞。目前已证明对葡萄霜霉病、白粉病、炭疽病等多种病害侵染的葡萄叶片都有很好监测效果；(4)无公害：该技术不会带来任何生态和人体健康方面的安全隐患。
下面将结合实施例及实验数据对本申请一种植物病害发生和发病程度的监测方法及应用进行详细说明。
实施例1
葡萄病害早期监测方法，包括以下步骤：
(1)单盐溶液制备。
单盐可选择氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、碘化钾(KI)、氯化钙(CaCl2)、硫酸钠(Na2SO4)等含钠离子、氯离子的盐类进行配制，其中以氯化钠最佳。以氯化钠为例，用蒸馏水或纯净水或离子强度较低的软水配制0.1％-1.5％(质量/体积)溶液，最佳浓度为0.5％-0.9％。
(2)待检测葡萄园盐溶液处理。
根据葡萄园大小在葡萄园的中部和四边不同位置随机选择3-9个处理点(处理点的增加可以增加监测结果的可信度)，每点包括3-5株葡萄(增加处理葡萄植株数量可以增加监测的准确度)，将单盐溶液用喷雾器均匀喷洒在所选葡萄植株叶片的正反面。叶片盐溶液喷洒进行两次，两次的间隔时间为30分钟以上(若盐溶液喷洒后2小时内有下雨，待雨晴2小时后重新处理)。对喷洒过单盐溶液的葡萄植株做好标记。
(3)坏死斑观察与相对面积统计。
盐溶液处理3天后，统计每株及每一个处理点乃至整个种植区葡萄叶片坏死斑出现的概率，同时并估计每片葡萄叶坏死斑的相对面积。统计单个处理点和整个种植区葡萄叶片坏死病斑相对面积。计算：
单个处理点坏死病斑出现率(％)＝出现坏死病斑叶片数量/处理点单盐溶液处理过的叶片总数×100；
整个种植区坏死病斑出现率(％)＝种植区内单个处理点坏死病斑出现率的平均值±标准误差；
单个处理叶片坏死病斑相对面积(％)＝坏死病斑总面积/叶片总面积×100；
单个处理点坏死病斑相对面积(％)＝处理点内单个处理叶片坏死病斑相对面积平均值±标准误差；
整个种植区坏死病斑相对面积(％)＝种植区内单个处理叶片坏死病斑相对面积的平均值±标准误差。
(4)葡萄园病害风险评价和防治措施制定。
坏死病斑出现率用于估计整个葡萄园葡萄植株的染病率，而坏死病斑相对面积可以估测葡萄园葡萄的病害程度。
1)每一个处理点葡萄叶片的坏死病斑出现频率可视为该样点区域葡萄的染病率。
2)坏死病斑相对面积评价葡萄病害程度，葡萄叶片病害程度如图1所示：
<5％：基本无病害，可以不处理或采取一些无公害的预防措施。
5％-10％：轻度染病，结合作物的常发性病害类型采用轻度的广谱性防治措施。
10％-15％：中度染病，需要有针对性防治措施。
>15％:重度染病，此时葡萄叶片上应该已有明显病斑，结合病斑采取相应的常规治疗措施。
实施例2
不同浓度NaCl溶液对葡萄染病叶片处理效果，包括以下步骤：
(1)配制不同浓度的NaCl溶液
取0.3gNaCl，溶解在少量水中，稀释到100mL，置于锥形瓶中，高温蒸汽灭菌，配制成0.3％NaCl溶液。重复上述操作配制0％、0.5％、0.7％、0.9％、1.1％的NaCl溶液。
(2)用不同浓度的NaCl溶液处理患病葡萄叶
将不同浓度的NaCl溶液均匀喷洒到葡萄叶上，标号；
葡萄采用云南大学－云南农业大学共建葡萄品种资源与品质调控试验基地的玫瑰蜜葡萄植株，随机选取患病的葡萄叶片。
(3)自然条件培养，观察记录。
本实施例观察葡萄叶坏死程度，将葡萄叶坏死程度等级为：9级：叶盘坏死比例大于76％；7级：叶盘坏死比例为51％～75％；5级：叶盘坏死比例为26％～50％；3级叶盘坏死比例为6％～25％；1级：叶盘坏死比例小于5％；0级：未坏死。
坏死指数(％)＝100×∑(各级坏死的叶盘数×各级的代表值)/(调查总的叶盘数×最高级的代表值)
结果如图2所示，0.3％-1.1％NaCl溶液都可以使患病的葡萄叶片出现病斑坏死的现象，0.5％NaCl溶液处理可以达到较为理想的结果。在0.3％ NaCl溶液处理时就有了可以观察到的坏死情况，0.5％NaCl溶液处理可以达到较好的效果，即葡萄叶大部分为绿色，病斑部位出现了明显的坏死症状，而NaCl溶液处理的NaCl溶液浓度达到0.7％之后，葡萄叶坏死情况明显，在0.9％ NaCl溶液处理是葡萄叶坏死情况最严重的，较之1.1％NaCl溶液处理更为严重(图2A)。
坏死指数表现了每组处理的葡萄叶坏死状况的均衡程度。0.3％NaCl溶液处理的葡萄叶坏死指数明显低于其他浓度的NaCl溶液处理，说明0.3％NaCl溶液处理效果的个体差异性大；0.9％的葡萄叶片坏死指数最高，该处理的葡萄叶片坏死程度几乎一致；其余处理的坏死指数相差不大，叶片坏死的程度比较均衡(图2B)。
实施例3
不同类型单盐溶液对葡萄染病叶片处理效果，包括以下步骤：
(1)配制0.5％浓度的KCl、KI、CaCl2、Na2SO4、MgSO4溶液
取0.5gKCl，溶解在少量水中，稀释到100mL，置于锥形瓶中，高温蒸汽灭菌，配制成0.5％NaCl溶液。重复上述操作配制0.5％的KI、CaCl2、Na2SO4、MgSO4溶液。
(2)用不同的盐溶液处理患病葡萄叶
将0.5％浓度的KCl、KI、CaCl2、Na2SO4、MgSO4溶液均匀喷洒到葡萄叶上，标号；
自然条件培养，观察记录。
结果如图3所示，NaCl、KCl、KI、CaCl2、Na2SO4溶液处理都可以使葡萄叶出现坏死现象，MgSO4溶液处理不会使叶片产生坏死现象。NaCl溶液处理的叶片坏死程度最高，且病斑坏死现象较为明显，CaCl2溶液处理的葡萄叶坏死程度比Na2SO4溶液处理的葡萄叶高，KCl溶液处理的葡萄叶片也出现了轻微的坏死现象。说明相同浓度下，使葡萄叶坏死的能力：氯离子〉钠离子〉钾离子，而钠离子和氯离子共同作用的效果最好。(图3A)。
KI溶液处理的坏死指数为100，葡萄叶片全部坏死；CaCl2、NaCl、Na2SO4、KCl的坏死指数递减(图3B)。
实施例4
NaCl溶液处理后葡萄叶片的生理生化指标测定
(1)叶绿素含量的测定
将所测定的葡萄叶片剪成宽度约为4mm的小条后混匀，称取约0.1g，加入10mL的80％丙醇，在暗盒中直接浸提48h，期间摇晃3次，直到叶片完全空白，澄清准确定容并且摇匀后的上层绿色溶液，之后进行比色测定，测470nm、645nm和663nm波长的光下的消光度。实验设置四个重复。
计算：按照Lichtenthaler的方法：
Ca＝12.21A663-2.81A645
Cb＝20.13A645-5.03A663
C类＝(1000A470-3.27Ca-104Cb)/229
(2)苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的测定
称取约0.1g的葡萄叶片，用1mL预冷的0.05mol/L的PH＝8.7的硼酸缓冲液和0.01gPVP，研磨，用预冷的0.05mol/L的PH＝8.7的硼酸缓冲液定容到5mL，离心10min(10000r/min，4℃)，吸取上清作为待测的PAL酶液。酶反应体系：取pH＝8.7的预冷的0.05mol/L硼酸缓冲液4mL、酶液和0.02mol/L的苯丙氨酸溶液各1mL，摇匀，40℃水浴1小时，水浴之后加入0.2mL的6mol/L的HCl使反应终止，之后用硼酸缓冲液替代酶液做空白对照，在290nm下测定OD值。实验设置四个重复。
计算：PAL活性[U/(gfw.min)]＝OD290*Vt/(Vs*0.01*W*t)
(3)超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定
称取约0.1g葡萄叶片，加入预冷的50μmol/L pH7.8的PBS缓冲液，研磨，定容至5mL，离心10min(8000r/min，4℃)，吸取上清为待测SOD酶液。加入3mL的PBS缓冲液、130μmol/L的Met溶液、20μmol/L的核黄素溶液、100μmol/L的EDTA-Na2溶液、酶液各0.6mL，再加入0.6mL的750μmol/L的NBT溶液，混匀成总体积为6.0mL的显色反应体系。取2支试管以磷酸缓冲液做空白对照，一支同样品管置于4000lx日光灯下，另一支置于暗处，反应30min，在反应结束时，立刻避光使反应终止，将暗处的对照管作为空白对照，在560nm处测定吸光度。实验设置四个重复。
计算：SOD活性(U/g)＝(A0-A1)Vt/(A0×Vs×W×0.5)
(4)电导率测定
称取约0.1g葡萄叶片，剪成碎片，放入到装有100mL重蒸水的三角瓶中，用力摇晃直到碎片全部浸入到水中，将瓶口封住，放到20℃暗盒中浸泡24h，在20℃条件下对浸泡液的电导率值进行测定，用重蒸水进行对照。实验设置四个重复。
电导率＝(样品电导率-对照电导率)/样品重量
(5)丙二醛(MDA)含量的测定
称取0.3g葡萄叶片，用5％TCA溶液充分研磨，定容至5mL，放入离心机中离心10min(4000r/min)，取2mL上清和2mL的0.67％TBA溶液混匀，进行30min的沸水浴，迅速冷却后离心，吸取上清，测定600nm、532nm、450nm处吸光值，用蒸馏水做空白对照。实验设置四个重复。
计算：MDA浓度(μmol/L)＝6.45(A532-A600)-0.56A450
MDA含量(μmol/g)＝C×Vt/W
(6)总酚(TPh)含量的测定
称取约0.1g葡萄叶于研钵中，加80％甲醇充分研磨后定容至2mL，放入离心机中离心10mim(12000r/min，4℃)，吸取1ml上清，先加入0.4mL福林酚试剂，摇匀后静置5min，再加入4mL7％NaCO3溶液，之后加入蒸馏水定容到9mL，摇匀后静置反应90min，用蒸馏水代替提取液做空白对照，在750nm处测定吸光值，整个过程注意避光，用没食子酸标准曲线计算含量。实验设置四个重复。
计算：TPh含量(mg/g)＝(C×Vt/Vs)×(1/W)
(7)总黄酮(TF)含量的测定
称取约0.1g葡萄叶，加80％甲醇充分研磨后定容至2mL，离心10mim(12000r/min，4℃)，吸取1mL上清，0.3mL的5％NaNO2溶液，摇匀静置反应5min，加0.3mL 10％AlCl3，1min后加2mL的1mol/LNaOH溶液，用蒸馏水定容至9mL，摇匀，在510nm处测定吸光值，用蒸馏水做空白对照，对比儿茶素标准曲线计算含量。实验设置四个重复。
计算：TF含量(mg/g)＝(C×Vt/Vs)×(1/W)
测定结果：
1)不同浓度NaCl溶液处理的葡萄叶片的叶绿素含量变化
0％NaCl溶液处理的葡萄叶片的叶绿素a含量显著低于0.3％NaCl溶液处理。0％NaCl溶液处理的葡萄叶片的叶绿素b含量显著低于除0.9％NaCl溶液处理的其余处理。0％NaCl溶液处理的葡萄叶片的类胡萝卜素含量显著低于0.3％NaCl溶液处理和0.9％NaCl溶液处理(表1)。总体而言，利用NaCl溶液处理的葡萄叶片，可以使叶片的叶绿素含量明显升高，且0.3％NaCl溶液处理的效果最好。
2)不同浓度NaCl溶液处理的葡萄叶片的苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性变化
0％NaCl溶液处理的葡萄叶片的PAL活性显著低于除0.7％NaCl溶液处理的其余处理，随着处理浓度的增加，对PAL活性的抑制先强再弱，后又增强(表1)
3)不同浓度NaCl溶液处理的葡萄叶片的超氧化物歧化酶(SOD)活性变化
0％NaCl溶液处理的葡萄叶片的SOD活性与其余各处理均有显著差异，高于0.9％NaCl溶液处理，高于其余处理(表1)。
4)不同浓度NaCl溶液处理的葡萄叶片的电导率变化
0％ NaCl溶液处理的葡萄叶片的电导率与其余处理均有显著差异，显著低于其他处理(表1)。
5)不同浓度NaCl溶液处理的葡萄叶片的丙二醛(MDA)含量变化
不同浓度NaCl溶液处理对葡萄叶片的MDA含量无影响(表1)。
6)不同浓度NaCl溶液处理的葡萄叶片的总酚(TPh)含量变化
0％NaCl溶液处理的葡萄叶片的TPh含量与0.5％NaCl溶液处理和0.9％NaCl溶液材料以及1.1％NaCl溶液处理的葡萄叶片的TPh含量均有显著差异，显著低于这几个处理(表1)。
7)不同浓度NaCl溶液处理的葡萄叶片的总黄酮(TF)含量变化
不同浓度NaCl溶液处理的对葡萄叶片的TF含量无影响(表1)。
表1不同盐溶液处理对葡萄叶的生理生化指标影响
注：表中数据为平均值±标准误差，相同字母表示差异不显著(p>0.05)，不同字母表示差异显著(p≤0.05)，处理编号代表处理患病葡萄叶的NaCl溶液浓度，I：0％NaCl溶液，II：0.3％NaCl溶
液，III：0.5％NaCl溶液，IV：0.7％NaCl溶液，V：0.9％NaCl溶液，VI：1.1％NaCl溶液。
综上可知，0.3％-1.1％浓度的NaCl溶液处理可以使葡萄叶发生坏死，0.5％浓度的KCl、KI、CaCl2、Na2SO4溶液处理也可以使葡萄叶出现坏死现象。在低浓度NaCl溶液处理时，葡萄叶可以通过多种抗盐途径来减少盐离子在细胞质中的累积，叶片受到影响较小，但随着NaCl溶液的浓度升高，叶片调节能力不足，叶片出现了盐离子毒害现象，坏死现象越发明显，而病斑部分由于受到病菌感染，坏死情况更加明显，而NaCl溶液处理的浓度提升到0.9％后，1.1％的NaCl溶液处理葡萄叶坏死情况减弱，可能是过量盐离子激发了叶片新的抗盐途径，KI溶液处理会使葡萄叶叶片全部坏死萎缩，推测是由于碘离子相对分子量大，对葡萄叶产生了毒害作用。综合对比处理效果和原材料的获取难易程度，可以发现0.5％NaCl溶液处理的效果最好。
NaCl溶液处理会对葡萄叶片的叶绿素的含量、电导率、超氧化物歧化酶(SOD)的活性、总酚(TPh)的含量、苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性产生影响。而综合比较，0.5％NaCl溶液处理可以使葡萄叶片的叶绿素含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、电导率、总酚(TPh)含量升高，苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性降低，从而使调节机制更为脆弱的制葡萄叶病斑部位坏死。
本发明实施例已经证明0.5％NaCl溶液处理对葡萄叶有着明显的使病斑坏死的作用，可以将0.5％NaCl溶液处理葡萄叶作为一种绿色无污染的防治白粉病的方法，且这种方法操作便捷，原料也易于获取。对于越来越追求绿色食品的今天，这种无残留的绿色无污染的防治葡萄白粉病的新方法有着非常广阔的应用前景。
最后，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (6)

1.一种葡萄植株病害发生和发病程度的监测方法，其特征在于，所述监测方法包括：
根据葡萄种植区的大小在葡萄种植区随机选取3～9个处理点，每个所述处理点选取3～5株葡萄植株，以质量浓度0.1％～1.5％的单盐溶液均匀喷洒在所述葡萄植株叶片的正反面；
所述葡萄植株经所述单盐溶液处理完毕3天后，根据所述葡萄植株的叶片坏死病斑，评价所述葡萄植株的染病率和发病程度；
根据所述染病率和所述发病程度，对所述葡萄植株的病害风险进行评估；
其中，所述单盐溶液中，单盐包括NaCl、KCl、CaCl2和Na2SO4中的任意一种。
2.根据权利要求1所述的一种葡萄植株病害发生和发病程度的监测方法，其特征在于，所述单盐溶液中，单盐为NaCl，所述单盐溶液中NaCl的质量浓度为0.5％。
3.根据权利要求1所述的一种葡萄植株病害发生和发病程度的监测方法，其特征在于，所述根据所述葡萄植株的叶片坏死病斑，评价所述葡萄植株的染病率和发病程度，具体包括：
统计所述葡萄植株出现坏死病斑的叶片数量和坏死病斑面积，评价所述葡萄植株的染病率和发病程度。
4.根据权利要求1所述的一种葡萄植株病害发生和发病程度的监测方法，其特征在于，所述根据所述葡萄植株的叶片坏死病斑，评价所述葡萄植株的染病率和发病程度，具体包括：
统计每个所述处理点的所述葡萄植株出现坏死病斑的叶片数量和坏死病斑面积；
计算所述葡萄植株单个处理点和整个种植区的坏死病斑出现率，并计算单个处理叶片、单个处理点和整个种植区的坏死病斑相对面积：
单个处理点坏死病斑出现率(％)＝出现坏死病斑叶片数量/处理点单盐溶液处理过的叶片总数×100；
整个种植区坏死病斑出现率(％)＝种植区内单个处理点坏死病斑出现率的平均值±标准误差；
单个处理叶片坏死病斑相对面积(％)＝坏死病斑总面积/叶片总面积×100；
单个处理点坏死病斑相对面积(％)＝处理点内单个处理叶片坏死病斑相对面积平均值±标准误差；
整个种植区坏死病斑相对面积(％)＝种植区内单个处理叶片坏死病斑相对面积的平均值±标准误差；
根据单个处理点和整个种植区的坏死病斑出现率，以及单个处理叶片、单个处理点和整个种植区的坏死病斑相对面积，评价所述葡萄植株的染病率和发病程度。
5.一种如权利要求1-4中任一项所述的葡萄植株病害发生及发病程度的监测方法在葡萄植株病害的预防和/或治疗中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述葡萄植株病害包括霜霉病、白粉病和炭疽病中的至少一种。
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