CN113880931B - 抗菌肽及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了抗菌肽及其制备方法和应用，属于生物技术领域。本发明公开深海热液虾抗菌肽，其包括两条Type IIa型抗菌肽Al‑crus 3和Al‑crus 7，所述Al‑crus 3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述Al‑crus 7如SEQ ID NO：2所示。本发明获得的抗菌肽基因序列是宝贵的深海生物基因资源，其对部分病原菌和致病菌有明显的抑制作用，尤其是对耐药菌甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌和耐亚胺培南鲍曼不动杆菌有明显的抑制效果，且易体外表达获取，可为后续深海基因的研究和利用提供理论基础，为替代抗生素提供新的方向。

Description

抗菌肽及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种抗菌肽及其制备方法和应用。
背景技术
抗菌肽是一种广泛存在于生物体内具有抗菌活性的小分子多肽，是机体先天免疫系统的重要组成部分，在机体受到病原微生物侵染时，可以在生物体内快速合成，其生成和释放时机体产生炎症反应，是宿主防御病原微生物入侵的重要分子屏障(Wang et al,2008)。
抗生素的发现及其应用使人类受益匪浅，但抗生素不规范使用也带来了诸多挑战，如抗生素应用于养殖业后，抗生素可能聚积在养殖动物，造成食品健康问题。且抗生素还可能沉积在自然环境中，破坏水体及土壤微环境。而更为关键的是抗生素的频繁使用相当于对自然界的致病菌做定向筛选，将自然产生耐药菌株的时间提前数倍，造成病原菌耐药性的提高以及抗生素残留等诸多危及人类健康的问题(Michael et al,2014)。因此，寻找新型抗菌试剂刻不容缓。抗菌肽具有分子量低、水溶性好、热稳定性、对高等动物正常细胞无毒害等优点(Bulet et al,2004)。除此之外，还对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌起不同程度的抑菌或杀菌作用，同时还对真菌、病毒、寄生虫和肿瘤有抑制作用(Michelle etal,2008)。由于抗菌肽与抗生素的不同抗菌机制，抗菌肽不易产生耐药性，因此抗菌肽将成为可代替抗生素的潜在抗菌试剂。
目前抗菌肽家族已发现有10余种，已报道的抗菌肽有100余种，但目前对抗菌肽抗菌活性的研究还不充分，基本所有已报道的抗菌肽只测试了其对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑菌或杀菌作用，有的还同时对真菌、病毒、寄生虫和肿瘤的抑制作用进行了研究(Michelle et al,2008)。但对目前迫切需要的对耐药菌有活性的抗菌肽的报导却非常缺乏。
发明内容
本发明的目的是提供抗菌肽及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过分析深海热液虾长角阿尔文虾中多肽，得到两条对耐药菌具有活性的抗菌肽，这为深海基因的研究和利用提供了理论基础，为替代抗生素提供新的方向。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供深海热液虾抗菌肽，其包括两条Type IIa型抗菌肽Al-crus3和Al-crus 7，所述Al-crus 3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述Al-crus 7如SEQ ID NO：2所示。
本发明还提供编码所述抗菌肽的基因，编码抗菌肽Al-crus 3的核苷酸序列如SEQID NO：3所示，编码抗菌肽Al-crus 7的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
本发明还提供一种重组载体，包括所述的如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列或如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。
本发明还提供一种宿主细胞，包括所述的重组载体。
本发明还提供一种所述的抗菌肽的制备方法，包括以下步骤：
获取抗菌肽Al-crus 3和抗菌肽Al-crus 7的基因序列；
将所得抗菌肽Al-crus 3或抗菌肽Al-crus 7的基因序列转入表达载体pGEX4T-1中，获取重组载体；
将所得重组载体转化大肠杆菌，再经过IPTG诱导表达、纯化，获取抗菌肽Al-crus3或抗菌肽Al-crus 7。
优选的是，获取抗菌肽Al-crus 3和抗菌肽Al-crus 7的基因序列所用的引物如下：
Al-crus 3F：5’-TTCGCCCAACCAGGATTCGG-3’；
Al-crus 3R：5’-TGTGCAAACCTGCCATCATATAA-3’；
Al-crus 7F：5’-ATGCAAGAAGGTGCTCAAG-3’；
Al-crus 7R：5’-ACTTGGCTTCGGGCGTTAA-3’。
本发明还提供一种所述的抗菌肽在制备抑菌或杀菌性能药物中的应用。
优选的是，所述药物包括防治细菌感染的药物。
优选的是，所述细菌包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
优选的是，所述革兰氏阳性菌包括甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌；所述革兰氏阴性菌包括亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌。
本发明公开了以下技术效果：
本发明获得的两条抗菌肽序列有助于了解深海生物抗菌肽基因特征，经过分析发现两条多肽均属于Type IIa型抗菌肽，且C端均含有12个半胱氨酸残基和含有8个半胱氨酸残基的乳清酸蛋白结构功能域(WAP domain)。抗菌活性分析显示，在测定范围50μM以内，Al-crus 3对革兰氏阳性菌有明显的抑制作用，尤其是对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌抑制作用较强，MIC50为10μM；MIC50在10μM到25μM之间，而对革兰氏阴性菌几乎没有抑制作用。在相同测定范围内，Al-crus 7除了对部分革兰氏阳性菌有抑制作用外，对革兰氏阴性菌耐亚胺培南鲍曼不动杆菌有较强的抑制作用，MIC50为12μM。可见，在有效抗菌谱中，两条抗菌肽对耐药菌甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌和耐亚胺培南鲍曼不动杆菌抑制效果明显。
本发明获得的抗菌肽基因序列是宝贵的深海生物基因资源，其对部分病原菌和致病菌有明显的抑制作用，且易体外表达获取，可为后续深海基因的研究和利用提供理论基础，为替代抗生素提供新的方向。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明获得的两种抗菌肽的编码基因和氨基酸序列，其中A为Al-crus 3，B为Al-cus 7，阴影部分为WAP功能域；
图2为本发明获得的两种抗菌肽与其他抗菌肽构建的系统发育树；带黑色圆圈的为本发明中的两条抗菌肽。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1抗菌肽的获取与分析
1、cDNA准备及目的基因克隆
1)cDNA准备
使用Trizol法提取深海热液虾长角阿尔文虾的总RNA，以其中的mRNA为模板，经PrimeScriptTM II 1st Strand cDNA Synthesis kit(Takara，日本)试剂盒合成cDNA，具体合成步骤如下：
①在离心管中配制下列反应混合液：Oligo dT Primer(50μM)，1μl；dNTP Mixture(10mM)，1μl；mRNA，5ug；加入RNase Free dH2O至10μl。
②将上述反应混合液放置65℃保温5分钟，冰上迅速冷却。
③在上述混合液放置的离心管中配制下列反转录反应液，总量为20μl：10μl步骤②变性后反应液；5×PrimeScript II Buffer，4μl；RNase Inhibitor(40U/μl)，0.5μl；PrimeScript II RTase(200U/μl)，1μl；加入RNase Free dH2O至20μl。
④缓慢混匀。
⑤将上述步骤③混匀后的反应液42℃水浴45分钟。
⑥95℃水浴5分钟，冰上冷却。
2)目的基因扩增
基于前期通过生物信息学分析获得的序列。设计抗菌肽基因引物，引物序列为：
Al-crus 3F：TTCGCCCAACCAGGATTCGG；
Al-crus 3R：TGTGCAAACCTGCCATCATATAA；
Al-crus 7F：ATGCAAGAAGGTGCTCAAG；
Al-crus 7R：ACTTGGCTTCGGGCGTTAA。
以反转录的cDNA为模板进行目的片段的PCR(聚合酶链式反应)扩增。PCR反应体系为：1μl，cDNA模板；10μl，5×PCR buffer；4μl，dNTPs(10mM)；0.5μl，Primer STAR HS DNAPolymerase(Takara，日本)；32.5μl，ddH2O；1μl，下游引物(10uM)；1μl，下游引物(10uM)。
PCR反应程序为：98℃预变性10秒；98℃变性10秒，50℃退火30秒，72℃延伸1分钟，30个扩增循环；最终72℃延伸10分钟。
3)目的基因克隆
扩增产物经MinElute Gel Extraction Kit(Qiagen，德国)胶回收与pMD18-T载体(Takara，日本)进行连接，连接产物转化到感受态细胞Escherichia coli DH5α(Takara，日本)后，将菌液铺于含有氨苄青霉素(50mg/L)的LB平板上37℃培养12h，使转化成功的阳性克隆于LB液体培养基中进行扩增培养，利用E.Z.N.A.
Figure BDA0003312110160000071
Plasmid DNA Mini Kit I试剂盒(Omega,美国)对感受态细胞进行质粒提取，并对质粒中的插入片段进行测序，最终得到抗菌肽基因的全长序列。
将上述克隆得到的2条抗菌肽氨基酸序列与已报道的来自NCBI数据库的抗菌肽序列进行比对，再将比对结果利用系统发育树构建软件进行系统发育分析。
通过分析发现，两条抗菌肽序列均属于Type IIa型抗菌肽，其中Al-crus3基因序列长度为576bp(SEQ ID NO：3)，编码191个氨基酸(SEQ ID NO：1)；Al-crus 7基因序列长度为705bp(SEQ ID NO：4)，编码234个氨基酸(SEQ ID NO：2)。两条抗菌肽在C端均含有12个半胱氨酸残基和含有8个半胱氨酸残基的乳清酸蛋白结构功能域(WAP domain)(图1)。序列比对及系统进化分析显示，与Al-crus 3亲缘关系最近的为来自日本沼虾的抗菌肽(GenBank编码：QIV66989)，氨基酸序列相似性为63％；与Al-crus7亲缘关系最近的为来自螯龙虾的抗菌肽(GenBank编码：KAG7170693)，氨基酸序列相似性为82％(图2)。
实施例2目的基因表达、纯化及浓度测定
利用NCBI上的ORF finder工具预测目的基因中的开放性阅读框，对目的基因设计引物，使其位于正确的读码框中，并在引物中引入与原核生物表达载体pGEX4T-1(Takara，日本)对应的限制性内切酶位点。用设计出的引物对目的基因进行PCR扩增(同实施例1目的基因的扩增)，并将扩增产物进行切胶纯化，使用合适的限制性内切酶对纯化后的PCR产物及表达载体进行双酶切，并用T4连接酶(Takara，日本)对纯化后的酶切产物进行连接，将经测序验证连接成功的重组质粒转化到感受态细胞E.coli BL21Codon Plus(Novagen，美国)，挑取转化后的阳性克隆，在含有氨苄青霉素(50mg/L)的LB液体培养基中进行扩增培养。当菌液培养至OD600值为0.6时加入终浓度为0.2-0.5mM的IPTG(异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)诱导目的基因的表达，25℃培养16h后离心收集菌体，用裂解缓冲液(Na2HPO4 80mM、NaCl 1.36M、KH2PO4 20mM、KCl 26mM、1％TRITON X-100、pH 8.0)对菌体进行重悬，并利用超声波破碎仪(Fisher，美国)对菌体进行破碎，破碎后释放出的重组蛋白通过GenScriptHigh-Affinity GST Resin纯化，纯化产物通过10％的SDS-PAGE凝胶电泳进行检验，并利用DC Protein Assay Kit试剂盒(Bio-Rad，美国)对纯化后的蛋白进行浓度测定。
实施例3抗菌肽抑菌实验
利用实施例2表达纯化的蛋白，进行抗菌活性的测定，确定抗菌肽的抗菌谱以及抗菌肽对不同病原菌的最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration，MIC50)。
1)抗菌谱的测定
实验菌株包括革兰氏阳性菌：藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、大肠杆菌(ESBLs阳性)、肺炎克雷伯菌(ESBLs阳性)；革兰氏阴性菌：肺炎克雷伯菌(ESBLs阴性)、大肠杆菌(ESBLs阴性)、亚胺培南敏感铜绿假单胞菌、亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌、亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌。
将上述过夜培养至对数期的实验菌稀释至OD600＝0.05，将稀释好的实验菌分别加到96孔培养板中，每孔加90μL稀释菌液，并分别加入10μL的抗菌肽，将培养板于37℃恒温100rpm震荡培养，培养12h后，在600nm下用酶标仪测定其吸光度。以纯菌和融合标签蛋白GST为阴性对照，每组实验做三组平行。
2)最小抑菌浓度(MIC50)的测定
将抗菌肽用1×PBS两倍稀释为0、5、10、12.5、25、50μM共计6个梯度。将上述过夜培养至对数期的实验菌稀释至OD600＝0.05，将稀释好的实验菌分别加到96孔培养板中，每孔加100μL稀释菌液，并分别加入10μL的抗菌肽，将培养板于37℃恒温120rpm震荡培养，培养12h后，在600nm下用酶标仪测定其吸光度。以纯菌和融合标签蛋白GST为阴性对照，每组实验做三组平行。结果如表1所示。
表1抗菌谱和最小抑菌浓度测定结果
Figure BDA0003312110160000091
Figure BDA0003312110160000101
由表1可见，抗菌活性分析显示，在测定范围内(50μM以内)，Al-crus3对革兰氏阳性菌有明显的抑制作用，包括：藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、大肠杆菌，MIC50在10μM到25μM之间，而对革兰氏阴性菌几乎没有抑制作用。在相同的测定范围内，Al-crus 7除了对部分革兰氏阳性菌(枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌)有抑制作用外(MIC50在10μM到25μM之间)，对革兰氏阴性菌(耐亚胺培南鲍曼不动杆菌)有较强的抑制作用，MIC50为12μM。可见，在有效抗菌谱中，Al-crus 3和Al-crus 7对耐药菌甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌和耐亚胺培南鲍曼不动杆菌有明显的抑制效果。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
序列表
<110> 中国科学院深海科学与工程研究所
<120> 抗菌肽及其制备方法和应用
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 191
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Phe Ala Gln Pro Gly Phe Gly Gln Gln Gly Phe Gly Gln Gln Gly Phe
1 5 10 15
Gly Gln Gln Gly Phe Gly Gln Gln Gly Phe Gly Gln Gln Gly Phe Gly
20 25 30
Gln Gln Gly Phe Gly Gln Gln Gly Phe Gly Gln Gln Gly Phe Ser Gln
35 40 45
Gln Gly Phe Gly Phe Asn Gln Gln Gly Thr Val Pro Thr Gly Leu Gly
50 55 60
Gln Gly Leu Gly Gln Pro Phe Gly Gln Ser Val Leu Ala Gln Pro Gly
65 70 75 80
Leu Gly Leu Asn Ser Val Gly Gln Pro Thr Leu Ser Gly Val Pro Val
85 90 95
Ala Ala Pro Glu Leu Pro Asn Arg Pro Ala Ile Ser Leu Pro Ser Asn
100 105 110
Ser Cys Arg Gln Trp Cys Arg Gly Thr Arg Pro Gly Gln Val Tyr Cys
115 120 125
Cys Asp Asp Asn Ser Lys Pro Leu Thr Leu Pro Ile Val Lys Pro Gly
130 135 140
Ser Cys Pro Pro Arg Arg Pro Leu Cys Pro Lys Phe His Thr Pro Pro
145 150 155 160
Gln Thr Cys Gly Asn Asp Ser Lys Cys Ser Gly Thr Asp Lys Cys Cys
165 170 175
Leu Asp Thr Cys Leu Glu Val His Val Cys Lys Pro Ala Ile Ile
180 185 190
<210> 2
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Gln Glu Gly Ala Gln Glu Gly Ala Gln Glu Asp Ser Ser Thr Asn
1 5 10 15
Ser Glu Gly Arg Thr Gly Ser Ser Gly Ser Lys Thr Glu Gly Asp Gly
20 25 30
Ser Ala Thr Arg Phe Leu Gly Gly Leu Gly Gly Gly Gly Tyr Gly Gly
35 40 45
Val Asn Pro Gly Leu Gly Gly Ala Gly Tyr Gly Gly Val Asn Pro Gly
50 55 60
Leu Gly Gly Ala Gly Phe Gly Gly Val Asn Pro Gly Leu Gly Gly Ala
65 70 75 80
Gly Tyr Gly Gly Val Asn Pro Gly Leu Gly Gly Gly Tyr Gly Gly Val
85 90 95
Asn Pro Gly Leu Gly Gly Ala Gly Tyr Gly Gly Val Asn Pro Gly Leu
100 105 110
Gly Gly Ala Gly Tyr Gly Gly Val Asn Pro Gly Leu Gly Gly Ala Gly
115 120 125
Phe Gly Gly Ile Gly Ser Gly Leu Gly Gly Ile Asn Ser Gly Ile Gly
130 135 140
Ser Val Ala Pro Pro Ser Gln Cys Arg Tyr Trp Cys Arg Thr Pro Glu
145 150 155 160
Gly Gln Ala Tyr Cys Cys Glu Asn Thr Asn Gln Pro Gln Ser Asn Ala
165 170 175
Gly Val Val Lys Pro Gly Arg Cys Pro Pro Val Arg Pro Val Cys Pro
180 185 190
Pro Val Arg Ser Phe Ala Pro Pro Ala Ser Cys Ser Asn Asp Gly Ala
195 200 205
Cys Gly Gly Ile Asp Lys Cys Cys Tyr Asp Lys Cys Leu Glu Gln His
210 215 220
Thr Cys Lys Ala Pro Leu Gly Phe Gly Arg
225 230
<210> 3
<211> 576
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ttcgcccaac caggattcgg ccaacaagga tttggtcaac aaggattcgg ccaacaagga 60
ttcggtcaac aaggattcgg ccaacaagga ttcggccaac aaggattcgg tcagcaagga 120
ttcggtcagc aaggattctc ccaacaagga ttcggcttca atcaacaagg aacagttccc 180
acaggccttg gtcagggact tggccaacct tttggtcagt ccgttttggc tcagccagga 240
ctaggcttaa actcggtagg ccaaccgacg ctgagcggag tgccagtggc tgcccccgaa 300
cttcccaacc gccctgccat ctctcttcct agtaacagct gtaggcagtg gtgccgtgga 360
acaagacctg gacaagtcta ctgctgcgat gacaactcca aacctctcac tcttcctatt 420
gtgaaacctg gcagttgtcc cccaaggaga cctttgtgtc ccaaattcca tactcctcct 480
cagacttgcg gcaacgacag caagtgttct ggaaccgaca agtgctgcct cgacacctgt 540
ctggaagtgc acgtgtgcaa acctgccatc atataa 576
<210> 4
<211> 705
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
atgcaagaag gtgctcaaga aggtgctcaa gaagactcgt cgactaatag tgagggtcgt 60
accggcagca gtggcagcaa aacggagggt gatggttcag cgaccagatt cttaggtggt 120
ttgggtggtg gtggatacgg cggtgtcaat ccaggattag gaggtgctgg atacggcggt 180
gtcaatccag gattgggagg tgctggattt ggcggtgtca atcccggatt gggaggtgct 240
ggatacggcg gtgtcaatcc aggattggga ggtggatacg gcggtgtcaa tccaggattg 300
ggaggtgcag gatacggcgg tgtcaatcca ggattgggag gtgcaggata cggcggtgtc 360
aatccaggat tgggaggtgc tggatttggt ggaattggct caggacttgg tggtattaat 420
tcaggaatag gttcagtggc acccccaagc cagtgtcgct actggtgcag aacacccgaa 480
ggtcaagctt actgctgtga gaacaccaac caaccccaga gcaacgctgg agtcgttaag 540
cccggtcgtt gcccacctgt ccgtcccgtg tgtccccctg tcaggagctt cgccccacca 600
gcctcctgct ctaacgatgg tgcctgcggt ggtattgaca agtgctgcta cgacaaatgc 660
ctggaacaac atacctgcaa ggctccactt ggcttcgggc gttaa 705

Claims (7)

1.深海热液虾抗菌肽，其特征在于，其包括两条Type IIa型抗菌肽Al-crus 3和Al-crus 7，所述Al-crus 3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述Al-crus 7的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
2.编码权利要求1所述抗菌肽的基因，其特征在于，编码抗菌肽Al-crus3的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，编码抗菌肽Al-crus 7的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
3.一种重组载体，其特征在于，包括权利要求2中所述的如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列或如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。
4.一种宿主细胞，其特征在于，包括权利要求3所述的重组载体。
5.一种如权利要求1所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：获取抗菌肽Al-crus 3和抗菌肽Al-crus 7的基因序列；
将所得抗菌肽Al-crus 3或抗菌肽Al-crus 7的基因序列转入表达载体pGEX4T-1中，获取重组载体；
将所得重组载体转化大肠杆菌，再经过IPTG诱导表达、纯化，获取抗菌肽Al-crus 3或抗菌肽Al-crus 7。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，获取抗菌肽Al-crus 3和抗菌肽Al-crus7的基因序列所用的引物如下：
Al-crus 3F：5’-TTCGCCCAACCAGGATTCGG-3’；
Al-crus 3R：5’-TGTGCAAACCTGCCATCATATAA-3’；
Al-crus 7F：5’-ATGCAAGAAGGTGCTCAAG-3’；
Al-crus 7R：5’-ACTTGGCTTCGGGCGTTAA-3’。
7.一种如权利要求1所述的抗菌肽在制备抑菌或杀菌性能药物中的应用，其特征在于，所述菌为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌和亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌。
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