CN113840928A - 病毒载体转基因调控的内在系统 - Google Patents
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Abstract
提供了一种从传播的病毒疫苗载体中调节去除异源遗传物质的方法。
Description
技术领域
本发明总体上涉及一种允许病毒载体(完全复制和减毒的)中衰减的转基因表达被用作常规和传播疫苗或基因替换载体的系统。
背景技术
病毒疫苗载体能够被用于对重组表达的转基因呈递的抗原产生免疫应答。病毒载体允许将编码免疫原性蛋白质(即，抗原)的基因直接投递到宿主细胞中，同时诱导对编码抗原的免疫。除了仅在直接接种的个体(术语“个体”涉及任何人类和非人类动物接受者)中诱导免疫力的常规疫苗之外，传播病毒疫苗将病毒载体的免疫原性属性与其通过宿主种群在个体之间传播的能力相结合。因此，传播疫苗由于其正常的病毒传播通过宿主种群传播疫苗衍生的免疫力。这种方法有多种潜在应用，包括疫苗接种，从而控制从地理上或经济上无法获得常规疫苗接种的动物种群(野生动物和家畜)的人畜共患病和动物流行病传播。因此，这种方法限制了人类/家养动物的后续感染，同时保护了参与传播的动物种群免受疾病的侵害。
病毒载体也能够用作替代个体所缺乏的基因的手段。在这种情况下，不需要对转基因免疫。
疱疹病毒如巨细胞病毒(CMV)是非常适合作为病毒疫苗的DNA病毒。它们是具有相对较大的编码能力并且对编码的转基因诱导强大的持久免疫的大型病毒，在其各自的宿主中具有良性但终生的感染。作为传播载体平台，它们在其宿主种群中具有高血清阳性率，表明高传播效率。它们还具有高度的物种特异性，因此能够通过使用相关的疱疹病毒种类来靶向至特定宿主种群。尽管没有被广泛研究，疱疹病毒也可以用于以非免疫原性形式表达基因，以替代或修改宿主的遗传缺陷。
虽然是一个潜在的高度可利用的病毒载体平台，但基于疱疹病毒的载体可能会在环境中长期存在且后果未知。本文提出了一种产生重组病毒载体的机制，该重组病毒载体在逆转到其良性野生型基因型和表现型之前在可定义的时期内表达转基因。
病毒基因组大小受许多因素的限制，包括在病毒衣壳内有效包装核酸的能力。被设计为编码免疫原性蛋白质的病毒具有更大的基因组，因此与野生型亲本菌株相比处于竞争劣势。转基因其本身也可以对于其丢失提供与其大小无关的选择压力。推论是抗原表达可能会随着时间的推移而丢失。然而，这种抗原丢失的时间在很大程度上是不确定的。
发明内容
本发明利用对基因组大小(或提供选择压力的转基因的其他特征)的这种选择压力来产生具有确定的转基因表达衰减时间的病毒载体。
本发明的一个方面提供了一种从传播的病毒疫苗载体中调控去除异源遗传物质的方法，其包括以下步骤：
-提供野生型或亲本病毒载体，其包括基因组序列的重组工程复制；
-提供抗原表达盒，其包括转基因和用于控制转基因表达的侧部(flanked)是野生型/亲本基因组序列的区域的拷贝的必要基因调控元件(regulatory genetic elements)；
-将盒插入载体，使转基因侧部是野生型/亲本基因组序列及其复制序列；同源重组随后导致转基因被去除，只留下同源序列的单拷贝，如通常在野生型/亲本病毒中发现的那样，从而在不存在任何非亲本病毒基因序列的情况下再生野生型/亲本病毒基因组，
-选择复制序列的长度，
其中病毒基因组中转基因去除的速率，及从而重组病毒基因组向野生型/亲本的逆转，取决于所选复制序列的长度。
在一些实施方案中，外源转基因以这样的方式插入到病毒载体中，使得其侧部是重复的病毒序列，允许重复序列之间的定向同源重组并且伴随插入的转基因的去除。
导致转基因的去除的重组将仅留下侧部同源序列的单拷贝，从而产生野生型(亲本)病毒基因组，不存在任何非病毒基因序列。
从病毒基因组中去除转基因的速率(将重组病毒基因组逆转到亲本所需的周期)将取决于以下中的一或多个：所使用的特定DNA病毒、重复序列的长度以及插入的转基因的大小和性质。
转基因表达的长度将是可定义的和可变的，以允许对转基因去除进行微调的内在手段。衰减率的调控将允许适合于正在部署的疫苗接种或基因替换策略的转基因表达，及通过将重组病毒逆转至亲本野生型来提高安全性。
这种机制可能适用于所有基于DNA病毒的病毒载体。
本发明的一些方面和实施例提供或涉及一种用于从遗传修饰的病毒中快速去除异源序列的方法。
这些可能包括用于以下的病毒和病毒载体(复制或减毒)：
a.需要短期抗原暴露的癌症免疫疗法。病毒载体会在抗原衰减时迅速逆转为野生型。
b.预防细菌、病毒、蠕虫或真菌感染的疫苗接种策略。病毒载体会在抗原衰减时迅速逆转为野生型。
c.替代疫苗策略，包括自体抗原，例如用于免疫避孕的那些。病毒载体会在抗原衰减时迅速逆转为野生型。
g.基因替换，代表从用于基因替换的病毒载体中调节去除转基因的内在方法。
根据本发明的一进一步的方面，提供一种用于从传播的病毒疫苗载体中调控去除异源遗传物质的方法，包括以下步骤：
-提供野生型或亲本病毒载体，其包括预选长度的基因组序列的复制(重组工程复制)；
-提供抗原表达盒，其包括转基因和用于控制转基因表达的侧部是野生型/亲本基因组序列的区域的拷贝的必要调控遗传成分；
-将该盒插入到载体中，使得转基因的侧部是野生型/亲本基因组序列及其拷贝(复制)序列；
据此，同源重组导致转基因被去除，以只留下同源序列的单拷贝，如通常在野生型/亲本病毒中发现的那样，从而在不存在任何非亲本病毒基因序列的情况下再生野生型/亲本病毒基因组，
其中病毒基因组中转基因去除的速率，并且因此重组病毒基因组向野生型/亲本的逆转，取决于复制序列的长度，以及插入的转基因的大小和性质。
一进一步的方面提供一种从转基因修饰的病毒中快速去除异源序列的方法，其包括以下步骤：
-提供野生型或亲本病毒载体，其包括预选长度的病毒基因组的复制序列
-提供抗原表达盒，其包括转基因和必要调控序列和野生型/亲本序列的复制区域的拷贝
-将该盒插入到载体中，使得转基因的侧部是野生型/亲本序列及其具有定义的大小的拷贝
据此，同源重组导致转基因的去除以仅留下侧部同源序列的单拷贝，从而产生野生型/亲本病毒基因组。
一进一步的方面提供一种从传播的病毒疫苗载体中调控去除异源遗传物质的方法，其包括以下步骤：
-提供野生型或亲本病毒载体，其包括预选长度的基因组序列的重组工程复制；
-提供抗原表达盒，其包括转基因和用于控制转基因表达的侧部是野生型/亲本基因组序列的区域的拷贝的必要基因调控元件；；
-将该盒插入到载体中，使得转基因的侧部是野生型/亲本基因组序列及其复制序列；
据此，同源重组导致转基因被去除，以只留下同源序列的单拷贝，如通常在野生型/亲本病毒中发现的那样，从而在不存在任何非亲本病毒基因序列的情况下再生野生型/亲本病毒基因组，
其中病毒基因组中转基因去除的速率，及从而重组病毒基因组向野生型/亲本的逆转，取决于复制序列的长度，以及插入的转基因的大小和性质。
一进一步的方面提供一种从传播的病毒疫苗载体中快速去除异源遗传物质的方法，其包括以下步骤：
-提供野生型或亲本病毒载体，其包括预选长度的基因组的复制序列
-提供抗原表达盒，其包括转基因和野生型/亲本侧部序列的拷贝
-将该盒插入到载体中，使得转基因的侧部是野生型/亲本序列及其基因组的拷贝(复制)序列
据此，同源重组导致转基因的去除以仅留下侧部同源序列的单拷贝，从而产生野生型/亲本病毒基因组，而不存在任何非病毒基因序列(在序列和拷贝数方面)。
病毒载体可以是基于疱疹病毒的载体，
病毒载体可以是基于CMV的载体。
基于CMV的载体可以选自以下非排他性清单：人CMV(HCMV)，猿CMV(SCCMV)，恒河猴CMV(RhCMV)，黑猩猩CMV(CCMV)，大猩猩CMV(GCMV)，猪CMV(PCMV)以及包括鹿鼠[白足鼠属]CMV(PyCMV)、乳鼠属CMV和鼠(murine)CMV(MCMV)的啮齿动物CMV。
病毒载体可以包括来自以下非排他性清单的额外的非CMV疱疹病毒：人单纯疱疹病毒(HSV)、人爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、人卡波西肉瘤病毒(KHSV)、马疱疹病毒-2(EHV-2)和鼬类疱疹病毒-1(MusHV-1)；以及其他DNA病毒，包括腺病毒和腺相关病毒。
一进一步的方面提供一种用于病毒载体转基因调控的内在系统，其包括具有侧部为病毒基因组序列复制的转基因的病毒载体，用于允许重复序列之间的同源重组和伴随的转基因切除并且仅留下与野生型/亲本基因组中发现的区域相当的复制侧部区域的单拷贝，其中抗原衰减取决于复制基因组序列的长度，使得转基因表达的长度是可定义和可变的。
一进一步的方面提供一种用于病毒载体转基因调控的内在系统，其包括具有侧部为病毒基因组序列复制的转基因的病毒载体，用于允许重复序列之间的同源重组和伴随的转基因切除并且仅留下与野生型/亲本基因组中发现的区域相当的复制侧部区域的单拷贝，其中抗原衰减取决于复制基因组序列的长度、转基因的大小和性质，使得转基因表达的长度是可定义和可变的。
一个另外的方面提供一种具有侧部为复制的病毒序列的转基因的病毒载体，用于允许复制序列之间的同源重组和伴随的转基因切除并且仅留下两种复制序列中的一种从而将病毒返回至野生型/亲本基因组状态，其中抗原衰减取决于复制序列的长度、转基因的大小和性质，使得转基因表达的长度是可定义和可变的。
本发明还提供了一种疫苗，该疫苗由如本文所述的载体组成、包含或包括本文所述的载体。
本发明还提供一种包括如本文所述的载体或疫苗和药学上可接受的载体的组合物。
已知具有同源序列(即，相同的基因组拉伸)的侧部外源成分将靶向间插的外源成分以从病毒基因组中去除。本发明基于这样的观察，即同源性侧部序列的大小越大，外源成分的去除速率越快。因此，促进了来自病毒基因组的外源遗传成分的动力学控制。
载体可以包括基于疱疹病毒的载体，例如基于CMV的载体。
基于CMV的载体可以选自以下非排他性清单：人CMV(HCMV)，猿CMV(SCCMV)，恒河猴CMV(RhCMV)，黑猩猩CMV(CCMV)，大猩猩CMV(GCMV)，猪CMV(PCMV)以及包括鹿鼠[白足鼠属]CMV(PyCMV)和鼠CMV(MCMV)的啮齿动物CMV。
病毒载体可以包括来自以下非排他性清单的额外的非CMV疱疹病毒：人单纯疱疹病毒(HSV)、人爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、人卡波西肉瘤病毒(KHSV)、马疱疹病毒-2(EHV-2)和鼬类疱疹病毒-1(MusHV-1)，牛疱疹病毒-4；以及其他DNA病毒，包括腺病毒和腺相关病毒。
本发明还提供一种包括如本文所述的疫苗或载体和药学上可接受的载体的组合物。
本发明还提供了一种疫苗，该疫苗由如本文所述的载体组成、包含或包括本文所述的载体。
本发明的不同方面和实施例可以单独或一起使用。
在所附的独立权利要求和从属权利要求中阐述了本发明的另外的特定和优选方面。从属权利要求的特征可以适当地与独立权利要求的特征组合，并且可以结合不同于权利要求中明确陈述的那些特征。每个方面能够独立于其他方面或与其他方面中的一个或多个结合来实现。
具体实施方式
现在将参考附图通过示例的方式更具体地描述本发明。
对示例实施例进行了足够详细的描述，以使本领域普通技术人员能够具体表现和实现本文描述的系统和过程。重要的是要理解，可以以许多替代形式来提供实施例并且不应被解释为限于本文中阐述的示例。
因此，虽然实施例能够以各种方式修改并且采用各种替代形式，但其具体实施例在附图中示出并且在下面作为示例进行详细描述。无意限制所公开的特定形式。相反，应包括落入所附权利要求范围内的所有修改、等同物和替代物。在适当的情况下，贯穿附图和详细描述，示例实施例的元素一致地由相同的附图标记表示。
除非另有定义，本文中使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)均应按照本领域的惯例进行解释。将进一步理解的是，除非在本文中清楚地如此定义，否则通常使用的术语也应被解释为相关领域中的惯例而不是理想化的或过于正式的意义。
第1页
参考附图中的图1，外源转基因以这样的方式被插入到病毒载体中，使得其侧部是重复的病毒序列，允许重复序列之间的定向同源重组并且同时去除插入的转基因。
导致转基因去除的重组将仅留下侧部同源序列的单拷贝，从而产生野生型(亲本)病毒基因组，不存在任何非病毒基因序列。
从病毒基因组中去除转基因的速率(将重组病毒基因组逆转到亲本所需的周期)将取决于以下中的一或多个：所使用的特定DNA病毒、重复序列的长度以及插入的转基因的大小和性质。
转基因表达的长度将是可定义的和可变的，以允许对转基因去除进行微调的内在手段。衰减率的调控将允许适合于正在部署的疫苗接种或基因替换策略的转基因表达，及通过将重组病毒逆转至亲本野生型来提高安全性。
这种机制可适用于所有基于DNA病毒的病毒载体。
能够将这个原理应用于例如一种用于从遗传修饰的病毒中快速去除异源序列的方法。
这些可能包括用于以下的病毒和病毒载体(复制或减毒)：
a.需要短期抗原暴露的癌症免疫疗法。病毒载体会在抗原衰减时迅速逆转为野生型。
b.预防细菌、病毒、蠕虫或真菌感染的疫苗接种策略。病毒载体会在抗原衰减时迅速逆转为野生型。
c.替代疫苗策略，包括自体抗原，例如用于免疫避孕的那些。病毒载体会在抗原衰减时迅速逆转为野生型。
g.基因替换，代表从用于基因替换的病毒载体中调节去除转基因的内在方法。
本发明的实施例还提供一种从传播的病毒疫苗载体中快速去除异源遗传物质的方法。
这些可以包括，但不限于，用于动物种群的病毒和病毒载体，其中病毒载体的传播而不是直接接种是有利的，但在环境中重组病毒的非永久性存在是可取的。非排他性示例如下：
a.需要短期接种/传播(如上所述，细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原、蠕虫抗原或自体抗原)的圈养动物种群，然后将病毒载体逆转为亲本病毒。
b.需要短期接种/传播(如上所述，细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原、蠕虫抗原或自体抗原)的伴侣动物，然后将病毒载体逆转为亲本病毒。
c.需要短期接种/传播(如上所述，细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原、蠕虫抗原或自体抗原)的牲畜，然后将病毒载体逆转为亲本。
e.需要短期接种/传播(如上所述，细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原、蠕虫抗原或自体抗原)的野生动物，然后将病毒载体逆转为亲本。
本发明的实施例还提供一种从传播的病毒疫苗载体中延迟去除异源遗传物质的方法。
这将包括但不限于上面给出的示例。
第2页
技术进步/亮点：TA2 WP1B
内在衰减
图中提供的结果表明同源重组能够用于去除如图1中所述的表达转基因。
LacZ盒(转基因)保持在一定比例的病毒粒子内至少4次传代，重复长度为250bp，并且不会从与假设一致的0bp重复长度的对照病毒粒子中丢失。
丢失率受侧部同源长度的影响，这在后续实验中被量化(见下文)。
表1：允许的鼠成纤维细胞中的iMCMV B-Gal BAC构建体的重建
表1：允许的M210.B4鼠成纤维细胞中重建后iMCMV的生长。iMCMV BAC克隆体是通过E/T重组构建的。不同的iMCMV BAC包含侧部插入非必需M157 MCMV ORF中的同源指示区域的β-Gal+KanR盒。BACs基于Kan抗性选择，并且通过PCR表征。完整的基因组序列分析证实了基因组的完整性，细菌的功能分析显示β-Gal(LacZ)基因代谢的X-gal(产生蓝色菌落)表明功能性β-Gal的稳定表达。MCMV pArkl4不含LacZ基因。表1显示了在MCMV允许的鼠M210.B4成纤维细胞中重建iMCMV BAC的结果。关键(Key)：+++＝50％CPE；+＝<25％(2-3个斑块)。
第3和4页
附图的第3页和第4页涉及病毒在P1和P2中丢失LacZ/KN盒。
LacZ存在于P1和P2中的0nt、25nt和250nt MCMV Bgal菌株中。
红色突出显示的条带(第4页右侧)表明在P1中已经切除了25nt和250nt侧部序列之间的LacZ/Kn。
测序证实突出显示的条带对应于切除的LacZ/Kn。
在0nt侧部样本中未检测到LacZ/Kn的丢失。
使用引物m156intFOR和m158REV进行M PCR：
vARK14(WT)：1326bp
具有插入物的25nt侧部：6884bp
具有插入物的250nt侧部：7109bp
在重复序列之间切除的lacZ/Kn：702bp
使用引物LacZintFOR和LacZintREV进行L PCR：3024bp
第5和6页
附图的第5页和第6页涉及病毒在P3和P4中丢失LacZ/KN盒。
LacZ存在于P3和P4中的0nt、25nt和250nt MCMV Bgal菌株中。
红色突出显示的条带(第6页右侧)对应于切除25nt和250nt侧部序列之间的LacZ/Kn。
具有250bp与25bp重复序列的病毒的基因丢失率更高。
在0nt侧部样本中未检测到LacZ/Kn的丢失。
要点：LacZ盒在25bp和250bp重复病毒中至少保留4代。同源重组正在发生并且导致一部分病毒中的LacZ丢失。丢失率由重复序列的长度决定。
第7和8页
内在衰减：一种对可传播疫苗进行稳固(robust)生物防治的简单工具(WP2 TA1B)
A)基于重复序列的内在衰减的原理。同源重组的速率取决于病毒中重复序列的长度(以及病毒衣壳化的能力，总基因组大小的函数)，更长的重复序列应该导致转基因(或LacZ)更快丢失。
B.显示质粒和同源重组机制的iMCMV菌株设计，导致逆转为仅包含单个“重复”序列的野生型(WT)序列。重复序列之间的同源重组导致间插序列(intervening sequence)和一个重复序列的丢失。
C.染色以保留LacZ(在添加β-半乳糖苷酶后，病毒疫(viral plagues)保留LacZ染色蓝色)。显示的是iMCMV-250和iMCMV-0的第4代病毒滴定。
D.连续传代中转基因(LacZ)丢失的量化。iMCMV-250变体在第13次传代时已完全转基因丢失，而iMCMV-25在多次传代保留了转基因。iMCMV-25最终以比没有重复序列的病毒(iMCMV-0)稍快的速率丢失表达。由于更大的选择压力，可以合理地预期体内转基因丢失更快。将在体内测试具有0、25、50、75和100bp重复序列的新iMCMV毒株，同时还评估免疫原性和免疫原性丧失，来自LCMV的标称抗原NP。还将评估WT和iMCMV菌株之间的竞争在转基因丢失中所起的作用。在这种情况下，竞争可能会选择WT，从而经由竞争导致iMCMV菌株的丢失，即与正在进行的重组无关。
第9和10页
可传播疫苗接种：一种防止人畜共患病毒的宿主物种从动物转移给人类的工具(WP1)
A)可传播疫苗接种的原则。人类中大多数高致病性病毒来自野生动物。野生动物疫苗接种能够防止转移给人类，但难接近及恶劣条件阻止使用常规(直接施用的)疫苗，除非在极少数情况下(例如，狂犬病)。可传播疫苗接种解决了为生活在恶劣环境中的难接近的野生动物种群提供高疫苗覆盖率的问题。
B)可传播LASV疫苗。用于野生大鼠(多乳鼠类(Mastomys natalensis)；Mnat)宿主的针对拉沙病毒(LASV)的可传播疫苗提供了具有直接“现实世界”影响的“概念验证”。多乳鼠巨细胞病毒(MasCMV)将用作可传播疫苗。时间线：2019年6月基于扩增230,000bp基因组的179bp部分的能力，PCR已显示在Mnat组织中存在MasCMV。2019年9月来自RML独立资助项目的组织的可用性与高度许可的Mnat上皮细胞系的开发相结合，能够分离3种不同的MasCMV物种。这种敏感的共培养试验表明，野生Mnat种群中的MasCMV感染率很高(至少40％)并且共感染很常见，这表明先前对MasCMV的免疫(即使对于非常密切相关的病毒)并不能防止再次感染：这些是用作可传播疫苗的两个重要特征。2020年1月实时全长基因组测序为其本地野生动物种群中的所有CMV提供了最广泛的表征。将MasCMV开发为可传播疫苗的关键是，基因组表征已使工程进入第二阶段，在该阶段，MasCMV将被克隆为感染性细菌人工染色体，以便对其进行基因操作以构建LASV的可传播疫苗。
尽管本文已经参照附图详细公开了本发明的说明性实施例，但是应当理解，本发明不限于所示的精确实施例，并且在不脱离由所附权利要求及其等同物限定的本发明的范围的情况下，本领域技术人员可以在其中实现各种改变和修改。
Claims (12)
1.一种用于从传播的病毒疫苗载体中调控去除异源遗传物质的方法，其包括以下步骤：
-提供野生型或亲本病毒载体，其包括基因组序列的重组工程复制；
-提供抗原表达盒，其包括转基因和用于控制转基因表达的侧部是野生型/亲本基因组序列的区域的拷贝的必要基因调控元件，；
-将所述盒插入到载体中，使得转基因的侧部是野生型/亲本基因组序列及其复制序列；
借此，同源重组导致转基因被去除，以只留下同源序列的单拷贝，如通常在野生型/亲本病毒中发现的那样，从而在不存在任何非亲本病毒基因序列的情况下再生野生型/亲本病毒基因组，
-选择复制序列的长度，
其中病毒基因组中转基因去除的速率，及从而重组病毒基因组向野生型/亲本的逆转，取决于所选复制序列的长度。
2.一种用于从转基因修饰的病毒中快速去除异源序列的方法，其包括以下步骤：
-提供野生型或亲本病毒载体，其包括预选长度的病毒基因组的复制序列；
-提供抗原表达盒，其包括转基因和必要调控序列和野生型/亲本序列的复制区域的拷贝；
-将该盒插入到载体中，使得转基因的侧部是野生型/亲本序列及其具有定义的大小的拷贝；
据此，同源重组导致转基因的去除以仅留下侧部同源序列的单拷贝，从而产生野生型/亲本病毒基因组。
3.一种用于从传播的病毒疫苗载体中快速去除异源遗传物质的方法，其包括以下步骤：
-提供野生型或亲本病毒载体，其包括预选长度的基因组的复制序列
-提供抗原表达盒，其包括转基因和野生型/亲本侧部序列的拷贝
-将该盒插入到载体中，使得转基因的侧部是野生型/亲本序列及其基因组的拷贝(复制)序列
据此，同源重组导致转基因的去除以仅留下侧部同源序列的单拷贝，从而产生野生型/亲本病毒基因组，而不存在任何非病毒基因序列(在序列和拷贝数方面)。
4.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述病毒载体是基于疱疹病毒的载体。
5.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述病毒载体是基于CMV的载体。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述基于CMV的载体选自以下非排他性清单：人CMV(HCMV)，猿CMV(SCCMV)，恒河猴CMV(RhCMV)，黑猩猩CMV(CCMV)，大猩猩CMV(GCMV)，猪CMV(PCMV)以及包括鹿鼠[白足鼠属]CMV(PyCMV)、乳鼠属CMV和鼠CMV(MCMV)的啮齿动物CMV。
7.如权利要求5或6所述的方法，其中所述病毒载体包括来自以下非排他性清单的额外非CMV疱疹病毒：人单纯疱疹病毒(HSV)、人爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、人卡波西肉瘤病毒(KHSV)、马疱疹病毒-2(EHV-2)和鼬类疱疹病毒-1(MusHV-1)，牛疱疹病毒-4；以及其他DNA病毒，包括腺病毒和腺相关病毒。
8.一种用于病毒载体转基因调控的内在系统，其包括具有侧部为病毒基因组序列复制的转基因的病毒载体，用于允许重复序列之间的同源重组和伴随的转基因切除并且仅留下与野生型/亲本基因组中发现的区域相当的复制侧部区域的单拷贝，其中抗原衰减取决于复制基因组序列的长度、转基因的大小和性质，使得转基因表达的长度是可定义和可变的。
9.一种具有侧部为复制的病毒序列的转基因的病毒载体，其用于允许复制序列之间的同源重组和伴随的转基因切除并且仅留下两种复制序列中的一种从而将病毒返回至野生型/亲本基因组状态，其中抗原衰减取决于复制序列的长度、转基因的大小和性质，使得转基因表达的长度是可定义和可变的。
10.一种疫苗，其由如权利要求9所述的载体组成或包括或包含如权利要求9所述的载体。
11.一种组合物，其包括权利要求9或10所述的载体或疫苗和药学上可接受载体。
12.一种用于从传播的病毒疫苗载体中调控去除异源遗传物质的方法，其包括以下步骤：
-提供野生型或亲本病毒载体，其包括预选长度的基因组序列的复制(重组工程复制)
-提供抗原表达盒，其包括转基因和用于控制转基因表达的侧部是野生型/亲本基因组序列的区域的拷贝的必要基因调控元件
-将该盒插入到载体中，使得转基因的侧部是野生型/亲本基因组序列及其拷贝(复制)序列
借此，同源重组导致转基因被去除，以只留下同源序列的单拷贝，如通常在野生型/亲本病毒中发现的那样，从而在不存在任何非亲本病毒基因序列的情况下再生野生型/亲本病毒基因组
其中病毒基因组中转基因去除的速率，及从而重组病毒基因组向野生型/亲本的逆转，取决于复制序列的长度，以及插入的转基因的大小和性质。
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